Porównanie metod przydatnych w ocenie wpływu flukonazolu na żywotność komórek Candida albicans

Wielkość: px
Rozpocząć pokaz od strony:

Download "Porównanie metod przydatnych w ocenie wpływu flukonazolu na żywotność komórek Candida albicans"

Transkrypt

1 diagnostyka laboratoryjna Journal of Laboratory Diagnostics 2011 Volume 47 Number Praca oryginalna Original Article Porównanie metod przydatnych w ocenie wpływu flukonazolu na żywotność komórek Candida albicans Comparison of methods, useful in assessing the impact of fluconazole on Candida albicans viability Dominika Trzaska, Monika Kocot, Zenon P. Czuba Katedra i Zakład Mikrobiologii i Immunologii Wydziału Lekarskiego z Oddziałem Lekarsko-Dentystycznym w Zabrzu, Śląskiego Uniwersytetu Medycznego w Katowicach Streszczenie Celem pracy było porównanie metod pozwalających na ocenę wpływu różnych stężeń flukonazolu na komórki Candida albicans tj. posiewu ilościowego, spektrofotometrii, testu MTT, chemiluminescencji i mikroskopii fluorescencyjnej z udziałem oranżu akrydyny. W badaniach wykorzystano szczep referencyjny Candida albicans ATCC W pierwszym etapie porównano liczby wyrosłych kolonii komórek grzyba na stałych podłożach Sabourauda, które posiewano z hodowli kontrolnych, prowadzonych na stałym i płynnym podłożu Sabourauda. Gęstości optyczne zawiesin wyjściowych, mierzonych przy długości fali λ=550 nm, wynosiły 0,5 oraz 1,0 według skali McFarlanda. Ponadto określono zmiany w liczebności komórek C. albicans poddanych działaniu flukonazolu w stężeniach 0,1; 1,0 oraz 10 µg/ml w stosunku do kontroli. Metoda posiewu ilościowego umożliwiła określenie przydatności skali McFarlanda do oceny gęstości komórek badanego szczepu w zawiesinie, przeprowadzenie analizy porównawczej liczby wyrosłych kolonii na stałych podłożach, jak również określenie wpływu flukonazolu na żywotność C. albicans. Do oceny żywotności komórek C. albicans w hodowlach badanych wykorzystano również test MTT, metodę spektrofotometryczną, a także mikroskopię fluorescencyjną z użyciem barwienia oranżem akrydyny. W niniejszej pracy określono procent komórek żywych w próbach poddanych działaniu flukonazolu. Summary The aim of this study was to compare methods used to estimate of Candida albicans cells viability, like quantitative culture, absorption spectrophotometry, MTT assay, chemiluminescence method and fluorescence microscopy with acridine orange dye. The references strain of Candida albicans ATCC was used in this study as a control. At first stage of research, we compared numbers of yeast colonies after growth on solid Sabourauda medium, which we inoculated from control culture, maintained on solid and in liquid Sabourauda medium. Optical density of starting measured suspension at 550 nm wavelength conformed 0,5 and 1,0 in McFarland s scale. Moreover we specyfied changes in number of C. albicans cells, treated of fluconazole in concentrations 0,1; 1,0 and 10 µg/ml, according to the control. The solid medium culture allowed us to assess usefulness of McFarland s scale for estimating cell density in suspension, comperative analysis of cells number on medium and defining fluconazole influence on C. albicans cell viability. To assess the C. albicans cell viability we used MTT assay, spectrophotometry and fluorescence microscopy with acridine orange. In this study we estimated percent of lives cells after fluconazole treatment. Słowa kluczowe: Candida albicans, żywotność komórek, spektrofotometria, chemiluminescencja, analiza MTT Key words: Candida albicans, cell viability, spectrophotometry, chemiluminescence, MTT assay Wstęp W ciągu ostatnich lat znacznie wzrosła częstość występowania grzybic, zarówno powierzchniowych jak i układowych, w których dominujący czynnik etiologiczny stanowią drożdżaki z rodzaju Candida, zwłaszcza Candida albicans [1]. Zakażenia grzybicze dotyczą obecnie około 40% ludności świata, a najczęstszą ich lokalizacją jest skóra i jej przydatki. Zakażenia te stanowią 7,9% przyczyn zakażeń szpitalnych. Zajmują czwarte miejsce wśród tych zakażeń na oddziałach intensywnej opieki medycznej i obarczone są w 67-83% śmiertelnością [11, 16]. Pomimo ciągłego postępu w rozpoznawaniu i leczeniu zakażeń grzybiczych pozostają więc one nadal poważnym problemem medycznym. Warunkiem skutecznej i bezpiecznej terapii grzybic jest przede 169

2 Porównanie metod przydatnych w ocenie wpływu flukonazolu na żywotność komórek Candida albicans wszystkim właściwe rozpoznawanie infekcji, połączone z identyfikacją patogennych grzybów, a także właściwy wybór skutecznej i akceptowanej przez chorego metody leczenia. Równie ważna jest odpowiednia profilaktyka, polegająca głównie na usuwaniu czynników predysponujących do zakażenia. Podstawowa diagnostyka mykologiczna obejmuje badanie mikroskopowe materiału biologicznego pobranego od pacjenta, hodowlę na podłożu agarowym oraz identyfikację biochemiczną z użyciem testów opartych na auksanografii węglowodanowej i związków azotowych (testy przyswajania węgla i azotu z określonych związków organicznych) oraz ocenie zdolności wytwarzania określonych enzymów. Uzupełnieniem diagnostyki może być także badanie histologiczne wycinka pobranego z miejsca zajętego przez kolonie grzyba, ocena przeciwciał przeciwgrzybiczych we krwi pacjenta (test immunoenzymatyczny - ELISA) [7, 15] oraz wykrycie materiału genetycznego grzyba z wykorzystaniem technik biologii molekularnej (w tym PCR, real-time PCR) [5, 7, 15, 17, 18]. Metody te dają jednak jedynie wynik jakościowy. Dlatego też celem niniejszej pracy była ocena przydatności posiewu ilościowego na podłożu agarowym w ocenie żywotności komórek C. albicans poddanych działaniu flukonazolu oraz porównanie tej metody z innymi, nie wykorzystywanymi rutynowo w diagnostyce mykologicznej tj. z testem MTT, barwieniem oranżem akrydyny i oznaczaniem ATP metodą chemiluminescencji [6, 8, 10, 19]. Materiały i metody Badany szczep i warunki hodowli Do badań wykorzystano szczep referencyjny Candida albicans ATCC 10231, pochodzący z American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, USA. Przed użyciem badany szczep został poddany procedurze sprawdzenia czystości, obejmującej obserwację mikroskopową w celu potwierdzenia typowego kształtu komórek badanych, identyfikację biochemiczną przy użyciu testu API 20C AUX firmy Biomerieux Industry, Warszawa, Polska, (przeprowadzoną zgodnie z zaleceniami producenta), a także wzrost na selektywnym podłożu chromogennym. Test API 20C AUX jest wystandaryzowanym zestawem do identyfikacji drożdżaków w czasie godzin i umożliwia przeprowadzenie 12 testów tj. reakcji enzymatycznych lub zakwaszania cukrów, które uwidaczniają się podczas inkubacji dzięki spontanicznym zmianom barwy. Komórki C. albicans hodowano na stałym podłożu Sabourauda, zawierającym pepton (10,0 g/l), glukozę (40,0 g/l) oraz agar (8,0 g/l). Hodowlę prowadzono w temperaturze 37 C i regularnie przesiewano co godziny. Metoda posiewu ilościowego W celu przygotowania komórek badanego szczepu do analizy zastosowano metodę rozcieńczeń. W pierwszym etapie przygotowano jałowy roztwór związku przeciwgrzybicznego - flukonazolu o stężeniu 1 mg/ml, w jałowym buforowanym fizjologicznym roztworze soli (PBS), pozbawionym jonów wapnia i magnezu. Następnie ze sporządzonego roztworu wyjściowego, techniką dziesięciokrotnych rozcieńczeń, przygotowano roztwory flukonazolu w jałowej soli fizjologicznej (0,85%) o stężeniach: 20; 10 i 1,0 µg/ml. W drugim etapie, z 48-godzinnej hodowli szczepu referencyjnego C. albicans na stałym podłożu Sabourauda, sporządzono zawiesiny w roztworze soli fizjologicznej (0,85%). Gęstości optyczne zawiesin (OD, optical density) zmierzone przy użyciu densytometru DensiLaMetr (typ Densi-2, EMO), przy długości fali λ=550 nm, wynosiły odpowiednio 0,250 oraz 0,500 (standard 1,0 oraz 2,0 według skali McFarlanda). Następnie przygotowane szeregi roztworu flukonazolu dodawano do wyjściowych zawiesin szczepu C. albicans, uzyskując w równej objętości końcowe stężenia flukonazolu 10; 1,0 i 0,1 µg/ml. W ostatnim etapie hodowle inkubowano 24 godziny w temperaturze 37 C. Po okresie inkubacji z przygotowanych hodowli komórek C. albicans ze związkiem przeciwgrzybicznym, sporządzono szeregi dziesięciokrotnych rozcieńczeń w zakresie od 10-1 do Z trzech ostatnich stężeń z każdego szeregu pobierano po 2 µl zawiesiny, które przy użyciu ezy kalibrowanej posiewano ilościowo metodą murawkową na powierzchni stałego podłoża Sabourauda. Posiane płytki inkubowano 48 godzin w temperaturze 37 C. Równocześnie przygotowano hodowle kontrolne z 24- i 48-godzinnej hodowli szczepu wzorcowego. Ocenę ilościową komórek badanych C. albicans, wyrażoną przez jednostki tworzące kolonie (CFU - colony forming unit), przeprowadzono w porównaniu do hodowli kontrolnych, pozbawionych związku badanego. Zliczano wyrosłe pojedyncze kolonie na płytce, a uzyskane dane wykorzystano do określenia przydatności skali McFarlanda do oceny gęstości komórek badanego szczepu w zawiesinie, do przeprowadzenia ilościowej analizy porównawczej wyrosłych kolonii komórek grzyba pochodzących z hodowli prowadzonej na stałym podłożu Sabourauda, celem określenia wpływu flukonazolu na żywotność C. albicans w hodowlach badanych w porównaniu do kontroli. Wszystkie oznaczenia prowadzono w dwóch powtórzeniach. Ocena żywotności Candida albicans metodą spektrofotometryczną W pierwszym etapie przygotowano w dwóch szeregach rozcieńczenia roztworu flukonazolu w jałowej soli fizjologicznej (0,85%), o stężeniach: 20; 10 i 1,0 µg/ml, które następnie dodano do zawiesin szczepu badanego C. albicans. Gęstości optyczne zawiesin wyjściowych, przygotowanych z 48-godzinnej hodowli grzyba na stałym podłożu Sabourauda, wynosiły odpowiednio 0,250 dla pierwszego szeregu oraz 0,500 dla drugiego (standard 1,0 oraz 2,0 według skali McFarlanda). Ostatecznie w hodowlach badanych uzyskano stężenie flukonazolu równe 10; 1,0 i 0,1 µg/ml. Przygotowano również hodowle kontrolne, pozbawione związku przeciwgrzybiczego, o gęstościach optycznych 0,125 oraz 0,250 (standard 0,5 oraz 1,0 według skali McFarlanda). Dodatkowo dla flukonazolu sporządzono widmo absorbcyjne, 170

3 D. Trzaska, M. Kocot i Z.P. Czuba w zakresie od 800 do 200 nm, przy użyciu spektrofotometru JASCO V-630 (Japonia). Tak przygotowane próby poddano 24-godzinnej inkubacji w temperaturze 37 C. Po upływie czasu inkubacji zmierzono gęstość optyczną prób badanych i kontrolnych a następnie pobierano po 200 μl i tę ilość zawiesiny nanoszono na mikropłytkę. Odczyt prowadzono w trzech powtórzeniach w automatycznym czytniku do mikropłytek Elx 800 firmy BioTek Instr., (USA), przy długości fali λ=550 nm. Z otrzymanych danych wyliczono procent żywotności C. albicans w obecności badanego związku w porównaniu do kontroli. Ocena żywotności komórek Candida albicans testem MTT Ocenę żywotności komórek badanych C. albicans przeprowadzono z użyciem testu MTT. Polega on na oznaczeniu barwnego produktu formazanu, powstającego po dodaniu bromku [3-(4,5-dimetylo-2-ilo)-2,5-difenylotetrazolu] (MTT) do zawiesiny hodowlanej zawierającej badany związek. Stężenie powstającego produktu jest proporcjonalne do ilości żywych komórek. Nierozpuszczalne w wodzie kryształki formazanu gromadzą się w komórkach i do ich rozpuszczenia konieczne jest użycie roztworu rozpuszczającego barwnik. W tym celu użyto 100% dimetylosulfotlenek (DMSO). Stężenie uwolnionego barwnika mierzono ilościowo w automatycznym czytniku do płytek 96-dołkowych metodą spektrofotometryczną, przy długości fali λ=550 nm, porównując wartości w próbach badanych do kontrolnych [8]. Przygotowanie komórek C. albicans do analizy przebiegało według opisanej procedury, obejmującej przygotowanie zawiesin wyjściowych i szeregu rozcieńczeń flukonazolu w odpowiednich stężeniach oraz 24-godzinną inkubację w temperaturze 37 C. Jednocześnie przygotowano próby kontrolne pozbawione związku przeciwgrzybiczego, o gęstości 0,5 i 1,0 w skali McFarlanda. Po inkubacji próbki odwirowano, ściągnięto nadsącz a do osadu komórek dodano po 450 µl HBSS i 50 µl roztworu MTT i ponownie inkubowano przez 4 godziny w temperaturze 37 C. Następnie próbki ponownie odwirowano, ściągnięto nadsącz a do osadu komórek dodano 300 µl DMSO (100%), po czym zawiesiny komórek poddano wytrząsaniu. Na mikropłytkę naniesiono po 150 µl zawiesiny badanej i kontrolnej a następnie przeprowadzono analizę kolorymetryczną wytworzonego formazanu przy długości fali λ=550 nm, z użyciem automatycznego czytnika do mikropłytek [6, 8, 9]. Odczyt prowadzono w trzech powtórzeniach. Z otrzymanych danych wyliczono procent żywotności komórek C. albicans w obecności badanego związku, w porównaniu do kontroli. Oznaczanie ATP metodą chemiluminescencji Zasada luminometrycznego oznaczania ATP z użyciem układu lucyferyna/lucyferaza opiera się na następującej reakcji, katalizowanej przez lucyferazę: ATP + lucyferyna + O 2 oksylucyferyna + AMP + PPi + CO 2 (emisja światła) Po upływie 24-godzinnej inkubacji zawiesin kontrolnych i badanych, przeprowadzono ekstrakcję ATP z komórek C. albicans przy użyciu 5% kwasu trójchlorooctowego (TCA). Do probówki typu eppendorf dodano 60 μl zawiesiny badanej z flukonazolem oraz 20 μl kwasu trójchlorooctowego i inkubowano w temperaturze 4 o C. Jednocześnie przygotowano próbę kontrolną, którą stanowiła zawiesina komórek C. albicans pozbawionych wpływu związku przeciwgrzybiczego (60 μl) oraz kwas trójchlorooctowy (20 μl), sprzężony ze wskaźnikiem ph ksylenolem oraz próbę ślepą (woda destylowana + TCA). Po inkubacji pobrano po 40 μl zawiesiny i dodano 160 μl buforu do oznaczeń (0,1 M TRIS-kwas octowy o ph 7,75 z 2 mm EDTA). Następnie z uprzednio przygotowanych próbek pobrano po 20 μl i do tej ilości dodano po 140 μl buforu do oznaczeń, 40 μl odczynnika zawierającego lucyferynę i lucyferazę. Inkubowano 10 minut w temperaturze pokojowej. Zmierzono luminescencję z użyciem luminometru LB Centro XS3 (Berthold Technologies, Niemcy). Następnie dodano 10μl standardu ATP, ponownie zmierzono luminescencję w celu zbadania wpływu czynników obecnych w próbce. Ilość uwolnionego ATP jest proporcjonalna do ilości żywych komórek C. albicans. Odczynniki stosowane w oznaczeniu pochodziły z firmy Bio-Orbit (LKB Wallac, Turku, Finlandia) [13, 19]. Ocena żywotności komórek Candida albicans metodą mikroskopową z użyciem oranżu akrydyny Przygotowanie komórek C. albicans do analizy przebiegało według wyżej opisanej procedury, obejmującej przygotowanie zawiesin wyjściowych i szeregu rozcieńczeń flukonazolu o odpowiednich stężeniach oraz 24-godzinną inkubację w temperaturze 37 C. Po upływie czasu inkubacji pobrano po 1 ml zawiesin badanych, które następnie odwirowano a nadsącz odrzucono. Do osadu komórek dodano 50 µl roztworu oranżu akrydyny (1:100000) i poddano 15-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Następnie po dodaniu 100 µl buforu HBSS, próbki poddano wytrząsaniu i analizie mikroskopowej z użyciem mikroskopu fluorescencyjnego IX- 51 (Olympus, Japonia) przyjmując komórki fluoryzujące na zielono za żywe, a fluoryzujące na czerwono za martwe. Dla prób badanych, traktowanych flukonazolem zliczano liczbę komórek żywych na 100 komórek w polu widzenia, celem obliczenia żywotności komórek C. albicans, wyrażonej w procencie kontroli [10, 12]. Analiza statystyczna W opracowaniu statystycznym wyników korzystano z programu Statictica 9.0. W analizie zależności pomiędzy danymi zastosowano test t-studenta dla prób zależnych. Wyniki wyrażono w procencie wartości średnich ± odchylenie standardowe. Liczebność prób dla zastosowanych w badaniach testów zawierała się w przedziale od 2 do 4. Za różnice statystycznie istotne pomiędzy poszczególnymi próbami badanymi a kontrolą uznawano wartości p<0,

4 Porównanie metod przydatnych w ocenie wpływu flukonazolu na żywotność komórek Candida albicans Wyniki Czystość badanego szczepu Na podstawie przeprowadzonej procedury stwierdzono czystość użytego w badaniu szczepu grzyba i przynależność do C. albicans. Barwienie metodą Grama i obserwacja mikroskopowa wykazały typowy dla tych drożdżaków wygląd komórek. Hodowla na odpowiednim podłożu chromogennym wykazała typowy wzrost kolonii, charakterystyczny dla badanego szczepu. Ponadto identyfikacja biochemiczna grzyba, przeprowadzona przy użyciu testu API 20C AUX, jednoznacznie potwierdziła przynależność badanego szczepu do C. albicans. Metoda posiewu ilościowego Analiza wyników posiewu ilościowego wykazała wpływ flukonazolu w zastosowanych stężeniach na żywotność komórek badanych, wyrażoną w procencie kontroli. Dla hodowli badanych C. albicans o gęstości 0,5 w skali McFarlanda, poddanych działaniu wybranych stężeń flukonazolu, zaobserwowano spadek żywotności komórek badanych w porównaniu do hodowli kontrolnej (100±15,7%) (p<0,05), za wyjątkiem najniższego stężenia (ryc. 1). Po wprowadzeniu flukonazolu w stężeniach 1,0 i 10 μg/ml żywotność C. albicans wynosiła odpowiednio 44,4±2,2% (p=0,0385) oraz 11,1±15,7% (p=0,0299). Dla najniższego stężenia flukonazolu nie odnotowano różnic statystycznie istotnych (NS). W przypadku hodowli badanych C. albicans o gęstości 1,0 w skali McFarlanda poddanych działaniu flukonazolu, zaobserwowano spadek żywotności komórek drożdżaka w porównaniu do hodowli kontrolnej (100±7,4%) na poziomie istotności p<0,05 dla 0,1 i 10 μg/ml, oraz p<0,01 dla stężenia 1,0 μg/ml. Po wprowadzeniu flukonazolu w stężeniu 0,1 μg/ml żywotność komórek drożdżaka wynosiła 52,6±1,1% (p=0,0124), natomiast dla stężeń wyższych wynosiła 42,1±1,1 (p=0,0083) oraz 36,8±7,4% (p=0,0136) odpowiednio dla 1,0 i 10 μg/ml. Metoda spektrofotometryczna Przeprowadzona analiza wartości zmętnienia prób badanych i kontrolnych mierzona przez pomiar absorbancji metodą spektrofotometryczną (λ=550 nm) wykazała istotny wpływ flukonazolu na żywotność komórek C. albicans, wyrażoną w procencie kontroli. W przypadku zawiesiny o gęstości 0,5 w skali McFarlanda zaobserwowano istotny spadek żywotności prób badanych poddanych działaniu flukonazolu w stężeniu 1,0 i 10 μg/ml (p<0,01). Po wprowadzeniu flukonazolu w tych stężeniach żywotność komórek spadła odpowiednio do poziomu 75±1,25% (p=0,0028) oraz 62,5±10,2% (p=0,002) w porównaniu do wartości kontrolnej (100±10,2%). Dla najniższego stężenia flukonazolu nie zaobserwowano różnic statystycznie istotnych (NS) (ryc. 2) Rycina 2. komórek Candida albicans, oceniony pomiarem zmętnienia przez odczyt absorbancji światła przechodzącego metodą spektrofotometryczną, przy długości fali λ=550 nm. Wyniki uzyskane z prób badanych porównano do hodowli kontrolnej, nie zawierającej badanego związku. Na wykresie przedstawiono wartości średnie ± odchylenie standardowe dla n=4, wyrażone w procencie kontroli. Różnice statystycznie istotne zaznaczono gwiazdkami: * p<0,05; ** p<0,01. Po wprowadzeniu do hodowli grzyba o gęstości 1,0 w skali McFarlanda flukonazolu w stężeniach 1 i 10 μg/ml odnotowano spadek żywotności komórek C. albicans w porównaniu do kontroli (100±22,5%) odpowiednio do poziomu 57,5±13% (p<0,05) oraz 45±6,9% (p<0,01). Dla najniższego stężenia flukonazolu nie zaobserwowano różnic statystycznie istotnych (NS) (ryc. 2). Rycina 1. komórek Candida albicans, oceniony metodą posiewu ilościowego na stałym podłożu Sabourauda. Ocenę ilościową komórek badanych (rozcieńczenia 10-3 ), wyrażoną przez jednostki tworzące kolonie (CFU), przeprowadzono w porównaniu do hodowli kontrolnej nie zawierającej badanego związku. Na wykresie przedstawiono wartości średnie ± odchylenie standardowe dla n=2, wyrażone w procencie kontroli. Różnice statystycznie istotne próby badanej względem kontroli zaznaczono gwiazdkami: * p<0,05; ** p<0,01. Test MTT Przeprowadzona analiza wartości stężenia formazanu uwolnionego z komórek poddanych działaniu flukonazolu wykazała wpływ badanych stężeń związku na ten parametr w porównaniu do kontroli. Otrzymane dane posłużyły do oceny żywotności komórek C. albicans wyrażonej w procencie kontroli. Po wprowadzeniu do hodowli badanej (gęstość 0,5 w skali McFarlanda) flukonazolu w stężeniu 0,1 i 1,0 μg/ml zaobserwowano istotny spadek żywotności komórek drożdżaka w porównaniu do kontroli (100±2,9%) odpowiednio do poziomu 93,9±2% (p=0,014) oraz 80,8±5,1% (p=0,0006). Dla najwyższego stężenia także wykazano istotny spadek 172

