RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP 2185168 (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: 31.07.2008 08786725.5 (13) (51) T3 Int.Cl. A61K 36/38 (2006.01) A61K 36/58 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: 31.10.2012 Europejski Biuletyn Patentowy 2012/44 EP 2185168 B1 (54) Tytuł wynalazku: Sposób przygotowywania wyciągu z dziurawca w oleju z miodli indyjskiej i substancja otrzymana tym sposobem (30) Pierwszeństwo: 01.08.2007 SM 200700032 (43) Zgłoszenie ogłoszono: 19.05.2010 w Europejskim Biuletynie Patentowym nr 2010/20 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: 29.03.2013 Wiadomości Urzędu Patentowego 2013/03 (73) Uprawniony z patentu: Moses S.R.L., Falciano, SM (72) Twórca(y) wynalazku: PL/EP 2185168 T3 MARCO MOSCONI, Rimini, IT (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Włodzimierz Gałązkiewicz BRANDPAT KANCELARIA RZECZNIKÓW PATENTOWYCH CHLEBICKA CZYŻ GAŁĄZKIEWICZ ZIÓŁKOWSKI SP.P. ul. Hoża 29/31 lok. 31 00-521 Warszawa Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).
1308-PAT-EP-PL 1 EP2185168 Opis Dziedzina wynalazku [0001] Wynalazek ten dotyczy urządzeń medyczno-chirurgicznych, w szczególności dotyczy sposobu przygotowywania wyciągu z Hypericum perforatum (dziurawca) w oleju z miodli indyjskiej i substancji otrzymanej tym sposobem. Stan techniki [0002] Znany jest fakt, że wyciąg olejowy (olej) z dziurawca zwyczajnego (Hypericum perforatum) wykazuje działanie przeciwzapalne, dezynfekcyjne i ułatwiające zabliźnianie zewnętrznych zranień, owrzodzeń i oparzeń. [0003] Ponadto wiadomo, że olej z miodli indyjskiej wykazuje właściwości polegające na ułatwianiu zabliźniania, biobójcze, przeciwzapalne, odstraszające larwy wędrujące. [0004] Na przykład ze zgłoszenia WO 2006/013607 wiadomo, że w mieszaninie oleju z miodli indyjskiej i olejowego wyciągu z dziurawca następuje sumowanie się cech charakterystyki aktywności biologicznej sprawdzonej dla pojedynczych składników mieszaniny. [0005] Wspomniany efekt rozcieńczenia wyklucza myślenie w kategoriach równoważności właściwości biologicznych i biobójczych dla pojedynczych możliwych do otrzymania mieszanin złożonych, ponieważ właściwość biologiczna jest cechą molekularną, zależy od struktury oraz od dawki. [0006] W tymże dokumencie WO 2006/013607, dla wskazanego sposobu przygotowania, olej z dziurawca z pewnością nie może spełnić
1308-PAT-EP-PL 2 EP2185168 kryterium odtwarzalności wyników uzyskanych dla wyciągu olejowego, biorąc pod uwagę utratę warunków procesu (temperatury, czas, oświetlenie, mieszanie, stosunek leki/olej), aby spełnić kryterium minimalnej odtwarzalności składu cząsteczkowego wyciągu olejowego. [0007] Co więcej, w uzyskanym w ten sposób preparacie już w temperaturze 16 C pojawia się zmętnienie wywołane wytrącaniem węglowodorów, kwasów tłuszczowych, itp., a zatem wpływające na łatwość rozsmarowywania i użycia preparatu. Fakt ten ogranicza możliwości w przestrzeni-w czasie, ze względu na klimat. [0008] Co więcej, na macerację spagiryczną zastosowaną w procesie ekstrakcji zgodnie z dokumentem WO2006/013607 ma wpływ zmienność czynnika klimatycznego (światło, temperatura) i różny czas prowadzenia procesu. [0009] W EP 1 197 219 ujawniono proces ekstrakcji oleju z dziurawca z kwiatów H. perforatum przy pomocy oleju, takiego jak olej pszenny (tj. olej z zarodków pszenicy), oliwa z oliwek, olej słonecznikowy, olej rzepakowy, olej lniany, olej z pestek dyni, olej sezamowy, olej kukurydziany, olej z nasion palmy, olej kartamusowy i olej z orzechów arachidowych. [0010] Kulevanova et al., Acta Pharmaceutica, 50 (2000), strony 29-37 ujawniają ekstrakcję flawonoidu i kwercetyny z H. perforatum w wyciągach wodnych, wodno-etanolowych i olejowych. [0011] W FR 2 864 447 ujawniono kompozycję dermatologiczną zawierającą mieszaninę kwiatów dziurawca i oliwę z oliwek. [0012] W artykule opublikowanym w International Journal of Toxicology, 20(Suppl. 2). 31-39, 2001, opisano ekstrakcję z kwiatów i ziela H. perforatum przy użyciu glikolu 1,2-
