Total RNA Zol-Out. 25 izolacji, 100 izolacji

Transkrypt

1 Total RNA Zol-Out Zestaw do szybkiej izolacji ultraczystego, całkowitego RNA z odczynników opartych na mieszaninie fenolu oraz rodanku lub chlorowodorku guanidyny (TRIzol, TRI Reagent, RNAzol, QIAzol, TriPure, TriSure, etc.) wersja izolacji, 100 izolacji Nr kat , Pojemność minikolumny do oczyszczania RNA wynosi 100 μg. Produkt przeznaczony wyłącznie do badań naukowych. 1

2 Skład zestawu Składnik 25 izolacji 100 izolacji Temp. Przechowywania Minikolumny do oczyszczania RNA 25 szt. 100 szt. Temp. Pok. Probówki 2 ml 25 szt. 100 szt. Temp. Pok. A1 roztwór płuczący 50 ml 200 ml Temp. Pok. Izopropanol 10 ml 30 ml Temp. Pok. Woda jałowa (wolna od nukleaz, traktowana DEPC) 8 ml 30 ml od -20 do +20 Wyposażenie i materiały niezbędne do izolacji RNA, które nie wchodzą w skład zestawu 1. Materiał do izolacji RNA 2. DNAza (nr kat , ) 3. Jałowe, wolne od RNAzy probówki typu Eppendorf o pojemności 1,5 ml 4. Mikrowirówka 5. Inkubator lub łaźnia wodna 50 C UWAGA: Przed przystąpieniem do pracy zalecamy oczyszczenie powierzchni roboczej używając produktu LabZAP (nr kat ) Ilustracje zamieszczone w niniejszym protokole mają jedynie charakter poglądowy. Ich rzeczywisty wygląd, w tym kolor, może odbiegać od prezentowanych w grafice. Firma A&A Biotechnology udziela rocznej gwarancji na niniejszy zestaw. Firma nie gwarantuje poprawnego działania zestawu do izolacji RNA w przypadku: odstępstwa od dostarczonego wraz z zestawem protokołu braku zalecanego w niniejszym protokole wyposażenia i materiałów użycia innych odczynników niż zalecane lub które nie wchodzą w skład zestawu użycia przeterminowanych odczynników oraz minikolumn 2

3 Przygotowanie materiału 1. Dla próbki zawieszonej w: TRIzol, TRI Reagent i innych odczynnikach opartych na mieszaninie fenolu oraz rodanku- lub chlorowodorku guanidyny (RNAzol, QIAzol, TriPure TriSure, itp.) wybrać jedną z czterech metod (A, B, C lub D) przygotowania próbek do izolacji RNA. Do 1 objętości próbki dodać: A. 1 objętości chloroformu (nie ma w zestawie) - proporcje 5:1, np. do 1 ml próbki dodać po 0,2 ml chloroformu. 5 Przejść do pkt. 1. protokołu izolacji RNA. lub B. 1 objętości BCP (1-bromo-3-chloropropan) (nie ma w zestawie) proporcje 10:1, np. do 1 ml próbki dodać po 0,1 ml BCP. 10 Przejść do pkt. 1. protokołu izolacji RNA. lub C. 1 objętość 96%-100% etanolu (nie ma w zestawie) - proporcje 1:1, np. do 1 ml próbki dodać po 1 ml etanolu. Przejść do pkt. 2. protokołu izolacji RNA. lub D. 1 objętości wody jałowej (w zestawie) - proporcje 3:1, np. do 1 ml próbki dodać po 0,3 ml wody jałowej wolnej od RNAzy. Wirować próbkę 15 min przy RPM. Pobrać supernatant do nowej probówki 1,5 ml (nie ma w zestawie). Dodać po 12 objętości izopropanolu (w zestawie) - proporcje 2:1, np. do 1 ml supernatantu dodać po 0,5 ml izopropanolu. 3 Przejść do pkt. 2. protokołu izolacji RNA. Protokół izolacji RNA 1. Z przygotowanego materiału pobrać górne frakcje zawierające RNA do probówek 1,5 ml (nie ma w zestawie). Następnie dodać po 1 2 objętości izopropanolu - proporcje 2:1, np. do 600 μl próbki dodać po 300 μl izopropanolu. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, Gdynia 3 NIP

