ANTISERUM SALMONELLA SUROWICE DO TYPOWANIA PAŁECZEK SALMONELLA

Podobne dokumenty
Zestaw SIT InHaVi Szybki Identyfikacyjny Test Szczepów Salmonella Infantis, Hadar oraz Virchow

Zestaw SIT Szybki Identyfikacyjny Test Szczepów Salmonella Enteritidis i Typhimurium

SEROWARY SALMONELLA WYSTĘPUJĄCE W POLSCE (określone w Krajowym Ośrodku Salmonella, )

Bożena Dera-Tomaszewska, Renata Głośnicka ZESTAW IENIE SERÓW ARÓW SALMONELLA W YSTĘPUJĄCYCH W POLSCE

Zestawienie cen jednostkowych poszczególnych elementów dostawy

OCENA PRZYDATNOŚCI TESTU PREMI TEST SALMONELLA DO IDENTYFIKACJI PAŁECZEK SALMONELLA NIETYPUJĄCYCH SIĘ METODAMI KLASYCZNYMI

II. OZNACZANIE LICZBY BAKTERII Z GRUPY COLI I BAKTERII Z GRUPY COLI TYP FEKALNY METODĄ PŁYTKOWĄ W ŻYWNOŚCI I INNYCH PRODUKTACH wg PN-ISO 4832: 2007

AE/ZP-27-03/16 Załącznik Nr 6

Protokoły do zajęć praktycznych z mikrobiologii ogólnej i żywności dla studentów kierunku: Dietetyka

XXV. Grzyby cz I. Ćwiczenie 1. Wykonanie i obserwacja preparatów mikroskopowych. a. Candida albicans preparat z hodowli barwiony metoda Grama

Oznaczenie sprawy AE/ZP-27-49/14 Załącznik Nr 1 Formularz Cenowy

XIII. Staphylococcus, Micrococcus ćwiczenia praktyczne

Oznaczenie sprawy AE/ZP-27-41/13 Załącznik Nr 1 Formularz Cenowy

ROZPORZĄDZENIE RADY MINISTRÓW. z dnia 23 maja 2011 r.

Numer ogłoszenia: ; data zamieszczenia: OGŁOSZENIE O ZMIANIE OGŁOSZENIA

Kontrola pożywek mikrobiologicznych. Sekcja Badań Epidemiologicznych

(Tekst mający znaczenie dla EOG)

KALKULACJA CENY OFERTY Część VII - Testy lateksowe. Jednostka miary. Ilość. zestaw 4

IV. Streptococcus, Enterococcus ćwiczenia praktyczne

Instrukcje do ćwiczeń oraz zakres materiału realizowanego na wykładach z przedmiotu Mikrobiologia na kierunku chemia kosmetyczna

M46d Rozcieńczalnik do próbek: 50 ml 0,85% roztwór izotoniczny soli konserwowany 0,099% azydkiem sodowym (biała nakrętka).

VIII. Pałeczki Gram-ujemne z rodziny Enterobacteriaceae

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli

E.coli Transformer Kit

Tok badania bakteriologicznego. Klasyczne metody stosowane w diagnostyce bakteriologicznej. (identyfikacja bakterii i oznaczanie lekowrażliwości).

ZP/220/106/17 Parametry wymagane dla zadania nr 1 załącznik nr 4 do formularza oferty PO MODYFIKACJI

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 1164

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20006/11859/09

Załącznik nr 4 Metodyka pobrania materiału przedstawiona jest w osobnym Instrukcja PZH

III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 1029 wydany przez POLSKIE CENTRUM AKREDYTACJI Warszawa ul. Szczotkarska 42

VII. Pałeczki Gram-dodatnie: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus - ćwiczenia praktyczne

Ćwiczenie 4-5 Mikrobiologiczne kryteria oceny sanitarnej wody

Dotyczy: przetargu nieograniczonego na dostawa odczynników, krwinek wzorcowych do serologii grup krwi- metody probówkowe/szkiełkowe

II. Badanie lekowrażliwości drobnoustrojów ćwiczenia praktyczne. Ćwiczenie 1. Oznaczanie lekowrażliwości metodą dyfuzyjno-krążkową

WYCIECZKA DO LABORATORIUM

VII. Fizjologia bakterii - ćwiczenia praktyczne

1. Wykonanie preparatów bezpośrednich i ich ocena: 1a. Wykonaj własny preparat bezpośredni ze śliny Zinterpretuj i podkreśl to co widzisz:

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 924

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 924

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 1029 wydany przez POLSKIE CENTRUM AKREDYTACJI Warszawa ul. Szczotkarska 42

Serowary Salmonella wystêpuj¹ce u zwierz¹t, w ywnoœci i paszach w Polsce w latach

Lista badań prowadzonych w ramach zakresu elastycznego nr 2/Z Załącznik do zakresu akredytacji nr AB1029

1. Demonstracja preparatów bakteryjnych barwionych metodą negatywną ukazujących kształty komórek bakteryjnych.

XIX. Pałeczki Gram-ujemne część I - ćwiczenia praktyczne

woda do 1000 ml ph=6,9-7,1. Po sterylizacji dodać nystatynę (końcowe stężenie ok. 50 μg/ml). Agar z wyciągiem glebowym i ekstraktem drożdżowym (YS)

(13) B1 PL B1. (57) 1. Sposób wytwarzania wieloważnej szczepionki przeciwko Pseudomonas aeruginosa

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 1088

Załącznik nr 2 do SIWZ

liczba godzin 2 MIKROBIOLOGIA KOSMETOLOGICZNA dla studentów II roku, studiów I st. kierunku KOSMETOLOGIA półpłynne stałe

KIT COMPONENTS. Product name: Antiserum Salmonella POLYVALENT T, A, B, C,Vi (5 x 3 ml) Product code:

Salmonella u osób zamieszkujących powiat bielski i miasto Bielsko-Biała

Przedmiot zamówienia -Specyfikacja cenowa

1276: (ATCC

Arkusz1. Nazwa artykułu opakowanie ilość opak. 1 Agar Columbia + 5% krew barania 20 płytek* 205

RAPORT Z BADAŃ 01369/2015/D/AGST. Blirt S.A Gdańsk, ul. Trzy Lipy 3/1.38. Dział DNA-Gdańsk. Nr zlecenia

ĆWICZENIE 5 MECHANIZMY PROMUJĄCE WZROST ROŚLIN

Interpretacja wyników analiz ilości i obecności drobnoustrojów zgodnie z zasadami badań mikrobiologicznych żywności i pasz?

Europejska Komisja ds. Kontrolowania Pryszczycy (EUFMD) Vademecum wykrywania ogniska pryszczycy i dochodzenia Wersja 1 (12/2009)

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna.

Mikrobiologia - Bakteriologia

SPRAWOZDANIE Z BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH Nr 20005/11858/09

Przygotowanie mianowanych zawiesin szczepów wzorcowych znajdujących zastosowanie w badaniach mikrobiologicznych

Instrukcja do ćwiczeń

Mikrobiologia - Bakteriologia

Difco Salmonella H Antisera Difco Salmonella Antiserum Vi

Zestaw do izolacji genomowego DNA z bakterii

Staphylococcus ćwiczenia praktyczne. a. agarze z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK)

ROZPORZĄDZENIE KOMISJI (UE) NR

Wykrywanie i identyfikacja chorobotwórczych pałeczek jelitowych z rodziny Enterobacteriaceae w diagnostyce schorzeń jelitowych

OSTRACODTOXKIT F Procedura testu

X. Pałeczki Gram-dodatnie. Rodzaje: Corynebacterium, Listeria, Erysipelothtix, Lactobacillus

ODPOWIEDZI NA PYTANIA

Ćwiczenie 1 Podstawy różnicowania bakterii. 1. Preparat przyżyciowy (mokry, tzw. świeży) w kropli wiszącej. Technika wykonania preparatu:

Rodzaj oznaczenia (wybierz) - C3 / C4 /C1q

Ćw.nr1 i 2 Morfologia i fizjologia drobnoustrojów.

FORMULARZ CENOWY. Data:... Nazwa wykonawcy:... Siedziba wykonawcy:... Przedstawia zestawienie cenowe dla oferowanego przedmiotu zamówienia:

Interpretacja wyników testów serologicznych

Formularz cenowy oferowanych przez wykonawcę artykułów

(Akty o charakterze nieustawodawczym) DECYZJE

Tok badania bakteriologicznego. Klasyczne metody stosowane w diagnostyce bakteriologicznej (identyfikacja bakterii i oznaczanie lekowrażliwości).

- podłoża transportowo wzrostowe..

