Ćwiczenie 1 Podstawy różnicowania bakterii. 1. Preparat przyżyciowy (mokry, tzw. świeży) w kropli wiszącej. Technika wykonania preparatu:

Transkrypt

1 Ćwiczenie 1 Podstawy różnicowania bakterii. 1. Preparat przyżyciowy (mokry, tzw. świeży) w kropli wiszącej Technika wykonania preparatu: - na rogi szkiełka nakrywkowego nanieś niewielką ilość wazeliny - na środku szkiełka umieść 2 oczka zawiesiny z hodowli płynnej bakterii/grzybów - na szkiełko nakrywkowe nałóż szkiełko podstawowe z wgłębieniem, tak aby kropla znalazła się we wgłębieniu - oglądaj w mikroskopie świetlnym Obejrzyj preparat przyżyciowy z hodowli płynnej bakterii. Opisz wynik : 2. Barwienie złożone - metoda Grama Przygotowanie preparatu: odtłuszczone szkiełko podstawowe, nałożenie bakterii ( z hodowli płynnej 1-2 oczka ezy lub ze stałej - kropla soli + część kolonii bakteryjnej z podłoża stałego - rozprowadzenie na szkiełku. - utrwalenie preparatu (nad płomieniem) - barwienie: 1. fiolet krystaliczny 3 min. Spłukać wodą 2.płyn Lugola 2 min. Spłukać wodą 3. Etanol kilka sekund Spłukać wodą 4. Fuksyna 30 sek. Spłukać wodą - po wyschnięciu oglądamy pod imersją Wykonaj barwienie preparatów własnych ze wskazanych przez nauczyciela hodowli stałych ziarniaków Gram(+), ziarniaków Gram(-), pałeczek Gram+, pałeczek Gram(-) każdy student wykonuje co najmniej 2 różne preparaty własne. Preparaty pokazowe: 3.Obejrzyj pod mikroskopem i narysuj to co widzisz, uzupełnij pytania preparat barwiony czerwienią Kongo Co widać w tym barwieniu? Preparat barwiony metodą Ziehl -Neelsena Bakterie są koloru :.. Tło.. Wykorzystujemy w diagnostyce.. Preparat barwiony błękitem metylenowym Podaj przykłady zastosowania tego typu barwienia w diagnostyce

2 4.Agar krwawy agar z dodatkiem 5 % krwi baraniej (owczej) Obejrzyj rodzaje hemolizy paciorkowców na podłożu krwawym opisz wygląd Alfa Beta Gamma podaj przykłady podaj przykłady podaj przykłady 5.Wykonaj test na obecność katalazy z podłoża krwawego z kolonii wskazanych przez asystenta i oceń czy są to bakterii katalazo-dodatnie czy katalazo ujemne. Wpisz wynik. Wykorzystywany jest do różnicowania.. od 6.Podłoże McConkeya jest podłożem - określ typ. Kolonie laktozo+ są koloru Kolonie laktozo (-) są koloru podaj przykłady podaj przykłady 7.Podłoże Chapmana stosowane jest w diagnostyce Kolonie mannitolo+ są koloru Kolonie mannitolo(-) są koloru.. podaj przykład podaj przykłady 8.Uzupełnij : z krwią owczą Chapmana (MSA) MacConkeya czekoladowe Coccosel Pyocyanosel rodzaj podłoża czynnik wybiórczy czynnik różnicujący dla jakich drobnoustrojów możliwa barwa kolonii 9.Scharakteryzuj jakie bakterie mogą rosnąć na wskazanym przez asystenta podłożu chromogennym kierując się kolorem kolonii posługując się wzorcem kolorów danego podłoża. 10.Odczytaj test biochemiczny typu API - wskazany przez asystenta posługując się instrukcją do odczytu danego testu. 11.Hodowla drobnoustrojów w podłożu płynnym zaznacz na rysunku w której części probówki rosną bakterie wybitnie tlenowe. Względnie beztlenowe i bezwzględnie beztlenowe.

3 Ćwiczenie nr 2 Dermatofity wypełnij tabelę na podstawie dyskusji z Asystentem oraz za pomocą dostępnych testów: Rodzaje materiału pobieranego do badań Preparat bezpośredni jak wykonujemy i oceniamy Hodowla : Podłoża: Czas wzrostu Warunki temperatura inkubacji Identyfikacja gatunku Opisz wybrane gatunki dermatofitów na podłożach co najmniej 2 1. Nazwa gatunku. Wygląd kolonii.. 2. Nazwa gatunku. Wygląd kolonii.. Morfologia i fizjologia Candida wypełnij tabelę na podstawie dyskusji z Asystentem oraz za pomocą dostępnych testów: Rodzaje materiału pobieranego do badań Preparat bezpośredni wykonaj i oceń Hodowla : Podłoża: Czas wzrostu Warunki temperatura inkubacji

4 Morfologia i fizjologia Aspergillus wypełnij tabelę na podstawie dyskusji z Asystentem oraz za pomocą dostępnych testów: Rodzaje materiału pobieranego do badań Preparat bezpośredni - oceń Hodowla : Podłoża: Czas wzrostu Warunki temperatura inkubacji

5 Ćwiczenie nr 3 1. Wykonaj test hemaglutynacji szkiełkowej, opisz swój wynik 2. W diagnostyce jakich zakażeń wirusowych stosowane są testy hem aglutynacyjne 3. Obejrzyj w mikroskopie fluorescencyjnym wirusa wścieklizny (DIF) opisz preparat 4. Metoda łysinkowa - opisz

6 Ćwiczenie nr 4 1.Różnicowanie gronkowców Hodowla na agarze krwawym Hodowla na podłożu Chapmana Hodowla na Agarze prostym Katalaza CF, koagulaza Badanie biochemiczne Inne testy 2. Różnicowanie paciorkowców Hodowla na agarze krwawym typ hemolizy Hodowla na podłożu Granada lub innych podł. chromogennych Hodowla na Agarze prostym Katalaza Test na optochinę Badanie biochemiczne

7 3. Różnicowanie enterokoków: Hodowla na agarze krwawym typ hemolizy Hodowla na podłożu Granada lub innych podł. chromogennych Hodowla na Agarze prostym Podloże z eskuliną/ tellurynem potasu Katalaza Test na ruch Badanie biochemiczne Inne testy 4. Obejrzyj barwienie metodą Grama oraz Neissera z kolonii Corynebacterium sp. Narysuj co widzisz w obu preparatach oraz napisz w jakim celu stosuje się te barwienia, wskaż różnice. b. Grama b. Neissera mmm Technika barwienia Neissera: Przygotowanie preparatu z hodowli Utrwalenie (nad płomieniem) Barwienie: Neisser I + II - 10 min. Spłukać wodą Chryzoidyna - 30 sek Spłukać wodą Po wyschnięciu oglądamy pod imersją: ziarnistości - granatowe, komórki żółte 5. Obejrzyj i porównaj preparaty z hodowli prątków wykonane metodą Ziehl-Neelsena oraz fluorescencji. Opisz preparaty

8 6. Wymień podłoża do hodowli prątków: 7. Wzrost prątków na podłożach stałych- po obejrzeniu opisz wygląd kolonii prątków: 8. Jakie znaczenie ma wykrywanie DNA prątków w materiałach klinicznych?- opisz w punktach; zastosowanie metody, jej ograniczenia, przykłady wyników, dyskusja.

9 Ćwiczenie 5 1. Odszukaj na wskazanych płytkach i opisz kolonie poszczególnych drobnoustrojów, w opisie stosuj cechy różnicujące na podłożach np. laktozo+ Drobnoustroje/ rodzaj podłoża E.coli Agra z krwią opisz wygląd kolonii, śluz etc. McConkey a SS agar CPS podłoże chromogenne Proteus sp. Klebsiella sp. Serratia sp. Citrobacter sp. Enterobacter sp. Salmonella sp. Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumanii Stenotrophomonas maltophilia 2. Wykonaj oznaczenie wytwarzania oksydazy dla szczepu wskazanego przez asystenta wpisz wynik Szczep oksydaza 3. Obejrzyj i narysuj preparat z hodowli Campylobacter 4. Obejrzyj i narysuj preparat z hodowli Helicobacter

10 5. Pobierz wymazy z przedsionka nosa, spojówek, skóry, okolic odbytu, gardła lub innych okolic jamy ustnej, a następnie posiej pobrane materiały na wskazanych przez asystenta podłożach. Odczyt płytek na następnym ćwiczeniu. Materiał I - Podłoża Materiał II - Podłoża Materiał III - podłoża

11 Ćwiczenie nr 6 1.Odczytaj płytki z ubiegłego tygodnia z posiewami z nosa, jamy ustnej i skóry, opisz według wzoru: liczba różnych kolonii na płytce, kolor, kształt kolonii, obecność hemolizy, czynnik różnicujący Miejsce Pobrania Rodzaj podloża nos j.ustna: Skóra: Agar z krwią McConkey Chapman Saburauda czekoladowe Inne: Wykonaj 2 preparaty Grama z wybranych kolonii wskazanych przez Nauczyciela i wpisz wynik: Wykonaj preparat bezpośredni z kieszonki dziąsłowej lub z płytki nazębnej technikę prezentuje asystent narysuj i opisz wykonany przez siebie preparat. 3.Czy regularnie chodzisz do stomatologa na usuwanie płytki nazębnej? 4.Obejrzyj co najmniej 2 preparaty z hodowli Gram(+) i Gram (-) bakterii beztlenowych- wpisz nazwę szczepu i co widzisz:

12 Ćwiczenie nr 7 1. Wykonaj : posiewy: odciskowe palców (przed myciem, po myciu mydłem, po dezynfekcji), z powierzchni nieożywionych (metodą odciskową - Count-Tact, wymazy) oraz badanie zanieczyszczenia powietrza metodą opadową 2. Odczytaj test zahamowania hemaglutynacji 3. Obejrzyj w mikroskopie fluorescencyjnym preparaty z Adenowirusem, wirusem Parainfluenzae i Influenzae oraz RSV. 4. Możliwości zastosowania testu na obecność wirusa grypy - aparat GeneExpert opisz. Demonstracja testu przez asystenta. 5. Oznaczanie antygenów mannanowych i galaktomannanowych we krwi pacjenta i z niektórych materiałów klinicznych- wyniki + interpretacja, zastosowanie testu opisz 6. Real-time PCR w diagnostyce grzybic przykładowe wyniki, zastosowanie testu