IMMUNOHISTOCHEMICZNA OCENA MERKERÓW PROLIFERACJI KOMÓRKOWEJ W RAKU JELITA GRUBEGO EWA STĘPIEŃ ZAKŁAD PATOMORFOLOGII OGÓLNEJ AKADEMII MEDYCZNEJ W BIAŁYMSTOKU KIEROWNIK I OPIEKUN PRACY: Dr KATARZYNA GUZIŃSKA-USTYMOWICZ
RAK JELITA GRUBEGO DRUGA PRZYCZYNA ZGONÓW SPOWODOWANYCH PRZEZ NOWOTWORY NAJWIĘKSZA ILOŚĆ ZACHOROWAŃ PRZYPADA NA 60-70 ROK śycia MĘśCZYśNI CHORUJĄ 20% CZĘŚCIEJ NIś KOBIETY WSRÓD KOBIET PRZEWAśA RAK OKRĘśNICY, NATOMIAST WŚRÓD MĘśCZYZN RAK ODBYTNICY UMIERALNOŚĆ JEST WIĘKSZA W PRZYPADKU RAKA ODBYTNICY
RAK JELITA GRUBEGO WEWNĘTRZNE CZYNNIKI RYZYKA ZACHOROWANIA NA RAKA JELITA GRUBEGO WRZODZIEJĄCE ZAPALENIE JELITA GRUBEGO CHOROBA LEŚNIOWSKIEGO-CROHNA GRUCZOLAKI JELITA GRUBEGO PREDYSPOZYCJE GENETYCZNE: DZIEDZICZNY RAK JELITA GRUBEGO BEZ POLIPOWATOŚCI ZESPÓŁ GRUCZOLAKOWATEJ POLIPOWATOŚCI RODZINNEJ ZESPOŁ GARDNERA
RAK JELITA GRUBEGO ZEWNĘTRZNE CZYNNIKI RYZYKA ZACHOROWANIA NA RAKA JELITA GRUBEGO: SKŁAD DIETY: ILOŚĆ SPOśYWANEGO NIEWCHŁANIALNEGO BŁONNIKA DUśA ILOŚĆ RAFINOWANYCH WĘGLOWODANÓW DUśA ZAWARTOŚĆ TŁUSZCZÓW BRAK W DIECIE WITAMIN A, C i E DUśA ILOŚĆ MIĘSA ZWŁASZCZA CZERWONEGO MAŁA ILOŚĆ WARZYW CZYNNIKI MIKROŚRODOWISKA JELITA GRUBEGO SUBSTANCJE MUTAGENNE W JELICIE WYSOKIE ph W STOLCU ZWOLNIENIE PERYSTALTYKI JELIT INNE PALENIE TYTONIU ALKOHOL ETYLOWY
PROCES POWSTAWANIA NOWOTWORU ABY DOSZŁO DO ROZWOJU NOWOTWORU W KOMÓRCE MUSI DOJŚĆ DO NASTĘPUJĄCYCH ZMIAN: INAKTYWACJI MECHANIZMÓW INDUKUJĄCYCH APOPTOZĘ W USZKODZONYCH KOMÓRKACH UNIEZALEśNIENIA SIĘ OD ZEWNĄTRZKOMÓRKOWYCH SYGNAŁÓW REGULUJĄCYCH PROLIFERACJĘ UZYSKANIA ZDOLNOŚCI DO NIELIMITOWANEJ LICZBY PODZIAŁÓW UZYSKANIA ZDOLNOŚCI DO INDUKCJI TWORZENIA NACZYŃ KRWIONOŚNYCH DOPROWADZAJĄCYCH KREW DO GUZA
ANTYGENY PROLIFERACJI SZYBKOŚĆ WZROSTU NOWOTWORU ZALEśY OD: AKTYWNOŚCI PROLIFERACYJNEJ KOMÓREK TEMPA OBUMIERANIA KOMÓREK OCENA PROLIFERACJI KOMÓRKOWEJ JEST STOSOWANA JAKO WSKAŹNIK PROGNOSTYCZNY W WIELU RODZAJACH NOWOTWORÓW. PROLIFERACJĘ KOMÓRKOWĄ MOśEMY OCENIĆ PRZY UśYCIU TAKICH ANTYGENÓW JAK: Ki-67 PCNA MCM2
ANTYGEN JĄDROWY PROLIFERACJI KOMÓRKOWEJ PCNA NIEHISTONOWE BIAŁKO JĄDROWE O MASIE CZĄSTECZKOWEJ 36 kd PEŁNI FUNKCJĘ BIAŁKA POMOCNICZEGO DLA POLIMERAZY DNA delta ANTYGEN TEN JEST HOMOTRIMEREM, KTÓRY TWORZY PIERŚCIEŃ UMOśLIWIAJĄCY OBJĘCIE DNA I PRZYŁĄCZENIE POLIMERAZY DNA delta KAśDY Z MONOMERÓW POSIADA PO DWIE alfa HELIKAZY ODPOWIEDZIALNE ZA ROZPLECENIE PODWÓJNEJ HELISY DNA GROMADZI SIĘ OD FAZY G1 CYKLU KOMÓRKOWEGO OSIĄGAJĄC MAKSIMUM EKSPRESJI W FAZIE S, A NASTĘPNIE STOPNIOWO ZANIKA Aś DO KOŃCA MITOZY
Ki-67 NIEHISTONOWE BIAŁKO WIĄśCE DNA WYRÓśNIAMY DWIE IZOFORMY BIAŁKA Ki-67 POWSTAŁE PRZEZ ALTERNATYWNY SPLICING mrna O MASACH CZĄSTECZKOWYCH 320 I 359 kd EKSPRESJA Ki-67 WZRASTA OD FAZY G1 CYKLU KOMÓRKOWEGO, OSIĄGAJĄC MAKSIMUM W METAFAZIE, PO CZYM ZACZYNA SIĘ OBNIśAĆ PODCZAS ANAFAZY I TELOFAZY.
MCM2 NALEśY DO RODZINY 10 BIAŁEK MCM (minichromosome maintenance) BIORĄCYCH UDZIAŁ W INICJACJI REPLIKACJI BIAŁKA MCM2-7 CHARAKTERYZUJĄ SIĘ PODOBNĄ BUDOWĄ I FUNKCJĄ. TWORZĄ HEKSAMERYCZNY KOMPLEKS O MASIE CZĄSTECZKOWEJ 600 kd ROZPLATAJĄCY PODWÓJNĄ HELISĘ DNA PODCZAS INICJACJI REPLIKACJI KOMPLEKS TEN GROMADZI SIĘ OD WCZESNEJ FAZY G1, USUWANY JEST NATOMIAST W FAZIE S i G2
CEL I ZAŁOśENIA PRACY CELEM NINIEJSZEJ PRACY BYŁA OCENA METODAMI IMMUNOHISTOCHEMICZNYMI EKSPRESJI BIAŁEK Ki-67, PCNA I MCM2 W RAKU JELITA GRUBEGO ANALIZA KORELACJI EKSPRESJI TYCH BIAŁEK Z WYBRANYMI PARAMETRAMI ANATOMO-KLINICZNYMI: WIEK PACJENTA LOKALIZACJA NOWOTWORU OBECNOŚĆ PRZERZUTÓW DO WĘZŁÓW CHŁONNYCH OBECNOŚĆ PRZERZUTÓW ODLEGŁYCH
GRUPA BADANA GRUPĘ BADANĄ STANOWIŁO 55 PACJENTÓW Z RAKIEM JALITA GRUBEGO W STOPNIU ZAAWANSOWANIA pt3 ORAZ ZŁOŚLIWOŚCI HISTOLOGICZNEJ G2 OPEROWANYCH NA ODDZIALE CHIRURGII SZPITALA WOJEWÓDZKIEGO im. J. ŚNIADECKIEGO W BIAŁYMSTOKU
METODYKA WYCINKI TKANKOWE UTRWALONO W 10% ZBUFOROWANYM ROZTWORZE FORMALDEHYDU, PO CZYM ZATAPIANO W PARAFINIE W TEMPERATURZE 56 0 C BADANIA IMMUNOHISTOCHEMICZNE WYKONANO PRZY UśYCIU PRZECIWCIAŁ MONOKLONALNYCH i POLIKLONALNYCH: Ki-67- MONOCLONAL MOUSE (DAKO) CLONE MIBI, PCNA- MONOCLONAL MOUSE (DAKO) CLONE PC10, MCM2-POLYCLONAL GOAT (SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY) Sc-9839 SKIEROWANYCH ODPOWIEDNIO PRZECIWKO LUDZKIEMU BIAŁKU Ki-67, PCNA I MCM2 Prawidłowy nabłonek jelita grubego
METODYKA c.d. REAKCJĘ WYKONANO W TECHNICE LSAB (BIOTYNA- STREPTOWIDYNA- PEROKSYDAZA) KOMPLEKS ANTYGEN-PRZECIWCIAŁO UWIDOCZNIONO PRZY UśYCIU CHROMOGENU DAB OCENĘ AKUMULACJI JĄDROWEJ W KOMÓRKACH NOWOTWOROWYCH PRZEPROWADZONO W SPOSÓB PÓŁILOŚCIOWY PRZYJMUJĄC PRÓG REAKCJI DODATNIEJ : Ki-67- REAKCJA OBECNA W POWYśEJ 50% KOMÓREK PCNA- REAKCJA OBECNA W POWYśEJ 60% KOMÓREK MCM2- REAKCJA OBECNA W POWYśEJ 60% KOMÓREK Ekspresja PCNA w raku jelita grubego
WYNIKI NIE WYKAZANO KORELACJI POMIĘDZY EKSPRESJĄ Ki-67, PCNA, MCM2 A: WIEKIEM PACJENTA LOKALIZACJĄ NOWOTWORU OBECNOŚCIĄ PRZERZUTÓW ODLEGŁYCH Ekspresja MCM2 w raku jelita grubego
WYNIKI c.d. WYKAZANO KORELACJĘ POMIĘDZY EKSPRESJĄ Ki-67, PCNA I MCM2 A: OBECNOŚCIĄ PRZERZUTÓW DO WĘZŁÓW CHŁONNYCH EKSPRESJA Ki-67, PCNA I MCM2 KORELOWAŁA ZE SOBĄ U WIĘKSZOŚCI PACJENTÓW. Ekspresja Ki-67 w raku jelita grubego
WNIOSKI UZYSKANE WYNIKI POZWALAJĄ STWIERDZIĆ, Iś W GRUPIE BADANEJ (RAK JELITA GRUBEGO pt3, G2) OBECNOŚĆ EKSPRESJI Ki-67, PCNA I MCM2 W GŁÓWNEJ MASIE GUZA SUGERUJE WYSTĘPOWANIE PRZERZUTÓW RAKA DO WĘZŁÓW CHŁONNYCH.