Total RNA Zol-Out Zestaw do szybkiej izolacji ultraczystego, całkowitego RNA z odczynników opartych na mieszaninie fenolu oraz rodanku lub chlorowodorku guanidyny (TRIzol, TRI Reagent, RNAzol, QIAzol, TriPure, TriSure, etc.) wersja 0517 25 izolacji, 100 izolacji Nr kat. 030-25, 030-100 Pojemność minikolumny do oczyszczania RNA wynosi 100 μg. Produkt przeznaczony wyłącznie do badań naukowych. 1
Skład zestawu Składnik 25 izolacji 100 izolacji Temp. Przechowywania Minikolumny do oczyszczania RNA 25 szt. 100 szt. Temp. Pok. Probówki 2 ml 25 szt. 100 szt. Temp. Pok. A1 roztwór płuczący 50 ml 200 ml Temp. Pok. Izopropanol 10 ml 30 ml Temp. Pok. Woda jałowa (wolna od nukleaz, traktowana DEPC) 8 ml 30 ml od -20 do +20 Wyposażenie i materiały niezbędne do izolacji RNA, które nie wchodzą w skład zestawu 1. Materiał do izolacji RNA 2. DNAza (nr kat. 1009-10, 1009-100) 3. Jałowe, wolne od RNAzy probówki typu Eppendorf o pojemności 1,5 ml 4. Mikrowirówka 5. Inkubator lub łaźnia wodna 50 C UWAGA: Przed przystąpieniem do pracy zalecamy oczyszczenie powierzchni roboczej używając produktu LabZAP (nr kat. 040-500) Ilustracje zamieszczone w niniejszym protokole mają jedynie charakter poglądowy. Ich rzeczywisty wygląd, w tym kolor, może odbiegać od prezentowanych w grafice. Firma A&A Biotechnology udziela rocznej gwarancji na niniejszy zestaw. Firma nie gwarantuje poprawnego działania zestawu do izolacji RNA w przypadku: odstępstwa od dostarczonego wraz z zestawem protokołu braku zalecanego w niniejszym protokole wyposażenia i materiałów użycia innych odczynników niż zalecane lub które nie wchodzą w skład zestawu użycia przeterminowanych odczynników oraz minikolumn 2
Przygotowanie materiału 1. Dla próbki zawieszonej w: TRIzol, TRI Reagent i innych odczynnikach opartych na mieszaninie fenolu oraz rodanku- lub chlorowodorku guanidyny (RNAzol, QIAzol, TriPure TriSure, itp.) wybrać jedną z czterech metod (A, B, C lub D) przygotowania próbek do izolacji RNA. Do 1 objętości próbki dodać: A. 1 objętości chloroformu (nie ma w zestawie) - proporcje 5:1, np. do 1 ml próbki dodać po 0,2 ml chloroformu. 5 Przejść do pkt. 1. protokołu izolacji RNA. lub B. 1 objętości BCP (1-bromo-3-chloropropan) (nie ma w zestawie) proporcje 10:1, np. do 1 ml próbki dodać po 0,1 ml BCP. 10 Przejść do pkt. 1. protokołu izolacji RNA. lub C. 1 objętość 96%-100% etanolu (nie ma w zestawie) - proporcje 1:1, np. do 1 ml próbki dodać po 1 ml etanolu. Przejść do pkt. 2. protokołu izolacji RNA. lub D. 1 objętości wody jałowej (w zestawie) - proporcje 3:1, np. do 1 ml próbki dodać po 0,3 ml wody jałowej wolnej od RNAzy. Wirować próbkę 15 min przy 10 000-12 000 RPM. Pobrać supernatant do nowej probówki 1,5 ml (nie ma w zestawie). Dodać po 12 objętości izopropanolu (w zestawie) - proporcje 2:1, np. do 1 ml supernatantu dodać po 0,5 ml izopropanolu. 3 Przejść do pkt. 2. protokołu izolacji RNA. Protokół izolacji RNA 1. Z przygotowanego materiału pobrać górne frakcje zawierające RNA do probówek 1,5 ml (nie ma w zestawie). Następnie dodać po 1 2 objętości izopropanolu - proporcje 2:1, np. do 600 μl próbki dodać po 300 μl izopropanolu. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia 3 NIP 584-025-44-03
2. Całość dokładnie wymieszać i nanieść po 700 μl mieszaniny na minikolumny do izolacji RNA. Wirować 1 min przy 10 000-12 000 RPM. Na minikolumnę można nanieść jednorazowo do 700 µl mieszaniny. W przypadku większej objętości mieszaniny niż 700 µl, po zwirowaniu 700 µl należy nanieść na minikolumnę pozostałą część mieszaniny i ponownie zwirować. 3. Przenieść minikolumny do nowych probówek 2 ml (w zestawie). Następnie dodać do minikolumn po 700 µl roztworu płuczącego A1. 4. Wirować 1 min przy 10 000-12 000 RPM. 5. Wyjąć minikolumny z probówek 2 ml, wylać przesącz i ponownie umieścić w tych samych probówkach 2 ml. Następnie dodać do minikolumn po 700 µl roztworu płuczącego A1. 6. Wirować 1 min przy 10 000-12 000 RPM. 7. Wyjąć minikolumny z probówek 2 ml, wylać przesącz i ponownie umieścić w tych samych probówkach 2 ml. Następnie dodać do minikolumn po 200 µl roztworu płuczącego A1. 8. Wirować 2 min przy 10 000-12 000 RPM. 9. Minikolumny umieścić w nowych jałowych, wolnych od RNAzy probówkach elucyjnych 1,5 ml (nie ma w zestawie). Do złoża znajdującego się na dnie minikolumn dodać po 100 µl wody jałowej. 10. Pozostawić na 3 min w temp. pokojowej. Następnie wirować 1 min przy 10 000-12 000 RPM. 11. Minikolumny usunąć, a oczyszczone RNA znajdujące się w probówkach przechowywać w temperaturze -20 C, -80 C do czasu dalszych analiz. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia 4 NIP 584-025-44-03
Protokół skrócony przygotowana próbka + 1 /2 objętości izopropanolu (dla próbek z chloroformem i BCP) i. wymieszać ii. nanieść po 700 μl na minikolumnę iii. wirować 10 000-12 000 RPM - 1 min nowa probówka 2 ml minikolumna 700 µl roztworu A1 i. wirować 10 000-12 000 RPM - 1 min ii. wylać przesącz i włożyć minikolumnę do tej samej probówki 2 ml 700 µl roztworu A1 minikolumna i. wirować 10 000-12 000 RPM - 1 min ii. wylać przesącz i włożyć minikolumnę do tej samej probówki 2 ml 200 µl roztworu A1 minikolumna i. wirować 10 000-12 000 RPM - 2 min probówka elucyjna 1,5 ml minikolumna 100 µl wody jałowej i. inkubować w temp. pok. - 3 min i. wirować 10 000-12 000 RPM - 1 min 100 µl eluatu RNA RNA gotowe do użycia Przechowywać w temperaturze -20 C, -80 C 5
Doczyszczanie eluatu RNA (opcjonalnie) Zestaw Total RNA Mini efektywnie izoluje i oczyszcza RNA bez potrzeby jego dodatkowego doczyszczania. W szczególnym przypadku, gdy konieczne jest usunięcie nawet śladowych ilości DNA zalecamy: Zastosowanie DNAzy (nr kat. 1009-10, 1009-100) 1. Do 100 µl eluatu RNA dodać po: 1 µl DNAzy (10 U/µl) 10 µl 10x buforu reakcyjnego (w zestawie z DNAzą) 2. Inkubować próbkę 15 min w temp. 37 C 3. Inkubować próbkę 10 min w temp. 75 C - inaktywacja DNAzy lub Użycie zestawu Clean-Up RNA Concentrator (nr kat. 039-25C, 039-100C) Zestaw jest oparty na mikrokolumnach i służy do usuwania śladowych ilości DNA. Elucja RNA w ok. 30 µl wody jałowej. Elementy do zamówień dodatkowych Produkt Ilość Nr kat. Izopropanol 50 ml 208-50 Woda jałowa (wolna od nukleaz, traktowana DEPC) DNAza (10 U/µl) Clean-Up RNA Concentrator 5 x 1,5 ml 003-075 5 x 5 ml 003-25 500 ml 003-500 1000 U 1009-10 10 000 U 1009-100 25 izolacji 039-25C 100 izolacji 039-100C 6
Produkty powiązane Nazwa zestawu Ilość nr kat. Total RNA Mini Total RNA Mini Plus Total RNA Mini Plus Concentrator 25 izolacji 031-25 100 izolacji 031-100 25 izolacji 036-25 100 izolacji 036-100 25 izolacji 036-25C 100 izolacji 036-100C Total RNA Midi 20 izolacji 032-20 Total RNA Maxi 10 izolacji 033-10 Micro RNA 25 izolacji 035-25 Micro RNA Concentrator 25 izolacji 035-25C Clean-Up RNA Concentrator 25 izolacji 039-25C 100 izolacji 039-100C 100 ml 038-100 StayRNA 250 ml 038-250 500 ml 038-500 7
Informacje bezpieczeństwa NIEBEZPIECZEŃSTWO A1 roztwór płuczący H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H319 Działa drażniąco na oczy. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. NIEBEZPIECZEŃSTWO Izopropanol H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H319 Działa drażniąco na oczy. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. 8