Kit for rapid detection Legionella pneumophilla Zestaw do szybkiej detekcji bakterii Legionella w próbkach wody opiera się na wykorzystaniu immunomagnetycznych kulek. Są to cząsteczki superparamagnetyczne, które posiadają związane na ich powierzchni przeciwciała, wiążące się specyficznie z białkami znajdującymi się na komórkach bakterii Legionella. Kulki są unieruchamiane przy wykorzystaniu pola magnetycznego. Po usunięciu pola magnetycznego kulki nie posiadają żadnych własności magnetycznych. Najpierw należy umieścić próbkę wody w probówkach znajdujących się na specjalnym statywie wchodzącym w skład zestawu. Następnie delikatnie wymieszać roztwór zawierający kulki magnetyczne. Dodać po kilka kropli roztworu zawierającego kulki magnetyczne opłaszczone przeciwciałami. Probówki zamknąć szczelnie korkiem.
Delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Przeciwciała przyłączają się do docelowych białek na powierzchni bakterii Legionella. Po upływie 15 minut kilkakrotnie przekręcić pokrętło znajdujące się u dołu statywu. Następnie zlać roztwór znajdujący się w probówkach. Cząsteczki bakterii Legionella pozostaną w probówkach, gdyż zostały unieruchomione działaniem magnesu. W probówkach pozostaną jedynie cząsteczki bakterii Legionella z przyłączonymi do nich magnetycznymi kulkami. Inne mikroorganizmy oraz związki znajdujące się w wodzie zostaną usunięte. Selektywne wychwytywanie:
Dodać około 1 ml roztworu do przepłukiwania. Probówki zakryć korkiem, kilkakrotnie przekręć pokrętło i delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Zlać roztwór znajdujący się w probówkach. Wszystkie niezwiązane z magnetycznymi kulkami mikroorganizmy i związki zostaną usunięte. Do każdej z probówek dodać roztwór zawierający drugorzędowe przeciwciała ze znacznikiem.
Zakryć probówki korkiem i kilkakrotnie przekręcić pokrętło. Następnie delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Przeciwciała drugorzędowe przyłączają się do przeciwciał znajdujących się na powierzchni kulek magnetycznych związanych z komórkami bakterii Legionella. Po upływie 10 minut dodać około 1 ml roztworu do przepłukiwania. Probówki zakryć korkiem, kilkakrotnie przekręcić pokrętło i delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie.
Zlać roztwór znajdujący się w probówkach. Wszystkie niezwiązane przeciwciała drugorzędowe zostaną usunięte. Do probówek dodać po kilka kropli roztworu zawierającego substrat (np. enzym lub fluorochrom), zakryć korkiem, i delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Substrat reaguje ze znacznikiem znajdującym się na powierzchni przeciwciał drugorzędowych. W wyniku tej reakcji powstaje mierzalny sygnał barwny. Bakterie odłączają się od magnesu: Do probówek zostaje dodany substrat (na rysunku zaznaczony na żółto) dla znacznika przeciwciał drugorzędowych:
Substrat przyłącza się do znacznika znajdującego się na przeciwciałach drugorzędowych Po 10 minutach można odczytać wynik oznaczenia. Uzyskaną barwę roztworu należy porównać ze skalą umieszczoną na statywie i w ten sposób określić stopień zanieczyszczenia wody bakteriami Legionella.