1308-PAT-EP-PL 3 EP2185168 propylenowego i z kwiatów Hypericum przy pomocy roztworu glikolu 1,3-butylenowego. [0013] W EP 0 415 327 ujawniono wyciąg z Hypericum erectum Thunb., przygotowany ze zmielonych liści, łodyg, korzeni, owoców, nasion lub kwiatów Hypericum erectum Thunb. przez ekstrakcję rozpuszczalnikiem organicznym. Istota wynalazku [0014] Celem niniejszego wynalazku jest zaproponowanie przemysłowej metody ekstrakcji substancji biologicznie czynnych z kwiatów i owocostanów (torebek) Hypericum perforatum przy zastosowaniu jako roztworu ekstrakcyjnego oleju z miodli indyjskiej bez użycia innego oleju do maceracji. [0015] Kolejnym celem jest zwiększenie efektywności metody ekstrakcji, na przykład przez zastosowanie rozpuszczalnika. [0016] Dodatkowym celem jest otrzymanie wyciągów Hypericum bezpośrednio w koncentratach oleju z miodli indyjskiej i o większym zakresie stosowalności w funkcji temperatury. [0017] Dodatkowy celem jest ponadto zaproponowanie sposobu, który będzie bardzo łatwy do przeprowadzenia i korzystny ekonomicznie. Najlepszy sposób wykonania wynalazku [0018] Cel niniejszego wynalazku dotyczący sposobu obejmuje wprowadzenie świeżych, zamrożonych, wysuszonych, liofilizowanych kwiatów oraz owocostanów (torebek) dziurawca, albo ich mieszanin do reaktora składającego się ze stalowego pojemnika, wyposażonego w centralną oś obrotową wyposażoną w osadzone na tej osi łopatki mieszające, które mogą obracać się ze zmienną
1308-PAT-EP-PL 4 EP2185168 szybkością. Pojemnik wyposażony jest w nieprzepuszczającą powietrza szklaną pokrywę przenikalną dla promieniowania w zakresie widzialnym. [0019] Pojemnik ogrzewa się pod próżnią przy ciśnieniu nie niższym niż 0,04 atmosfery. [0020] Stosunek masy roztworu rozpuszczalnikowego / masy kwiatów albo torebek wynosi pomiędzy 3 a 1 i pomiędzy 15 a 1, zależnie od ubytku zawartości wody w kwiatach albo torebkach albo ich mieszaninach. Po wprowadzeniu kwiatów i/lub torebek dodaje się rozpuszczalnik wybrany spośród: a) oleju z miodli indyjskiej jako takiego; b) mieszanin zawierających olej z miodli indyjskiej i rozpuszczalnik albo mieszaniny rozpuszczalników, takich jak alkohol benzylowy, etanol 96, alkohol fenyloetylowy, alkohol alfa-fenyloetylowy, alkohol etylowy, alkohol izopropylowy, alkohol oktylowy; glikole takie jak gliceryna, glikol propylenowy, glikol polietylenowy; estry takie jak octan etylu, octan oktylu, mleczan etylu, octan izopropylu, mirystynian izopropylu, palmitynian izopropylu, kaprylan etylu, fenylooctan etylu, oleinian etylu, linoleinian etylu, laurynian etylu, cytrynian trietylu, octan fenyloetylu; triglicerydy takie jak: trioleinian, trilinoleinian, trimaślan, trioctan, trikaprylan, trikapronian, trikaprynian, oleje parafinowe, silikony, w proporcji olej z miodli indyjskiej - rozpuszczalniki pomiędzy 1:2 a 1:0,01. [0021] Rozpuszczalniki ekstrakcyjne wymienione w punktach a, b, same albo wraz ze składnikami takimi jak silikony, oleje parafinowe, estry, triglicerydy ciekłe w 4 C, mogą działać niesprzyjająco dla zjawisk wytrącania w kompozycji stosowanej na
