JNY METASTABILNE I FRAGMENTACJA PD WPŁYWEM ENERGII ZDERZEŃ
Widmo EI kwasu octowego 100 Jony fragmentacyjne 43 45 Intensywność względna 50 15 C H 3 C M = 60 H Jon molekularny 60 0 29 18 31 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 m/z
Terminologia procesów fragmentacji M + P + + N jon macierzysty (parent ion lub precursor ion) jon potomny (daughter ion lub product ion) fragment obojętny (neutral fragment) Energia jonów fragmentacyjnych M + P + + N E M = E P + E N (jeśli pominąć energię uwalnianą E P = E M M M P M w reakcji fragmentacji
Rodzaje pomiarów MS/MS Widmo jonów potomnych Widmo jonów macierzystych Q1 Product Ion Scan Q3 Q1 Precursor Ion Scan Q3 m 1 m 2 m 1 Wybór jonu macierzystego Skanowanie jonów potomnych Widmo jonów tracących fragment obojętny o stałej masie Q1 Neutral Loss Scan Q3 m 1 m 2 m 1 Skanowanie jonów macierzystych Wybór jonu potomnego Śledzenie wybranych reakcji fragmentacji Multiple Reaction Monitoring (MRM) m 1 m 2 Skanowanie Q1 i Q3 ze stałą różnicą masy m m 1 - m m 2 - m m 1 m 2 (m 3, m 4...) Wybór jonu macierzystego Wybór jonu potomnego (lub kilku jonów potomnych)
Rozkład energii populacji jonów molekularnych w źródle jonów EI P(E) Fragmentacja w źródle jonów M + Czas przebywania jonu w źródle: 1 10-6 s Czas przelotu jonu przez spektrometr AMD 604: M = 100 u 2.4 10-4 s M = 400 u 1 10-3 s E I (Energia jonizacji) Jony metastabilne E
Metody badania fragmentacji w spektrometrze o podwójnym ogniskowaniu i geometrii BE Drugi obszar wolny od pola (II FFR) Widma jonów potomnych MIKES (Mass-analyzed Ion Kinetic Energy Spectrum) Analizator magnetyczny...... Analizator elektryczny Szczelina wejściowa...... Komory zderzeń Pierwszy obszar wolny od pola (I FFR) Szczelina wyjściowa Źródło jonów Widma jonów potomnych B/E=const. Widma jonów macierzystych B 2 /E = const. Widma jonów tracących fragment obojętny o stałej masie Powielacz elektronów
Widmo EI 1-metylo-4-nitrobenzosultamu 100 117.2 228.2 90 N 80 147.1 S 2 Intensity (%age) 70 60 50 40 51.1 65.3 77.2 91.2 N 2 M = 228 30 39.1 164.2 20 10 104.2 133.2 198.3 212.3 0 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 Low Resolution M/z
Widma jonów potomnych MIKE i CA-MIKE dla jonu 228 100 117.2 228.2 90 147.1 EI 80 Intensity (Volts) 0.70 0.60 0.50 0.40 0.30 0.20 Intensity (%age) 70 60 50 40 30 20 10 0 39.1 65.3 91.2 104.2 164.2 198.3 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 Low Resolution M/z 164 MIKE dla jonu 228 211 227.9 0.10 76.5 90.4 116.9 147 0.00 60 80 100 120 140 160 180 200 220 Low Resolution M/z Intensity (Volts) 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 64.5 76.3 90.6 104.3 116.9 133.1 146.9 163.9 CA-MIKE dla jonu 228 180.8 210.8 227.9 0.00 60 80 100 120 140 160 180 200 220 Low Resolution M/z
Intensity (Volts) Widma jonów potomnych B/E i CA-B/E dla jonu 228 100 117.2 228.2 90 147.1 EI 80 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 Intensity (%age) 70 60 50 40 30 20 10 0 39.1 65.3 91.2 104.2 164.2 198.3 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 Low Resolution M/z 147.1 164.1 183 B/E dla jonu 228 211 227.9 0.0 Intensity (Volts) 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 60 80 100 120 140 160 180 200 220 Low Resolution M/z 65.2 76.1 91.2 104.2 107.1 117.1 121.1 133.2 136.2 146.2 147.1 164.1 180 CA-B/E dla jonu 228 181 197 211 227.9 0.0 60 80 100 120 140 160 180 200 220 Low Resolution M/z
