Genomic Mini AX Body Fluids zestaw do izolacji DNA z płynów ustrojowych wersja 1115 20 izolacji Nr kat. 052-20M tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 info@aabiot.com www.aabiot.com 1
Skład zestawu Składnik Ilość Temperatura Przechowywania Kolumny Genomic Mini AX 20 szt. +4 do +8 C Probówki (15 ml) 20 szt. Temp. Pok. Probówki precypitacyjne 2 ml 20 szt. Temp. Pok. L1.4 roztwór lizujący 45 ml Temp. Pok. K1 roztwór równoważący 20 ml Temp. Pok. K2 roztwór płuczący 70 ml Temp. Pok. K3 roztwór elucyjny 30 ml Temp. Pok. PM mieszanina precypitacyjna 20 ml Temp. Pok. Bufor TE 5 ml Temp. Pok. Proteinaza K 1,1 ml +4 do +8 C Wyposażenie i materiały niezbędne do izolacji DNA, które nie wchodzą w skład zestawu: 1. Materiał do izolacji DNA 2. 15 ml probówki typu falkon 3. 70% etanol 4. Termoblok lub inny inkubator (50 C) 5. Mikrowirówka Firma A&A Biotechnology udziela rocznej gwarancji na niniejszy zestaw. Firma nie gwarantuje poprawnego działania zestawu do izolacji DNA w przypadku: odstępstwa od dostarczonego wraz z zestawem protokołu braku zalecanego w niniejszym protokole wyposażenia i materiałów użycia innych odczynników niż zalecane lub które nie wchodzą w skład zestawu użycia przeterminowanych lub niewłaściwie przechowywanych odczynników oraz kolumn tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 info@aabiot.com www.aabiot.com 2
Protokół izolacji Uwaga: Proces oczyszczania DNA na kolumnie można przerwać w dowolnym momencie i kontynuować nawet po upływie 15 godzin bez wpływu na jakość i ilość uzyskanego DNA. Podczas takiej przerwy należy pamiętać o zamknięciu probówki, w której znajduje się kolumna. 1. Próbki płynów ustrojowych (np. osocze, mocz, płyn owodniowy) przenieść do probówki 15 ml typu falkon (nie ma w zestawie). Objętość próbki nie powinna przekraczać 2 ml 2. Następnie dodać po 1 objętość roztworu lizującego L1.4 (np. do 2 ml próbek dodać po 2 ml L1.4) oraz po 50 µl Proteinazy K. 3. Całość wymieszać i inkubować 15 min w temp. 50 C. Podczas inkubacji próbki należy od czasu do czasu mieszać przez odwracanie. 4. W trakcie inkubacji ustawić kolumny Genomic Mini AX umieszczone w probówce 15 ml w statywie. Następnie nanieść na kolumny Genomic Mini AX po 800 µl roztworu równoważącego K1. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. 5. Po inkubacji próbki w całości nanieść na zrównoważone uprzednio kolumny Genomic Mini AX. Poczekać aż lizat przejdzie przez kolumny. Kolumna pracuje grawitacyjnie. Szybkość przepływu zależy od ilości oraz wielkości cząstek DNA. Duża ilość DNA powoduje spowolnienie przepływu, a przy znacznym przeładowaniu kolumny może dojść nawet do całkowitego zablokowania. W takim przypadku należy wirować kolumny wraz z probówkami w rotorze uchylnym przez 1 min przy 3000-4000 RPM. Wirowanie można przeprowadzić zarówno po naniesieniu próbek (pkt 5) jak i podczas płukania roztworem płuczącym K2 (pkt 7 i 8) A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 3 VAT 584-025-44-03 info@aabiot.com www.aabiot.com
6. Kolumny Genomic Mini AX przenieść do nowych probówek 15 ml typu falkon (w zestawie). 7. Płukać kolumny Genomic Mini AX przez dodanie po 1,5 ml roztworu płuczącego K2. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. 8. Ponownie nanieść na kolumny Genomic Mini AX po 1,5 ml roztworu płuczącego K2. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. 9. Dodać do kolumn Genomic Mini AX po 250 µl roztworu elucyjnego K3. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. Krok ten ma na celu zmniejszenie całkowitej objętości eluatu, gdyż martwa objętość kolumny wynosi 250 µl 10. Przenieść kolumny Genomic Mini AX do probówek precypitacyjnych 2 ml (w zestawie). Eluować DNA przez naniesienie na złoże kolumn Genomic Mini AX po 1 ml roztworu elucyjnego K3. Poczekać aż roztwór wypłynie z kolumn. Kolumna posiada odpowiednie żeberka pozwalające na łatwe umieszczenie w probówce A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 4 VAT 584-025-44-03 info@aabiot.com www.aabiot.com
