ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ

Transkrypt

1 ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ

2

3 3 Spis treści Stabilność technologii TAG Specifikacja qpcr Mix-ów Kompatybilność kitów qpcr 5x HOT FIREPol EvaGreen qpcr Supermix 5x HOT FirePol EvaGreen qpcr Mix Plus 5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix 5x HOT FirePol Probe qpcr Mix Plus Właściwości produktów PCR HOT FirePol DNA Polimeraza 5 HOT FIREPol Blend Master Mix & Blend Master Mix Ready to Load FIREPol DNA Polimeraza 5 FIREPol Master Mix & Master Mix Ready to Load TERMIPol DNA Polimeraza M-MLV Reverse Transcriptase RNase H Minus DNA Polimeraza dntp Mix and Set 100 bp DNA Ladder 1 kb DNA Ladder 6 x DNA Loading Dye Buffers 10 GC-rich Enhancer 25 mm MgCl PCR Grade Water

4 4 Stabilność technologii TAG Solis Taq jest technologią p ozwalającą na utworzenie bardziej stabilnych białek, bez utraty ich właściwości. Umożliwiło to stworzenie produktów typu FIREPol, w tym Polimerazy Taq - wyjątkowo stabilnej w temperaturze pokojowej. Zwiększona stabilność białek w roztworze Solis Taq podnosi trwałość i tolerancję białka na zmiany temperatury co zapobiega self-hydrolizie Polimerazy Taq. Relativeactivity% TERMIPol Polimeraza HOT FIREPol Polimeraza Timeinmonths FIREPol Polimeraza Niezwykła stabilność w temperaturze pokojowej Wszystkie enzymy wyprodukowane przez firmę Solis BioDyne są niezwykle stabilne w temperaturze pokojowej. Ta cecha została osiągnięty dzięki odpowiednim modyfikacjom genetycznym Polimerazy Taq. Wszystkie odczynniki mogą pozostawać w temperaturze pokojowej powyżej jednego miesiąca bez szkody dla ich biologicznej aktywności. Stabilność w temp. -20 C Oprócz niezwykłej stabilności w temperaturze pokojowej, enzymy firmy Solis BioDyne posiadają również wyjątkowo długi okres przydatności. Nawet po 14 latach (!), pierwsza wytworzona przez firmę polimeraza DNA FIREPol, dała zadowalające wyniki w reakcji PCR. FIREPol Wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie Wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie produktów nie powoduje utraty ich aktywności. Stabilność oraz aktywność produktów jest zachowana nawet po 50 cyklach (!) zamrażania i rozmrażania. Użytkownik może mieć pewność stałej jakości produktu, aż do przeprowadzenia ostatniej reakcji. Relativeactivity% Timeinyears

5 5 Stabilność NAWET w temp. +35 C Niedawno testowano stabilność produktów w temperaturze +35 C. Nie stwierdzono żadnych różnic w działaniu pomiędzy świeżymi mieszaninami qpcr, przechowywanymi w temp. -20 C a mieszaniną qpcr przechowywaną w temp. +35 C. Oba produkty przechowywano przez okres 4 tygodni w podanych temperaturach. Porównanie Polimerazy FIREPol i HOT FIREPol również nie wykazało zmian w ich wydajności po 4-tygodniowym okresie przechowywania w temperaturze +35 C. HOT FIREPol DNA Polimeraza FIREPol DNA Polimeraza Komfort przeprowadzania reakcji w temp. pokojowej Z uwagi na wyjątkową stabilność wszystkich produktów w temperaturze otoczenia, nie ma konieczności prowadzenia reakcji na lodzie, czy w specjalnie przygotowanych warunkach. Ta cecha jest szczególnie istotna dla użytkowników wykonujących dużą ilość badań, gdzie utrzymanie odpowiednio niskiej temperatury reakcji jest dość trudn e. Stosowanie produktów firmy Solis BioDyne nie wymaga używania łaźni z lodem, co w żaden sposób nie wpływa na zmniejszenie wydajności reakcji. Nie wykryto strat aktywności w mieszaninie 5x Mix po przechowywaniu jej w temperaturze 35 C przez jeden miesiąc. Transport i przechowywanie Wszystkie odczynniki Solis BioDyne: DNA Polymerazy, Master Mixy i dntps mogą pozostawać w temp. pokojowej powyżej jednego miesiąca, bez szkody dla ich biologicznej aktywności. Dlatego też mogą być transportowane bez użycia suchego lodu. Długotrwałe przechowywanie produktów zaleca się w temperaturze -20 C.

