X. Diagnostyka mikrobiologiczna bakterii chorobotwórczych z rodzaju: Corynebacterium, Mycobacterium, Borrelia, Treponema, Neisseria

Transkrypt

1 X. Diagnostyka mikrobiologiczna bakterii chorobotwórczych z rodzaju: Corynebacterium, Mycobacterium, Borrelia, Treponema, Neisseria Maczugowce (rodzaj Corynebacterium) Ćwiczenie 1. Wykonanie preparatu mikroskopowego barwionego metodą Grama. Wykonanie ćwiczenia: Opis wykonania ćwiczenia przy temacie III. Budowa komórki bakteryjnej, metody barwienia. a. preparat barwiony metodą Grama z Corynebacterium pseudodiphtheriticum. b. preparat barwiony metodą Neissera z Corynebacterium diphtheriae. Ćwiczenie 2. Ocena wzrostu szczepów na agarze z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK). rodzaj drobnoustroju: Corynebacterium pseudodiphtheriticum typ hemolizy morfologia kolonii...

2 Ćwiczenie 3. Oznaczanie cech biochemicznych szczepów maczugowców. a. wykonanie próby na katalazę Wykonanie ćwiczenia: Opis wykonania ćwiczenia przy temacie IV. Fizjologia bakterii. Szczep badany obserwowane wyniki. Wnioski b. oznaczanie zdolności do redukcji azotanów Zasada metody: Badanie wykrywa zdolność wytwarzania przez bakterie reduktazy azotanowej. W wyniku jej działania drobnoustroje przekształcają jony azotanowe w azotynowe. Dodanie do hodowli odczynnika Griessa (kwas sulfanilowy: α-naftyloamina w kwasie octowym) powoduje, że w roztworze zachodzi reakcja diazowania kwasu sulfanilowego jonami azotynowymi, której produktem jest związek diazowy o barwie ceglastoczerwonej. Wykonanie: 1. Badanie wykonuje się na bulionie z dodatkiem azotanu potasu. 2. Po 24 godzinnej inkubacji do hodowli dodaje się odczynnika Griessa. Czerwonoceglaste zabarwienie hodowli świadczy o redukcji azotanów. obserwowane wyniki próba dodatnia próba ujemna

3 c. wykrywanie zdolności do wytwarzania ureazy Zasada metody: Enzymatyczny rozkład mocznika przez bakterie powoduje powstanie NH 3 i CO 2. Powstający NH 3 alkalizuje podłoże i powoduje zmianę zabarwienia z żółtego na różowo-amarantowe. Wykonanie: 1. Podłoże zawierające 2% mocznika zaszczepić badanym szczepem. 2. Całość inkubować w temperaturze 37ºC przez godziny. 3. Odczytać wynik. obserwowane wyniki próba dodatnia próba ujemna d. ocena zdolności utleniania/fermentacji glukozy, maltozy, sacharozy Zasada metody: Badanie zdolności sacharolitycznych maczugowców wykonuje się na podłożu zawierającym surowicę końską, enzymatyczny hydrolizat kazeiny, cystynę, 1% badanego cukru i czerwień fenolową. Kwaśny rozkład węglowodanów powoduje zmianę ph środowiska i zmianę zabarwienia z czerwonego na żółte. Wykonanie: 1. Podłoże zawierające 1% glukozy, maltozy lub sacharozy zaszczepić badanym szczepem 2. Całość inkubować w temperaturze 37ºC przez godziny. 3. Odczytać wynik. obserwowane wyniki próba dodatnia próba ujemna

4 Ćwiczenie 4. Różnicowanie szczepów Corynebacterium spp. na podstawie wybranych cech biochemicznych. 1-redukcja azotanów, 2- wytwarzanie ureazy, 3- O/F glukozy, 4-rozkład maltozy, 5- rozkład sacharozy Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium ulcerans Corynebacterium pseudodiphtheriticum Corynebacterium urealyticum

5 Ćwiczenie 5. Identyfikacja szczepów Corynebacterium spp. przy użyciu testu API Coryne. Odczyt testu: Po inkubacji do mikroprobówek NIT, PYZ, PyrA, PAL, GUR, GAL, αglu, βnag dodać odpowiednie odczynniki wg schematu: 1. Test NIT po kropli NIT1 i NIT2 2. Test PYZ 1 kropla PYZ 3. Testy PyrA, PAL, GUR, GAL, αglu, βnag po kropli ZYM A i ZYM B Odczytać wyniki wg załączonej tabeli.

6 Prątki (rodzaj Mycobacterium) Ćwiczenie 6. Obserwacja preparatów mikroskopowych. a. ocena preparatów bezpośrednich z plwociny Kryteria przydatności plwociny do badania mikrobiologicznego: Plwocina zakwalifikowana do badania mikrobiologicznego powinna zawierać: >25 leukocytów i <10 komórek nabłonkowych w polu widzenia (przy powiększeniu 10x10). Ocena półilościowa liczby komórek bakteryjnych (pod powiększeniem immersyjnym): (+) 1 komórka bakteryjna, co kilka pól widzenia, (++) 10 komórek bakteryjnych, co kilka pól widzenia, (+++) 1-10 komórek bakteryjnych w każdym polu widzenia, (++++) >10 komórek bakteryjnych w każdym polu widzenia. Wnioski: b. Mycobacterium tuberculosis preparat bezpośredni z plwociny barwiony metodą Ziehla-Neelsena Ocena ilościowa liczby prątków kwasoodpornych wg skali Graffy ego: (-) brak prątków w preparacie, (+/- ) 1 prątek w preparacie, (+) pojedyncze prątki w preparacie, (++) pojedyncze prątki w poszczególnych polach widzenia, (+++) liczne prątki w poszczególnych polach widzenia. Wnioski:

7 Ćwiczenie 7. Opisz wzrost prątków na podłożu Löewensteina Jensena.. Ćwiczenie 8. Barwienie prątków metodą Ziehla-Nelsena. Opisz wykonanie barwienia. Ćwiczenie 9. Barwienie prątków metodą fluorescencyjną (AFB). Opisz wykonanie barwienia.

8 Ćwiczenie 10. Opisz metodę badania lekowrażliwości prątków gruźlicy. Wymień podstawowe leki przeciwprątkowe:

9 Krętki (rodzaje Borrelia i Treponema) Ćwiczenie 11. Wykonanie preparatu mikroskopowego barwionego metodą Grama. Ćwiczenie 12. Identyfikacja zakażenia Treponema pallidum z użyciem testu VDRL. Opisz wykonanie testu VDRL/RPR jakościowego i ilościowego. Zinterpretuj otrzymane wyniki badań.

10 Ziarniaki Gram-ujemne (rodzaj Neisseria) Ćwiczenie 13. Obserwacja preparatów mikroskopowych. Neisseria gonorrhoeae preparat bezpośredni z pochwy barwiony metodą Grama Ćwiczenie 14. Ocena właściwości sacharolitycznych bakterii z rodzaju Neisseria. Na podstawie zdolności rozkładu cukrów dokonaj zróżnicowania ziarenkowców Neisseria glukoza, 2- maltoza, 3-laktoza Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Neisseria lactamica