PL/EP 1926391 T3 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP 1926391 Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: 11.09.2006 068086.6 (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: 12.08.2009 Europejski Biuletyn Patentowy 2009/33 EP 1926391 B1 (13) T3 (1) Int. Cl. A23K1/18 A61K31/198 A61K36/00 A23K1/16 (2006.01) (2006.01) (2006.01) (2006.01) (4) Tytuł wynalazku: Kompozycja biologicznie dostępnej metioniny z co najmniej jednym olejkiem eterycznym (30) Pierwszeństwo: FR2000009273 12.09.200 (43) Zgłoszenie ogłoszono: 04.06.2008 Europejski Biuletyn Patentowy 2008/23 (4) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: 29.01.20 Wiadomości Urzędu Patentowego 01/20 (73) Uprawniony z patentu: Adisseo Ireland Ltd, Dublin, IE (72) Twórca (y) wynalazku: MERCIER Yves, Clermont Ferrand, FR GERAERT Pierre-André, Rochecorbon, FR (74) Pełnomocnik: LDS Łazewski Depo i Wspólnicy rzecz. pat. Łazewski Marek 01-612 Warszawa Mysłowicka 1 Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejsk iego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).
EP 1 926 391 B1 Z-6434 KOMPOZYCJA BIOLOGICZNIE DOSTĘPNEJ METIONINY Z CO NAJMNIEJ JEDNYM OLEJKIEM ETERYCZNYM. Opis wynalazku [0001] Prezentowany wynalazek dotyczy uzupełnienia pożywienia zwierząt hodowlanych o metioninę. [0002] Mikroflora jelitowa zwierząt składa się z wielu różnych organizmów, w tym bakterii, drożdży i grzybów. Ta mikroflora ma znaczący wpływ na zdrowie i wydajność zwierząt. [0003] Znajdują się tam głównie dwa typy bakterii: jedna grupa to bakterie patogenne (na przykład: Salmonella, Campylobacter jejuni albo Clostridium perfringens), a druga to bakterie, które nie są uważane za patogeny (na przykład Lactobacillus albo Propionibacterium). Ogólny wpływ, jaki mają te bakterie na produktywność zwierząt 1 hodowlanych, jest negatywny.
[0004] Od wielu lat, przedsiębiorstwa zajmujące się hodowlą zwierząt szukają sposobu modyfikacji oddziaływania flory bakteryjnej tak, aby poprawiała wydajność zwierząt. [000] I tak, opis US 6,322,82 opisuje użycie olejków eterycznych do przygotowania kompozycji leczniczych, które mogłyby zastąpić kompozycje zawierające zwłaszcza sulfonamidy, kortyzon lub antybiotyki. [0006] Natomiast opis US 4,166,867 opisuje przygotowanie paszy dla koni, która jest bardziej aromatyczna, dzięki zastosowaniu cytrynowego olejku eterycznego jako powłoki. Olejek stanowi mniej niż 0,01% masy produktu końcowego. [0007] W zgłoszeniu patentowym WO 03/0693 opisany został suplement diety wykorzystywany w żywieniu przeżuwaczy. Suplement ten zawiera co najmniej jeden olejek eteryczny i co najmniej jeden związek z grupy saponin, które działają w żwaczu utrzymując optymalny poziom białek żwaczowych. [0008] Szczególnie częste jest uzupełnianie wyżywienia zwierząt o 1 antybiotykowe stymulatory wzrostu co pozwala na zmniejszenie ogólnej ilości bakterii w przewodzie pokarmowym i zwiększenie wydajności wzrostu lub produkcji. Jednakże, stosowanie antybiotyków jako stymulatorów wzrostu jest zakazane w Europie od 1 stycznia 2006. [0009] Wywołało to potrzebę stworzenia produktów stanowiących zamiennik. 20 [00] Celem niniejszego wynalazku jest opracowanie paszy dla zwierząt hodowlanych, która będzie miała bakteriobójczy wpływ na florę jelitową tych zwierząt. [0011] Innym celem tego wynalazku jest opracowanie paszy dla zwierząt hodowlanych, mającej korzystny wpływ na produktywność zwierząt. Kolejnym celem jest
3 otrzymanie dodatków do żywności, które nie zawierają antybiotyków, ale nadal mają korzystny wpływ na rozwój zwierząt, podobny do tego wywołanego stosowaniem antybiotyków. [0012] Jeszcze innym celem niniejszego wynalazku jest opracowanie paszy mającej wpływ na florę jelitową zwierząt hodowlanych. [0013] Opisywany wynalazek dotyczy zatem kompozycji synergicznej paszy dla zwierząt hodowlanych z dodatkiem biologicznie dostępnej metioniny. Pasza ta zawiera: a) związek biologicznie dostępnej metioniny, i b) co najmniej % minimum jednego olejku eterycznego. [0014] Twórcy opisywanego produktu stwierdzili, że kompozycja o zaprezentowanym powyżej składzie, zawierająca te dwa wymienione składniki, ma efekt synergicznie bakteriobójczy na florę jelitową. W istocie biologicznie dostępna metionina i olejek eteryczny lub kompozycja olejków eterycznych wzajemnie wzmacniają swoje działanie. 1 [001] Żadne wcześniejsze badania nie opisują synergicznego efektu bakteriobójczego kompozycji biologicznie dostępnej metioniny z co najmniej jednym olejkiem eterycznym. Poprzez biologicznie dostępną metioninę rozumiemy każdy związek, który może zapewnić zwierzętom hodowlanym dzienną, niezbędną dawkę metioniny. W istocie, 20 metionina może być podawana zwierzętom hodowlanym w różnej formie. W tym przypadku biologicznie dostępna metionina jest wyizolowana.
