Genomic Mini AX Milk Spin

Podobne dokumenty
Genomic Mini AX Plant Spin

Genomic Mini AX Bacteria+ Spin

Genomic Maxi AX Direct

Genomic Midi AX Direct zestaw do izolacji genomowego DNA (procedura bez precypitacji) wersja 1215

Genomic Midi AX. 20 izolacji

Genomic Micro AX Swab Gravity Plus

Genomic Maxi AX zestaw do izolacji genomowego DNA wersja 0616

Gel-Out. 50 izolacji, 250 izolacji. Nr kat , Zestaw do izolacji DNA z żelu agarozowego. wersja 0617

Total RNA Zol-Out. 25 izolacji, 100 izolacji

Genomic Mini. 50 izolacji, 250 izolacji. Uniwersalny zestaw do izolacji genomowego DNA z różnych materiałów. wersja Nr kat.

Zestaw przeznaczony jest do całkowitej izolacji RNA z bakterii, drożdży, hodowli komórkowych, tkanek oraz krwi świeżej (nie mrożonej).

Plasmid Mini AX Gravity

Genomic Mini AX Body Fluids zestaw do izolacji DNA z płynów ustrojowych wersja 1115

Genomic Micro AX Blood Gravity 96-well

Plasmid Mini. 50 izolacji, 250 izolacji. Zestaw do izolacji plazmidów wysokokopijnych wersja Nr kat ,

Sherlock AX. 25 izolacji, 100 izolacji

Zestaw o zwiększonej wydajności do izolacji plazmidów niskoi wysokokopijnych. Procedura z precypitacją DNA. wersja 0117

Zestaw o zwiększonej wydajności do izolacji plazmidów niskoi wysokokopijnych. Procedura z precypitacją DNA. wersja 0217

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych

Zestaw do izolacji genomowego DNA z drożdży

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna.

Zestaw do izolacji genomowego DNA z drożdży

Zestaw do izolacji DNA z wymazów oraz nasienia

E.coli Transformer Kit

Novabeads Food DNA Kit

GeneMATRIX Cell Culture DNA Purification Kit

Zestaw do izolacji DNA z krwi świeżej i mrożonej

Zestaw do izolacji DNA z krwi świeżej i mrożonej

Zestaw do izolacji DNA z wymazów oraz nasienia. Nr kat. EM06 Wersja zestawu:

KWAS 1,2-DIBROMO-2-FENYLOPROPIONOWY

Zestaw do izolacji DNA z wymazów oraz nasienia

PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika

1 ekwiwalent 1 ekwiwalent

Odczynnik do izolacji RNA z tkanek zwierzęcych, roślinnych oraz linii komórkowych

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli

GeneMATRIX Swab-Extract DNA Purification Kit

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych. Nr kat. EM03 Wersja zestawu:

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Jakie jest jego znaczenie? Przykładowe zwroty określające środki ostrożności Jakie jest jego znaczenie?

Instrukcja dla klejów TL-PVC oraz TL-W

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

1 ekwiwalent 6 ekwiwalentów 0,62 ekwiwalentu

1 ekwiwalent 2 ekwiwalenty 2 krople

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych

Zestaw do izolacji totalnego DNA z bakterii. Nr kat. EM02 Wersja zestawu:

Instrukcja dla kleju TL-T50

Zestaw do izolacji totalnego DNA z drożdży

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zestaw do izolacji genomowego DNA z drożdży

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

1 ekwiwalent 4 ekwiwalenty 5 ekwiwalentów

fix RNA Roztwór do przechowywania i ochrony przed degradacją próbek przeznaczonych do izolacji RNA kat. nr. E0280 Sierpień 2018

bi ~ Zestaw dydal<tyczny umożliwiający przeprowadzenie izolacji genomowego DNA z bakterii EasyLation Genomie DNA INSTRUI<CJA DLA STUDENTÓW

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Instrukcja dla kleju TL-T70 TRI-FREE Bez Trichloroetenu

1 ekwiwalent 1 ekwiwalent

GeneMATRIX Agarose-Out DNA Purification Kit

Zestaw do izolacji genomowego DNA z bakterii

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Gdzie na przykład możemy się z nim zetknąć Pojemniki z gazem

GeneMATRIX Bacterial & Yeast Genomic DNA Purification Kit

1 ekwiwalent 0,85 ekwiwalentu 1,5 ekwiwalentu

INFORMACJE O ZAGROŻENIACH SUBSTANCJAMI CHEMICZNYMI ĆWICZENIE 20

GeneMATRIX Bio-Trace DNA Purification Kit

StayRNA bufor zabezpieczający RNA przed degradacją wersja 0215

Uniwersalny zestaw do izolacji DNA (GeDI)

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

1 ekwiwalent 1,45 ekwiwalenta 0,6 ekwiwalenta

1 ekwiwalent 2.5 ekwiwalenta 0.5 ekwiwalenta

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

1 ekwiwalent 3 ekwiwalenty 2 ekwiwalenty

GeneMATRIX Short DNA Clean-Up Purification Kit

Kolor i stan skupienia: czerwone ciało stałe. Analiza NMR: Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Syngen Fungi DNA Mini Kit

Zwroty R. ToxInfo Consultancy and Service Limited Partnership Tel.:

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu:

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zestaw do izolacji plazmidowego DNA. Nr kat. EM01 Wersja zestawu:

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu:

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

GeneMATRIX Environmental DNA & RNA Purification Kit

Zestaw do izolacji plazmidowego DNA

W razie konieczności zasięgnięcia porady lekarza należy pokazać pojemnik lub etykietę.

GeneMATRIX Tissue DNA Purification Kit

KETAL ETYLENOWY ACETYLOOCTANU ETYLU

Techniki molekularne ćw. 1 1 z 6

Syngen Gel/PCR Mini Kit

Załącznik 2. Międzynarodowe kody zagrożeń i zaleceń bezpieczeństwa (Risk and Safety Phrases)

Syngen Gel/PCR Mini Kit

H200 Materiały wybuchowe niestabilne. H201 Materiał wybuchowy; zagrożenie wybuchem masowym. H202

Syngen Plant DNA Mini & Maxi Kit

PathogenFree RNA Isolation Kit Zestaw do izolacji RNA

Piktogramy CLP. Gas under pressure Symbol: Gas cylinder

Zwroty wskazujące środki ostrożności ogólne P101 W razie konieczności zasięgnięcia porady lekarza, należy pokazać pojemnik lub etykietę.

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Syngen Blood/Cell DNA Mini Kit

GeneMATRIX Basic DNA Purification Kit

MATERIAŁY SZKOLENIOWE DLA ZAKŁADÓW HIGIENY WETERYNARYJNEJ W ZAKRESIE LABORATORYJNEJ DIAGNOSTYKI AFRYKAŃSKIEGO POMORU ŚWIŃ

Transkrypt:

Genomic Mini AX Milk Spin Zestaw o zwiększonej wydajności do izolacji genomowego DNA z próbek mleka. wersja 1017 100 izolacji Nr kat. 059-100S Pojemność kolumny do oczyszczania DNA wynosi 15 μg. Produkt przeznaczony wyłącznie do badań naukowych. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 1

Skład zestawu Składnik Ilość Temperatura Przechowywania Kolumny Mini AX Spin 100 szt. +4 do +8 C Probówki 2 ml 200 szt. Temp. Pok. LSU bufor lizujący 50 ml Temp. Pok. W1 pierwszy roztwór płuczący 140 ml Temp. Pok. W2 drugi roztwór płuczący 60 ml Temp. Pok. E bufor elucyjny 20 ml +4 do +8 C N bufor zobojętniający 1 ml Temp. Pok. Proteinaza K 2 x 1,1 ml +4 do +8 C Roztwór T 400 µl +4 do +8 C Wyposażenie i materiały niezbędne do izolacji DNA, które nie wchodzą w skład zestawu: 1. Materiał do izolacji DNA 2. Bufor PBS lub bufor TE (nr kat. 297-100, 297-200, 297-1000) 3. RNAza (nr kat.: 1006-10,1006-50) (opcjonalnie) 4. Probówki o poj. 1,5 ml typu Eppendorf 5. Probówki o poj. 15 ml typu Falcon 6. Inkubator 50 C (zalecany Thermomixer firmy Eppendorf) 7. Wortex 8. Mikrowirówka 9. Wirówka z rotorem uchylnym na probówki 15 ml UWAGA: Przed przystąpieniem do pracy zalecamy oczyszczenie powierzchni roboczej używając produktu LabZAP (nr kat. 040-500) Ilustracje zamieszczone w niniejszym protokole mają jedynie charakter poglądowy. Ich rzeczywisty wygląd, w tym kolor, może odbiegać od prezentowanych w grafice. Firma A&A Biotechnology udziela rocznej gwarancji na niniejszy zestaw. Firma nie gwarantuje poprawnego działania zestawu do izolacji DNA w wypadku: odstępstwa od dostarczonego wraz z zestawem protokołu braku zalecanego w niniejszym protokole wyposażenia i materiałów użycia innych odczynników niż zalecane lub które nie wchodzą w skład zestawu użycia przeterminowanych lub niewłaściwie przechowywanych odczynników oraz kolumn A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 2

