BACTEC Mycosis-IC/F Culture Vials Pod³o e selektywne dla grzybów i dro d aków

Transkrypt

1 BACTEC Mycosis-IC/F Culture Vials Pod³o e selektywne dla grzybów i dro d aków PP113JAA 2008/01 Polski PRZEZNACZENIE BACTEC Mycosis-IC/F butelki hodowlane s³u ¹ do tlenowych posiewów krwi. Podstawowe zastosowanie do aparatów BACTEC serii fluorescencyjnej do wybiórczej hodowli i odzysku grzybów i dro d aków z krwi. STRESZCZENIE I WYJAŒNIENIA Próbkê do badania inokuluje siê do jednej lub wiêcej fiolek, które umieszcza siê w aparacie fluorescencyjnym BACTEC w celu inkubacji i okresowego odczytu. Ka da fiolka zawiera chemiczny sensor, który mo e wykrywaæ zwiêkszenie iloœci CO 2 wytwarzanego w trakcie wzrostu drobnoustrojów. Sensor jest monitorowany przez aparat co 10 min pod k¹tem wzrostu fluorescencji, który jest proporcjonalny do iloœci obecnego CO 2. Odczyt dodatni wskazuje na przypuszczaln¹ obecnoœæ w fiolce ywych drobnoustrojów. ZASADY PROCEDURY Jeœli w badanej próbce, inokulowanej do fiolki BACTEC, obecne s¹ dro d aki lub grzyby, CO 2 bêdzie wytwarzany, kiedy drobnoustroje bêd¹ metabolizowaæ substraty obecne w próbce. Wzrosty fluorescencji sensora zawartego w fiolce, spowodowane przez wiêksz¹ iloœæ CO 2, s¹ monitorowane przez aparat fluorescencyjny BACTEC. Analiza tempa i wielkoœci wzrostu CO 2 umo liwia okreœlenie przez aparat fluorescencyjny BACTEC, czy wynik dla danej fiolki jest dodatni, tzn. czy badana próbka zawiera ywe drobnoustroje. ODCZYNNIKI Przed przeprowadzeniem badania fiolki do hodowli BACTEC Mycosis-IC/F zawieraj¹ nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki: Lista sk³adników Woda destylowana ml Bulion mózgowo-sercowy... 1,0% (stê enie wagowe) Bulion trawi¹cy sojowo-kazeinowy... 0,5% (stê enie wagowe) Wyci¹g dro d owy... 0,035% (stê enie wagowe) Sacharoza... 0,6% (stê enie wagowe) Dekstroza... 0,1% (stê enie wagowe) m-inozytol... 0,05% (stê enie wagowe) Cytrynian amonu elaza... 0,0001% (stê enie wagowe) Polianetolosulfonian sodu (SPS)... 0,05% (stê enie wagowe) Saponina... 0,24% (stê enie wagowe) Chloramfenikol... 0,0037% (stê enie wagowe) Tobramycyna... 0,001% (stê enie wagowe) Czynnik przeciwpieni¹cy... 0,01% (stê enie wagowe) Wszystkie pod³o a BACTEC s¹ dostarczane z dodanym CO 2. Sk³ad mo e byæ dostosowany do wymagañ specyficznego badania. Ostrze enia i œrodki ostro noœci Do u ytku diagnostycznego in vitro. Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny. W próbkach mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia w¹troby i wirus HIV. Podczas pracy z materia³ami ska onymi krwi¹ i innymi p³ynami ustrojowymi nale y przestrzegaæ Standardowych œrodków ostro noœci 1-4 oraz wytycznych obowi¹zuj¹cych w danej placówce. Przed u yciem ka d¹ fiolkê nale y oceniæ pod k¹tem œladów zniszczenia, zanieczyszczenia lub pogorszenia jakoœci. Fiolki maj¹ce oznaki zniszczenia lub zanieczyszczenia takie jak przeciek, zmêtnienie, zmiana barwy (na ciemniejsz¹), uwypuklenie lub wklêœniêcie przegrody nie powinny byæ u ywane. W fiolce z zanieczyszczeniami mo e dojœæ do zwiêkszenia ciœnienia. Jeœli zanieczyszczona fiolka jest u ywana do bezpoœredniego pobierania materia³u, zanieczyszczone pod³o e hodowlane mo e byæ zassane do y³y pacjenta. Zanieczyszczenie fiolki mo e nie byæ ³atwo widoczne. Kiedy u ywa siê procedury bezpoœredniego pobierania materia³u, nale y monitorowaæ dok³adnie ten proces, aby unikn¹æ zassania materia³u do organizmu pacjenta. W rzadkich przypadkach szyjka fiolki mo e byæ pêkniêta i mo e od³amaæ siê podczas zdejmowania pokrywki albo w czasie obs³ugi. Tak e w rzadkich przypadkach fiolka mo e nie byæ zamkniêta wystarczaj¹co szczelnie W obu przypadkach zawartoœæ fiolki mo e wyciekn¹æ lub rozlaæ siê. Jeœli fiolka by³a inokulowana, materia³, który wyciek³ lub uleg³ rozlaniu, nale y traktowaæ z ostro noœci¹ ze wzglêdu na to, e mo e on zawieraæ patogenne drobnoustroje (czynniki). Przed utylizacj¹ nale y wysterylizowaæ wszystkie inokulowane fiolki w autoklawie. Fiolki z hodowl¹, która da³a wynik dodatni, do podhodowli, barwienia itd.: Przed pobraniem próbki nale y wypuœciæ gaz, który czêsto jest wytwarzany w wyniku metabolizmu bakterii. Próbki nale y w miarê mo liwoœci pobieraæ w kabinie bezpieczeñstwa mikrobiologicznego w odpowiedniej odzie y ochronnej, w³¹czaj¹c w to rêkawiczki i maski. Dodatkowe informacje na temat podhodowli zob. rozdzia³ Procedury. Aby zminimalizowaæ potencjalny wyciek podczas inokulacji próbki do fiolki hodowlanej, nale y u yæ koñcówek z za³o onymi na sta³e ig³ami lub zakoñczeniami typu Luer-Lok. Instrukcja przechowywania Fiolki BACTEC s¹ dostarczane w postaci gotowej do u ycia i nie wymagaj¹ rozprowadzenia ani rozcieñczenia zawartoœci. Przechowywaæ w temperaturze 2 25 C w suchym miejscu. Chroniæ przed bezpoœrednim œwiat³em s³onecznym. POBIERANIE PRÓBKI Próbkê nale y pobraæ przy u yciu sterylnych technik, aby zredukowaæ mo liwoœæ zanieczyszczenia. Typowa objêtoœæ próbki to 8 10 ml. Zaleca siê inokulacjê próbki do fiolki BACTEC przy ³ó ku pacjenta. Najczêœciej do pobrania próbki u ywa siê strzykawki z koñcówk¹ typu Luer-Lok o pojemnoœci 10 ml lub 20 ml. Dogodnie jest u yæ: uchwytu igie³ Vacutainer i zestawu Vacutainer do pobierania krwi lub zestawu do pobierania krwi Vacutainer Safety-Lok lub innego zestawu motylkowego. Kiedy u ywa siê ig³y i zestawu przewodów (bezpoœrednie pobieranie), nale y uwa nie obserwowaæ kierunek przep³ywu krwi w momencie, kiedy zaczyna siê pobieranie próbki. Puste miejsce w fiolce zwykle przekracza 10 ml, tak e u ytkownik powinien monitorowaæ pobieran¹ objêtoœæ za pomoc¹ oznaczeñ co 5 ml na etykiecie fiolki. Po pobraniu wymaganych 8 10 ml przep³yw nale y zatrzymaæ przez zagiêcie przewodu i usuniêcie zestawu z fiolki BACTEC. Mog¹ byæ u ywane próbki o objêtoœci 3 ml, jednak e odzysk nie bêdzie tak du y jak przy wiêkszych objêtoœciach. Inokulowana fiolka BACTEC powinna byæ przetransportowana tak szybko jak to mo liwe do laboratorium. Probówka Vacutainer z ó³t¹ nakrêtk¹ zawieraj¹ca SPS mo e tak e byæ u yta do poboru próbek krwi od pacjenta. Probówka powinna byæ przetransportowana do laboratorium i umieszczona w aparacie BACTEC tak szybko, jak to mo liwe. PROCEDURA Nale y usun¹æ nakrêtkê ze szczytu fiolki BACTEC i sprawdziæ fiolkê pod wzglêdem pêkniêæ, zanieczyszczenia, nadmiernego zmêtnienia i uwypuklenia lub przeciêtych przegród. NIE NALE Y U YWAÆ, je eli zauwa y siê jakieœ uszkodzenia. Przed inokulacj¹ przetrzeæ przegrodê alkoholem (jodyna nie jest

2 zalecana). Aseptycznie wstrzykn¹æ lub pobraæ bezpoœrednio 8 10 ml próbki na fiolkê. Po ywka jest przeznaczona do stosowania do próbek krwi o objêtoœci 3 10 ml. Jeœli objêtoœæ próbki jest mniejsza ni 3 ml, odzysk nie bêdzie tak du y jak przy wiêkszych objêtoœciach (zobacz rozdzia³ Ograniczenia procedury). Inokulowane fiolki powinny byæ umieszczone we fluorescencyjnym aparacie BACTEC tak szybko, jak to mo liwe do inkubacii i monitorowania. Jeœli umieszczenie inokulowanej fiolki w aparacie jest opóÿnione i widoczny jest wzrost, fiolka nie powinna byæ poddana badaniu we fluorescencyjnym aparacie BACTEC, ale raczej powinna byæ wykonana podhodowla, a fiolka powinna byæ traktowana jako przypuszczalnie dodatnia. Fiolki umieszczone w aparacie bêd¹ badane automatycznie co 10 minut w czasie rejestrowania przebiegu badania. Fiolki dodatnie bêd¹ oznaczane przez fluorescencyjny aparat BACTEC i identyfikowane jako dodatnie (zobacz instrukcjê obs³ugi w³aœciwego fluorescencyjnego aparatu BACTEC). Sensor wewn¹trz fiolki w ocenie wzrokowej nie bêdzie wykazywa³ ró nic miêdzy fiolkami z wynikiem dodatnim i ujemnym, jednak e fluorescencyjny aparat BACTEC mo e wykazaæ ró nicê we fluorescencji. Jeœli po zakoñczeniu okresu badania ujemna fiolka BACTEC Mycosis-IC/F wydaje siê wzrokowo dodatnia (np. uwypuklona przegroda i (lub) zmêtnienie), z fiolki nale y wykonaæ podhodowlê, odpowiednio wybarwiæ i traktowaæ jako przypuszczalnie dodatni¹. Z fiolek dodatnich nale y wykonaæ posiewy i odpowiednio je wybarwiæ. W znakomitej wiêkszoœci przypadków pozwoli to dostrzec drobnoustroje i umo liwi wydanie lekarzowi wstêpnego wyniku badania. Podhodowle: Przed wykonaniem podhodowli ustawiæ fiolkê pionowo i umieœciæ wacik nasycony alkoholem nad przegrod¹. Aby obni yæ ciœnienie w fiolce, wbiæ steryln¹ ig³ê z odpowiednim filtrem lub wacikiem poprzez wacik i przegrodê. Ig³a powinna byæ usuniêta bezpoœrednio po obni eniu ciœnienia i przed pobraniem próbki z fiolki do podhodowli. Wk³ucie i wycofanie ig³y nale y wykonaæ w linii prostej, unikaj¹c jakichkolwiek ruchów obrotowych. W celu uzyskania maksymalnej wydajnoœci z izolatów z hodowli, fiolki, w których wynik hodowli by³ ujemny, nale y przed utylizacj¹ sprawdziæ za pomoc¹ barwienia i (lub) podhodowli. KONTROLA JAKOŒCI Nale y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymaganiami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów lokalnych, krajowych lub federalnych, wymogami akredytacji oraz standardowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium. Zaleca siê, aby u ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich wytycznych CLSI (poprzednio NCCLS) i przepisów CLIA, dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci. NIE U YWAÆ fiolek hodowlanych po up³ywie ich daty wa noœci. NIE U YWAÆ fiolek do hodowli, które wykazuj¹ pêkniêcia lub defekty; utylizowaæ fiolkê w odpowiedni sposób. Z ka dym opakowaniem kartonowym pod³o y dostarczane s¹ certyfikaty kontroli jakoœci. Certyfikaty Kontroli Jakoœci zawieraj¹ kontrole badanych drobnoustrojów, w³¹czaj¹c hodowle ATCC wyszczególnione w Standardzie CLSI Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media 5 (Gwarancja jakoœci dla przygotowanych do handlu po ywek hodowlanych). Czas niezbêdny do wykrycia w godzinach wynosi³ 72 h dla ka dego z drobnoustrojów wyszczególnionych w certyfikacie kontroli jakoœci tej po ywki: Drobnoustroje Candida albicans* ATCC Candida parapsilosis ATCC Candida (Torulopsis) glabrata ATCC Candida albicans ATCC Candida krusei ATCC Cryptococcus neoformans ATCC Candida tropicalis ATCC 750 *szczep CLSI Zaleca siê przeprowadzenie testu wydajnoœci dla ka dej porcji pod³o y dostarczonej do laboratorium przy u yciu fiolek stanowi¹cych kontrolê dodatni¹ i ujemn¹. Fiolka dodatnia powinna byæ inokulowana szczepem wzorcowym Candida albicans ATCC lub Candida (Torulopsis) glabrata b¹dÿ inokulowana z 0,1 ml 0,5 wzorca McFarlanda. Tê fiolkê i fiolkê niepoddan¹ inokulacji nale y wprowadziæ do aparatu i poddaæ badaniu. Fiolka inokulowana powinna byæ wykryta jako dodatnia w ci¹gu 72 h. Fiolka kontroli ujemnej powinna pozostaæ ujemna. Ta procedura potwierdza, e pod³o a nie by³y nieprawid³owo magazynowane lub te transportowane w niew³aœciwych warunkach przed dostarczeniem do Pañstwa laboratorium. Je eli któraœ z fiolek nie daje oczekiwanych wyników, nie nale y u ywaæ tych pod³o y do chwili skontaktowania siê z lokalnym przedstawicielem firmy BD. Po informacje dotycz¹ce