Genomic Mini AX Body Fluids zestaw do izolacji DNA z płynów ustrojowych wersja 1115

Transkrypt

1 Genomic Mini AX Body Fluids zestaw do izolacji DNA z płynów ustrojowych wersja izolacji Nr kat M tel: , fax: info@aabiot.com 1

2 Skład zestawu Składnik Ilość Temperatura Przechowywania Kolumny Genomic Mini AX 20 szt. +4 do +8 C Probówki (15 ml) 20 szt. Temp. Pok. Probówki precypitacyjne 2 ml 20 szt. Temp. Pok. L1.4 roztwór lizujący 45 ml Temp. Pok. K1 roztwór równoważący 20 ml Temp. Pok. K2 roztwór płuczący 70 ml Temp. Pok. K3 roztwór elucyjny 30 ml Temp. Pok. PM mieszanina precypitacyjna 20 ml Temp. Pok. Bufor TE 5 ml Temp. Pok. Proteinaza K 1,1 ml +4 do +8 C Wyposażenie i materiały niezbędne do izolacji DNA, które nie wchodzą w skład zestawu: 1. Materiał do izolacji DNA ml probówki typu falkon 3. 70% etanol 4. Termoblok lub inny inkubator (50 C) 5. Mikrowirówka Firma A&A Biotechnology udziela rocznej gwarancji na niniejszy zestaw. Firma nie gwarantuje poprawnego działania zestawu do izolacji DNA w przypadku: odstępstwa od dostarczonego wraz z zestawem protokołu braku zalecanego w niniejszym protokole wyposażenia i materiałów użycia innych odczynników niż zalecane lub które nie wchodzą w skład zestawu użycia przeterminowanych lub niewłaściwie przechowywanych odczynników oraz kolumn tel: , fax: info@aabiot.com 2

3 Protokół izolacji Uwaga: Proces oczyszczania DNA na kolumnie można przerwać w dowolnym momencie i kontynuować nawet po upływie 15 godzin bez wpływu na jakość i ilość uzyskanego DNA. Podczas takiej przerwy należy pamiętać o zamknięciu probówki, w której znajduje się kolumna. 1. Próbki płynów ustrojowych (np. osocze, mocz, płyn owodniowy) przenieść do probówki 15 ml typu falkon (nie ma w zestawie). Objętość próbki nie powinna przekraczać 2 ml 2. Następnie dodać po 1 objętość roztworu lizującego L1.4 (np. do 2 ml próbek dodać po 2 ml L1.4) oraz po 50 µl Proteinazy K. 3. Całość wymieszać i inkubować 15 min w temp. 50 C. Podczas inkubacji próbki należy od czasu do czasu mieszać przez odwracanie. 4. W trakcie inkubacji ustawić kolumny Genomic Mini AX umieszczone w probówce 15 ml w statywie. Następnie nanieść na kolumny Genomic Mini AX po 800 µl roztworu równoważącego K1. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. 5. Po inkubacji próbki w całości nanieść na zrównoważone uprzednio kolumny Genomic Mini AX. Poczekać aż lizat przejdzie przez kolumny. Kolumna pracuje grawitacyjnie. Szybkość przepływu zależy od ilości oraz wielkości cząstek DNA. Duża ilość DNA powoduje spowolnienie przepływu, a przy znacznym przeładowaniu kolumny może dojść nawet do całkowitego zablokowania. W takim przypadku należy wirować kolumny wraz z probówkami w rotorze uchylnym przez 1 min przy RPM. Wirowanie można przeprowadzić zarówno po naniesieniu próbek (pkt 5) jak i podczas płukania roztworem płuczącym K2 (pkt 7 i 8) A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, Gdynia tel: , fax: VAT info@aabiot.com