6 6 Specyfikacja miksów qpcr Większa precyzja i szerszy zakres działania Wszystkie Mixyq PCR produkowane są jako mieszaniny 5-krotnie stężone. Zajmują one tylko 1/5 końcowej bjętości reakcji, pozostawiając jednocześnie 2.5 razy więcej miejsca dla szablonu w stosunku do mieszanin 2-krotnie stężonych. Rozwiązanie takie jest bardzo pomocne w sytuacji, kiedy mamy do czynienia z szerokim zakresem rozcieńczeń lub w przypadku badania ekspresji genu, kiedy stężenie docelowego genu jest bardzo niskie. Zastosowanie mieszaniny 5-krotnie stężonej pozwala na użycie większej ilości cdna w reakcji, co umożliwia uzyskanie bardziej precyzyjnych i wiarygodnych wyników przy niższych wartościach cykli progowych (CT). Rn , Ochrona przed światłem Cycle Barwnik interkalujący z DNA - EvaGreen oraz referencyjny barwnik ROX, znajdujące się w mieszaninie qpcr, są wrażliwe na działanie światła, dlatego wymagają opakowań ochronnych. Solis BioDyne umieszcza wszystkie mieszaniny qpcr w ciemnych probówkach, co chroni je przed ekspozycją na światło podczas transportu. Barwnik EvaGreen Jeden mix dla wszystkich urządzeń wymagających ROX Wysoka czułość - daje bardzo silny sygnał PCR przy zalecanym stężeniu. Niski stopień hamowania reakcji - wykazuje znacznie mniejszy wpływ na reakcję PCR niż inne barwniki. Wysoka stabilność- niezniszczalny w większości warunków biochemicznych. Może być przechowywany w temperaturze pokojowej i podlegać wielokrotnemu procesowi zamrażania i rozmrażania bez wpływu na jego aktywność. Widmo podobne do innych popularnych barwników - kompatybilny z szeroką gamą termocyklerów dostępnych na rynku. Mniej mutagenny i cytotoksyczny. Zgodność z różnymi urządzeniami wymagającymi ROX: Jednakowe 10-krotnie rozcieńczone 72 bp fragmenty genu albuminy, zostały jednocześnie poddane amplifikacji z wykorzystaniem HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus na trzech różnych urządzeniach: Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (fioletowy), Applied Biosystems StepOnePlus (zielony) oraz Applied Biosystems 7900HT Real-Time PCR System (różowy). Rn Cycle Solis BioDyne Supermix Comp. A Comp. B Comp. C Bardzo konkurencyjny Cztery pięciokrotne rozcieńczenia 98 bp genu GAPDH amplifikowano z ludzkiego genomowego DNA z użyciem 5 HOT FIREPol EvaGreen qpcr Supermix (czerwony) i kitów qpcr konkurencyjnych firm A, B i C (ciemny niebieski, jasny niebieski i zielony). Reakcje przeprowadzono na Applied Biosystems ViiATM 7 Real-Time PCR System zgodnie z protokołem zalecanym przez dostawcę.

7 7 Kompatybilność kitów qpcr: FIREPol jest znakiem towarowym firmy Solis BioDyne. Applied Biosystems i StepOne są znakami towarowymi firmy Applied Biosystems LLC. QuantStudio i VIIa są znakami towarowymi Life Technologies Corporation. Stratagen, M30005, MX3005P są znakami towarowymi firmy Agilent Technologies Inc. Mastercycler jest znakiem towarowym firmy Eppendorf AG. Rotor-Gene jest znakiem towarowym firmy Qiagen Group. Bio-Rad, CFX96, CFX384, iq, MyiQ, Opticon 2, Cromo4, MiniOpticon są znakami towarowymi firmy Bio-Rad Laboratories. SmartCycler i Cepheid są znakami towarowymi cefeidy. Corporation. LightCycler jest znakiem towarowym Roche Molecular Systems Eco jest znakiem towarowym firmy Illumina Inc. PikoReal jest znakiem towarowym firmy Thermo Fisher Scientific Inc EvaGreen jest znakiem towarowym firmy Biotium Inc.

