Doktorantka: Żaneta Lewandowska

HTML
DOWNLOAD

Wielkość: px

Rozpocząć pokaz od strony:

Download "Doktorantka: Żaneta Lewandowska"

Gabriela Jastrzębska
8 lat temu
Przeglądów:

1 Doktorantka: Żaneta Lewandowska Główny opiekun naukowy: Dr hab. Piotr Piszczek, prof. UMK Katedra Chemii Nieorganicznej i Koordynacyjnej, Wydział Chemii Dodatkowy opiekun naukowy: Prof. dr hab. Wiesław Kozak Zakład Immunologii, Wydział Biologii i Ochrony Środowiska

2 Badania nad wytwarzaniem nanopowłok o działaniu przeciwzapalnym oraz możliwościami ich wykorzystania do otrzymania nowej generacji implantów stosowanych w chirurgii twarzowo-szczękowej

4 Elektrochemiczna metoda utleniania anodowego

5 Nanorurki ditlenku tytanu

6 Chemiczne osadzanie z fazy gazowej - metoda CVD

7 Badanie właściwości fizykochemicznych Badanie topografii powierzchni *Skaningowa mikroskopia elektronowa (SEM) *Transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM) *Mikroskopia sił atomowych (AFM) Analiza jakościowa warstw * Spektroskopia odbicia rozproszonego w podczerwieni (DRIFT) *Metoda dyfrakcji rentgenowskiej (EDX, XRD) Ocena aktywności fotokatalitycznej Badanie kąta zwilżania Ocena stabilności i trwałości materiałów powłokowych w środowisku płynów ustrojowych

8 Zwilżalność powierzchni

9 Ocena stabilności i trwałości materiałów powłokowych w środowisku płynów ustrojowych Czysty Ti oraz TNT o średnicy 23, 30 oraz 96 nm pokryte nanosrebrem w różnych ilościach (5, 10 i 15 mg użytego prekursora Ag) Zanurzenie próbek w roztworze soli fizjologicznej (PBS) symulacja płynów ustrojowych człowieka Czas zanurzenia 1, 3 i 4 tygodnie

10 Wynik [µg/l] Wynik [µg/l] Wynik [µg/l] Wynik [µg/l] TNT 4V TNT 6V tydzień tydzień 15 TNT 18V 20 Tytan tydzień tydzień 5 mg 10 mg 15 mg 30 mg

11 Badania biologiczne Badania immunologiczne *Zakładanie hodowli komórkowej fibroblastów *Ocena żywotności fibroblastów za pomocą testu MTT *Izolacja i hodowla komórek mononuklearnych *Oznaczenie stężenia zapalnych i przeciwzapalnych cytokin we krwi za pomocą testu ELISA Badania mikrobiologiczne *Staphylococcus aureus ATCC szczep referencyjny *Staphylococcus aureus H9 szczep kliniczny Przygotowanie materiału biologicznego do obrazowania

12 Fibroblasty warunki hodowli W doświadczeniu użyto mysie fibroblasty linii komórkowej L929 Hodowlę prowadzono we wzbogaconej pożywce hodowlanej RPMI 1640 zawierającej 2 mm L-glutaminy,10% inaktywowanej surowicy płodowej bydlęcej (FBS), 100 mg streptomycyny/ml i 100 IU penicyliny/ml Biomateriał użyty podczas doświadczeń in vitro został wcześniej wysterylizowany przy użyciu autoklawu (121 C przez 15 minut) Wpływ rodzaju materiału biologicznego na adhezję komórek L929 (po 24h) i proliferacji (po 72h) oceniano za pomocą testu MTT

13 Fibroblasty - Test MTT

14 23 nm, 5 mg Ag, 72h inkubacji

15 30 nm, 5mg Ag, 72h inkubacji

16 Komórki mononuklearne warunki hodowli Komórki mononuklearne izolowano z krwi obwodowej szczurów rasy Wistar wykorzystując metodę wirowania w jednostopniowym gradiencie gęstości Biomateriał użyty podczas doświadczeń in vitro został wcześniej wysterylizowany przy użyciu autoklawu (121 C przez 15 minut) Poszczególne warianty stymulacji i inkubacji komórek przeprowadzono z użyciem 1 mln komórek/ml inkubowane w pożywce hodowlanej RPMI 1640 Kontrolna stymulacja komórek z LPS (stężenie 1 μg/ml/106 komórek ) była przeprowadzona przez 4h Kontrolna inkubacja komórek z 0,9% sterylnym NaCl była przeprowadzona również przez 4h Po upływie czasu inkubacji komórek z badanymi płytkami zebrano supernatanty do probówek typu Eppendorf i próby zwirowano, a następnie zamrożono w -20 C i wykorzystano podczas oznaczania poziomu TNF-α i PGE2 z użyciem testu ELISA.

Stężenie PGE 2 [pg/ml] Porównanie średnich stężeń PGE 2 zmierzonych w supernatantach pohodowlanych po inkubacji komórek mononuklearnych z badanymi płytkami w dwóch wariantach

17 Stężenie PGE 2 [pg/ml] Porównanie średnich stężeń PGE 2 zmierzonych w supernatantach pohodowlanych po inkubacji komórek mononuklearnych z badanymi płytkami w dwóch wariantach czasowych 250 po 4 godzinach 204 po 24 godzinach , ,8 99,6 121,1 110,2 129, ,6 42,2 28,2 7,3 0 Ti Ti+Ag 23nm 23nm+Ag 38nm 38nm+Ag wariant doświadczenia

18 Zmiana ilości PGE 2 w ciągu doby [%] Zmiana w stężeniu PGE 2 uwalnianej przez komórki mononuklearne inkubowane z badanymi płytkami, które zaobserwowano pomiędzy 4- i 24-godzinami inkubacji Ti Ti+Ag 23nm 23nm+Ag 38nm 38nm+Ag

Stężenie TNF-α [pg/ml] Porównanie średnich stężeń TNF-α zmierzonych w supernatantach pohodowlanych po inkubacji komórek mononuklearnych z badanymi płytkami w dwóch wariantach

19 Stężenie TNF-α [pg/ml] Porównanie średnich stężeń TNF-α zmierzonych w supernatantach pohodowlanych po inkubacji komórek mononuklearnych z badanymi płytkami w dwóch wariantach czasowych ,3 243,6 po 4 godzinach 210,1 po 24 godzinach , ,6 119, ,5 95,3 90,9 45, ,1 0 Ti Ti+Ag 23nm 23nm+Ag 38nm 38nm+Ag wariant doświadczenia

20 Wzrost ilości TNF-α w ciągu doby [%] Zmiany w stężeniu TNF-α produkowanego przez komórki mononuklearne inkubowane z badanymi płytkami, które zaobserwowano pomiędzy 4 i 24-godzinami inkubacji Ti Ti+Ag 23nm 23nm+Ag 38nm 38nm+Ag

22 Dziękuję za uwagę!!!

Podobne dokumenty

SPIS TREŚCI WPROWADZENIE Podział biomateriałów Biomateriały w medycynie regeneracyjnej Cementy kostne...

SPIS TREŚCI WPROWADZENIE Podział biomateriałów Biomateriały w medycynie regeneracyjnej Cementy kostne... SPIS TREŚCI WPROWADZENIE... 1 I. PRZEGLĄD LITERATURY... 3 1.1. Podział biomateriałów... 3 1.2. Biomateriały w medycynie regeneracyjnej... 8 1.3. Materiały kościozastępcze... 11 1.4. Wymagania stawiane