Widma jonów macierzystych B 2 /E dla jonów 147 i 104 Intensity (Volts) 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 147.1 164.4 B 2 /E dla jonu 147 Intensity (%age) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 39.1 65.3 91.2 104.2 117.2 147.1 164.2 EI 198.3 228.2 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 Low Resolution M/z 0.2 0.0 169.5 175.1 182 183.7 191.1 194.8 204.2 207.9 211.7 216.3 228.4 150 160 170 180 190 200 210 220 230 Low Resolution M/z 0.080 0.070 0.060 104 105.1 147.4 B 2 /E dla jonu 104 Intensity (Volts) 0.050 0.040 0.030 0.020 0.010 120.5 122.2 132.1 137.8 166.2 200.9 204.3 212.4 0.000 100 120 140 160 180 200 220 Low Resolution M/z
Widma utraty obojętnego fragmentu o masie 64 i 28 Intensity (%age) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Intensity (%age) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 39.1 65.3 91.2 104.2 117.2 147.1 164.2 EI 198.3 228.2 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 Low Resolution M/z 182.4 211.1 CNL dla 64 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 Low Resolution M/z 228 0.70 0.60 119.1 CNL dla 28 Intensity (Volts) 0.50 0.40 0.30 0.20 0.10 65 78 92 93 105 0.00 60 80 100 120 140 160 180 200 220 Low Resolution M/z
SPEKTRMETR MAS TYPU API 365
+MS2 (137.00) CE (10): 0.301 to 1.052 min from Sample 1 (frag 137 CE 10 15 20 25) of beta... Max. 7.7e5 cps. 137.2 7.5e5 7.0e5 6.5e5 6.0e5 5.5e5 CE = 10V M + H + Zależność stopnia fragmentacji od energii zderzeń 5.0e5 4.5e5 4.0e5 3.5e5 3.0e5 2.5e5 2.0e5 1.5e5 1.0e5 5.0e4 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 m/z, amu 94.1 106.1 + N N H H [M + H + ] = 137 +MS2 (137.00) CE (10): 1.903 to 2.655 min from Sample 1 (frag 137 CE 10 15 20 25) of beta... Max. 4.9e5 cps. +MS2 (137.00) CE (10): 4.207 to 4.958 min from Sample 1 (frag 137 CE 10 15 20 25) of beta... Max. 3.9e5 cps. 4.9e5 4.5e5 4.0e5 3.5e5 3.0e5 2.5e5 2.0e5 1.5e5 1.0e5 5.0e4 CE = 15V 44.1 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 m/z, amu 94.1 106.1 M + H + 137.2 4.0e5 3.8e5 3.6e5 3.4e5 3.2e5 3.0e5 2.8e5 2.6e5 2.4e5 2.2e5 2.0e5 1.8e5 1.6e5 1.4e5 1.2e5 1.0e5 8.0e4 6.0e4 4.0e4 2.0e4 CE = 25V 44.1 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 m/z, amu 94.1 106.0 M + H + 96.0 137.2
Zależność stopnia fragmentacji od energii zderzeń -MS2 (227.20): 0.150 to 1.503 min from Sample 2 (frag 227 CE 10 15 20 25) of 1K1686.wiff,... Max. 8.2e5 cps. -MS2 (227.20): 3.005 to 4.257 min from Sample 2 (frag 227 CE 10 15 20 25) of 1K1686.wiff,... Max. 2.4e5 cps. 8.0e5 7.5e5 7.0e5 6.5e5 6.0e5 5.5e5 5.0e5 4.5e5 4.0e5 CE = 10V N S 2 [M H] 227.0 2.4e5 2.2e5 2.0e5 1.8e5 1.6e5 1.4e5 1.2e5 CE = 20V 151.0 179.0 [M H] 227.0 3.5e5 3.0e5 2.5e5 2.0e5 1.5e5 1.0e5 5.0e4 -MS2 (227.20): 1.703 to 2.955 min from Sample 2 (frag 227 CE 10 15 20 25) of 1K1686.wiff,... 4.3e5 4.2e5 4.0e5 3.8e5 3.6e5 3.4e5 3.2e5 3.0e5 2.8e5 2.6e5 2.4e5 2.2e5 2.0e5 1.8e5 1.6e5 1.4e5 1.2e5 1.0e5 8.0e4 6.0e4 4.0e4 2.0e4 N 2 M = 228 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 m/z, amu CE = 15V 66.0 90.9 104.0 150.9 91.0 104.0 118.0 Max. 4.3e5 cps. 