Przygotowanie materiału 1. 2. Próbkę mleka w ilości 5-10 ml umieścić w probówce 15 ml typu Falcon (nie ma w zestawie). Próbkę wirować 10 min przy 5000 RPM (~ 4500 x g). Podczas wirowania, w górnej części probówki zbiera się śmietana. Tworzy ona rodzaj korka, który mocno przywiera do ścianek probówki. Po wirowaniu zalecamy okrążyć tipsem wokół brzegu probówki, aby ułatwić usunięcie korka i supernatantu. 3. 4. 5. 6. Usunąć supernatant. Do osadu dodać 10 ml buforu PBS lub buforu TE (nie ma w zestawie). Wirować 10 min przy 5000 RPM (~ 4500 x g). Usunąć supernatant. Po wirowaniu na dnie probówki znajduje się wyraźny biały osad. Osad dokładnie zawiesić w 500-600 µl buforu PBS lub buforu TE (nie ma w zestawie). Objętość buforu PBS lub buforu TE można zwiększać w zależności od ilości otrzymanego osadu. Jednak całkowita objętość (bufor z zawieszonym osadem) nie może przekroczyć 1,5 ml. 7. 8. 9. Całość przenieść do nowej probówki 1,5 ml (nie ma w zestawie). Wirować 5 min przy 8000 RPM (~ 6000 x g). Zlać supernatant. Przejść do punktu 1. protokołu izolacji DNA. Protokół izolacji 1. Dodać po 400 µl buforu lizującego LSU oraz 20 µl Proteinazy K. 2. Próbki zworteksować i inkubować 60 min w temp. 50 C. Podczas inkubacji próbki należy kilkakrotnie worteksować. Inkubację można przeprowadzić w urządzeniu Thermomixer firmy Eppendorf lub jego odpowiedniku, przy parametrach ciągłego mieszania przy 1400 RPM. 50 C Opcjonalne usuwanie RNA. Patrz Informacje dodatkowe - str. 7. 3. Po inkubacji próbki intensywnie worteksować przez 2 min przy 1000-1400 RPM. Ten krok jest kluczowy dla wydajności izolacji DNA. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 3

4. Następnie próbki wirować 5 min przy 8000 x g. Aby osadzić na dnie probówki pozostałości niezlizowanego materiału. 5. Nanieść próbki na kolumny Mini AX Spin znajdujące się w 2 ml probówkach. 6. Wirować 30-60 s przy 8 000 x g. 7. Wyjąć kolumny Mini AX Spin z probówek i umieścić je w nowych probówkach 2 ml (w zestawie). 8. Nanieść na kolumny Mini AX Spin po 600 µl pierwszego roztworu płuczącego W1. Wirować 30-60 s przy 8 000 x g. 9. Wyjąć kolumny Mini AX Spin z probówek, wylać przesącz i umieścić je w tych samych probówkach 2 ml. 10. Nanieść na kolumny Mini AX Spin po 600 µl pierwszego roztworu płuczącego W1. Wirować 30-60 s przy 8 000 x g. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 4

11. Wyjąć kolumny Mini AX Spin z probówek i umieścić je w nowych probówkach 2 ml (w zestawie). 12. Nanieść na kolumny Mini AX Spin po 500 µl drugiego roztworu płuczącego W2. Wirować 30-60 s przy 8 000 x g. 13. Przygotować probówki elucyjne (nie ma w zestawie). Mogą to być jałowe probówki 1,5 ml typu Eppendorf. Dodać na ich dno po 5 µl buforu zobojętniającego N. Zobojętnianie próbek DNA. Patrz Informacje dodatkowe - str. 7. 14. Przenieść kolumny Mini AX Spin do przygotowanych probówek elucyjnych. 15. Przed użyciem buforu elucyjnego E, zalecamy przeprowadzenie testu funkcjonalności. Patrz Test funkcjonalności buforu elucyjnego E - str. 7. Dodać do kolumn Mini AX Spin po 75 µl roztworu elucyjnego E i poczekać 2 min. Po użyciu buforu elucyjnego E należy zawsze szczelnie zakręcać pojemnik. Składniki buforu elucyjnego E ulegają rozkładowi przy długotrwałym kontakcie z powietrzem. Bufor elucyjny E należy zawsze przechowywać w temp. od +4 do +8 C. 16. Wirować 30-60 s przy 8 000 x g. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 5