5 D. Trzaska, M. Kocot i Z.P. Czuba żywotności do wartości 68±2,1% (p<0,001) (ryc. 3). Dla hodowli badanej o gęstości 1,0 według skali McFarlanda poddanych działaniu flukonazolu w dwóch najwyższych stężeniach również zaobserwowano istotny spadek żywotności komórek badanych w porównaniu do wartości kontrolnej (100±1,7). Po wprowadzeniu flukonazolu w stężeniu 1,0 i 10 μg/ml żywotność komórek wynosiła kolejno 81,2±0,8% (p<0,001) oraz 76±2,4% (p<0,001). Po wprowadzeniu flukonazolu w stężeniu 0,1 μg/ml do hodowli badanej nie zaobserwowano różnic statystycznie istotnych w żywotności komórek C. albicans w porównaniu do kontroli (NS) (ryc. 3). Rycina 4. komórek Candida albicans, oceniony metodą mikroskopową z użyciem barwnika fluorescencyjnego. Zliczano liczbę żywych komórek (fluoryzujących na zielono) z prób badanych, na 100 komórek w polu widzenia. Na wykresie przedstawiono wartości średnie ± odchylenie standardowe dla n=3, wyrażone w procencie kontroli. Różnice istotne statystycznie zaznaczono gwiazdkami: ** p<0,01; *** p<0,001. Rycina 3. komórek Candida albicans, oceniony ilościowym pomiarem stężenia formazanu uwolnionego z komórek żywych metodą spektrofotometryczną przy długości fali λ=550 nm. Wyniki uzyskane z prób badanych porównano do hodowli kontrolnej, nie zawierającej badanego związku. Na wykresie przedstawiono wartości średnie ± odchylenie standardowe dla n=4, wyrażone w procencie kontroli. Różnice statystycznie istotne zaznaczono gwiazdkami: * p<0,05; *** p<0,001. Metoda mikroskopowa z barwieniem oranżem akrydyny Analiza danych z ilości komórek żywych C. albicans (fluoryzujących na zielono) zliczanych na 100 komórek w polu widzenia metodą mikroskopową, posłużyły do obliczenia żywotności komórek drożdżaka poddanych działaniu flukonazolu. Wykazano wpływ flukonazolu na żywotność komórek badanych na poziomie istotności (p<0,01 oraz p<0,001), wyrażoną w procencie kontroli. Dla hodowli grzyba o gęstości 0,5 w skali McFarlanda zaobserwowano spadek żywotności komórek poddanych działaniu flukonazolu we wszystkich stężeniach tj. 0,1; 1,0 i 10 μg/ml (p<0,001), w porównaniu do kontroli (100±0,1%). Dane widoczne na wykresie (ryc. 4). W przypadku hodowli badanej C. albicans o gęstości 1,0 w skali McFarlanda żywotność komórek grzyba istotnie spadła w porównaniu z hodowlą kontrolną (100±0,1%). Po wprowadzeniu flukonazolu we wzrastających stężeniach żywotność komórek zmniejszyła się istotnie się odpowiednio do wartości 97,3±0,6% (p=0,0014); 92,3±0,6% (p<0,001) oraz 88,7±0,6% (p<0,001) (ryc. 4). Oznaczanie ATP metodą chemiluminescencji Przeprowadzona analiza wyników pozwoliła na obliczenie ilości ATP uwolnionego z komórek C. albicans poddanych działaniu flukonazolu i porównanie ich z wartościami uzyskanymi dla próby kontrolnej. Otrzymane dane posłużyły do obliczenia żywotności komórek wyrażonej w procencie kontroli. Zarówno dla hodowli o gęstości 0,5 jak i dla 1,0 w skali McFarlanda odnotowano istotny spadek żywotności komórek badanych (p<0,05 oraz p<0,01). Po wprowadzeniu do hodowli grzyba o gęstości 0,5 w skali McFarlanda flukonazolu w stężeniu 1, i 10 μg/ml żywotność komórek C. albicans spadła z poziomu 100±1,19% w kontroli do wartości, odpowiednio 93,9±0,5% (p=0,0226) oraz 92,2±1,2% (p=0,0235). Dla najniższego stężenia związku nie zaobserwowano różnic statystycznie istotnych w porównaniu do kontroli (NS) (ryc. 5). Dla hodowli grzyba o gęstości 1,0 w skali McFarlanda odnotowano zmniejszenie żywotności komórek w próbach badanych poddanych działaniu wzrastających stężeń flukonazolu, w porównaniu do kontroli (100±0,4%) i uzyskano następujące wartości: 91,4±0,5% (p<0,01) dla Rycina 5. komórek Candida albicans, oceniony przez pomiar uwolnionego z komórek żywych ATP (μmol/l) metodą chemiluminescencji. Wyniki uzyskane z prób badanych porównano do hodowli kontrolnej, nie zawierającej badanego związku. Na wykresie przedstawiono wartości średnie ± odchylenie standardowe dla n=3, wyrażone w procencie kontroli. Różnice statystycznie istotne zaznaczono gwiazdkami: * p<0,05; ** p<0,

6 Porównanie metod przydatnych w ocenie wpływu flukonazolu na żywotność komórek Candida albicans stężenia 1 μg/ml oraz 89,8±0,6% (p<0,01) dla stężenia 10 μg/ml. Dla najniższego stężenia związku nie zaobserwowano różnic statystycznie istotnych w porównaniu do kontroli (NS) (ryc. 4). Dyskusja W ostatnich latach nastąpił znaczny wzrost zakażeń grzybiczych wywołanych przez C. albicans. Podstawowa diagnostyka mykologiczna, obejmująca obserwację mikroskopową, hodowlę na podłożu agarowym oraz testy biochemiczne, pozwala głownie na analizę jakościową i wykrycie czynnika etiologicznego zakażeń [1, 5]. Ocena żywotności komórek C. albicans nie jest badaniem rutynowo wykorzystywanym w mykologii. Dlatego też celem niniejszej pracy było określenie przydatności metod pozwalających na ocenę wpływu związku przeciwgrzybicznego - flukonazolu w różnych stężeniach na żywotność komórek Candida albicans. Flukonazol jest przedstawicielem azoli-syntetycznych leków przeciwgrzybicznych (związek grzybostatyczny), którego mechanizm działania związany jest z hamowaniem zależnej od cytochromu P α-demetylazy lanosterolu w biosyntezie hormonów steroidowych grzybów. Prowadzi to do zmniejszenia ilości ergosterolu najważniejszego sterolu w błonie komórkowej grzybów oraz do kumulacji lanosterolu w błonie komórkowej grzyba, zaburzeń w jej strukturze i funkcjonowaniu, a w efekcie zniszczenia komórki [2, 3, 4, 14]. W badaniach wykorzystano metodę posiewu ilościowego na podłożu agarowym, metodę spektrofotometryczną, kolorymetryczny test MTT, chemiluminescencyjny pomiar stężenia ATP oraz metodę mikroskopową z udziałem barwnika fluorescencyjnego. Analiza statystyczna otrzymanych wyników wykazała przydatność zastosowanych w pracy metod do oceny żywotności komórek C. albicans poddanych działaniu wybranych stężeń flukonazolu (0,1; 1,0 i 10 μg/ml). Metoda posiewu ilościowego, spektrofotometrii, chemiluminescencji wykazała negatywny wpływ flukonazolu w stężeniach 1,0 i 10 μg/ ml na żywotność komórek badanych o gęstości 0,5 w skali McFarlanda. Metody te natomiast nie okazały się przydatne do oceny żywotności komórek drożdżaka poddanych działaniu flukonazolu w najniższym zastosowanym stężeniu (0,1 μg/ml). W przeciwieństwie do powyższych metod, analiza mikroskopowa z użyciem barwnika oranżu akrydyny, umożliwiła określenie wpływu flukonazolu na żywotność komórek C. albicans w najniższym zastosowanym stężeniu, zarówno w odniesieniu do gęstości komórek badanych 0,5 jak i 1,0 w skali McFarlanda. W teście mikroskopowym wykorzystuje się możliwość przechodzenia oranżu akrydyny przez błonę komórkową, dzięki czemu barwnik ten zabarwia całą komórkę, umożliwiając identyfikację komórek żywych. Po przeprowadzonych badaniach najbardziej czułą i dokładną metodą okazał się test MTT. Analiza ilości uwolnionego formazanu pozwoliła na ocenę wpływu flukonazolu we wszystkich zastosowanych stężeniach na żywotność komórek C. albicans. Test MTT jest ilościowym testem toksyczności, którego podstawą jest przekształcenie soli tetrazoliowych (MTT) o zabarwieniu żółtym do fioletowo zabarwionego, nierozpuszczalnego w wodzie formazanu. Proces ten zachodzi w mitochondriach żywych komórek a redukcja MTT do formazanu następuje w sposób proporcjonalny do ich ilości. Jeżeli więc komórki zostały wcześniej uszkodzone lub zniszczone przez związek przeciwgrzybiczny to reakcja ta jest mniej intensywna lub nie zachodzi w ogóle [6, 8, 9]. Analiza statystyczna wyników uzyskanych wybranymi metodami dla hodowli badanych C. albicans o gęstości 1,0 w skali McFarlanda pozwoliła na podobne obserwacje jak w przypadku zawiesiny komórek badanych o niższej gęstości w sali McFarlanda. Piśmiennictwo 1. Biliński P, Seweryńska I, Warzocha K. Diagnostyka i leczenie układowych zakażeń grzybiczych w onhohematologii. Onkol Prak Klin 2008; 4: Bille J. Mechanisms and clinical significance of antifungal resistance. Int J Antimicrob Agents 2000; 16: Carrillo-Munoz AJ, Giusiano G, Ezkurra PA i wsp. Antifungal agents: Mode of action in yeast cells. Rev Esp Quimioterap 2006; 19: Charlier C, Hart E, Lefort A i wsp. Fluconazole for the management of invasive candidiasis: where do we stand after 15 years?. J Antomicrob Chemother 2006; 57: Chybicka A. Kandydoza jako problem w onkologii i hematologii dziecięcej. Zakażenia 2004; 4: Derengowski LS, De-Souza-Silva C, Braz SV i wsp. Antimicrobial effect of farnesol, a Candida albicans quorum sensing molecule, on Paracoccidioides brasiliensis growth and morphogenesis. Ann Clin Microbiol Antimicrob 2009; 8: Drożdż I, Makarewicz M. Zakażenia mikrobiologiczne. Nowoczesne metody ich wykrywania w przemyśle spożywczym. Laboratorium Przegląd Ogólnopolski : Freimoser FM, Jakob CA, Aebi M i wsp. The MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide] Assay Is a Fast and Reliable Methods for Colorimetric Determination of Fungal Cell Densities. Appl Environ Microbiol 1999; 65: Gregoraszczuk EŁ. Hodowla in vitro w toksykologii Hodowla tkanek w badaniach toksykologicznych. Hodowla komórek i tkanek, pod red. S. Stokłosowej, Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa 2004; Gregoraszczuk EŁ. Hodowla in vitro w toksykologii Hodowla tkanek w badaniach toksykologicznych. Hodowla komórek i tkanek, pod red. S. Stokłosowej, Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa 2004; Hasse-Cieślińska M. Flukonazol w leczeniu powierzchownych zakażeń grzybiczych. Zakażenia 2008; 6: Hjertstedt J, Hahn BL, Kos WL i wsp. Comparison of fungal viability assays using Candida albicans yeast cells undergoing prolonged incubation in the absence of nutrients. Mycoses 1998; 41: Koshlukova SE, Araujo MWB, Baev D i wsp. Released ATP is an Extracellular Cytotoxic Mediator in Salivary Histatin 5-Induced Killing of Candida albicans. Infect Immun 2000; 68: Lupetti A, Danesi R, Campa M i wsp. Molecular basis of resistance to azole antifungals. Trends Mol Med 2002; 8: McCullough MJ, Ross BC, Reade PC. Candida albicans: a review of its history, taxonomy, epidemiology, virulence attributes, and methods of strain differentation. Int J Oral Maxillofac Surg 1996; 25: Reboli AC, Rotstein C, Pappas PG i wsp. Anidulafungina w po- 174

