GOTOWE PODŁOŻA HODOWLANE NA PŁYTKACH INSTRUKCJE STOSOWANIA PA wer.: April 2013

Transkrypt

1 GOTOWE PODŁOŻA HODOWLANE NA PŁYTKACH INSTRUKCJE STOSOWANIA PA wer.: April 2013 Glucose Agar Gentamicin and Penicillin and Streptomycin PRZEZNACZENIE Podłoże Glucose Agar jest przeznaczone do izolacji i hodowli grzybów (drożdży, pleśni i dermatofitów) z próbek klinicznych., Gentamicin and oraz BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin są selektywnymi podłożami do izolowania grzybów z próbek klinicznych. ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY Metoda mikrobiologiczna. Sabouraud Glucose Agar jest podłożem ogólnego zastosowania, początkowo opracowanym do hodowli dermatofitów. 1,2 Obecnie jest wykorzystywane do izolacji i hodowli wszystkich grzybów. 3-5 Peptony w podłożu Sabouraud Glucose Agar są źródłem azotowych czynników wzrostu. Glukoza stanowi źródło energii niezbędnej do wzrostu drobnoustrojów. Wysokie stężenie glukozy ułatwia wzrost grzybów (stabilnych osmotycznie), podczas gdy większość bakterii nie toleruje wysokiego stężenia cukrów. Ponadto, niskie ph jest optymalne dla grzybów, w odróżnieniu od wielu bakterii. 3 Podłoże Sabouraud Glucose Agar jest jedynie w słabym stopniu selektywne względem bakterii., Gentamicin and oraz Penicillin and Streptomycin są selektywnymi podłożami opartymi na Sabouraud Glucose Agar. Podłoża te zawierają substancje powodujące selektywne zahamowanie wzrostu bakterii. Chloramfenikol jest antybiotykiem o szerokim spektrum działania, powodującym zahamowanie wzrostu wielu bakterii Gram-ujemnych i Gram-dodatnich, lecz może on także mieć hamujący wpływ na niektóre grzyby patogenne. 4 Zostało wykazane, że antybiotyki, takie jak penicylina, gentamycyna i streptomycyna bądź ich kombinacje, skutecznie hamują wzrost bakterii bez wpływu na wzrost grzybów. 2-5 Podłoża te są wykorzystywane do izolowania grzybów z próbek pochodzenia klinicznego oraz materiałów podejrzewanych o zanieczyszczenia bakteryjne. Sabouraud Glucose Agar jest jednym z podłoży zalecanych przez USP oraz EP do wykonywania badań limitów mikrobiologicznych. 6,12 ODCZYNNIKI Skład: zobacz tabelę 1 ŚRODKI OSTROŻNOŚCI. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych. Nie należy używać, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego, odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości. Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA. PA

2 PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8 C, w ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania. Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i inkubować w zalecanych czasach inkubacji. Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 można używać przez okres jednego tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8 C. Tabela 1: ODCZYNNIKI Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej Nazwa produktu Glucose Agar PA Penicillin and Streptomycin Gentamicin and Agar with Składniki Trzustkowy 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g hydrolizat kazeiny Hydrolizat 5,0 5,0 5,0 5,0 pepsynowy tkanki zwierzęcej Glukoza 40,0 40,0 40,0 40,0 Agar 15,0 15,0 15,0 15,0 Penicylina G IU - - Streptomycyna - 0,06 g - - Gentamycyna - - 0,04 - Chloramfenikol - - 0,4 0,4 ph ph 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 *Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie kryteriów wydajności. KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe informacje zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Informacje na temat inkubacji znajdują się pod tabelą. Nazwa produktu Badane szczepy **Candida albicans ATCC **Saccharomyces cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 ** Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus aureus ATCC *Escherichia coli ATCC Glucose Agar Brak zahamowania wzrostu Brak zahamowania wzrostu Penicillin and Streptomycin Gentamicin and Całkowite zahamowanie wzrostu Całkowite zahamowanie wzrostu Bez posiewu Zabarwienie jasnobursztynowe Inkubacja: *48 h C / **</= 5 days, C, w atmosferze tlenowej