11. Do eluatów zawierających DNA dodać po 800 µl mieszaniny precypitacyjnej PM. Całość wymieszać i wirować przez 10 min przy 10 000 RPM. Mieszanina precypitacyjna PM zawiera dodatkowo wzmacniacz precypitacji, dlatego przed użyciem należy go wymieszać przez kilkakrotne odwracanie butelki 12. Po wirowaniu zlać supernatant. Do probówek dodać po 500 µl 70% etanolu (nie ma w zestawie). Całość wymieszać i wirować przez 3 min przy 10 000 RPM. Po zlaniu supernatantu na dnie powinien być widoczny jasnoniebieski osad DNA 13. Po wirowaniu zlać supernatant. Następnie suszyć probówki odwrócone do góry dnem przez 5 min w temp. pokojowej. Jeżeli na ściankach probówki znajdują się resztki alkoholu to należy je osuszyć kawałkiem jałowej waty (doskonale nadają się do tego patyczki higieniczne lub pałeczki do pobierania wymazów) 14. Osad zawiesić w odpowiedniej ilości buforu TE. Niebieska barwa osadu umożliwia śledzenie procesu rozpuszczania DNA A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 5 VAT 584-025-44-03 info@aabiot.com www.aabiot.com
Produkty powiązane Izolacja DNA ze śladów biologicznych Nazwa Zestawu Ilość Nr kat. Sherlock AX 25 izolacji 095-25 100 izolacji 095-100 Izolacja DNA z wymazów Nazwa Zestawu Ilość Nr kat. Swab 25 izolacji 025-25 100 izolacji 025-100 Genomic Micro AX Swab Gravity 100 izolacji 105-100 Genomic Micro AX Swab Gravity Plus 100 izolacji + 100 wymazówek 105-100P Izolacja DNA z krwi - próbka do 300 µl Nazwa Zestawu Ilość Nr kat. Blood Mini 50 izolacji 022-50 250 izolacji 022-250 Genomic Mini AX Blood 60 izolacji 052-60 Genomic Mini AX Blood 0.3 ml Spin 100 izolacji 052-100S03 Genomic Micro AX Blood Gravity 100 izolacji 101-100 - próbka powyżej 300 µl Nazwa Zestawu Liczba izolacji Nr kat. Genomic Midi AX 20 izolacji 895-20 Genomic Maxi AX 10 izolacji 995-10 Genomic Mini AX Blood 1.0 ml Spin 100 izolacji 052-100S1 tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 info@aabiot.com www.aabiot.com 6
Elementy do zamówień dodatkowych Składnik Ilość Nr kat. Proteinaza K roztwór 20 mg/ml 1.1 ml 1019-20 25 mg 1019-25L Proteinaza K liofilizat 100 mg 1019-100L 250 mg 1019-250L 1000 mg 1019-1L Bufor TE 100 ml 297-100 200 ml 297-200 Roztwór równoważący K1 60 ml 217-60 Roztwór elucyjny K3 90 ml 080-90 Roztwór płuczący K2 (Genomic) 190 ml 216-190G 45 ml 219-45 Roztwór lizujący L1.4 125 ml 219-125 250 ml 219-250 tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 info@aabiot.com www.aabiot.com 7
Informacje bezpieczeństwa NIEBEZPIECZEŃSTWO Proteinaza K H315 Działa drażniąco na skórę. H334 Może powodować objawy alergii lub astmy lub trudności w oddychaniu w następstwie wdychania. H335 Może powodować podrażnienie dróg oddechowych. P261 Unikać wdychania pyłu. P342+P311 W przypadku wystąpienia objawów ze strony układu oddechowego skontaktować się z Ośrodkiem Zatruć lub lekarzem. UWAGA L1.4 roztwór lizujący H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. UWAGA K1 roztwór równoważący H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. NIEBEZPIECZEŃSTWO K2 roztwór płuczący H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. NIEBEZPIECZEŃSTWO K3 roztwór elucyjny H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. NIEBEZPIECZEŃSTWO PM mieszanina precypitacyjna H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Palenia wzbronione. P261 Unikać wdychania par. tel: +48 58 7351194, fax: +48 58 6228578 info@aabiot.com www.aabiot.com 8