7 D. Trzaska, M. Kocot i Z.P. Czuba równaniu z flukonazolem w leczeniu inwazyjnej kandydozy. N Engl J Med 2007; 356: Tomczak H. Zakażenia grzybicze w laryngologii problemy związane z diagnostyką i leczeniem. Post chir głowy i szyi 2008; 2: Wacińska-Drabińska M, Gajdzik-Plutecka D, Olczak-Kowalczyk D. Grzybica jamy ustnej, diagnostyka i leczenie. Nowa stom 2009; 3: Yamashoji S, Asakawa A, Kawasaki S i wsp. Chemiluminescent assay for detection of viable microorganisms. Anal Biochem 2004; 15: Adres do korespondencji: Katedra i Zakład Mikrobiologii i Immunologii Śląskiego Uniwersytetu Medycznego w Katowicach Zabrze, ul. Henryka Jordana 19 dominika.trzaska-saramak@wp.pl tel: Zaakceptowano do publikacji:

XXV. Grzyby cz I. Ćwiczenie 1. Wykonanie i obserwacja preparatów mikroskopowych. a. Candida albicans preparat z hodowli barwiony metoda Grama

XXV. Grzyby cz I. Ćwiczenie 1. Wykonanie i obserwacja preparatów mikroskopowych. a. Candida albicans preparat z hodowli barwiony metoda Grama XXV. Grzyby cz I. Ćwiczenie 1. Wykonanie i obserwacja preparatów mikroskopowych a. Candida albicans preparat z hodowli barwiony metoda Grama Opis preparatu: b. Saccharomyces cerevisiae preparat z hodowli

Bardziej szczegółowo

ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN

ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN CZĘŚĆ TEORETYCZNA Mechanizmy promujące wzrost rośli (PGP) Metody badań PGP CZĘŚĆ PRAKTYCZNA 1. Mechanizmy promujące wzrost roślin. Odczyt. a) Wytwarzanie

Bardziej szczegółowo

Temat ćwiczenia: Techniki stosowane w badaniach toksyczności in vitro

Temat ćwiczenia: Techniki stosowane w badaniach toksyczności in vitro Temat ćwiczenia: Techniki stosowane w badaniach toksyczności in vitro Miarą aktywności cytotoksycznej badanej substancji jest określenie stężenia hamującego, IC 50 (ang. inhibitory concentration), dla

Bardziej szczegółowo

woda do 1000 ml ph=6,9-7,1. Po sterylizacji dodać nystatynę (końcowe stężenie ok. 50 μg/ml). Agar z wyciągiem glebowym i ekstraktem drożdżowym (YS)

woda do 1000 ml ph=6,9-7,1. Po sterylizacji dodać nystatynę (końcowe stężenie ok. 50 μg/ml). Agar z wyciągiem glebowym i ekstraktem drożdżowym (YS) Ćwiczenie 1, 2, 3, 4 Skrining ze środowiska naturalnego: selekcja promieniowców zdolnych do produkcji antybiotyków. Testowanie zdolności do syntezy antybiotyków przez wyselekcjonowane szczepy promieniowców

Bardziej szczegółowo

Interpretacja wyników analiz ilości i obecności drobnoustrojów zgodnie z zasadami badań mikrobiologicznych żywności i pasz?

Interpretacja wyników analiz ilości i obecności drobnoustrojów zgodnie z zasadami badań mikrobiologicznych żywności i pasz? Wydział Biotechnologii i Nauk o Żywności Seminarium STC 2018 Interpretacja wyników analiz ilości i obecności drobnoustrojów zgodnie z zasadami badań mikrobiologicznych żywności i pasz? Dr inż. Agnieszka

Bardziej szczegółowo

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20006/11859/09

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20006/11859/09 SPRAWOZDANIE MOŻE BYĆ POWIELANE TYLKO W CAŁOŚCI. INNA FORMA KOPIOWANIA WYMAGA PISEMNEJ ZGODY LABORATORIUM. SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20006/11859/09 BADANIA WŁASNOŚCI PRZECIWDROBNOUSTROJOWYCH

Bardziej szczegółowo

Oznaczanie mocznika w płynach ustrojowych metodą hydrolizy enzymatycznej

Oznaczanie mocznika w płynach ustrojowych metodą hydrolizy enzymatycznej Oznaczanie mocznika w płynach ustrojowych metodą hydrolizy enzymatycznej Wprowadzenie: Większość lądowych organizmów kręgowych część jonów amonowych NH + 4, produktu rozpadu białek, wykorzystuje w biosyntezie

Bardziej szczegółowo

SKUTECZNOŚĆ IZOLACJI JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI?

SKUTECZNOŚĆ IZOLACJI JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? SKUTECZNOŚĆ IZOLACJI Wydajność izolacji- ilość otrzymanego kwasu nukleinowego Efektywność izolacji- jakość otrzymanego kwasu nukleinowego w stosunku do ilości Powtarzalność izolacji- zoptymalizowanie procedury

Bardziej szczegółowo

JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI?

JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? Podstawowe miary masy i objętości stosowane przy oznaczaniu ilości kwasów nukleinowych : 1g (1) 1l (1) 1mg (1g x 10-3 ) 1ml (1l x 10-3 ) 1μg (1g x 10-6 ) 1μl (1l x 10-6 ) 1ng (1g x 10-9 ) 1pg (1g x 10-12

Bardziej szczegółowo

HODOWLA PERIODYCZNA DROBNOUSTROJÓW

HODOWLA PERIODYCZNA DROBNOUSTROJÓW Cel ćwiczenia: Celem ćwiczenia jest porównanie zdolności rozkładu fenolu lub wybranej jego pochodnej przez szczepy Stenotrophomonas maltophilia KB2 i Pseudomonas sp. CF600 w trakcie prowadzenia hodowli

Bardziej szczegółowo

Techniki immunoenzymatycznego oznaczania poziomu hormonów (EIA)

Techniki immunoenzymatycznego oznaczania poziomu hormonów (EIA) Techniki immunoenzymatycznego oznaczania poziomu hormonów (EIA) Wstęp: Test ELISA (ang. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), czyli test immunoenzymatyczny (ang. Enzyme Immunoassay - EIA) jest obecnie szeroko

Bardziej szczegółowo

Doktorantka: Żaneta Lewandowska

Doktorantka: Żaneta Lewandowska Doktorantka: Żaneta Lewandowska Główny opiekun naukowy: Dr hab. Piotr Piszczek, prof. UMK Katedra Chemii Nieorganicznej i Koordynacyjnej, Wydział Chemii Dodatkowy opiekun naukowy: Prof. dr hab. Wiesław

Bardziej szczegółowo

II. Badanie lekowrażliwości drobnoustrojów ćwiczenia praktyczne. Ćwiczenie 1. Oznaczanie lekowrażliwości metodą dyfuzyjno-krążkową

II. Badanie lekowrażliwości drobnoustrojów ćwiczenia praktyczne. Ćwiczenie 1. Oznaczanie lekowrażliwości metodą dyfuzyjno-krążkową II. Badanie lekowrażliwości drobnoustrojów ćwiczenia praktyczne Ćwiczenie 1. Oznaczanie lekowrażliwości metodą dyfuzyjno-krążkową Zasada metody: Krążki bibułowe nasycone odpowiednimi ilościami antybiotyków

Bardziej szczegółowo

Testy aktywności przeciwdrobnoustrojowej na przykładzie metody dyfuzyjnej oraz wyznaczania wartości minimalnego stężenia hamującego wzrost.