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 m/z, amu 151.0 179.1 179.0 [M H] 227.0 1.0e5 8.0e4 6.0e4 4.0e4 2.0e4 90.9 104.1 65.9 118.0 105.9 132.1 45.0 92.0 145.1 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 m/z, amu 161.0 -MS2 (227.20): 4.508 to 5.760 min from Sample 2 (frag 227 CE 10 15 20 25) of 1K1686.wiff,... 2.6e5 2.4e5 2.2e5 2.0e5 1.8e5 1.6e5 1.4e5 1.2e5 1.0e5 8.0e4 6.0e4 4.0e4 2.0e4 CE = 25V 90.9 104.1 Max. 2.6e5 cps. 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 m/z, amu 151.0 46.0 132.0 66.0 106.0 121.1 161.2 92.0 179.0 [M H] 226.9
Praca w trybie MS Spektrometr typu Q-TF Praca w trybie MS/MS
Spektrometr Q-TF z analizatorem TF typu W
Widma fragmentacji peptydu (Q-TF)
Widma fragmentacji peptydu (Q-TF)
Spektrometr ESI - Ion Trap firmy Agilent
Widma kolejnych fragmentacji glikozydu (pułapka jonowa LCQ; jony ujemne)
Fragmentacja w źródle jonów electrospray (cone voltage fragmentation) Gaz rozpylający (N 2 ) Dysza Płytka osłonowa Ciśnienie atmosferyczne bszar fragmentacji U Zbierak Declustering potential lub nozzle potential lub skimmer potential Q0 - -- - - - -- -- - - -- -- -- -- -- -- -- -- - --- - - - - - ~ 2 Torr 8 x 10-3 Torr Roztwór próbki Przechodzenie jonów do fazy gazowej Gaz osłonowy (N 2 ) Pompa wstępna Pompa turbomolekularna
620.81 Cone voltage fragmentation 620.81 [M+2H + ] 2+ MARINER Nozzle potential 100V 621.31 621.81 622.31 622.81 149.02 301.15 433.24 631.81 860.41 [M+H + ] + 100 360 620 880 1140 1400 1240.58 B 2 A 249.1 2 221.1 620.8 [M+2H + ] 2+ Y 8 806.4 MARINER Nozzle potential 280V 556.3 176.1 631.8 642.8 Y 3 Y 4 B 3 B 4 Y 6 Y 7 719.4 653.8 230.1 435.2 522.2 B 1262.6 386.2 499.3 565.3 611.8 8 1284.6 667.3 1011.5 100 360 620 880 1140 1400 Y 9 992.5 [M+H + ] + 1240.6 [M+Na + ] +
B 2 A 249.1 2 221.1 Widma MS/MS peptydu (M = 1239.6) 620.8 [M+2H + ] 2+ Y 8 806.4 MARINER (ESI-TF) Nozzle potential 280V 556.3 176.1 631.8 642.8 Y 3 Y 4 B 3 B 4 Y 6 Y 7 719.4 653.8 230.1 435.2 522.2 B 1262.6 386.2 499.3 565.3 611.8 8 1284.6 667.3 1011.5 100 360 620 880 1140 1400 Y 9 992.5 [M+H + ] + 1240.6 [M+Na + ] + 249.2 B 2 [M+2H + ] 2+ 621.0 API 365 (ESI-QQQ) Product Ion Scan dla jonu m/z 621 [M+2H + ] 2+ Y Y 8 6 806.6 Y 556.3 3 B 3 230.2 435.3 A 2 Y 7 Y 9 221.2 Y 4 B 4 719.5 992.6 386.3 522.3 504.3 667.3 B B B 6 8 A 611.8 7 159.3 3 742.3 1011.5 407.4 855.4 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400
Chromatografia gazowa sprzężona ze spektrometrią mas GC/MS
Problemy związane z techniką GC/MS Problemy aparaturowe Chromatograf gazowy Spektrometr mas Próbka w formie pary rozcieńczonej dużą ilością gazu EI: praca w wysokiej próżni CI: konieczność użycia gazu jonizującego ESI: wprowadzanie próbki w roztworze APCI: wprowadzanie próbki w roztworze rozpuszczalnika odpowiedniego do CI Problemy do rozwiązania: pozbycie się dużej ilości gazu nośnego szybkie skanowanie graniczenia dotyczące próbki Lotność (ew. po derywatyzacji) dporność na wysoką temperaturę
Budowa zestawu chromatograf gazowy spektrometr mas (GC/MS) strzyka wka z próbką komora termostatowana kolumna kapilarna źródło jonów linie transmisji danych hel Chromatograf gazowy Spektrometr mas Komputer
Spektrometr mas z analizatorem kwadrupolowym Źródło jonów EI Analizator kwadrupolowy Detektor do pompy do pompy sygnał do wzmacniacza
Analiza GC/MS mieszaniny wzorcowej Abundance 3500000 3000000 5.28 6.43 TIC: EVALDEM.D 7.74 9.78 2500000 2000000 1500000 1000000 500000 Time--> 0 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 Abundance 600000 Average of 7.713 to 7.753 min.: EVALDEM.D (-) 188 550000 500000 450000 400000 350000 300000 250000 200000 150000 100000 50000 0 m/z--> 27 76 152 63 94 126 51 39 86 102 113 136 162 177 20 30 40 50 60 70 80 90 100110120130140150160170180190
Identyfikacja związku z wykorzystaniem biblioteki widm masowych Abundance 9000 Average of 7.713 to 7.753 min.: EVALDEM.D (-) 188 Widmo zmierzone 8000 7000 6000 5000 4000 3000 152 2000 1000 0 m/z--> Abundance 76 63 51 94 126 27 39 86 102 113 136 162 177 20 30 40 50 60 70 80 90 100110120130140150160170180190 Widmo biblioteczne m/z--> 9000 8000 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000 0 #72704: 3-Chlorobiphenyl $$ 1,1'-Biphenyl, 3-chloro- (CAS) 188 152 76 63 51 39 94 126 86 102 113 136 162 173 20 30 40 50 60 70 80 90 100110120130140150160170180190 Cl
Chromatogram gazowy mieszaniny nitrotoluenów 9.38 10.43 N2 HN 3 + + H 2 S 4 N 2 N 2 10.04 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00
Chromatogram GC/MS olejku cytrynowego. Składniki zidentyfikowano na podstawie biblioteki widm Wiley a α-pinen (96 %) 2.33 β-pinen (97 %) 3.17 sabinen (97 %) mircen 3.33 (96 %) 3.96 4.78 limonen (99 %) γ-terpinen (97 %) 5.82 linalool (97 %) 11.57 octan linalylu (91 %) 11.72 12.12 α-bergamoten (98 %) 12.30 β-kariofilen (99 %) 11.50 12.00 12.50 13.00 13.50 14.00 p-cymen (97 %) α-terpinolen 11.57 6.40 (98 %) 12.12 6.66 β-bisabolen (95 %) Z-cytral (97 %) 13.52 α-terpineol (91 %) 13.69 13.52 14.07 geranial (96 %) 14.19 14.19 octan geranylu (91 %) 14.45 14.45 14.50 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 min. Liczby w nawiasach określają w procentach współczynnik zgodności widma zmierzonego i bibliotecznego
Chromatogram całkowitego prądu jonowego i chromatogram dla wybranej masy jonu
Chromatogramy dla wybranych mas w warunkach pomiaru wysokiej rozdzielczości
Analiza GC/MS 1-metylo-4-nitrobenzosultamu N S 2 N - S 2 N A N 2 M = 228 S 2 N 2 M = 228 N 2 M = 164 N CH 2 A N 2 M = 164 M + N CH 2 N 2 M = 164
H N S 2 Analiza GC/MS 4-nitrobenzosultamu N 2 N 2 M = 150 8a M = 214 t - S 2 H N Abundance 15.08 380000 360000 S 2? 340000 320000 300000 N 2 280000 8.30 260000 M = 214 240000 220000 8a 200000 180000 160000 140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 Time--> 0 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 N H t 9a N 2 NH 2 N 9a M = 300 Generation and Reactions of Aza-orthoxylylenes in the Injector of GC/MS System, W. Danikiewicz, K. Wojciechowski, M. lejnik, Tetrahedron Lett., 36, 1099 (1995). N 2 Abundance 22000 20000 18000 16000 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 m/z--> 0 39 51 77 91 105 Scan 1108 (15.080 min) 119 134 149 167 180 195 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 206 223 9a 236 251 265 283 M + +. 300
Zastosowania techniki GC/MS Analiza składu mieszanin poreakcyjnych Badania reakcji chemicznych w fazie gazowej Analiza produktów naturalnych (np. olejki zapachowe) Identyfikacja zanieczyszczeń w lekach, kosmetykach, artykułach spożywczych itp. Analizy medyczne (np. profil kwasowy) Analizy antydopingowe Analizy kryminalistyczne (np. identyfikacja producentów narkotyków) Analizy zanieczyszczeń środowiska