8 8 5x HOT FIREPol EvaGreen qpcr Supermix Opis: 5x HOT FIREPolEvaGreenPCR Supermix zawiera gotowy do użycia zestaw zoptymalizowanych odczynników do ilościowej reakcji real-time PCR, łącznie z barwnikiem EvaGreen. Zestaw zawiera wszystkie niezbędne komponenty, z wyjątkiem kontroli i starterów, do przeprowadzenia reakcji PCR. HOT FIREPol DNA Polimeraza zostaje aktywowana w wyniku trwającej przez 12 minut inkubacji w temp. 95 C. Dzięki mechanizmowi Hot-Start startery nie mogą niespecyficznie hybrydyzować z matrycą, przez co nie tworzą się nieprawidłowe produkty reakcji utworzone w niskich temperaturach. Zalety: Wysoce specyficzne i powtarzalne reakcje real-time PCR Doskonała wydajność w przypadku niskiej liczby kopii Wysoka wydajność reakcji na długich (do 500 bp) i bogatych w pary GC matrycach Ułatwione pipetowanie przez zawartość niebieskiego barwnika Zastosowanie: Wykrywanie i oznaczanie ilościowe DNA i cdna Profilowanie ekspresji genów Wykrywanie bakterii Określenie wirusowego obciążenia organizmu Kontrola jakości: Kontrola jakości poprzez real-time PCR na różnych matrycach genomu Badanie stabilności w temperaturze pokojowej Badanie wpływu na zmiany temperatury w cyklach zamrażanie/rozmrażanie Doskonała czułość i specyficzność przy użyciu różnych cyklerów qpcr Cztery dziesięciokrotne rozcieńczenia 98 bp genu GAPDH amplifikowanego z ludzkiego genomowego DNA za pomocą HOT FIREPol EvaGreen qpcr Supermix. Stężenie DNA w jednej studzience wynosi od 0,01 ng do 10 ng. Reakcję przeprowadzono na systemach: Applied Biosystems ViiA 7 Real-Time PCR oraz Roche LightCycler480 ( wykresy poniżej), zgodnie z protokołem zalecanym przez dostawcę. 5x HOT FIREPol EvaGreen qpcr Supermix S0 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 82, ml 2000 Reakcji 658, ml 5000 Reakcji 1.645,00 Illumina Inc. EvaGreen jest znakiem towarowym Biotium Inc.

9 9 5x HOT FirePol EvaGreen qpcr Mix Plus Opis: HOT FIREPol EvaGreen qpcr Mix zawiera gotowy do użycia zestaw odczyników dla ilościowej reakcji real-time PCR, łącznie z barwnikiem EvaGreen. Zawarte w zestawie komponenty wymagane do przeprowadzenia reakcji qpcr: HOT FIREPol DNA Polymerase, dntps, MgCl 2, barwnik EvaGreen oraz barwnik ROX, z wyjątkiem kontroli, starterów i wody. Właściwości Wysoka czułość i szeroki zakres dynamiczny Wyjątkowa stabilność w temperaturze pokojowej Bazuje na barwniku EvaGreen Wygodny, gotowy do użycia roztwór Reakcja bez użycia lodu Dostępne z barwnikiem lub bez barwnika referencyjnego ROX Mix kompatybilny z większością dostępnych na runku termocyklerów Real-Time Zastosowanie Wykrywanie i oznaczanie ilościowe DNA i cdna Profilowanie ekspresji genów Genotypowanie Wykrywanie bakterii Określenie wirusowego obciążenia organizmu Analiza HRM Wyniki uzyskane podczas zastosowania EvaGreen qpcr Mix Wysoka powtarzalność wyników przy użyciu różnych cyklerów qpcr Dwadzieścia niezależnych amplifikacji każdego rozcieńczania, wskazuje na wysoką powtarzalność uzyskanych wyników przy użyciu różnych cyklerów qpcr. Reakcje wykonano w Corbett Rotor-Gene 6000 (górny wykres), używając HOT Fire Pol EvaGreen qpcr Mix Plus (no ROX) i w Roche LightCycler 1,5 (dolny wykres), używając HOT Fire Pol EvaGreen qpcr Mix Plus (Capillary). Doskonała czułość i specyficzność Amplifikacja fragmentu 98 bp genu GAPDH, wyznaczyła wydajność reakcji poprzez krzywe na wykresie (górny wykres) z bardzo specyficznymi pikami w analizie krzywej topnienia (dolny wykres) przy użyciu HOT FIREPol EvaGreen qpcr Mix Plus (no ROX). Wykonano amplifikację ludzkiego genomowego DNA przy użyciu Rotor-Gene 6000 qpcr Cycler zgodnie z protokołem zalecanym przez dostawcę. 5 x HOT FIREPol EvaGreen qpcr Mix Plus (ROX) S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 63, ml 2000 Reakcji 506, ml 5000 Reakcji 1.270,00 5 x HOT FIREPol EvaGreen qpcr Mix Plus (no ROX) S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 63, ml 2000 Reakcji 506, ml 5000 Reakcji 1.270, S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka 5 x HOT FIREPol EvaGreen qpcr Mix Plus (Capillary) ml 250 Reakcji 63, ml 2000Reakcji 506, ml 5000 Reakcji 1.270,00

