Plasmid Mini AX Gravity



Podobne dokumenty
Genomic Micro AX Swab Gravity Plus

Genomic Midi AX Direct zestaw do izolacji genomowego DNA (procedura bez precypitacji) wersja 1215

Genomic Mini AX Plant Spin

Genomic Mini AX Bacteria+ Spin

Genomic Mini AX Milk Spin

Genomic Maxi AX Direct

Genomic Micro AX Blood Gravity 96-well

Genomic Mini AX Body Fluids zestaw do izolacji DNA z płynów ustrojowych wersja 1115

Plasmid Mini. 50 izolacji, 250 izolacji. Zestaw do izolacji plazmidów wysokokopijnych wersja Nr kat ,

Zestaw o zwiększonej wydajności do izolacji plazmidów niskoi wysokokopijnych. Procedura z precypitacją DNA. wersja 0117

Genomic Midi AX. 20 izolacji

Genomic Maxi AX zestaw do izolacji genomowego DNA wersja 0616

Zestaw o zwiększonej wydajności do izolacji plazmidów niskoi wysokokopijnych. Procedura z precypitacją DNA. wersja 0217

Zestaw przeznaczony jest do całkowitej izolacji RNA z bakterii, drożdży, hodowli komórkowych, tkanek oraz krwi świeżej (nie mrożonej).

Gel-Out. 50 izolacji, 250 izolacji. Nr kat , Zestaw do izolacji DNA z żelu agarozowego. wersja 0617

Genomic Mini. 50 izolacji, 250 izolacji. Uniwersalny zestaw do izolacji genomowego DNA z różnych materiałów. wersja Nr kat.

Total RNA Zol-Out. 25 izolacji, 100 izolacji

Sherlock AX. 25 izolacji, 100 izolacji

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych

Zestaw do izolacji genomowego DNA z bakterii

E.coli Transformer Kit

Zestaw do izolacji genomowego DNA z drożdży

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna.

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli

Zestaw do izolacji genomowego DNA z bakterii

Zestaw do izolacji genomowego DNA z drożdży

Novabeads Food DNA Kit

Zestaw do izolacji DNA z wymazów oraz nasienia

PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika

Genomic Micro AX Blood Gravity

fix RNA Roztwór do przechowywania i ochrony przed degradacją próbek przeznaczonych do izolacji RNA kat. nr. E0280 Sierpień 2018

Zestaw do izolacji DNA z krwi świeżej i mrożonej

Zestaw do izolacji DNA z krwi świeżej i mrożonej

GeneMATRIX Cell Culture DNA Purification Kit

INFORMACJE O ZAGROŻENIACH SUBSTANCJAMI CHEMICZNYMI ĆWICZENIE 20

1 ekwiwalent 2.5 ekwiwalenta 0.5 ekwiwalenta

Kolor i stan skupienia: czerwone ciało stałe. Analiza NMR: Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zestaw do izolacji plazmidowego DNA

Zestaw do izolacji totalnego DNA z bakterii. Nr kat. EM02 Wersja zestawu:

Zestaw do izolacji plazmidowego DNA. Nr kat. EM01 Wersja zestawu:

StayRNA bufor zabezpieczający RNA przed degradacją wersja 0215

GeneMATRIX Short DNA Clean-Up Purification Kit

bi ~ Zestaw dydal<tyczny umożliwiający przeprowadzenie izolacji genomowego DNA z bakterii EasyLation Genomie DNA INSTRUI<CJA DLA STUDENTÓW

GeneMATRIX Swab-Extract DNA Purification Kit

Zestaw do izolacji DNA z wymazów oraz nasienia

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

GeneMATRIX Bacterial & Yeast Genomic DNA Purification Kit

1 ekwiwalent 2 ekwiwalenty 2 krople

Jakie jest jego znaczenie? Przykładowe zwroty określające środki ostrożności Jakie jest jego znaczenie?

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

GeneMATRIX Agarose-Out DNA Purification Kit

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zestaw do izolacji DNA z wymazów oraz nasienia. Nr kat. EM06 Wersja zestawu:

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych

Zestaw do izolacji genomowego DNA z bakterii

GeneMATRIX Bacterial & Yeast Genomic DNA Purification Kit

1 ekwiwalent 4 ekwiwalenty 5 ekwiwalentów

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych. Nr kat. EM03 Wersja zestawu:

1 ekwiwalent 6 ekwiwalentów 0,62 ekwiwalentu

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Syngen Gel/PCR Mini Kit

Zestaw do izolacji totalnego DNA z drożdży

Syngen Plasmid Mini Kit

Uniwersalny zestaw do izolacji DNA (GeDI)