4 Może występować przede wszystkim jako czysta metionina, nieistotne czy L-metionina czy D,L-metionina. Może występować również jako pochodna metioniny. Przez pochodną metioniny rozumiemy na przykład sole, amidy, estry alkilowe lub alkoholu, pochodne ketonowe, pochodne hydroksylowe oraz ich pochodne. Może występować jako kwas 2-hydroksy-4-metylotiobutanowy (dalej nazywana HMTBA lub hydroksylowanym analogiem metioniny), który wykorzystywany jest jako analog metioniny w żywieniu zwierząt hodowlanych. Zaletą możliwości podawania metioniny w formie płynnej jest ułatwienie wykorzystania jej przez firmy produkujące żywność. Metionina może występować również jako ester izopropylowy hydroksylowanego analogu metioniny lub ester tert-butylowy metioniny. Opisywana kompozycja może również zawierać kilka źródeł biologicznie dostępnej metioniny, na przykład kompozycję metioniny i jej hydroksylowanego analogu. 1 [0016] Biologiczną dostępność metioniny w danej formie określa się na podstawie ilości substancji czynnej we krwi, w stosunku do ilości substancji czynnej wprowadzonej do diety zwierzęcia. Taki sposób wyznaczania dostępności uwzględnia wchłanianie w jelitach podczas przesuwania się pokarmu, przesuwanie się kęsów pokarmu do różnych komór żołądka u przeżuwaczy oraz szybkość przekształcania substancji aktywnych przez 20 organizm (na przykład przypadek hydroksylowanego analogu metioniny). [0017] Przez olejek eteryczny rozumiemy olejek uzyskany z różnych części roślin (kwiaty, pąki, nasiona, liście, gałęzie, trawy, kora, drewno, owoce i korzenie). Olejki eteryczne można uzyskać głównie poprzez tłoczenie, fermentację, macerację lub
ekstrakcję. Olejki eteryczne są czasami nazywane olejkami lotnymi z powodu obecności terpenów (węglowodany niearomatyczne) i związków tlenu (alkohole, aldehydy, ketony), które są aromatyczne. Olejek eteryczny występować w stanie naturalnym, w formie oczyszczonej, lub złożonej. [0018] Olejek eteryczny wykorzystany w opisywanym wynalazku może być kompozycją olejków eterycznych. [0019] Jeśli chodzi o sposób wytwarzania opisywanego produktu, olejki eteryczne składają się z więcej niż % co najmniej jednego z poniższych związków: octanu linalolu, alkoholu kuminowego, aldehydu cynamonowego, borneolu, kadinenu, kamfenu, kamfory, karwakrolu, karwonu, eukaliptolu, cytralu, cytronelalu, cytronelolu, cymenu, dipentenu, estragolu, eugenolu, geraniolu, limonenu (D lub L), linalolu (D lub L), mentolu, metylochawikolu, p-cymenu, felandrenu, pinenu (alfa lub beta), salicylanu metylu, terpinenu (alfa lub beta), terpinolu (alfa lub beta), tujonu, tymolu, octanu bornylu, octanu geranylu, octanu eugenolu, aldehydu kminkowego, allicyny, anetolu, aldehydu perilartyny 1 i sabinenu. Najlepiej jest, jeżeli olejki eteryczne są złożone z co najmniej % jednego z tych związków. [0020] Najlepiej, jeśli olejki są ekstrahowane na zimno ze skórki lub uzyskiwane na drodze destylacji z innych części następujących roślin: czosnku, żurawiny, aloesu, kopru, anyżu, drzewa herbacianego, bazylii, bergamotki, drzewa różanego, brzozy, 20 jałowca, marchwi, kurkumy, cajeput, drzewa kamforowego, cynamonu, kminku, selera, dębu, cytryny, trawy cytrynowej, kolendra, kminek, estragonu, eukaliptusa kulistego, kopru, jałowca, geranium, imbiru, żeń-szenia, goździka, hyzopu, liścia laurowego, lawendy prawdziwej, lawendy pieprzowej, trawy cytrynowej, limonki, mandarynki, majeranku, gałki muszkatołowej, mirry, mirtu, niaouli, cebuli, kadzidła, pomarańczy,
6 oregano, palmarosy, grejpfruta, papaji, papryki, paczuli, pietruszki, pieprzu, sosna nadmorska, sosna srebrnej, jabłoni, chrzanu, rozmarynu, drzewa sandałowego, cząbru, Sassafras, szałwi, tymianku, terpentyny, czerwonego tymianku, werbeny, wetiweri, ylang-ylang. [0021] Pojęcie zwierzę oznacza w szczególności zwierzęta hodowlane, a zwłaszcza zwierzęta wypasane (głównie bydło hodowane dla mięsa, mleka, sera i skóry, owce hodowane dla mięsa, wełny i sera; kozy), świnie, króliki, drób (kurczaki, kury, indyki, kaczki, gęsi i inne), zwierzęta wodne (na przykład ryby, krewetki, ostrygi i małże), zwierzęta rozrywkowe i domowe (głównie konie, psy, koty). Bydło rogate jest podrodziną rodziny krętorogie. Są to ssaki przeżuwające mające czterokomorowy żołądek. Wśród tych ssaków wyróżnia się wiele istotnych zwierząt hodowlanych (rasy mięsne, rasy mleczne i rasy mieszane). [0022] Opisywana kompozycja występuje w postaci proszku lub w postaci płynnej. Biologicznie dostępna metionina, która jest częścią kompozycje jest w postaci 1 proszku lub granulek. Oznacza to konieczność rozpuszczenia tego proszku w olejku eterycznym, aby otrzymać kompozycję stanowiącą opisywany wynalazek. Jak zostało opisane powyżej, metionina może być zarówno w postaci hydroksylowanego analogu, a zatem w formie płynnej. W takim przypadku dwie ciecze są wymieszane w sposób jednorodny przed podaniem zwierzętom lub dodaniem do ich żywności. 20 [0023] Korzystne jest, jeżeli związek a) jest wybrany spośród czystej metioniny (L-metioniny lub D,L-metioniny) lub jej pochodnych, takich jak sole, amidy, estry alkilowe lub alkoholu, pochodnych ketonowych, hydroksylowanych analogów oraz pochodnych tych produktów.
7 [0024] Zgodnie z opisem związek a) ma wzór ogólny (I): w którym: R oznacza H lub grupę izopropylową; R oznacza OH, lub NH2. [002] Zgodnie z opisem wynalazku, na paszę, która ma wpływ synergicznie bakteriobójczy na florę jelitową zwierząt składają się: a) biologicznie dostępna metionina od do 9% masy; b) co najmniej jeden olejek eteryczny od do 9% masy, i c) co najmniej jeden inny składnik. Zgodnie z tym opisem, pasza zawiera co najmniej jeden inny składnik, na przykład emulgator lub żelatynę. W związku z tym pozostaje dowolność w kwestii ostatecznego składu. Korzystne jest jednak, żeby do 90% masy kompozycji stanowiła biologicznie dostępna metionina, 1 do 90% masy co najmniej jeden olejek eteryczny, a resztę co najmniej jeden inny składnik.