Chromatografia cieczowa sprzężona ze spektrometrią mas LC/MS lub HPLC/MS
Problemy związane z techniką LC/MS Problemy aparaturowe Chromatograf cieczowy Spektrometr mas Próbka w formie rozcieńczonego roztworu, często z zawartością bufora Problemy do rozwiązania: EI: praca w wysokiej próżni CI: konieczność użycia gazu jonizującego ESI: wprowadzanie próbki w roztworze APCI: wprowadzanie próbki w roztworze rozpuszczalnika odpowiedniego do CI konieczność odparowania dużej ilości rozpuszczalnika problem substancji buforujących szybkie skanowanie graniczenia dotyczące próbki Niska lotność Rozpuszczalność w wybranym rozpuszczalniku (eluencie) Trwałość w warunkach HPLC
Podstawowa zależność: dwukrotnie mniejsza średnica = czterokrotnie mniejszy przepływ Dopasowanie rodzaju źródła jonów do warunków chromatografii cieczowej Średnica wewnętrzna kolumny chromatograficznej 4 4,6 mm 1-2 mm 100 1000 µm 10 100 µm Przepływ eluenta 0,5 1 ml/min 50 200 µl/min 0,5 50 µl/min 10 500 nl/min Rodzaj źródła jonów TurboIonSpray, APCI Electrospray standardowy, APCI Microspray Nanospray
Warunki, które musza byc spełnione podczas pomiaru HPLC/MS Próbka musi być wystarczająco polarna, aby ulec jonizacji w technice electrospray (ESI), ewentualnie APCI. Analiza z zastosowaniem faz odwróconych. Akceptowalne eluenty to: metanol, woda, acetonitryl, izopropanol i ich mieszaniny. Dopuszczalny jest pomiar w gradiencie składu eluenta. Kolumna z wypełnieniem najlepiej C-18, C-8 lub analogicznym, służącym do analiz w fazach odwróconych. Eluent nie może zawierać nielotnych buforów, np. fosforanowych. Dopuszczalne są octan i mrówczan amonu, kwasy octowy i mrówkowy itp. lotne związki; Czas analizy nie powinien przekraczać 60 min.
ANALIZA ZANIECZYSZCZEŃ DIGKSYNY H H H H H H
ANALIZA DIGKSYNY Molecular Weight = 780.9588 Exact Mass = 780.4296 Molecular Formula = C 41 H 64 14 H Widmo APCI(-) digoksyny w układzie MeH-CHCl 3. Jon pseudomolekularny [M + Cl] - ulega fragmentacji tracąc kolejne reszty cukrowe i zachowując jon Cl -. H -Q1: 14.074 to 15.247 min from CH3ClDigoxin.wiff Max. 2.6e6 cps. 2.6e6 815.6 H H H H 389.2 + 1 + 35 = 425.2 519.3 + 1 + 35 = 555.3 649.4 + 1 + 35 = 685.4 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 1.6e6 1.4e6 555.2 685.6 817.6 780.4 + 35 = 815.4 1.2e6 1.0e6 425.2 687.6 8.0e5 557.6 6.0e5 4.0e5 427.5 2.0e5 649.8 211.3 407.7 667.7 797.8 295.6 389.6 779.9 519.6 537.7 0.0 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 m/z, amu
ANALIZA DIGKSYNY Chromatogram całkowitego prądu jonowego Intensity, cps TIC of -Q1: from CH3ClDigoxin.wiff 3.1e8 3.0e8 2.8e8 2.6e8 2.4e8 2.2e8 2.0e8 1.8e8 1.6e8 1.4e8 1.2e8 1.0e8 8.0e7 6.0e7 4.0e7 2.0e7 0.08 6.99 7.99 47.40 48.40 48.67 49.59 46.68 50.01 50.43 45.99 50.65 14.58 45.69 51.02 14.73 14.33 44.38 14.02 15.15 25.30 25.75 26.04 15.40 26.37 15.85 13.67 17.09 13.35 24.93 31.70 32.74 38.80 41.62 43.70 45.07 Max. 3.1e8 cps. 51.44 52.73 57.85 Chromatogram prądu jonowego wybranych jonów (jony [M+Cl] - digoksyny i acetylodigoksyny) Intensity, cps 0.0 8.4e7 8.0e7 7.5e7 7.0e7 6.5e7 6.0e7 5.5e7 5.0e7 4.5e7 4.0e7 3.5e7 3.0e7 2.5e7 2.0e7 1.5e7 1.0e7 5.0e6 0.0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Time, min XIC of -Q1: 856.0 to 860.0 amu from CH3ClDigoxin.wiff, Added <XIC of -Q1: 815.0 to 819.0 amu fro... Max. 8.4e7 cps. 14.09 14.63 14.41 14.83 15.15 25.30 24.93 13.74 22.00 25.63 26.09 13.42 26.42 21.60 16.87 27.76 7.77 8.61 5.26 29.84 2.60 38.02 38.82 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Time, min