KWAS 1,2-DIBROMO-2-FENYLOPROPIONOWY

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Zestaw do wykrywania Chlamydia trachomatis w moczu lub w kulturach komórkowych

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Gdzie na przykład możemy się z nim zetknąć Pojemniki z gazem

Syngen DNA Micro Kit

GeneMATRIX Basic DNA Purification Kit

Syngen Gel/PCR Mini Kit

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu:

1 ekwiwalent 3 ekwiwalenty 2 ekwiwalenty

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu:

Zestaw do izolacji genomowego DNA z drożdży

1 ekwiwalent 1 ekwiwalent

Instrukcja dla klejów TL-PVC oraz TL-W

Załącznik 2. Międzynarodowe kody zagrożeń i zaleceń bezpieczeństwa (Risk and Safety Phrases)

Syngen Fungi DNA Mini Kit

Instrukcja dla kleju TL-T50

Zestawy do izolacji DNA i RNA

Techniki molekularne ćw. 1 1 z 6

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Inżynieria bioprocesowa na kierunku biotechnologia

GeneMATRIX Environmental DNA & RNA Purification Kit

Syngen Blood/Cell DNA Mini Kit

Zakład Biologii Molekularnej, Wydział Farmaceutyczny, WUM.

Zakład Biologii Molekularnej, Wydział Farmaceutyczny, WUM.

1 ekwiwalent 1,45 ekwiwalenta 0,6 ekwiwalenta

Substancje i mieszaniny niebezpieczne w miejscu pracy

KARTA CHARAKTERYSTYKI

1 ekwiwalent 1 ekwiwalent

1 ekwiwalent 0,85 ekwiwalentu 1,5 ekwiwalentu

Zakład Chemii Organicznej, Wydział Chemii UMCS Strona 1

Instrukcja dla kleju TL-T70 TRI-FREE Bez Trichloroetenu

Transkrypt:

!"# Plasmid Mini AX Gravity zestaw do izolacji ultraczystego plazmidowego DNA (plazmidy wysokokopijne) wersja 0515/I 100 izolacji Nr kat. 015-100 1

Skład zestawu Składnik Ilość Temp. Przechowywania Kolumny Micro AXB (pojemność złoża 20 μg DNA) 100 szt. +4 do +8 C Probówki odbieralnikowe 5 ml 100 szt. Temp. Pok. L1 roztwór do zawieszania 35 ml Temp. Pok. L2 roztwór lizujący 35 ml Temp. Pok. L3 roztwór zobojętniający 35 ml Temp. Pok. K1 roztwór równoważący 60 ml Temp. Pok. K2 pierwszy roztwór płuczący 70 ml Temp. Pok. W2 drugi roztwór płuczący 60 ml Temp. Pok. E bufor elucyjny 2 x 5 ml +4 do +8 C N bufor zobojętniający 1 ml Temp. Pok. Roztwór T 400 µl +4 do +8 C Wyposażenie i materiały niezbędne do izolacji DNA, które nie wchodzą w skład zestawu: 1. Materiał do izolacji plazmidowego DNA 2. Probówki 1,5 ml typu Eppendorf 3. Probówki PCR (opcjonalnie) 4. Mikrowirówka Firma A&A Biotechnology udziela rocznej gwarancji na niniejszy zestaw. Firma nie gwarantuje poprawnego działania zestawu do izolacji plazmidowego DNA w wypadku: odstępstwa od dostarczonego wraz z zestawem protokołu braku zalecanego w niniejszym protokole wyposażenia i materiałów użycia innych odczynników niż zalecane lub które nie wchodzą w skład zestawu użycia przeterminowanych lub niewłaściwie przechowywanych odczynników oraz kolumn 2