8 Inną możliwością jest, aby biologicznie dostępna metionina stanowiła od 1 do 8% masy, co najmniej jeden olejek eteryczny stanowił także od 1 do 8% masy, oraz występował co najmniej jeszcze jeden inny składnik. Kolejną możliwością jest, żeby 20 do 80% masy opisywanej kompozycje stanowiła biologicznie dostępna metionina, od 20 do 80% stanowił co najmniej jeden olejek eteryczny, oraz żeby występował co najmniej jeden inny składnik. [0026] Na drodze kolejnego sposobu tworzenia opisywanego wynalazku, na skład paszy, która ma synergiczny efekt bakteriobójczy na florę jelitową zwierząt składa się: a) biologicznie dostępna metionina od do 9% masy, i b) co najmniej jeden olejek eteryczny od do 9% masy; W takim przypadku, kompozycja składa się tylko z dwóch składników, nie zawiera żadnego innego związku. W ten sposób mamy do czynienia ze stałym składem kompozycje. Korzystne jest, gdy do 90% masy kompozycji stanowi biologicznie dostępna 1 metionina oraz do 90% masy co najmniej jeden olejek eteryczny. Innym sposobem otrzymywania opisywanej kompozycje jest wytworzenie związku składającego się w 1 do 8% masy z biologicznie dostępnej metioniny oraz w 1 do 8% masy z co najmniej jednego olejku eterycznego. Jeszcze inną możliwością jest, aby biologicznie dostępna metionina stanowiła od 20 20 do 80% masy, co najmniej jeden olejek eteryczny stanowił także od 20 do 80% masy, oraz żeby występował co najmniej jeden inny składnik.
9 [0027] Zgodnie z zakładanym sposobem wytwarzania opisywanej kompozycje, biologicznie dostępna metionina (tj. związek a)) stanowi co najmniej 60% masy kompozycje, a najlepiej gdy stanowi więcej niż 80% masy. [0028] Zgodnie z zakładanym sposobem wytwarzania opisywanej kompozycje, olejek eteryczny (tj. związek b)) stanowi mniej niż 40% masy kompozycje, a najlepiej gdy stanowi mniej niż 20% masy, przy czym jeszcze bardziej korzystne jest, gdy stanowi nie więcej niż % masy kompozycje. Podobnie, związek b) jest obecny w składzie masowym opisywanego związku w proporcji większej niż %, przy najkorzystniejszej proporcji większej lub równej 8% masy. [0029] Opisywany wynalazek dotyczy także dodatku do żywności, będącego kompzycją według prezentowanego opisu. Poprzez "dodatek do żywności" rozumiemy aktywny związek lub kompozycję aktywnych związków stanowiące na ogół mniej niż 2% ogólnej masy pożywienia, na przykład mniej niż 1% masy pożywienia. [0030] Prezentowany wynalazek dotyczy również paszy zwierzęcej, szczególnie 1 takiej, jak kompozycja opisywana powyżej lub zawierającej opisywany dodatek do żywności. [0031] Opisywany wynalazek dotyczy wreszcie takiego stosowania kompozycje, jak ta opisywana powyżej, które ma na celu otrzymanie dodatku do żywności. [0032] Poprzez wykorzystanie opisywanego wynalazku rozumie się także, takie 20 jego użycie, które może dodatkowo pozwolić na obniżenie aktywności flory bakteryjnej u zwierząt hodowlanych lub może pozwolić na zwalczenie szkodliwych efektów działania mikroorganizmów patogennych flory jelitowej zwierząt hodowlanych.
[0033] Poprzez wykorzystanie opisywanego wynalazku rozumie się także, takie jego użycie, które może dodatkowo pozwolić na poprawienie wydajności zwierząt, czyli ma wpływ na wzrost, żywotność, jednorodność lub wydajność produkcji. [0034] Poprzez wykorzystanie opisywanego wynalazku rozumie się również, takie jego użycie, które może spowodować poprawienie wydajności zwierząt poprzez zmniejszenie aktywności flory bakteryjnej zwierząt hodowlanych. Zatem wykorzystując prezentowany wynalazek, tworzy się kompozycję, która stanowi dodatek do żywności, mający na celu poprawienie wydajności zwierząt poprzez zmniejszenie aktywności flory jelitowej omawianych zwierząt. [003] Poniższe przykłady i zaprezentowane wyniki liczbowe pomogą wskazać oczywiste zalety i cechy prezentowanego wynalazku. [0036] Celem poniższego badania jest porównanie produkcji gazu przez florę jelitową brojlerów, na skutek poddania ich różnym próbom. Produkcja gazu jest pośrednim wskaźnikiem aktywności flory jelitowej kurczaków. 1 Przykład 1 Zwierzęta i próby [0037] 0 brojlerów jest hodowanych na diecie opartej na pszenicy, przy wykorzystaniu takiej samej diety. Po 3 dniach kurczaki są zabijane, a ich treść żołądkowa jest usuwana w warunkach beztlenowych. Zawartość przechowuje się w fiolkach 20 umieszczonych w temperaturze 18 C.