kontroli jakoœci serii fluorescencyjnych aparatów BACTEC nale y siêgn¹æ do instrukcji w³aœciwego aparatu BACTEC. OGRANICZENIA PROCEDURY Zanieczyszczenie Nale y przedsiêwzi¹æ œrodki ostro noœci, aby zapobiec kontaminacji podczas pobierania i inokulacji do fiolki BACTEC. Zanieczyszczona próbka da odczyt dodatni, co jednak nie oznacza wyniku istotnego klinicznie. Takie ustalenie musi byæ wykonane przez u ytkownika na podstawie takich czynników jak: typ wykrytych drobnoustrojów, wystêpowanie tego samego drobnoustroju w wielu hodowlach, historia choroby pacjenta itd. Drobnoustroje niewykazuj¹ce ywotnoœci Wymaz szczepów zabarwionych metod¹ Grama z pod³o a mo e zawieraæ niewielk¹ liczbê niewykazuj¹cych ywotnoœci drobnoustrojów, pochodz¹cych ze sk³adników pod³o a, odczynników barwi¹cych, olejku immersyjnego, szkie³ek szklanych i próbek u ywanych do inokulacji. Ponadto próbka pobrana od pacjenta mo e zawieraæ drobnoustroje, które nie bêd¹ ros³y w pod³o u lub w po ywkach u ywanych do podhodowli. Takie próbki powinny byæ posiewane na specjalnie do tego przygotowanych pod³o ach 6. Grzyby dimorficzne Pod³o e Mycosis IC/F zosta³o zoptymalizowane pod k¹tem odzysku dro d aków. Nie udowodniono efektywnoœci tego pod³o a w przypadku odzysku grzybów dimorficznych. Rozwa ania ogólne Optymalny odzysk izolatów bêdzie osi¹gany poprzez dodawanie od 8 do 10 ml krwi. U ycie mniejszych lub wiêkszych objêtoœci mo e niekorzystnie wp³ywaæ na odzysk i /albo czas detekcji. Krew mo e zawieraæ czynniki hamuj¹ce wzrost bakterii albo inne inhibitory, które mog¹ spowalniaæ wzrost drobnoustrojów albo go uniemo liwiaæ. Fa³szywie ujemne odczyty mo emy uzyskiwaæ na skutek obecnoœci pewnych drobnoustrojów, które nie wytwarzaj¹ odpowiedniej iloœci CO 2, niezbêdnej do wykrycia przez system albo te wzrost znacz¹cy zachodzi przed umieszczeniem fiolki w systemie. Wyniki fa³szywie dodatnie mog¹ zdarzaæ siê w przypadku znacznego podwy szenia liczby krwinek bia³ych. Z powodu charakteru materia³u biologicznego zawartego w pod³o ach i naturalnej ró norodnoœci drobnoustrojów u ytkownik powinien zdawaæ sobie sprawê z potencjalnej ró norodnoœci wyników przy wzroœcie niektórych drobnoustrojów. OCZEKIWANE WYNIKI I SWOISTA CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA Wydajnoœæ w badaniach z posiewami hodowli krwi Wykonano posiewane hodowle krwi, stosuj¹c ludzk¹ krew pe³n¹ i poziom inokulum od 10 do 100 CFU. Poni ej przedstawiono listê drobnoustrojów rosn¹cych w po ywce Mycosis-IC/F, wykrytych w aparatach serii fluorescencyjnej BACTEC. Lista grzybów i dro d aków wykrytych w posianych próbkach krwi na pod³o u BACTEC Mycosis-IC/F Aspergillus flavus Candida parapsilosis Mucor ramosissimus Candida albicans Candida rugosa Penicillium roqueforti Candida glabrata Candida tropicalis Trichosporon capitatum Candida krusei Cryptococcus neoformans Wyniki na pod³o u selektywnym BACTEC przeznaczonym do odzyskania grzybów i dro d aków zosta³y porównane z wczeœniej u ywanym pod³o em BACTEC NR Fungal wykorzystywanym w systemie nieradiometrycznym BACTEC. Wykonane przez BD posiewy da³y takie same rezultaty dla pod³o a Mycosis IC/F, jak i pod³o a NR Fungal. 2

3 DOSTÊPNOŒÆ Nr kat. Opis BACTEC Mycosis-IC/F Culture Vials (fiolki do hodowli), kaseta zawieraj¹ca 50 fiolek PIŒMIENNICTWO 1. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M22-A3, Quality control for commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.) Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3

4 4

5 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Luer-Lok, Safety-Lok and Vacutainer are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.