3 PROCEDURA Dostarczane materiały Glucose Agar,, Gentamicin and lub Penicillin and Streptomycin, wszystkie podłoża na płytkach Stacker o śr. 90 mm. Sprawdzane pod kątem obecności mikroorganizmów. Materiały niedostarczane Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z wymaganiami. Typy próbek Produkty opisane w niniejszym dokumencie są podłożami do izolowania grzybów i mogą być stosowane (pojedynczo lub jako kombinacja dwóch podłoży) do wszystkich próbek pochodzenia klinicznego (zobacz także CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY). Podłoża te są także stosowane w wielu dziedzinach mikrobiologii przemysłowej oraz w monitorowaniu czystości mikrobiologicznej. Procedura testowa Wykonać posiew próbki możliwie jak najszybciej po dostarczeniu materiału do laboratorium. Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek zawierających florę mieszaną. Ewentualnie, jeżeli materiał jest posiewany bezpośrednio z wymazówki, należy przetoczyć wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a następnie wykonać posiew przez rozprowadzenie po podłożu. Jeśli próbka składa się z wyskrobin ze skóry, włosów lub paznokci, materiał należy umieścić na środku powierzchni podłoża. W miarę możliwości większe cząstki należy delikatnie wcisnąć w powierzchnię za pomocą sterylnej pincety w celu zapewnienia dobrego kontaktu z podłożem. W celu wykrycia dermatofitów materiał należy umieścić także na podłożu BD Dermatophyte Agar lub BD Mycosel Agar. W przypadku użycia podłoża, Gentamicin and lub Penicillin and Streptomycin materiał należy umieścić także na płytce z podłożem Glucose Agar. Ponadto należy wykonać posiew na podłoże nieselektywne, takie jak BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood, w celu wykrycia innych patogenów bakteryjnych występujących w próbce. W przypadku wykorzystania podłoża do wykrycia drożdży (np. rodzaju Candida) w próbkach pochodzenia klinicznego, płytki należy inkubować przez 48 godzin w temperaturze C. W przypadku podejrzenia grzybów nitkowatych, w tym dermatofitów, inkubację należy prowadzić przez okres do jednego tygodnia w temperaturze C. Czasem do uzyskania wzrostu dermatofitów konieczna jest inkubacja przez okres 3 tygodni lub dłużej. W badaniach wykonywanych w ramach monitorowania czystości mikrobiologicznej inkubację należy prowadzić przez 7 dni w temperaturze C. Gdy inkubacja trwa dłużej niż 3 dni, należy zwiększyć wilgotność środowiska. W celu uniknięcia wysychania podłoża płytki można uszczelnić taśmą klejącą. Szczegółowe informacje dotyczące optymalnej dla wzrostu temperatury oraz inkubacji przedstawiono w piśmiennictwie. 5,7-10 Wyniki Po odpowiednim okresie inkubacji na płytkach mogą pojawić się pojedyncze kolonie w miejscach pasmowego posiewu oraz wzrost zlewny w obszarach gęstego zaszczepienia. Płytki należy zbadać pod kątem obecności kolonii grzybów o typowym zabarwieniu i morfologii. W celu potwierdzenia obserwacji należy wykonać testy biochemiczne oraz badania mikroskopowe i serologiczne. 6-9 PA

4 Ze względu na to, że liczba grzybów patogennych jest duża, w niniejszym dokumencie nie podano szczegółowych informacji na temat ich wyglądu kolonii. Należy zapoznać się z 2,3, 5-9 piśmiennictwem. CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY Podłoża opisane w niniejszym dokumencie są standardowymi podłożami do izolacji i hodowli grzybów ze wszystkich typów próbek pochodzenia klinicznego i nieklinicznego Ze względu na duży zakres temperatur optymalnych dla wzrostu grzybów może być konieczne wykonanie posiewu na kilku płytkach z tym samym podłożem i inkubowanie ich w różnych temperaturach. Informacje na ten temat przedstawiono w części Procedura testowa oraz w odpowiednim piśmiennictwie. 5,7-10 Ze względu na to, że podłoże Glucose Agar jest tylko w małym stopniu selektywne, na podłożu tym obserwuje się wzrost bakterii, zwłaszcza po dłuższym okresie inkubacji. W przypadku podejrzenia zanieczyszczenia bakteriami próbek, materiałów lub badanych obszarów, do hodowli z próbki należy użyć podłoża o większej selektywności, np. BD Sabouraud, Gentamicin and lub Penicillin and Streptomycin. Nocardia i Actinomyces są bakteriami nitkowatymi (a nie grzybami!) i w związku z tym nie obserwuje się ich wzrostu na żadnych podłożach Sabouraud zawierających substancje hamujące wzrost bakterii. PIŚMIENNICTWO 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. PA

5 PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ Glucose Agar Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20 Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 120 Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20 Gentamicin and Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20 Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 120 Penicillin and Streptomycin Nr katalogowy Gotowe podłoża na płytkach hodowlanych, 20 DODATKOWE INFORMACJE W celu uzyskania dodatkowych informacji należy się skontaktować z lokalnym przedstawicielem firmy BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA