PL B1. POLITECHNIKA GDAŃSKA, Gdańsk, PL BUP 22/06. JÓZEF KUR, Wejherowo, PL MARTA WANARSKA, Lębork, PL

Wielkość: px
Rozpocząć pokaz od strony:

Download "PL B1. POLITECHNIKA GDAŃSKA, Gdańsk, PL BUP 22/06. JÓZEF KUR, Wejherowo, PL MARTA WANARSKA, Lębork, PL"

Transkrypt

1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: (22) Data zgłoszenia: (51) Int.Cl. C07H 21/04 ( ) C12N 9/38 ( ) C12R 1/84 ( ) C12N 15/04 ( ) (54) Startery oligonukleotydowe, sekwencja DNA, wektor plazmidowy, wektor ekspresyjny, rekombinantowy szczep Pichia pastoris i jego sposób otrzymywania oraz sposób wytwarzania termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei (73) Uprawniony z patentu: POLITECHNIKA GDAŃSKA, Gdańsk, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono: BUP 22/06 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: WUP 09/11 (72) Twórca(y) wynalazku: JÓZEF KUR, Wejherowo, PL MARTA WANARSKA, Lębork, PL (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Popławski Czesław POLITECHNIKA GDAŃSKA PL B1

2 2 PL B1 Opis wynalazku Przedmiotem wynalazku są startery oligonukleotydowe, a także sekwencja DNA, wektor plazmidowy, wektor ekspresyjny, rekombinantowy szczep Pichia pastoris i jego sposób otrzymywania oraz sposób wytwarzania termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei. Znane są β-d-galaktozydazy, które są enzymami syntetyzowanymi przez komórki ssaków, roślin, drożdży, grzybów strzępkowych i bakterii. W zależności od źródła, z którego pochodzą enzymy te różnią się masą cząsteczkową, ilością podjednostek wchodzących w skład natywnej cząsteczki, wartościami optymalnej temperatury i ph działania, a także zapotrzebowaniem na jony metali niezbędne dla aktywności enzymu lub/i stabilizowania jego struktury. Aktywność β-d-galaktozydaz zazwyczaj wzrasta, gdy w buforze reakcyjnym znajdują się jony potasu, sodu i magnezu. Jony metali ciężkich działają zaś, jako inhibitory. Enzymy te posiadają zdolność katalizowania reakcji hydrolizy laktozy, dlatego wykorzystuje się je głównie w procesach produkcji mleka o niskiej zawartości laktozy, przeznaczonego dla osób cierpiących z powodu nietolerancji tego disacharydu. β-d-galaktozydazy pochodzące z mikroorganizmów mezofilnych, grzybów strzępkowych z rodzaju Aspergillus i drożdży z rodzaju Kluyveromyces, od dawna stosowane są w przemysłowej produkcji mleka o obniżonej zawartości laktozy i przetwórstwie serwatki. Enzymy te znalazły też zastosowanie w produkcji oligosacharydów - należących do grupy prebiotyków - składników żywności funkcjonalnej. Nie spełniają one jednak do końca wymogów nowoczesnych biotechnologii pod względem aktywności i stabilności w warunkach prowadzenia procesu technologicznego. Stąd, poszukuje się nowych, wydajnych producentów β-d-galaktozydaz, w tym termostabilnych. Od około 30 lat trwają prace nad izolacją i charakterystyką enzymów pochodzących z organizmów termofilnych. W 1972 roku została opisana termostabilna β-d-galaktozydaza wyizolowana z komórek termofilnej bakterii Thermus sp. T2. Enzym miał masę cząsteczkową 570 kda. β-galaktozydaza Thermus sp. T2 jest kodowana przez gen bgaa. Polipeptyd będący produktem tego genu składa się z 645 reszt aminokwasowych, a jego obliczona na podstawie sekwencji aminokwasowej masa cząsteczkowa wynosi 73,595 kda, co sugeruje, że enzym w formie natywnej jest oktamerem. Optymalne warunki działania enzymu to 80 C i ph = 5,0. Termostabilna β-d-galaktozydazę wyizolowano również z komórek bakterii Thermus sp. 4-1 A. Masa cząsteczkowa enzymu wynosiła 440 kda. β-d-galaktozydaza ze szczepu Thermus 4-1A jest wysoce termostabilnym enzymem. Po 20 godzinach inkubacji w 80 C zachowuje 83% początkowej aktywności. Scharakteryzowano również enzym wyizolowany z komórek termofilnych bakterii Thermus sp. A4. Stwierdzono, że natywna cząsteczka enzymu jest trimerem. Optymalne ph działania tej β-d- -galaktozydazy wynosi 6,5. Za optymalną temperaturę uznano 70 C, gdyż w tej temperaturze enzym jest całkowicie stabilny i nawet po 20 godzinach inkubacji zachowuje pełną aktywność. Termostabilna β-d-galaktozydazę wykazującą aktywność transglikozylacyjną wyizolowano z komórek Thermus aquaticus YT-I. Enzym ten ma niezwykle dużą masę cząsteczkową przekraczającą 700 kda. Natomiast masa cząsteczkowa jednej podjednostki wynosi 59 kda. Optymalne warunki działania tej P-D-galaktozydazy to ph = 5,5 i 80 C. Źródłem termostabilnej β-d-galaktozydazy mogą być też termofilne grzyby Rhizomucor sp., bakterie Bacillus coagulans RCS3 lub mezofilne drożdże Sterigmatomyces elviae CBS8119. Termostabilne grzyby strzępkowe Rhizomucor sp. produkują zewnątrzkomórkową β-d-galaktozydazę o masie cząsteczkowej 250 kda. Enzym jest glikoproteiną i występuje w postaci dimeru. Optymalne warunki jego działania to ph = 4,5 i temperatura 60 C. Zewnątrzkomórkową termostabilna β-d-galaktozydaza produkowana jest również przez termofilny szczep Bacillus coagulans RCS3. Maksymalną aktywność enzym wykazuje w temperaturze 65 C i ph = 6,8. Pozostaje ona na wysokim poziomie w ph = 6,0-7,0 i temperaturze C. Termostabilna β-d-galaktozydaza syntetyzowana w komórkach Sterigmatomyces elviae CBS8119 związana jest ze ścianą komórkową mikroorganizmu. Masa cząsteczkowa enzymu wynosi 170 kda. W formie natywnej jest on dimerem złożonym z podjednostek o masie cząsteczkowej 86 kda. Optymalne ph działania β-d-galaktozydazy obejmuje zakres 4,5-5,0. Najwyższą aktywność enzym uzyskuje w 85 C w ph = 5,0. Enzym o aktywności β-d-galaktozydazy wyizolowano również z komórek hypertermostabilnego archaeona Sulfolobus solfataricus. Masa cząsteczkowa tej β-d-galaktozydazy wynosi 240 kda.