Protokół izolacji 1. Zwirować 1-3 ml nocnej hodowli bakteryjnej. Supernatanty usunąć, a osady dokładnie zawiesić w 300 µl roztworu do zawieszania L1. W trakcie zawieszania osadu bakteryjnego roztwór będzie zmieniał wygląd z całkowicie transparentnego o odcieniu ciemnoróżowym na nieprzezroczysty o odcieniu jasnoróżowym. Zawieszanie można zakończyć po całkowitym zniknięciu osadu u dołu probówki. 2. Dodać po 300 µl alkalicznego roztworu lizującego L2 i po wymieszaniu przez kilkakrotne odwracanie probówek pozostawić na 3 min w temp. pokojowej. Po dodaniu roztworu L2 należy ostrożnie mieszać zawartość probówki, aby nie spowodwać fragmentacji chromosomalnego DNA. Po 3 min inkubcji lizat powinien być całkowicie klarowny i jednolicie fioletowy. W przeciwnym wypadku należy odwrócić lizat kilka razy i przedłużyć czas inkubacji o dalsze 3 min. 3. Dodać po 300 µl roztworu zobojętniającego L3 i wymieszać przez kilkakrotne odwracanie probówek. Po wymieszaniu zawartość probówki powinna zmienić zabarwienie na lekko żółte. 4. Całość wirować 10 min przy 10 000 RPM. 5. Podczas wirowania przygotować kolumny Micro AXB do oczyszczania DNA przez dokładne zamocowanie ich do probówek odbieralnikowych i umieszczenie w pozycji pionowej w statywie. Następnie nanieść na kolumny Micro AXB po 500 µl roztworu równoważącego K1. Dobrą praktyką jest nanoszenie roztworu K1 na ściankę kolumny tak, aby uniknąć przypadkowego zablokowania przepływu kolumny przez bąbelek powietrza uwięziony pomiędzy złożem a naniesionym roztworem K1 Kolumna jest gotowa do użytku, gdy roztwór przestanie kapać z kapilary 3

6. Po wirowaniu nanieść supernatanty na zrównoważone uprzednio kolumny Micro AXB. Poczekać, aż lizat przejdzie przez kolumny Micro AXB pod wpływem sił grawitacji. Zwykle trwa to do 4 min. Prędkość przepływu przez kolumnę uzależniona jest od zawartości DNA w próbce. UWAGA: Dotyczy punktów 6.-8. protokołu izolacji. W przypadku izolacji plazmidowego DNA z większej ilości prób (ponad 10) zalecamy odczekać do 4 min, zamiast obserwowania zachowania się poszczególnych kolumn (patrz Uwagi - str. 5). W przypadku izolacji DNA z mniejszej ilości prób (do 10) należy obserwować czy lizat w całości przeszedł przez kolumnę. Gdy roztwór przestanie kapać z kapilary należy przejść do kolejnego punktu (patrz Uwagi - str. 5). 7. Nanieść na kolumny Micro AXB po 700 µl pierwszego roztworu płuczącego K2. Poczekać, aż roztwór wypłynie z kolumn Micro AXB. 8. Następnie dodać po 500 µl drugiego roztworu płuczącego W2. Poczekać, aż roztwór wypłynie z kolumn Micro AXB. 9. Nanieść na kolumny Micro AXB po 40 µl roztworu elucyjnego E i poczekać 2 min. Krok ten ma na celu zmniejszenie całkowitej objętości eluatu, ponieważ martwa objętość kolumny wynosi około 40 µl. Po użyciu buforu elucyjnego E należy zawsze szczelnie zakręcać pojemnik. Składniki buforu elucyjnego E ulegają rozkładowi przy długotrwałym kontakcie z powietrzem. Bufor elucyjny E należy zawsze przechowywać w temp. +4 do +8 C. 10. Przygotować probówki elucyjne (nie ma w zestawie). Mogą to być jałowe probówki 1,5 ml typu Eppendorf. Dodać na ich dno po 2 µl buforu zobojętniającego N. Zobojętnianie próbek DNA. Patrz Informacje dodatkowe - str. 5 11. Przenieść kolumny Micro AXB do przygotowanych probówek elucyjnych. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 5840254403 4

12. Eluować DNA przez naniesienie na złoże kolumn Micro AXB po 40 µl roztworu elucyjnego E. Po użyciu buforu elucyjnego E należy zawsze szczelnie zakręcać pojemnik. Składniki buforu elucyjnego E ulegają rozkładowi przy długotrwałym kontakcie z powietrzem. Bufor elucyjny E należy zawsze przechowywać w temp. +4 do +8 C. 13. Całość wirować przez 30-60 s przy 5 000 RPM. 14. Usunąć kolumny Micro AXB i zamknąć probówki elucyjne. Informacje dodatkowe Zobojętnianie próbek DNA. Bufor elucyjny E jest silnie alkaiczny i po zamrożeniu może powodować degradację DNA. Z tego powodu konieczne jest stosowanie buforu zobojętniającego N. Z naszej praktyki laboratoryjnej wynika, że najwygodniej jest dodać bufor zobojętniający N przed elucją DNA, do pustej probówki elucyjnej (punkt 10. protokołu izolacji). W trakcie elucji, zawieszone w buforze elucyjnym DNA wymiesza się z buforem zobojętniającym N i ulegnie natychmiastowej neutralizacji. Po dodaniu buforu zobjętniającego N - DNA będzie zawieszone w roztworze 10 mm Tris ph 8,5. Jeżeli bufor zobojętniający N nie został dodany w punkcie 10. protokołu, to można dodać go po zakończonej izolacji - przed zamrożeniem próbek DNA. Uwagi Problem Przyczyna Rozwiązanie Wolny przepływ próbki przez kolumnę Bardzo duża ilość DNA w próbce Kolumnę można odwirować po umieszczeniu jej uprzednio w probówce typu Eppendorf. Przy kolejnej izolacji należy zmniejszyć o połowę ilość próbki badanej. Pęcherzyki powietrza w drenie probówki odbieralnikowej Niedokładne zamocowanie kolumny na probówce odbieralnikowej Zalecamy dokręcenie kolumny. Uwięzione w drenie pęcherzyki powietrza można usunąć poprzez uniesienie probówki z kolumną na 1-2 cm i opuszczenie jej. A&A BIOTECHNOLOGY, Aleja Zwycięstwa 96/98, 81-451 Gdynia NIP 5840254403 5

Technologia Gravity flow '&'()*!'+! "+*&,# -!#.&'+!!"#$%& Produkty oparte na technologii Gravity flow Nazwa Ilość Materiał Nr. kat Genomic Micro AX Blood Gravity 100 izolacji Krew 101-100 Genomic Micro AX Swab Gravity 100 izolacji Wymazy 105-100 Genomic Micro AX Swab Gravity Plus 100 izolacji + wymazówki Wymazy 105-100P Genomic Micro AX Bacteria Gravity 100 izolacji Bakterie 102-100 Genomic Micro AX Bacteria+ Gravity 100 izolacji Bakterie G+ 102-100M Genomic Micro AX Tissue Gravity 100 izolacji Tkanki 104-100 Genomic Micro AX Plant Gravity 100 izolacji Rośliny 103-100 Bead-Beat Micro AX Gravity 20 izolacji Trudne próby 106-20 100 izolacji Trudne próby 106-100 6

Test funkcjonalności buforu elucyjnego E Bufor elucyjny E ma kluczowy wpływ na wydajność elucji DNA. Jego prawidłowe działanie można sprawdzić za pomocą roztworu T wchodzącego w skład zestawu. Kiedy przeprowadzić test funkcjonalności: Bufor E nie był używany przez min. 2 miesiące Bufor E był przechowywany w temp. pokojowej przez min. 2 tygodnie Fiolka zawierająca bufor E nie została szczelnie zamknięta po użyciu Protokół 1. Przenieść 20 µl buforu E do nowej probówki PCR 2. Dodać po 2 µl roztworu T. Całość wymieszać 3. Poczekać 2 min 4. Porównać kolor mieszaniny ze zdjęciem obok przedstawiającym kolory referencyjne Bufor E nie działający poprawnie Bufor E działający poprawnie 7

Informacje bezpieczeństwa NIEBEZPIECZEŃSTWO L3 roztwór zobojętniający (Xn, środek drażniący, R:41, R:37/38) H315 Działa drażniąco na skórę. H318 Powoduje poważne uszkodzenia oczu. H335 Może powodować podrażnienie dróg oddechowych. P261 Unikać wdychania pyłu. P280 Stosować rękawice ochronne/ odzież ochronną/ ochronę oczu/ ochronę twarzy. NIEBEZPIECZEŃSTWO L2 roztwór lizujący (Xn, środek szkodliwy, żrący dla skóry, R:42 S:23-45) H315 Działa drażniąco na skórę. H319 Działa drażniąco na oczy. H334 Może powodować objawy alergii lub astmy lub trudności w oddychaniu w następstwie wdychania. H335 Może powodować podrażnienie dróg oddechowych. P261 Unikać wdychania pyłu. P342+P311 W przypadku wystąpienia objawów ze strony układu oddechowego skontaktować się z Ośrodkiem Zatruć lub lekarzem. UWAGA K1 roztwór równoważący (Xn, środek szkodliwy, R:22-36/38, S:26-37) H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. H319 Działa drażniąco na oczy. UWAGA K2 pierwszy roztwór płuczący (Xn, środek szkodliwy, R:22-36/38, S:26-37) H302 Działa szkodliwie po połknięciu. H315 Działa drażniąco na skórę. H319 Działa drażniąco na oczy. NIEBEZPIECZEŃSTWO E bufor elucyjny (Xn, środek żrący, C, R35, S26, S45) H314 Powoduje poważne oparzenia skóry oraz uszkodzenia oczu. P280 Stosować rękawice ochronne/ odzież ochronną/ ochronę oczu/ ochronę twarzy. P310 Natychmiast skontaktować się z Ośrodkiem Zatruć lub lekarzem. 8