X. Diagnostyka mikrobiologiczna bakterii chorobotwórczych z rodzaju: Corynebacterium, Mycobacterium, Borrelia, Treponema, Neisseria

INFORMACJA O LEKU DLA PACJENTA Należy zapoznać się z właściwościami leku przed zastosowaniem

1. Rodzaj materiału klinicznego w zależności od kierunku i metodyki badań

(12) OPIS PATENTOWY. (54) Sposób izolacji pałeczek Salmonella z mieszanek paszowych i ich komponentów

VIII. Diagnostyka mikrobiologiczna głównych drobnoustrojów odpowiedzialnych za zakażenia przewodu pokarmowego i zapalenie otrzewnej

ZAKRES AKREDYTACJI LABORATORIUM BADAWCZEGO Nr AB 1088

Ćwiczenie 1 Morfologia I fizjologia bakterii

ZAKŁAD DIAGNOSTYKI LABORATORYJNEJ I IMMUNOLOGII KLINICZNEJ WIEKU ROZOJOWEGO AM W WARSZAWIE.

Ćwiczenie 8, 9, 10 Kontrola mikrobiologiczna środowiska pracy

Zakład Biologii Sanitarnej i Ekotechniki ĆWICZENIE 2 BUDOWA I FUNKCJE ENZYMÓW. ZASTOSOWANIE BADAŃ ENZYMATYCZNYCH W INŻYNIERII ŚRODOWISKA.

(Tekst mający znaczenie dla EOG)

Kwestionariusz wiedzy dla pracowników programów i placówek narkotykowych

Lekooporność pałeczek Salmonella wyizolowanych z żywności. Łukasz Mąka Zakład Bezpieczeństwa Żywności r.

1- ZASTOSOWANIE TESTU

Laboratorium 7. Testy na genotoksyczność

Podstawy różnicowania bakterii i grzybów. Imię i nazwisko:

CHARAKTERYSTYKA PRODUKTU LECZNICZEGO

1. Rodzaj materiału klinicznego w zależności od kierunku i metodyki badań

Transkrypt:

ANTISERUM SALMONELLA SUROWICE DO TYPOWANIA PAŁECZEK SALMONELLA 1. ZNACZENIE KLINICZNE Pałeczki Salmonella są odpowiedzialne za ostre zakażenia, o różnym przebiegu i objawach klinicznych, w zależność od wywołującego je serotypu bakterii. Rodzaj Salmonella zawiera 2 podgatunki: S.bongori (20 serotypów) i S.enterica (2415 serotypów). Gatunek S.enterica dzieli się na 6 podgatunków: - S. enterica subsp. enterica (I lub 1) - S. enterica subsp. salamae (II lub 2) - S. enterica subsp. arizonae (IIIa lub 3a) - S. enterica subsp. diarizonae (IIIb lub 3b) - S. enterica subsp. houtenae (IV lub 4) - S. enterica subsp. indica (VI lub 6). Serotypy podgatunku enterica (1435 serotypów) reprezentują 99.5% izolowanych szczepów (1). W schemacie Kauffmanna-White a (1), serotypy są sklasyfikowane zgodnie z kombinacją antygenów somatycznych (O) i rzęskowych (H) pałeczek Salmonella. Skład antygenowy jest wykrywany przy pomocy surowic aglutynacyjnych (anty-o i anty- H). Oznaczenie grupy O Serotypy wyróżnione na podstawie grupy O, oznaczane jako pierwsze, opisane zostały literami alfabetu, a następnie opis był kontynuowany przy użyciu liczb. Obecnie przeważnie oznacza się antygeny grupowe, charakterystyczne dla danej grupy O. Odpowiedniki nomenklatury alfabetycznej i oznaczenia antygenów grupowych O Alfabetyczna nomenklatura grupy Antygeny grupowe O Alfabetyczna nomenklatura grupy Antygeny grupowe O Alfabetyczna nomenklatura grupy Antygeny grupowe O A 2 I 16 R 40 B 4 J 17 S 41 C1 C2 C3 6, 7, 8 K 18 T 42 D 9 L 21 U 43 E1 E2 3, 10 M 28 V 44 E4 1, 3, 19 N 30 W 45 F 11 O 35 X 47 G1 G2 13 P 38 Y 48 H 6, 14 Q 39 Z 50 2- ZASTOSOWANIE Surowice do typowania Salmonella (anty-o i anty-h) służą do identyfikacji serologicznej wyizolowanego szczepu pałeczek Salmonella w celach epidemiologicznych i diagnostycznych metodą aglutynacji szkiełkowej. 3- ZASADA METODY Test jest oparty na aglutynacji bakterii, posiadających odpowiednie antygeny, przez swoiste surowice (anty-o i anty-h). Surowice zostały uzyskane przez immunizację królików wybranymi szczepami Salmonella. Surowice monowalentne zostały wyadsorbowane w celu podwyższenia ich swoistości. Zostały one poddane filtracji membranowej; są konserwowane 0.1% azydkiem sodu. 1. Surowice do aglutynacji szkiełkowej a) Surowice O Poliwalentne surowice O do wstępnego typowania Poliwalentne surowice O nie są adsorbowane. Są one przeznaczone do wstępnego typowania i głównie rekomendowane do wykrywania pałeczek Salmonella w żywności w środowisku. Ogromna większość szczepów Salmonella (około 98%) izolowanych od ludzi i zwierząt stałocieplnych posiada antygeny somatyczne O aglutynujące z surowicą OMA i OMB. 1