1308-PAT-EP-PL 5 EP2185168 skórę podczas przechowywania, rozszerzając zakres stosowania do temperatur bliskich 0 C lub niższych. [0022] Dlatego też uzyskuje się próżnię, aktywuje ogrzewanie masy rozpuszczalnika ekstrakcyjnego i biomasy o temperaturze w przedziale pomiędzy 16 C i 100 C i wprowadza się w ruch obrotowy wał z rozmieszczonymi śrubowo łopatkami. [0023] Aktywuje się naświetlanie i utrzymuje kontakt pomiędzy roztworem ekstrahentu a biomasą przez okres czasu od 1 godziny do 400 godzin. [0024] Po upływie czasu ekstrakcji roztwór uzyskany w wyniku maceracji przelewa się, poprzez jeden lub większą liczbę filtrów, do ciemnego pojemnika ze szkła bursztynowego i w nim przechowuje się produkt maceracji, chroniąc go przed kontaktem z tlenem z powietrza. Kinetykę ekstrakcji nadzoruje się, monitorując za pomocą chromatografii HPLC dwie cząsteczki markerowe[:] hiperycynę i pochodne przy 585 nanometrach i hiperforynę i pochodne przy 278 nanometrach. [0025] Korzystając z tej metody, otrzymuje się kompozycję, stanowiącą lek przeciwzapalny, dezynfekcyjny i ułatwiający gojenie, do stosowania na przykład w terapii zewnętrznych ran, owrzodzeń, skaleczeń i oparzeń, działający oprócz tego jako repelent na larwy wędrujące i nie insekty. [0026] Dalsze cechy będą w dużej mierze wynikać z opisu pewnych praktycznych korzystnych przykładów wykonania sposobu przygotowywania wyciągu zgodnie z wynalazkiem, przykłady podane w dalszej części służą jako wskazówka i nie ograniczają zakresu wynalazku.
1308-PAT-EP-PL 6 EP2185168 Przykład 1 [0027] Do reaktora wprowadzono 300 gramów kwiatów dziurawca albo torebek Hypericum perforatum, wysuszonych lub zamrożonych albo liofilizowanych itp. i po hermetycznym uszczelnieniu szklanej pokrywy reaktora wytworzono próżnię. [0028] A zatem wprowadzono 4 kg czystego oleju z miodli indyjskiej, a gdy zasilanie rozpuszczalnikiem zostało zakończone, uruchomiono mieszadło wielołopatkowe, temperaturę zwiększono do 50 C i poddano działaniu promieniowania. Po 220 godzinach zatrzymano ruch wału mieszającego i jednocześnie zablokowano dopływ ciepła i promieniowania, a wyciąg przeniesiono do pojemnika ze szkła bursztynowego. Jeden lub dwa wkłady filtrujące do wyeliminowania materiału zawieszonego włożono do rury doprowadzającej wyciąg. Wyciąg dziurawca w oleju z miodli indyjskiej przechowywano w zacienionym miejscu w temperaturze 20 ±1. Wydajność wyciągu wyniosła 2,85 kg, co równa się 71,25% wprowadzonego oleju z miodli indyjskiej. Przykład 2 [0029] 300 gramów liofilizowanych kwiatów dziurawca (o objętości ok. 2 litrów), z których 60% to owocostan wprowadzono do reaktora i dodano 3,5 kg roztworu ekstrahentu, składającego się z oleju z miodli indyjskiej 41% (wag./wag.), 26% octanu etylu, 16% alkoholu benzylowego, 16% etanolu 96%-go. Otrzymano próżnię, zaprogramowano ogrzewanie do 35 C i wyregulowano szybkość mieszania, ustalając szybkość rotacji wału, na którym osadzone są łopatki, poddając działaniu promieniowania przy pomocy lamp wytwarzających światło białe, przy całkowitym czasie ekstrakcji wynoszącym 180 godzin. Po tym okresie mieszanie i naświetlanie