4 2. Całość dokładnie wymieszać i nanieść po 700 μl mieszaniny na minikolumny do izolacji RNA. Wirować 1 min przy RPM. Na minikolumnę można nanieść jednorazowo do 700 µl mieszaniny. W przypadku większej objętości mieszaniny niż 700 µl, po zwirowaniu 700 µl należy nanieść na minikolumnę pozostałą część mieszaniny i ponownie zwirować. 3. Przenieść minikolumny do nowych probówek 2 ml (w zestawie). Następnie dodać do minikolumn po 700 µl roztworu płuczącego A1. 4. Wirować 1 min przy RPM. 5. Wyjąć minikolumny z probówek 2 ml, wylać przesącz i ponownie umieścić w tych samych probówkach 2 ml. Następnie dodać do minikolumn po 700 µl roztworu płuczącego A1. 6. Wirować 1 min przy RPM. 7. Wyjąć minikolumny z probówek 2 ml, wylać przesącz i ponownie umieścić w tych samych probówkach 2 ml. Następnie dodać do minikolumn po 200 µl roztworu płuczącego A1. 8. Wirować 2 min przy RPM. 9. Minikolumny umieścić w nowych jałowych, wolnych od RNAzy probówkach elucyjnych 1,5 ml (nie ma w zestawie). Do złoża znajdującego się na dnie minikolumn dodać po 100 µl wody jałowej. 10. Pozostawić na 3 min w temp. pokojowej. Następnie wirować 1 min przy RPM. 11. Minikolumny usunąć, a oczyszczone RNA znajdujące się w probówkach przechowywać w temperaturze -20 C, -80 C do czasu dalszych analiz. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, Gdynia 4 NIP

5 Protokół skrócony przygotowana próbka + 1 /2 objętości izopropanolu (dla próbek z chloroformem i BCP) i. wymieszać ii. nanieść po 700 μl na minikolumnę iii. wirować RPM - 1 min nowa probówka 2 ml minikolumna 700 µl roztworu A1 i. wirować RPM - 1 min ii. wylać przesącz i włożyć minikolumnę do tej samej probówki 2 ml 700 µl roztworu A1 minikolumna i. wirować RPM - 1 min ii. wylać przesącz i włożyć minikolumnę do tej samej probówki 2 ml 200 µl roztworu A1 minikolumna i. wirować RPM - 2 min probówka elucyjna 1,5 ml minikolumna 100 µl wody jałowej i. inkubować w temp. pok. - 3 min i. wirować RPM - 1 min 100 µl eluatu RNA RNA gotowe do użycia Przechowywać w temperaturze -20 C, -80 C 5

6 Doczyszczanie eluatu RNA (opcjonalnie) Zestaw Total RNA Mini efektywnie izoluje i oczyszcza RNA bez potrzeby jego dodatkowego doczyszczania. W szczególnym przypadku, gdy konieczne jest usunięcie nawet śladowych ilości DNA zalecamy: Zastosowanie DNAzy (nr kat , ) 1. Do 100 µl eluatu RNA dodać po: 1 µl DNAzy (10 U/µl) 10 µl 10x buforu reakcyjnego (w zestawie z DNAzą) 2. Inkubować próbkę 15 min w temp. 37 C 3. Inkubować próbkę 10 min w temp. 75 C - inaktywacja DNAzy lub Użycie zestawu Clean-Up RNA Concentrator (nr kat C, C) Zestaw jest oparty na mikrokolumnach i służy do usuwania śladowych ilości DNA. Elucja RNA w ok. 30 µl wody jałowej. Elementy do zamówień dodatkowych Produkt Ilość Nr kat. Izopropanol 50 ml Woda jałowa (wolna od nukleaz, traktowana DEPC) DNAza (10 U/µl) Clean-Up RNA Concentrator 5 x 1,5 ml x 5 ml ml U U izolacji C 100 izolacji C 6

7 Produkty powiązane Nazwa zestawu Ilość nr kat. Total RNA Mini Total RNA Mini Plus Total RNA Mini Plus Concentrator 25 izolacji izolacji izolacji izolacji izolacji C 100 izolacji C Total RNA Midi 20 izolacji Total RNA Maxi 10 izolacji Micro RNA 25 izolacji Micro RNA Concentrator 25 izolacji C Clean-Up RNA Concentrator 25 izolacji C 100 izolacji C 100 ml StayRNA 250 ml ml

8 Informacje bezpieczeństwa NIEBEZPIECZEŃSTWO A1 roztwór płuczący H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H319 Działa drażniąco na oczy. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. NIEBEZPIECZEŃSTWO Izopropanol H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H319 Działa drażniąco na oczy. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. 8