Produkty Genomic Essentials 2014

Produkty Genomic Essentials 2014 GCTA+

2 ŻYWA PAGINA / POSZCZEGÓLNE ROZDZIAŁY GENOMIC ESSENTIALS: KLUCZ DO SUKCESU W BADANIACH Ciekawość, dobry pomysł i odwaga są często kluczem do sukcesu. Biochemik William A. Linton w 1978 roku dostrzegł wśród naukowców potrzebę wykorzystania fragmentów DNA i zaoferował sprzedaż samodzielnie wyprodukowanych enzymów restrykcyjnych. Mając przed oczyma tę samą wizję wspieranie naukowców w ich codziennej pracy w laboratorium firma Promega odpowiednio wcześnie poszerza swoją ofertę produktów do zastosowania w genomice. Po pojedynczych produktach, takich jak RNAsin czy polimeraza Taq DNA w latach osiemdziesiątych, przyszła kolej na pierwsze zestawy, jak Wizard Mini-DNA czy system SV Total RNA. Stanowiły one wstęp do obszernego asortymentu kluczowych produktów dla biologów molekularnych. Dzisiaj, po ponad 35 latach, Promega oferuje ponad 3000 produktów przeznaczonych do zastosowania w badaniach podstawowych, farmakologii, kryminalistyce i diagnostyce molekularnej, przy czym firma nadal koncentruje się na kluczowym obszarze swojej działalności: niezbędnych odczynnikach do badań genomicznych, czyli GENOMIC ESSENTIALS. Dlaczego o tym mówimy? Naukowcy z dziedziny genomiki potrzebują prostych, skutecznych i niezawodnych produktów, aby móc szybko znaleźć odpowiedzi na pytania naukowe. Firma Promega, jeden z największych producentów odczynników biologicznych na świecie, opracowuje produkty z serii Genomic Essentials w ścisłej współpracy z ich użytkownikami. Sprawdzone i wzajemnie dopasowane produkty Genomic Essentials pozwalają zyskać więcej czasu na to, co jest naprawdę istotne. Warto skorzystać z wieloletniego doświadczenia firmy Promega w każdej z dziedzin, którymi się zajmujemy. Z Genomic Essentials stworzą Państwo podstawę swojego sukcesu! GCTA+ Wybrane z całej oferty Promega produkty do zastosowania w genomice stanowią idealną podstawę badań zapraszamy do zapoznania się z Genomic Essentials. Przejrzyste prezentacje produktów wraz z opisem ich zalet, wskazówki dotyczące narzędzi i aplikacji oraz wszystkie informacje niezbędne do złożenia zamówienia.

SPIS TREŚCI 3 Kontakt Doradztwo techniczne: Jeśli coś nie od razu się udaje lub jeśli potrzebna jest porada dotycząca korzystania z produktów, prosimy o kontakt: tel. +48 22 531 06 68 pl_techserv@promega.com Telefoniczne składanie zamówień: tel. +48 22 531 06 67 Składanie zamówień faksem: fax +48 22 531 06 69 Składanie zamówień przez e-mail: pl_custserv@promega.com Składanie zamówień w sklepie internetowym: www.promega.com 2% rabatu w sklepie internetowym NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Aplikacja Promega Darmowa aplikacja Promega dostarcza naukowcom danych referencyjnych i pomocnych narzędzi. Obejmuje praktyczny kalkulator do stosowania na stole laboratoryjnym, filmy ukazujące protokoły oraz szczegółowe dane referencyjne z kluczowych dziedzin biologii molekularnej i biologii komórki. BioMath Calculators Szybkie wyliczanie temperatury topnienia, molarności, rozcieńczenia, stężenia DNA lub białka oraz wiele innych możliwości. Protocols & Application Guide Tutaj można znaleźć informacje z dziedziny biologii molekularnej i biologii komórki, jak również powszechnie stosowane protokoły. W poszczególnych sekcjach omówiono zagadnienia apoptozy, klonowania, szlaków sygnałowych w komórce, oczyszczania DNA, amplifikacji z zastosowaniem reakcji PCR, reporterów bioluminescencyjnych i transfekcji. Multimedia Filmy z protokołami i animowane prezentacje sprzętu. Można je przeglądać poprzez Protocols & Application Guide lub w osobnym menu. Custom PCR-Protocol Tworzenie i zapisywanie protokołów PCR oraz dodawanie do nich komentarzy i wysyłanie ich poprzez e-mail. Restriction Enzyme Tool Wyszukiwanie enzymów restrykcyjnych według nazwy, rozpoznawanej sekwencji lub wystających końców. Szybkie i łatwe wyszukiwanie enzymów do podwójnego trawienia bez konieczności wprowadzania każdego enzymu z osobna. OCZYSZCZANIE 4 Oczyszczanie DNA 5 Oczyszczanie RNA 10 Oczyszczanie bez odwirowywania 13 Oczyszczanie automatyczne / System Maxwell 16 16 KWANTYFIKACJA ORAZ WYKRYWANIE 18 Kwantyfikacja 19 Wykrywanie 21 PCR 22 Rutynowe reakcje PCR 23 PCR typu hot-start 24 PCR długich sekwencji 24 PCR ze sprawdzaniem poprawności 24 dntp 25 RT-PCR 26 Odwrotne transkryptazy 27 Systemy do odwrotnej transkrypcji 28 Oligonukleotydy i startery 29 INHIBITORY RYBONUKLEAZY 30 PCR W CZASIE RZECZYWISTYM 32 Zastosowania poszczególnych technologii PCR w czasie rzeczywistym PCR w czasie rzeczywistym z użyciem barwnika PCR w czasie rzeczywistym z użyciem sond 34 SYSTEMY KLONOWANIA 36 Klonowanie produktów PCR 37 System klonowania Flexi 39 Biblioteka cdna 40 Interferencja RNA 41 MARKERY 42 Markery DNA z serii BenchTop 43 Równoodstępowe drabinki DNA 44 Drabinki DNA 45 Konwencjonalne markery DNA 46 Markery RNA 47 ENZYMY RESTRYKCYJNE 48 ENZYMY MODYFIKOWANE 54 Fosfatazy alkaliczne 55 Polimerazy 55 Ligazy 56 Kinazy i systemy znakowania DNA 56 Nukleazy 57 Inne enzymy 57 WEKTORY EKSPRESYJNE 58 Wektory ekspresyjne Flexi 59 Standardowe wektory MCS 61 KOMPETENTNE KOMÓRKI 62 Wszystkie produkty z tym znakiem można umieszczać w zamrażarce, lodówce lub szafie utrzymującej temperaturę pokojową marki Helix. Więcej informacji na temat produktów Helix można znaleźć na stronie www.promega.com/helix

4 OCZYSZCZANIE OCZYSZCZANIE Oczyszczanie kwasów nukleinowych stanowi fundament wszystkich innych prac badawczych. Produkty do oczyszczania Genomic Essentials firmy Promega to podstawa sukcesu Państwa doświadczeń. Od wyboru odpowiednich produktów do oczyszczania zależy powodzenie dalszych etapów doświadczenia. Firma Promega oferuje odpowiednie produkty do szerokiego zakresu materiałów wyjściowych i zastosowań, w tym DNA i RNA, fragmentów i plazmidów, protokołów ręcznych i automatycznych! Produkty są skuteczne i łatwe w użyciu co więcej dołączane są do nich protokoły zastosowania w postaci przejrzystych protokołów skróconych, dzięki czemu rutynowe czynności laboratoryjne są jeszcze prostsze i wydajniejsze. NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Wybór produktu do oczyszczania kwasów nukleinowych Który zestaw do oczyszczania firmy Promega będzie odpowiedni? Pomoc online w wyborze produktu: www.promega.com/nap-selector Objaśnienie symboli 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny

OCZYSZCZANIE 5 Oczyszczanie DNA Oczyszczanie plazmidów od Mini do Maxi PureYield Plasmid System Szybkie oczyszczanie DNA plazmidowego do uzyskania jakości odpowiedniej do transfekcji Protokół próżniowy pozwala zmniejszyć nakład czasu potrzebny do izolacji w porównaniu z metodami wykorzystującymi żele krzemionkowe i kolumny membranowe. Specjalny bufor płuczący oddziela zanieczyszczenia w postaci białek, RNA i endotoksyn Lepsze wyniki w zastosowaniach o dużej czułości, na przykład transfekcji, transkrypcji in vitro lub sprzężonej transkrypcji / translacji in vitro Brak konieczności wytrącania w izopropanolu lub odwirowywania oczyszczonego DNA plazmidowego PureYield Plasmid Miniprep System Do kultur bakteryjnych o objętości od 600 µl do 3 ml 10 min 30 µg M A1223 100 szt. zł 621, A1222 250 szt. zł 1.0, PureYield Plasmid Midiprep System Do kultur bakteryjnych o objętości 25 100 ml 40 min 200 µg M A2492 25 szt. zł 710, A2495 100 szt. zł 2.559, A2496 300 szt. zł 6.520, Film o produkcie Przedstawiamy, jak szybkie i łatwe jest stosowanie produktu. www.promega.de/pureyield-midiprepsfast-video PureYield Plasmid Maxiprep System Do kultur bakteryjnych o objętości do 250 ml 60 min 1 mg M A2392 10 szt. zł 659, A2393 25 szt. zł 1.522, Wizard Plus SV Miniprep DNA Purification System Do kultur bakteryjnych o objętości 1 10 ml System na bazie membrany krzemionkowej Oczyszczone DNA można bezpośrednio zastosować do automatycznego sekwencjonowania fluorescencyjnego lub innych standardowych technik biologii molekularnej A10 50 szt. zł 310, A1460 250 szt. zł 1.0, A1465 1000 szt. zł 4.480, Nie jest wymagana ekstrakcja z użyciem fenolu ani etap wytrącania SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym, np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold 45 min 20 µg M

6 OCZYSZCZANIE Wizard SV 96 Plasmid DNA Purification System System na bazie membrany krzemionkowej na płytce 96-dołkowej Oczyszczone DNA plazmidowe można bezpośrednio zastosować do automatycznego sekwencjonowania fluorescencyjnego lub innych standardowych technik biologii molekularnej A2250 1 96 szt. zł 1.046, A2255 5 96 szt. zł 4.356, A2258 100 96 szt. zł.545, Do zastosowań ręcznych lub automatycznych na aparatach Beckman Coulter lub PerkinElmer SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym, np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold 45 min 20 µg M/A Wizard MagneSil Plasmid DNA Purification System Wysokoprzepustowy format 96-dołkowy Oczyszczone DNA można bezpośrednio zastosować do automatycznego sekwencjonowania fluorescencyjnego lub innych standardowych technik biologii molekularnej A1630 4 96 szt. zł 2.151, A1631 8 96 szt. zł 4.101, A1635 100 96 szt. zł 41.956, Paramagnetyczne cząstki do klarowania lizatu i izolowania DNA. Etap wirowania lub zastosowania próżni staje się zbędny Zaleta: idealny system do w pełni automatycznych zastosowań na różnych aparatach 45 min 20 µg A Komórki, tkanki, rośliny do każdego z zastosowań! ReliaPrep gdna Tissue Miniprep System Czyste, niezdegradowane gdna bez konieczności wytrącania alkoholem, pozyskiwane z 25 mg tkanki, wymazu z błony śluzowej jamy ustnej (policzka) lub 1 cm ogona mysiego A2051 100 szt. zł 1.157, A2052 250 szt. zł 2.532, Odczynniki gotowe do użycia Wysoka wydajność i czystość w eluacie o objętości zaledwie 50 μl Lepsze wyniki A260 / A230 w porównaniu z konwencjonalnymi systemami oczyszczania 20 30 min 30 µg M Wizard Genomic DNA Purification Kit Łatwa metoda izolacji DNA z roztworu, użyteczna przy badaniu białych ciałek krwi, kultur komórkowych, tkanek zwierzęcych i roślinnych, drożdży, bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych Kultury komórkowe o zawartości 1 105 do 8 105 komórek NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATALOGOWA A1120 100 oczyszczeń 300 µl zł 837, A1125 500 oczyszczeń 300 µl zł 1.842, A1620 100 oczyszczeń 10 ml zł 4.586, 11 mg wątroby mysiej, 0,5 1 cm ogona mysiego lub 40 mg liścia pomidora Objętości odczynników można indywidualnie dostosowywać do ilości badanego materiału 60 min V M 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny

O C Z YS ZCZA NIE Wizard SV Genomic DNA Purification System Kultury komórkowe o zawartości 1 104 do 5 106 komórek Szybka, łatwa i wysoce wydajna metoda na bazie membrany do izolacji czystego DNA NR KATALOG. A2360 A2361 min 20 µg M Średnia wydajność (µg) 45 CENA K ATALOGOWA 4 Oczyszczanie DNA z zł 510, 5 50 szt. Oczyszczanie RNA 10 250 szt. Oczyszczanie bez odwirowywania z zł 2.163, 13 Oczyszczanie automatyczne / System Maxwell 16 16 KWANTYFIKACJA ORAZ WYKRYWANIE 18 Odpowiednia do komórek, ogona mysiego lub tkanki roślinnej do 20 mg SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym, np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold OCZYSZCZANIE ILOŚĆ Kwantyfikacja 19 Wykrywanie 21 PCR 22 Rutynowe reakcje PCR PCR typu hot-start PCR długich sekwencji PCR ze sprawdzaniem poprawności dntp RT-PCR 23 24 24 24 25 26 Odwrotne transkryptazy 27 Metoda Systemy dooczyszczenia odwrotnej transkrypcji 28 Oligonukleotydy i startery 29 Wydajność oczyszczania DNA: porównanie systemów Wizard SV i SV 96: średni uzysk genomowego DNA (w µg) z 20 mg próbki ogona mysiego. INHIBITORY RYBONUKLEAZY 30 PCR W CZASIE RZECZYWISTYM 32 Tkanki / skrawki utrwalone w formalinie i zatopione w poszczególnych parafinietechnologii to takie Zastosowania PCR w czasie rzeczywistym proste! PCR w czasie rzeczywistym z użyciem barwnika ReliaPrep FFPE gdna Miniprep System Skrawki tkankowe 5 50 µm Uniwersalna metoda do utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie skrawków tkankowych Nie ma konieczności stosowania szkodliwych dla zdrowia rozpuszczalników ani prowadzenia całonocnego trawienia Minimalny nakład czasu do przeprowadzenia procedury (krótki czas pracy i niewiele etapów wykonywanych ręcznie) Zoptymalizowana liza odwraca modyfikacje, które zachodzą podczas utrwalania Rezultat: niezdegradowane, zdolne do namnażania DNA 2,5 h V M NR KATALOG. A2351 A2352 PCR w czasie rzeczywistym z użyciem sond 34 ILOŚĆ SYSTEMY 10KLONOWANIA szt. Klonowanie produktów PCR 100 szt. System klonowania Flexi Biblioteka cdna Interferencja RNA MARKERY CENA K ATALOGOWA z zł 360, 36 37 zzł 1.422, 39 40 41 42 Markery DNA z serii BenchTop 43 Równoodstępowe drabinki DNA 44 Drabinki DNA 45 Konwencjonalne markery DNA 46 Markery RNA 47 ENZYMY RESTRYKCYJNE 48 ENZYMY MODYFIKOWANE Fosfatazy alkaliczne Polimerazy Ligazy Kinazy i systemy znakowania DNA Nukleazy Inne enzymy WEKTORY EKSPRESYJNE 54 55 55 56 56 57 57 58 Wektory ekspresyjne Flexi 59 Standardowe wektory MCS 61 KOMPETENTNE KOMÓRKI Produkty GE NO M I C E S S E NT I A LS 2014 62 7

8 OCZYSZCZANIE Krew zawsze odpowiednia postać ReliaPrep Blood gdna Miniprep System Uzyskiwanie ze świeżych lub zamrożonych próbek krwi czystego i niezdegradowanego gdna bez wytrącania etanolem Zestaw odczynników gotowych do użycia Wysoka wydajność i czystość w eluacie o objętości zaledwie 50 μl Lepsze wyniki A260 / A230 w porównaniu z konwencjonalnymi systemami oczyszczania 200 µl <30 min 20 µg M Uzysk gdna (µg) A5081 100 szt. zł 980, A5082 250 szt. zł 2.154, 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 { { frisch(4ºc) gefroren 2.5 2 1.5 1 0.5 0 9317MA Ausbeute A 260 /A 280 A 260 /A 230 Oczyszczanie z systemem ReliaPrep umożliwia wydajne uzyskiwanie dużego stężenia genomowego DNA: próbki krwi można zastosować bezpośrednio lub po 3 cyklach zamrażania i rozmrażania. Wizard Genomic DNA Purification Kit Łatwa metoda izolacji DNA z roztworu, użyteczna przy badaniu białych ciałek krwi, komórek ssaków, tkanek zwierzęcych i roślinnych, drożdży, bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych Objętości odczynników można indywidualnie dostosowywać do ilości badanego materiału. 50 µl 10 ml NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATALOGOWA A1120 100 oczyszczeń 300 µl zł 837, A1125 500 oczyszczeń 300 µl zł 1.842, A1620 100 oczyszczeń 10 ml zł 4.586, 60 min V M ReliaPrep HT gdna Isolation System W pełni automatyczna izolacja DNA z próbek krwi o objętości wejściowej w zakresie 1 ml 10 ml (możliwość jednoczesnej pracy z próbkami o różnej objętości) Izolacja DNA z frakcji białych krwinek po odwirowaniu próbki krwi, z osadu komórkowego i z innych typów próbek Od 1 do 32 osobnych próbek Kompletny system ze stacją roboczą Freedom EVO HSM Workstation powstał przy współpracy z firmą Tecan Kompletny system obejmuje platformę zautomatyzowaną i odczynniki. Ceny i zamówienia Freedom EVO HSM Workstation 4 h 200 400 µg A Film o produkcie www.promega.de/reliaprep-hsm 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny

OCZYSZCZANIE 9 Fragmenty z żelu i po reakcji PCR Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System Wyekstrahowane i oczyszczone fragmenty DNA o wielkości od 100 bp do 10 kb ze standardowego żelu agarozowego lub żelu agarozowego o niskiej temperaturze topnienia System jest ponadto odpowiedni do bezpośredniego oczyszczania produktów reakcji PCR i trawienia enzymami restrykcyjnymi uzyskuje się wskaźnik odzyskiwania na poziomie 95% i wiązanie do 40 μg DNA DNA może następnie zostać wykorzystane w takich technikach, jak zautomatyzowane sekwencjonowanie fluorescencyjne, klonowanie, wyznakowywanie lub transkrypcja/translacja in vitro, bezpośrednio bez dalszego przetwarzania Do 300 mg fragmentów żelu agarozowego lub do 1 ml reakcji enzymatycznej SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym, np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold 15 min 95% M A9281 50 szt. zł 383, A9282 250 szt. zł 1.692, A9285 1000 szt. zł 5.750, WIELKOŚĆ FRAGMENTÓW ODZYSK 55 bp 26% 70 bp 39% 85 bp 55% 100 bp 84% 500 bp 89% 1000 bp 92% 3199 bp 95% 9416 bp 95% 23 130 bp 47% Wizard SV 96 PCR Clean-Up System Wysokoprzepustowa izolacja produktów reakcji PCR o długości od 100 bp do 10 kb Oddzielanie nukleotydów, starterów i dimerów starterów z wydajnością ponad 90% Oczyszczone DNA może następnie zostać wykorzystane w takich technikach, jak zautomatyzowane sekwencjonowanie fluorescencyjne, klonowanie, wyznakowywanie, trawienie enzymami restrykcyjnymi lub analiza mikromacierzowa, bezpośrednio bez dalszego przetwarzania A9340 1 96 szt. zł 599, A9341 4 96 szt. zł 2.010, A9342 8 96 szt. zł 3.625, A9345 100 96 szt. zł 25.564, Dostępne są protokoły automatycznego oczyszczania na aparatach firm Beckman Coulter, Eppendorf, PerkinElmer i Tecan Reakcje PCR do 2 ml SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym, np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold 20 min 90% M Wizard MagneSil Sequencing Reaction Clean-Up System Wysokoprzepustowy system oczyszczania produktów reakcji sekwencjonowania, również przy stosowaniu zestawu BigDye Terminator A1831 4 96 szt. zł 1.777, A1832 8 96 szt. zł 3.366, A1835 100 96 szt. zł 38.6, Oczyszczanie przebiega z udziałem cząstek MagneSil GREEN Paramagnetic Particles na niepowlekanych, standardowych 96-dołkowych płytkach do amplifikacji Nie wymaga działań ze strony użytkownika do momentu, gdy próbka jest gotowa do umieszczenia w aparacie do sekwencjonowania Dostępne są protokoły automatycznego oczyszczania na aparatach firm Beckman Coulter, Eppendorf, PerkinElmer i Tecan 2 µl mieszaniny reakcyjnej do sekwencjonowania 35 90 min 650 par zasad A DNA Analysis Notebook Wprowadzenie do różnych technik laboratoryjnych analizy DNA, w tym oczyszczania genomowego DNA, oczyszczania produktów reakcji PCR i klonowania. Przejrzysty, napisany w dostępny sposób poradnik. www.promega.de/dna-analysis-notebook

10 OCZYSZCZANIE Oczyszczanie RNA Komórki, tkanki, rośliny do każdego z zastosowań! ReliaPrep RNA Miniprep Systeme Jedyna w swoim rodzaju kolumna ze złożem wiążącym RNA, bardzo wydajna, nawet w przypadku niewielkich ilości materiału wyjściowego Wyizolowane RNA można uzyskać przy mniej niż 15 μl eluentu Obróbka DNazą następuje bezpośrednio na membranie minikolumny w ten sposób można wydajnie oddzielać substancje, które zaburzają końcowe wyniki doświadczeń Bez konieczności prowadzenia ekstrakcji z użyciem fenolu i chloroformu lub wytrącania etanolem Zaleta: uzyskuje się czyste, całkowite RNA, odpowiednie do bezpośredniego użycia w różnych wymagających zastosowaniach bez potrzeby dalszego zatężania ReliaPrep RNA Cell Miniprep System Od 100 do 5 106 komórek ssaków 20 30 min 0,5 ng 1,34 µg M Z6010 10 szt. zł 247, Z6011 50 szt. zł 1.062, Z6012 250 szt. zł 4.248, ReliaPrep RNA Tissue Miniprep System Od 0,25 do 20 mg tkanki 20 30 min 30 µg M Z6110 10 szt. zł 247, Z6111 50 szt. zł 1.062, Z6112 250 szt. zł 4.248, SV Total RNA Isolation System Szybka i łatwa preparatyka niezdegradowanego, całkowitego RNA z tkanek, komórek lub białych ciałek krwi Obróbka DNazą w minikolumnach membranowych ogranicza zanieczyszczenia genomowym DNA, które zakłócałyby wyniki późniejszych reakcji PCR Z3101 10 szt. zł 247, Z3100 50 szt. zł 906, Z3105 250 szt. zł 3.728, Bez konieczności prowadzenia ekstrakcji z użyciem fenolu i chloroformu lub wytrącania etanolem Szczególna zaleta: brak opóźnień spowodowanych koniecznością obróbki wyizolowanego RNA DNazą SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym W przypadku komórek: do 5 105 komórek ssaczych W przypadku tkanek: do 15 60 mg SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym, np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold 60 min 0,27 5,3 µg/mg M Analiza czystości RNA po oczyszczeniu z użyciem zestawu SV Total RNA: izolaty RNA z wątroby myszy zostały poddane odwrotnej transkrypcji, amplifikacji i analizie w żelu agarozowym. W przeciwieństwie do konkurencyjnego produktu (ścieżki 7 12) system SV Total RNA (ścieżki 1 6) umożliwił uzyskanie próbki bez zanieczyszczeń genomowym DNA (widoczne jako paski odpowiadające 1123 bp) przy uzyskaniu porównywalnej wydajności. Ścieżka C: kontrola dodatnia. 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny

OCZYSZCZANIE 11 SV 96 Total RNA Isolation System Wysokoprzepustowa technika ze specjalnym urządzeniem próżniowym zapobiega częstemu zmienianiu końcówek, co ogranicza stosowanie jednorazowych materiałów z tworzyw sztucznych Z3500 1 96 szt. zł 1.101, Z3505 5 96 szt. zł 5.228, Nowy projekt płytek zapobiega zanieczyszczeniom krzyżowym DNaza wyraźnie zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia genomowym DNA Szczególna zaleta: brak konieczności prowadzenia ekstrakcji z użyciem fenolu i chloroformu lub wytrącania etanolem W przypadku komórek: do 5 105 komórek ssaczych W przypadku tkanek: do 15 60 mg SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym, np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold <1 h 0, 0,44 µg / 10 5 komórek M/A MagneSil Total RNA Mini-Isolation System Wysokoprzepustowy format 96/384-dołkowy, który umożliwia szybką i łatwą preparatykę niezdegradowanego, całkowitego RNA z komórek, lizatów tkankowych lub świeżo pobranych próbek krwi Z51 4 96 szt. zł 3.941, Protokół umożliwia automatyczne, wysokoprzepustowe oczyszczanie z użyciem szerokiej gamy stacji do obróbki płynów Brak konieczności filtrowania próżniowego, odwirowywania lub wytrącania Niewielkie objętości eluatu: zaledwie 15 μl tj. stężone RNA do takich zastosowań, jak RT-PCR lub RT-PCR w czasie rzeczywistym W przypadku tkanek: do 2 mg lizatu tkankowego w 100 µl W przypadku komórek: do 1 105 komórek 30 min 2 µg / 10 5 komórek A PureYield RNA Midiprep System Niezdegradowane, czyste RNA z niemal każdej próbki odpowiednie do wielu różnych zastosowań, w tym RT-PCR Z3740 10 szt. zł 455, Z3741 50 szt. zł 2.016, Nowo opracowany bufor umożliwia szybkie oczyszczanie bez użycia DNazy i bez pozostawiania wykrywalnych zanieczyszczeń genomowym DNA Brak konieczności stosowania rozpuszczalników organicznych, trawienia proteazami czy wytrącania alkoholem Opracowany do stosowania z wirówkami lub urządzeniami próżniowymi (np. Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold 3 strona 13) Tkanka liścia do 300 mg <2 h 0, 0,44 µg / 10 5 komórek M

12 OCZYSZCZANIE Tkanki / skrawki utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie to takie proste! ReliaPrep FFPE Total RNA Miniprep System Uniwersalna metoda do utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie skrawków tkankowych. Nie ma konieczności stosowania szkodliwych dla zdrowia rozpuszczalników ani całonocnego trawienia Całkowite RNA z utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie tkanek można szybko wyizolować przy krótkim czasie poświęconym na pracę Wynik: niezdegradowane, odpowiednie do amplifikacji RNA o wysokiej jakości Skrawki tkankowe 5 50 µg 90 min V M Z1001 10 reakcji zł 494, Z1002 100 reakcji zł 2.623, Całkowite RNA jest izolowane z następujących po sobie skrawków wątroby mysiej o grubości 10 µm, utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, a następnie badane z użyciem aparatu Agilent Bioanalyzer. Dzięki systemowi ReliaPrep FFPE Total RNA Miniprep System można wyizolować dłuższe fragmenty RNA, niż z użyciem konkurencyjnych zestawów. Krew zawsze odpowiednia postać! SV Total RNA Isolation System Szybka i łatwa preparatyka niezdegradowanego, całkowitego RNA z tkanek, komórek lub białych ciałek krwi Obróbka DNazą w minikolumnach membranowych ogranicza zanieczyszczenia genomowym DNA, które zakłócałyby wyniki reakcji PCR Z3101 10 szt. zł 247, Z3100 50 szt. zł 906, Z3105 250 szt. zł 3.728, Bez konieczności prowadzenia ekstrakcji z użyciem fenolu i chloroformu lub wytrącania etanolem Szczególna zaleta: brak opóźnień spowodowanych koniecznością obróbki preparatu RNA DNazą SV = do stosowania z mikrowirówkami (w protokole wirowania) lub w protokole próżniowym 100 µl krwi 60 min 0,27 5,3 µg /mg M MagneSil Total RNA Mini-Isolation System Wysokoprzepustowy format 96/384-dołkowy, który umożliwia szybką i łatwą preparatykę niezdegradowanego, całkowitego RNA z komórek ssaków, lizatów tkankowych lub świeżo pobranych próbek krwi Z51 4 96 szt. zł 3.941, Protokół umożliwia automatyczne, wysokoprzepustowe oczyszczanie z użyciem szerokiej gamy stacji do obróbki płynów Brak konieczności filtrowania próżniowego, odwirowywania lub wytrącania Niewielkie objętości eluatu: zaledwie 15 μl tj. stężone RNA do zastosowań, takich jak RT-PCR lub RT-PCR w czasie rzeczywistym Do 20 µl krwi 30 min 2 µg / 10 5 komórek A RNA Analysis Notebook Wprowadzenie do różnych technik laboratoryjnych analizy RNA, w tym: oczyszczania RNA, amplifikacji w technice RT-PCR, wytarzania RNA in vitro i analizy mikromacierzowej RNA. www.promega.de/rna-analysis-notebook 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny

OCZYSZCZANIE 13 Oczyszczanie bez wirowania stanowisko pracy z próżnią Stacja próżniowa Vac-Man Dzięki podciśnieniu praca idzie jak z płatka: korzystając ze stacji próżniowej Vac-Man i pompy próżniowej można błyskawicznie oczyszczać kwasy nukleinowe przy użyciu podciśnienia. Zalety w porównaniu ze stosowanymi zwykle protokołami obejmującymi wirowanie: Szybsze uzyskiwanie DNA i RNA Do 20 oczyszczeń prowadzonych równolegle Brak konieczności czekania na koniec wirowania Dzięki pompie próżniowej Uzyskuje się podciśnienie i utrzymuje jego stałą wartość Nie marnuje się wody Pakiet startowy do oczyszczania obejmuje: Odczynniki do oczyszczania Vac-Man (stacja próżniowa) Vakuum-Eluator (w zależności od pakietu do oczyszczania) Pompę próżniową o wartości 500 dodajemy gratis Aby ułatwić rozpoczęcie stosowania protokołów próżniowych do oczyszczania firma Promega oferuje atrakcyjne pakiety startowe. Można w ten sposób otrzymać wartą 500 pompę próżniową gratis Pakiety do oczyszczania plazmidowego PAKIET STARTOWY DO OCZYSZCZANIA Pure Yield Minipreps ZAWARTOŚĆ PAKIETU NR KATALOG. CENA KATALOGOWA 750 szt. (3 A1222) + Vac-Man (A7231) + pompa próżniowa gratis! A6812 zł 4.730, PureYield Midipreps 100 szt. (1 A2495) + Vac-Man (A7231) + 4 Eluatoren (1 A1071) + pompa próżniowa gratis! A6742 zł 3.859, PureYield Maxipreps 50 szt. (1 A2393) + Vac-Man (A7231) + 4 Eluatoren (1 A1071) + pompa próżniowa gratis! A6732 zł 4.254, Wizard Plus SV Minipreps 750 szt. (3 A1470) + Vac-Man (A7231) + odpowiedni adapter (A11) + pompa próżniowa gratis! A6762 zł 4.837,

14 OCZYSZCZANIE Pakiety do oczyszczania genomowego DNA PAKIET STARTOWY DO OCZYSZCZANIA Wizard SV Genomic DNA Purification System ZAWARTOŚĆ PAKIETU NR KATALOG. CENA KATALOGOWA 500 szt. (2 A2361) + Vac-Man (A7231) + odpowiedni adapter (A11) + pompa próżniowa gratis! A6772 zł 5.258, Wizard SV 96 Genomic 4 96 szt. (1 A2371) + Vac-Man 96 (A2291) + pompa próżniowa gratis! A6782 zł 5.688, Pakiety do oczyszczania fragmentów DNA PAKIET STARTOWY DO OCZYSZCZANIA Wizard SV Gel and PCR Clean- -Up System ZAWARTOŚĆ PAKIETU NR KATALOG. CENA KATALOGOWA 500 szt.(1 A9282) + Vac-Man (A7231) + odpowiedni adapter (A11) + pompa próżniowa gratis! A6752 zł 4.203, Wizard SV 96 PCR Clean-Up 8 96 szt. (A9342) + Vac-Man 96 (A2291) + pompa próżniowa gratis! A6792 zł 5.729, Pakiety do oczyszczania RNA PAKIET STARTOWY DO OCZYSZCZANIA SV Total RNA Isolation System ZAWARTOŚĆ PAKIETU NR KATALOG. CENA KATALOGOWA 250 szt. (1 Z3105) + Vac-Man (A7231) + odpowiedni adapter (A11) + pompa próżniowa gratis! Z82 zł 4.469, PureYield RNA Midipreps 100 szt. (2 Z3741) + Vac-Man (A7231) + 4 Eluatoren (1 A1071) + pompa próżniowa gratis! Z72 zł 5.241, Vac-Man Laboratory Vacuum Manifold, 20sample-capacity A7231 1 sztuka zł 744, Vac-Man 96 Vacuum Manifold A2291 1 sztuka zł 2.104, One-Way Luer-Lok Stopcocks A7261 10 sztuk zł 157, 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny

OCZYSZCZANIE 15 Vakuum-Eluator Vakuum-Eluator sprawia, że ostatni etap wirowania nie jest już potrzebny do uzyskania preparatu. Teraz można wszystkie etapy pracy wykonać bezpośrednio na stole laboratoryjnym. Oto jak działa Eluator! www.promega.de/vakuum-eluator-video Wysoka wydajność: 20% więcej plazmidów w eluacie dzięki zmniejszeniu martwej objętości Praktyczność: mniej etapów pipetowania dzięki elucji bezpośrednio do próbówki Eppendorfa Szybkość: elucja w mniej niż 1 minutę Eluator Vacuum Elution Device A1071 4 sztuki zł 557, Elucja przy użyciu wirówki Eluator Uzysk w µg 500 System Eluator zapewnia większą szybkość i wydajność Do oczyszczania z systemem próżniowym Eluator przeznaczone są następujące zestawy: 400 300 PureYield Plasmid Midiprep System Strona 5 PureYield Plasmid Maxiprep System Strona 5 PureYield RNA Midiprep System Strona 11 200 100 250 350 450 600 Objętość eluatu w µl Rys.: Oczyszczanie w systemie PureYield Plasmid Midiprep: przy różnych objętościach elucji mierzono wydajność obu metod i porównywano je. Wydajność metody z użyciem systemu Eluator jest wyraźnie wyższa w porównaniu z metodą obejmującą wirowanie dla każdej zmierzonej objętości.

16 OCZYSZCZANIE Oczyszczanie automatyczne z systemem Maxwell 16 Izolacja i oczyszczanie automatyczne DNA i RNA z różnych próbek z odtwarzalnymi wynikami i wysoką wydajnością. Szybie, pewne i przyjazne użytkownikowi metody oczyszczania kwasów nukleinowych dla każdego laboratorium. Urządzenie Maxwell 16 jest kompaktowe, zajmuje podobną powierzchnię co laptop i łatwo wpasuje się do każdego laboratorium. System Maxwell 16 korzysta z techniki oczyszczania bazującej na cząstkach paramagnetycznych w zapełnianych fabrycznie jednorazowych kartuszach. Fabrycznie zainstalowane protokoły i ekran dotykowy sprawiają, że system jest przyjazny użytkownikowi Szybkość: 1 do 16 próbek w ok. 30 minut Niezawodność: zawsze taka sama wydajność pracy Bezpieczeństwo: brak zanieczyszczeń krzyżowych Wszechstronność: automatyczna homogenizacja próbek stałych, np. tkanek lub kału Przy stosowaniu urządzenia Maxwell dostępna jest szeroka gama zoptymalizowanych zestawów do ekstrakcji z różnego rodzaju próbek: tkanek, krwi, preparatów utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, wirusów, roślin, kultur komórkowych, kału, wymazów i innych próbek biologicznych, kryminalistycznych lub medycznych. Istnieje wiele przetestowanych protokołów pracy dostosowanych do różnych materiałów wyjściowych i odpowiadających im parametrom. Przykłady: Całkowite kwasy nukleinowe z osocza RNA z tkanek lub komórek Wirusowe kwasy nukleinowe z próbek kału DNA z krwi w diagnostyce zakażeń DNA z wymazów do typowania HLA DNA lub RNA z utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie tkanek DNA z próbek kryminalistycznych DNA zbóż do wykrywania GMO Maxwell 16 Geräte NR KATALOG. ZESTAW OPIS KOMENTARZ AS2000 Aparat Maxwell 16 Standardowe urządzenie Maxwell Do wszystkich zestawów z wyjątkiem zestawów do diagnostyki in vitro AS3000 Maxwell MDx Urządzenie do diagnostyki i wielu innych zastosowań AS3050 Maxwell 16 MDx (CE- IVD) Urządzenie z certyfikatem CE do diagnostyki in vitro AS3060 Aparat Maxwell 16 Forensic Urządzenie do zastosowań w kryminalistyce Do wszystkich zestawów z wyjątkiem zestawów do diagnostyki in vitro Z systemem rejestrowania kodów kreskowych, ekranem dotykowym i lampą UV Do wszystkich zestawów Z systemem rejestrowania kodów kreskowych, ekranem dotykowym i lampą UV CE IVD Specjalnie przystosowane do zadań kryminalistycznych Z systemem rejestrowania kodów kreskowych, ekranem dotykowym i lampą UV 30 min Czas obróbki 1 mg Wydajność *z=zmienna A/M Format Automatyczny / ręczny

O C Z YS ZCZA NIE OCZYSZCZANIE 4 Dzięki systemowi Maxwell 16 izolacja DNA i/lub RNA ze skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafioczyszczanie DNA 5 nie (FFPE) staje się niezwykle prosta. Oczyszczanie RNA 10 Oczyszczanie bez odwirowywania 13 Oczyszczanie automatyczne / System Maxwell 16 16 KWANTYFIKACJA ORAZ WYKRYWANIE 18 Kwantyfikacja 19 Wykrywanie 21 PCR 22 Rutynowe reakcje PCR PCR typu hot-start PCR długich sekwencji PCR ze sprawdzaniem poprawności dntp RT-PCR 23 24 24 24 25 26 Odwrotne transkryptazy 27 Systemy do odwrotnej transkrypcji 28 Oligonukleotydy i startery 29 INHIBITORY RYBONUKLEAZY Oszczędność czasu i pieniędzy Oszczędność PCRprzestrzeni W CZASIE RZECZYWISTYM 32 Zastosowania poszczególnych technologii PCR w czasie rzeczywistym PCR w czasie rzeczywistym z użyciem barwnika PCR w czasie rzeczywistym z użyciem sond 34 kolumna (ręcznie) SYSTEMY KLONOWANIA Klonowanie produktów PCR System klonowania Flexi Biblioteka cdna Interferencja RNA koszt czas koszt czas % udział -50 %* l 30 kartusz (automatycznie) * koszt całkowity = cena + czas pracy MARKERY 36 37 39 40 41 42 Markery DNA z serii BenchTop Nieduże urządzenie stołowe wielkości laptopa 43 Równoodstępowe drabinki DNA 44 Drabinki DNA 45 Konwencjonalne markery DNA 46 Markery RNA 47 ENZYMY RESTRYKCYJNE Zestawy Maxwell 16 48 ENZYMY MODYFIKOWANE NR KATALOG. ZESTAW AS1010 Maxwell 16 Blood DNA Purification Kit AS1020 Maxwell 16 Cell DNA Purification Kit AS1030 Maxwell 16 Tissue DNA Purification Kit AS1050 Maxwell 16 Total RNA Purification Kit AS1220 Maxwell 16 Tissue LEV Total RNA Purification Kit AS1225 Maxwell 16 Cell LEV Total RNA Purification Kit AS1150 Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification Kit Fosfatazy alkaliczne Polimerazy Ligazy Kinazy i systemy znakowania DNA Nukleazy Inne enzymy WEKTORY EKSPRESYJNE 54 ILOŚĆ 55 48 szt. 55 48 szt. 56 56 48 szt. 57 48 szt. 57 48 szt. 58 Wektory ekspresyjne Flexi 48 szt. 59 Standardowe wektory MCS 61 48 szt. KOMPETENTNE KOMÓRKI 48 szt. 62 AS1290 Maxwell 16 LEV Blood DNA Kit AS1140 Maxwell 16 Cell LEV DNA Purification Kit 48 szt. AS1270 Maxwell 16 LEV simplyrna Cells Kit 48 szt. AS1280 Maxwell 16 LEV simplyrna Tissue Kit 48 szt. AS1135 Maxwell 16 LEV FFPE Plus LEV DNA Purification Kit 48 szt. AS1260 Maxwell 16 LEV RNA FFPE Kit 48 szt. AS1015 Maxwell 16 Clinical Blood DNA Purification Kit, CE IVD 48 szt. AS1155 Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification Kit, CE IVD 48 szt. AS1240 Maxwell 16 DNA IQ Casework Pro Kit 48 szt. Produkty GE NO M I C E S S E NT I A LS 2014 17

18 KWANTYFIKACJA I WYKRYWANIE KWANTYFIKACJA I WYKRYWANIE Wiarygodna kwantyfikacja kwasów nukleinowych na poziomie pikogramów Kwantyfikacji DNA i RNA nie należy pozostawiać przypadkowi. Dzięki produktom Genomic Essentials można określić z dokładnością do pikograma ilości potrzebne do przeprowadzenia doświadczeń, uzyskując wiarygodne wyniki. Fluorescencyjne kwantyfikacje DNA i RNA wykazują znacząco większą czułość od metod opartych na pomiarze absorbancji. Produkty QuantiFluor zawierają szeroką gamę różnych barwników, które wiążą się swoiście z jedno- lub dwuniciowymi kwasami nukleinowymi i w ten sposób umożliwiają dokładniejsze oznaczenie w porównaniu z pomiarem absorbancji przy 260 nm. Z tego powodu metody kwantyfikacji oparte na pomiarze fluorescencji są szczególnie użyteczne przy przygotowywaniu próbek do zastosowań w biologii molekularnej, szczególnie w sekwencjonowaniu nowej generacji. Barwniki można stosować z czytnikiem płytek mikrotitracyjnych lub fluorymetrem jednoprobówkowym, jak na przykład Quantus firmy Promega.

KWANTYFIKACJA I WYKRYWANIE 19 Kwantyfikacja Kompletny pakiet do kwantyfikacji kwasów nukleinowych Fluorymetr Quantus i system QuantiFluor Dye doskonale współgrają ze sobą i są przeznaczone do czułej kwantyfikacji jedno- lub dwuniciowego DNA lub RNA. Urządzenie jest kompatybilne z innymi zestawami do kwantyfikacji bazującymi na pomiarze fluorescencji. Dzięki darmowemu oprogramowaniu Quantus można przesyłać dane w czasie rzeczywistym: wystarczy podłączyć urządzenie do komputera. Stosując fluorymetry Quantus z barwnikami QuantiFluor można uzyskać nawet 40 000 razy większą czułość w porównaniu z metodami bazującymi na pomiarze absorbancji. Przy wyższej czułości i szerokim linearnym zakresie pomiarowym system Quantus idealnie nadaje się do próbek z małą ilością DNA lub RNA, np. tkanek utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie (skrawków FFPE), jak również próbek do sekwencjonowania nowej generacji. Barwniki QuantiFluor można też stosować z innymi fluorymetrami, np. Qubit 2.0 lub GloMax Multi-Mode Reader. 50pg /ml TIMES 10 MORE Sensitive 10 2 200pg /ml Detection Limit 500pg /ml 40,000 TIMES MORE Sensitive 10 1 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 dsdna Concentration (ng/ml) 2µg/ml Quantus Fluorometer QuantiFluor -ST Fluorometer Qubit 2.0 Fluorometer * NanoDrop 2000 Spectrophotometer ** * Qubit jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Life Technologies ** NanoDrop jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy NanoDrop Technologies Ogólne informacje na temat aparatu GloMax Multi-Mode Reader: www.promega.com/multimode-readers 11574MC Fluorymetr Quantus Długości fal: Filtr ekstynkcji: czerwony, 640 nm Shortpass, niebieski, 495 nm Shortpass Filtr emisji: czerwony, 660-720 nm, niebieski, 510-580 nm E6150 1 sztuka zł 6.719,

20 KWANTYFIKACJA I WYKRYWANIE QuantiFluor One dsdna Dye Zakres wykrywalności i czułość: E4891 20 ml zł 251, Próbka*: 0,2 400 ng /µl Oznaczenie: 1 2000 ng /ml QuantiFluor dsdna System Zakres wykrywalności i czułość: E2670 1 ml zł 975, Próbka*: 0,1 200 ng / µl Oznaczenie: 0,05 1000 ng / ml QuantiFluor ssdna System Zakres wykrywalności i czułość: E3190 1 ml zł 1.240, Próbka*: 0,2 400 ng / µl Oznaczenie: 1 2000 ng / ml QuantiFluor RNA System Zakres wykrywalności i czułość: E10 1 ml zł 1.192, Próbka*: 0,1 500 ng / µl Oznaczenie: 0,5 2500 ng / ml * Na podstawie wyników dla próbki 1 µl NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Analiza danych z systemów QuantiFluor Dye Analiza danych z systemów QuantiFluor Dye jest łatwa i wygodna dzięki arkuszom kalkulacyjnym Excel. Arkusz kalkulacyjny zawiera format płytki, aby sporządzać plan doświadczenia lub wprowadzać wyniki pojedynczych pomiarów, jak również przeprowadzać analizę wyników uzyskanych z zastosowaniem barwników fluorescencyjnych QuantiFluor ONE, QuantiFluor dsdna, ssdna lub RNA Dye. www.promega.com/quantus-data- -analysis Wprowadzanie i ocena wyników pomiarów w formacie 96-dołkowym Wyliczanie stężenia wyjściowego Sprawdzanie wiarygodności wyników poprzez odnoszenie zmierzonych wartości stężenia do krzywej wzorcowej Wybór pomiędzy pomiarami prostymi i wykonywanymi w trzech powtórzeniach

KWANTYFIKACJA I WYKRYWANIE 21 Wykrywanie Diamond Nucleic Acid Dye Barwnik fluorescencyjny o dużej czułości, który wiąże się z jedno- lub dwuniciowym DNA i RNA Wykrywanie minimalnych ilości kwasów nukleinowych Do wybarwiania i wizualizacji kwasów nukleinowych w żelu H1181 500 µl zł 368, 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Odpowiedni do stosowania zarówno w żelu agarozowym, jak i poliakrylamidowym Znacząco mniejsze działanie mutagenne od bromku etydyny (poziom bezpieczeństwa porównywalny z barwnikiem SYBR Safe*) Stabilność w temperaturze pokojowej * SYBR jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Molecular Probes Barwienie DNA barwnikiem Diamond Nucleic Acid Dye w 1,2% żelu E-gel **: w pierwszej ścieżce znajduje się 10 µl markera 1 kb DNA BenchTop typu drabinka (G7541). Przy serii rozcieńczeń w ścieżkach 2 12 stosowano każdorazowo połowę ilości z poprzedniej ścieżki z barwnikiem 1X Blue/Orange Loading Dye (G1881). Po elektroforezie inkubowano żel przez 20 minut w barwniku Diamond Nucleic Acid Dye. Prążki w żelu uwidoczniono w systemie Molecular Imager Gel Doc XR+ z oprogramowaniem Image Lab *** i aplikacją SYBR Gold. 11175TA ** E-gel jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Life Technologies *** Molecular Imager Gel Doc XR+ i Lab Software są zastrzeżonymi znakami towarowymi firmy Bio-Rad

22 PCR PCR Bezkonkurencyjne wyniki, odtwarzalne w każdych warunkach: dzięki produktom z serii GoTaq firmy Promega. Odczynniki PCR firmy Promega zapewniają optymalne wyniki w szerokim spektrum zastosowań. Stosuje się je np. w identyfikacji genetycznej, w ramach zapewnienia jakości w przedsiębiorstwach przemysłowych oraz w diagnostyce. Polimerazy DNA GoTaq G2 są dostępne we wszystkich powszechnie stosowanych formach: jako pojedynczy enzym, w postaci mieszaniny Master Mix i w wersji spersonalizowanej, w której można dowolnie dobierać stężenie MgCl2, lub jako kompletny bufor reakcyjny. Do każdej polimerazy dodawany jest bufor bezbarwny i bufor zielony. Zielony bufor służy jako kontrola przebiegu elektroforezy i przy jego stosowaniu produkty reakcji PCR można przenosić bezpośrednio na żel. Przy zastosowaniach, które wymagają pomiaru absorbancji lub fluorescencji produktów reakcji PCR przed oczyszczeniem, należy stosować bufor bezbarwny. Zakupy bez ryzyka z gwarantowaną satysfakcją podczas przeprowadzania reakcji PCR! Jeśli nie będą Państwo zadowoleni z naszych produktów do PCR, zwrócimy Państwu pieniądze!

PCR 23 Rutynowy PCR GoTaq G2 DNA Polymerase Zawsze wysoka wydajność, niezależnie od sekwencji docelowej Amplifikacja najmniejszych ilości DNA dzięki dużej czułości Stężenie MgCl 2 : 1,5 mm M7841 100 U zł 166, M7845 500 U zł 676, M7848 2500 U (5 500 U) zł 2.873, GoTaq G2 Flexi DNA Polymerase Zawsze wysoka wydajność, niezależnie od sekwencji docelowej Amplifikacja najmniejszych ilości DNA dzięki dużej czułości Stężenie MgCl 2 można dopasować indywidualnie M7801 100 U zł 166, M7805 500 U zł 676, M7806 2500 U (5 500 U) zł 2.873, M7808 10 000 U (20 500 U) zł 5.517, GoTaq G2 Green Master Mix Gotowa do użycia mieszanina zawierająca polimerazę DNA GoTaq G2, dntp i bufor reakcyjny M7822 100 reakcji zł 2, M7823 1000 reakcji zł 2.601, Marker barwny w buforze do bezpośredniej kontroli w żelu GoTaq G2 Colorless Master Mix Gotowa do użycia mieszanina zawierająca polimerazę DNA GoTaq G2, dntp i bufor reakcyjny M7832 100 reakcji zł 2, M78 1000 reakcji zł 2.601, Bezbarwny bufor reakcyjny NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW BioMath Calculators Szybkie wyliczanie temperatury topnienia, molarności, rozcieńczenia, stężenia DNA lub białka oraz wiele innych możliwości. www.promega.com/biomath

24 PCR PCR typu hot-start GoTaq G2 Hot Start Polymerase Większa procesywność, czułość i swoistość Konfiguracja w temperaturze pokojowej Stężenie MgCl 2 można dopasować indywidualnie M7401 100 U zł 213, M7405 500 U zł 965, M7406 2500 U (5 500 U) zł 4.174, M7408 10 000 U (20 500 U) zł 14.357, GoTaq G2 Hot Start Green Master Mix Gotowa do użycia mieszanina zawierająca polimerazę GoTaq G2 Hot Start Polymerase, dntp i bufor reakcyjny o optymalnym stężeniu MgCl 2 M7422 100 reakcji zł 344, M7423 1000 reakcji zł 2.724, Marker barwny w buforze do bezpośredniej kontroli w żelu GoTaq G2 Hot Start Colorless Master Mix Gotowa do użycia mieszanina zawierająca polimerazę GoTaq G2 Hot Start Polymerase, dntp i bufor reakcyjny o optymalnym stężeniu MgCl 2 M7432 100 reakcji zł 344, M74 1000 reakcji zł 2.724, Bezbarwny bufor reakcyjny PCR długich sekwencji GoTaq Long PCR Master Mix Amplifikacja sekwencji ludzkiego DNA genomowego o długości do 30 kb lub mniej złożonych sekwencji matrycowych o długości do 40 kb, np. DNA faga Lambda M4021 100 reakcji zł 802, Gotowa do użycia mieszanina zawierająca polimerazę GoTaq G2 Hot Start i termostabilną polimerazę sprawdzającą poprawność parowania zasad, dntp i MgCl 2 w optymalnym stężeniu PCR ze sprawdzaniem poprawności Pfu DNA Polymerase Aktywność egzonukleazy 3 q 5 (sprawdzanie poprawności) Najwyższy poziom bezbłędności wśród termostabilnych polimeraz DNA M7741 100 U zł 468, M7745 500 U zł 1.761, Produkty reakcji PCR z tępymi końcami

PCR 25 dntp Zestaw nukleotydów: datp, dctp, dgtp, dttp Osobne pojemniki Mieszaniny poszczególnych nukleotydów dostępne na żądanie Wysoki poziom czystości (<98%) Dostępne również inne zestawy i pojedyncze nukleotydy (patrz Katalog całościowy) U10 4 10 µm (100 mm) zł 2, U1420 4 25 µm (100 mm) zł 625, U1240 4 40 µm (100 mm) zł 922, U1410 4 200 µm (100 mm) zł 4.565, dntp Mix Gotowa do użycia mieszanina nukleotydów: datp, dctp, dgtp i dttp Wysoki poziom czystości (<98%) U1511 200 µl (10 mm) zł 106, U1515 1000 µl (10 mm) zł 438, PCR Nucleotide Mix Gotowa do użycia mieszanina nukleotydów: datp, dctp, dgtp i dttp Wysoki poziom czystości (<98%) C1141 200 µl (10 mm) zł 247, C1145 1000 µl (10 mm) zł 941, Swoiste QC Przetestowane do stosowania w reakcji PCR Woda wolna od nukleaz Nuclease-Free Water Brak zawartości inhibitorów: woda nie zawiera chemicznych dodatków i nie była poddawana obróbce chemicznej P1193 50 ml (2 25 ml) zł 217, P1195 150 ml zł 574, Gwarantowany brak zawartości nukleaz dzięki ścisłej kontroli jakości Małe opakowania (2 25 ml) zapobiegające zanieczyszczeniom podczas pracy NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Custom PCR Protokoll Tworzenie i zapisywanie protokołów PCR oraz dodawanie do nich komentarzy i wysyłanie ich poprzez e-mail. (To narzędzie należy także do aplikacji Promega App, która jest dostępna bezpłatnie poprzez App Store pod systemy Apple i Android). www.promega.com/custom-pcr-protocols

26 RT-PCR RT-PCR Zestaw czy enzym? Zawsze odpowiedni produkt do syntezy cdna lub RT-PCR Od ponad 25 lat Promega wytwarza produkty do syntezy cdna i RT-PCR. Zachęcamy do skorzystania z wieloletniego doświadczenia firmy i przejrzenia naszej uznanej oferty w celu wybrania potrzebnych produktów. Odwrotne transkryptazy i zestawy do RT-PCR umożliwiają łatwą i niezawodną syntezę pełnej długości cdna. Produkty Genomic Essentials są niezawodne w wydajnej transkrypcji mrna, zarówno przy niskim, jak i wysokim poziomie ekspresji również jeśli tworzy on złożone struktury drugorzędowe.

RT-PCR 27 Odwrotne transkryptazy AMV Reverse Transcriptase M5101 300 U zł 386, M5108 1000 U zł 1.032, M-MLV Reverse Transcriptase M1701 10 000 U zł 268, M1705 50 000 U zł 1.019, M-MLV Reverse Transcriptase RNase H-, Point Mutant M3681 2500 U zł 199, M3682 10 000 U zł 720, M3683 50 000 U zł 2.666, GoScript Reverse Transcriptase A5003 100 reakcji zł 1.183, A5004 500 reakcji zł 4.682, WŁAŚCIWOŚCI AMV Reverse Transcriptase M-MLV Reverse Transcriptase M-MLV Reverse Transcriptase RNase H-, Point Mutant GoScript Reverse Transcriptase TEMPERATURA REAKCJI 42 58 C 37 58 C 37 55 C 42 55 C AKTYWNOŚĆ RNAZY H występuje niewielka nie występuje niewielka DŁUGOŚĆ cdna do 4 kb do 5 kb do 7,5 kb do 9 kb UŻYTECZNOŚĆ W PRZY PADKU WYSTĘPOWANIA DRUGO RZĘDOWYCH STRUKTUR RNA LICZBA BŁĘDÓW ok. 5 błędów na 10 000 zasad ok. 1 błędu na 10 000 zasad ok. 1 błędu na 10 000 zasad nd. CZUŁOŚĆ GŁÓWNE ZASTOSOWA NIA RT Wydłużanie starterów / RACE RT Wydłużanie starterów / RACE RT Wydłużanie starterów / RACE RT-PCR Wbudowywanie wyznakowanych nukleotydów Wydłużanie starterów / RACE ZALETY Użyteczność przy matrycach z drugorzędowymi strukturami Do cdna o długości do 4 kb Duża procesywność Niska aktywność RNazy H Do cdna o długości do 5 kb Brak aktywności RNazy H Do cdna o długości Niski koszt w przeliczeniu na powyżej 7,5 kb reakcję Użyteczność do 55 C Duża stabilność Duża selektywność Niska aktywność RNazy H Do cdna o długości do 9 kb Optymalne warunki do jednoprobówkowej reakcji RT-PCR w systemie GoScript Reverse Transcription INHIBITORY Aktynomycyna D (50 µg / ml) rrna i trna Glicerol <10% Kompleksy rybonukleozydów z wanadylem (2 mm) Imid kwasu N-etylomaleinowego Nieorganiczne fosforany i pirofosforany Aktynomycyna D (50 µg / ml) Spermidyna Nieorganiczne fosforany i pirofosforany Aktynomycyna D (50 µg / ml) Spermidyna Nieorganiczne fosforany i pirofosforany Aktynomycyna D (50 µg / ml) Spermidyna JEDNOSTKI NA REAKCJĘ 15 30 U / 25 µl 200 U / 25 µl 200 U / 25 µl 25 µl / reakcję

28 RT-PCR Porównanie GoScript Reverse Transcriptase z innymi produktami A B C D Czułość: transkrybuje trudne matryce Wydajność: transkrybuje długie odcinki mrna w całości Wygoda: bezpośrednie wykorzystanie mieszaniny reakcyjnej w qpcr Niezawodność: transkrybuje matryce bogate w GC Czułość odwrotnej transkryptazy GoScript jest większa lub równa czułości innych przetestowanych produktów. GoScript wykazuje na każdym poziomie transkrypcji taką samą lub większą czułość. (Seria rozcieńczeń mysiego RNA w reakcji RT z losowymi starterami) Dane pomiarowe: Szkoła Wyższa w Mannheim, Instytut Biologii Molekularnej i Komórkowej, M. Ammerschläger, P. Kioschis Systemy do odwrotnej transkrypcji Reverse Transcription System NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATALOGOWA A3500 100 reakcji zł 2.059, GoScript Reverse Transcription System NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATALOGOWA A5000 50 reakcji zł 1.153, A5001 100 reakcji zł 2.228, Access RT-PCR System NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATALOGOWA A1260 20 reakcji zł 546, A1250 100 reakcji zł 1.912, A1280 500 reakcji zł 8.119, AccessQuick RT-PCR System NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATALOGOWA A1701 20 reakcji zł 520, A1702 100 reakcji zł 2.059, A1703 500 reakcji zł 8.705,

RT-PCR 29 RÓŻNE TYPY REAKCJI PCR POPRZEDZONE ODWROTNĄ TRANSKRYPCJĄ ODWROTNA TRANSKRYPCJA I PCR PROWADZONE JEDNOCZEŚNIE WŁAŚCIWOŚCI Reverse Transcription System GoScript Reverse Transcription System Access RT-PCR System AccessQuick RT-PCR System ZAKRES ZASTOSOWAŃ / WŁAŚCIWOŚCI MATERIA ŁU WYJŚCIOWEGO Liczne / złożone struktury drugorzędowe Więcej niż jedna reakcja PCR po RT Mała liczba kopii mrna Syntetyczny RNA Długie konstrukty Wbudowywanie zmodyfikowanych nukleotydów (wyznakowanych Cy3 / Cy5 do zastosowania w mikromacierzach) RT i PCR w pojedynczej reakcji RT-PCR swoiste genowo Mała liczba kopii mrna Złożone struktury drugorzędowe RT i PCR w pojedynczej reakcji RT-PCR swoiste genowo Mała liczba kopii mrna Złożone struktury drugorzędowe Niewiele etapów wymagających pipetowania SZCZEGÓLNE WŁAŚCI WOŚCI Do trudnych matryc ze strukturami drugorzędowymi Możliwość prowadzenia różnych reakcji PCR Najwyższa czułość Dodatek Taq umożliwia stosowanie w reakcjach jednoetapowych Wykonanie RT i PCR w pojedynczym etapie bez konieczności pipetowania pomiędzy tymi reakcjami Duża czułość Wykonanie RT i PCR w pojedynczym etapie bez konieczności pipetowania pomiędzy tymi reakcjami Składniki przygotowane w formie mieszaniny Master Mix Duża czułość ZALECANY STARTER RT Oligo(dT)15 lub losowe heksamery Oligo(dT)15, losowe heksamery lub startery swoiste genowo Startery swoiste genowo Startery swoiste genowo DOSTARCZONE STARTERY Oligo(dT)15 i losowe heksamery Oligo(dT)15, losowe heksamery i starter kontrolny Starter kontrolny RT-PCR OPTYMALNA TEMPERA TURA REAKCJI AKTYWNOŚĆ RNAZY H DŁUGOŚĆ UZYSKIWANEGO cdna 42 58 C 37 42 C 42 58 C 42 58 C Do 5 kb Do 9 kb Do 5 kb Do 5 kb CZUŁOŚĆ 1 µg całkowitego RNA lub 1 pg 1 µg poli(a)+ RNA 1 pg-1 µg całkowitego RNA, 10 kopii 1 pg 1 µg całkowitego RNA 1 10 ng poli(a)+ RNA 1 pg 1 µg całkowitego RNA 1 10 ng poli(a)+ RNA MATERIAŁ WYJŚCIOWY Całkowity RNA Poli(A)+ RNA Całkowity RNA Poli(A)+ RNA Syntetyczny RNA Całkowity RNA Poli(A)+ RNA Całkowity RNA Poli(A)+ RNA Oligonukleotydy i startery Oligo(dT)15 Primer Starter do syntezy pierwszej nici cdna z użyciem odwrotnej transkryptazy C1101 20 μg zł 251, Hybrydyzacja z ogonem poli(a) cząsteczki mrna Random Primers Starter do syntezy pierwszej nici cdna i klonowania C1181 20 μg zł 156, Woda wolna od nukleaz Nuclease-Free Water Brak zawartości inhibitorów: woda nie zawiera chemicznych dodatków i nie była poddawana obróbce chemicznej P1193 50 ml (2 25 ml) zł 217, P1195 150 ml zł 574, Gwarantowany brak zawartości nukleaz dzięki ścisłej kontroli jakości Małe opakowania (2 25 ml) zapobiegające zanieczyszczeniom podczas pracy

30 INHIBITORY RYBONUKLEAZY INHIBITORY RYBONUKLEAZY RNasin oryginalny produkt firmy Promega Produkt RNasin był wzmiankowany w ponad 9000 publikacji w ciągu 25 lat, z czego wynika, że jest najczęściej stosowanym inhibitorem RNaz. RNasin chroni RNA przed rozkładem przez Rnazy A, B i C. Promega zapewnia bezpieczną pracę z RNA również w przypadku cennych materiałów wyjściowych. Zaleca się stosowanie RNasin każdorazowo podczas izolacji RNA, RT-PCR, transkrypcji in vitro oraz innych technik pracy z RNA.

INHIBITORY RYBONUKLEAZY 31 Czy myślą Państwo o ochronie RNA podczas pracy? Jest to konieczne! Dziewięć próbek wolnych od RNaz buforów i wody z laboratoriów akademickich przetestowano pod kątem zanieczyszczenia RNazami. Próbki były w użyciu przez 1 do 14 miesięcy. Z każdej próbki pobrano 35 µl, podzielono na dwie części i do obu dodano 5 µg RNA oraz 10 X bufor RNase ONE. Do jednej części każdej z próbek dodano 40 U RNasin i inkubowano wszystkie przez noc w 37 C. Ścieżka 1: marker, ścieżka 2: kontrola RNA, ścieżki 3 11: próbki z laboratoriów. Szczegółowy opis doświadczenia: www.promega.com/pubs/tpub_047 9,0 kb 5,0 kb 3,0 kb 1,5 kb 1,0 kb 0,5 kb 9,0 kb 5,0 kb 3,0 kb Bez dodatku RNasin 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Z dodatkiem RNasin 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1,5 kb 1,0 kb 0,5 kb Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor Inhibitor RNaz A, B i C oraz ludzkiej RNazy łożyskowej Nie stanowi inhibitora innych RNaz ani zmodyfikowanych enzymów, w tym odwrotnych transkryptaz N2511 2500 U zł 434, N2515 10 000 U zł 1.175, Zwiększa wydajność ekstrakcji RNA oraz poprawia skuteczność reakcji RT-PCR, syntezy cdna, technik mikromacierzowych oraz transkrypcji / translacji in vitro RNasin Plus RNase Inhibitor Wypróbowane właściwości produktu Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor N2611 2500 U zł 607, N2615 10 000 U zł 1.444, Większa stabilność w środowisku utleniającym i w wysokiej temperaturze, co zwiększa ogólną stabilność i wydłuża czas użytkowania produktu Szczególnie użyteczny w ochronie długo przechowywanych próbek RNA

32 PCR W CZASIE RZECZYWISTYM PCR W CZASIE RZECZYWISTYM Pełna gama produktów do prowadzenia reakcji qpcr i RT-qPCR, zarówno z zastosowaniem sond, jak i barwnika. PCR w czasie rzeczywistym przeprowadza się nie po to, aby udowodnić obecność jakiejś sekwencji, lecz aby odpowiedzieć na pytanie, ile cząsteczek o danej sekwencji znajduje się w próbce. Produkty z linii Genomic Essentials pomogą w uzyskaniu odpowiedzi na to pytanie i zapewnią najwyższą jakość kwantyfikacji. Do PCR w czasie rzeczywistym z użyciem barwników polecamy jasny i czuły, a zarazem niezwykle trwały barwnik BRYT Green. Zapewnia on też uzyskanie niezawodnych i czułych danych z użyciem sondy. Na kolejnych stronach można się dowiedzieć, które z tych technologii najlepiej nadają się do zastosowania w Państwa pracy.

PCR W CZASIE RZECZYWISTYM Zastosowania poszczególnych technologii PCR w czasie rzeczywistym PRODUKT PCR W CZASIE RZECZYWISTYM Z UŻYCIEM BARWNIKA GoTaq qpcr Master Mix GoTaq RT-qPCR Systeme PCR W CZASIE RZECZYWISTYM Z UŻYCIEM SOND GoTaq Probe qpcr Master Mix GoTaq Probe RT-qPCR Systeme TECHNOLOGIA Barwniki wiążące dsdna, np. BRYT Green Dye, umożliwiają wykrywanie przyrostu produktów PCR w czasie trwania reakcji. Sondy swoiste dla danej sekwencji, wyznakowane barwnikiem fluorescencyjnym i barwnikiem wygaszającym, ulegają podczas reakcji PCR hydrolizie, dzięki czemu możliwa jest detekcja produktów PCR. SWOISTOŚĆ Średnia Wysoka CZUŁOŚĆ (NAJMNIEJSZA WYKRYWALNA LICZBA KOPII) Zmienna 1 10 kopii ODTWARZALNOŚĆ Średnia Wysoka MULTIPLEKSOWANIE Nie Tak (wyznakowanie różnymi barwnikami fluorescencyjnymi) ANALIZA KRZYWEJ TOPNIENIA (ODZWIERCIEDLA SWOISTOŚĆ AMPLIFIKACJI) Tak Nie (swoistość zapewniana przez użycie sondy) ZASTOSOWANIA Ekspresja genów Kwantyfikacja DNA ChIP Ekspresja genów Kwantyfikacja DNA ChIP Genotypowanie SNP Zmienność liczby kopii Analiza szlaków sygnałowych Wykrywanie mikro- i małocząsteczkowego RNA Wykrywanie mutacji Analiza białek Multipleksowanie PCR w czasie rzeczywistym z użyciem barwnika Barwnik BRYT Green zapewnia silną fluorescencję Nowy barwnik, który wykazuje ściślejszą zależność pomiędzy wzrostem stężenia dsdna i fluorescencją, a jednocześnie w mniejszym stopniu zakłóca reakcję PCR niż SYBR * Green. Prowadzi to do niższych wartości Cq i większego zakresu liniowości, niż przy stosowaniu innych systemów qpcr bazujących na barwnikach. Do wykrywania stosowane są te same zestawy filtrów, jak w przypadku barwników SYBR * Green i ROX ** * SYBR jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Molecular Probes ** ROX jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Applera Corporation Delta Rn Delta Rn vs. Cycle 0.01ng 0.1ng 1ng 10ng 100ng Cycle Number Nowy barwnik: większe przyrosty fluorescencji przy wiązaniu dsdna Czułość: niska wartość Cq, również przy niewielkiej ekspresji sekwencji docelowej Wiarygodność: optymalne połączenie buforu i polimerazy Hot Start zapewnia odtwarzalne wyniki Wygoda: pełna kompatybilność z protokołem SYBR * Green I 8277TA GoTaq Master Mix Company A 100ng 10ng 1ng 0.1ng 0.01ng

34 PCR W CZASIE RZECZYWISTYM GoTaq qpcr Master Mix 2X GoTaq qpcr Master Mix zawierający produkty GoTaq G2 Hot Start Polymerase, BRYT Green, MgCl2, dntp i bufor Barwnik referencyjny CXR w mieszaninie lub osobno A6001 200 reakcja po 50 µl (1 5 ml) A6002 1000 reakcja po 50 µl (25 1 ml) zł 1.127, zł 4.769, GoTaq 1-Step RT-qPCR System System do analizy ilościowej RNA A6020 200 reakcji zł 1.821, GoTaq 2-Step RT-qPCR System Dwuetapowy system RT-qPCR do kwantyfikacji RNA Synteza cdna w systemie GoScript Reverse Transcription i kwantyfikacja z użyciem GoTaq qpcr Master Mix A6010 50 reakcji RT + 200 reakcji qpcr zł 1.561, PCR w czasie rzeczywistym z użyciem sond System GoTaq Probe qpcr Master Mix został zoptymalizowany do ilościowej reakcji PCR z użyciem sond (np. TaqMan Probes)*. Produkt jest dwukrotnie zatężoną, gotową mieszaniną, która zawiera wszystkie potrzebne składniki w tym sondę, startery i matrycę. Reakcję qpcr z użyciem sondy można szybko i łatwo rozpocząć. Produkt GoTaq Probe qpcr Master Mix jest odpowiedni do stosowania ze wszystkimi znanymi termocyklerami zarówno w protokołach standardowych, jak i przyspieszonych. * TaqMan jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Life Technologies Porównanie: protokół standardowy i przyspieszony 7.000 Delta Rn vs. Cycle 7.000 Delta Rn vs. Cycle 6.000 Protokół Standard Cycling standardowy 6.000 Protokół Fast Cyclingprzyspieszony 5.000 5.000 4.000 4.000 Delta Rn 3.000 Delta Rn 3.000 2.000 2.000 1.000 1.000 0.000 0.000-1.000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1516 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 2829 30 3132 34 35 36 37 38 39 40 Cycle Number -1.000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 34 35 36 37 38 39 40 Cycle Number Stabilność: optymalne połączenie buforu i polimerazy GoTaq G2 Hot Start zapewnia odtwarzalne wyniki Wydajność: wysokowydajna synteza pełnego cdna również w obecności inhibitorów Uniwersalność: odpowiedni do stosowania zarówno w standardowym, jak i przyspieszonym protokole

PCR W CZASIE RZECZYWISTYM 35 GoTaq Probe qpcr Master Mix 2X GoTaq Probe qpcr Master Mix zawierający produkty GoTaq G2 Hot Start Polymerase, MgCl2, dntp i bufor Barwnik referencyjny CXR osobno A6101 200 reakcja po 20 µl (1 2 ml) A6102 1000 reakcja po 20 µl (10 1 ml) zł 477, zł 1.951, GoTaq Probe 1-Step RT-qPCR System System do analizy ilościowej RNA z odwrotną transkrypcją i ilościową reakcją PCR w jednym etapie (RT-qPCR) A6120 200 reakcji zł 1.214, Formuła zawiera dutp. Ograniczenie zanieczyszczeń DNA możliwe dzięki zastosowaniu uracylo-dna-glikozylazy (UNG) GoTaq Probe 2-Step RT-qPCR System Dwuetapowy system RT-qPCR do kwantyfikacji RNA Synteza cdna w systemie GoScript Reverse Transcription i kwantyfikacja z użyciem GoTaq qpcr Master Mix A6110 50 reakcji RT + 200 reakcji qpcr zł 954, Woda wolna od nukleaz Nuclease-Free Water Brak zawartości inhibitorów: woda nie zawiera chemicznych dodatków i nie była poddawana obróbce chemicznej P1193 50 ml (2 25 ml) zł 217, P1195 150 ml zł 574, Gwarantowany brak zawartości nukleaz dzięki ścisłej kontroli jakości Małe opakowania (2 25 ml) zapobiegające zanieczyszczeniom podczas pracy NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Amplification Product Selector Który produkt firmy Promega do przeprowadzenia reakcji PCR wybrać? Udzielamy pomocy online w podejmowaniu decyzji: www.promega.com/amplification-product-selector

36 SYSTEMY KLONOWANIA SYSTEMY KLONOWANIA Oferujemy szeroką gamę systemów klonowania, w tym systemy pgem -T Vector do klonowania produktów reakcji PCR, system ptarget Mammalian Expression Vector do ekspresji genów w komórkach ssaczych czy system Flexi Vector Cloning do klonowania otwartych ramek odczytu (ORF) w celu uzyskania ekspresji białek. Dzięki systemowi Universal RiboClone cdna Synthesis można szybko i łatwo tworzyć biblioteki cdna. Do klonowania ludzkich sekwencji docelowych w celu uzyskania ekspresji krótkich cząsteczek RNA o strukturze spinki do włosów (shrna) polecamy system GeneClip U1 Hairpin Cloning.