Surowice O do oznaczenia składu antygenowego Należy używać je sukcesywnie w logicznej kolejności (najpierw poliwalentne, a następnie monowalentne grupowe, itd.), w miarę możliwości jako funkcję właściwości biochemicznych poszczególnych szczepów (np. w przypadku serotypów typhi i paratyphi A). Drugorzędowe czynniki O są oznaczane w następnej kolejności. Przykład: - czynniki O:7 i O:8 są oznaczane, gdy szczep aglutynuje z surowicą O:6, 7, 8. - czynnik O:15 jest oznaczany jedynie, gdy występuje aglutynacja z surowicą O:3, 10, 15. Tylko aglutynacja z surowicami monowalentnymi pozwala zidentyfikować grupę O. Surowica anty-vi Antygen Vi jest ciepłochwiejnym antygenem powierzchniowym, który może maskować aktywność antygenu somatycznego. Najczęściej występuje on u szczepów S. typhi, oraz, dużo rzadziej, u szczepów S.paratyphi C. Szczepy Salmonella, posiadające ten antygen, nie aglutynują z surowicami O. W przypadku szczepu nie dającego aglutynacji z mieszanką OMA ani z mieszanką OMB, zaleca się wykonanie aglutynacji z surowicą Vi. Po uzyskaniu reakcji dodatniej, należy ogrzać zawiesinę bakterii w temperaturze 100 C przez 30 minut, a następnie powtórzyć test z surowicami poliwalentnymi OMA i OMB, oraz z odpowiednimi surowicami monowalentnymi. b) Surowice H Surowice H do wstępnego typowania Podobnie jak swoiste surowice O, surowice te są szczególnie przydatne podczas identyfikacji różnorodnych serotypów (w mikrobiologii żywności lub środowiska). Surowice H do oznaczenia składu antygenowego Surowic tych należy używać w tej samej logicznej kolejności, jak surowic O. Przykład: - Monowalentne surowice H:2, H:5, H:6, H:7 są używane po uzyskaniu aglutynacji z surowicą poliwalentną H1 - Monowalentne surowice z10 i z15 są używane po uzyskaniu aglutynacji z surowicą poliwalentną HE, itd 2. Surowice zmiany fazy Surowice zmiany fazy anty-h (metoda Sven Garda): Jeśli populacja bakterii zawiera podobną liczbę komórek, będących w fazie antygenowej H 1 i 2, można określić serotyp szczepu. Natomiast w przypadku, gdy większość komórek znajduje się w jednej z faz antygenu H, tylko ta faza może zostać określona. W celu identyfikacji swoistości antygenowej drugiej fazy, szczep należy wysiać na agar zmiany fazy Sven Garda z dodatkiem kropli surowicy SG, zawierającej aglutyniny przeciwko fazie już określonej. Podłoże Sven-Garda (nr kat. 53431) jest miękkim agarem, pozwalającym na ruch komórek pałeczek Salmonella, które wysiane centralnie na płytce Petriego wykazują wzrost rozpełzliwy na powierzchni agaru po całonocnej inkubacji. 4- POSTAĆ ODCZYNNIKÓW Surowice poliwalentne i monowalentne są dostarczone w fiolkach po 3 ml z kroplomierzem 60 testów). SUROWICE anty-o Poliwalentne surowice anty-o do wstępnego typowania Poliwalentne surowice Zawierają aglutyniny dla grup Odpowiadający im antygen somatyczny O Antiserum Salmonella polyvalent OMA A, B, D, E, L 1, 2,12 + 4, 5,12 + 9,12 + 9,46 + 3,10 + 3,15 + 1,3,19 +21 60801 Antiserum Salmonella polyvalent OMB C, F, G, H 6, 7 + 6, 8 + 11 + 13, 22 + 13, 23 + 6, 14, 24 + 8, 20 60811 Antiserum Salmonella polyvalent OMC I, J, K, M, N, O, P 16 + 17 + 18 + 28 + 30 + 35 + 38 60821 Antiserum Salmonella polyvalent OMC Q, R, S, T, U, V, W 39 + 40 + 41 + 42 + 43 + 44 + 45 60831 Antiserum Salmonella polyvalent OME X, Y, Z, 51-53 47 + 48 + 50 + 51 + 52 + 53 + 61 60841 Antiserum Salmonella polyvalent OMF 54 + 55 + 56 + 57 + 58 + 59 60851 Antiserum Salmonella polyvalent OMG 60 + 62 + 63 + 65 + 66 + 67 60861 Monowalentne surowice do oznaczenia składu antygenowego Monowalentne surowice Grupa Nr kat. Monowalentne surowice Grupa Nr kat. Antiserum Salmonella monovalent O:1, 2 A 59031 Antiserum Salmonella monovalent O:3, 10, 15 E1, E2 59112 Antiserum Salmonella monovalent O:4,5 B 59021 Antiserum Salmonella monovalent O:15 59127 Antiserum Salmonella monovalent O:6,7,8 C 59062 Antiserum Salmonella monovalent O:1, 3, 19 E4 59131 Antiserum Salmonella monovalent O:7 59081 Antiserum Salmonella monovalent O:11 F 59141 Antiserum Salmonella monovalent O:8 59091 Antiserum Salmonella monovalent O:13, 22, 23 G 59162 Antiserum Salmonella monovalent O:9 D 59101 Antiserum Salmonella monovalent O:6, 14, 24 59171 Monowalentna surowica Salmonella anty-vi (nr kat. 60951) Nr kat. 2

SUROWICE H Poliwalentne surowice do wstępnego typowania Poliwalentne surowice Odpowiadający im antygen rzęskowy Nr kat. Antiserum Salmonella polyvalent HMA a + b + c + d + i + z10 + z29 60451 Antiserum Salmonella polyvalent HMB e, h + e, n, x + e, n, z15 +G 60461 Antiserum Salmonella polyvalent HMC k + y + z + L + Z4 + r 60471 Antiserum Salmonella polyvalent HMD z35 + z36 + z38 + z39 + z41 + z42 + z44 + z60 60481 Antiserum Salmonella polyvalent HMIII Zawiera antygen H podgatunku III (Arizona) z52 + z53 + z54 + z55 + z57 + z61 60493 Poliwalentne surowice do oznaczenia składu antygenowego Poliwalentne surowice Nr kat. Antiserum Salmonella polyvalent H1 H1 = 1,2 +1,5 + 1,6 + 1,7 + z6 60401 Antiserum Salmonella polyvalent HL HL = l, v + l, w + l, z13 + l, z28 + l, z40 60411 Antiserum Salmonella polyvalent HE HE = e, h + e, n, x + e, n, z15 60391 Antiserum Salmonella polyvalent HZ4 HZ4 = z4,z23 + z4,z24 + z4,z32 60431 Antiserum Salmonella polyvalent HG HG = f, g + g, p + g, m, s + g, m + m, t 60441 Monowalentne surowice do oznaczenia składu antygenowego Monowalentne surowice Nr kat. Antiserum Salmonella monovalent H:r 60201 Antiserum Salmonella monovalent H:a 60111 Antiserum Salmonella monovalent H:v 61115 Antiserum Salmonella monovalent H:b 60121 Antiserum Salmonella monovalent H:w 61116 Antiserum Salmonella monovalent H:c 60131 Antiserum Salmonella monovalent H:x 61123 Antiserum Salmonella monovalent H:d 60141 Antiserum Salmonella monovalent H:y 60211 Antiserum Salmonella monovalent H:g, m 61121 Antiserum Salmonella monovalent H:z 60221 Antiserum Salmonella monovalent H:g, p 61122 Antiserum Salmonella monovalent H: z10 60241 Antiserum Salmonella monovalent H:h 61119 Antiserum Salmonella monovalent H: z15 61120 Antiserum Salmonella monovalent H:i 60161 Antiserum Salmonella monovalent H:2 61111 Antiserum Salmonella monovalent H:k 60171 Antiserum Salmonella monovalent H:5 61112 Antiserum Salmonella monovalent H:m 61117 Antiserum Salmonella monovalent H:6 61113 Antiserum Salmonella monovalent H:p 61118 Antiserum Salmonella monovalent H:7 61114 Surowice zmiany fazy anty-h (metoda sven garda) Poliwalentne surowice Aglutyniny Nr kat. Antiserum Salmonella SG1 a + b+ c+ z10 61011 Antiserum Salmonella SG2 d + i + e, h 61021 Antiserum Salmonella SG3 k + y + l, v + l, w + l, z13 + l, z28 61031 Antiserum Salmonella SG4 r + z 61041 Antiserum Salmonella SG5 e, n, x + e, n, z15 61051 Antiserum Salmonella SG6 1, 2 + 1, 5 + 1, 6 + 1, 7 + z6 61061 5- PRZECHOWYWANIE Surowice przechowywane w temperaturze +2-8 C, nie zanieczyszczone, są trwałe zgodnie z datą ważności (również po otwarciu). 6- INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY Szkiełka podstawowe Ezy plastikowe lub platynowe Sól fizjologiczna 3

7- OSTRZEŻENIA DLA UŻYTKOWNIKA Należy zapoznać się z aktualnymi technikami i środkami ostrożności zabezpieczającymi przed ryzykiem zakażenia podczas pracy i utylizacji materiału zakaźnego oraz produktów biologicznych używanych do reakcji aglutynacji. Surowice zawierają < 0.1% azydek sodu. Związek ten może reagować z miedzią i ołowiem w zlewie i w rurach, tworząc wybuchowe azydki metali. Po wylaniu odczynników, należy spłukać zlew dużą ilością wody. Nie rozcieńczać odczynników. 8- PROCEDURA 1) Surowice do aglutynacji szkiełkowej Serotypowanie wykonuje się po identyfikacji gatunku, z czystej, młodej hodowli pałeczek Salmonella na podłożu nie wybiórczym. Równolegle należy wykonać dla badanego szczepu test w soli fizjologicznej. Pobrać ezę hodowli Salmonella. Rozprowadzić bakterie w kropli soli fizjologicznej, tworząc jednorodną zawiesinę. W soli fizjologicznej nie powinno być aglutynacji. Jeśli aglutynacja występuje, jest to szczep samo-aglutynujący i nie można typować go z surowicami. Rozpocząć testy aglutynacyjne od surowic poliwalentnych, a następnie wykonać test z surowicami monowalentnymi, zawartymi w danej grupie (poliwalentne O i monowalentne O, a następnie poliwalentne H i monowalentne H). Nanieść 1 kroplę surowicy na szkiełko. Pobrać ezę hodowli Salmonella (z bardziej wilgotnej części hodowli, aby wykryć antygeny H). Rozprowadzić bakterie w kropli surowicy; dodawać je stopniowo, aby powstała jednorodna zawiesina. Delikatnie wytrząsać szkiełko ruchem obrotowym. Obserwować mieszaninę gołym okiem nad ciemną powierzchnią lub przez szkło powiększające. 2) Zmiana fazy Do rozpuszczonego i schłodzonego do temperatury około 45 C agaru Sven Garda dodać 1 kroplę surowicy SG, zawierającej aglutyniny dla fazy już oznaczonej. Dokładnie wymieszać podłoże z surowicą ruchem obrotowym, poczym wylać na płytki Petriego. Jeśli po zastygnięciu agaru na powierzchni podłoża pozostaną krople wody kondensacyjnej, wysuszyć podłoże, pozostawiając półprzymknięte wieczko. Zaszczepić podłoże centralnie na płytce, 3 lub 4 koloniami Salmonella z czystej, młodej hodowli na podłożu agarowym. Inkubować w temperaturze 37 C przez 18 godzin (płytka w pozycji wieczkiem do góry). Obserwować wystąpienie aglutynacji z surowicą H w peryferyjnej części rozpełzliwego wzrostu bakterii na agarze (zgodnie z procedurą opisaną powyżej). Przykład: Dla badanego szczepu Salmonella zidentyfikowano antygeny O:4,5 i H:1,2. Do inwersji fazy użyto surowicę SG6 (1,2+1,5+1,7+z6). Następnego dnia wykonano test aglutynacji z: - surowicą anty-h:i wskazuje na obecność Salmonella typhimurium (O:1,4,[5], 12 H:i:1,2) - surowicą anty-h:b wskazuje na obecność Salmonella paratyphi B (O:1,4[5], 12 H:b:1,2) 9- INTERPRETACJA WYNIKÓW O reakcji dodatniej świadczy aglutynacja występująca w czasie maksymalnie 1 minuty. Aglutynacja O jest wyraźna i regularna, i łatwo odróżnialna od niedokładnie zawieszonych cząstek hodowli. Uwaga: Wszystkie aglutynujące z surowicą O szczepy będą natychmiast aglutynować w jednej z surowic poliwalentnych. W przypadku innych surowic koaglutynacja może wystąpić z opóźnieniem i z mniejsza intensywnością. Jeśli szczep nie aglutynuje z mieszaniną OMA ani z mieszaniną OMB, zaleca się wykonanie testu z surowicą anty-vi. Żywe komórki formy V S.typhi nie aglutynują z surowicą O, natomiast wykazują aglutynację po zagotowaniu zawiesiny. Surowice HMA, HMB, HMC i HMD nie zawierają aglutynin anty-o, lecz występują one w surowicy HM III. Jeśli hodowla aglutynuje z tą surowicą, rzeczywistą naturę aglutynacji H można potwierdzić przez dodanie 1 kropli surowicy HM III do 1 ml zawiesiny bakterii. Po inkubacji przez 2 godziny w temperaturze 37 C w łaźni wodnej, można zaobserwować kłaczkującą aglutynację, jeśli szczep posiada antygen odpowiadający przeciwciałom zawartym w tej surowicy. Szczep, który posiada czynnik H;g aglutynuje z surowicą H:g,m oraz z surowicą H:g,p. Surowica H1 jest używana do wykrywania szczepów posiadających antygen H w nie swoistej fazie 2 (1,2 lub 1,5 lub 1,7). 4

10- WŁAŚCIWOŚCI TESTU / KONTROLA JAKOŚCI Aktywność poliwalentnych i monowalentnych surowic Salmonella jest kontrolowana przy użyciu następujących szczepów, dających reakcję dodatnią: SUROWICE O Surowica Szczep Budowa antygenowa OMA Paratyphi A (O:1,2,12 H:a : [1,5]) OMB Newport (O:6,8,20 H:e,h : 1,2 [z67]) OMC Tel Aviv (O:28 H:y : e,n,z15) OMD Champaign (O:39 H:k :1,5) OME Bergen (O: 47, H: i : e,n,z15) OMF Uccle (O: 3,54 H: g,s,t : -) OMG IIIa (Arizona) (O:63 H: g, z51 : -) O:1, 2 Paratyphi A (O:1,2,12 H:a : [1,5]) O:4, 5 Typhimurium (O:1,4,[5],12 H:i :1,2) O:6, 7, 8 Newport (O:6,8,20 H:e,h :1,2 [z67]) O:7 Braenderup (O:6,7,14 H:e,h : e,n,z15) O:8 Blockley (O:6,8 H:k : 1,5) O:9 Enteritidis (O:1,9,12 H: g,m : -) O:3, 10, 15 London (O:3,10 [15] H:l,v : 1,6) O:15 Strasbourg (O:9,46 H:d : 1,7) O:1, 3, 19 Senftenberg (0:1,3,19 H:g,[s],t : -) O:11 Aberdeen (O:11 H: i : 1,2) O:13, 22, 23 Grumpensis (O:1,13,23 H:d :1,7) O:6, 14, 24 Carrau (O:6,14,[24] H:y :1,7) SUROWICE VI Surowica Szczep Budowa antygenowa Vi Typhi (0:9,12,[Vi] H:d : -) SUROWICE ZMIANY FAZY Surowica Szczep Budowa antygenowa SG 1 Paratyphi A (O:1,2,12 H: a : [1,5]) SG 2 Newport (O:6,8,20 H:e,h :1,2 [z67]) SG 3 Thompson (O:6,7,14 H:k :1,5) SG 4 Heidelberg (O:1,4,[5],12 H: r : 1,2) SG 5 Abortusequi (O:4,12 H: - : e,n,x) SG 6 Typhimurium (O:1,4,[5],12 H: i :1,2) 5

SUROWICE H Surowica Szczep Budowa antygenowa HMA Paratyphi A (O:1,2,12H: a : [1,5]) HMB Enteritidis (O:1,9,12 H: g,m : -) HMC Blockley (O:6,8 H: k : 1,5) HMD Fresno (O:9,46H: z38 : -) HM III IIIb (Arizona) (O:65 H: c: z53) H1 Bovismorbificans (O:6,8,20 H: r,[i] : 1,5) HL Livingstone (O:6,7,14 H: d : l,w) HE Newport (O:6,8,20 H: e,h : 1,2) HZ4 Dusseldorf (O:6,8 H: z4, z24 : -) HG Dublin (O:1,9,12 [Vi] H: g,p : -) a Paratyphi A (O:1,2,12 H: a : [1,5]) b Paratyphi B (O:1,4,[5],12 H: b : 1,2) c Paratyphi C (O:6,7,[Vi] H: c: 1,5) d Livingstone (O:6,7,14 H: d : l,w) g, m Enteritidis (O:1,9,12 H: g,m : -) g, p Dublin (O:1,9,12 [Vi] H: g,p : -) h Newport (O:6,8,20 H: e,h : 1,2 [z67]) i Typhimurium (O:1,4,[5],12 H: i : 1,2) k Blockley (O:6,8 H: k : 1,5) m Enteritidis (O:1,9,12 H: g,m : -) p Dublin (O:1,9,12 [Vi] H: g,p : -) r Infantis (O:6,7,14 H: r : 1,5) v London (O:3,10 [15] H: l,v : 1,6) w Meleagridis (O:3,10 [15][15, 34] H: e,h : l,w) x Abony (O:1,4,[5],12,27 H: b : e,n,x) y Carrau (O:6,14,[24] H: y :1,7) z Worthington (O:1,13,23 H: z :l,w) z10 Lexington (O:3,10,[15] [15,34]H: z10 :1,5) z15 Brandenburg (O:1,4,[5],12,27 H:l,v:e,n,z15) 2 Newport (O:6,8,20 H: e,h : 1,2 [z67]) 5 Infantis (O:6,7,14 H: r : 1,5) 6 London (O:3,10 [15] H: l,v : 1,6) 7 Carrau (O:6,14,[24] H: y :1,7) 11- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA Wszystkie odczynniki są produkowane oraz sprzedawane zgodnie z naszym Systemem Jakości, zaczynając od otrzymania surowców do wykonania finalnego produktu. Każda seria odczynników jest poddana kontroli jakości i dopuszczona do sprzedaży po uzyskaniu określonych kryteriów. Dane dotyczące procesu produkcji oraz kontroli jakości każdej serii odczynników są archiwizowane u producenta. 12- OGRANICZENIA METODY Przed oznaczeniem serotypu należy zidentyfikować bakterie do gatunku. Do ostatecznej identyfikacji serologicznej niezbędne jest kompletne oznaczenie antygenów O i H. 6