4 6. Kolumny Genomic Mini AX przenieść do nowych probówek 15 ml typu falkon (w zestawie). 7. Płukać kolumny Genomic Mini AX przez dodanie po 1,5 ml roztworu płuczącego K2. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. 8. Ponownie nanieść na kolumny Genomic Mini AX po 1,5 ml roztworu płuczącego K2. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. 9. Dodać do kolumn Genomic Mini AX po 250 µl roztworu elucyjnego K3. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. Krok ten ma na celu zmniejszenie całkowitej objętości eluatu, gdyż martwa objętość kolumny wynosi 250 µl 10. Przenieść kolumny Genomic Mini AX do probówek precypitacyjnych 2 ml (w zestawie). Eluować DNA przez naniesienie na złoże kolumn Genomic Mini AX po 1 ml roztworu elucyjnego K3. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. Kolumna posiada odpowiednie żeberka pozwalające na łatwe umieszczenie w probówce A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, Gdynia tel: , fax: VAT info@aabiot.com

5 11. Do eluatów zawierających DNA dodać po 800 µl mieszaniny precypitacyjnej PM. Całość wymieszać i wirować przez 10 min przy RPM. Mieszanina precypitacyjna PM zawiera dodatkowo wzmacniacz precypitacji, dlatego przed użyciem należy go wymieszać przez kilkakrotne odwracanie butelki 12. Po wirowaniu zlać supernatant. Do probówek dodać po 500 µl 70% etanolu (nie ma w zestawie). Całość wymieszać i wirować przez 3 min przy RPM. Po zlaniu supernatantu na dnie powinien być widoczny jasnoniebieski osad DNA 13. Po wirowaniu zlać supernatant. Następnie suszyć probówki odwrócone do góry dnem przez 5 min w temp. pokojowej. Jeżeli na ściankach probówki znajdują się resztki alkoholu to należy je osuszyć kawałkiem jałowej waty (doskonale nadają się do tego patyczki higieniczne lub pałeczki do pobierania wymazów) 14. Osad zawiesić w odpowiedniej ilości buforu TE. Niebieska barwa osadu umożliwia śledzenie procesu rozpuszczania DNA A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, Gdynia tel: , fax: VAT info@aabiot.com

6 Produkty powiązane Izolacja DNA ze śladów biologicznych Nazwa Zestawu Ilość Nr kat. Sherlock AX 25 izolacji izolacji Izolacja DNA z wymazów Nazwa Zestawu Ilość Nr kat. Swab 25 izolacji izolacji Genomic Micro AX Swab Gravity 100 izolacji Genomic Micro AX Swab Gravity Plus 100 izolacji wymazówek P Izolacja DNA z krwi - próbka do 300 µl Nazwa Zestawu Ilość Nr kat. Blood Mini 50 izolacji izolacji Genomic Mini AX Blood 60 izolacji Genomic Mini AX Blood 0.3 ml Spin 100 izolacji S03 Genomic Micro AX Blood Gravity 100 izolacji próbka powyżej 300 µl Nazwa Zestawu Liczba izolacji Nr kat. Genomic Midi AX 20 izolacji Genomic Maxi AX 10 izolacji Genomic Mini AX Blood 1.0 ml Spin 100 izolacji S1 tel: , fax: info@aabiot.com 6

7 Elementy do zamówień dodatkowych Składnik Ilość Nr kat. Proteinaza K roztwór 20 mg/ml 1.1 ml mg L Proteinaza K liofilizat 100 mg L 250 mg L 1000 mg L Bufor TE 100 ml ml Roztwór równoważący K1 60 ml Roztwór elucyjny K3 90 ml Roztwór płuczący K2 (Genomic) 190 ml G 45 ml Roztwór lizujący L ml ml tel: , fax: info@aabiot.com 7

8 Informacje bezpieczeństwa NIEBEZPIECZEŃSTWO Proteinaza K H315 Działa drażniąco na skórę. H334 Może powodować objawy alergii lub astmy lub trudności w oddychaniu w następstwie wdychania. H335 Może powodować podrażnienie dróg oddechowych. P261 Unikać wdychania pyłu. P342+P311 W przypadku wystąpienia objawów ze strony układu oddechowego skontaktować się z Ośrodkiem Zatruć lub lekarzem. UWAGA L1.4 roztwór lizujący H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. UWAGA K1 roztwór równoważący H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. NIEBEZPIECZEŃSTWO K2 roztwór płuczący H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. NIEBEZPIECZEŃSTWO K3 roztwór elucyjny H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. NIEBEZPIECZEŃSTWO PM mieszanina precypitacyjna H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. tel: , fax: info@aabiot.com 8