Testy aktywności przeciwdrobnoustrojowej na przykładzie metody dyfuzyjnej oraz wyznaczania wartości minimalnego stężenia hamującego wzrost. Testy aktywności przeciwdrobnoustrojowej na przykładzie metody dyfuzyjnej oraz wyznaczania wartości minimalnego stężenia hamującego wzrost. Opracowanie: dr inż. Roland Wakieć Wprowadzenie. Najważniejszym

Bardziej szczegółowo

EKSTRAHOWANIE KWASÓW NUKLEINOWYCH JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI?

EKSTRAHOWANIE KWASÓW NUKLEINOWYCH JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? JAK ZMIERZYĆ ILOŚĆ KWASÓW NUKLEINOWYCH PO IZOLACJI? EKSTRAHOWANIE KWASÓW NUKLEINOWYCH Wytrącanie etanolem Rozpuszczenie kwasu nukleinowego w fazie wodnej (met. fenol/chloroform) Wiązanie ze złożem krzemionkowym za pomocą substancji chaotropowych: jodek

Bardziej szczegółowo

Laboratorium 8. Badanie stresu oksydacyjnego jako efektu działania czynników toksycznych

Laboratorium 8. Badanie stresu oksydacyjnego jako efektu działania czynników toksycznych Laboratorium 8 Badanie stresu oksydacyjnego jako efektu działania czynników toksycznych Literatura zalecana: Jakubowska A., Ocena toksyczności wybranych cieczy jonowych. Rozprawa doktorska, str. 28 31.

Bardziej szczegółowo

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Mikrobiologia na kierunku chemia kosmetyczna

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Mikrobiologia na kierunku chemia kosmetyczna 1 Zakład Mikrobiologii UJK Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Mikrobiologia na kierunku chemia kosmetyczna 2 Zakład Mikrobiologii UJK Zakres materiału (zagadnienia)

Bardziej szczegółowo

Techniki oznaczania aktywności cytotoksycznej związków chemioterapeutycznych in vitro

Techniki oznaczania aktywności cytotoksycznej związków chemioterapeutycznych in vitro Fizjologiczne techniki badań Techniki oznaczania aktywności cytotoksycznej związków chemioterapeutycznych in vitro Wstęp: Oznaczanie cytotoksyczności związków chemioterapeutycznych wobec komórek w hodowlach

Bardziej szczegółowo

KREW: 1. Oznaczenie stężenia Hb. Metoda cyjanmethemoglobinowa: Zasada metody:

KREW: 1. Oznaczenie stężenia Hb. Metoda cyjanmethemoglobinowa: Zasada metody: KREW: 1. Oznaczenie stężenia Hb Metoda cyjanmethemoglobinowa: Hemoglobina i niektóre jej pochodne są utleniane przez K3 [Fe(CN)6]do methemoglobiny, a następnie przekształcane pod wpływem KCN w trwały związek

Bardziej szczegółowo

POLITECHNIKA ŁÓDZKA INSTRUKCJA Z LABORATORIUM W ZAKŁADZIE BIOFIZYKI. Ćwiczenie 3 ANALIZA TRANSPORTU SUBSTANCJI NISKOCZĄSTECZKOWYCH PRZEZ

POLITECHNIKA ŁÓDZKA INSTRUKCJA Z LABORATORIUM W ZAKŁADZIE BIOFIZYKI. Ćwiczenie 3 ANALIZA TRANSPORTU SUBSTANCJI NISKOCZĄSTECZKOWYCH PRZEZ POLITECHNIKA ŁÓDZKA INSTRUKCJA Z LABORATORIUM W ZAKŁADZIE BIOFIZYKI Ćwiczenie 3 ANALIZA TRANSPORTU SUBSTANCJI NISKOCZĄSTECZKOWYCH PRZEZ BŁONĘ KOMÓRKOWĄ I. WSTĘP TEORETYCZNY Każda komórka, zarówno roślinna,

Bardziej szczegółowo

X. Diagnostyka mikrobiologiczna bakterii chorobotwórczych z rodzaju: Corynebacterium, Mycobacterium, Borrelia, Treponema, Neisseria

X. Diagnostyka mikrobiologiczna bakterii chorobotwórczych z rodzaju: Corynebacterium, Mycobacterium, Borrelia, Treponema, Neisseria X. Diagnostyka mikrobiologiczna bakterii chorobotwórczych z rodzaju: Corynebacterium, Mycobacterium, Borrelia, Treponema, Neisseria Maczugowce (rodzaj Corynebacterium) Ćwiczenie 1. Wykonanie preparatu

Bardziej szczegółowo

data ĆWICZENIE 12 BIOCHEMIA MOCZU Doświadczenie 1

data ĆWICZENIE 12 BIOCHEMIA MOCZU Doświadczenie 1 Imię i nazwisko Uzyskane punkty Nr albumu data /3 podpis asystenta ĆWICZENIE 12 BIOCHEMIA MOCZU Doświadczenie 1 Cel: Wyznaczanie klirensu endogennej kreatyniny. Miarą zdolności nerek do usuwania i wydalania

Bardziej szczegółowo

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna.

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna. Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna. wersja 0916 6 x 20 transformacji Nr kat. 4010-120 Zestaw zawiera

Bardziej szczegółowo

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20005/11858/09

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20005/11858/09 SPRAWOZDANIE MOŻE BYĆ POWIELANE TYLKO W CAŁOŚCI. INNA FORMA KOPIOWANIA WYMAGA PISEMNEJ ZGODY LABORATORIUM. SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20005/11858/09 BADANIA WŁASNOŚCI PRZECIWDROBNOUSTROJOWYCH

Bardziej szczegółowo

Laboratorium 5. Wpływ temperatury na aktywność enzymów. Inaktywacja termiczna

Laboratorium 5. Wpływ temperatury na aktywność enzymów. Inaktywacja termiczna Laboratorium 5 Wpływ temperatury na aktywność enzymów. Inaktywacja termiczna Prowadzący: dr inż. Karolina Labus 1. CZĘŚĆ TEORETYCZNA Szybkość reakcji enzymatycznej zależy przede wszystkim od stężenia substratu

Bardziej szczegółowo

II. OZNACZANIE LICZBY BAKTERII Z GRUPY COLI I BAKTERII Z GRUPY COLI TYP FEKALNY METODĄ PŁYTKOWĄ W ŻYWNOŚCI I INNYCH PRODUKTACH wg PN-ISO 4832: 2007

II. OZNACZANIE LICZBY BAKTERII Z GRUPY COLI I BAKTERII Z GRUPY COLI TYP FEKALNY METODĄ PŁYTKOWĄ W ŻYWNOŚCI I INNYCH PRODUKTACH wg PN-ISO 4832: 2007 Katedra i Zakład Mikrobiologii i Wirusologii Wydział Farmaceutyczny z Oddziałem Medycyny Laboratoryjnej Mikrobiologia ogólna Biotechnologia medyczna II rok / I o Temat: Żywność jako środowisko życia mikroorganizmów.

Bardziej szczegółowo

Laboratorium Podstaw Biofizyki

Laboratorium Podstaw Biofizyki CEL ĆWICZENIA Celem ćwiczenia jest zbadanie procesu adsorpcji barwnika z roztworu oraz wyznaczenie równania izotermy Freundlicha. ZAKRES WYMAGANYCH WIADOMOŚCI I UMIEJĘTNOŚCI: widmo absorpcyjne, prawo Lamberta-Beera,

Bardziej szczegółowo

liczba godzin 2 MIKROBIOLOGIA KOSMETOLOGICZNA dla studentów II roku, studiów I st. kierunku KOSMETOLOGIA półpłynne stałe

liczba godzin 2 MIKROBIOLOGIA KOSMETOLOGICZNA dla studentów II roku, studiów I st. kierunku KOSMETOLOGIA półpłynne stałe MIKROBIOLOGIA KOSMETOLOGICZNA dla studentów II roku, studiów I st. kierunku KOSMETOLOGIA Ćwiczenie 6 i 7 6 Fizjologia drobnoustrojów Wymagania metaboliczne bakterii. Rodzaje podłóż mikrobiologicznych.

Bardziej szczegółowo

Raport z badania Działanie wirusobójcze środka dezynfekującego wobec Feline calicivirus. 25 października 2006

Raport z badania Działanie wirusobójcze środka dezynfekującego wobec Feline calicivirus. 25 października 2006 Raport z badania Działanie wirusobójcze środka dezynfekującego wobec Feline calicivirus 25 października 2006 Dr Tobias J. Tuthill Wydział Nauk Biologicznych Uniwersytet Leeds Leeds LS2 9JT www.fbs.leeds.ac.uk

Bardziej szczegółowo

ĆWICZENIA Z MECHANIZMÓW DZIAŁANIA WYBRANYCH GRUP LEKÓW

ĆWICZENIA Z MECHANIZMÓW DZIAŁANIA WYBRANYCH GRUP LEKÓW UNIWERSYTET MARII CURIE-SKŁODOWSKIEJ WYDZIAŁ BIOLOGII I BIOTECHNOLOGII ZAKŁAD BIOLOGII MOLEKULARNEJ ĆWICZENIA Z MECHANIZMÓW DZIAŁANIA WYBRANYCH GRUP LEKÓW dla studentów I roku II 0 biotechnologii medycznej

Bardziej szczegółowo

RAPORT Z BADAŃ 01369/2015/D/AGST. Blirt S.A Gdańsk, ul. Trzy Lipy 3/1.38. Dział DNA-Gdańsk. Nr zlecenia

RAPORT Z BADAŃ 01369/2015/D/AGST. Blirt S.A Gdańsk, ul. Trzy Lipy 3/1.38. Dział DNA-Gdańsk. Nr zlecenia Strona1/7 Blirt S.A. 80-172 Gdańsk, ul. Trzy Lipy 3/1.38 RAPORT Z BADAŃ Dział DNA-Gdańsk Nr zlecenia 01369/2015/D/AGST NAZWA I ADRES KLIENTA Zenon Koszorz Ground-Therm Sp z o.o. Ul. Stepowa 30 44-105 Gliwice

Bardziej szczegółowo

Diagnostyka grzybów. 2) Preparat barwiony nigrozyną lub tuszem chińskim (przy podejrzeniu kryptokokozy) uwidocznienie otoczek Cryptococcus neoformans

Diagnostyka grzybów. 2) Preparat barwiony nigrozyną lub tuszem chińskim (przy podejrzeniu kryptokokozy) uwidocznienie otoczek Cryptococcus neoformans I Grzyby drożdżopodobne (drożdże) 1) Ocena morfologii kolonii na podłożu izolacyjnym (zwłaszcza konsystencja, zabarwienie): Candida: białe, kremowe Cryptococcus: białe, kremowe, śluzowate Uwaga! Gatunki

Bardziej szczegółowo

ODPOWIEDZI NA PYTANIA

ODPOWIEDZI NA PYTANIA Kraków, 11 września 2015r. wg rozdzielnika NR POSTĘPOWANIA: DZP.272-18/15 Przetarg nieograniczony pn. " Dostawa odczynników" ODPOWIEDZI NA PYTANIA działając na podstawie art. 38 ustawy z dn. 29 stycznia

Bardziej szczegółowo

ROCZN. PZH, 1998, 49, 73-86

ROCZN. PZH, 1998, 49, 73-86 ROCZN. PZH, 1998, 49, 73-86 74 wane narzędzia i sprzęt medyczny. Przeniesienie grzybów Candida m oże nastąpić przez ręce personelu, bieliznę, pościel, sprzęt do pielęgnacji i leczenia. C elem pracy było

Bardziej szczegółowo

Oznaczanie aktywności cytotoksycznej chemoterapeutyków wobec komórek nowotworowych

Oznaczanie aktywności cytotoksycznej chemoterapeutyków wobec komórek nowotworowych Wydział Chemiczny Politechniki Gdańskiej Katedra Technologii Leków i Biochemii Kultury tkankowe i komórkowe roślin i zwierząt Oznaczanie aktywności cytotoksycznej chemoterapeutyków wobec komórek nowotworowych

Bardziej szczegółowo

Program ćwiczeń z mikrobiologii dla studentów III roku Oddziału Analityki Medycznej, rok akademicki 2014/2015 SEMESTR LETNI

Program ćwiczeń z mikrobiologii dla studentów III roku Oddziału Analityki Medycznej, rok akademicki 2014/2015 SEMESTR LETNI Program ćwiczeń z mikrobiologii dla studentów III roku Oddziału Analityki Medycznej, rok akademicki 2014/2015 SEMESTR LETNI Wykłady (16 godz.): Środa 12.15-13.45 Ćwiczenia (60 godz.) środa: 9.45-12.00

Bardziej szczegółowo

Instrukcja do ćwiczeń laboratoryjnych

Instrukcja do ćwiczeń laboratoryjnych UNIWERSYTET GDAŃSKI WYDZIAŁ CHEMII Pracownia studencka Katedra Analizy Środowiska Instrukcja do ćwiczeń laboratoryjnych Ćwiczenie nr 3 OZNACZANIE CHLORKÓW METODĄ SPEKTROFOTOMETRYCZNĄ Z TIOCYJANIANEM RTĘCI(II)

Bardziej szczegółowo

Technika hodowli komórek leukemicznych

Technika hodowli komórek leukemicznych Fizjologiczne Techniki Badań Technika hodowli komórek leukemicznych Zasady prowadzenia hodowli komórek leukemicznych, pasażowania, mrożenia, rozmrażania i przechowywania komórek leukemicznych Warunki wstępne:

Bardziej szczegółowo

47 Olimpiada Biologiczna

47 Olimpiada Biologiczna 47 Olimpiada Biologiczna Pracownia biochemiczna zasady oceniania rozwia zan zadan Część A. Identyfikacja zawartości trzech probówek zawierających cukry (0 21 pkt) Zadanie A.1 (0 13 pkt) Tabela 1 (0 7 pkt)

Bardziej szczegółowo

1. Oznaczanie aktywności lipazy trzustkowej i jej zależności od stężenia enzymu oraz żółci jako modulatora reakcji enzymatycznej.

1. Oznaczanie aktywności lipazy trzustkowej i jej zależności od stężenia enzymu oraz żółci jako modulatora reakcji enzymatycznej. ĆWICZENIE OZNACZANIE AKTYWNOŚCI LIPAZY TRZUSTKOWEJ I JEJ ZALEŻNOŚCI OD STĘŻENIA ENZYMU ORAZ ŻÓŁCI JAKO MODULATORA REAKCJI ENZYMATYCZNEJ. INHIBICJA KOMPETYCYJNA DEHYDROGENAZY BURSZTYNIANOWEJ. 1. Oznaczanie

Bardziej szczegółowo

ĆWICZENIE NR 3 BADANIE MIKROBIOLOGICZNEGO UTLENIENIA AMONIAKU DO AZOTYNÓW ZA POMOCĄ BAKTERII NITROSOMONAS sp.

ĆWICZENIE NR 3 BADANIE MIKROBIOLOGICZNEGO UTLENIENIA AMONIAKU DO AZOTYNÓW ZA POMOCĄ BAKTERII NITROSOMONAS sp. ĆWICZENIE NR 3 BADANIE MIKROBIOLOGICZNEGO UTLENIENIA AMONIAKU DO AZOTYNÓW ZA POMOCĄ BAKTERII NITROSOMONAS sp. Uwaga: Ze względu na laboratoryjny charakter zajęć oraz kontakt z materiałem biologicznym,

Bardziej szczegółowo

BADANIA TOKSYCZNOŚCI ZANIECZYSZCZEŃ ORGANIZMÓW WODNYCH (PN -90/C-04610/01;03;05)

BADANIA TOKSYCZNOŚCI ZANIECZYSZCZEŃ ORGANIZMÓW WODNYCH (PN -90/C-04610/01;03;05) BADANIA TOKSYCZNOŚCI ZANIECZYSZCZEŃ ORGANIZMÓW WODNYCH (PN -90/C-04610/01;03;05) Magdalena Retkiewicz 26.03.2014 ZANIECZYSZCZENIA WÓD Zanieczyszczenie wód niekorzystne zmiany właściwości fizycznych, chemicznych

Bardziej szczegółowo

XIII. Staphylococcus, Micrococcus ćwiczenia praktyczne

XIII. Staphylococcus, Micrococcus ćwiczenia praktyczne XIII. Staphylococcus, Micrococcus ćwiczenia praktyczne Ćwiczenie 1. Ocena wzrostu szczepów gronkowców na: a. agarze z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK) typ hemolizy morfologia kolonii.. b. podłożu

Bardziej szczegółowo

Krew należy poddać hemolizie, która zachodzi pod wpływem izotonicznego odczynnika Drabkina.

Krew należy poddać hemolizie, która zachodzi pod wpływem izotonicznego odczynnika Drabkina. Imię i nazwisko Uzyskane punkty Nr albumu data /3 podpis asystenta ĆWICZENIE 13 BIOCHEMIA KRWI Doświadczenie 1 Cel: Oznaczenie stężenia Hb metodą cyjanmethemoglobinową. Hemoglobina (Hb) i niektóre jej

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 1 Morfologia I fizjologia bakterii

Ćwiczenie 1 Morfologia I fizjologia bakterii Ćwiczenie 1 Morfologia I fizjologia bakterii 1. Barwienie złożone - metoda Grama Przygotowanie preparatu: odtłuszczone szkiełko podstawowe, nałożenie bakterii ( z hodowli płynnej 1-2 oczka ezy lub ze stałej

Bardziej szczegółowo

OZNACZANIE ŻELAZA METODĄ SPEKTROFOTOMETRII UV/VIS

OZNACZANIE ŻELAZA METODĄ SPEKTROFOTOMETRII UV/VIS OZNACZANIE ŻELAZA METODĄ SPEKTROFOTOMETRII UV/VIS Zagadnienia teoretyczne. Spektrofotometria jest techniką instrumentalną, w której do celów analitycznych wykorzystuje się przejścia energetyczne zachodzące

Bardziej szczegółowo

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Inżynieria bioprocesowa na kierunku biotechnologia

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Inżynieria bioprocesowa na kierunku biotechnologia 1 Zakład Mikrobiologii UJK Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Inżynieria bioprocesowa na kierunku biotechnologia 2 Zakład Mikrobiologii UJK Zakres materiału

Bardziej szczegółowo

Nazwa i typ aparatu:.. Lp. Opis parametru Kryterium Parametr wymagany

Nazwa i typ aparatu:.. Lp. Opis parametru Kryterium Parametr wymagany Załącznik nr 3. Aparat do detekcji wzrostu drobnoustrojów z krwi i płynów ustrojowych Parametry graniczne. Nazwa i typ aparatu:.. Lp. Opis parametru Kryterium Parametr wymagany Parametr oferowany 1 Hodowla

Bardziej szczegółowo

1. PRZYGOTOWANIE ROZTWORÓW KOMPLEKSUJĄCYCH

1. PRZYGOTOWANIE ROZTWORÓW KOMPLEKSUJĄCYCH 1. PRZYGOTOWANIE ROZTWORÓW KOMPLEKSUJĄCYCH 1.1. przygotowanie 20 g 20% roztworu KSCN w wodzie destylowanej 1.1.1. odważenie 4 g stałego KSCN w stożkowej kolbie ze szlifem 1.1.2. odważenie 16 g wody destylowanej

Bardziej szczegółowo

E.coli Transformer Kit

E.coli Transformer Kit E.coli Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli. Metoda chemiczna. wersja 1117 6 x 40 transformacji Nr kat. 4020-240 Zestaw zawiera komplet odczynników

Bardziej szczegółowo

VII. Pałeczki Gram-dodatnie: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus - ćwiczenia praktyczne

VII. Pałeczki Gram-dodatnie: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus - ćwiczenia praktyczne VII. Pałeczki Gram-dodatnie: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus - ćwiczenia praktyczne Ćwiczenie 1. Wykonanie barwionych preparatów mikroskopowych preparat barwiony metodą Grama z

Bardziej szczegółowo

IV. Streptococcus, Enterococcus ćwiczenia praktyczne

IV. Streptococcus, Enterococcus ćwiczenia praktyczne IV. Streptococcus, Enterococcus ćwiczenia praktyczne Ćwiczenie 1. Ocena wzrostu szczepów paciorkowców na: a. agarze z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK) typ hemolizy morfologia kolonii... gatunek

Bardziej szczegółowo

Protokoły do zajęć praktycznych z mikrobiologii ogólnej i żywności dla studentów kierunku: Dietetyka

Protokoły do zajęć praktycznych z mikrobiologii ogólnej i żywności dla studentów kierunku: Dietetyka Protokoły do zajęć praktycznych z mikrobiologii ogólnej i żywności dla studentów kierunku: Dietetyka Protokół I, zajęcia praktyczne 1. Demonstracja wykonania preparatu barwionego metodą Grama (wykonuje

Bardziej szczegółowo

Przygotowanie mianowanych zawiesin szczepów wzorcowych znajdujących zastosowanie w badaniach mikrobiologicznych

Przygotowanie mianowanych zawiesin szczepów wzorcowych znajdujących zastosowanie w badaniach mikrobiologicznych Przygotowanie mianowanych zawiesin szczepów wzorcowych znajdujących zastosowanie w badaniach mikrobiologicznych Krystyna Mysłowska, Katarzyna Bucała-Śladowska* Mikrobiologia jest nauką, w której nie mamy