10 10 5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix Opis HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix zawiera gotowy do użycia roztwór dla metody HRM (High Resolution Melt), łącznie z barwnikiem EvaGreen. Kit zawiera: Polimerazę HOT FIREPol DNA, dntpy, MgCl 2 oraz barwnik ROX w zależności od wymagań systemu. Właściwości Szybkość i czułość genotypowania metodą HRM Wyjątkowa stabilność w temperaturze pokojowej Bazuje na barwniku EvaGreen Wygodny, gotowy do użycia roztwór Reakcja bez użycia lodu Kontrola jakości Kontrola jakości poprzez real-time PCR na różnych matrycach genomu Badanie stabilności w temperaturze pokojowej Badanie wpływu na zmiany temperatury w cyklach zamrażanie/rozmrażanie Wyniki uzyskane podczas zastosowania HRM Mix Czułość genotypowania metodą HRM Metody HRM użyto do określenia genotypu C insertion w genie BRCA1, z wykorzystaniem HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix (dwa wykresy powyżej). Reakcje przeprowadzono w Corbett Rotor- Gene Zielone linie reprezentują wildtypes bez insertion, czerwony wykres oznacza C insertion, a niebieski reprezentuje pacjenta o nieznanym fenotypie. Colour 5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix (ROX) S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 63, ml 2000 Reakcji 506, ml 5000 Reakcji 1.270,00 5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix (no ROX) S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 63, ml 2000 Reakcji 506, ml 5000 Reakcji 1.270,00 EvaGreen jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy BIOTIUM, INC.

11 11 5x HOT FirePol Probe qpcr Mix Plus Opis HOT FIREPol Probe qpcr Mix zawiera gotowy do użycia zestaw odczynników do real-time PCR: HOT FIREPol DNA Polimerazę, dntp, MgCl₂, oryginalne bufory oraz barwnik ROX z wyjątkiem kontroli, starterów i wody. Mix ten umożliwia detekcję niskiej liczby amplifikacji. HOT FIREPol DNA Polimeraza zostaje aktywowana w wyniku trwającej przez 15 min inkubacji w temp. 95 C. Dzięki temu startery nie mogą niespecyficznie hybrydyzować z matrycą i nie tworzą się nieprawidłowe produkty reakcji utworzone w niskich temperaturach. HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus jest kompatybilny z większością termocyklerów dostępnych na rynku. Właściwości Wysoka czułość i szeroki zakres dynamiczny Wyjątkowa stabilność w temperaturze pokojowej Wygodny, gotowy do użycia roztwór Reakcja bez użycia lodu Dostępne z barwnikiem lub bez barwnika referencyjnego ROX Mix kompatybilny z większością dostępnych na runku termocyklerów Real-Time Kontrola jakości Kontrola jakości poprzez real-time PCR na różnych matrycach genomu Badanie stabilności w temperaturze pokojowej Badanie wpływu na zmiany temperatury w cyklach zamrażanie/rozmrażanie Wyniki uzyskane podczas zastosowania Probe Mix Zastosowanie Wykrywanie i oznaczanie ilościowe DNA i cdna Profilowanie ekspresji genów Genotypowanie Wykrywanie bakterii Określenie wirusowego obciążenia organizmu Wysokakonkurencyjność Trzy dziesięciokrotne rozcieńczenia 72 bp genu albuminy zamplifikowanego z ludzkiego genomowego DNA za pomocą HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus (czerwony) i z qpcr mix z Company A (zielony). Reakcję przeprowadzono na systemie Applied Biosystems 7900HT Real-Time PCR zgodnie z protokołem zalecanym przez dostawcę. Doskonała powtarzalność Dwadzieścia niezależnych amplifikacji każdego rozcieńczania, wskazuje na wysoką powtarzalność uzyskanych wyników przy użyciu HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus. Wykonano amplifikację ludzkiego genomowego DNA przy użyciu systemu Applied Biosystems 7900HT Real-Time PCR zgodnie z protokołem zalecanym przez dostawcę. Zgodność metody Multiplex PCR Amplifikację FAM znakowanego czynnika SNAI1 (pomarańczowy) i VIC znakowanego genem referencyjnym HPRT (żółty) przeprowadzono w jednej reakcji z wykorzystaniem HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus. Ten multiplex qpcr został użyty równocześnie na trzech 10-krotnych rozcieńczeniach cdna ludzkiego łożyska, przy użyciu systemu Applied Biosystems 7900HT Real- Time PCR zgodnie z protokołem zalecanym przez dostawcę. 5 x HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus (ROX) 5 x HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus (no ROX) 5 x HOT FIREPol Probe qpcr Mix Plus (Capillary) S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 55, ml 2000 Reakcji 440, ml 5000 Reakcji 1.100, S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 51, ml 2000 Reakcji 414, ml 5000 Reakcji 1.035, S 0.2 ml 50 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 51, ml 2000 Reakcji 414, ml 5000 Reakcji 1.030,00