3 PL B1 3 W formie natywnej enzym jest tetrametrem złożonym z podjednostek o masie 60 kda. Najwyższą aktywność w reakcji z ONPG wykazuje w temperaturze 95 C i ph = 6,5. Enzym charakteryzuje się szerokim spektrum substratowym. Katalizuje hydrolizę wiązań glikozydowych w syntetycznych β-d- -galaktozydach, β-d-glukozydach i β-d-fukozydach. Wykazuje również aktywność hydrolityczną w stosunku do laktozy, celobiozy i oligomerów glukozy o stopniu polimeryzacji 3 i 4 (aktywność egzoglukozydazy). Szerokim spektrum substratowym charakteryzuje się również termostabilny enzym z archaeona Pyrococcus furiosus. Wykazuje on jednak wyższą aktywność hydrolityczną w stosunku do β-d-glukozydów syntetycznych i naturalnych (p-nitrofenylo-β-d-glukopiranozyd, celobioza), niż β-d- -galaktozydów (p-nitrofenylo-β-d-galaktopiranozyd, laktoza). Z tego względu został zakwalifikowany do β-d-glukozydaz. Mimo to prowadzono badania nad wykorzystaniem obu hydrolaz glikozydowych (β-d-galaktozydazy z S. solfataricus i β-d-glukozydazy z P. furiosus) zarówno do hydrolizy laktozy, jak i syntezy oligosacharydów z laktozy w wysokiej temperaturze. Geny kodujące termostabilne enzymy z Thermus sp. T2, S. solfataricus, czy P. furiosus klonowano w komórkach E. coli. Prowadzono również wydajną biosyntezę termostabilnych enzymów w komórkach mezofilnego gospodarza i wykazano, że rekombinowane białka mają zbliżone właściwości do enzymów wyizolowanych z naturalnego źródła. Skonstruowano układ ekspresyjny pozwalający na wydajną biosyntezę termostabilnej β-d- -galaktozydazy z hypertermofilnego archaeona Pyrococcus woesei (DSM 3773) w komórkach E. coli. Gen kodujący termostabilne białko został zidentyfikowany i zsekwencjonowany. Na podstawie sekwencji nukleotydowej genu ustalono sekwencję aminokwasową kodowanego polipeptydu. Obliczona masa cząsteczkowa jednej podjednostki enzymu wynosi 59,056 kda. β-d-galaktozydaza została częściowo oczyszczona i scharakteryzowana. Najwyższą aktywność enzymu uzyskano w ph = 5,4 i 93 C. Białko produkowane w komórkach E. coli jest też wysoce termostabilne. Po 4-godzinnej inkubacji w 85, 93, 100 i 105 C traci odpowiednio 11, 15, 65 i 94% początkowej aktywności. Skonstruowano również drugi układ ekspresyjny pozwalający na biosyntezę β-d-galaktozydazy z P. woesei w E. coli w postaci białka fuzyjnego zawierającego domenę oligohistydynową na N-końcu łańcucha polipeptydowego. Wysoce oczyszczony, metodą chromatografii metalopowinowactwa, preparat fuzyjnego białka charakteryzuje się podobną termostabilnością jak enzym w formie dzikiej. Optymalna temperatura jego działania wynosi 90 C. Porównanie aktywności obu preparatów białkowych w reakcji z ON-PG w temperaturze 85 C wykazało jednak, że enzym w postaci fuzyjnej ma znacznie niższą aktywność właściwą. Wynalazek stanowią startery oligonukleotydowe do reakcji amplifikacji DNA o wzorze 1 i o symbolach Sygalfal i SygB2. Wynalazek stanowi także sekwencja DNA otrzymana w wyniku amplifikacji DNA z zastosowaniem starterów o wzorze 1, zawierająca fragment DNA kodujący termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei, zawierająca fragment DNA rozpoznawany przez enzym restrykcyjny XhoI, zawierająca fragment DNA rozpoznawany przez enzym restrykcyjny Hindlll, zawierająca fragment DNA rozpoznawany przez enzym restrykcyjny Xbal, o wzorze 2. Wynalazek stanowi również wektor plazmidowy zawierający wklonowane DNA z fragmentem kodującym termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei, z fragmentami DNA rozpoznawanymi przez enzymy restrykcyjne XhoI, Hindlll i Xbal, z promotorem arabad, z miejscami regulatorowymi O 1, O 2, I 1 i I 2 dla białka regulatorowego AraC, z miejscem wiązania białka CAP, z miejscem wiązania rybosomów rbs, z genem oporności na ampicylinę, z origin plazmidu pbr322, z genem arac kodującym białko regulatorowe AraC, o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal. Wynalazkiem jest też wektor ekspresyjny zawierający fragment DNA kodujący peptyd sygnalny a-faktor z Saccharomyces cerevisiae połączony z genem termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei pod regulacyjną kontrolą silnego promotora AOX1, z fragmentem DNA kodującym sekwencję aminokwasową rozpoznawaną przez proteazę Kex2, z terminatorem transkrypcji AOX1 z genem oporności na zeocynę (Sh ble), z syntetycznym prokariotycznym promotorem EM7, z promotorem TEF1 z Saccharomyces cerevisiae, z terminatorem transkrypcji CYC1, z origin ColEl, o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal. Wynalazek stanowi rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal, który stanowią komórki drożdży Pichia pastoris GS115 zawierające gen kodujący β-d- -galaktozydazę Pyrococcus woesei zintegrowany z genomem drożdżowym. Wynalazkiem jest również sposób otrzymywania rekombinantowego szczepu Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczap-gal charakteryzujący się tym, że uzyskuje się fragment

4 4 PL B1 DNA kodujący termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei o wzorze 2 poprzez amplifikację DNA z zastosowaniem starterów oligonukleotydowych o wzorze 1 i o symbolach Sygalfal i SygB2. Uzyskany fragment DNA klonuje się do wektora plazmidowego pbad-topo firmy Invitrogen, w wyniku czego uzyskuje się wektor plazmidowy o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal. Następnie fragment DNA kodujący termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei przeklonowuje się z wektora plazmidowego pbad-topo-αβ-gal o wzorze 3 do wektora plazmidowego ppiczα B firmy Invitrogen, w wyniku czego uzyskuje się wektor ekspresyjny o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal. Otrzymanym DNA wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal o wzorze 4 transformuje się komórki Pichia pastoris GS115, w wyniku czego uzyskuje się rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal. W wariancie realizacji tego wynalazku, DNA wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal o wzorze 4 transformuje się komórki Pichia pastoris SMD1168, w wyniku czego uzyskuje się rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris SMD1168 ppiczαβ-gal. W innym wariancie realizacji tego wynalazku, DNA wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal o wzorze 4 transformuje się komórki Pichia pastoris KM71, w wyniku czego uzyskuje się rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris KM71 ppiczαβ-gal. Wynalazkiem jest również sposób wytwarzania termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei polegający na zewnątrzkomórkowej produkcji enzymu przez komórki rekombinantowego szczepu drożdży w pożywkach płynnych charakteryzujący się tym, że prowadzi się hodowlę komórek szczepu drożdży o symbolu Pichia pastoris GS115 αβ-gal w temperaturze C, a następnie izoluje się białka z płynu pohodowlanego na drodze wysalania siarczanem amonu, przy czym proces prowadzi się do uzyskania 60-70% nasycenia płynu pohodowlanego siarczanem amonu, po czym oddziela się osady białkowe i rozpuszcza się je w 0,05-0,1 M buforze fosforanowym o ph 6,0-7,0, odsala się na drodze dializy, a następnie uzyskaną termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei oczyszcza się na drodze strącania termicznego innych obecnych w preparacie białek w temperaturze C przez minut. Dzięki wykorzystaniu wynalazku uzyskuje się układ ekspresyjny umożliwiający wydajną produkcję termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei w komórkach drożdży Pichia pastoris, przy czym produkcja ta jest znacznie bardziej wydajna od biosyntezy enzymu w komórkach bakterii. Sposób według wynalazku pozwala na uzyskanie preparatów białkowych o stopniu czystości przekraczającym 90%. Uzyskana według wynalazku rekombinowana β-d-galaktozydaza Pyrococcus woesei zachowuje 60% maksymalnej aktywności w buforze o ph = 6,6 (ph mleka), co umożliwia zastosowanie w przemysłowej produkcji mleka o obniżonej zawartości laktozy. Dodatkowo korzystną cechą rekombinowanej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei jest to, iż obecność występujących w mleku jonów wapnia nie wpływa na jej aktywność. Wynalazek objaśniony jest bliżej w przykładach wykonania i na rysunku, na którym fig. 1 przedstawia fragment DNA o wzorze 2 z zaznaczeniem sekwencji genu termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei i fragmentów DNA rozpoznawanych przez enzymy restrykcyjne XhoI, Hindlll i Xbal, fig. 2 przedstawia schemat uzyskania wektora plazmidowego o wzorze 3 i o symbolu pbad- -TOPO-αβ-gal, fig. 3 przedstawia sekwencję nukleotydową wektora plazmidowego pbad-topo-αβ- -gal w rejonie klonowania fragmentu DNA o wzorze 2, fig. 4 przedstawia schemat uzyskania wektora ekspresyjnego o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal, fig. 5 przedstawia sekwencję nukleotydową wektora ekspresyjnego o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal w rejonie insercji genu kodującego β-d- -galaktozydazę Pyrococcus woesei oraz sekwencję aminokwasową białka powstającego w komórkach Pichia pastoris GS 115 transformowanych DNA wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal, fig. 6 przedstawia wynik rozdziału elektroforetycznego w 10% żelu poliakrylamidowym frakcji pochodzących z kolejnych etapów izolacji i oczyszczania β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei produkowanej przez rekombinantowy szczep Pichia pastoris GS 115 ppiczαβ-gal, zaś tabela 1 przedstawia wyniki oznaczeń aktywności i stężenia β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei w preparatach uzyskanych w wyniku izolacji i oczyszczania enzymu produkowanego przez rekombinantowy szczep Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal. P r z y k ł a d 1 Otrzymywanie sekwencji DNA kodującej termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei. W celu amplifikacji DNA kodującego termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei syntetyzuje się startery oligonukleotydowe o wzorze 1 i o symbolach Sygalfal i SygB2. Reakcję amplifikacji

5 PL B1 5 DNA kodującego termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei wykonuje się z użyciem starterów Sygalfal (0,2 µm) i SygB2 (0,2 µm) na matrycy DNA plazmidu pgal2 (0,2 µg) (S. Dąbrowski, J. Maciuńska, J. Synowiecki Cloning and nucleotide sequence of the thermostable β-galactosidase gene from Pyrococcus woesei in Escherichia coli and some properties of the isolated enzyme, (1998), Mol. Biotechnol., 10, ) w buforze zawierającym: 20 mm Tris-HCl ph 8,8, 10 mm KCl, 10 mm (NH 4 ) 2 SO 4, 2 mm MgSO 4, 0,1% Triton X-100, 250 µm każdego z trifosforanów deoksyrybonukleozydów (dntp) i 1 U polimerazy DNA Pwo produkowanej przez DNA-Gdańsk II s.o, Gdańsk, Polska. Reakcję przeprowadza się w termocyklerze w następujących warunkach temperaturowo-czasowych: 93 C - 1 minuta, 66 C - 1 minuta, 72 C - 2 minuty; 30 cykli. W wyniku reakcji amplifikacji uzyskuje się fragment DNA o wzorze 2. Fragment DNA o wzorze 2 z dokładnym zaznaczeniem sekwencji genu termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei i fragmentów DNA rozpoznawanych przez enzymy restrykcyjne XhoI, Hindlll i Xbal ilustruje fig. 1. P r z y k ł a d 2. Otrzymywanie wektora plazmidowego o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal. Schemat uzyskania wektora plazmidowego o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal ilustruje fig. 2. W celu uzyskania wektora plazmidowego pbad-topo-αβ-gal przeprowadza się klonowanie fragmentu DNA o wzorze 2 do wektora plazmidowego pbad-topo firmy Invitrogen, Carlsbad, Kalifornia, USA, przy pomocy zestawu pbad TOPO TA Expression Kit firmy Invitrogen. Postępuje się zgodnie z procedurą klonowania, proponowaną przez producenta zestawu, dla fragmentów DNA zakończonych tępymi końcami. Następnie mieszaniną reakcyjną transformuje się komórki Escherichia coli TOP10 i wysiewa na podłoże LA zawierające 100 µg/ml ampicyliny. Uzyskane kolonie bakteryjne zawierające wektory plazmidowe przesiewa się na pożywkę LB z dodatkiem 100 µg/ml ampicyliny i hoduje się w celu izolacji DNA plazmidowego. W wyniku izolacji uzyskuje się DNA wektora plazmidowego o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal, który zawiera wklonowany gen kodujący termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei, co potwierdza się poprzez analizę restrykcyjną i sekwencjonowanie DNA metodą Sangera. Dokładną sekwencję nukleotydową wektora plazmidowego pbad-topo-αβ-gal w rejonie klonowania fragmentu DNA o wzorze 2 ilustruje fig. 3. P r z y k ł a d 3. Otrzymywanie wektora ekspresyjnego o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal. Schemat uzyskania wektora ekspresyjnego o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal ilustruje fig. 4. W celu uzyskania wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal przeprowadza się reakcję ligacji fragmentu DNA o wielkości 3506 par zasad powstałego w wyniku trawienia plazmidu ppiczα B firmy Invitrogen enzymami restrykcyjnymi XhoI i Xbal z fragmentem DNA o wielkości 1549 par zasad powstałym po trawieniu wektora plazmidowego pbad-topo-αβ-gal o wzorze 3 enzymami restrykcyjnymi XhoI i Xbal, w temperaturze 17 C przez 3 godziny z użyciem 2U DNA ligazy faga T4, stosując bufor reakcyjny: 33 mm Tris-CH 3 COOH ph 7,8, 10 mm (CH 3 COO) 2 Mg, 66 mm CH 3 COOK, 0,5 mm DTT, 1 mm ATP. Następnie mieszaniną ligacyjną transformuje się komórki Escherichia coli TOP 10 i wysiewa na podłoże LA niskosolne zawierające 25 µg/ml zeocyny. Uzyskane kolonie bakteryjne zawierające wektory ekspresyjne przesiewa się na pożywkę LB niskosolną z dodatkiem 25 µg/ml zeocyny i hoduje się w celu izolacji DNA plazmidowego. W wyniku izolacji uzyskuje się DNA wektora ekspresyjnego o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal, który zawiera fragment DNA kodujący peptyd sygnalny α-faktor z Saccharomyces cerevisiae połączony z genem β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei pod regulacyjną kontrolą silnego promotora AOX1 przedstawionego na fig. 5, co potwierdza się poprzez analizę restrykcyjną i sekwencjonowanie DNA metodą Sangera. P r z y k ł a d 4. Otrzymywanie rekombinantowego szczepu Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal. W celu uzyskania rekombinantowego szczepu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal wykonuje się transformację komórek Pichia pastoris GS115 liniową formą DNA plazmidu ekspresyjnego pp- ICZαβ-gal o wzorze 4 powstałą w wyniku trawienia DNA plazmidu ppiczαβ-gal enzymem restrykcyjnym Pmel. Komórki drożdży wysiewa się na podłoże YPDS zawierające 100 µg/ml zeocyny, a następnie uzyskane kolonie rekombinantowego szczepu Pichia pastoris GS 115 ppiczαβ-gal przesiewa się na podłoże YPD z dodatkiem 100 µg/ml zeocyny. W celu stwierdzenia obecności genu kodującego termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei w obrębie genomu drożdży Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal wykonuje się izolację genomowego DNA z komórek drożdży, a następnie reakcję amplifikacji DNA z zastosowaniem starterów o wzorze 1 i symbolach Sygalfal i SygB2 zgodnie z przykładem 1.

6 6 PL B1 P r z y k ł a d 5. Otrzymywanie termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei. Uzyskuje się sekwencję DNA kodującą termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei o wzorze 2 według przykładu 1. Następnie otrzymuje się wektor plazmidowy o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal zgodnie z przykładem 2. W kolejnym etapie uzyskuje się wektor ekspresyjny o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal według przykładu 3. Następnie otrzymuje się rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal zgodnie z przykładem 4. Szczep hoduje się w pożywce BMGY przez 18 godzin w temperaturze 30 C, a następnie komórki drożdży oddziela się od pożywki poprzez wirowanie. Uzyskane osady komórkowe zawiesza się w pożywce BMMY i hoduje przez 4 doby w temperaturze 30 C, dodając raz na dobę 100% metanolu, do końcowego stężenia w pożywce 0,5%. Następnie komórki drożdży oddziela się od płynu pohodowlanego poprzez wirowanie. Termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei izoluje się z pożywki pohodowlanej na drodze wysalania białek siarczanem amonu. Proces prowadzi się do uzyskania 60% stopnia nasycenia płynu pohodowlanego siarczanem amonu. Preparaty uzyskane po rozpuszczeniu osadów białkowych w 0,1 M buforze fosforanowym o ph 6,6 łączy się i odsala na drodze dializy. Termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei oczyszcza się następnie na drodze strącania termicznego innych obecnych w preparacie białek w temperaturze 75 C przez 30 minut. Wyniki biosyntezy i oczyszczania β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei analizuje się metodą elektroforezy w 10% żelu poliakrylamidowym w warunkach denaturujących (fig. 6). Aktywność termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei oznacza się w reakcji z ONPG (o-nitrofenylo-β-d-galaktopiranozyd) w temperaturze 85 C. Stężenie białka oznacza się metodą Bradford. Wyniki oznaczeń przedstawia tabela 1, z której wynika, że z 1 litra pożywki otrzymanej po hodowli rekombinantowego szczepu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal uzyskuje się 74 mg termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei, co stanowi 37% wszystkich obecnych w płynie pohodowlanym białek. Zastrzeżenia patentowe 1. Startery oligonukleotydowe do reakcji amplifikacji DNA o wzorze 1 i o symbolach Sygalfal i SygB2. 2. Sekwencja DNA otrzymana w wyniku amplifikacji DNA z zastosowaniem starterów o wzorze 1, zawierająca fragment DNA kodujący termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei, zawierająca fragment DNA rozpoznawany przez enzym restrykcyjny XhoI, zawierająca fragment DNA rozpoznawany przez enzym restrykcyjny Hindlll, zawierająca fragment DNA rozpoznawany przez enzym restrykcyjny Xbal, o wzorze Wektor plazmidowy zawierający wklonowane DNA z fragmentem kodującym termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei, z fragmentami DNA rozpoznawanymi przez enzymy restrykcyjne XhoI, Hindlll i Xbal, z promotorem arabad, z miejscami regulatorowymi O 1, O 2, I 1 i I 2 dla białka regulatorowego AraC, z miejscem wiązania białka CAP, z miejscem wiązania rybosomów rbs, z genem oporności na ampicylinę, z origin plazmidu pbr322, z genem arac kodującym białko regulatorowe AraC, o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal. 4. Wektor ekspresyjny zawierający fragment DNA kodujący peptyd sygnalny α-faktor z Saccharomyces cerevisiae połączony z genem termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei pod regulacyjną kontrolą silnego promotora AOX1, z fragmentem DNA kodującym sekwencję aminokwasową rozpoznawaną przez proteazę Kex2, z terminatorem transkrypcji AOX1 z genem oporności na zeocynę (Sh ble), z syntetycznym prokariotycznym promotorem EM7, z promotorem TEF1 z Saccharomyces cerevisiae, z terminatorem transkrypcji CYC1, z origin ColE1, o wzorze 4 i o symbolu ppi- CZαβ-gal. 5. Rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal, który stanowią komórki drożdży Pichia pastoris GS115 zawierające gen kodujący β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei zintegrowany z genomem drożdżowym. 6. Sposób otrzymywania rekombinantowego szczepu Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal, znamienny tym, że uzyskuje się fragment DNA kodujący termostabilna β-d- -galaktozydazę Pyrococcus woesei o wzorze 2 poprzez amplifikację DNA z zastosowaniem starterów oligonukleotydowych o wzorze 1 i o symbolach Sygalfal i SygB2, po czym uzyskany fragment DNA klonuje się do wektora plazmidowego pbad-topo firmy Invitrogen, w wyniku czego uzyskuje się

7 PL B1 7 wektor plazmidowy o wzorze 3 i o symbolu pbad-topo-αβ-gal, a następnie fragment DNA kodujący termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei przeklonowuje się z wektora plazmidowego pbad-topo-αβ-gal o wzorze 3 do wektora plazmidowego ppiczα B firmy Invitrogen, w wyniku czego uzyskuje się wektor ekspresyjny o wzorze 4 i o symbolu ppiczαβ-gal, zaś otrzymanym DNA wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal o wzorze 4 transformuje się komórki Pichia pastoris GS 115, w wyniku czego uzyskuje się rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris GS115 ppic αβ-gal. 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że DNA wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal o wzorze 4 transformuje się komórki Pichia pastoris SMD1168, w wyniku czego uzyskuje się rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris SMD1168 ppiczαβ-gal. 8. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że DNA wektora ekspresyjnego ppiczαβ-gal o wzorze 4 transformuje się komórki Pichia pastoris KM71, w wyniku czego uzyskuje się rekombinantowy szczep Pichia pastoris o symbolu Pichia pastoris KM71 ppiczαβ-gal. 9. Sposób wytwarzania termostabilnej β-d-galaktozydazy Pyrococcus woesei polegający na zewnątrzkomórkowej produkcji enzymu przez komórki rekombinantowego szczepu drożdży w pożywkach płynnych, znamienny tym, że prowadzi się hodowlę komórek szczepu drożdży o symbolu Pichia pastoris GS115 ppiczαβ-gal w temperaturze C, a następnie izoluje się białka z płynu pohodowlanego na drodze wysalania siarczanem amonu, przy czym proces prowadzi się do uzyskania 60-70% nasycenia płynu pohodowlanego siarczanem amonu, po czym oddziela się osady białkowe i rozpuszcza się je w 0,05-0,1 M buforze fosforanowym o ph 6,0-7,0, odsala się na drodze dializy, a następnie uzyskaną termostabilna β-d-galaktozydazę Pyrococcus woesei oczyszcza się na drodze strącania termicznego innych obecnych w preparacie białek w temperaturze C przez minut.

8 8 PL B1

9 PL B1 9

10 10 PL B1

11 PL B1 11

12 12 PL B1

13 PL B1 13

14 14 PL B1

15 PL B1 15 Rysunki

16 16 PL B1

17 PL B1 17

18 18 PL B1

19 PL B1 19

20 20 PL B1

21 PL B1 21

22 22 PL B1 Departament Wydawnictw UP RP Cena 4,92 zł (w tym 23% VAT)

Ekspresja genów heterogenicznych w drożdżach Pichia pastoris

Ekspresja genów heterogenicznych w drożdżach Pichia pastoris Ekspresja genów heterogenicznych w drożdżach Pichia pastoris Ekspresja genów heterogenicznych w drożdżach Pichia pastoris Drożdże Pichia pastoris należą do drożdży metanolotroficznych tj. zdolnych do wykorzystywania

Bardziej szczegółowo

Drożdżowe systemy ekspresyjne

Drożdżowe systemy ekspresyjne Drożdże Drożdżowe systemy ekspresyjne Zalety: możliwość uzyskania dużej biomasy modyfikacje postranslacyjne eksprymowanych białek transport eksprymowanych białek do pożywki Duża biomasa W przypadku hodowli

Bardziej szczegółowo

KLONOWANIE DNA REKOMBINACJA DNA WEKTORY

KLONOWANIE DNA REKOMBINACJA DNA WEKTORY KLONOWANIE DNA Klonowanie DNA jest techniką powielania fragmentów DNA DNA można powielać w komórkach (replikacja in vivo) W probówce (PCR) Do przeniesienia fragmentu DNA do komórek gospodarza potrzebny

Bardziej szczegółowo

TaqNova-RED. Polimeraza DNA RP20R, RP100R

TaqNova-RED. Polimeraza DNA RP20R, RP100R TaqNova-RED Polimeraza DNA RP20R, RP100R RP20R, RP100R TaqNova-RED Polimeraza DNA Rekombinowana termostabilna polimeraza DNA Taq zawierająca czerwony barwnik, izolowana z Thermus aquaticus, o przybliżonej

Bardziej szczegółowo

TaqNovaHS. Polimeraza DNA RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925

TaqNovaHS. Polimeraza DNA RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925 TaqNovaHS RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925 RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925 TaqNovaHS Polimeraza TaqNovaHS jest mieszaniną termostabilnej polimerazy DNA

Bardziej szczegółowo

Nowoczesne systemy ekspresji genów

Nowoczesne systemy ekspresji genów Nowoczesne systemy ekspresji genów Ekspresja genów w organizmach żywych GEN - pojęcia podstawowe promotor sekwencja kodująca RNA terminator gen Gen - odcinek DNA zawierający zakodowaną informację wystarczającą

Bardziej szczegółowo

Klonowanie molekularne Kurs doskonalący. Zakład Geriatrii i Gerontologii CMKP

Klonowanie molekularne Kurs doskonalący. Zakład Geriatrii i Gerontologii CMKP Klonowanie molekularne Kurs doskonalący Zakład Geriatrii i Gerontologii CMKP Etapy klonowania molekularnego 1. Wybór wektora i organizmu gospodarza Po co klonuję (do namnożenia DNA [czy ma być metylowane

Bardziej szczegółowo

Definicje. Białka rekombinowane (ang. recombinant proteins, r-proteins) Ukierunkowana mutageneza (ang. site-directed/site-specific mutagenesis)

Definicje. Białka rekombinowane (ang. recombinant proteins, r-proteins) Ukierunkowana mutageneza (ang. site-directed/site-specific mutagenesis) Definicje Białka rekombinowane (ang. recombinant proteins, r-proteins) Białka, które powstały w żywych organizmach (lub liniach komórkowych) w wyniku ekspresji rekombinowanego DNA. Rekombinowany DNA jest

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie Prowadzący: mgr inż. Joanna Tymeck-Mulik i mgr Lidia Gaffke. Część teoretyczna:

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie Prowadzący: mgr inż. Joanna Tymeck-Mulik i mgr Lidia Gaffke. Część teoretyczna: Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Katedra Biologii Molekularnej Przedmiot: Biologia Molekularna z Biotechnologią Biologia II rok ===============================================================================================

Bardziej szczegółowo

Wybrane techniki badania białek -proteomika funkcjonalna

Wybrane techniki badania białek -proteomika funkcjonalna Wybrane techniki badania białek -proteomika funkcjonalna Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich (lub prawie wszystkich) białek komórkowych Zalety analizy proteomu np. w porównaniu z analizą trankryptomu:

Bardziej szczegółowo

WYNALAZKI BIOTECHNOLOGICZNE W POLSCE. Ewa Waszkowska ekspert UPRP

WYNALAZKI BIOTECHNOLOGICZNE W POLSCE. Ewa Waszkowska ekspert UPRP WYNALAZKI BIOTECHNOLOGICZNE W POLSCE Ewa Waszkowska ekspert UPRP Źródła informacji w biotechnologii projekt SLING Warszawa, 9-10.12.2010 PLAN WYSTĄPIENIA Umocowania prawne Wynalazki biotechnologiczne Statystyka

Bardziej szczegółowo

Biologia medyczna, materiały dla studentów

Biologia medyczna, materiały dla studentów Zasada reakcji PCR Reakcja PCR (replikacja in vitro) obejmuje denaturację DNA, przyłączanie starterów (annealing) i syntezę nowych nici DNA (elongacja). 1. Denaturacja: rozplecenie nici DNA, temp. 94 o

Bardziej szczegółowo

KLONOWANIE DNA REKOMBINACJA DNA WEKTORY

KLONOWANIE DNA REKOMBINACJA DNA WEKTORY KLONOWANIE DNA Klonowanie DNA jest techniką powielania fragmentów DNA DNA można powielać w komórkach (replikacja in vivo) W probówce (PCR) Do przeniesienia fragmentu DNA do komórek gospodarza potrzebny

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie. Prowadzący: mgr Anna Pawlik i mgr Maciej Dylewski. Część teoretyczna:

Ćwiczenia 1 Wirtualne Klonowanie. Prowadzący: mgr Anna Pawlik i mgr Maciej Dylewski. Część teoretyczna: Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Biologia i Biologia Medyczna II rok Katedra Biologii Molekularnej Przedmiot: Biologia Molekularna z Biotechnologią ===============================================================================================

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 5 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych

Ćwiczenie 5 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych Ćwiczenie 5 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych Celem ćwiczenia jest sklonowanie fragmentu DNA (powielonego techniką PCR i wyizolowanego z żelu agarozowego na poprzednich zajęciach) do wektora plazmidowego

Bardziej szczegółowo

(86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego: , PCT/EP00/05666 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:

(86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego: , PCT/EP00/05666 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego: RZECZPOSPOLITA POLSKA () OPIS PATENTOWY (9) PL () 005 () Numer zgłoszenia: 35360 (3) B Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej () Data zgłoszenia: 0.06.000 (6) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:

Bardziej szczegółowo

Powodzenie reakcji PCR wymaga właściwego doboru szeregu parametrów:

Powodzenie reakcji PCR wymaga właściwego doboru szeregu parametrów: Powodzenie reakcji PCR wymaga właściwego doboru szeregu parametrów: dobór warunków samej reakcji PCR (temperatury, czas trwania cykli, ilości cykli itp.) dobór odpowiednich starterów do reakcji amplifikacji

Bardziej szczegółowo

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna.