13- NAJCZĘŚCIEJ WYSTEPUJĄCE SEROTYPY Najczęściej izolowane szczepy Salmonella to Salmonella enteritidis i Salmonella typhimurium. Grupa B (O: 4) O H Abony 1,4,[5],12,27 b e,n,x Agona 1,4,12,27 f,g,s [1,2] Brandenburg 1,4,[5],12,27 l,v e,n,z15 Bredeney 1,4,12,27 l,v 1,7 Coeln 1,4,[5],12 y 1,2 Derby 1,4,[5],12 f,g [1,2] Heidelberg 1,4,[5],12 r 1,2 Indiana 1,4,12 z 1,7 Paratyphi B 1,4,[5],12 b 1,2 Saintpaul 1,4,[5],12 e,h 1,2 Schwarzengrund 1,4,12,27 d 1,7 Stanley 1,4,[5],12,27 d 1,2 Typhimurium 1,4,[5],12 i 1,2 Grupa E1 - E2 (O: 3, 10-3, 15) Anatum 3,10 [15][15, 34] e,h 1,6 London 3,10 [15] l,v 1,6 Meleagridis 3,10 [15][15, 34] e,h l,w Muenster 3,10 [15][15, 34] e,h 1,5 Groupe E4 (O: 1, 3, 19) Senftenberg 1,3,19 g,[s],t - Grupa A (O: 1, 2) Paratyphi A 1,2,12 a [1,5] Grupa D1 (O: 9) O H Dublin 1,9,12 [Vi] g,p Enteritidis 1,9,12 g,m - Napoli 1,9,12 l,z13 e,n,x Panama 1,9,12 l,v 1,5 Typhi 9,12,[Vi] d - 7

Grupa C1 (O: 6, 7) Braenderup 6,7,14 e,h e,n,z15 Infantis 6,7,14 r 1,5 Livingstone 6,7,14 d l,w Mbandaka 6,7,14 z10 e,n,z15 Montevideo 6,7,14 g,m,[p],s [1,2,7] Ohio 6,7,14 b l,w Thompson 6,7,14 k 1,5 Virchow 6,7 r 1,2 Grupa C2 - C3 (O: 6, 8) Blockley 6,8 k 1,5 Bovismorbificans 6,8,20 r,[i] 1,5 Goldcoast 6,8 r l,w Hadar 6,8 z10 e,n,x Kottbus 6,8 e,h 1,5 Litchfield 6,8 l,v 1,2 Muenchen 6,8 d 1,2 [z67] Newport 6,8,20 e,h 1,2 [z67] Podkreślone antygeny grupowe O (np. 1,4,12): antygeny, których obecność jest związana ze stanem lizogenii bakteriofagiem. Występują jedynie po zakażeniu hodowli odpowiednim fagiem. Antygeny umieszczone w nawiasach (np. 9,12,[Vi]): antygeny determinowane chromosomalnie, których obecność lub brak nie wpływa na określenie serotypu. 14- LITERATURA 1. POPOFF M. Y., LE MINOR L., 1997, Antigenic formulas of the Salmonella serovars, 7 th revision. WHO collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella. Institut Pasteur, Paris, France. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 2011/08 www.bio-rad.com 8