11 Test in vitro [0038] Postępując według schematu opisanego w tabeli I oznacza się objętość gazu w funkcji czasu. 48 butelek wypełnionych jest kolejno przez: [0039] - kolejne badane grupy (grupa kontrolna bez żadnych dodatków, HMTBA, HE lub próba badawcza), - 90 ml buforu zawierającego pszenną skrobię (pożywka dla bakterii); bufor ma za zadanie utrzymanie stałego poziomu ph oraz usunięcie tlenu (O2), - ml inokulum, które stanowi kompozycja składająca się w ¼ z treści jelitowej, a w ¾ ze sterylnej soli fizjologicznej, która jest filtrowana i homogenizowana przed napełnieniem. [0040] Badane dawki zostały przygotowane tak, aby były reprezentatywne dla produktów, które znajdują się w treści przewodu pokarmowego zwierząt. 1 [0041] Po przeprowadzeniu doświadczenia według schematu opisanego w powyższej tabeli I, otrzymujemy krzywą objętości gazu w zależności od czasu. Zazwyczaj ma ona kształt esowaty.
12 Tabela I
13 [0042] Taką krzywą można modelować na podstawie następującego wzoru: gdzie Y = objętość wyprodukowanego gazu t = czas A, B et C = zmienne [0043] Z powyższego równania można również wyliczyć wzorcową objętość końcową Vf (Vf=A), a także czas, w którym poziom produkcji gazu jest najwyższy (TRM). Wartość TRM można wykorzystać jako pośredni sposób obliczenia czasu opóźnienia, którego obliczenie jest niemożliwe przy tym modelu. Wykonuje się analizę wariancji (ANOVA), aby sprawdzić efekty prób. Jeśli prawdopodobieństwo skuteczności działania jest znaczące, tzn. p<0,0, porównuje się średnie za pomocą testu NIR, który pozwala na ustalenie różnic średnich, pomiędzy poszczególnymi próbami. Wyniki 1 [0044] Wyniki zostały zestawione w tabeli II. W tabeli II zostały przedstawione wyniki istotne statystycznie na poziomie istotności %, jeżeli wyniki prób nie mają żadnych liter wspólnych. [004] Wyraźnie widać, że wszystkie badane kombinacje dały wynik istotnie różny od próby kontrolnej, zarówno pod względem Vf i TRM. Kompozycje te zmniejszyły 20 aktywność flory jelitowej.
14 Tabela II
1 efektywne. [0046] Celem jest zwiększenie TRM, a zatem wszystkie badane próby okazały się [0047] To wskazuje na zwiększenie oddziaływania na bakterie dzięki wystąpieniu efektu synergii po zmieszaniu biologicznie dostępnej metioniny, w typ przypadku w postaci HMTBA, i olejku eterycznego. [0048] W istocie, TRM kontroli wynosi,8h. Próba z HMTBA dała identyczny efekt, co pozwala na wniosek, że HMTBA nie ma lub ma niewielki wpływ na aktywność bakterii, jeżeli jest stosowana bez dodatków. TRM w przypadku próby HE1 wynosi 13,h, a zatem HE1 ma wpływ na aktywność bakteryjną. TRM dla próby 1 wynosi 19,3h, a zatem taka kompozycja wpływa na aktywność bakterii. Efekt ten jest prawie sumą efektów wywołanych przez HE1 i HMTBA stosowanych osobno. A zatem kompozycja 1, a także kompozycje od 2 do, w przypadku których 1 obserwujemy podobne wyniki, wywołują synergiczny efekt na aktywność bakterii, mierzoną za pomocą TRM. [0049] Pomiar Vf jest wskaźnikiem dla długotrwałego stosowania. Celem jest zminimalizowanie Vf. [000] Za najbardziej skuteczne, uważane są te kompozycje, które minimalizują 20 objętość końcową (Vf), oraz w tym samym czasie maksymalizują TRM. W tym przypadku jako najskuteczniejsze można wskazać kompozycje 3 i.
16 Przykład 2 [001] Warunki i parametry danego eksperymentu zostały przeniesione z przykładu 1 do przykładu 2 według poniższej tabeli III. Tabela III Wyniki [002] Wyniki zostały przedstawione w tabeli IV. [003] Biorące pod uwagę TRM, którego wartość chcemy zwiększyć, wszystkie badane próby (HMTBA, HE oraz próby badawcze) są skuteczne.
17 Tabela IV [004] To ponownie wskazuje, że występuje efekt synergizmu działania kompozycje biologicznie dostępnej metioniny, w tym przypadku w postaci HMTBA, i olejku eterycznego, na aktywność bakteryjną. TRM kontroli wynosi 1,3h. Podanie HMTBA wywołało zwiększenie wartości TRM do 20,3h. A zatem HMTBA ma wpływ na działalność bakteryjną, kiedy jest podawana bez innych substancji. Podanie próby HE1 spowodowało wzrost TRM do 27,7h, a więc HE 1 wpływa na aktywność bakterii.
