Cat. No. EM07.1 Wersja: 1.2017 NOWA WERSJA Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych EXTRACTME jest zarejestrowanym znakiem towarowym BLIRT S.A.
www.blirt.eu
Nr kat. EM07.1 I. PRZEZNACZENIE ZESTAWU Zestaw EXTRACTME DNA CLEAN-UP przeznaczony jest do szybkiego i wydajnego oczyszczania fragmentów DNA po reakcjach enzymatycznych. Oczyszczone DNA wolne jest od nukleaz, starterów, inhibitorów, enzymów, detergentów, polimeraz, enzymów restrykcyjnych, kationów dwuwartościowych, soli, oleju mineralnego itp., gwarantując wysoką użyteczność w technikach biologii molekularnej. Zestaw umożliwia oczyszczanie fragmentów DNA o wielkościach od 50 pz do 20 000 pz, a także genomowego i plazmidowego DNA. Startery pozostałe po reakcji PCR są skutecznie eliminowane, natomiast małe fragmenty DNA są wiązane i oczyszczane z wysoką wydajnością. Protokół izolacji i składy buforów zostały zoptymalizowane w celu osiągnięcia zarówno wysokiego odzysku, jak i czystości oczyszczanego DNA. Produkt przeznaczony jest wyłącznie do użytku w celach badawczych. II. SKŁAD I PRZECHOWYWANIE ZESTAWU LICZBA 10 50 250 * Warunki przechowywania Nr katalogowy EM07.1-010 EM07.1-050 EM07.1-250 CB Buffer (Binding Buffer) CW Buffer (conc.)** (Wash Buffer) 4 ml 20 ml 100 ml TP 3.5 ml 16 ml 80 ml TP * TP temperatura pokojowa (+15 C do +25 C) Elution Buffer 2 ml 10 ml 5 x 10 ml TP DNA Purification Columns 10 szt. 50 szt. 5 x 50 szt. TP Collection Tubes (2 ml) 10 szt. 50 szt. 5 x 50 szt. TP Loading Buffer 1 szt. 1 szt. 1 szt. TP ** Przed pierwszym użyciem do roztworu CW Buffer należy dodać odpowiednią ilość 96 100% etanolu (informacja na etykietach oraz w poniższej tabeli). Po dodaniu etanolu zalecane jest oznaczenie butelki. LICZBA 10 50 250 Nr katalogowy EM07.1-010 EM07.1-050 EM07.1-250 CW Buffer 3.5 ml 16 ml 80 ml Etanol 96-100% 14 ml 64 ml 320 ml Całkowita objętość 17.5 ml 80 ml 400 ml 3
Roztwory należy przechowywać szczelnie zamknięte, aby uniknąć zmiany stężeń w wyniku parowania. Data ważności Data ważności zestawu, przechowywanego w odpowiednich warunkach, podana jest na etykietach produktu. Po pierwszym użyciu odczynników, zestaw zachowuje stabilność przez okres 12 miesięcy. III. SPECYFIKACJA PRODUKTU MATERIAŁ WYJŚCIOWY Próbka DNA o objętości do 200 µl ODZYSK 60-99% w zależności od wielkości fragmentu DNA WIELKOŚĆ IZOLOWANYCH FRAGMENTÓW DNA 50 pz 20 kpz Możliwe jest również oczyszczanie genomowego i plazmidowego DNA, lecz z obniżoną wydajnością. POJEMNOŚĆ ZŁOŻA ok. 25 µg DNA CZAS 10 minut przy 6 oczyszczeniach CZYSTOŚĆ DNA A 260/280 = 1.7-1.9 www.blirt.eu 4
Nr kat. EM07.1 IV. PRZED PRZYSTĄPIENIEM DO 1. Każdy z odczynników zestawu należy wymieszać. 2. Należy upewnić się, czy do CW Buffer został dodany etanol. Jeśli nie, należy dodać odpowiednią ilość 96 100% etanolu (ilości podane są na etykietach oraz w tabeli w sekcji II). 3. Należy pamiętać, aby wszystkie etapy izolacji przeprowadzać w temperaturze pokojowej. 5
V. PROTOKÓŁ Należy upewnić się, czy do CW Buffer został dodany etanol. KROK 1 Do 1 objętości próbki DNA dodać 2 objętości CB Buffer (np. do 50 μl mieszaniny po reakcji PCR dodać 100 μl CB Buffer), worteksować 3 s. KROK 2 Krótko odwirować próbkę w celu odzyskania resztek roztworu z wieczka probówki, a następnie przenieść całą objętość mieszaniny na złoże minikolumny umieszczonej w probówce odbierającej. Wirować 30 s przy. Odrzucić filtrat. 30 s Przenieść minikolumnę do nowej probówki odbierającej (2 ml). KROK 3 Dodać do minikolumny 700 μl CW Buffer i wirować 30 s przy. Odrzucić przesącz z probówki odbierającej i umieścić w niej z powrotem minikolumnę. 30 s www.blirt.eu 6
Nr kat. EM07.1 Rekomendacja: powtórzyć etap przemywania. Dodać do minikolumny 700 μl CW Buffer i wirować 30 s przy. Odrzucić przesącz z probówki odbierającej i umieścić w niej z powrotem minikolumnę. 30 s KROK 4 Wirować 60 s przy. c cbufor płuczący zawiera alkohol, który może powodować inhibicję niektórych reakcji enzymatycznych, a także obniżenie wydajności elucji, dlatego istotne jest jego całkowite usunięcie przed etapem elucji. 60 s KROK 5 Ostrożnie wyjąć suchą minikolumnę z probówki odbierającej i umieścić ją w jałowej probówce 1,5 ml typu Eppendorf. Nanieść 15-30 μl Elution Buffer centralnie na złoże minikolumny. Inkubować minikolumnę z buforem elucyjnym w temperaturze pokojowej przez 60 s. Wirować 60 s przy. 60 s Minikolumnę usunąć, a wyizolowane DNA przechowywać w temp. +4 C lub -20 C w zależności od dalszych analiz. 7
VI. BEZPIECZEŃSTWO I POSTĘPOWANIE Z PRODUKTEM CB BUFFER Niebezpieczeństwo H225, H302, H315, H319, H332, H336, P210, P233, P261, P264, P270, P271, P280, P301+P312 P330, P302+P352, P303+P361+P353, P332+P313 P362, P304+P340 P312, P305+P351+P338, P337+P313, P403+P233 P405 P235 H225 Wysoce łatwopalna ciecz i pary. H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. H319 Działa drażniąco na oczy. H332 Działa szkodliwie w następstwie wdychania. H336 Może wywoływać uczucie senności lub zawroty głowy. P210 Przechowywać z dala od źródeł ciepła, gorących powierzchni, źródeł iskrzenia, otwartego ognia i innych źródeł zapłonu. Nie palić. P233 Przechowywać pojemnik szczelnie zamknięty. P261 Unikać wdychania pyłu / dymu / gazu / mgły / par / rozpylonej cieczy. P264 Dokładnie umyć ręce po użyciu. P270 Nie jeść, nie pić ani nie palić podczas używania produktu. P271 Stosować wyłącznie na zewnątrz lub w dobrze wentylowanym pomieszczeniu. P280 Stosować rękawice ochronne / odzież ochronną/ochronę oczu / ochronę twarzy. P301+P312 P330 W przypadku połknięcia: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z ośrodkiem zatruć lub lekarzem. Wypłukać usta. P302+P352 W przypadku kontaktu ze skórą: umyć dużą ilością wody. P303+P361+P353 W przypadku dostania się na skórę (lub na włosy): natychmiast usunąć zdjąć całą zanieczyszczoną odzież. Spłukać skórę pod strumieniem wody / prysznicem. P332+P313 P362 W przypadku wystąpienia podrażnienia skóry: zasięgnąć porady / zgłosić się pod opiekę lekarza. Zanieczyszczoną odzież zdjąć i wyprać przed ponownym użyciem. P304+P340 P312 W przypadku dostania się do dróg oddechowych: wyprowadzić lub wynieść poszkodowanego na świeże powietrze i zapewnić warunki do odpoczynku w pozycji umożliwiającej swobodne oddychanie. W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z ośrodkiem zatruć lub lekarzem. P305+P351+P338 W przypadku dostania się do oczu: ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli są i można je łatwo usunąć. nadal płukać. P337+P313 W przypadku utrzymywania się działania drażniącego na oczy: zasięgnąć porady/zgłosić się pod opiekę lekarza. P403+P233 P405 P235 Przechowywać w dobrze wentylowanym miejscu. Przechowywać pojemnik szczelnie zamknięty. Przechowywać pod zamknięciem. Przechowywać w chłodnym miejscu. www.blirt.eu