12 12 Właściwości produktów PCR: Hot-Start PCR HOT FIREPo l DNA Polymerase HOT FIREPo l Blend Master Mix HOT FIREPo l Blend Master Mix Ready to Load Specyfikacja Rekombinowana polimeraza Taq przeznaczona do Hot Start PCR. Zestaw zawiera dwa zoptymalizowane bufory, dodatek do matryc bogatych w pary zasad GC oraz 25 mm MgCl 5 Master Mix; zawiera polimerazę Hot Start oraz enzym proofreading, przeznaczony dla dłuższych matryc, dostępny w czterech stężeniach MgCl₂ 5 Master Mix; zawiera polimerazę Hot Start oraz enzym proofreading, przeznaczony dla dłuższych matryc, dostępny w czterech stężeniach MgCl₂, zawiera dwa barwniki Przygotowanie w temperaturze pokojowej HOT START Redukcja błędów w porównaniu do standardowej polimerazy Taq 5 5 READY TO LOAD Zakres amplifikacji 3 kb 5 kb 5 kb Typ klonowania TA Tępe końce Tępe końce Standardowy PCR Specyfikacja Przygotowanie w temperaturze pokojowej Klasyczny PCR Do fragmentów bogatych w pary zasad GC Ready to Load Zakres amplifikacji Typ klonowania FIREPol DNA Polymerase FIREPol Master Mix Rekombinowana polimeraza Taq przeznaczona do klasycznego PCR. Zestaw zawiera dwa zoptymalizowane bufory, dodatek do matryc bogatych w GC oraz 25 mm MgCl FIREPol Master Mix Ready to Load 5x Master Mix, dostępny w dwóch stężeniach MgCl₂ 5x Master Mix, dostępny w dwóch stężeniach MgCl₂, zawiera dwa barwniki 3 kb 3 kb 3 kb TA TA TA Wydłużenie starterów Specyfikacja Przygotowanie w temperaturze pokojowej Hot Start Zwiększona wydajność dla fragmentów zawierających ddntps HOT TERMIPol Termostabila polimeraza Hot-Start DNA przeznaczona do MALDI-TOF oraz pozostałych platform wydłużenia starterów TERMIPol Termostabila polimeraza DNA przeznaczona do MALDI-TOF oraz pozostałych platform wydłużenia starterów Odwrotna transkrypcja Specyfikacja Przygotowanie w temp. pokojowej Synteza ddna Ochrona RNA przed działaniem RNazy Optymalna temperatura reakcji Wysoka czułość cdna zgodny z qpcr M-MLV RNase H Reverse Transcriptase RNase HDNA Polymerase 37 C

13 13 HOT FirePol DNA Polimeraza Opis HOT FIREPol DNA Polymeraza jest chemicznie zmodyfikowaną FIREPol DNA Polimerazą, o zwiększonej specyfice działania, redukującej niedoskonałości standardowej polimerazy. HOT FIREPol DNA Polimeraza ma aktywność 5 3 polimerazy DNA oraz aktywność egzonukleazy 5 3. Nie posiada aktywności egzonukleazy 3 5. HOT FIREPol Polimeraza DNA w temperaturze otoczenia jest nieaktywna. Zostaje aktywowana w wyniku trwającej przez 15 min inkubacji w temp. 95 C. Dzięki temu startery nie mogą niespecyficznie hybrydyzować z matrycą i nie tworzą się nieprawidłowe produkty reakcji utworzonych w niskich temperaturach. Czas elongacji: ~1 min/1 kb. WAŻNE: Temperatura przyłączania starterów powinna być niższa od 2-6 C niż temperatura topnienia. Źródłem enzymu jest rekombinant E. coli zawierający plazmid ze zmodyfikowanym genem Thermus aquaticus. Właściwości Wyjątkowa stabilność w temperaturze pokojowej Zwiększona czułość, swoistość i wydajność Szeroki wybór buforów i dodatków w celu optymalizacji wyników dla potrzeb użytkownika Dostarczanie aktywnego enzymu przez cały czas trwania reakcji PCR Zastosowanie Hot Start PCR DHPLC Klonowanie TA Kontrola jakości Enzym jest wolny od nacięć oraz egzonukleaz i niespecyficznych endonukleaz Kontrola jakości przez PCR na różnych matrycach Wskaźnik błędu na jeden nukleotyd podczas jednego cyklu ~2.5 x 10-5 Szacunkowy okres półtrwania w temp. 95 C wynosi 1,5 godziny Wyniki uzyskane podczas zastosowania HOT FIREPol DNA Polimerazy Genomowe DNA myszy Fragment 1183 bp and 643 bp genu zamplifikowano z genomowego DNA myszy, przy użyciu HOT FIREPol DNA Polimerazy z trzema buforami: A1 (ścieżka 1-3), B1 (ścieżka 4-6) i B2 (ścieżka 7-9) Matryca DNA była 10-krotnie rozcieńczona od początkowego stężenia 1 ng / ul. HOT FIREPol DNA Polimeraza dała zadowalający wynik nawet przy rozcieńczeniu tak niskim jak 0.01 ng/μl. HOT FIREPol polimerazę DNA stosowano w stężeniu 0.04 U / ul. Genomowe DNA roślin Fragment 672 bp zamplifikowano z genomowego DNA jęczmienia z wykorzystaniem HOT FIREPol DNA Polimerazy z trzema buforami: A1 (ścieżka 1-3), B1 (ścieżka 4-6) i B2 (ścieżka 7-9) Matryca DNA była 10-krotnie rozcieńczona od początkowego stężenia 1 ng / ul. HOT FIREPol DNA Polimeraza dała zadowalający wynik nawet przy rozcieńczeniu tak niskim jak 0.01 ng/μl. HOT FIREPol polimerazę DNA stosowano w stężeniu 0.04 U / ul. HOT FIREPol DNA Polimeraza (5 U/μl) S 100 U Próbka U 50, U 100,00

14 14 5 HOT FIREPol Blend Master Mix & Blend Master Mix Ready to Load Opis: 5 x HOT FIREPolR Blend Master Mix Ready to Load to wstępnie wymieszany gotowy do użycia roztwor zawierający wszystkie odczynniki dla HOT Start PCR, z wyjątkiem kontroli, starterów i wody. W skład zestawu wchodzą rownież dwa barwnikami (niebieski i żołty), ktore umożliwiają monitorowanie postępu reakcji w czasie elektroforezy. Mix zawiera dwa zoptymalizowane enzymy, mające aktywność egzonukleazy 5 3 oraz aktywność egzonukleazy 3 5. HOT FIREPolR Blend Master Mix charakteryzuje większadokładność i precyzja w porownaniu ze standardowym Hot Start Master Mix. Powstałe produkty PCR posiadają komplementarne końce tępe do procedury klonowania TA. Właściwości Stabilność w temperaturze pokojowej przez okres jednego miesiąca Reakcja bez użycia lodu Wygodny gotowy do użycia roztwór do PCR - Skrócony czas przygotowania, - Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia, - Ograniczenie błędów podczas pipetowania, - Duża wydajność reakcji. Dłuższe produkty Zwiększona wierność i czułość Zawiera barwniki do elektroforezy Wybór różnych stężeń MgCl 2 Wyniki uzyskane podczas zastosowania Blend Master Mix Amplikony różnej długości z różnych matryc Ścieżki 1-4 przedstawiają doskonałą amplifikację fragmentów różnej długości DNA λ. Ścieżka 5 i 6 przedstawia różne amplikony genomowego DNA myszy. Wszystko to przeprowadzono z użyciem 5 x HOT FIREPol Blend Master Mix Ready to Load z 7,5 mm MgCl 2 5 x HOT FIREPol Blend Master Mix Ready to Load z BSA z 7,5 mm MgCl 2 5 x HOT FIREPol Blend Master Mix Ready to Load z BSA z 10 mm MgCl 2 5 x HOT FIREPol Blend Master Mix Ready to Load z BSA z 12,5 mm MgCl S ml 25 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 49, ml 5000 Reakcji 980, S ml 25 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 49, ml 5000 Reakcji 980, S ml 25 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 49, ml 5000 Reakcji 980,00 5 x HOT FIREPol Blend Master Mix S ml 25 Reakcji Próbka Ready to Load ml 250 Reakcji 49,00 z BSA z 15 mm MgCl ml 5000 Reakcji 980, S ml 25 Reakcji Próbka 5x HOT FIREPol Blend Master Mix z BSA z 7.5 mm MgCl 2 5x HOT FIREPol Blend Master Mix z BSA z 10 mm MgCl 2 5x HOT FIREPol Blend Master Mix z BSA z 12,5 mm MgCl 2 5x HOT FIREPol Blend Master Mix z BSA z 15 mm MgCl ml 250 Reakcji 49, ml 5000 Reakcji 980, S ml 25 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 49, ml 5000 Reakcji 980, S ml 25 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 49, ml 5000 Reakcji 980, S ml 25 Reakcji Próbka ml 250 Reakcji 49, ml 5000 Reakcji 980,00

15 15 FIREPol DNA Polimeraza Opis: FIREPol jest wysokiej jakości, termostabilną polimerazą DNA. Ma zwiększoną stabilność w temp. pokojowej, nie tracąc przy tym nic ze swojej biologicznej aktywności przez okres dłuższy niż jeden miesiąc. Enzym ma aktywność 5 3 polimerazy DNA oraz aktywność 5 3 egzonukleazy. Nie posiada aktywności egzonukleazy 3 5. Właściwości Wyjątkowa stabilność w temperaturze pokojowej Zwiększona czułość, swoistość i wydajność Szeroki wybór buforów i dodatków w celu optymalizacji wyników dla potrzeb użytkownika Zastosowanie Szeroki zakres testów PCR Klonowanie TA Kontrola jakości Enzym jest wolny od nacięć oraz egzonukleaz i niespecyficznych endonukleaz Kontrola jakości przez PCR na różnych matrycach Wskaźnik błędu na jeden nukleotyd podczas jednego cyklu ~2.5 x 10-5 Szacunkowy okres półtrwania w temp. 95 C wynosi 1,5 godziny Wyniki uzyskane podczas zastosowania FIREPol DNA Polimerazy Genomowe DNA myszy Fragment 1200 bp genu beta-synukleiny zamplifikowano z genomowego DNA myszy, przy użyciu polimerazy DNA FIREPol z dwoma buforami: B (ścieżka 1-3) i BD (ścieżka 4-6). Matryca DNA była 10-krotnie rozcieńczona od początkowego stężenia 1 ng / ul. FIREPol polimerazę DNA stosowano w stężeniu 0.04 U / ul. Genomowe DNA roślin Fragment 672 bp zamplifikowano z genomowego DNA jęczmienia z wykorzystaniem FIREPol Polimerazy DNA z dwoma buforami: B (ścieżka 1-3) i BD (ścieżka 4-6). Matryca DNA była 10-krotnie rozcieńczona od początkowego stężenia 1 ng / ul. FIREPol polimerazę DNA dał zadowalający wyniknawet przy rozcieńczeniu tak niskim jak 0.01 ng/μl. FIREPol polimerazę DNA stosowano w stężeniu 0.04 U / ul. FIREPol DNA Polimeraza (5 U/μl) S 100 U Próbka U 27, U 54, U 108,00