Widma masowe APCI(-) digoksyny (M = 780,4) i jej pochodnej acetylowej -Q1: 14.074 to 15.180 min from CH3ClDigoxin.wiff 816.0 2.7e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 Digoksyn a 685.6 Max. 2.7e6 cps. [M + Cl] - 1.6e6 Molecular Weight = 780.9588 Exact Mass = 780.4296 Molecular Formula = C 41 H 64 14 H H H H 389.2 + 1 + 35 = 425.2 519.3 + 1 + 35 = 555.3 649.4 + 1 + 35 = 685.4 780.4 + 35 = 815.4 H H 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 6.0e5 4.0e5 2.0e5 211.3 425.2 555.2 0.0 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu -Q1: 25.098 to 26.137 min from CH3ClDigoxin.wiff 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e5 8.0e5 7.0e5 6.0e5 Pochodna acetylowa digoksyny 688.7 407.7 537.7 649.8 667.7 779.9 797.8 425.3 555.5 557.6 685.6 819.0 [MAc + Cl] - M = 42 857.8 Max. 1.5e6 cps. 5.0e5 4.0e5 3.0e5 2.0e5 1.0e5 0.0 861.0 816.0 688.6 537.7 667.6 727.8 519.6 597.5 775.9 311.5 389.7428.4 839.8 899.8 295.5 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu
Widma masowe APCI(-) digoksyny (M = 780,4) i jej pochodnej acetylowej -Q1: 14.074 to 15.180 min from CH3ClDigoxin.wiff 815.6 2.7e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 Digoksyn a 685.6 Max. 2.7e6 cps. [M + Cl] - 1.6e6 Molecular Weight = 780.9588 Exact Mass = 780.4296 Molecular Formula = C 41 H 64 14 H Ac H H 519.3 + 1 + 35 = 555.3 649.4 + 1 + 35 = 685.4 H H 389.2 + 1 + 35 = 425.2 780.4 + 42 + 35 = 857.4 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 6.0e5 4.0e5 2.0e5 211.3 425.2 555.2 0.0 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu -Q1: 25.098 to 26.137 min from CH3ClDigoxin.wiff 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e5 8.0e5 7.0e5 6.0e5 Pochodna acetylowa digoksyny 688.7 407.7 537.7 649.8 667.7 779.9 797.8 425.3 555.5 557.6 685.6 819.0 [MAc + Cl] - M = 42 857.8 Max. 1.5e6 cps. 5.0e5 4.0e5 3.0e5 2.0e5 1.0e5 0.0 861.0 816.0 688.6 537.7 667.6 727.8 519.6 597.5 775.9 311.5 389.7428.4 839.8 899.8 295.5 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu
Widma masowe APCI(-) digoksyny (M = 780,4) i jej pochodnej acetylowej -Q1: 14.074 to 15.180 min from CH3ClDigoxin.wiff 816.0 2.7e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 Digoksyn a 685.6 Max. 2.7e6 cps. [M + Cl] - 1.6e6 Molecular Weight = 780.9588 Exact Mass = 780.4296 Molecular Formula = C 41 H 64 14 Ac H H H 519.3 + 1 + 35 = 555.3 649.4 + 1 + 35 = 685.4 H H 389.2 + 1 + 35 = 425.2 780.4 + 42 + 35 = 857.4 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 6.0e5 4.0e5 2.0e5 211.3 425.2 555.2 0.0 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu -Q1: 25.098 to 26.137 min from CH3ClDigoxin.wiff 1.5e6 1.4e6 1.3e6 1.2e6 1.1e6 1.0e6 9.0e5 8.0e5 7.0e5 6.0e5 Pochodna acetylowa digoksyny 688.7 407.7 537.7 649.8 667.7 779.9 797.8 425.3 555.5 557.6 685.6 819.0 [MAc + Cl] - M = 42 857.8 Max. 1.5e6 cps. 5.0e5 4.0e5 3.0e5 2.0e5 1.0e5 0.0 861.0 816.0 688.6 537.7 667.6 727.8 519.6 597.5 775.9 311.5 389.7428.4 839.8 899.8 295.5 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu
WYKRYWANIE PACLITAXELU (TAKSLU) W MATERIALE BILGICZNYM NHBz Ac H H H H Bz Ac
Wykrywanie taksolu w materiale biologicznym +Q1: 0.100 to 1.002 min from Sample 1 (widmoq+) of taxol.wiff Intensity, cps 4.3e6 4.2e6 4.0e6 3.8e6 3.6e6 3.4e6 3.2e6 3.0e6 2.8e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 1.6e6 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 Widmo ESI(+) próbki taksolu 301.3 531 413.4 384.2 337.4 396.2 468.2 Max. 4.3e6 cps. 6.0e5 4.0e5 324.4 367.3 860.5 243.3 285.3 409.3 421.4 898.6 591.4 2.0e5 257.2 381.3 398.3 485.4 531.4 757.4 854.5 974.6 0.0 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu [M + Na + ] + 876.4 NHBz H Ac H H Bz Ac Paclitaxel (taksol) M = 853.3 +Product (876.5): 1.302 to 1.753 min from Sample 2 (fragmentacja 876.5 CE 35) of taxol.wiff Intensity, cps 2.0e5 1.9e5 1.8e5 1.7e5 1.6e5 1.5e5 1.4e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 1.0e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 5.0e4 4.0e4 3.0e4 2.0e4 1.0e4 0.0 104.9 308.2 531.2 409.4 509.4 547.3 350.3 469.1 591.4 H Widmo CID jonu [M + Na + ] + taksolu Max. 2.0e5 cps. 876.4 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 m/z, amu 694.2
Wykrywanie taksolu w materiale biologicznym TIC of +Q1: from Sample 1 (powtorka001) of 103HPLC.wiff Max. 9.4e7 cps. 9.4e7 9.0e7 5.51 8.5e7 Chromatogram całkowitego prądu jonowego badanej mieszaniny Intensity, cps 8.0e7 7.5e7 7.0e7 6.5e7 6.0e7 5.5e7 5.0e7 4.5e7 4.0e7 3.5e7 3.0e7 3.43 9.18 8.93 11.90 26.71 17.44 27.14 26.15 12.33 17.74 35.25 2.66 7.05 9.63 24.65 27.38 21.45 23.14 33.68 17.04 35.47 27.59 2.88 14.79 28.13 33.24 36.02 34.20 33.93 34.63 34.95 2.5e7 2.0e7 1.5e7 1.0e7 5.0e6 0.0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 Time, min Base Peak Chrom. of +Q1: from Sample 1 (powtorka001) of 103HPLC.wiff Max. 4.2e6 cps. Chromatogram maksymalnych pików badanej mieszaniny Intensity, cps 4.2e6 4.0e6 3.8e6 3.6e6 3.4e6 3.2e6 3.0e6 2.8e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 1.6e6 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 6.0e5 4.0e5 2.0e5 0.0 5.34 5.51 5.68 9.18 11.78 11.96 17.44 26.64 34.45 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 Time, min 26.44 9.45 26.30 17.31 12.26 17.12 26.10 8.90 17.86 3.43 33.71 17.63 2.68 7.00 27.59 2.19 16.94 24.91 12.53 9.73 33.46 22.57 24.51 35.64 20.64 27.83 0.49 14.11 32.97 26.84 27.08 27.29 34.08 33.88 34.95 35.17 35.40
Wykrywanie taksolu w materiale biologicznym XIC of +Q1: 875.0 to 877.0 amu from Sample 1 (powtorka001) of 103HPLC.wiff Max. 2.2e5 cps. Chromatogram jonu m/z 876,4 badanej mieszaniny Intensity, cps 2.1e5 2.0e5 1.9e5 1.8e5 1.7e5 1.6e5 1.5e5 1.4e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 1.0e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 5.0e4 4.0e4 3.0e4 2.0e4 1.0e4 0.0 0.42 2.23 7.17 8.86 13.97 18.56 18.87 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 Time, min 19.50 19.92 14.98 23.47 11.01 18.31 20.16 18.25 24.21 5.29 11.16 28.06 29.00 2.70 31.38 9.87 33.48 35.97 +Q1: 18.531 to 20.038 min from Sample 1 (powtorka001) of 103HPLC.wiff, subtracted (12.884 to 1... Max. 5.9e4 cps. Widmo masowe (po odjęciu tła) dla piku z powyższego chromatogramu Intensity, cps 5.9e4 5.5e4 5.0e4 4.5e4 4.0e4 3.5e4 3.0e4 2.5e4 2.0e4 1.5e4 1.0e4 5000.0 0.0 899.1 860.0 513.6 970.2 766.9 327.5 832.0 965.4 243.5 771.7 904.0 130.2 282.6 875.8 368.3 585.5 212.4 541.5 719.7 787.8 146.4 256.6 919.7 943.1 320.4 431.7 536.7 580.6 229.7 163.4 277.4 608.6 877.9 505.3 727.6 793.9 927.0 987.1 528.9 1079.3 1144.7 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 m/z, amu 811.0 816.0 854.9
Wykrywanie taksolu w materiale biologicznym +Q1: 0.100 to 1.002 min from Sample 1 (widmoq+) of taxol.wiff Intensity, cps 4.3e6 4.2e6 4.0e6 3.8e6 3.6e6 3.4e6 3.2e6 3.0e6 2.8e6 2.6e6 2.4e6 2.2e6 2.0e6 1.8e6 1.6e6 1.4e6 1.2e6 1.0e6 8.0e5 Widmo ESI(+) próbki taksolu 301.3 531 413.4 384.2 337.4 396.2 468.2 Max. 4.3e6 cps. 6.0e5 4.0e5 324.4 367.3 860.5 243.3 285.3 409.3 421.4 898.6 591.4 2.0e5 257.2 381.3 398.3 485.4 531.4 757.4 854.5 974.6 0.0 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 m/z, amu [M + Na + ] + 876.4 NHBz H Ac H H Bz Ac Paclitaxel (taksol) M = 853.3 +Product (876.5): 1.302 to 1.753 min from Sample 2 (fragmentacja 876.5 CE 35) of taxol.wiff Intensity, cps 2.0e5 1.9e5 1.8e5 1.7e5 1.6e5 1.5e5 1.4e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 1.0e5 9.0e4 8.0e4 7.0e4 6.0e4 5.0e4 4.0e4 3.0e4 2.0e4 1.0e4 0.0 104.9 308.2 531.2 409.4 509.4 547.3 350.3 469.1 591.4 H Widmo CID jonu [M + Na + ] + taksolu Max. 2.0e5 cps. 876.4 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 m/z, amu 694.2
Wykrywanie taksolu w materiale biologicznym XIC of +MRM (12 pairs): 876.5/591.4 amu from Sample 2 (powtorka002) of 103HPLC.wiff Max. 120.0 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 876.5/531.2 amu from Sample 2 (powtorka002) of 103HPLC.wiff Max. 140.0 cps. 120 110 100 90 80 4.48 Chromatogram MRM 876 591 140 130 120 110 100 90 4.41 Chromatogram MRM 876 531 13.89 Intensity, cps 70 60 50 40 30 20 10 4.62 7.40 9.18 10.67 1.32 4.87 7.61 13.17 19.54 20.00 20.70 22.57 26.22 3.15 3.55 5.97 11.83 15.72 18.11 24.63 26.50 Intensity, cps 80 70 60 50 40 30 20 10 2.58 4.56 4.75 10.57 2.00 5.11 11.49 16.07 17.02 23.74 0.63 7.29 9.33 14.64 17.52 19.94 20.82 25.55 26.56 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 Time, min 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 Time, min XIC of +MRM (12 pairs): 876.5/308.2 amu from Sample 2 (powtorka002) of 103HPLC.wiff Intensity, cps 400 380 360 340 320 300 280 260 240 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 3.76 4.39 4.66 8.66 Max. 400.0 cps. 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 Time, min Chromatogram MRM 876 308 XIC of +MRM (12 pairs): 876.5/591.4 amu from Sample 2 (powtorka002) of 103HPLC.wiff Intensity, cps 400 380 360 340 320 300 280 260 240 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 4.48 Nałożone chromatogramy MRM Max. 120.0 cps. 4.62 10.67 7.40 9.18 1.32 13.17 19.54 20.00 20.70 22.57 26.22 3.15 3.55 5.97 11.83 15.72 18.11 25.74 26.66 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 Time, min
Zastosowania techniki LC/MS Analiza składu mieszanin poreakcyjnych Analiza białek i produktów ich hydrolizy enzymatycznej Identyfikacja zanieczyszczeń w lekach, kosmetykach, artykułach spożywczych itp. Analizy medyczne (np. oznaczanie stężenia leków i ich metabolitów we krwi) Analizy antydopingowe Analizy kryminalistyczne (np. identyfikacja producentów narkotyków) Analizy zanieczyszczeń środowiska