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna. Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna. wersja 0916 6 x 20 transformacji Nr kat. 4010-120 Zestaw zawiera

Bardziej szczegółowo

(12) O PIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1

(12) O PIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) O PIS PATENTOWY (19) PL (11) 159844 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 273721 ( 2) Data zgłoszenia: 14.07.1988 (51) IntCl.5: C12N 15/51

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 7 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych

Ćwiczenie 7 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych Ćwiczenie 7 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych Celem ćwiczenia jest sklonowanie fragmentu DNA (powielonego techniką PCR i wyizolowanego z żelu agarozowego na poprzednich zajęciach) do wektora plazmidowego

Bardziej szczegółowo

Biologia Molekularna z Biotechnologią ===============================================================================================

Biologia Molekularna z Biotechnologią =============================================================================================== Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Biologia i Biologia Medyczna II rok Katedra Genetyki Molekularnej Bakterii Katedra Biologii i Genetyki Medycznej Przedmiot: Katedra Biologii Molekularnej Biologia

Bardziej szczegółowo

Ekspresja białek w komórkach ssaczych

Ekspresja białek w komórkach ssaczych Ekspresja białek w komórkach ssaczych Ekspresja białek w komórkach ssaczych Używane powszechnie w laboratoriach ssacze linie komórkowe są zmodyfikowane w celu pełnienia roli gospodarza ekspresji białek

Bardziej szczegółowo

SYLABUS. Wydział Biologiczno-Rolniczy. Katedra Biochemii i Biologii Komórki

SYLABUS. Wydział Biologiczno-Rolniczy. Katedra Biochemii i Biologii Komórki SYLABUS 1.1. PODSTAWOWE INFORMACJE O PRZEDMIOCIE/MODULE Nazwa przedmiotu/ modułu Biologia molekularna z elementami inżynierii genetycznej Kod przedmiotu/ modułu* Wydział (nazwa jednostki prowadzącej kierunek)

Bardziej szczegółowo

Sposób otrzymywania białek o właściwościach immunoregulatorowych. Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania fragmentów witellogeniny.

Sposób otrzymywania białek o właściwościach immunoregulatorowych. Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania fragmentów witellogeniny. 1 Sposób otrzymywania białek o właściwościach immunoregulatorowych Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania fragmentów witellogeniny. Wynalazek może znaleźć zastosowanie w przemyśle spożywczym i

Bardziej szczegółowo

PCR - ang. polymerase chain reaction

PCR - ang. polymerase chain reaction PCR - ang. polymerase chain reaction łańcuchowa (cykliczna) reakcja polimerazy Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu

Bardziej szczegółowo

Inżynieria genetyczna

Inżynieria genetyczna Inżynieria genetyczna i technologia rekombinowanego DNA Dr n. biol. Urszula Wasik Zakład Biologii Medycznej Inżynieria genetyczna świadoma, celowa, kontrolowana ingerencja w materiał genetyczny organizmów

Bardziej szczegółowo

PCR - ang. polymerase chain reaction

PCR - ang. polymerase chain reaction PCR - ang. polymerase chain reaction łańcuchowa (cykliczna) reakcja polimerazy Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu

Bardziej szczegółowo

Ryc 1. Budowa operonu laktozowego.

Ryc 1. Budowa operonu laktozowego. Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Biologia i Biologia medyczna II rok Katedra Biologii Molekularnej Przedmiot: Biologia Molekularna z Biotechnologią =================================================================

Bardziej szczegółowo

Polimeraza Taq (1U/ l) 1-2 U 1 polimeraza Taq jako ostatni składniki mieszaniny końcowa objętość

Polimeraza Taq (1U/ l) 1-2 U 1 polimeraza Taq jako ostatni składniki mieszaniny końcowa objętość Ćwiczenie 6 Technika PCR Celem ćwiczenia jest zastosowanie techniki PCR do amplifikacji fragmentu DNA z bakterii R. leguminosarum bv. trifolii TA1 (RtTA1). Studenci przygotowują reakcję PCR wykorzystując

Bardziej szczegółowo

POLIMERAZY DNA- PROCARYOTA

POLIMERAZY DNA- PROCARYOTA Enzymy DNA-zależne, katalizujące syntezę DNA wykazują aktywność polimerazy zawsze w kierunku 5 3 wykazują aktywność polimerazy zawsze wobec jednoniciowej cząsteczki DNA do utworzenia kompleksu z ssdna

Bardziej szczegółowo

Techniki molekularne w mikrobiologii SYLABUS A. Informacje ogólne

Techniki molekularne w mikrobiologii SYLABUS A. Informacje ogólne Techniki molekularne w mikrobiologii A. Informacje ogólne Elementy sylabusu Nazwa jednostki prowadzącej kierunek Nazwa kierunku studiów Poziom kształcenia Profil studiów Forma studiów Rodzaj Rok studiów

Bardziej szczegółowo

Inżynieria Genetyczna ćw. 3

Inżynieria Genetyczna ćw. 3 Materiały do ćwiczeń z przedmiotu Genetyka z inżynierią genetyczną D - blok Inżynieria Genetyczna ćw. 3 Instytut Genetyki i Biotechnologii, Wydział Biologii, Uniwersytet Warszawski, rok akad. 2018/2019

Bardziej szczegółowo

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 26/11

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 26/11 PL 214501 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 214501 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 391458 (51) Int.Cl. C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/29 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej

Bardziej szczegółowo

Escherichia coli. System pbad

Escherichia coli. System pbad Escherichia coli System pbad System pbad System pbad został skonstruowany w oparciu o elementy regulacji transkrypcji operonu arabinozowego E. coli Elementy regulacji transkrypcji operonu arabinozowego

Bardziej szczegółowo

BIOSYNTEZA ACYLAZY PENICYLINOWEJ. Ćwiczenia z Mikrobiologii Przemysłowej 2011

BIOSYNTEZA ACYLAZY PENICYLINOWEJ. Ćwiczenia z Mikrobiologii Przemysłowej 2011 BIOSYNTEZA ACYLAZY PENICYLINOWEJ Ćwiczenia z Mikrobiologii Przemysłowej 2011 Acylaza penicylinowa Enzym hydrolizuje wiązanie amidowe w penicylinach Reakcja przebiega wg schematu: acylaza Reszta: fenyloacetylowa

Bardziej szczegółowo

Dr. habil. Anna Salek International Bio-Consulting 1 Germany

Dr. habil. Anna Salek International Bio-Consulting 1 Germany 1 2 3 Drożdże są najprostszymi Eukariontami 4 Eucaryota Procaryota 5 6 Informacja genetyczna dla każdej komórki drożdży jest identyczna A zatem każda komórka koduje w DNA wszystkie swoje substancje 7 Przy

Bardziej szczegółowo

PCR - ang. polymerase chain reaction

PCR - ang. polymerase chain reaction PCR - ang. polymerase chain reaction łańcuchowa (cykliczna) reakcja polimerazy Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu

Bardziej szczegółowo

SYLABUS. Wydział Biologiczno-Rolniczy. Katedra Biochemii i Biologii Komórki

SYLABUS. Wydział Biologiczno-Rolniczy. Katedra Biochemii i Biologii Komórki SYLABUS 1.1. PODSTAWOWE INFORMACJE O PRZEDMIOCIE/MODULE Nazwa przedmiotu/ modułu Biologia molekularna Kod przedmiotu/ modułu* Wydział (nazwa jednostki prowadzącej kierunek) Nazwa jednostki realizującej

Bardziej szczegółowo

Wykład 14 Biosynteza białek

Wykład 14 Biosynteza białek BIOCHEMIA Kierunek: Technologia Żywności i Żywienie Człowieka semestr III Wykład 14 Biosynteza białek WYDZIAŁ NAUK O ŻYWNOŚCI I RYBACTWA CENTRUM BIOIMMOBILIZACJI I INNOWACYJNYCH MATERIAŁÓW OPAKOWANIOWYCH

Bardziej szczegółowo

47 Olimpiada Biologiczna

47 Olimpiada Biologiczna 47 Olimpiada Biologiczna Pracownia biochemiczna zasady oceniania rozwia zan zadan Część A. Identyfikacja zawartości trzech probówek zawierających cukry (0 21 pkt) Zadanie A.1 (0 13 pkt) Tabela 1 (0 7 pkt)

Bardziej szczegółowo

Screening, klonowanie, ekspresja i oczyszczanie białek

Screening, klonowanie, ekspresja i oczyszczanie białek Screening, klonowanie, ekspresja i oczyszczanie białek Kiedy gen jest znany Dostępna sekwencja DNA sekwencjonowanie genomu, biblioteki Dostępna sekwencja białka sekwencjonowanie białka Techniki pozyskania

Bardziej szczegółowo

wykład dla studentów II roku biotechnologii Andrzej Wierzbicki

wykład dla studentów II roku biotechnologii Andrzej Wierzbicki Genetyka ogólna wykład dla studentów II roku biotechnologii Andrzej Wierzbicki Uniwersytet Warszawski Wydział Biologii andw@ibb.waw.pl http://arete.ibb.waw.pl/private/genetyka/ 1. Gen to odcinek DNA odpowiedzialny

Bardziej szczegółowo

PL B1. UNIWERSYTET EKONOMICZNY W POZNANIU, Poznań, PL BUP 21/09. DARIA WIECZOREK, Poznań, PL RYSZARD ZIELIŃSKI, Poznań, PL

PL B1. UNIWERSYTET EKONOMICZNY W POZNANIU, Poznań, PL BUP 21/09. DARIA WIECZOREK, Poznań, PL RYSZARD ZIELIŃSKI, Poznań, PL PL 215965 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 215965 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 384841 (51) Int.Cl. C07D 265/30 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia:

Bardziej szczegółowo

PCR łańcuchowa reakcja polimerazy

PCR łańcuchowa reakcja polimerazy PCR łańcuchowa reakcja polimerazy PCR - ang. polymerase chain reaction Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu

Bardziej szczegółowo

POLIMERAZY DNA- PROCARYOTA

POLIMERAZY DNA- PROCARYOTA Enzymy DNA-zależne, katalizujące syntezę DNA wykazują aktywność polimerazy zawsze w kierunku 5 3 wykazują aktywność polimerazy zawsze wobec jednoniciowej cząsteczki DNA do utworzenia kompleksu z ssdna

Bardziej szczegółowo

Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich lub prawie wszystkich białek komórkowych

Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich lub prawie wszystkich białek komórkowych Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich lub prawie wszystkich białek komórkowych Zalety w porównaniu z analizą trankryptomu: analiza transkryptomu komórki identyfikacja mrna nie musi jeszcze oznaczać

Bardziej szczegółowo

PL B1. Kwasy α-hydroksymetylofosfonowe pochodne 2-azanorbornanu i sposób ich wytwarzania. POLITECHNIKA WROCŁAWSKA, Wrocław, PL

PL B1. Kwasy α-hydroksymetylofosfonowe pochodne 2-azanorbornanu i sposób ich wytwarzania. POLITECHNIKA WROCŁAWSKA, Wrocław, PL PL 223370 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 223370 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 407598 (51) Int.Cl. C07D 471/08 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia:

Bardziej szczegółowo

Wyznaczanie aktywności właściwej pleśniowej β-galaktozydazy

Wyznaczanie aktywności właściwej pleśniowej β-galaktozydazy Wyznaczanie aktywności właściwej pleśniowej β-galaktozydazy Instrukcja do zajęć laboratoryjnych z przedmiotu Biotechnologia Dla studentów kierunku Chemia specjalność Chemia Bioorganiczna Materiały zostały

Bardziej szczegółowo

Najważniejsze z nich to: enzymy restrykcyjne wektory DNA inne enzymy np. ligazy, fosfatazy, polimerazy, nukleazy

Najważniejsze z nich to: enzymy restrykcyjne wektory DNA inne enzymy np. ligazy, fosfatazy, polimerazy, nukleazy Aby manipulować genami niezbędne są odpowiednie narzędzia molekularne, które pozwalają uzyskać tzw. zrekombinowane DNA (umożliwiają rekombinację materiału genetycznego in vitro czyli w próbówce) Najważniejsze

Bardziej szczegółowo

E.coli Transformer Kit

E.coli Transformer Kit E.coli Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli. Metoda chemiczna. wersja 1117 6 x 40 transformacji Nr kat. 4020-240 Zestaw zawiera komplet odczynników

Bardziej szczegółowo

PL B1. AKADEMIA GÓRNICZO-HUTNICZA IM. STANISŁAWA STASZICA, Kraków, PL BUP 21/10. MARCIN ŚRODA, Kraków, PL

PL B1. AKADEMIA GÓRNICZO-HUTNICZA IM. STANISŁAWA STASZICA, Kraków, PL BUP 21/10. MARCIN ŚRODA, Kraków, PL RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 212156 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 387737 (51) Int.Cl. C03C 1/00 (2006.01) B09B 3/00 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data

Bardziej szczegółowo

RT31-020, RT , MgCl 2. , random heksamerów X 6

RT31-020, RT , MgCl 2. , random heksamerów X 6 RT31-020, RT31-100 RT31-020, RT31-100 Zestaw TRANSCRIPTME RNA zawiera wszystkie niezbędne składniki do przeprowadzenia syntezy pierwszej nici cdna na matrycy mrna lub całkowitego RNA. Uzyskany jednoniciowy

Bardziej szczegółowo

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 04/14. SYLWIA OKOŃ, Dąbrowica, PL KRZYSZTOF KOWALCZYK, Motycz, PL

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 04/14. SYLWIA OKOŃ, Dąbrowica, PL KRZYSZTOF KOWALCZYK, Motycz, PL PL 220315 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 220315 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 400252 (22) Data zgłoszenia: 06.08.2012 (51) Int.Cl.

Bardziej szczegółowo

ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN

ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN CZĘŚĆ TEORETYCZNA Mechanizmy promujące wzrost rośli (PGP) Metody badań PGP CZĘŚĆ PRAKTYCZNA 1. Mechanizmy promujące wzrost roślin. Odczyt. a) Wytwarzanie

Bardziej szczegółowo

Najważniejsze z nich to: enzymy restrykcyjne wektory DNA inne enzymy np. ligazy, fosfatazy, polimerazy, nukleazy

Najważniejsze z nich to: enzymy restrykcyjne wektory DNA inne enzymy np. ligazy, fosfatazy, polimerazy, nukleazy Aby manipulować genami niezbędne są odpowiednie narzędzia molekularne, które pozwalają uzyskać tzw. zrekombinowane DNA (umożliwiają rekombinację materiału genetycznego in vitro czyli w próbówce) Najważniejsze

Bardziej szczegółowo

Inwestycja w przyszłość czyli znaczenie ochrony własności przemysłowej dla współczesnej biotechnologii

Inwestycja w przyszłość czyli znaczenie ochrony własności przemysłowej dla współczesnej biotechnologii Inwestycja w przyszłość czyli znaczenie ochrony własności przemysłowej dla współczesnej biotechnologii Zdolność patentowa wynalazków biotechnologicznych aspekty praktyczne dr Małgorzata Kozłowska Ekspert

Bardziej szczegółowo

wykład dla studentów II roku biotechnologii Andrzej Wierzbicki

wykład dla studentów II roku biotechnologii Andrzej Wierzbicki Genetyka ogólna wykład dla studentów II roku biotechnologii Andrzej Wierzbicki Uniwersytet Warszawski Wydział Biologii andw@ibb.waw.pl http://arete.ibb.waw.pl/private/genetyka/ Budowa rybosomu Translacja

Bardziej szczegółowo

Inżynieria Genetyczna ćw. 1

Inżynieria Genetyczna ćw. 1 Materiały do ćwiczeń z przedmiotu Genetyka z inżynierią genetyczną D - blok Inżynieria Genetyczna ćw. 1 Instytut Genetyki i Biotechnologii, Wydział Biologii, Uniwersytet Warszawski, rok akad. 2018/2019

Bardziej szczegółowo

ĆWICZENIE 1 i 2 Modyfikacja geu wołowej beta-laktoglobuliny przy użyciu metody Overlap Extension PCR (wydłużania nakładających się odcinków)

ĆWICZENIE 1 i 2 Modyfikacja geu wołowej beta-laktoglobuliny przy użyciu metody Overlap Extension PCR (wydłużania nakładających się odcinków) ĆWICZENIE 1 i 2 Modyfikacja geu wołowej beta-laktoglobuliny przy użyciu metody Overlap Extension PCR (wydłużania nakładających się odcinków) Celem ćwiczenia jest wprowadzenie mutacji punktowej do genu

Bardziej szczegółowo

Making the impossible possible: the metamorphosis of Polish Biology Olympiad

Making the impossible possible: the metamorphosis of Polish Biology Olympiad Making the impossible possible: the metamorphosis of Polish Biology Olympiad Takao Ishikawa Faculty of Biology, University of Warsaw, Poland Performance of Polish students at IBO Gold Silver Bronze Merit

Bardziej szczegółowo

PL B1. POLITECHNIKA WARSZAWSKA, Warszawa, PL BUP 24/15. JOLANTA MIERZEJEWSKA, Warszawa, PL ALEKSANDRA MULARSKA, Ząbki, PL

PL B1. POLITECHNIKA WARSZAWSKA, Warszawa, PL BUP 24/15. JOLANTA MIERZEJEWSKA, Warszawa, PL ALEKSANDRA MULARSKA, Ząbki, PL PL 226680 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 226680 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 408170 (22) Data zgłoszenia: 09.05.2014 (51) Int.Cl.

Bardziej szczegółowo

Regulacja Ekspresji Genów

Regulacja Ekspresji Genów Regulacja Ekspresji Genów Wprowadzenie o Ekspresja genu jest to złożony proces jego transkrypcji do mrna, o Obróbki tego mrna, a następnie o Translacji do białka. 4/17/2019 2 4/17/2019 3 E 1 GEN 3 Promotor

Bardziej szczegółowo

PL B1. POLITECHNIKA GDAŃSKA, Gdańsk, PL BUP 19/09. MACIEJ KOKOT, Gdynia, PL WUP 03/14. rzecz. pat.

PL B1. POLITECHNIKA GDAŃSKA, Gdańsk, PL BUP 19/09. MACIEJ KOKOT, Gdynia, PL WUP 03/14. rzecz. pat. PL 216395 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 216395 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 384627 (51) Int.Cl. G01N 27/00 (2006.01) H01L 21/00 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej

Bardziej szczegółowo

Agenda: Wynalazek jako własnośd intelektualna. Co może byd wynalazkiem. Wynalazek biotechnologiczny. Ochrona patentowa

Agenda: Wynalazek jako własnośd intelektualna. Co może byd wynalazkiem. Wynalazek biotechnologiczny. Ochrona patentowa dr Bartosz Walter Agenda: Wynalazek jako własnośd intelektualna Co może byd wynalazkiem Wynalazek biotechnologiczny Ochrona patentowa Procedura zgłoszenia patentowego Gdzie, kiedy i jak warto patentowad

Bardziej szczegółowo

Metody odczytu kolejności nukleotydów - sekwencjonowania DNA

Metody odczytu kolejności nukleotydów - sekwencjonowania DNA Metody odczytu kolejności nukleotydów - sekwencjonowania DNA 1. Metoda chemicznej degradacji DNA (metoda Maxama i Gilberta 1977) 2. Metoda terminacji syntezy łańcucha DNA - klasyczna metoda Sangera (Sanger

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 3 PCR i trawienie DNA enzymami restrykcyjnymi

Ćwiczenie 3 PCR i trawienie DNA enzymami restrykcyjnymi Uniwersytet Gdański, Wydział Biologii Katedra Genetyki Molekularnej Bakterii Katedra Biologii i Genetyki Medycznej Katedra Biologii Molekularnej Biologia i Biologia Medyczna II rok Przedmiot: Biologia

Bardziej szczegółowo

PCR - ang. polymerase chain reaction

PCR - ang. polymerase chain reaction PCR - ang. polymerase chain reaction Technika PCR umożliwia otrzymywanie dużej liczby kopii specyficznych fragmentów DNA (czyli amplifikację zwielokrotnienie fragmentu DNA) Jest to reakcja powielania (replikacji)

Bardziej szczegółowo

Zapytanie ofertowe na zakup usługi badawczej

Zapytanie ofertowe na zakup usługi badawczej Gdańsk 10.12.20115r Zapytanie ofertowe na zakup usługi badawczej W związku z ubieganiem się przez Zamawiającego Blirt S.A. o dofinansowanie projektu w ramach II osi priorytetowej: Wsparcie otoczenia i

Bardziej szczegółowo

PL B1. ZACHODNIOPOMORSKI UNIWERSYTET TECHNOLOGICZNY W SZCZECINIE, Szczecin, PL BUP 06/14

PL B1. ZACHODNIOPOMORSKI UNIWERSYTET TECHNOLOGICZNY W SZCZECINIE, Szczecin, PL BUP 06/14 PL 222179 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 222179 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 400696 (22) Data zgłoszenia: 10.09.2012 (51) Int.Cl.

Bardziej szczegółowo

Recenzja rozprawy doktorskiej mgr Olgi Żołnierkiewicz pt. Chemiczna synteza zoptymalizowanego genu taqiirm:

Recenzja rozprawy doktorskiej mgr Olgi Żołnierkiewicz pt. Chemiczna synteza zoptymalizowanego genu taqiirm: Dr hab. inż. Paweł Sachadyn Katedra Biotechnologii Molekularnej i Mikrobiologii Wydział Chemiczny Politechniki Gdańskiej ul. Narutowicza 11/12, 80-233 Gdańsk email: psach@pg.gda.pl, tel. 58 347 2671 Gdańsk,

Bardziej szczegółowo

Laboratorium Pomorskiego Parku Naukowo-Technologicznego Gdynia.

Laboratorium Pomorskiego Parku Naukowo-Technologicznego Gdynia. Laboratorium Pomorskiego Parku Naukowo-Technologicznego Gdynia www.ppnt.pl/laboratorium Laboratorium jest częścią modułu biotechnologicznego Pomorskiego Parku Naukowo Technologicznego Gdynia. poprzez:

Bardziej szczegółowo

Biosynteza witamin. B 2, B 12, A (karotenów), D 2

Biosynteza witamin. B 2, B 12, A (karotenów), D 2 Biosynteza witamin B 2, B 12, A (karotenów), D 2 Witamina B 2 ryboflawina 1. szczepy produkujące do 100 mg witaminy na 1L pożywki 2. szczepy produkujące od 500 do 1000 mg/1l 3. szczepy wytwarzające do

Bardziej szczegółowo

PROJEKT WSPÓŁFINANSOWANY PRZEZ UNIĘ EUROPEJSKĄ Z EUROPEJSKIEGO FUNDUSZU ROZWOJU REGIONALNEGO 1 z 7

PROJEKT WSPÓŁFINANSOWANY PRZEZ UNIĘ EUROPEJSKĄ Z EUROPEJSKIEGO FUNDUSZU ROZWOJU REGIONALNEGO 1 z 7 Poznań, dnia 28.04.2014 r. BioVentures Institute Spółka z ograniczoną odpowiedzialnością ul. Promienista 83 60 141 Poznań Zapytanie ofertowe nr 01/2014 Projekt Nowa technologia wytwarzania szczepionek

Bardziej szczegółowo

Pytania Egzamin magisterski

Pytania Egzamin magisterski Pytania Egzamin magisterski Międzyuczelniany Wydział Biotechnologii UG i GUMed 1. Krótko omów jakie informacje powinny być zawarte w typowych rozdziałach publikacji naukowej: Wstęp, Materiały i Metody,

Bardziej szczegółowo

Wybrane techniki badania białek -proteomika funkcjonalna

Wybrane techniki badania białek -proteomika funkcjonalna Wybrane techniki badania białek -proteomika funkcjonalna Proteomika: umożliwia badanie zestawu wszystkich (lub prawie wszystkich) białek komórkowych Zalety analizy proteomu w porównaniu z analizą trankryptomu:

Bardziej szczegółowo

(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP 1706494 (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: 10.01.2005 05704663.3 (13) (51) T3 Int.Cl. C12N 15/62 (2006.01)

Bardziej szczegółowo

PL B1. Sposób usuwania zanieczyszczeń z instalacji produkcyjnych zawierających membrany filtracyjne stosowane w przemyśle spożywczym

PL B1. Sposób usuwania zanieczyszczeń z instalacji produkcyjnych zawierających membrany filtracyjne stosowane w przemyśle spożywczym PL 214736 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 214736 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 388142 (51) Int.Cl. B01D 65/06 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia:

Bardziej szczegółowo

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 170477 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 298926 (51) IntCl6: C22B 1/24 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia: 13.05.1993 (54)

Bardziej szczegółowo

Najważniejsze z nich to: enzymy restrykcyjne wektory DNA inne enzymy np. ligazy, fosfatazy, polimerazy, kinazy, nukleazy

Najważniejsze z nich to: enzymy restrykcyjne wektory DNA inne enzymy np. ligazy, fosfatazy, polimerazy, kinazy, nukleazy Aby manipulować genami niezbędne są odpowiednie narzędzia molekularne, które pozwalają uzyskać tzw. zrekombinowane DNA (umożliwiają rekombinację materiału genetycznego in vitro czyli w próbówce) Najważniejsze

Bardziej szczegółowo

PL 198188 B1. Instytut Chemii Przemysłowej im.prof.ignacego Mościckiego,Warszawa,PL 03.04.2006 BUP 07/06

PL 198188 B1. Instytut Chemii Przemysłowej im.prof.ignacego Mościckiego,Warszawa,PL 03.04.2006 BUP 07/06 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 198188 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 370289 (51) Int.Cl. C01B 33/00 (2006.01) C01B 33/18 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22)

Bardziej szczegółowo

Bloki licencjackie i studia magisterskie na Kierunkach: Biotechnologia, specjalność Biotechnologia roślinna oraz Genetyka

Bloki licencjackie i studia magisterskie na Kierunkach: Biotechnologia, specjalność Biotechnologia roślinna oraz Genetyka Bloki licencjackie i studia magisterskie na Kierunkach: Biotechnologia, specjalność Biotechnologia roślinna oraz Genetyka INSTYTUT BIOLOGII EKSPERYMENTALNEJ W Katedrze Genetyki Ogólnej, Biologii Molekularnej

Bardziej szczegółowo

Biologia molekularna z genetyką

Biologia molekularna z genetyką Biologia molekularna z genetyką P. Golik i M. Koper Konwersatorium 3: Analiza genetyczna eukariontów Saccharomyces cerevisiae Makrokierunek: Bioinformatyka i Biologia Systemów; 2016 Opracowano na podstawie

Bardziej szczegółowo

PL B1. Sposób epoksydacji (1Z,5E,9E)-1,5,9-cyklododekatrienu do 1,2-epoksy-(5Z,9E)-5,9-cyklododekadienu

PL B1. Sposób epoksydacji (1Z,5E,9E)-1,5,9-cyklododekatrienu do 1,2-epoksy-(5Z,9E)-5,9-cyklododekadienu PL 212327 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 212327 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 383638 (22) Data zgłoszenia: 29.10.2007 (51) Int.Cl.

Bardziej szczegółowo

Zestawy do izolacji DNA i RNA

Zestawy do izolacji DNA i RNA Syngen kolumienki.pl Gotowe zestawy do izolacji i oczyszczania kwasów nukleinowych Zestawy do izolacji DNA i RNA Katalog produktów 2012-13 kolumienki.pl Syngen Biotech Sp. z o.o., 54-116 Wrocław, ul. Ostródzka

Bardziej szczegółowo

PL B1. Sposób i układ do modyfikacji widma sygnału ultraszerokopasmowego radia impulsowego. POLITECHNIKA GDAŃSKA, Gdańsk, PL

PL B1. Sposób i układ do modyfikacji widma sygnału ultraszerokopasmowego radia impulsowego. POLITECHNIKA GDAŃSKA, Gdańsk, PL PL 219313 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 219313 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 391153 (51) Int.Cl. H04B 7/00 (2006.01) H04B 7/005 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej

Bardziej szczegółowo

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Zakład Biologii Molekularnej Wydział Farmaceutyczny, WUM ul. Banacha 1, 02-097 Warszawa IZOLACJA DNA Z HODOWLI KOMÓRKOWEJ.

Bardziej szczegółowo

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli Wersja 0211 6x40 transformacji Nr kat. 4020-240 Zestaw zawiera komplet odczynników do przygotowania sześciu

Bardziej szczegółowo

Ligazy. Zastosowanie ligazy w inżynierii genetycznej:

Ligazy. Zastosowanie ligazy w inżynierii genetycznej: Ligazy Katalizują tworzenie wiązań fosfodiestrowych między sąsiednimi grupami 3 OH i 5 PO 4 w kwasach nukleinowych DNA lub RNA. W reakcji tworzą się wysokoenergetyczne pośredniki z udziałem NAD + lub ATP

Bardziej szczegółowo

PL B1. POLWAX SPÓŁKA AKCYJNA, Jasło, PL BUP 21/12. IZABELA ROBAK, Chorzów, PL GRZEGORZ KUBOSZ, Czechowice-Dziedzice, PL

PL B1. POLWAX SPÓŁKA AKCYJNA, Jasło, PL BUP 21/12. IZABELA ROBAK, Chorzów, PL GRZEGORZ KUBOSZ, Czechowice-Dziedzice, PL PL 214177 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 214177 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 394360 (51) Int.Cl. B22C 1/02 (2006.01) C08L 91/08 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej

Bardziej szczegółowo

PL B1. Nowy szczep bakterii Bacillus subtilis i sposób otrzymywania α-amylazy przy użyciu nowego szczepu

PL B1. Nowy szczep bakterii Bacillus subtilis i sposób otrzymywania α-amylazy przy użyciu nowego szczepu RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 211354 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 374396 (22) Data zgłoszenia: 14.04.2005 (51) Int.Cl. C12N 1/20 (2006.01)

Bardziej szczegółowo

ENZYMY RESTRYKCYJNE ENZYMY RESTRYKCYJNE CZYM RÓŻNIĄ SIĘ POSZCZEGÓLNE ENZYMY? nazewnictwo: EcoRV

ENZYMY RESTRYKCYJNE ENZYMY RESTRYKCYJNE CZYM RÓŻNIĄ SIĘ POSZCZEGÓLNE ENZYMY? nazewnictwo: EcoRV ENZYMY RESTRYKCYJNE Enzymy z klasy endonukleaz (hydrolaz), wykazujące powinowactwo do specyficznych fragmentów dwuniciowych cząsteczek DNA i hydrolizujące wiązania fosfodiestrowe w obu niciach Naturalnie

Bardziej szczegółowo

Biologia Molekularna Podstawy

Biologia Molekularna Podstawy Biologia Molekularna Podstawy Budowa DNA Budowa DNA Zasady: Purynowe: adenina i guanina Pirymidynowe: cytozyna i tymina 2 -deoksyryboza Grupy fosforanowe Budowa RNA Budowa RNA Zasady: purynowe: adenina

Bardziej szczegółowo

Chemiczne składniki komórek

Chemiczne składniki komórek Chemiczne składniki komórek Pierwiastki chemiczne w komórkach: - makroelementy (pierwiastki biogenne) H, O, C, N, S, P Ca, Mg, K, Na, Cl >1% suchej masy - mikroelementy Fe, Cu, Mn, Mo, B, Zn, Co, J, F

Bardziej szczegółowo

Przeciwciała poliklonalne przeciwko białkom Helicobacter pylori oraz sposób ich wytwarzania. (74) Pełnomocnik:

Przeciwciała poliklonalne przeciwko białkom Helicobacter pylori oraz sposób ich wytwarzania. (74) Pełnomocnik: RZECZPOSPOLITA POLSKA Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 201982 (21) Numer zgłoszenia: 361069 (22) Data zgłoszenia: 03.07.2003 (13) B1 (51) Int.Cl. A61K 39/40 (2006.01)

Bardziej szczegółowo

Ćwiczenie 2. Identyfikacja płci z wykorzystaniem genu amelogeniny (AMGXY)

Ćwiczenie 2. Identyfikacja płci z wykorzystaniem genu amelogeniny (AMGXY) Ćwiczenie 2. Identyfikacja płci z wykorzystaniem genu amelogeniny (AMGXY) Cel ćwiczenia Amplifikacja fragmentu genu amelogeniny, znajdującego się na chromosomach X i Y, jako celu molekularnego przydatnego

Bardziej szczegółowo

PL B1. UNIWERSYTET IM. ADAMA MICKIEWICZA W POZNANIU, Poznań, PL BUP 24/17

PL B1. UNIWERSYTET IM. ADAMA MICKIEWICZA W POZNANIU, Poznań, PL BUP 24/17 RZECZPOSPOLITA POLSKA (2) OPIS PATENTOWY (9) PL () 229709 (3) B (2) Numer zgłoszenia: 49663 (5) Int.Cl. C07F 7/30 (2006.0) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia: 05.2.206 (54)

Bardziej szczegółowo

PL 216012 B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWIU, Wrocław, PL 11.10.2010 BUP 21/10

PL 216012 B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWIU, Wrocław, PL 11.10.2010 BUP 21/10 PL 216012 B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 216012 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 391223 (22) Data zgłoszenia: 14.05.2010 (51) Int.Cl.

Bardziej szczegółowo

Transformacja pośrednia składa się z trzech etapów:

Transformacja pośrednia składa się z trzech etapów: Transformacja pośrednia składa się z trzech etapów: 1. Otrzymanie pożądanego odcinka DNA z materiału genetycznego dawcy 2. Wprowadzenie obcego DNA do wektora 3. Wprowadzenie wektora, niosącego w sobie

Bardziej szczegółowo

(86)Data i numer zgłoszenia międzynarodowego: 29.12.1994,PCT/US94/13268

(86)Data i numer zgłoszenia międzynarodowego: 29.12.1994,PCT/US94/13268 RZECZPOSPOLITA POLSKA Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (12) OPIS PATENTOWY (19)PL (11)180818 (13) B1 (21 ) Numer zgłoszenia: 321039 (22) Data zgłoszenia: 29.12.1994 (86)Data i numer zgłoszenia

Bardziej szczegółowo

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) (13) B1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 162995 (13) B1 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 283854 (22) Data zgłoszenia: 16.02.1990 (51) IntCl5: C05D 9/02 C05G

Bardziej szczegółowo