StayRNA bufor zabezpieczający RNA przed degradacją wersja 0215

Transkrypt

1 StayRNA bufor zabezpieczający RNA przed degradacją wersja ml, 250 ml, 500 ml Nr kat , , Nietosyczny roztwór wodny do przechowywania i zabezpieczania różnego rodzaju tkanek przeznaczonych do izolacji RNA 1

2 Opis produktu StayRNA jest roztworem wodnym, nietoksycznym, przeznaczonym do przechowywania świeżych próbek (nie mrożonych) przeznaczonych do izolacji RNA. Roztwór przenika do świeżej próbki i zabezpiecza RNA in situ przed degradacją i działaniem RNAz. Przechowywanie prób w roztworze nie wpływa na jakość i ilość izolowanego RNA. Dzięki StayRNA próbki do izolacji RNA nie muszą być od razu poddawane izolacji RNA lub zamrażane w ciekłym azocie do późniejszej izolacji W przypadku zauważenia osadu roztwór należy podgrzać do temp. 37 C StayRNA zabezpiecza RNA w próbach * 1 dzień/ 24 h w temperaturze 37 C * 1 tydzień w temperaturze 25 C * 1 miesiąc w temperaturze od +2 C do +8 C * przy dłuższym przechowywaniu zalecamy stosowanie temperatury -20 C lub -80 C Preparat StayRNA został przetestowany na próbach pochodzących z różnego rodzaju materiału biologicznego, m.in. tkanki kręgowców w tym mózg, serce, nerki, śledziona, wątroba, jądra, mięśnie szkieletowe, tkanka tłuszczowa, płuca, grasica. StayRNA został przetestowany także na hodowlach bakteryjnych E. coli oraz Drosophila, hodowlach komórkowych, krwinkach białych i niektóre tkankach roślinnych. StayRNA jest kompatybilny z zestawami do izolacji RNA firmy A&A Biotechnology: Total RNA Mini (nr kat , ) Total RNA Midi (nr kat ) Total RNA Maxi (nr kat ) Total RNA Mini Plus (nr kat , ) Total RNA Mini Plus Concentrator (nr kat C, C) Micro RNA (035-25) Micro RNA Concentator (nr kat C) 2

3 1. Przygotowanie prób Krew Krwinki białe należy oddzielić od krwinek czerwonych i osocza Krwinki białe zawiesić w 5 objętościach StayRNA StayRNA nie należy stosować do krwi pełnej, osocza lub surowicy ze względu na wysoką zawartość białka, które po zawieszeniu w buforze będzie strącać się w postaci nierozpuszczalnego osadu. Przechowywać w żądanej temperaturze - informacje w dziale Przechowywanie prób - str Bakterie 1,5-3 ml hodowli bakteryjnej wirować przez 2 min w x g Usunąć supernatant Delikatnie rozpuścić pelet w 0,5-1 ml StayRNA StayRNA działa bakteriostatycznie, jednakże komórki pozostają nietknięte. Komórki E.coli przechowywane przez 1 miesiąc w temp. od +2 C do +8 C pozostają w stanie nienaruszonym. Drożdże Komórki w ilości 3 x 10 8 wirować przez 2 min w x g Usunąć supernatatnt Delikatnie rozpuścić pelet w 0,5-1 ml StayRNA Komórki drożdży mogą być przechowywane w buforze do 8 godzin w temp. 25 C lub przez tydzień w temp. od +2 C do +8 C. W przypadku dłuższego przechowywania należy inkubować komórki przez 1 godz. w buforze. Wirować przez 5 min w x g. Usunąć supernatant i szybko zamrozić. Przechowywać w temp. od -20 C. 3

4 Tkanka zwierzęca mg świeżej tkanki zwierzęcej pociąć na drobne kawałki Przenieść do probówki typu Eppendorf Małe narządy, jak np. szczurza wątroba, nerki, śledziona, mogą być przechowywane w całości Dodać 5 objętości StayRNA Przechowywać w żądanej temperaturze - informacje w dziale Przechowywanie prób - str. 5 Tkanka roślinna Świeżą tkankę roślinną pociąć na drobne kawałki <0,5 cm Przenieść do probówki typu Eppendorf Tkanki roślinne, które są pokryte woskowymi nalotami lub mają inne bariery naturalne uniemożliwiające wnikanie roztworu do tkanki, przed dodaniem StayRNA tkankę należy pozbawić tych naturalnych barier. Każda metoda, która narusza strukturę wosku jest odpowiednia. Dodać 5 objętości StayRNA Przechowywać w żądanej temperaturze - informacje w dziale Przechowywanie prób - str. 5 Hodowle komórkowe Komórki w ilości 1 x 10 6 wirować przez 2 min w x g Usunąć supernatant, a osad zawiesić w 5 objętościach StayRNA W razie konieczności osad można przepłukać buforem PBS przed dodaniem StayRNA Przechowywać w żądanej temperaturze - informacje w dziale Przechowywanie prób - str. 5 4

5 Przechowywanie prób Przechowywanie w temp. -80 C i -20 C zalecane w przypadku przechowywania długoterminowego Nie zamrażać prób zawieszonych w StayRNA bez wcześniejszego ich przygotowania. W celu przygotowania próbek do przechowywania należy przeprowadzić nocną inkubację w temp. od +2 C do +8 C. Umożliwia to dokładne przeniknięcie roztworu do próby. Następnie usunąć pozostałe StayRNA przed przeniesieniem do temp. -80 C lub -20 C, aby zapobiec tworzeniu się kryształów soli. W komórkach hodowli tkankowej, nie należy usuwać StayRNA. Zamrozić wraz z buforem. Próby mogą być rozmrażane w temp. pokojowej i ponownie zamrażane bez wpływu na ilość i jakość izolowanego RNA. Przechowywanie w temp. od +2 C do +8 C Próby mogą być przechowywane do 1 miesiąca bez wpływu na ilość i jakość izolowanego RNA. Przechowywanie w temp. pokojowej (25 C) Próby mogą być przechowywane do 1 tygodnia bez wpływu na ilość i jakość izolowanego RNA. RNA izolowane z prób przechowywanych przez dwa tygodnie w temp. 25 C jest w niewielkim stopniu zdegradowane (tj. minimalnie dopuszczalne w technice Northern Blot, ale wystarczająco dobre do analiz RT-PCR). Jeżeli temperatura pokojowa jest powyżej 25 C, należy próbkę zawieszoną w StayRNA inkubować na lodzie przez kilka godzin zanim zostanie pozostawiona w temperaturze pokojowej. Przechowywanie w temp. 37 C Próby mogą być przechowywane do 24 godzin bez wpływu na ilość i jakość izolowanego RNA. RNA ulega częściowej degradacji po 3 dniach inkubacji w temp. 37 C. 5

6 Izolacja RNA z prób przechowywanych w StayRNA Próby przechowywane w StayRNA mogą stać się twardsze, co może powodować problemy z homogenizacją próby w porównaniu do świeżej. Zalecamy pocięcie próbek na mniejsze kawałki przed homogenizacją w buforze lizującym. Tkanki Za pomocą sterylnej pincenty wyciągnąć tkankę zanurzoną w StayRNA. Szybko osuszyć z nadmiaru buforu (np. papierowym ręcznikiem lub bibułą). Następnie próbki umieścić w buforze lizującym z zestawu do izolacji RNA (fenozol lub fenozol plus). Tkankę homogenizować niezwłocznie po umieszczeniu jej w buforze lizującym. Komórki Istnieją dwie możliwości izolowania RNA z komórek znajdujących się w StayRNA: Usuwanie StayRNA przed izolacją RNA Komórki przechowywane w StayRNA stają się bardziej odporne na wysokie prędkości wirowania bez lizy. Większość typów komórek może być wirowana przy 5000 x g bez uszkodzenia komórek. W przypadku zastosowania dotychczas stosowanych prędkości wirowania zalecamy rozcieńczyć próbę zawieszoną w StayRNA. Bezpośrednio przed wirowaniem należy dodać równą objętość lodowatego buforu PBS (lub innego buforowanego roztworu) w celu zmniejszenia gęstości roztworu. Po wirowaniu osad komórek zawiesić w buforze lizującym. Postępować zgodnie z protokołem izolacji RNA z zestawu. Izolacja RNA z komórek zawieszonych w StayRNA Do oczyszczania RNA z komórek zawieszonych w StayRNA można zastosować roztwory do izolacji RNA w jednym kroku oparte na fenolu. Do próby należy dodać dziesięć objętości roztworu do izolacji RNA, dalej postępować zgodniez procedą izolacji RNA. 6

7 Produkty powiązane izolacja RNA Nazwa zestawu Ilość Nr kat. Total RNA Mini Total RNA Mini Plus Total RNA Mini Plus Concentrator 25 izolacji izolacji izolacji izolacji izolacji C 100 izolacji C Total RNA Midi 20 izolacji Total RNA Maxi 10 izolacji Micro RNA 25 izolacji Micro RNA Concentrator 25 izolacji C odwrotna transkrypcja Nazwa zestawu Ilość Nr kat. TranScriba Kit 20 reakcji reakcji TranScriba-qPCR Master Mix SYBR 200 reakcji S TranScriba-qPCR Master Mix Probe 200 reakcji Q 7

8 Produkty powiązane Nazwa zestawu Ilość Nr kat. Marker RNA 1 ( pz) Inhibitor RNAz (40 U/μl) NTP s zestaw rybonukleotydów (4 x 100 mm) T7 RNA Polimeraza (20 U/μl) DNAza (wolna od RNAzy) (10 U/μl) RNAza (wolna od DNAzy) (10 mg/ml) Pirofosfataza drożdżowa (0,1 U/μl) aplikacji U x 2500 U x 2500 U x 250 μl U U U ml x 1 ml U Woda DEPC 5 x 5 ml Informacje bezpieczeństwa UWAGA StayRNA roztwór (Xn, środek szkodliwy, R:22-36/38,S:L26-37) H302 Działa szkodliwie po połknięciu H315 Działa drażniąco na skórę H319 Działa drażniąco na oczy P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i moz je łatwo usunąć. Nadal płukać.. 8