17. Dodać do kolumn Mini AX Spin po 75 µl roztworu elucyjnego E. Po użyciu buforu elucyjnego E należy zawsze szczelnie zakręcać pojemnik. Składniki buforu elucyjnego E ulegają rozkładowi przy długotrwałym kontakcie z powietrzem. Bufor elucyjny E należy zawsze przechowywać w temp. od +4 do +8 C. 18. Wirować 30-60 s przy 8 000 x g. 19. Usunąć kolumny Mini AX Spin i zamknąć probówki elucyjne. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 6

Informacje dodatkowe Opcjonalne usuwanie RNA. Jeżeli zależy nam na całkowitym usunięciu RNA, to do próbki należy dodać 5 µl RNAzy (10 mg/ml) (nie ma w zestawie, nr kat. 1006-10, 1006-50), a następnie całość wymieszać i pozostawić na 5 min w temp. pokojowej. Następnie przejść do punktu 3. protokołu izolacji. Zobojętnianie próbek DNA. Bufor elucyjny E jest silnie alkaiczny i po zamrożeniu może powodować degradację DNA. Z tego powodu konieczne jest stosowanie buforu zobojętniającego N. Z naszej praktyki laboratoryjnej wynika, że najwygodniej jest dodać bufor zobojętniający N przed elucją DNA, do pustej probówki elucyjnej (punkt 13. protokołu izolacji). W trakcie elucji, zawieszone w buforze elucyjnym DNA wymiesza się z buforem zobojętniającym N i ulegnie natychmiastowej neutralizacji. Po dodaniu buforu zobjętniającego N - DNA będzie zawieszone w roztworze 10 mm Tris ph 8,5. Jeżeli bufor zobojętniający N nie został dodany w punkcie 13. protokołu, to można dodać go po zakończonej izolacji - przed zamrożeniem próbek DNA. Test funkcjonalności buforu elucyjnego E Bufor elucyjny E ma kluczowy wpływ na wydajność elucji DNA. Jego prawidłowe działanie można sprawdzić za pomocą roztworu T wchodzącego w skład zestawu. Kiedy przeprowadzić test funkcjonalności: Bufor E nie był używany przez min. 2 miesiące. Bufor E był przechowywany w temp. pokojowej przez min. 2 tygodnie. Fiolka zawierająca bufor E nie została szczelnie zamknięta po użyciu. Protokół 1. Przenieść 20 µl buforu E do nowej probówki PCR. 2. Dodać po 2 µl roztworu T. Całość wymieszać. 3. Poczekać 2 min. 4. Porównać kolor mieszaniny ze zdjęciem obok przedstawiającym kolory referencyjne. Bufor E nie działający poprawnie Bufor E działający poprawnie A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 7

Informacje bezpieczeństwa NIEBEZPIECZEŃSTWO Proteinaza K H315 Działa drażniąco na skórę. H319 Działa drażniąco na oczy. H334 Może powodować objawy alergii lub astmy lub trudności w oddychaniu w następstwie wdychania. H335 Może powodować podrażnienie dróg oddechowych. P261 Unikać wdychania pyłu. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. P342+P311 W przypadku wystąpienia objawów ze strony układu oddechowego skontaktować się z Ośrodkiem Zatruć lub lekarzem. UWAGA LSU bufor lizujący H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. H319 Działa drażniąco na oczy. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. NIEBEZPIECZEŃSTWO W1 pierwszy roztwór płuczący H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H319 Działa drażniąco na oczy. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. NIEBEZPIECZEŃSTWO E bufor elucyjny H314 Powoduje poważne oparzenia skóry oraz uszkodzenia oczu. P280 Stosować rękawice ochronne/ odzież ochronną/ ochronę oczu/ ochronę twarzy. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. P310 Natychmiast skontaktować się z Ośrodkiem Zatruć lub lekarzem. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 584-025-44-03 8