Bardziej szczegółowo

VII. Fizjologia bakterii - ćwiczenia praktyczne

VII. Fizjologia bakterii - ćwiczenia praktyczne VII. Fizjologia bakterii - ćwiczenia praktyczne Ćwiczenie 1. Rodzaje pożywek i ich zastosowanie a. Podłoże stałe - proste Agar zwykły (AZ) b. Podłoża wzbogacone Agar z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej

Bardziej szczegółowo

KINETYKA HYDROLIZY SACHAROZY

KINETYKA HYDROLIZY SACHAROZY Ćwiczenie nr 2 KINETYKA HYDROLIZY SACHAROZY I. Kinetyka hydrolizy sacharozy reakcja chemiczna Zasada: Sacharoza w środowisku kwaśnym ulega hydrolizie z wytworzeniem -D-glukozy i -D-fruktozy. Jest to reakcja

Bardziej szczegółowo

III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej

III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej Ćwiczenie 1. Rodzaje pożywek i ich zastosowanie a. Podłoże stałe - proste Agar zwykły (AZ) b. Podłoża wzbogacone Agar z dodatkiem 5% odwłóknionej

Bardziej szczegółowo

Oznaczanie żelaza i miedzi metodą miareczkowania spektrofotometrycznego

Oznaczanie żelaza i miedzi metodą miareczkowania spektrofotometrycznego Oznaczanie żelaza i miedzi metodą miareczkowania spektrofotometrycznego Oznaczanie dwóch kationów obok siebie metodą miareczkowania spektrofotometrycznego (bez maskowania) jest możliwe, gdy spełnione są

Bardziej szczegółowo

Metody badania aktywności leków in vitro

Metody badania aktywności leków in vitro Artur Wnorowski Zakład Biofarmacji Uniwersytet Medyczny w Lublinie Wersja: 1.2 Rok: 2016 Metody badania aktywności leków in vitro Cytotoksyczność związków i żywotność komórek Oznaczanie żywotności komórek

Bardziej szczegółowo

data ĆWICZENIE 7 DYSTRYBUCJA TKANKOWA AMIDOHYDROLAZ

data ĆWICZENIE 7 DYSTRYBUCJA TKANKOWA AMIDOHYDROLAZ Imię i nazwisko Uzyskane punkty Nr albumu data /3 podpis asystenta ĆWICZENIE 7 DYSTRYBUCJA TKANKOWA AMIDOHYDROLAZ Amidohydrolazy (E.C.3.5.1 oraz E.C.3.5.2) są enzymami z grupy hydrolaz o szerokim powinowactwie

Bardziej szczegółowo

Diagnostyka wirusologiczna w praktyce klinicznej

Diagnostyka wirusologiczna w praktyce klinicznej Diagnostyka wirusologiczna w praktyce klinicznej Ponad 60% zakażeń w praktyce klinicznej jest wywołana przez wirusy. Rodzaj i jakość materiału diagnostycznego (transport!) oraz interpretacja wyników badań

Bardziej szczegółowo

Zakład Biologii Sanitarnej i Ekotechniki ĆWICZENIE 2 BUDOWA I FUNKCJE ENZYMÓW. ZASTOSOWANIE BADAŃ ENZYMATYCZNYCH W INŻYNIERII ŚRODOWISKA.

Zakład Biologii Sanitarnej i Ekotechniki ĆWICZENIE 2 BUDOWA I FUNKCJE ENZYMÓW. ZASTOSOWANIE BADAŃ ENZYMATYCZNYCH W INŻYNIERII ŚRODOWISKA. ĆWICZENIE 2 BUDOWA I FUNKCJE ENZYMÓW. ZASTOSOWANIE BADAŃ ENZYMATYCZNYCH W INŻYNIERII ŚRODOWISKA. /Opiekun merytoryczny: dr hab. Teodora M. Traczewska, prof. nadzw. PWr modyfikacja: dr inż. Agnieszka Trusz-Zdybek

Bardziej szczegółowo

Biologiczna ocena wyrobów medycznych Testy in vitro

Biologiczna ocena wyrobów medycznych Testy in vitro Specjalistyczne metody badań materiałów, 2014 Biologiczna ocena wyrobów medycznych Testy in vitro Bogdan Walkowiak Zakład Biofizyki IIM PŁ in vitro vs in vivo i ex vivo http://sexymammy.fotolog.pl/in-vitro-wedlug-disy,1370470

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 4-5 Mikrobiologiczne kryteria oceny sanitarnej wody

Ćwiczenie 4-5 Mikrobiologiczne kryteria oceny sanitarnej wody ĆWICZENIA Z GOSPODARKI ENERGETYCZNEJ, WODNEJ I ŚCIEKOWEJ CZĘŚĆ MIKROBIOLOGICZNA Ćwiczenie 4-5 Mikrobiologiczne kryteria oceny sanitarnej wody Część teoretyczna: 1. Kryteria jakości sanitarnej wody przeznaczonej

Bardziej szczegółowo

Ocena wybranych wskaźników chorobotwórczości grzybów z rodzaju Candida wyizolowanych od pacjentów chirurgicznych.

Ocena wybranych wskaźników chorobotwórczości grzybów z rodzaju Candida wyizolowanych od pacjentów chirurgicznych. Ocena wybranych wskaźników chorobotwórczości grzybów z rodzaju Candida wyizolowanych od pacjentów chirurgicznych. Wstęp Rodzaj Candida obejmuje ponad 150 gatunków grzybów, występujących w środowisku nieożywionym,

Bardziej szczegółowo

OFERTA TEMATÓW PRAC DYPLOMOWYCH (MAGISTERSKICH) do zrealizowania w Katedrze MIKROBIOLOGII

OFERTA TEMATÓW PRAC DYPLOMOWYCH (MAGISTERSKICH) do zrealizowania w Katedrze MIKROBIOLOGII OFERTA TEMATÓW PRAC DYPLOMOWYCH (MAGISTERSKICH) do zrealizowania w Katedrze MIKROBIOLOGII Opracowanie zestawu do wykrywania DNA Aspergillus flavus za pomocą specjalistycznego sprzętu medycznego. Jednym

Bardziej szczegółowo

CEL ĆWICZENIA: Zapoznanie się z przykładową procedurą odsalania oczyszczanych preparatów enzymatycznych w procesie klasycznej filtracji żelowej.

CEL ĆWICZENIA: Zapoznanie się z przykładową procedurą odsalania oczyszczanych preparatów enzymatycznych w procesie klasycznej filtracji żelowej. LABORATORIUM 3 Filtracja żelowa preparatu oksydazy polifenolowej (PPO) oczyszczanego w procesie wysalania siarczanem amonu z wykorzystaniem złoża Sephadex G-50 CEL ĆWICZENIA: Zapoznanie się z przykładową

Bardziej szczegółowo

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Wydział Farmaceutyczny, WUM ul. Banacha 1, 02-097 Warszawa tel. 22 572 0735, 606448502

Bardziej szczegółowo

Technika radioimmunologicznego oznaczania poziomu hormonów (RIA) dr Katarzyna Knapczyk-Stwora

Technika radioimmunologicznego oznaczania poziomu hormonów (RIA) dr Katarzyna Knapczyk-Stwora Technika radioimmunologicznego oznaczania poziomu hormonów (RIA) dr Katarzyna Knapczyk-Stwora Warunki wstępne: Proszę zapoznać się z tematem Radioimmunologiczne metody oznaczania hormonów steroidowych

Bardziej szczegółowo

ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ŚRODOWISKA 1)

ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ŚRODOWISKA 1) ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ŚRODOWISKA 1) z dnia 6 listopada 2002 r. w sprawie metodyk referencyjnych badania stopnia biodegradacji substancji powierzchniowoczynnych zawartych w produktach, których stosowanie

Bardziej szczegółowo

10) istotne kliniczne dane pacjenta, w szczególności: rozpoznanie, występujące czynniki ryzyka zakażenia, w tym wcześniejsza antybiotykoterapia,

10) istotne kliniczne dane pacjenta, w szczególności: rozpoznanie, występujące czynniki ryzyka zakażenia, w tym wcześniejsza antybiotykoterapia, Załącznik nr 2 Standardy jakości w zakresie mikrobiologicznych badań laboratoryjnych, w tym badań technikami biologii molekularnej, oceny ich jakości i wartości diagnostycznej oraz laboratoryjnej interpretacji

Bardziej szczegółowo

Laboratorium 4. Określenie aktywności katalitycznej enzymu. Wprowadzenie do metod analitycznych. 1. CZĘŚĆ TEORETYCZNA

Laboratorium 4. Określenie aktywności katalitycznej enzymu. Wprowadzenie do metod analitycznych. 1. CZĘŚĆ TEORETYCZNA Laboratorium 4 Określenie aktywności katalitycznej enzymu. Wprowadzenie do metod analitycznych. Prowadzący: dr inż. Karolina Labus 1. CZĘŚĆ TEORETYCZNA Enzymy to wielkocząsteczkowe, w większości białkowe,

Bardziej szczegółowo

1276:1997 13368 (ATCC

1276:1997 13368 (ATCC Działanie bakteriobójcze Środka biobójczego Clinell GAMA Healthcare Ltd. zbadane za pomocą Europejskiego Standardowego Testu według normy BS EN 1276:1997 wobec: Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 (ATCC 700603).

Bardziej szczegółowo

Labowe know-how : ELISA

Labowe know-how : ELISA Labowe know-how : ELISA Test immunoenzymatyczny ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) jest jedną z najpowszechniejszych metod stosowanych w badaniach diagnostycznych i naukowych. Jej zadaniem jest

Bardziej szczegółowo

BADANIE WŁASNOŚCI KOENZYMÓW OKSYDOREDUKTAZ

BADANIE WŁASNOŚCI KOENZYMÓW OKSYDOREDUKTAZ KATEDRA BIOCHEMII Wydział Biologii i Ochrony Środowiska BADANIE WŁASNOŚCI KOENZYMÓW OKSYDOREDUKTAZ ĆWICZENIE 2 Nukleotydy pirydynowe (NAD +, NADP + ) pełnią funkcję koenzymów dehydrogenaz przenosząc jony

Bardziej szczegółowo

Technika fluorescencyjnego oznaczania aktywności enzymów. Wstęp:

Technika fluorescencyjnego oznaczania aktywności enzymów. Wstęp: Technika fluorescencyjnego oznaczania aktywności enzymów Wstęp: Wśród technik biologii molekularnej jedną z najczęściej stosowanych jest technika fluorescencyjna. Stosując technikę fluorescencyjną można

Bardziej szczegółowo

PODSTAWY BIOLOGII KOMÓRKI. Bankowanie komórek i ocena ich żywotności

PODSTAWY BIOLOGII KOMÓRKI. Bankowanie komórek i ocena ich żywotności PODSTAWY BIOLOGII KOMÓRKI Wstęp Jedną z rutynowych metod laboratoryjnych stosowanych we współczesnej biologii jest długotrwałe przechowywanie żywych komórek w obniżonej temperaturze. Metoda ta jest szczególnie

Bardziej szczegółowo

II rok OML studia magisterskie - Diagnostyka parazytologiczna- praktyczna nauka zawodu

II rok OML studia magisterskie - Diagnostyka parazytologiczna- praktyczna nauka zawodu ĆWICZENIE 1 Temat: Wykrywanie grzybów i pasożytów w różnych materiałach biologicznych cz.1 1. Zasady pobierania, transportu i przechowywania materiałów biologicznych do badań mikologicznych i parazytologicznych

Bardziej szczegółowo

X. Pałeczki Gram-dodatnie. Rodzaje: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus

X. Pałeczki Gram-dodatnie. Rodzaje: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus X. Pałeczki Gram-dodatnie. Rodzaje: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus Gramujemne pałeczki auksotroficzne. Rodzaj: Haemophilus, Brucella, Legionella Ćwiczenie 1. Wykonanie preparatu

Bardziej szczegółowo

Elżbieta Arłukowicz Streszczenie rozprawy doktorskiej

Elżbieta Arłukowicz Streszczenie rozprawy doktorskiej Elżbieta Arłukowicz Streszczenie rozprawy doktorskiej Analiza zmienności ilościowej i jakościowej tlenowej flory bakteryjnej izolowanej z ran przewlekłych kończyn dolnych w trakcie leczenia tlenem hiperbarycznym

Bardziej szczegółowo

BIOLOGIA KOMÓRKI. Testy witalności komórek

BIOLOGIA KOMÓRKI. Testy witalności komórek BIOLOGIA KOMÓRKI Testy witalności komórek WSTĘP Każda komórka jest układem termodynamicznie otwartym wymieniającym ze swym otoczeniem materię i energię. Wymiana ta odbywa się poprzez błonę komórkową, której

Bardziej szczegółowo

Diagnostyka mikrobiologiczna zakażeń krwi Paweł Zwierzewicz

Diagnostyka mikrobiologiczna zakażeń krwi Paweł Zwierzewicz Diagnostyka mikrobiologiczna zakażeń krwi Paweł Zwierzewicz Diagnostyka mikrobiologiczna sepsy oferta firmy biomerieux Automatyczne analizatory do posiewów krwi Automatyczne analizatory do identyfikacji

Bardziej szczegółowo

1. Demonstracja preparatów bakteryjnych barwionych metodą negatywną ukazujących kształty komórek bakteryjnych.

1. Demonstracja preparatów bakteryjnych barwionych metodą negatywną ukazujących kształty komórek bakteryjnych. Ćwiczenie 1. Mikrobiologia ogólna - Budowa komórki bakteryjnej. Metody barwienia preparatów bakteryjnych. Wzrost drobnoustrojów w warunkach laboratoryjnych. Uzyskiwanie czystej hodowli. Identyfikowanie

Bardziej szczegółowo

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli Wersja 0211 6x40 transformacji Nr kat. 4020-240 Zestaw zawiera komplet odczynników do przygotowania sześciu

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 9. Temat: Metody ilościowe w mikrobiologicznych badaniach żywności Cz.1

Ćwiczenie 9. Temat: Metody ilościowe w mikrobiologicznych badaniach żywności Cz.1 Ćwiczenie 9 Temat: Metody ilościowe w mikrobiologicznych badaniach żywności Cz.1 Pobieranie prób do badań Próbka pobrana do badań mikrobiologicznych powinna być reprezentatywna tzn. powinna odzwierciedlać

Bardziej szczegółowo

Harmonogram zajęć z Mikrobiologii z parazytologią i Immunologii dla studentów II roku kierunku lekarskiego WL 2018/2019 GRUPA 5

Harmonogram zajęć z Mikrobiologii z parazytologią i Immunologii dla studentów II roku kierunku lekarskiego WL 2018/2019 GRUPA 5 Harmonogram zajęć z Mikrobiologii z parazytologią i Immunologii dla studentów II roku kierunku lekarskiego WL 2018/2019 GRUPA 5 GRUPY ĆWICZENIOWE 51, 52 : 8.00-10.30 Wtorek: 17.00-19.30 Data Godzina Rodzaj

Bardziej szczegółowo

Ocena i interpretacja obrazu mikroskopowego oraz innych czynników określających stopien czystości pochwy

Ocena i interpretacja obrazu mikroskopowego oraz innych czynników określających stopien czystości pochwy 9.5 Stopień czystości pochwy Ocena i interpretacja obrazu mikroskopowego oraz innych czynników określających stopien czystości pochwy Czynnik Liczba/Interpretacja/Uwagi Preparat barwiony metodą Grama Przypadek

Bardziej szczegółowo

Oznaczanie SO 2 w powietrzu atmosferycznym

Oznaczanie SO 2 w powietrzu atmosferycznym Ćwiczenie 6 Oznaczanie SO w powietrzu atmosferycznym Dwutlenek siarki bezwodnik kwasu siarkowego jest najbardziej rozpowszechnionym zanieczyszczeniem gazowym, występującym w powietrzu atmosferycznym. Głównym

Bardziej szczegółowo

Producent i nr katalogowy oferowanego odczynnika

Producent i nr katalogowy oferowanego odczynnika Załącznik nr 2 do SIWZ Nr postępowania: DYR.Zam.Publ.-29/2 SZCZEGÓŁOWY OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA / FORMULARZ CENOWY Tytuł zamówienia: Dostawa odczynników specjalistycznych i pipet automatycznych z wyposażeniem

Bardziej szczegółowo

Dominika Jezierska. Łódź, dn r.

Dominika Jezierska. Łódź, dn r. Badania i ocena jakości środowiska morskiego Bałtyku rozporządzenie MŚ z dnia 4 października 2002 r. w sprawie wymagań jakim powinny odpowiadać morskie wody wewnętrzne i wody przybrzeżne będące środowiskiem

Bardziej szczegółowo

PODSTAWY BIOLOGII KOMÓRKI. Bankowanie komórek i ocena ich żywotności

PODSTAWY BIOLOGII KOMÓRKI. Bankowanie komórek i ocena ich żywotności PODSTAWY BIOLOGII KOMÓRKI Wstęp Jedną z rutynowych metod laboratoryjnych stosowanych we współczesnej biologii jest długotrwałe przechowywanie żywych komórek w obniżonej temperaturze. Metoda ta jest szczególnie

Bardziej szczegółowo

Metody mikrobiologiczne, opisane w Farmakopei

Metody mikrobiologiczne, opisane w Farmakopei cena możliwości zastosowania aparatu DeltaTox do badań czystości mikrobiologicznej produktów leczniczych Jadwiga Marczewska, Jolanta KrzysztońRussjan, Ewa Karwicka Zakład Biochemii i Biofarmaceutyków,

Bardziej szczegółowo

CZĘŚĆ 1 TEST KASETKOWY DO WYKRYWANIA KALPROTEKTYNY I LAKTOFERYNY W KALE. 73/PNP/SW/2018 Załącznik nr 1 do SIWZ formularz asortymentowo cenowy

CZĘŚĆ 1 TEST KASETKOWY DO WYKRYWANIA KALPROTEKTYNY I LAKTOFERYNY W KALE. 73/PNP/SW/2018 Załącznik nr 1 do SIWZ formularz asortymentowo cenowy formularz asortymentowo cenowy CZĘŚĆ TEST KASETKOWY DO WYKRYWANIA KALPROTEKTYNY I LAKTOFERYNY W KALE Ilość sztuk na 36 za sztukę Immunochromatograficzny, nieinwazyjny szybki test do jakościowego wykrycia

Bardziej szczegółowo

Kontrola pożywek mikrobiologicznych. Sekcja Badań Epidemiologicznych

Kontrola pożywek mikrobiologicznych. Sekcja Badań Epidemiologicznych Kontrola pożywek mikrobiologicznych Sekcja Badań Epidemiologicznych 27.04.2015 Zgodnie z ISO 17025 oraz ISO 15189 jednym z czynników istotnie wpływających na jakość wyników badań w przypadku badań mikrobiologicznych,

Bardziej szczegółowo

Laboratorium 7. Testy na genotoksyczność

Laboratorium 7. Testy na genotoksyczność Test rewersji mutacji test Amesa Laboratorium 7 Testy na genotoksyczność Test Amesa jest testem bakteryjno-ssaczym. Organizmami testowymi są tutaj bakterie Salmonella typhimurium. W wyniku mutacji, celowo

Bardziej szczegółowo

BIOLOGIA KOMÓRKI. Analiza żywotności komórek w warunkach in vitro

BIOLOGIA KOMÓRKI. Analiza żywotności komórek w warunkach in vitro BIOLOGIA KOMÓRKI Analiza żywotności komórek w warunkach in vitro Wstęp Każda komórka jest układem termodynamicznie otwartym wymieniającym ze swym otoczeniem materię i energię. Wymiana ta odbywa się poprzez

Bardziej szczegółowo

ALGALTOXKIT F Procedura testu

ALGALTOXKIT F Procedura testu ALGALTOXKIT F Procedura testu 1 PRZYGOTOWANIE STANDARDOWEJ POŻYWKI A B C D - KOLBKA MIAROWA (1 litr) - FIOLKI Z ROZTWORAMI POŻYWEK A (2 fiolki), B, C, D - DESTYLOWANA (lub dejonizowana) WODA 2 A PRZENIEŚĆ

Bardziej szczegółowo

Novabeads Food DNA Kit

Novabeads Food DNA Kit Novabeads Food DNA Kit Novabeads Food DNA Kit jest nowej generacji narzędziem w technikach biologii molekularnej, umożliwiającym izolację DNA z produktów spożywczych wysoko przetworzonych. Metoda oparta

Bardziej szczegółowo

Jod. Numer CAS:

Jod. Numer CAS: Podstawy i Metody Oceny Środowiska Pracy 2009, nr 1(59), s. 153 157 dr EWA GAWĘDA Centralny Instytut Ochrony Pracy Państwowy Instytut Badawczy 00-701 Warszawa ul. Czerniakowska 16 Jod metoda oznaczania

Bardziej szczegółowo

SPRAWOZDANIE Z ĆWICZEŃ Z HIGIENY, TOKSYKOLOGII I BEZPIECZEŃSTWA ŻYWNOŚCI

SPRAWOZDANIE Z ĆWICZEŃ Z HIGIENY, TOKSYKOLOGII I BEZPIECZEŃSTWA ŻYWNOŚCI Data.. Imię, nazwisko, kierunek, grupa SPRAWOZDANIE Z ĆWICZEŃ Z HIGIENY, TOKSYKOLOGII I BEZPIECZEŃSTWA ŻYWNOŚCI OCENA JAKOŚCI WODY DO PICIA Ćwiczenie 1. Badanie właściwości fizykochemicznych wody Ćwiczenie

Bardziej szczegółowo