Inżynieria genetyczna Ćwiczenie 3

Wielkość: px
Rozpocząć pokaz od strony:

Download "Inżynieria genetyczna Ćwiczenie 3"

Transkrypt

1 Inżynieria genetyczna Ćwiczenie 3 Metoda PCR została opracowana w 1987 r. przez grupę Naukowców z Cetus Corporation w USA. Firma Roche odkupiła od Cetus Corp. prawa do PCR za 300 mln $ Autor K. Mullis otrzymał w 1993r. nagrodę Nobla w dziedzinie chemii. 1

2 Początkowo stosowano fragment Klenowa polimerazy DNA I z E. coli, który wykazuje aktywność 5 3 polimerazy oraz 3 5 egzonukleazy, brakuje natomiast aktywności 5 3 egzonukleazy, dzięki czemu nie występuje niebezpieczeństwo degradacji primerów podczas reakcji. Polimeraza ta była niestabilna w wyższych temperaturach, dlatego konieczne było dodawanie jej kolejnej porcji w każdym kolejnym cyklu. Niekorzystne cechy tej polimerazy zostały wyeliminowane przez użycie polimerazy Taq z termofilnych bakterii Thermus aquaticus temperatura denaturacji matrycy nie pozbawia enzymu aktywności. 1. Matryca DNA (RNA) 2. Startery 3. dntp 4. MgCl 2 5. Polimeraza 6. Bufor 2

3 najlepiej dodać najpierw wodę, a następnie kolejno pozostałe składniki mieszaninę reakcyjną przetrzymujemy w lodzie podczas pracy gdy matrycą jest powszechnie używane DNA w laboratorium lub gdy są jej śladowe ilości, to praca powinna odbywać się w laminarnym przepływie sterylnego powietrza, a tipsy i pipety powinny być zabezpieczone korkami podczas pracy z małymi objętościami komponentów (1-2 μl) trzeba uważać, aby do wszystkich prób dodana została jednakowa ilość (szczególnie ważne przy ilościowym PCR) Niekorzystna zbyt duża/zbyt niska liczba matryc - Ilość DNA 1ng-1μg - Wyjściowa liczba matryc: DNA człowieka 3*10-5 DNA drożdży 1μg DNA E. Coli 1ng Odpowiedni stopień czystości (UV, elektroforeza ) - Zanieczyszczenia matrycy: SDS, EDTA, DMSO, heparyna, fenol, sole Metoda izolacji - usunięcie inhibitorów reakcji 3

4 Efekt zbyt dużej liczby matryc Degradacja DNA Polimeraza Taq: Wyizolowana z bakterii Thermus aquaticus Aktywność polimerazy 5-3 Aktywność egzonukleazy 5-3 Brak aktywności egzonukleazy 3-5 Aktywność polimerazy Taq około 2000 nt/min (60 nt/s) w optym. temperaturze C Po reakcji na końcach 3' kilka nukleotydów adeninowych, właściwość wykorzystywana jest przy klonowaniu produktów PCR. Do swej aktywności wymaga jonów Mg 2+ Procesywność, wierność, szybkość 4

5 Cechy: - odpowiednia długość (18-28 nt) - zawartość GC % Tm [2n 1 (A+T)+4n 2 (G+C)] C T a C -wyznaczana doświadczalnie -wpływ na specyficzność Dobór stężenia roboczego 10 pmol/ μl -zbyt duże stężenie- niespecyficzność produktów Dimery starterów - komplementarność końców 3 metoda oparta o %GC: Tm[ o C] = 81,5 + 16,6 x log[na] + 0,41 x (%GC) - 675/długość - 0,65 x (%formamidu) - (%niekomplementarnych) metoda uproszczona: Tm = [2 o x (A + T) + 4 o x (G + C)] metoda w oparciu o zasady sąsiadujące 5

6 startery - najczęściej to ich sekwencja i stężenie decyduje o powodzeniu reakcji: nie powinny tworzyć wewnętrznych struktur 2-rzędowych Powinny mieć wyrównaną zawartość zasad G/C i A/T nie mogą komplementować między sobą na 3 końcu nie mogą zbyt silnie wiązać na 3 końcu do 5 można dodawać: miejsca cięcia dla enzymów restrykcyjnych, tzw. lepkie końce stężenie 0,1-0,5 M (za dużo - pomyłki, za mało - mniej produktu) startery zdegenerowane, modyfikacje: biotynowanie, zabezpieczanie przed 3 degradacją - wiązania fosfotiolowe, fosforylacja Źle zaprojektowane startery 6

7 Wpływ temperatury wiązania starterów - termocykler z gradientem temp. - wyznaczanie optymalnej T m dntp-trifosforany deoksyrybonukleotydów niezrównoważony skład obniża dokładność polimerazy, stężenie wyjściowe: 5-10 mm stężenie reakcji: µm jednakowe stężenie wszystkich dntp ph 7, 7

8 MgCl 2-0,5-5,0 mm - wpływa na aktywność enzymu, zwiększa T m dsdna, tworzy kompleksy z dntp dając substrat dla polimerazy, Stężenie jonów Mg > stężenie dntp dntp Stężenie optymalne µM MgCl 2 Wiązanie przez: matrycę, startery, polimerazę Taq, dntp datp:dgtp: dctp: dttp Stosowanie jednakowych stężeń Dokładność reakcji Proporcjonalna do stężenia wolnych MgCl 2 Wrażliwość na degradację Rozkład- przyczyna braku produktu Wzrost dokładności polimerazy Stężenie MgCl 2 nieco wyższe od steżenia dntp 8

9 Należy zwrócić uwagę na: - Stężenie 0,5-5U na 100µl zbyt duże- niespecyficzne produkty zbyt małe- brak produktów - Przechowywanie -20 C - Okres półtrwania 92,5 C 2h 95,0 C 40 min 97,5 C 5 min (!) 9

10 DMSO Żelatyna BSA Tween 20 PEG Fenol SDS Proteinaza K Porfiryna EDTA Etanol 10

11 Zapewnia odpowiednie warunki dla działania polimerazy ph 8,3-8,8 Tris-HCl w zakresie mm Czynniki ujemnie wpływające na PCR: 1. Jakość i zanieczyszczenia matrycy 2. Startery - powstawanie dimerów starterów - niska specyficzność starterów 3. Niewłaściwy dobór stężeń dntp i MgCl 2 4. Błędy polimerazy 5. Zanieczyszczenia odczynników 6. Ilość cykli 11

12 ETAP CZAS C początkowa denaturacja 2-5 min 94 denaturacja 1-60 s 94 przyłączanie starterów s 54 wydłużanie starterów s 72 ostatnie wydłużanie 5-10 min 72 schładzanie b/o 4 x Aktywność polimerazy Taq około 2000 nt/min (60 nt/s) w optym. temperaturze C Denaturacja nie powinna być dłuższa niż 60 s, ponieważ wpływałoby to na aktywność enzymu Początkowo czas wydłużania ustalamy 1kb -1 min, 2kb 2 min itd., przy kolejnych reakcjach można skracać Przyłączanie starterów temp. zależy od temp. topnienia obu oligonukleotydów Liczba cykli 30, więcej cykli nie wpływa znacząco na ilość produktu OPTYMALIZACJA usunięcie niespecyficznych produktów 12

13 Specyficzność eliminowanie niespecyficznych produktów podwyższyć temperaturę annealingu (przyłączania starterów), obniżyć stężenie jonów Mg 2+ zmienić skład nukleotydowy primera obniżyć ilość cykli zmienić polimerazę Długość produktu amplifikacja długich fragmentów wydłużyć czas syntezy dobrać odpowiednie stężenie jonów Mg 2+ zmienić polimerazę skrócić czas denaturacji podwyższyć stężenie matrycy zmienić ph buforu do PCR Wierność redukcja błędów syntezy obniżyć liczbę cykli podwyższyć stężenie matrycy obniżyć stężenie dntp zmienić polimerazę Ilość produktu zwiększenie ilości amplifikowanych fragmentów zwiększyć liczbę cykli podwyższyć stężenie matrycy zmienić polimerazę obniżyć temperaturę annilingu wydłużyć czas syntezy 13

14 Hot start - unikanie niespecyficznej amplifikacji podczas pierwszego cyklu (RT 94 o C): wkładać probówki do gorącego bloku dodawać polimerazę lub startery do gorącej mieszaniny odseparować startery od reszty reakcji parafiną korzystać z polimerazy zabezpieczonej przeciwciałem inne zabezpieczenia dysocjujące w wyższej temperaturze Touch-down PCR pierwsze kilka cykli wykonane przy dużo wyższej temp. przył. startera zwiększa specyficzność Kłopoty z subklonowaniem produktu PCR po Taq polimerazie zostaje ok. 70% końców tępych, a reszta ma 1 zasadę wystającą na końcu 3 (zwykle A) - można ligować na lepko (!) większość starterów zdefosforylowanych na końcu 5 (PNK). 14

15 Cechy PCR PCR w zastosowaniu analitycznym (diagnostycznym) Wykrywanie sekwencji o niewielu kopiach Analizy genetyczne Sądownictwo Synteza sond PCR jako metoda syntezy (zastosowanie laboratoryjne) Synteza insertów przeznaczonych do klonowania Czułość Synteza matryc do sekwencjonowania Specyficzność Wierność Ilość produktu - (+) _ +++, niezwykle istotna; ++, bardzo istotna; +, istotna; (+), może być istotna; -, nieistotna. Jedna zasada, wiele modyfikacji 15

16 nested - zagnieżdżony PCR, multiplex PCR - jednoczesna amplifikacja kilku fragmentów (dłuższe startery), long (expanded, extended) PCR - dla fragmentów > 5kb - mieszanki polimeraz, octany, dwie temp. (np.99/68), inverted PCR, asymetryczny PCR (zmiana proporcji starterów po cyklach), LCR - ligase chain reaction, RT-PCR, in situ PCR (genomowy i RT) w tkance, Real time PCR mutageneza kierowana - wprowadzanie zmian, AMV-RT - avian myeloblastosis virus reverse transcriptase, zachowuje aktywność do 55 C, eliminuje problemy związane strukturą II-rzędową MMLV-RT - moloney murine leukaemia virus reverse transcriptase, ma mniejszą aktywność RNAzy H niż AMV-RT i jest lepsza do syntezy pełnej długości cząsteczek cdna synteza cdna: hybrydyzacja ze specyficznym starterem hybrydyzacja z oligo (dt) hybrydyzacja z heksamerami AAAA TTTT AAAA AAAA 16

17 dwie lub więcej docelowych sekwencji jest namnażanych w jednej probówce jedna z tych sekwencji to najczęściej wewnętrzna kontrola poprawności warunków reakcji a druga jest sekwencją docelową zastosowanie diagnostyczne polimorfizmy analizy mikrobiologiczne SSCP- polimorfizm konformacji jednoniciowych fragmentów DNA (ang. single strand conformation polymorphism) wykorzystywany w celu wykrywania punktowych mutacji w genomowym DNA w war.natywnych DNA przyjmuje określoną konformację zależną od sekwencji nukleotydowych szybkość zależna od wielkości i konformacji >95% wykrywalność dla DNA o wielkości pz Do detekcji reakcja srebrzenia, radioizotopy, rzadziej bromek etydyny 17

18 PCR-HD Wykrywanie mutacji metodą heterodupleksów 1. Do produktów PCR powyżej 400 pz 2. Układ heterozygotyczny( 2 allele zmutowany i prawidłowy) 3. Amplifikacja inkubacja w celu utworzenia heterodupleksów 4. Heterodupleks- hybrydyzacja nie w pełni komplementarna 5. Substytucja-obustronne wybrzuszenie 6. Insercja lub delecja- jednostronne wybrzuszenie lub ugięcie nici Polimorfizmy RFLP to dziedziczne warianty sekwencji DNA, które objawiają się utworzeniem bądź zanikiem miejsca rozpoznawalnego przez endonukleazy restrykcyjne lub zmianą liczby nukleotydów między takimi miejscami. Amplifikacja fragmentu DNA, w obrębie którego występuje marker RFLP a potem jego hydroliza enzymem restrykcyjnym. 18

19 pozwala na amplifikację długich fragmentów DNA, można w ten sposób uzyskiwać fragmenty nawet do 27 kb, rutynowo służy do otrzymywania fragmentów kb długie fragmenty uzyskuje się stosując mieszaninę termostabilnych polimeraz DNA, zwykle: polimerazę Taq zapewnia wysoką procesywność (aktywność 5-3 polimerazy) polimerazę Pwo zapewnia poprawność (aktywność 3-5 egzonukleazy) Nested PCR dwa zestawy primerów: zewnetrzne i wewnętrzne, ale dwie rundy amplifikacji. cel: zwiększenie czułości (pg) i specyficzności PCR 19

20 enz transgen enz trawienie restrykcyjne a następnie ligacja (to nie jest plazmid!) przecinamy w obszarze transgenu enz., który nie trawi transgenu projektujemy primery amplifikacja, klonowanie i sekwencjonowanie Koliste fragmenty DNA stają się matrycą produkty są w mieszaninach, w których formy koliste zawierają oba miejsca przyłączania starterów pozwala zamplifikować obszary wokół transgenu 20

21 niskie tło znakowanie po specyficznej hybrydyzacji, startery nie są znakowane szybkość hybrydyzacja i elongacja w 30 min., cała procedura 2h wydłużanie nie jest limitowane długością startera 21

22 Ocena ilościowa produktu Wysoka czułość i powtarzalność Szeroki zakres oznaczanych stężeń Budowa: - źródło światła wzbudzającego cząsteczkę reporterową - układ detekcji fluorescencji - termocyler 22

23 23

24 SYBR Green I interkaluje do dsdna podczas reakcji, związane z DNA ma silną fluorescencję (1000x silniej niż nie związane stąd (+) niskie tło) technika FRET - (fluorescence resonanse energy transfer) do detekcji specyficznych sekwencji. Przygotowuje się 2 sondy hybrydyzujące blisko na matrycy. Górna sonda jest wyznakowana fluoresceiną na końcu 3, która działa jako FRET. Koniec 5 dolnej sondy jest wyznakowany akceptorem. Jeżeli dojdzie do hybrydyzacji obu - jest fluorescencja technika Molecular Beacons podwójnie znakowany starter, gdy jest nie związany jest wygaszanie1 (struktura spinki do włosów), gdy się przyłączy jest fluorescencja TaqMan wykorzystanie aktywności egzonukleolitycznej 5-3. Starter jest podwójnie wyznakowany: fluoresceiną i wygaszaczem. Następuje wycięcie barwnika, co odblokowuje fluorescencję. SYBR Green I (metoda niespecyficznej detekcji fluorescencji) 24

25 TaqMan (metoda specyficznej detekcji fluorescencji) 25

26 26

27 Geny: mir482d mir6023 U6 Matryce: 3dpi K 3dpi Inf 27

28 Geny: β tubulina Lsd1 Matryce: Col0 Lsd1(Col0) 28

29 Gene expression level Gene Expression Std. Error 95% C.I. P(H1) Result ACT2 1 APX1 1,584 0,909 0,663-2,870 0,065 CAT2 0,687 0,586 0,560-0,885 0,008 DOWN EIN2 1,795 1,065 0,903-4,560 0,045 UP ERF1 195, , , ,734 0 UP GA3 0,474 0,4 0,357-0,629 0,007 DOWN LOX2 3,35 2,099 0,993-9,826 0,014 UP ORA47 1,01 0,477 0,423-2,022 0,963 OXI1 1,209 0,702 0,601-2,150 0,363 PDF ,04 198,096 48, ,125 0,001 UP PR1 8,044 2,83 2,589-42,579 0,002 UP RRTF 6,84 5,689 5,203-10,045 0,001 UP SAG2 2,486 1,398 0,453-8,868 0,058 UBQ 1,261 0,54 0,212-6,047 0,661 WRKY33 4,335 2,269 1,760-10,719 0 UP ,1 ROOT 29

30 Elektorforeza i metody elucji 30

31 rodzaj agarozy przezroczystość rozdział krótkich prążków cena czas (dla prążków krótszych niż 600pz) lepiej krócej tzn. 3-4 h dla żelu cm, przy dłuższym czasie 14-16h (niskie napięcie) prążki nie są ostre, rozdział gorszy Agaroza 0,3% 5-60 kpz 0,5% 1-30 kpz Wielkość rozdzielanych fragmentów DNA 0,7% 0,8-12 kpz 1,0% 0,5-10 kpz 1,2% 0,4-7 kpz 1,5% 0,2-3 kpz 2,0% 0,05-2 kpz rozdział wielu prążków (polimorficzne loci): lepsze żele poliakrylamidowe, jeżeli prążki różnią się kilkoma pz (np. markery mikrosatelitalne) 6-10% niedenaturujące dobry dla pojedynczych loci denaturujące 6%/7M mocznik - żele do sekwencjonowania multiplex PCR 2-3% żel agarozowy Elektroelucja konieczne przeprowadzenie kolejne elektroforezy, w specjalnie przygotowanym aparacie, pracochłonna Szkło kwarcowe sole chaotropowe odpowiednia do oczyszczania dużych i małych fragmentów DNA, pracochłonna, zanieczyszczenia NaI, trudności przy agarozie opartej na TBE Modyfikowana celuloza DEAE nadaje się do oczyszczania długich odcinków DNA, skomplikowana i pracochłonna, konieczność wykonania kolejnej elektroforezy, możliwość nieodwracalnego związania się DNA z celulozą po wyschnięciu Zamrażanie, wyciskanie, wirowanie tania, styczność z BrEt podczas wyciskania Trawienie -agarazą odpowiednia do oczyszczania dużych i małych fragmentów DNA, tylko do agarozy o niskiej temperaturze topnienia, trudności przy wykorzystaniu bufora TBE, konieczne utrzymywanie odpowiedniej temp. (42-45C) oraz ph 5-8 Metody z wykorzystaniem kolumienek wygodna, w kontrolowanych warunkach, powtarzalna, kosztowne, większe cząsteczki DNA mogą zahaczać się w kolumienkach 31

32 Dziękuję za uwagę! 32

TaqNova-RED. Polimeraza DNA RP20R, RP100R

TaqNova-RED. Polimeraza DNA RP20R, RP100R TaqNova-RED Polimeraza DNA RP20R, RP100R RP20R, RP100R TaqNova-RED Polimeraza DNA Rekombinowana termostabilna polimeraza DNA Taq zawierająca czerwony barwnik, izolowana z Thermus aquaticus, o przybliżonej

Bardziej szczegółowo

TaqNovaHS. Polimeraza DNA RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925

TaqNovaHS. Polimeraza DNA RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925 TaqNovaHS RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925 RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925 TaqNovaHS Polimeraza TaqNovaHS jest mieszaniną termostabilnej polimerazy DNA

Bardziej szczegółowo

Powodzenie reakcji PCR wymaga właściwego doboru szeregu parametrów:

Powodzenie reakcji PCR wymaga właściwego doboru szeregu parametrów: Powodzenie reakcji PCR wymaga właściwego doboru szeregu parametrów: dobór warunków samej reakcji PCR (temperatury, czas trwania cykli, ilości cykli itp.) dobór odpowiednich starterów do reakcji amplifikacji

Bardziej szczegółowo

PCR - ang. polymerase chain reaction

PCR - ang. polymerase chain reaction PCR - ang. polymerase chain reaction łańcuchowa (cykliczna) reakcja polimerazy Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu

Bardziej szczegółowo

PCR. Aleksandra Sałagacka

PCR. Aleksandra Sałagacka PCR Aleksandra Sałagacka Reakcja PCR naśladuje proces replikacji DNA in vitro pozwala na amplifikację określonego krótkiego (kilkadziesiąt kilka tys.pz) fragmentu DNA obecnie najważniejsze narzędzie biologii

Bardziej szczegółowo

PCR - ang. polymerase chain reaction

PCR - ang. polymerase chain reaction PCR - ang. polymerase chain reaction łańcuchowa (cykliczna) reakcja polimerazy Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu

Bardziej szczegółowo

PCR - ang. polymerase chain reaction

PCR - ang. polymerase chain reaction PCR - ang. polymerase chain reaction Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu DNA) Jest to reakcja powielania (replikacji)

Bardziej szczegółowo

Genetyczne modyfikowanie organizmów Kierunek OCHRONA ŚRODOWISKA, II rok semestr letni 2015/16

Genetyczne modyfikowanie organizmów Kierunek OCHRONA ŚRODOWISKA, II rok semestr letni 2015/16 Genetyczne modyfikowanie organizmów Kierunek OCHRONA ŚRODOWISKA, II rok semestr letni 2015/16 Ćwiczenie 3 Identyfikacja genetycznie modyfikowanych roślin w produktach spożywczych - jakościowe badanie obecności

Bardziej szczegółowo

Farmakogenetyka Biotechnologia Medyczna I o

Farmakogenetyka Biotechnologia Medyczna I o ĆWICZENIE 2 Oznaczanie polimorfizmu cytochromu CYP2D6 za pomocą tradycyjnych metod biologii molekularnej: PCR-RFLP I. Łańcuchowa reakcja polimerazy PCR (polymerase chain reaction) Technika PCR rozwinęła

Bardziej szczegółowo

Klonowanie molekularne Kurs doskonalący. Zakład Geriatrii i Gerontologii CMKP

Klonowanie molekularne Kurs doskonalący. Zakład Geriatrii i Gerontologii CMKP Klonowanie molekularne Kurs doskonalący Zakład Geriatrii i Gerontologii CMKP Etapy klonowania molekularnego 1. Wybór wektora i organizmu gospodarza Po co klonuję (do namnożenia DNA [czy ma być metylowane

Bardziej szczegółowo

Optymalizacja warunków reakcji PCR w gradiencie temperatury i magnezu

Optymalizacja warunków reakcji PCR w gradiencie temperatury i magnezu Protokół pochodzi ze strony molekularnie.wordpress.com Kopiowanie i rozpowszechnianie wyłącznie w całości, z zachowaniem praw autorskich zgodnie z zasadami licencji GNU Dziękuję za uszanowanie mojej pracy,

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 3 Oznaczenie polimorfizmu genetycznego cytochromu CYP2D6 metodą PCR w czasie rzeczywistym (rtpcr) przy użyciu sond typu TaqMan

Ćwiczenie 3 Oznaczenie polimorfizmu genetycznego cytochromu CYP2D6 metodą PCR w czasie rzeczywistym (rtpcr) przy użyciu sond typu TaqMan Ćwiczenie 3 Oznaczenie polimorfizmu genetycznego cytochromu CYP2D6 metodą PCR w czasie rzeczywistym (rtpcr) przy użyciu sond typu TaqMan Klasyczna metoda PCR jest metodą jakościową, nie ilościową co np.

Bardziej szczegółowo

Metody badania polimorfizmu/mutacji DNA. Aleksandra Sałagacka Pracownia Diagnostyki Molekularnej i Farmakogenomiki Uniwersytet Medyczny w Łodzi

Metody badania polimorfizmu/mutacji DNA. Aleksandra Sałagacka Pracownia Diagnostyki Molekularnej i Farmakogenomiki Uniwersytet Medyczny w Łodzi Metody badania polimorfizmu/mutacji DNA Aleksandra Sałagacka Pracownia Diagnostyki Molekularnej i Farmakogenomiki Uniwersytet Medyczny w Łodzi Mutacja Mutacja (łac. mutatio zmiana) - zmiana materialnego

Bardziej szczegółowo

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Wydział Farmaceutyczny, WUM ul. Banacha 1, 02-097 Warszawa IZOLACJA DNA Z HODOWLI KOMÓRKOWEJ.

Bardziej szczegółowo

Mieszanina trójfosforanów deoksyrybonukleotydów (dntp: datp, dgtp, dctp, dttp) Bufor reakcyjny zapewniający odpowiednie warunki reakcji

Mieszanina trójfosforanów deoksyrybonukleotydów (dntp: datp, dgtp, dctp, dttp) Bufor reakcyjny zapewniający odpowiednie warunki reakcji Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Biologia i Biologia medyczna II rok Katedra Biologii Molekularnej Przedmiot: Biologia Molekularna z Biotechnologią =================================================================

Bardziej szczegółowo

AmpliTest Salmonella spp. (Real Time PCR)

AmpliTest Salmonella spp. (Real Time PCR) AmpliTest Salmonella spp. (Real Time PCR) Zestaw do wykrywania sekwencji DNA specyficznych dla bakterii z rodzaju Salmonella techniką Real Time PCR Nr kat.: BAC01-50 Wielkość zestawu: 50 oznaczeń Objętość

Bardziej szczegółowo

Metody badania ekspresji genów

Metody badania ekspresji genów Metody badania ekspresji genów dr Katarzyna Knapczyk-Stwora Warunki wstępne: Proszę zapoznać się z tematem Metody badania ekspresji genów zamieszczonym w skrypcie pod reakcją A. Lityńskiej i M. Lewandowskiego

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 3. Amplifikacja genu ccr5 Homo sapiens wykrywanie delecji Δ32pz warunkującej oporność na wirusa HIV

Ćwiczenie 3. Amplifikacja genu ccr5 Homo sapiens wykrywanie delecji Δ32pz warunkującej oporność na wirusa HIV Ćwiczenie 3. Amplifikacja genu ccr5 Homo sapiens wykrywanie delecji Δ32pz warunkującej oporność na wirusa HIV Cel ćwiczenia Określenie podatności na zakażenie wirusem HIV poprzez detekcję homo lub heterozygotyczności

Bardziej szczegółowo

2. Przedmiot zamówienia: Odczynniki chemiczne do izolacji DNA i reakcji PCR, wymienione w Tabeli 1. Nazwa odczynnika Specyfikacja Ilość*

2. Przedmiot zamówienia: Odczynniki chemiczne do izolacji DNA i reakcji PCR, wymienione w Tabeli 1. Nazwa odczynnika Specyfikacja Ilość* Poznao, 6 lutego 2012 r. Zapytanie ofertowe nr 001 /2012 dotyczące zakupu odczynników chemicznych do izolacji DNA i reakcji PCR GENESIS Polska Sp. z o.o Ul. Za Cytadelą 19, 61-659 Poznao NIP 778 13 56

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie numer 6. Analiza próbek spożywczych na obecność markerów GMO

Ćwiczenie numer 6. Analiza próbek spożywczych na obecność markerów GMO Ćwiczenie numer 6 Analiza próbek spożywczych na obecność markerów GMO 1. Informacje wstępne -screening GMO -metoda CTAB -qpcr 2. Izolacja DNA z soi metodą CTAB 3. Oznaczenie ilościowe i jakościowe DNA

Bardziej szczegółowo

Badanie próbek żywności na obecność Genetycznie Zmodyfikowanych Organizmów. Rozdział 9

Badanie próbek żywności na obecność Genetycznie Zmodyfikowanych Organizmów. Rozdział 9 Badanie próbek żywności na obecność Genetycznie Zmodyfikowanych Organizmów Rozdział 9 Wykrywanie jakościowe kukurydzy MON810, kukurydzy Bt-176 i soi Roundup Ready metodą PCR M. Querci, M. Maretti, M. Mazzara

Bardziej szczegółowo

Zastosowanie metody RAPD do różnicowania szczepów bakteryjnych

Zastosowanie metody RAPD do różnicowania szczepów bakteryjnych Zastosowanie metody RAPD do różnicowania szczepów bakteryjnych Wstęp teoretyczny Technika RAPD (ang. Random Amplification of Polymorphic DNA) opiera się na prostej reakcji PCR, przeprowadzanej na genomowym

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie Prowadzący: mgr inż. Joanna Tymeck-Mulik i mgr Lidia Gaffke. Część teoretyczna:

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie Prowadzący: mgr inż. Joanna Tymeck-Mulik i mgr Lidia Gaffke. Część teoretyczna: Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Katedra Biologii Molekularnej Przedmiot: Biologia Molekularna z Biotechnologią Biologia II rok ===============================================================================================

Bardziej szczegółowo

Ligazy. Zastosowanie ligazy w inżynierii genetycznej:

Ligazy. Zastosowanie ligazy w inżynierii genetycznej: Ligazy Katalizują tworzenie wiązań fosfodiestrowych między sąsiednimi grupami 3 OH i 5 PO 4 w kwasach nukleinowych DNA lub RNA. W reakcji tworzą się wysokoenergetyczne pośredniki z udziałem NAD + lub ATP

Bardziej szczegółowo

Biologia Molekularna Podstawy

Biologia Molekularna Podstawy Biologia Molekularna Podstawy Budowa DNA Budowa DNA Zasady: Purynowe: adenina i guanina Pirymidynowe: cytozyna i tymina 2 -deoksyryboza Grupy fosforanowe Budowa RNA Budowa RNA Zasady: purynowe: adenina

Bardziej szczegółowo

Glimmer umożliwia znalezienie regionów kodujących

Glimmer umożliwia znalezienie regionów kodujących Narzędzia ułatwiające identyfikację właściwych genów GLIMMER TaxPlot Narzędzia ułatwiające amplifikację tych genów techniki PCR Primer3, Primer3plus PrimerBLAST Reverse Complement Narzędzia ułatwiające

Bardziej szczegółowo

Poradnik: Optymalizacja reakcji PCR algorytm postępowania

Poradnik: Optymalizacja reakcji PCR algorytm postępowania Poradnik: Optymalizacja reakcji PCR algorytm postępowania Jak przeprowadzić optymalizację reakcji PCR? Co zmienić w metodyce, by pozbyć się produktów niespecyficznych? Jak poprawić plon reakcji? Od czego

Bardziej szczegółowo

Elektroforeza kwasów nukleinowych

Elektroforeza kwasów nukleinowych Elektroforeza kwasów nukleinowych Elektroforeza jest podstawową techniką wizualizacji kwasów nukleinowych pozwala bezpośrednio identyfikować cząsteczki DNA i jest stosunkowo czuła (po odpowiednim wybarwieniu

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie. Prowadzący: mgr Anna Pawlik i mgr Maciej Dylewski. Część teoretyczna:

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie. Prowadzący: mgr Anna Pawlik i mgr Maciej Dylewski. Część teoretyczna: Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Biologia i Biologia Medyczna II rok Katedra Biologii Molekularnej Przedmiot: Biologia Molekularna z Biotechnologią ===============================================================================================

Bardziej szczegółowo

Transformacja pośrednia składa się z trzech etapów:

Transformacja pośrednia składa się z trzech etapów: Transformacja pośrednia składa się z trzech etapów: 1. Otrzymanie pożądanego odcinka DNA z materiału genetycznego dawcy 2. Wprowadzenie obcego DNA do wektora 3. Wprowadzenie wektora, niosącego w sobie

Bardziej szczegółowo

PL 217144 B1. Sposób amplifikacji DNA w łańcuchowej reakcji polimerazy za pomocą starterów specyficznych dla genu receptora 2-adrenergicznego

PL 217144 B1. Sposób amplifikacji DNA w łańcuchowej reakcji polimerazy za pomocą starterów specyficznych dla genu receptora 2-adrenergicznego PL 217144 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 217144 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 391926 (22) Data zgłoszenia: 23.07.2010 (51) Int.Cl.

Bardziej szczegółowo

SCENARIUSZ LEKCJI BIOLOGII Z WYKORZYSTANIEM FILMU PCR sposób na DNA.

SCENARIUSZ LEKCJI BIOLOGII Z WYKORZYSTANIEM FILMU PCR sposób na DNA. SCENARIUSZ LEKCJI BIOLOGII Z WYKORZYSTANIEM FILMU PCR sposób na DNA. SPIS TREŚCI: 1. Wprowadzenie. 2. Części lekcji. 1. Część wstępna. 2. Część realizacji. 3. Część podsumowująca. 3. Karty pracy. 1. Karta

Bardziej szczegółowo

Projektowanie reakcji multiplex- PCR

Projektowanie reakcji multiplex- PCR Projektowanie reakcji multiplex- PCR Dzięki nowoczesnym, wydajnym zestawom do PCR, amplifikacja DNA nie jest już takim wyzwaniem, jak w latach 80-tych i 90-tych. Wraz z poprawą metodyki, pojawiły się ciekawe

Bardziej szczegółowo

Ampli-LAMP Babesia canis

Ampli-LAMP Babesia canis Novazym Products Zestaw do identyfikacji materiału genetycznego pierwotniaka Babesia canis canis techniką Loop-mediated Isothermal AMPlification (LAMP) Numery katalogowe produktu: AML-Bc-200 AML-Bc-400

Bardziej szczegółowo

dr hab. Beata Krawczyk Katedra Mikrobiologii PG Publikacja współfinansowana ze środków Unii Europejskiej w ramach Europejskiego Funduszu Społecznego

dr hab. Beata Krawczyk Katedra Mikrobiologii PG Publikacja współfinansowana ze środków Unii Europejskiej w ramach Europejskiego Funduszu Społecznego Wk Wykrywanie polimorfizmów i mutacji Badania przesiewowe mutacji Wykrywanie znanych mutacji punktowych dr hab. Beata Krawczyk Katedra Mikrobiologii PG Publikacja współfinansowana ze środków Unii Europejskiej

Bardziej szczegółowo

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 04/14. SYLWIA OKOŃ, Dąbrowica, PL KRZYSZTOF KOWALCZYK, Motycz, PL

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 04/14. SYLWIA OKOŃ, Dąbrowica, PL KRZYSZTOF KOWALCZYK, Motycz, PL PL 220315 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 220315 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 400252 (22) Data zgłoszenia: 06.08.2012 (51) Int.Cl.

Bardziej szczegółowo

Biochemia: Ćw. 11 Metoda RT-PCR

Biochemia: Ćw. 11 Metoda RT-PCR Ćwiczenie 11 METODA RT-PCR Wyciąg z kart charakterystyki substancji niebezpiecznych: bromek etydyny T+ EDTA Xi etanol, 96% F kwas octowy, 96% C -merkaptoetanol N, T Tris Xi UWAGI WSTĘPNE Praca z kwasami

Bardziej szczegółowo

7. Metody molekularne jako źródło informacji botanicznej i lichenologicznej

7. Metody molekularne jako źródło informacji botanicznej i lichenologicznej 7. Metody molekularne jako źródło informacji botanicznej i lichenologicznej 7.2. Metody biologii molekularnej (technika PCR, sekwencjonowanie DNA) wykorzystywane w taksonomii roślin Autor: Magdalena Dudek

Bardziej szczegółowo

AmpliTest TBEV (Real Time PCR)

AmpliTest TBEV (Real Time PCR) AmpliTest TBEV (Real Time PCR) Zestaw do wykrywania sekwencji RNA specyficznych dla TBEV (Tick-borne encephalitis virus) techniką Real Time PCR Nr kat.: RV03-50 Wielkość zestawu: 50 oznaczeń Objętość pojedynczej

Bardziej szczegółowo

AmpliTest Panel odkleszczowy (Real Time PCR)

AmpliTest Panel odkleszczowy (Real Time PCR) AmpliTest Panel odkleszczowy (Real Time PCR) Zestaw do wykrywania sekwencji DNA specyficznych dla bakterii Borrelia burgdorferi, Anaplasma, Ehrlichia oraz pierwotniaków rodzaju Babesia (B. canis, B. gibsoni,

Bardziej szczegółowo

Przeglądanie bibliotek

Przeglądanie bibliotek Przeglądanie bibliotek Czyli jak złapać (i sklonować) ciekawy gen? Klonowanie genów w oparciu o identyczność lub podobieństwo ich sekwencji do znanego już DNA Sonda homologiczna (komplementarna w 100%)

Bardziej szczegółowo

Jaka jest lokalizacja genu na chromosomie? Jakie jest jego sąsiedztwo?

Jaka jest lokalizacja genu na chromosomie? Jakie jest jego sąsiedztwo? Jaka jest lokalizacja genu na chromosomie? Jakie jest jego sąsiedztwo? Hybrydyzacja - powstawanie stabilnych struktur dwuniciowych z cząsteczek jednoniciowych o komplementarnych sekwencjach nukleotydów

Bardziej szczegółowo

Elektroforeza kwasów nukleinowych

Elektroforeza kwasów nukleinowych Elektroforeza kwasów nukleinowych Elektroforeza jest podstawową techniką wizualizacji kwasów nukleinowych pozwala bezpośrednio identyfikować cząsteczki DNA i jest stosunkowo czuła (po odpowiednim wybarwieniu

Bardziej szczegółowo

ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ

ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ www.cytogen.com.pl ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ 3 Spis treści 4 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 22 22 Stabilność technologii TAG Specifikacja qpcr Mix-ów Kompatybilność kitów qpcr

Bardziej szczegółowo

TECHNIKI WYKORZYSTYWANE W DIAGNOSTYCE MOLEKULARNEJ CHORÓB JEDNOGENOWYCH TECHNIQUES USED IN MOLECULAR DIAGNOSTICS OF MONOGENIC DISORDERS

TECHNIKI WYKORZYSTYWANE W DIAGNOSTYCE MOLEKULARNEJ CHORÓB JEDNOGENOWYCH TECHNIQUES USED IN MOLECULAR DIAGNOSTICS OF MONOGENIC DISORDERS Nowiny Lekarskie 2006, 75, 5, 486 490 ALINA LICZBAŃSKA, ANNA WOŹNIAK, ANNA WAWROCKA, MACIEJ R. KRAWCZYŃSKI TECHNIKI WYKORZYSTYWANE W DIAGNOSTYCE MOLEKULARNEJ CHORÓB JEDNOGENOWYCH TECHNIQUES USED IN MOLECULAR

Bardziej szczegółowo

Program ćwiczeń z inżynierii genetycznej KP-III rok Biologii

Program ćwiczeń z inżynierii genetycznej KP-III rok Biologii Program ćwiczeń z inżynierii genetycznej KP-III rok Biologii Ćwiczenie 1 i 2: Metody izolacji, oczyszczania DNA kolokwium wstępne: sprawdzenie podstawowych wiadomości z zakresu genetyki, i biologii molekularnej

Bardziej szczegółowo

Wprowadzenie do genetyki sądowej. Materiały biologiczne. Materiały biologiczne: prawidłowe zabezpieczanie śladów

Wprowadzenie do genetyki sądowej. Materiały biologiczne. Materiały biologiczne: prawidłowe zabezpieczanie śladów Wprowadzenie do genetyki sądowej 2013 Pracownia Genetyki Sądowej Katedra i Zakład Medycyny Sądowej Materiały biologiczne Inne: włosy z cebulkami, paznokcie możliwa degradacja - tkanki utrwalone w formalinie/parafinie,

Bardziej szczegółowo

TECHNIKI ANALIZY RNA TECHNIKI ANALIZY RNA TECHNIKI ANALIZY RNA

TECHNIKI ANALIZY RNA TECHNIKI ANALIZY RNA TECHNIKI ANALIZY RNA DNA 28SRNA 18/16S RNA 5SRNA mrna Ilościowa analiza mrna aktywność genów w zależności od wybranych czynników: o rodzaju tkanki o rodzaju czynnika zewnętrznego o rodzaju upośledzenia szlaku metabolicznego

Bardziej szczegółowo

PCR PCR. Model replikacji semikonserwatywnej

PCR PCR. Model replikacji semikonserwatywnej PCR Łańcuchowa reakcja polimerazy (Polymerase Chain Reaction) amplifikacja (namnożenie wielu kopii cząsteczki kwasu nukleinowego) w pierwotnej wersji wykorzystująca model replikacji semikonserwatywnej

Bardziej szczegółowo

Elektroforeza kwasów nukleinowych

Elektroforeza kwasów nukleinowych Elektroforeza kwasów nukleinowych Elektroforeza jest podstawową techniką wizualizacji kwasów nukleinowych pozwala bezpośrednio identyfikować cząsteczki DNA i jest stosunkowo czuła (po odpowiednim wybarwieniu

Bardziej szczegółowo

Izolowanie i amplifikacja kwasów nukleinowych

Izolowanie i amplifikacja kwasów nukleinowych ROZDZIAŁ 4 Izolowanie i amplifikacja kwasów nukleinowych Wojciech Garczorz Diagnostyka molekularna jest obecnie najszybciej rozwijającym się działem diagnostyki medycznej. W wielu dziedzinach medycyny

Bardziej szczegółowo

Ilość TAK TAK TAK TAK TAK TAK

Ilość TAK TAK TAK TAK TAK TAK Postępowanie WB.2420.6.2013.NG ZAŁĄCZNIK NR 5 L.p. Nazwa asortymentu parametry techniczne Ilość Nazwa wyrobu, nazwa producenta, określenie marki, modelu, znaku towarowego Cena jednostkowa netto (zł) Wartość

Bardziej szczegółowo

O trawieniu restrykcyjnym

O trawieniu restrykcyjnym O trawieniu restrykcyjnym Enzymy II klasy, Mg 2+, dsdna z rozpoznawaną sekwencją, tępe, lepkie (kohezyjne) końce, warunki reakcji bufor o różnym stężeniu NaCl i określonym ph BSA -stabilizator 37 o C /lub

Bardziej szczegółowo

PCR bez izolacji testujemy Direct PCR Kits od ThermoFisher Scientific

PCR bez izolacji testujemy Direct PCR Kits od ThermoFisher Scientific PCR bez izolacji testujemy Direct PCR Kits od ThermoFisher Scientific Specjalnie dla Was przetestowaliśmy w naszym laboratorium odczynniki firmy Thermo Scientific umożliwiające przeprowadzanie reakcji

Bardziej szczegółowo

GENOMIKA FUNKCJONALNA. Jak działają geny i genomy? Poziom I: Analizy transkryptomu

GENOMIKA FUNKCJONALNA. Jak działają geny i genomy? Poziom I: Analizy transkryptomu GENOMIKA FUNKCJONALNA Jak działają geny i genomy? Poziom I: Analizy transkryptomu Adnotacja (ang. annotation) pierwszy etap po uzyskaniu kompletnej sekwencji nukleotydyowej genomu analiza bioinformatyczna

Bardziej szczegółowo

biologia molekularna CLONTECH

biologia molekularna CLONTECH biologia molekularna CLONTECH Clontech Laboratoires to najnowszy członek Takara Bio Group, która jest światowym liderem w produkcji rozwiązań dedykowanych technikom molekularnym. Dostarczając odczynniki,

Bardziej szczegółowo

Markery klasy II -Polimorfizm fragmentów DNA (na ogół niekodujących): - RFLP - VNTR - RAPD

Markery klasy II -Polimorfizm fragmentów DNA (na ogół niekodujących): - RFLP - VNTR - RAPD Marker genetyczny- polimorficzna cecha jakościowa organizmu, którą charakteryzuje proste dziedziczenie (mendlowskie) oraz którą można dokładnie identyfikować metodami analitycznymi. Markery klasy I - Antygeny

Bardziej szczegółowo

dr hab. Beata Krawczyk Katedra Mikrobiologii PG

dr hab. Beata Krawczyk Katedra Mikrobiologii PG Metody amplifikacji kwasów nukleinowych dr hab. Beata Krawczyk Katedra Mikrobiologii PG Publikacja współfinansowana ze środków Unii Europejskiej pj j w ramach Europejskiego Funduszu Społecznego Amplifikacja

Bardziej szczegółowo

Techniki molekularne w mikrobiologii SYLABUS A. Informacje ogólne

Techniki molekularne w mikrobiologii SYLABUS A. Informacje ogólne Techniki molekularne w mikrobiologii A. Informacje ogólne Elementy sylabusu Nazwa jednostki prowadzącej kierunek Nazwa kierunku studiów Poziom kształcenia Profil studiów Forma studiów Rodzaj Rok studiów

Bardziej szczegółowo

WYJAŚNIENIA DO TREŚCI SPECYFIKACJI ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA

WYJAŚNIENIA DO TREŚCI SPECYFIKACJI ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA Katowice, dn. 04.05.2016r. WYJAŚNIENIA DO TREŚCI SPECYFIKACJI ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA Dotyczy: postępowania o udzielenie zamówienia publicznego prowadzonego w trybie przetargu nieograniczonego na

Bardziej szczegółowo

Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System, czyli Mercedes wśród termocyklerów do analizy PCR w czasie rzeczywistym

Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System, czyli Mercedes wśród termocyklerów do analizy PCR w czasie rzeczywistym Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System, czyli Mercedes wśród termocyklerów do analizy PCR w czasie rzeczywistym Rynek aparatury laboratoryjnej pęka w szwach od ilości różnych aparatów przeznaczonych

Bardziej szczegółowo

Dr hab.n.med. Renata Jacewicz

Dr hab.n.med. Renata Jacewicz GENOM CZŁOWIEKA >99,999% 0,0005% 65% Dr hab.n.med. Renata Jacewicz Kierownik Pracowni Genetyki Medycznej i Sądowej 3% 32% 2013 Pracownia Genetyki Medycznej i Sądowej ZMS Dojrzałe erytrocyty, trzony włosów

Bardziej szczegółowo

CENNIK PRODUKTÓW BIOLINE 2013

CENNIK PRODUKTÓW BIOLINE 2013 CENNIK PRODUKTÓW BIOLINE 2013 MASTER MIXY REAL-TIME PCR MASTER MIXY REAL-TIME PCR Najnowszej Generacji SensiFAST SYBR No-ROX m.in. SmartCycler (Cepheid), Rotor-Gene (Qiagen), Eco (Illumina), Opticon TM,

Bardziej szczegółowo

Izolacja i oczyszczanie DNA jest kluczowym etapem większości. procedur stosowanych w biologii molekularnej, diagnostyce i innych

Izolacja i oczyszczanie DNA jest kluczowym etapem większości. procedur stosowanych w biologii molekularnej, diagnostyce i innych izolacja DNA Izolacja i oczyszczanie DNA jest kluczowym etapem większości procedur stosowanych w biologii molekularnej, diagnostyce i innych badaniach. Głównym celem tego etapu badań jest uzyskanie wysokiej

Bardziej szczegółowo

Mikrosatelitarne sekwencje DNA

Mikrosatelitarne sekwencje DNA Mikrosatelitarne sekwencje DNA Małgorzata Pałucka Wykorzystanie sekwencji mikrosatelitarnych w jądrowym DNA drzew leśnych do udowodnienia pochodzenia materiału dowodowego w postępowaniu sądowym 27.09.2012

Bardziej szczegółowo

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu:

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu: Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych Nr kat. EM08 Wersja zestawu: 1.2012 www.dnagdansk.com Nr kat. EM08 I. PRZEZNACZENIE ZESTAWU Zestaw EXTRACTME DNA GEL OUT przeznaczony jest do szybkiej i wydajnej

Bardziej szczegółowo

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych. Nr kat. EM03 Wersja zestawu:

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych. Nr kat. EM03 Wersja zestawu: Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych Nr kat. EM03 Wersja zestawu: 1.2012 I. PRZEZNACZENIE ZESTAWU Zestaw EXTRACTME DNA CLEAN-UP przeznaczony jest do szybkiego i wydajnego oczyszczania

Bardziej szczegółowo

Adres strony internetowej, na której Zamawiający udostępnia Specyfikację Istotnych Warunków Zamówienia: www.imp.sosnowiec.pl

Adres strony internetowej, na której Zamawiający udostępnia Specyfikację Istotnych Warunków Zamówienia: www.imp.sosnowiec.pl Strona 1 z 7 Adres strony internetowej, na której Zamawiający udostępnia Specyfikację Istotnych Warunków Zamówienia: www.imp.sosnowiec.pl Sosnowiec: Sukcesywna dostawa odczynników dla Instytutu Medycyny

Bardziej szczegółowo

2015-11-18. DNA i RNA ENZYMY MODYFIKUJĄCE KOŃCE CZĄSTECZEK. DNA i RNA. DNA i RNA

2015-11-18. DNA i RNA ENZYMY MODYFIKUJĄCE KOŃCE CZĄSTECZEK. DNA i RNA. DNA i RNA Fosfataza alkaliczna CIP Calf Intestine Phosphatase- pochodzenie: jelito cielęce BAP Bacterial Alcaline Phosphatase- pochodzenie: E. coli SAP Shrimp Alcaline Phosphatase- pochodzenie: krewetki Pandalus

Bardziej szczegółowo

Zastosowanie transferu energii rezonansu fluorescencji (FRET) w ilościowej metodzie oznaczania ekspresji genów na przykładzie sondy TaqMan

Zastosowanie transferu energii rezonansu fluorescencji (FRET) w ilościowej metodzie oznaczania ekspresji genów na przykładzie sondy TaqMan Anna KOZIOROWSKA, Maria ROMEROWICZ-MISIELAK Uniwersytet Rzeszowski, Polska Zastosowanie transferu energii rezonansu fluorescencji (FRET) w ilościowej metodzie oznaczania ekspresji genów na przykładzie

Bardziej szczegółowo

ŁAŃCUCHOWA REAKCJA POLIMERAZY Z ANALIZĄ W CZASIE RZECZYWISTYM (RT-PCR) REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION (RT-PCR)

ŁAŃCUCHOWA REAKCJA POLIMERAZY Z ANALIZĄ W CZASIE RZECZYWISTYM (RT-PCR) REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION (RT-PCR) A N N A L E S A C A D E M I A E M E D I C A E S T E T I N E N S I S R O C Z N I K I P O M O R S K I E J A K A D E M I I M E D Y C Z N E J W S Z C Z E C I N I E 2007, 53, 3, 5 9 KATARZYNA WIEDRO, EWA STACHOWSKA,

Bardziej szczegółowo

Laboratoria.net Innowacje Nauka Technologie

Laboratoria.net Innowacje Nauka Technologie Akceptuję W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany

Bardziej szczegółowo

Dr Anna Linkiewicz Instytut Hodowli i Aklimatyzacji Roślin - PIB LAB-GMO Maj 2015

Dr Anna Linkiewicz Instytut Hodowli i Aklimatyzacji Roślin - PIB LAB-GMO Maj 2015 Genetycznie modyfikowana żywność i pasze Streszczenie zajęć Blisko 50 różnych GMO jest dopuszczonych do stosowania w Unii Europejskiej jako żywność lub pasza. Podczas zajęć wyizolowane zostanie DNA z produktów

Bardziej szczegółowo

ENZYMY RESTRYKCYJNE ENZYMY RESTRYKCYJNE CZYM RÓŻNIĄ SIĘ POSZCZEGÓLNE ENZYMY? nazewnictwo: EcoRV

ENZYMY RESTRYKCYJNE ENZYMY RESTRYKCYJNE CZYM RÓŻNIĄ SIĘ POSZCZEGÓLNE ENZYMY? nazewnictwo: EcoRV ENZYMY RESTRYKCYJNE Enzymy z klasy endonukleaz (hydrolaz), wykazujące powinowactwo do specyficznych fragmentów dwuniciowych cząsteczek DNA i hydrolizujące wiązania fosfodiestrowe w obu niciach Naturalnie

Bardziej szczegółowo

TRANSKRYPCJA - I etap ekspresji genów

TRANSKRYPCJA - I etap ekspresji genów Eksparesja genów TRANSKRYPCJA - I etap ekspresji genów Przepisywanie informacji genetycznej z makrocząsteczki DNA na mniejsze i bardziej funkcjonalne cząsteczki pre-mrna Polimeraza RNA ETAP I Inicjacja

Bardziej szczegółowo

Dr hab.n.med. Renata Jacewicz

Dr hab.n.med. Renata Jacewicz GENOM CZŁOWIEKA >99 % 0,05%(100MtDNA) 65% Dr hab.n.med. Renata Jacewicz Kierownik Pracowni Genetyki Medycznej i Sądowej 3% 32% 2013 Pracownia Genetyki Medycznej i Sądowej ZMS Dojrzałe erytrocyty, trzony

Bardziej szczegółowo

Spis treści. spis treści. 2 syngen.pl. Polimerazy PCR i real-time PCR

Spis treści. spis treści. 2 syngen.pl. Polimerazy PCR i real-time PCR spis treści Spis treści Polimerazy PCR i real-time PCR 6 Klasyczny PCR Hot Start PCR Real-time PCR i analiza HRM Polimerazy specjalne (long range, proofreading) 6 8 10 13 Odwrotna transkrypcja 15 Izolacja

Bardziej szczegółowo

Laboratorium z biochemii

Laboratorium z biochemii Laboratorium z biochemii DLA STUDENTÓW BIOLOGII, BIOTECHNOLOGII I OCHRONY ŚRODOWISKA Praca zbiorowa pod redakcją Antoniego Polanowskiego Poprawki do wydania III wprowadzone pod redakcją Justyny Ciuraszkiewicz

Bardziej szczegółowo

Wprowadzenie do genetyki sądowej

Wprowadzenie do genetyki sądowej DNA - kwas deoksyrybonukleinowy Wprowadzenie do genetyki sądowej część 2 odwójna helisa ok. 3,2 miliardy par zasad (base pairs) A=T, G=C ok. 20 000-30 000 genów onad 99% identyczności w populacji; 1% różnic

Bardziej szczegółowo

Prof. UG, dr hab. Uniwersytet Gdański, Wydział Chemii, Wita Stwosza 63, Gdańsk tel ,

Prof. UG, dr hab. Uniwersytet Gdański, Wydział Chemii, Wita Stwosza 63, Gdańsk tel , Prof. UG, dr hab. Uniwersytet Gdański, Wydział Chemii, Wita Stwosza 63, Gdańsk 80-308 Piotr Mucha tel. 0585235432, e-mail: piotr.mucha@ug.edu.pl Gdańsk, 17.10.2015r. Recenzja pracy doktorskiej mgr Ireneusza

Bardziej szczegółowo

Ziemniak Polski 2014 nr 3

Ziemniak Polski 2014 nr 3 40 Ziemniak Polski 2014 nr 3 Ochrona TECHNIKA PCR I JEJ MODYFIKACJE W IDENTYFIKACJI PATOGENÓW ZIEMNIAKA mgr inż. Joanna Chołuj, dr inż. Włodzimierz Przewodowski IHAR PIB, Pracownia Diagnostyki Molekularnej

Bardziej szczegółowo

Zakład Chorób Ryb. PIWet. Zastosowanie molekularnych metod do diagnostyki wirusowych chorób ryb, wirusa krwotocznej posocznicy

Zakład Chorób Ryb. PIWet. Zastosowanie molekularnych metod do diagnostyki wirusowych chorób ryb, wirusa krwotocznej posocznicy PIWet Zakład Chorób Ryb Zastosowanie molekularnych metod do diagnostyki wirusowych chorób ryb, wirusa krwotocznej posocznicy łososiowatych o (VHS), wirusa zakaźnej a martwicy układu krwiotwórczego (IHN)

Bardziej szczegółowo

CENNIK PRODUKTÓW DNA-GDAŃSK 2013

CENNIK PRODUKTÓW DNA-GDAŃSK 2013 CENNIK PRODUKTÓW DNA-GDAŃSK 2013 ZESTAWY DO IZOLACJI I OCZYSZCZANIA DNA I RNA EXTRACTME PLASMID DNA KIT Nowość! izolacja plazmidowego DNA EXTRACTME DNA BACTERIA KIT Nowość! izolacja genomowego DNA z bakterii

Bardziej szczegółowo

dostawa odczynników chemicznych oraz akcesoriów laboratoryjnych

dostawa odczynników chemicznych oraz akcesoriów laboratoryjnych dostawa odczynników chemicznych oraz akcesoriów laboratoryjnych Polsko-Japońska Wyższa Szkoła Technik Komputerowych 02-008 Warszawa Koszykowa 86 Tel. (22) 58 44 536 Fax. 022 58 44 502 E-mail trampczynska@pjwstk.edu.pl

Bardziej szczegółowo

INSTYTUT GENETYKI i HODOWLI ZWIERZĄT POLSKIEJ AKADEMII NAUK ul. POSTĘPU 36A, JASTRZĘBIEC, 05-552 Magdalenka

INSTYTUT GENETYKI i HODOWLI ZWIERZĄT POLSKIEJ AKADEMII NAUK ul. POSTĘPU 36A, JASTRZĘBIEC, 05-552 Magdalenka Jastrzębiec, 12. 03. 2014 r. Dotyczy przetargu DAZ-2401/ 7 / 14 na dostawę odczynników laboratoryjnych. Do zamawiającego wpłynęły następujące pytania na które odpowiedzi publikuje poniŝej: Dotyczy części

Bardziej szczegółowo

Podstawy inżynierii genetycznej

Podstawy inżynierii genetycznej Metody bioinformatyki Podstawy inżynierii genetycznej prof. dr hab. Jan Mulawka Czym jest inżynieria genetyczna Zbiór technik rekombinowania i klonowania DNA Wydzielanie i charakteryzowanie pojedyńczych

Bardziej szczegółowo

Stowarzyszenie na Rzecz Dzieci z Zaburzeniami Genetycznymi Badania molekularne

Stowarzyszenie na Rzecz Dzieci z Zaburzeniami Genetycznymi Badania molekularne http://www.genetyka-ginekolog.pl/ Techniki molekularne z przykładami Jedną z podstawowych technik wykorzystywanych w genetyce molekularnej jest RFLP (ang. restriction fragments length polymorphism, czyli

Bardziej szczegółowo

Novabeads Food DNA Kit

Novabeads Food DNA Kit Novabeads Food DNA Kit Novabeads Food DNA Kit jest nowej generacji narzędziem w technikach biologii molekularnej, umożliwiającym izolację DNA z produktów spożywczych wysoko przetworzonych. Metoda oparta

Bardziej szczegółowo

Walidacja metod wykrywania, identyfikacji i ilościowego oznaczania GMO. Magdalena Żurawska-Zajfert Laboratorium Kontroli GMO IHAR-PIB

Walidacja metod wykrywania, identyfikacji i ilościowego oznaczania GMO. Magdalena Żurawska-Zajfert Laboratorium Kontroli GMO IHAR-PIB Walidacja metod wykrywania, identyfikacji i ilościowego oznaczania GMO Magdalena Żurawska-Zajfert Laboratorium Kontroli GMO IHAR-PIB Walidacja Walidacja jest potwierdzeniem przez zbadanie i przedstawienie

Bardziej szczegółowo

Metody wykrywania genetycznie zmodyfikowanych organizmów

Metody wykrywania genetycznie zmodyfikowanych organizmów Metody wykrywania genetycznie zmodyfikowanych organizmów Katarzyna Grelewska- Nowotko Laboratorium Kontroli GMO Zakład Biotechnologii i Cytogenetyki Roślin IHAR- PIB Rośliny genetycznie zmodyfikowane:

Bardziej szczegółowo

Ampli-LAMP Salmonella species

Ampli-LAMP Salmonella species Novazym Products Novazym Polska ul. Żywokostowa 23, 61-680 Poznań, tel. +48 0 61 610 39 10, fax +48 0 61 610 39 11, email info@novazym.com Zestaw do identyfikacji materiału genetycznego bakterii z rodzaju

Bardziej szczegółowo

SYLABUS. Wydział Biologiczno-Rolniczy. Katedra Biochemii i Biologii Komórki

SYLABUS. Wydział Biologiczno-Rolniczy. Katedra Biochemii i Biologii Komórki SYLABUS 1.1. PODSTAWOWE INFORMACJE O PRZEDMIOCIE/MODULE Nazwa przedmiotu/ modułu Biologia molekularna Kod przedmiotu/ modułu* Wydział (nazwa jednostki prowadzącej kierunek) Nazwa jednostki realizującej

Bardziej szczegółowo

Hybrydyzacja kwasów nukleinowych metodą Southerna

Hybrydyzacja kwasów nukleinowych metodą Southerna Hybrydyzacja kwasów nukleinowych metodą Southerna ENZYMY SŁUŻĄCE DO MANIPULACJI DNA KATEGORIA FUNKCJA CHARAKTERYSTYKA PRZYKŁADY POLIMERAZY synteza nowych polinukleotydów komplementarnych do istniejącej

Bardziej szczegółowo

PL 208956 B1. Sposób wykrywania i różnicowania chorób należących do grupy hemoglobinopatii, zwłaszcza talasemii

PL 208956 B1. Sposób wykrywania i różnicowania chorób należących do grupy hemoglobinopatii, zwłaszcza talasemii RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 208956 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 381219 (22) Data zgłoszenia: 05.12.2006 (51) Int.Cl. C12Q 1/68 (2006.01)

Bardziej szczegółowo

PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika

PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika Spis treści 1. Zawartość 2 1.1 Składniki zestawu 2 2. Opis produktu 2 2.1 Założenia metody 2 2.2 Instrukcja 2 2.3 Specyfikacja

Bardziej szczegółowo

PROJEKT WSPÓŁFINANSOWANY PRZEZ UNIĘ EUROPEJSKĄ Z EUROPEJSKIEGO FUNDUSZU ROZWOJU REGIONALNEGO 1 z 7

PROJEKT WSPÓŁFINANSOWANY PRZEZ UNIĘ EUROPEJSKĄ Z EUROPEJSKIEGO FUNDUSZU ROZWOJU REGIONALNEGO 1 z 7 Poznań, dnia 28.04.2014 r. BioVentures Institute Spółka z ograniczoną odpowiedzialnością ul. Promienista 83 60 141 Poznań Zapytanie ofertowe nr 01/2014 Projekt Nowa technologia wytwarzania szczepionek

Bardziej szczegółowo

Zakład Biologii Molekularnej, Wydział Farmaceutyczny, WUM.

Zakład Biologii Molekularnej, Wydział Farmaceutyczny, WUM. Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: TERAPIA GENOWA Plan ćwiczeń Ćwiczenie 1: Przygotowanie warsztatu terapii genowej 1. Kontrola jakościowa preparatów plazmidowych paav/lacz,

Bardziej szczegółowo

Endonukleazy restrykcyjne molekularne nożyczki

Endonukleazy restrykcyjne molekularne nożyczki Endonukleazy restrykcyjne molekularne nożyczki Inżynieria genetyczna nauka o technikach badawczych pozwalających na ingerencję w materiał genetyczny organizmów w celu wyizolowania i charakterystyki określonych

Bardziej szczegółowo

Parametr Wymagany parametr Oferowany parametr 1. 2. 3. a) z wbudowaną pompą membranową PTEE, b) kondensorem par, System

Parametr Wymagany parametr Oferowany parametr 1. 2. 3. a) z wbudowaną pompą membranową PTEE, b) kondensorem par, System Załącznik nr 1A do SIWZ. PARAMETRY TECHNICZNE PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA Zadanie nr 1. TERMOSTAT CYRKULACYJNY Termostat cyrkulacyjny Z grzaniem i chłodzeniem Zakres temperatury roboczej 25 o C do + 200 o C

Bardziej szczegółowo