16 16 5 FIREPol Master Mix & Master Mix Ready to Load 5 x FIREPol Master Mix jest wstępnie wymieszanym, gotowym do użycia roztworem zawierającym wszystkie komponenty niezbędne do wykonania reakcji PCR, z wyjątkiem kontroli, starterów i wody. W skład zestawu wchodzą również dwa barwnikami (niebieski i żółty), które umożliwiają monitorowanie postępu reakcji w czasie elektroforezy. 5 x FIREPol Master Mix jest polecany do każdego badania, którego wynik oznaczany będzie przy pomocy elektroforezy, przy użyciu bromku etydyny. Mix nie jest zalecany do badań wykorzystujących metody spektrofotometryczne (absorbancja, fluorescencja), ponieważ obecność barwników może wpłynąć na zafałszowanie wyniku badania. Właściwości Stabilność w temperaturze pokojowej przez okres jednego miesiąca Reakcja bez użycia lodu Wygodny gotowy do użycia roztwór do PCR - Skrócony czas przygotowania, - Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia, - Mniej błędów podczas pipetowania, - Duża wydajność reakcji. Zawiera barwniki do elektroforezy. Wybór dwóch różnych stężeń MgCl 2 Zastosowanie Szeroki zakres testów PCR Wytwarzanie produktów PCR do klonowania TA Łatwa wizualizacja na żelu Wyniki uzyskane podczas zastosowania Master Mix Genomowe DNA roślin Fragment 672 bp zamplifikowano z genomowego DNA jęczmienia, stosując FIREPol Master Mix (ścieżka 1-3) i FIREPol Master Mix Ready to Load (ścieżka 4-6). Matryca DNA została rozcieńczona 10-krotnie od początkowego stężenia 1 ng/μl. Master Mix dał zadowalający wynik nawet przy rozcieńczeniu tak niskim jak 0.01 ng/μl. 5 x FIREPol Master Mix 7.5 mm MgCl 2 5 x FIREPol Master Mix 12.5 mm MgCl 2 5 x FIREPol Master Mix Ready to Load 7.5 mm MgCl 2 5 x FIREPol Master Mix Ready to Load 12.5 mm MgCl S S S S ml 25 Reakcji 1 ml 250 Reakcji 0.1 ml 25 Reakcji 1 ml 250 Reakcji 0.1 ml 25 Reakcji 1 ml 250 Reakcji 0.1 ml 25 Reakcji 1 ml 250 Reakcji Próbka 29,00 Próbka 29,00 Próbka 37,50 Próbka 37,50 Zawiera barwniki - niebieski i żółty, które umożliwiają monitorowanie postępu reakcji w czasie elektroforezy

17 17 TERMIPol DNA Polimeraza TERMIPol DNA Polimeraza jest termostabilną polimerazą DNA, przystosowaną do spektrometrii mas MALDI-TOF i innych reakcji opartych na zasadzie wydłużania starterów. Enzym posiada aktywność polimerazy 5 3 i zwiększa możliwość przyłączania niestandardowych nukleotydów: dideoksynukleotydów i nukleotydów acyklicznych. TERMIPol jest dostępna w dwóch stężeniach: 5 U / ml i 25 U / μl oraz w wersji HOT TERMIPol DNA Polimeraza, która zmniejsza ryzyko wydłużania niepożądanych produktów oraz par primer-dimer powstających przy obniżeniu temperatury reakcji. Polimeraza wymaga inkubacji w temperaturze 95 C przez 15 minut. Właściwości Szczególnie skuteczna podczas przyłączania ddntp 99% skuteczność w MALDI-TOF Wysoki wskaźnik przyłączania Solidne i niezawodne reakcje Doskonała stabilność w temperaturze pokojowej Zastosowanie MALDI-TOF Wydłużanie starterów MassARRAY Kontrola jakości Wolna od zanieczyszczeń egzonukleazami i niespecyficznymi endonukleazami, Aktywność i stabilność enzymu przetestowana przy użyciu termocyklera, Wskaźnik błędu na jeden nukleotyd podczas jednego cyklu: ~ 8 x 10-5, Szacunkowy okres półtrwania w temp. 95 C wynosi 1,5 godziny. TERMIPol DNA Polimeraza (5 U/μl) TERMIPol DNA Polimeraza HC (25 U/μl) HOT TERMIPol DNA Polimeraza (5 U/μl) S 500 U Próbka U 61, U 246, S 1000 U Próbka U 122, U na specjalne zamówienie S 500 U Próbka U 105, U 420,00

18 18 M-MLV Reverse Transcriptase RNase H Minus DNA Polymerase Opis: RNASE H ACTIVITY M-MLV Reverse Transcriptase RNase H- jest genetycznie zmodyfikowaną M-MLV odwrotną transkryptazą, która wykazuje właściwości polimerazy DNA zależnej od RNA lub DNA, ale nie posiada aktywności rybonukleazy H. Enzym ten może syntetyzować komplementarną nić DNA zainicjowaną przez startery. Usunięcie aktywności H RNAzy skutkuje wzrostem pełnej długości produktów cdna. Zastosowanie mrna cdna RNase RNase H degrades mrna, causing truncation of cdna A T A T A T Synteza cdna Analiza RNA przez wydłużanie starterów Znakowanie DNA Brak aktywności H RNAzy Wysoka czułość Wysoka efektywności syntezy pełnej długości cdna mrna Reverse Transcriptase A A A cdna T T T Reverse Transcriptase Removal of the RNase H activity results in an increase of full-length cdna products M-MLV Reverse Transcriptase RNase H- (200 U/μl) S U Próbka U 144, U 720, U 2.880,00

19 19 dntp Mix and Set Opis: Wszystkie nukleotydy firmy Solis BioDyne są chemicznie syntetyzowanymi nukleotydami o 99% czystości (wg. HPLC). Mix nukleotydów stanowią cztery odrębne roztwory: datp, dctp, ddtp i dttp. Gotowy do użycia dntp Mix może być bezpośrednio użyty do reakcji amplifikacji, co pozwala zaoszczędzić czas, zmniejszyć ryzyko zakażenia i zapewnić powtarzalność wyników. dntp Mix: Gotowy do użycia (w jednej probówce) roztwór, zawiera w swoim składzie: datp, dctp, dgtp and dttp (każdy składnik o końcowym stężeniu 20 mm) w buforze TE. Końcowe stężenie całego roztworu dntp Mix wynosi 80 mm. dntp Set: 100 mm roztwór datp, dctp, dgtp i dttp, każdy w oddzielnej probówce w TE buforze. dutp: 100 mm dutp roztwór w TE buforze. Właściwości Zastosowanie Ultraczyste:> 99% (HPLC) Odpowiedni dla różnych technik PCR i qpcr Wiarygodne, spójne wyniki Synteza cdna Dostępne jako gotowe do użycia zestawy Sekwencjonowanie DNA Szeroki zakres zastosowań Znakowanie DNA Mutageneza Kontrola jakości Test Czystość (HPLC)> 99% Wolne od pirofosforanu, DNA, RNA, DNaz i RNaz Testowany techniką qpcr, PCR i reakcją odwrotnej transkrypcji Wzory strukturalne dntp dntp Mix 20 mm of each dntp Set 100 mm dutp 100 mm S 0.8 μmol Próbka μmol 14, μmol 72, S 4 x 0.5 μmol Próbka x 25 μmol 72, x 100 μmol 288, S 2.5 μmol Próbka μmol 18,00

20 bp DNA Ladder 1 kb DNA Ladder Opis: Drabinki DNA 1 kb i 100bp to gotowe do użycia wzorce masy molekularnej DNA, zaprojektowany do określania wielkości produktów PCR, przy zastosowaniu elektroforezy żelowej. Posiadają barwnik służący jako wizualna pomoc do monitorowania postępu migracji podczas elektroforezy w żelu agarozowym. 100 bp DNA Ladder zawiera 12 oddzielnych fragmentów DNA w przedziale od 100 bp do 3000 bp oraz barwnik -Bromophenol Blue. 1 kb DNA Ladder zawiera 13 odrębnych fragmentów DNA w przedziale od 300 bp do bp oraz dwa barwniki: Xylene Cyanole FF i Bromophenol Blue. Właściwości Gotowy do użycia roztwór Wyraźne prążki o zwiększonej intensywności Zawiera barwniki Stabilny w temperaturze otoczenia 100 bp DNA Ladder Ready to Load (0.1 µg/µl) 1 kb DNA Ladder Ready to Load (0.1 µg/µl) S 1.5 µg Próbka µg 32, S 1.5 µg Próbka µg 32,00