18 Próba 1 daje wynik TRM równy 33,1h. A zatem wpływa ona na aktywność bakterii, z wynikiem równym prawie sumie efektów spowodowanych przez HE1 i HMTBA osobno. [00] Kompozycja 1, jak również próba 2, która powoduje podobne efekty, wykazują zatem efekty synergiczne. [006] Wartość Vf jest wskaźnikiem długoterminowego stosowania substancji. Celem jest zminimalizowanie wartości Vf. [007] Za najbardziej skuteczne uważane są te próby, które równocześnie zmniejszają objętość końcową i zwiększają wartość TRM. W tym przypadku jest to próba 1. [008] Uwaga: różnice w wartości Vf i TRM pomiędzy różnymi przykładami mogą być wynikiem stosowania różnego pokarmu oraz wykorzystania zwierząt z różnych partii. Mimo że hodowla, pożywienie i warunki pobierania próbek były identyczne, populacje bakterii, które znajdują się w przewodzie pokarmowym zwierząt nigdy nie są 1 dokładnie takie same. Obserwowane zmiany wartości w różnych przykładach są spowodowane zróżnicowaniem flory bakteryjnej występującej w poszczególnych próbkach. Przykład 3 [009] Warunki i parametry danego eksperymentu zostały przeniesione z przykładu 20 1 do przykładu 3 według tabeli V.
19 Tabela V Wyniki [0060] Wyniki zostały przedstawione w tabeli VI. [0061] Wszystkie próby badawcze dały znacząco różne wyniki w stosunku do kontroli, pod względem zarówno Vf, jak i TRM. Kompozycje te zatem wykazują efekt zmniejszający aktywność flory jelitowej. [0062] W odniesieniu do TRM, który powinien zostać zmaksymalizowany, wszystkie próby (HMTBA, HE i próby badawcze) są skuteczne.
20 Tabela VI [0063] To pokazuje raz jeszcze, że można zaobserwować efekt synergicznego oddziaływania, na aktywność bakterii, kompozycje biologicznie dostępnej metioniny, na przykład HMTBA, w połączeniu z olejkiem eterycznym, na przykład olejkiem cynamonowym. W istocie, TRM w przypadku kontroli wynosi 14,1h. Próba z HMTBA daje wartość TRM równą 28,1h. Zatem HMTBA, jeśli jest podawana bez innych związków, wykazuje wpływ na aktywność bakteryjną. Podawanie HE1 daje wartość TRM równą 3,h. Zatem HE1 wykazuje wpływ na działalność bakteryjną. [0064] W przypadku próby 1 obserwujemy wartość TRM równą więcej niż 72h. Zatem wykazuje ona aktywność bakteriobójczą, która jest w stanie prawie całkowicie
21 zapobiec produkcji gazu przez bakterie jelitowe. Kompozycja HMTBA i cynamonowego olejku eterycznego ma zatem bardzo silny efekt na aktywność bakterii. Efekt ten prawie przewyższa sumę efektów wywołanych przez podanie HMTBA oraz olejku cynamonowego w osobnych próbach. Kompozycja 1 prezentuje zatem bardzo silną synergię. Patrz wykres 6. [006] Wartość Vf jest wskaźnikiem długoterminowego stosowania substancji. Celem jest zminimalizowanie wartości Vf. [0066] Za najbardziej skuteczne uważane są te próby, które równocześnie zmniejszają objętość końcową i zwiększają wartość TRM. Kompozycją, która spełnia te warunki, i która w związku z tym jest uważana za najbardziej skuteczną, jest ta z próby 1. Przykład 4 [0067] Warunki i parametry danego eksperymentu zostały przeniesione z przykładu 1 do przykładu 4 według tabeli VII.
22 Tabela VII Wyniki [0068] Wyniki zostały przedstawione w tabeli VIII. Tabela VIII [0069] To pokazuje raz jeszcze, że można zaobserwować efekt synergiczny działania kompozycje biologicznie dostępnej metioniny z kompozycją olejków eterycznych, w stosunku do aktywności bakterii. [0070] TRM w przypadku kontroli wynosi 11,1h. Biorąc pod uwagę próbę, która zawierała 84,7% HMTBA oraz 1,3% kompozycje olejku z drzewa herbacianego oraz olejku cynamonowego obserwujemy, że:
23 - podawanie HMTBA daje wartość TRM równą 1,4. Zatem HMTBA wykazuje wpływ na aktywność bakteryjną, jeśli jest podawana bez innych związków (wartość różnicy w stosunku do próby kontrolnej wynosi 4,3h) - podawanie MHE daje wartość TRM równą 19,0h. Zatem HE1 wykazuje wpływ na działalność bakteryjną (różnica w stosunku do próby kontrolnej wynosi 7,9h) - próba badawcza dała wartość TRM równą 2,3h. Kompozycja z tej próby wykazuje zatem efekt na aktywność bakterii. Efekt ten prawie przewyższa sumę efektów wywołanych przez podanie MHE2 i HMTBA w osobnych próbach. W istocie (2,3-11,1) jest większe niż (4,3+7,9). Kompozycja wykazuje efekt synergiczny w stosunku do aktywności bakterii. [0071] Wartość Vf jest wskaźnikiem długoterminowego podawania substancji. Celem jest zminimalizowanie wartości Vf. Za najbardziej skuteczne uważane są te próby, które równocześnie zmniejszają objętość końcową i zwiększają wartość TRM. 1 Kompozycja wykorzystana w tym badaniu spełnia powyższe warunki, w związku z czym uważana jest za wyjątkowo skuteczną. Przykład [0072] W przykładzie 1 wykazano efektywność kompozycji olejków eterycznych w celu zredukowania aktywności jelitowej zwierząt karmionych pożywieniem 20 na bazie pszenicy.
24 Celem tej próby jest wykazanie, że trzy z tych kompozycji także będą wykazywały efekt redukujący w stosunku do aktywności bakterii jelitowych w przypadku kurczaków odżywianych na bazie kukurydzy. Zwierzęta i próby [0073] Warunki identyczne, jak te w przykładzie 1.. Test in vitro [0074] Schemat eksperymentu został przedstawiony w tabeli I dla próby 2, 3, 4 i. Wyniki [007] Wyniki zostały przedstawione w tabeli IX.
2 Tabela IX [0076] W tabeli zostały przedstawione wyniki istotne statystycznie na poziomie istotności %, jeżeli wyniki prób nie mają żadnych liter wspólnych Cztery badane kompozycje zmniejszyły znacząco wartość Vf i wyraźnie zwiększyły wartość TRM w porównaniu do kontroli. Oznacza to, że produkty te skutecznie redukują aktywność flory jelitowej kurczaków żywionych pokarmem na bazie kukurydzy. Działanie to jest skuteczne zarówno przy podawaniu krótko- jak i długotrwałym, podobnie jak obserwowaliśmy w przypadku flory kurczaków żywionych pokarmem na bazie pszenicy (przykład 1). Zatem te kompozycje są skuteczne przy dwóch sposobach żywienia. Przykład 6 [0077] Przykłady od 1 do wykazały skuteczność redukowania aktywności bakteryjnej flory jelitowej brojlerów przez różne kompozycje olejków eterycznych. Celem tego doświadczenia jest sprawdzenie skuteczności działania tych 1 kompozycji na florę jelitową świń. Zwierzęta [0078] Świnie są hodowane przez 0 dni, a następnie usuwana jest treść jelitowa w warunkach beztlenowych.
26 Test in vitro [0079] Schemat doświadczenia jest zaprezentowany w tabeli I dla kompozycji 2,3 i 4. Wyniki [0080] Wyniki zostały przedstawione w tabeli X. [0081] W tabeli zostały przedstawione wyniki istotne statystycznie na poziomie istotności %, jeżeli wyniki prób nie mają żadnych liter wspólnych [0082] Wszystkie kompozycje obniżyły wartość Vf, przy czym kompozycje 2 i 3 znacząco, natomiast kompozycja 4 na średnim poziomie. Wszystkie zwiększyły również wartość TRM w stosunku do kontroli. Zatem można stwierdzić, że kompozycje skutecznie redukują aktywność flory jelitowej świń, zarówno przy krótko- jak i długotrwałym stosowaniu.
27 Tabela X Przykład 7 [0083] Celem niniejszego doświadczenia jest porównanie skuteczności co najmniej jednego olejku eterycznego z HMTBA, gdy związki te znajdują się w osobnych butelkach (oba związki znajdują się w niewielkiej ilości w 0 ml rozpuszczalnika, jest zatem niewielki kontakt pomiędzy cząsteczkami) oraz gdy są zmieszane przed podaniem. Zwierzęta [0084] W doświadczeniu wykorzystywana jest flora bakteryjna 3-dniowych kurczaków żywionych na bazie pszenicy. Test in vitro [008] W doświadczeniu badana jest kompozycja, która była badana w przykładzie 1. Schemat eksperymentu jest przedstawiony w tabeli I dla próby 2.. Wyniki [0086] Wyniki zostały przedstawione w tabeli XI. 1 [0087] W tabeli zostały przedstawione wyniki istotne statystycznie na poziomie istotności %, jeżeli wyniki prób nie mają żadnych liter wspólnych. [0088] Efekt HE2 + HMTBA jest znacznie lepszy, jeżeli te dwa składniki są zmieszane przed podaniem wstępny kontakt znacznie zwiększa ich efektywność w stosunku do flory jelitowej. To sugeruje, że zachodzą reakcje fizyczno-chemiczne 20 pomiędzy związkami, które modyfikują ich skuteczność. To potwierdza działanie
28 synergiczne kompozycje biologicznie dostępnej metioniny z co najmniej jednym olejkiem eterycznym. Tabela XI Przykład 8 Zwierzęta [0089] W doświadczeniu wykorzystywana jest flora bakteryjna 3-dniowych kurczaków żywionych pokarmem na bazie pszenicy. Test in vitro [0090] Schemat eksperymentu jest przedstawiony w tabeli XII.
29 Tabela XII Wyniki [0091] Wyniki zostały przedstawione w tabeli XIII. Przedstawione wyniki są istotne statystycznie na poziomie istotności %, jeżeli wyniki prób nie mają żadnych liter wspólnych. Tabela XIII [0092] Jeżeli HMTBA jest stosowana bez dodatku żadnych innych związków, nie wykazuje znaczącego wpływu na fermentację, jak obserwuje się w przykładzie 1. Olejek oregano zwiększa wartość TRM średnio o 2,3h w stosunku do kontroli (wynik istotny). Kompozycja olejku z organo i HMTBA zwiększa wartość TRM o 4,3h w stosunku do kontroli.
30 Zmieszanie powoduje silniejsze działanie w stosunku do aktywności bakteryjnej flory jelitowej ze względu na wystąpienie efektu synergii. Olejek i HMTBA działają zatem synergicznie redukując w krótkim czasie działanie flory jelitowej. Adisseo Ireland Ltd,Dublin 1 Pełnomocnik:
EP 1 926 391 B1 Z-6434 Zastrzeżenia patentowe 1. Kompozycja wykazująca efekt synergiczny stworzona jako dodatek do paszy zwierząt hodowlanych, zawierająca: a. związek biologicznie dostępnej metioniny, i b. co najmniej % masy przynajmniej jednego olejku eterycznego. 2. Kompozycja według zastrz. 1, zawierająca: a. od do 9% masy związku biologicznie dostępnej metioniny, b. od do 9% masy co najmniej jednego olejku eterycznego, i c. ewentualnie co najmniej jeden inny związek. 3. Kompozycja według zastrz. 1, zawierająca: a. od do 9% masy związku biologicznie dostępnej metioniny, b. od do 9% masy co najmniej jeden olejku eterycznego. 4. Kompozycja według któregokolwiek z powyższych zastrzeżeń, znamienna tym, że związek a) jest wybrany spośród czystej metioniny (L-metioniny lub D,L-metioniny), lub jej pochodnych, takich jak sole, amidy, estry alkilowe lub alkoholowe, pochodne ketonowe, hydroksylowane analogi lub pochodne tych produktów.
. Związek według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń, w którym związek a) ma wzór ogólny w postaci (I): w którym: R oznacza H lub grupę izopropylową; R oznacza OH, lub NH2. 6. Zastosowanie kompozycji, z któregokolwiek z zastrzeżeń 1 do, do otrzymania składnika odżywczego przeznaczonego do odżywiania zwierząt. 7. Zastosowanie kompozycji, z któregokolwiek z zastrzeżeń 1 do, do otrzymania dodatku żywieniowego. 8. Zastosowanie według zastrzeżenia 7, do uzyskania dodatku do paszy zwierzęcej, który ma za zadanie zmniejszyć aktywność endogennej flory zwierząt hodowlanych. 9. Zastosowanie według zastrzeżenia 7, do uzyskania dodatku do paszy zwierzęcej, który ma za zadanie poprawić osiągnięcia zwierząt hodowlanych, co ocenia się poprzez aktywność rozrodczą, żywotność, jednorodność, wydajność produkcyjną.. Zastosowanie według zastrzeżenia 7, do uzyskania środka medycznego przeznaczonego do zwalczania negatywnych skutków działalności mikroorganizmów flory jelitowej zwierząt hodowlanych. Adisseo Ireland Ltd Dublin 1 Pełnomocnik: