ĆWICZENIA Z BIOCHEMII

Transkrypt

1 ĆWICZENIA Z BIOCHEMII D U STUDENTfiW WYDZIAŁU LEKARSKIEGO Pod redakcją Piotra Laidlera, Barbary Piekarskiej, Marii Wróbel WYDAWNICTWO UNIWERSYTETU JAGIELLOŃSKIEGO

2 ĆWICZENIA Z BIOCHEMII DLA STUDENTÓW WYDZIAŁU LEKARSKIEGU Pod redakcją Piotra Laidlera, Barbary Piekarskiej, Marii Wróbel WYDAWNICTWO UNIWERSYTETU JAGIELLOŃSKIEGO

3 Spis treści 1. Spektrofotometria absorpcyjna Roztwory buforowe - analiza miareczkowa Osmolowość roztworów. Badanie oporności osmotycznej erytrocytów Kompleksometria Aminokwasy i białka Rozdział mieszaniny aminokwasów metodą podziałowej chromatografii bibułowej Analiza jakościowa aminokwasów. Wybrane reakcje charakterystyczne Wyznaczanie ładunku oraz pi aminokwasów, peptydów i białek Oznaczanie stężenia białek Dializa Metody oczyszczania i rozdziału mieszaniny białek Denaturacja i renaturacja białka Albumina - interakcja białko-ligand Enzymy Kinetyka enzymatyczna Trypsyna Metabolizm Łańcuch oddechowy - wprowadzenie do bioenergetyki Glikoliza Reaktywne formy tlenu Kwasy nukleinowe. Ekspresja genu. Hodowle komórkowe w badaniach biochemicznych DNA - wizualizacja modeli helisy B DNA oraz kompleksu DNA-białko Od genu do białka I - wyszukiwanie w internetowej bazie danych informacji o genach, mrna i białku Analiza struktury genu i mrna dla kwaśnej fosfatazy prostatowej Analiza struktury genu i mrna dla kolagenu typu III Analiza struktury genu i mrna dla albuminy osocza Od genu do białka II - izolowanie DNA i RNA z komórek linii hodowlanych Izolowanie DNA Izolowanie RNA

4 Efekt hiperchromowy Od genu do białka III Wykorzystanie metody PCR oraz RT-PCR do potwierdzenia obecności genu oraz mrna Rozdział elektroforetyczny produktów PCR i RT-PCR oraz genomowego DNA i całkowitego RNA, wyizolowanych z komórek Oznaczanie aktywności kwaśnej fosfatazy prostatowej w hodowlach komórkowych linii LNCaP i PC Od genu do białka IV Kwaśna fosfataza prostatowa - hamowanie aktywności, struktura, mechanizm katalizy Badanie cytotoksyczności wybranych preparatów stosowanych w stomatologii zachowawczej oraz fluorku sodu w hodowli fibroblastów ludzkich Sprawozdania z ćwiczeń Lista zajęć laboratoryjnych Sprawozdania z ćwiczeń wspólne dla kierunków: lekarski, lekarsko-dentystyczny - rok II; dietetyka Spektrofotometria (Ćwiczenie 1) Roztwory buforowe - analiza miareczkowa (Ćwiczenie 2) Osmolowość roztworów. Badanie oporności osmotycznej erytrocytów (Ćwiczenie 3). Kompleksometria (Ćwiczenie 4) Aminokwasy (Ćwiczenia 5.1, 5.2, 5.3) Kinetyka enzymatyczna (Ćwiczenie 6.1) Łańcuch oddechowy (Ćwiczenie 7.1) Glikoliza (Ćwiczenie 7.2) Reaktywne formy tlenu - badanie wytwarzania i usuwania (Ćwiczenie 7.3) Sprawozdania z ćwiczeń dla kierunku lekarskiego Białka I (Ćwiczenia 5.4, 5.5) Białka II. Metody oczyszczania i rozdziału mieszanin białek (Ćwiczenie 5.6) Od genu do białka I. Analiza struktury genu i mrna dla kwaśnej fosfatazy prostatowej (Ćwiczenia ) Od genu do białka II. Izolowanie DNA i RNA z hodowli komórek nowotworu prostaty (Ćwiczenia , wariant A, 8.3.3) Od genu do białka III. PCR. Rozdział elektroforetyczny DNA, całkowitego RNA oraz produktów PCR i RT-PCR (Ćwiczenie 8.4) Od genu do białka IV. Kwaśna fosfataza prostatowa - hamowanie aktywności, struktura, mechanizm katalizy. Denaturacja i renaturacja białka (Ćwiczenia 5.7, 8.5) Sprawozdania z ćwiczeń dla kierunku lekarsko-dentystycznego - II rok Białka (Ćwiczenia 5.4, 5.6, 5.7) Kwasy nukleinowe (Ćwiczenia 8.1, , 8.4.2) Sprawozdania z ćwiczeń dla kierunku lekarsko-dentystycznego - rok IV, biochemia jamy ustnej Analiza struktury genu i mrna dla kolagenu typu III (Ćwiczenia ) Izolowanie DNA i RNA z hodowli fibroblastów (Ćwiczenia , wariant B)

5 PCR. Rozdział elektroforetyczny DNA, całkowitego RNA oraz produktów PCR i RT-PCR (Ćwiczenia wariant B, wariant B) Badanie cytotoksyczności składników wypełnień dentystycznych oraz fluorku sodu w hodowli fibroblastów ludzkich (Ćwiczenie 8.6) Sprawozdania z ćwiczeń dla kierunku dietetyka Białka I. Metody oczyszczania i rozdziału mieszanin białek. Wyznaczanie ładunku oraz pi aminokwasów, peptydów i białek (Ćwiczenia 5.3, 5.4, 5.6) Białka II. Oznaczanie stężenia białek. Denaturacja i renaturacja białka (Ćwiczenia 5.4, 5.7) Trypsyna. Struktura centrum aktywnego. Wpływ ph i inhibitorów na aktywność enzymu (Ćwiczenie 6.2) Kwasy nukleinowe (Ćwiczenia 8.1, 8.3.3, 8.4.2) Albumina. Analiza struktury genu i mrna albuminy osocza. Interakcja białko- -ligand. Dializa (Ćwiczenia , 5.5, 5.8)