SNAP* BVD. Bovine Virus Diarrhea Antigen Test Kit. Zestaw diagnostyczny do wykrywania antygenu wirusa biegunki i choroby błon śluzowych bydła (BVD-MD)

Transkrypt

1 SNAP* BVD Bovine Virus Diarrhea Antigen Test Kit Zestaw diagnostyczny do wykrywania antygenu wirusa biegunki i choroby błon śluzowych bydła (BVD-MD)

2

3 Bovine Virus Diarrhea Antigen Test Kit (SNAP* BVD) Wyłącznie do użytku weterynaryjnego. Szybki zestaw diagnostyczny in vitro do wykrywania antygenu wirusa biegunki i choroby błon śluzowych bydła w próbkach małżowiny ucha i surowicy zwierząt trwale zakażonych (PI). Środki Ostrożności Wszystkie materiały biologiczne należy traktować jako potencjalne źródło wirusa BVD-MD. Nie pipetować odczynników ustami. Nie spożywać posiłków, nie pić napojów i nie palić w pomieszczeniach, w których pracuje się z próbkami lub elementami zestawu diagnostycznego. Przed utylizacją wszystkie odpady należy odpowiednio inaktywować (dekontaminacja). Nie mieszać odczynników z zestawów o różnych numerach serii. Nie używać do badań testera SNAP, który aktywowano przed nałożeniem próbki. Nie używać ponownie pipet, które miały kontakt z próbką. Do pobierania koniugatu nie używać pipety, która wcześniej miała kontakt z próbką. Nie należy dezynfekować skóry lekiem Betadyna przed pobraniem skrawka małżowiny ucha do badania, ponieważ może mieć to wpływ na wynik badania. Nie wykonywać badania w warunkach bezpośredniego nasłonecznienia. Należy unikać ewentualnej kontaminacji krzyżowej przyrządu do pobierania próbek z małżowiny ucha. Przed i po pobraniu próbki przyrząd inaktywować poprzez zanurzenie w środku dezynfekcyjnym. W trakcie aktywacji testera SNAP BVD (wciskanie przycisku aktywującego) ZAWSZE drugą ręką należy trzymać tester, aby zapobiec możliwości rozchlapania płynu. Warunki przechowywania Zestaw SNAP BVD (testery i koniugat) należy przechowywać w temperaturze 2-8 C. Przed rozpoczęciem badania wszystkie odczynniki oraz badane próbki należy doprowadzić do temperatury pokojowej (18-30 C). Przed badaniem wyjąć z lodówki tylko tyle testerów i koniugatu, ile potrzebne będzie do wykonania badania. Składniki zestawu diagnostycznego Duże wycinki (o wielkości 1cm) Małe wycinki (o wielkości 2-3mm) Surowica Jedna lub pięć butelek koniugatu anty-bvd-hrpo (17ml) Zestaw SNAP 10 lub 50 testerów SNAP BVD Odczynniki zawarte w każdym testerze: 0,6ml roztworu substratu 0,4ml roztworu do płukania Opakowanie z akcesoriami do testu SNAP Probówki z nakrętkami na duże wycinki małżowiny ucha Pipety do koniugatu Probówki z nakrętkami na próbki surowicy i małe wycinki małżowiny ucha Pipety do koniugatu Pipety do próbek i koniugatu 1

4 Dodatkowe urządzenia niedostępne w zastawie Nie są wynagane Wymagany jest blok grzejny (suchy lub łaźnia wodna) umożliwiający nastawienie temperatury w zakresie 45 C±5 C Informacje dotyczące badanych próbek Uwaga: Przed rozpoczęciem badania, wszystkie próbki należy doprowadzić do temperatury pokojowej (18-30 C). Rodzaj próbki Duże wycinki (o wielkości 1cm) Małe wycinki (o wielkości 2-3mm) Próbki małżowiny ucha można pobierać od zwierząt w każdym wieku. Próbki Surowicy Źródło Pobrana próbka powinna mieć przynajmniej 1cm długości Pobrana próbka powinna mieć przynajmniej 2-3 mm średnicy. (Typowa wielkość wycinka uzyskiwanego za pomocą kolczykownic stosowanych w Europie) Do badania potrzeba 150µl surowicy. Krew należy pobierać od nowonarodzonych cieląt przed podaniem siary lub od cieląt powyżej 3 miesiąca życia, aby zapobiec interferencji ze strony przeciwciał matczynych w teście SNAP BVD1. Przechowywanie Krótkotrwałe: Wycinki małżowiny ucha można przechowywać w stanie suchym w temp. 2-8 C. Jeżeli nie ma takich warunków, próbki można przechowywać w stanie suchym w temperaturze pokojowej (18-30 C) przez okres maksymalnie 3 dni. Długotrwałe: gdy konieczne jest dłuższe przechowywanie próbek, należy przechowywać je zamrożone w temperaturze -20 C lub niższej. Krótkotrwałe: surowicę można przechowywać w temp. 2-8 C do 7 dni Długotrwałe: surowicę należy przechowywać w stanie zamrożonym w temperaturze -20 C lub niższej. Przed pobraniem objętości wymaganej do badania, rozmrożoną próbkę surowicy należy dokładnie wymieszać. 2

5 Wykonanie badania (duże i małe wycinki ) Duże wycinki (o wielkości 1cm) Małe wycinki (o wielkości 2-3mm) Jeżeli zestaw diagnostyczny przechowywano w lodówce, przed rozpoczęciem badania należy wszystkie składniki zestawu doprowadzić do temperatury pokojowej (18-30 C) wyjmując je z lodówki i pozostawiając w temperaturze pokojowej przez czas minimum 30 minut. Umieść tester SNAP BVD na płaskiej powierzchni. Przez cały okres badania tester musi znajdować się w pozycji poziomej, aby zapewnić wiarygodny wynik badania. 1,5ml koniugatu do probówki z nakrętką, w której umieszczono wycinek małżowiny ucha. 1.5 ml 450µl koniugatu do probówki zawierającej wycinek małżowiny ucha (na pipetach do nanoszenia koniugatu znajdujących się w opakowaniach z akcesoriami do testów do badania próbek surowicy i małych wycinków małżowiny ucha objętość 450µl oznaczono wypukłą kreską). 450 µl Wymieszaj: Dokładnie wymieszaj zawartość probówki w taki sposób, aby wycinek małżowiny ucha był zanurzony w koniugacie. Inkubuj: W temperaturze pokojowej (18-30 C) przez minimum 10 minut (w zakresie od 10 minut do 1 godziny). Minimum 10 minut Inkubuj: W temperaturze pokojowej (18-30 C) przez 1 godzinę (w zakresie od 1 godziny do 3 dni). 1 Godzina Przelej lub przenieś pipetą zawartość probówki do studzienki na próbkę testera. Niewielka objętość koniugatu pozostanie w probówce z wycinkiem małżowiny ucha (studzienka na próbkę testera powinna być całkowicie wypełniona płynem - ok. 1ml). Przelej lub przenieś pipetą zawartość probówki do studzienki na próbkę testera. Niewielka objętość koniugatu pozostanie w probówce z wycinkiem małżowiny ucha. Jeśli podczas przelewania wycinek małżowiny ucha wpadnie do studzienki na próbkę testera, należy delikatnie wyjąć go przed wciśnięciem przycisku aktywującego testera. studzienka na próbkę przycisk aktywujący studzienka na próbkę przycisk aktywujący wynikowe aktywacji wynikowe aktywacji Obserwuj: Próbka przemieści się przez wynikowe, osiągając aktywacji w czasie sekund. UWAGA: Niewielka ilość próbki może pozostać w studzience na próbkę. Uważnie obserwuj moment pojawienia się próbki lub niebieskiego zabarwienia w okienku aktywacji. Odczekaj sek. 3

6 Aktywuj tester SNAP W momencie, gdy tylko w okienku aktywacji pojawi się kolor wciśnij mocno przycisk aktywujący, aż znajdzie się w jednej płaszczyźnie z obudową testera. Naciskaj z dużą siłą! Przycisk wciśnięty ze zbyt małą siłą Prawidłowo Nieprawidłowo UWAGA: Niektóre próbki mogą nie dotrzeć do okienka aktywacji w czasie 60 sekund, w związku z czym nie dojdzie w nim do zmiany barwy. W takim przypadku wciśnij przycisk aktywacji, kiedy próba przepłynie przez wynikowe. Jeśli próbka w ogóle nie przepłynie przez wynikowe, należy powtórzyć badanie z użyciem nowego testera. Odczytaj: Wynik badania odczytaj po 10 minutach (w zakresie minut). Uwaga: Niebieskie zabarwienie plamki kontroli dodatniej w okienku wynikowym może pojawić się wcześniej, ale wynik badania należy ocenić dopiero po upływie 10 minut od momentu wciśnięcia przycisku aktywującego testera. Odczekaj 10 minut Wykonanie badania (próbki surowicy) Próbki surowicy Jeżeli zestaw diagnostyczny przechowywano w lodówce, przed rozpoczęciem badania należy wszystkie składniki zestawu doprowadzić do temperatury pokojowej (18-30 C) wyjmując je z lodówki i pozostawiając w temperaturze pokojowej przez czas minimum 30 minut. Umieść tester SNAP BVD na płaskiej powierzchni. Przez cały okres badania tester musi znajdować się w pozycji poziomej, aby zapewnić wiarygodny wynik badania. Pobierz i przenieś 150µl (lub 3 krople z użyciem pipety trzymanej w pozycji pionowej) badanej próbki surowicy do probówki z nakrętką. 3 Do tej samej probówki dodaj 200µl koniugatu (lub 6 kropli z użyciem nowej pipety dla próbek trzymanej w pozycji pionowej). 6 Wymieszaj: Zakręć, a następnie dokładnie wymieszaj zawartość probówki, odwracając ją 3-5 razy. Inkubuj: Zamkniętą probówkę z mieszaniną surowicy z koniugatem inkubuj w temperaturze 45 C (w zakresie C) przez okres 10 minut (w zakresie od 10 do 20 minut). Minimum 10 minut 4

7 Przelej zawartość probówki do studzienki na próbkę testera. studzienka na próbkę przycisk aktywujący wynikowe aktywacji Obserwuj: Próbka przemieści się przez wynikowe, osiągając aktywacji w czasie sekund. UWAGA: Niewielka ilość próbki może pozostać w studzience na próbkę. Uważnie obserwuj moment pojawienia się próbki lub niebieskiego zabarwienia w okienku aktywacji. Odczekaj sek. Aktywuj tester SNAP W momencie, gdy tylko w okienku aktywacji pojawi się kolor wciśnij mocno przycisk aktywujący, aż znajdzie się w jednej płaszczyźnie z obudową testera. Naciskaj z dużą siłą! Przycisk wciśnięty ze zbyt małą siłą Prawidłowo Nieprawidłowo UWAGA: Niektóre próbki mogą nie dotrzeć do okienka aktywacji w czasie 60 sekund, w związku z czym nie dojdzie w nim do zmiany barwy. W takim przypadku wciśnij przycisk aktywacji, kiedy próba przepłynie przez wynikowe. Jeśli próbka w ogóle nie przepłynie przez wynikowe, należy powtórzyć badanie z użyciem nowego testera. Odczytaj: Wynik badania odczytaj po 10 minutach (w zakresie minut). Uwaga: Niebieskie zabarwienie plamki kontroli dodatniej w okienku wynikowym może pojawić się wcześniej, ale wynik badania należy ocenić dopiero po upływie 10 minut od momentu wciśnięcia przycisku aktywującego testera. Odczekaj 10 minut Interpretacja wyników badania Umiejscowienie plamek barwnych w okienku wynikowym testera przed wykonaniem badania (po wyjęciu z pudełka). Wymogi walidacji testu: Plamka kontroli dodatniej zabarwia się na niebiesko. Plamka kontroli ujemnej nie wykazuje zabarwienia intensywniejszego niż kolor tła. Interpretacja wyników: Wynik dodatni (status zakażenia trwałego - PI): próbka traktowana jest jako dodatnia, gdy niebieskie zabarwienie plamki próbki badanej jest bardziej intensywne niż kolor tła. Plamka kontroli dodatniej Plamka kontroli ujemnej Wynik dodatni lub Plamka próbki badanej Uwaga: dodatni wynik badania testem SNAP BVD lub inną metodą np. PCR nie musi oznaczać, że zwierzę jest zakażone trwale wirusem BVD-MD. Postawienie takiej diagnozy wymaga wykonania drugiego badania próbki pobranej od danego zwierzęcia po 3 tygodniach od pierwszego pobrania. Gdy w drugim badaniu uzyskany zostanie także wynik dodatni, potwierdzony zostanie stan zakażenia trwałego wirusem BVD-MD. 5

8 Wynik ujemny (brak zakażenia trwałego): próbka jest traktowana jako ujemna, gdy zabarwienie plamki próbki badanej jest słabsze lub równie intensywne jak kolor tła. Wyniki nieważne Tło - jeżeli próbka badana przemieści się poza aktywacji, może pojawić się kolor tła. Niewielkie zabarwienie tła jest reakcją normalną. Jeśli jednak kolor tła jest na tyle intensywny, że uniemożliwia interpretację wyniku badania, badanie należy powtórzyć. Brak zabarwienia plamki kontroli dodatniej - jeżeli plamka kontroli dodatniej nie zabarwi się na kolor niebieski, badanie należy powtórzyć. Zabarwienie plamki kontroli ujemnej - jeżeli plamka kontroli ujemnej zabarwi się na kolor niebieski o intensywniejszej barwie niż kolor tła, badanie należy powtórzyć. Czułość i specyficzność Badanie nr SIK-0384 Względna czułość i specyficzność testu SNAP BVD używając referencyjnych próbek dodatnich i ujemnych Liczba próbek Rodzaj SNAP BVD/wartość referencyjna próbki +/+ -/+ +/- -/- Suma Małżowina ucha małe wycinki Małżowina ucha duże wycinki Surowica Względna czułość i specyficzność 95% przedziały ufności (PU) Czułość 100% (95% PU 96.5%-100%) Specyficzność 100% (95% PU 97.1%-100%) Sen. 99.1% (95% PU 96.3%-99.9%) Specyficzność 99.5% (95% PU 97.0%-100%) Sen. 95.9% (95% PU 92.3%-97.9% Specyficzność 100% (95% PU 97.7%-100%) Wynik ujemny Statystyka Kappa Próbki referencyjne badano metodą PCR lub testem izolacji wirusa. Wyniki uzyskano dla próbek pobieranych jednokrotnie; nie potwierdzano statusu zakażenia trwałego (PI). Dane dostępne w firmie IDEXX Laboratories, Inc. Westbrook, Maine, USA. Piśmiennictwo Palfi V, Houe H, Philipsen J. Studies on the decline of bovine virus diarrhea virus (BVDV) maternal antibodies and detectability of BVDV in persistently infected calves. Acta Vet Scan, 1993:34(1): ) Matczyne przeciwciała anty-bvd, które mogą być przekazywane nowonarodzonym cielętom w ciągu pierwszych 24 godzin przyjmowania siary, mogą w przypadku badania próbek surowicy wywoływać interferencję z testem, dając wyniki fałszywie ujemne u trwale zakażonych, immunotolerancyjnych cieląt (PI). Ponieważ ilość przeciwciał matczynych w organizmie spada wraz wiekiem cieląt, można zapobiec wystąpieniu interferencji stosując się do zasad pobierania próbek do badania testem SNAP BVD podanych w tej instrukcji w punkcie Informacje dotyczące badanych próbek. Producent: IDEXX Laboratories, Inc. One IDEXX Drive, Westbrook, Maine USA Przedstawiciel na UE: IDEXX Europe B.V. P.O. Box EK Hoofddorp Netherlands Dystrybutor: PPH ESKULAP SJ ul. Elsnera 6, Gliwice tel.: , tel./fax: eskulap@eskulap.gliwice.pl 6