1308-PAT-EP-PL 7 EP2185168 zatrzymano, a wyciąg przeniesiono pojemnika ze szkła bursztynowego. Masa uzyskanego wyciągu wyniosła 2,8 kg, co stanowi wydajność 80,3% z mieszaniny ekstrahentu. Przykład 3 [0030] 800 gramów torebek dziurawca albo świeżych kwiatów dziurawca umieszczono w reaktorze, obydwa 3,8 kg roztworu ekstrahentu o następującym składzie procentowym: 50% oleju z miodli indyjskiej, 15% alkoholu fenyloetylowego, 20% octanu propylu, 10% etanolu 96 -go, 2% palmitynianu izopropylu, 3% oleju parafinowego o temperaturze krzepnięcia wynoszącej - 20 C i uzyskano próżnię. Ustalono temperaturę ogrzewania na 65 C, włączono mieszadło i, doprowadzając promieniowanie, kontynuowano ekstrakcję przez 120 godzin. Mieszanie i naświetlanie zatrzymano i badanie kontynuowano zgodnie z przykładem 1, przenosząc do pojemnika z ciemnego szkła 2,3 kg wyciągu, co stanowi wydajność 71,8%. Przykład 4 [0031] 400 g świeżych kwiatów dziurawca albo torebek zamrożonych w -18 C umieszczono w reaktorze, a następnie dodano 3,5 kg oleju z miodli indyjskiej. Uzyskano próżnię, a ogrzewanie ustwiono na 98 C i wprowadzono w ruch obrotowy wał mieszający z szybkością 20 obrotów na godzinę, w obecności promieniowania. Ekstrakcję prowadzono przez 1 godzinę, a następnie urządzenie mieszające zatrzymano, a także wstrzymuje się ogrzewanie i naświetlanie; wyciąg olejowy Hypericum perforatum przeniesiono do pojemnika ze szkła bursztynowego i przechowuje w temperaturze 20 C w
1308-PAT-EP-PL 8 EP2185168 zacienionym miejscu. Masa wyciągu olejowego wyniosła 2,5 kg, co oznacza wydajność odzyskiwania wynoszącą 74,3%. Przykład 5 [0032] 350 gramów liofilizowanych kwiatów Hypericum perforatum wprowadzono do reaktora i dodano 3,00 kg oleju z miodli indyjskiej jako rozpuszczalnika do ekstrakcji. Uzyskano próżnię, a ogrzewanie zaprogramowano na 18 C z szybkością mieszania wału mieszającego zaprogramowaną na 15 obrotów na godzinę, przez czas ekstrakcji wynoszący 380 godzin, naświetlając światłem w zakresie 400-700 nanometrów. Po tym czasie mieszanie i naświetlanie zatrzymano, a wyciąg olejowy przeniesiono zgodnie z metodologią z przykładu 1 do pojemnika ze szkła bursztynowego. Masa wyciągu olejowego Hypericum perforatum wyniosła 2,20 kg przy wydajności odzyskiwania wynoszącej 73,3%. Przykład 6 [0033] 300 gramów biomasy składającej się ze świeżych kwiatów (60%) i torebek (40 %) Hypericum perforatum wprowadzono do reaktora i uzyskano próżnię do obniżenia ciśnienia do 0,04 atmosfery. Po 10 minutach do biomasy dodano 3 kg roztworu ekstrahentu składającego się z oleju z miodli indyjskiej (60%), octanu propylu (25%) - i alkoholu fenyloetylowego (15%) w temperaturze pokojowej przez wessanie pod wpływem próżni. Z ogrzewaniem zaprogramowanym na 45 C i stosując napromieniowanie światłem białym, uruchomiono wielołopatkowy wał obrotowy, a kinetykę ekstrakcji monitorowano za pomocą chromatografii HPLC przy 278 nanometrach dla hiperforyn i przy 585 nanometrach dla hiperycyn. Po 140 godzinach zawartość tych cząsteczek osiągnęła
1308-PAT-EP-PL 9 EP2185168 plateau, przy stosunku wagowym hiperforyn do hiperycyn bliskim 15 do 1, a następnie wał mieszający zatrzymano, ogrzewanie jak też promieniowanie zablokowano, a na końcu wyciąg przeniesiono do pojemnika ze szkła bursztynowego, wkładając do rury doprowadzającej wkłady filtrujące, aby usunąć zawieszony materiał. Ilość odzyskanego wyciągu dziurawca wyniosła 2,6 kg przy wydajności 86,6%; hiperforyny w ekstrakcie przechowywane w ciemności w 20 C + lub -1, wykazały godny uwagi okres połowicznej trwałości wynoszący blisko 15 miesięcy zmierzony przy pomocy chromatografii HPLC przy 278 nanometrach. [0034] Korzyścią jest ulepszenie sposobu ekstrakcji na przykład przez zastosowanie rozpuszczalnika. [0035] Dodatkową korzyścią jest otrzymanie wyciągu z dziurawca w postaci koncentratów w oleju z miodli indyjskiej.
1308-PAT-EP-PL 10 EP2185168 Zastrzeżenia patentowe 1. Sposób przygotowywania wyciągu Hypericum perforatum w oleju z miodli indyjskiej, znamienny tym, że: - łączy się pewną ilość kwiatów dziurawca i/lub torebek z pewną ilością oleju z miodli indyjskiej w stosunku wagowym w zakresie pomiędzy 1:3 i 1:15; - wprowadza się do reaktora mieszaninę wykonaną z pewnej ilości kwiatów i/lub torebek dziurawca i oleju z miodli indyjskiej; - utrzymuje się mieszaninę pod próżnią, z mieszaniem przez określony z góry czas w przedziale pomiędzy jedną godziną a 400 godzinami i temperaturą w przedziale pomiędzy 16 C a 100 C. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że dostarcza się dodatkowo do mieszaniny promieniowanie przy wykorzystaniu światła w zakresie widzialnym. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się świeże, zamrożone, liofilizowane albo wysuszone kwiaty albo torebki dziurawca. 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się podciśnienie nie niższe niż 0,04 atmosfery. 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szybkość mieszania może się zmieniać w przedziale od 2 do 30 obrotów na godzinę. 6. Sposób według któregokolwiek z wcześniejszych zastrz., znamienny tym, że pewna ilość oleju z miodli indyjskiej składa
1308-PAT-EP-PL 11 EP2185168 się z oleju z miodli indyjskiej i rozpuszczalnika albo mieszaniny rozpuszczalników, w których zawartość oleju z miodli indyjskiej wynosi przynajmniej 33% wag. rozpuszczalnika albo mieszaniny rozpuszczalników. 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że rozpuszczalnik stanowi alkohol albo glikole albo estry albo triglicerydy albo oleje parafinowe albo silikony albo ich mieszaniny. 8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że rozpuszczalnik stanowi alkohol benzylowy, etanol 96 -owy, alkohol fenyloetylowy, alkohol alfa-fenyloetylowy, alkohol etylowy, alkohol izopropylowy, alkohol oktylowy, glicerynę, glikol propylenowy, glikol polietylenowy, octan etylu, octan oktylu, mleczan etylu, octan izopropylu, mirystynian izopropylu, palmitynian izopropylu, kaprylan etylu, fenylooctan etylu, oleinian etylu, linoleinian etylu, laurynian etylu, cytrynian trietylu, octan fenyloetylu, trioleinian, trilinoleinian, trimaślan, trioctan, trikaprylan, trikapronian, trikaprynian lub ich mieszaniny. 9. Sposób według któregokolwiek z wcześniejszych zastrz., znamienny tym, że produkt maceracji przesyła się pod upływie czasu ekstrakcji do ciemnego pojemnika ze szkła bursztynowego. 10. Sposób według któregokolwiek z wcześniejszych zastrz., znamienny tym, że produkt maceracji przechowuje się jako chroniony przed kontaktem z tlenem z powietrza.
1308-PAT-EP-PL 12 EP2185168 11. Kompozycja otrzymana sposobem zdefiniowanym w którymkolwiek z zastrzeżeń 1-10. 12. Kompozycja według zastrz. 11, znamienna tym, że temperatura stosowania kompozycji jako ciekłego płynu kosmetycznego jest obniżona co najmniej do 0 C. 13. Kompozycja według któregokolwiek z zastrz. od 11 do 12, znamienna tym, że kwiaty albo torebki dziurawca są świeże albo zamrożone albo wysuszone albo liofilizowane albo roztarte na proszek przed maceracją. 14. Zastosowanie kompozycji zdefiniowanej w zastrzeżeniach od 11 do 13 do przygotowywania leku.