SYSTEMY KLONOWANIA 37 Klonowanie produktów PCR Wypróbowane systemy T-Vektor umożliwiają szybkie i wydajne klonowanie produktów reakcji PCR. Podczas reakcji PCR na końcach amplifikatów powstają zwykle reszty A. Klonowanie w wektorze mającym w postaci liniowej komplementarne do nich reszty T na końcach jest rozwiązaniem z wyboru w trudnych przypadkach. Stąd też nazwano tego typu systemy wektorami T. Firma Promega oferuje różne wektory T do klonowania prostego z rozbudowanymi polilinkerami, z kompetentnymi komórkami w zestawie lub bez nich i w wersji specjalnie dostosowanej do ekspresji w komórkach ssaczych. pgem -T Vector System I System do prostego klonowania produktów reakcji PCR (z ogonem A na końcu 3 ) Wektor pgem -5Zf(+) w postaci liniowej Wektor z resztami T na końcach 3' po obu stronach Bufor do szybkiej ligacji skraca czas klonowania do 1 h w temperaturze pokojowej Bez komórek kompetentnych A3600 20 reakcji zł 689, XmnI 1994 ScaI 1875 Amp r pgem -T Vector (3000bp) ori NaeI 2692 f1 ori T7 1 start ApaI AatII SphI BstZI 14 20 26 31 lacz NcoI 37 T T SacII SpeI NotI BstZI PstI SalI NdeI SacI BstXI NsiI 46 55 62 62 73 75 82 94 103 112 126 SP6 0356VA04_3A pgem -T Vector System II Zestaw pgem -T Vector System I z komórkami kompetentnymi JM109 A3610 20 reakcji zł 1.127, XmnI 1994 ScaI 1875 Amp r pgem -T Vector (3000bp) ori NaeI 2692 f1 ori T7 1 start ApaI AatII SphI BstZI 14 20 26 31 lacz NcoI 37 T T SacII SpeI NotI BstZI PstI SalI NdeI SacI BstXI NsiI 46 55 62 62 73 75 82 94 103 112 126 SP6 0356VA04_3A

38 SYSTEMY KLONOWANIA pgem -T Easy Vector System I System klonowania produktów reakcji PCR Ma właściwości systemu pgem -T Vector System I. Dodatkowe miejsca cięcia przez enzymy restrykcyjne wokół miejsca insercji Bufor do szybkiej ligacji skraca czas klonowania do 1 h w temperaturze pokojowej Bez komórek kompetentnych A1360 20 reakcji zł 858, XmnI 2009 ScaI 1890 Amp r pgem -T Easy Vector (3015bp) ori f1 ori lacz NaeI 2707 T T T7 ApaI AatII SphI BstZI NcoI BstZI NotI SacII EcoRI SpeI EcoRI NotI BstZI PstI SalI NdeI SacI BstXI NsiI SP6 1 start 14 20 26 31 37 43 43 49 52 64 70 77 77 88 90 97 109 118 127 141 1473VA05_6A pgem -T Easy Vector System II Zestaw pgem -T Easy Vector System I z komórkami kompetentnymi JM109 A1380 20 reakcji zł 1.305, XmnI 2009 ScaI 1890 Amp r pgem -T Easy Vector (3015bp) ori f1 ori lacz NaeI 2707 T T T7 ApaI AatII SphI BstZI NcoI BstZI NotI SacII EcoRI SpeI EcoRI NotI BstZI PstI SalI NdeI SacI BstXI NsiI SP6 1 start 14 20 26 31 37 43 43 49 52 64 70 77 77 88 90 97 109 118 127 141 1473VA05_6A ptarget Mammalian Expression Vector System System łatwego klonowania produktów reakcji PCR Bezpośrednia ekspresja sklonowanych sekwencji w komórkach ssaczych A1410 20 reakcji zł 1.608, Ampr ori Synthetic poly(a) Neo BglII 5665 CMV Enhancer/Promoter ptarget Vector (5670bp) Intron fl ori SV40 Enhancer/ EarlyPromoter SgfI 664 SV40 Late poly (A) I-PpoI 851 T T lacz T7 EcoRI BamHI NheI XhoI MluI SmaI KpnI SalI AccI NotI EcoRI lacz T overhangs 1250 1256 1264 1270 1276 1293 1301 1303 1304 1311 1318 1505VA07_6A

SYSTEMY KLONOWANIA 39 Flexi Cloning System System Flexi Vector stanowi metodę celowanego klonowania sekwencji kodujących białka, bazującą na dwóch rzadko tnących enzymach restrykcyjnych: SgfI i PmeI. Umożliwia szybki i wydajny transfer sekwencji pomiędzy wektorami bez konieczności ponownego sekwencjonowania. Łatwa reakcja transferu jest szczególnie istotna przy tworzeniu konstruktów do ekspresji N- lub C-końcowych białek fuzyjnych. SgfI protein-coding region PCR PmeI System klonowania Flexi gwarantuje maksymalną elastyczność, jako że raz sklonowana sekwencja docelowa może zostać łatwo przeniesiona z użyciem innego wektora Flexi bez konieczności powtórnego sekwencjonowania. Elastyczne tworzenie N- lub C-końcowych struktur fuzyjnych stanowi ważną zaletę tego systemu klonowania w porównaniu z innymi produktami. Dostępna jest szeroka gama wektorów (patrz rozdział Wektory ekspresyjne, 3 strona 59) SgfI PmeI DNA Purification Digestion with Flexi Enzyme Blend SgfI lethal gene PmeI SgfI DNA Purification PmeI Acceptor Flexi Vector lethal gene Digestion with Flexi Enzyme Blend Ligation Transformation and Selection protein-coding region SgfI PmeI 4599MA Klonowanie sekwencji kodujących białka w wektorze Flexi SgfI proteincoding region PmeI SgfI Kan r lethal gene PmeI SgfI proteincoding region PmeI Transfer regionu kodującego białko z jednego wektora Flexi do kolejnego: system Flexi Vector stanowi elastyczną metodę klonowania celowanego, umożliwiającą tworzenie plazmidów do ekspresji białek. Wektory Flexi zawierają letalny gen barnazy i marker oporności na antybiotyk, umożliwiający selekcję dodatnich kolonii. Transfer pomiędzy wektorami Flexi do ekspresji natywnych lub wyznakowanych na N-końcu białek fuzyjnych jest możliwy w dwóch kierunkach. Amp r SgfI lethal gene PmeI Kan r Amp r 4597MA

40 SYSTEMY KLONOWANIA SgfI Amp r proteincoding region PmeI SgfI Kan r lethal gene EcolCRI SgfI Kan r proteincoding region 4824MB Transfer sekwencji kodującej białko z natywnego lub N-końcowego wektora Flexi do C-końcowego wektora Flexi : C-końcowe wektory Flexi zawierają miejsca cięcia przez enzymy SgfI i EcoICRI i służą do uzyskiwania białek wyznakowanych na C-końcu. Ligacja tępych końców uzyskanych po trawieniu enzymami PmeI i EcoCRI prowadzi do dezaktywacji kodonu stop, który znajduje się w miejscu cięcia przez PmeI. Tym samym uzyskuje się otwartą ramkę odczytu pomiędzy sekwencją kodującą białko i znacznikiem C-końcowym. Miejsca cięcia przez PmeI i EcoCRI zostają zniesione poprzez klonowanie tępych końców. Transfer sekwencji kodującej białko z C-końcowych wektorów Flexi do N-końcowych lub natywnych wektorów Flexi nie jest więc możliwy Flexi System, Entry /Transfer C8640 5 reakcji wprowadzenia i 20 reakcji transferu zł 1.214, Flexi System, Transfer C8820 100 reakcji transferu zł 3.750, Carboxy Flexi System, Transfer C9320 50 reakcji transferu zł 1.795, Artykuł branżowy na temat systemu Flexi Vector www.promega.com/flexi-vector-system Biblioteka cdna Universal RiboClone cdna Synthesis System Tworzenie biblioteki cdna z RNA uzyskanego w ekstrakcji C4360 1 system zł 3.069, W zestawie znajdują się wszystkie odczynniki potrzebne do syntezy dwuniciowego cdna z mrna a następnie wprowadzenia go do wektora z miejscem cięcia EcoRI

SYSTEMY KLONOWANIA 41 Interferencja RNA System GeneClip Hairpin Cloning jest opartym na DNA systemie RNAi (ddrnai), opracowanym w celu ekspresji krótkich cząsteczek RNA o strukturze spinki do włosów w komórkach ssaczych. System umożliwia szybkie i wydajne klonowanie i ekspresję shrna przy poszukiwaniu optymalnych sekwencji docelowych podczas pracy z RNA. Wektory pgeneclip basic i pgeneclip hmgpf zalecane są do transfekcji przejściowej, a wektory pgeneclip Puromycin/Hygromycin/Neomycin z genami oporności na antybiotyki są zalecane do tworzenia stabilnych komórek. GeneClip U1 Hairpin Cloning System-Basic C8750 1 system zł 1.222, GeneClip U1 Hairpin Cloning System-Puromycin C8760 1 system zł 1.222, GeneClip U1 Hairpin Cloning System-Hygromycin C8770 1 system zł 1.222, GeneClip U1 Hairpin Cloning System-Neomycin C8780 1 system zł 1.222, GeneClip U1 Hairpin Cloning System-hMGFP C8790 1 system zł 1.782,

42 MARKERY MARKERY Czy może zdarzyło się Państwu zostawić marker na noc na stole laboratoryjnym? Nie ma problemu. W naszej ofercie znajdują się, oprócz markerów konwencjonalnych, zapewniające wygodę stosowania markery DNA z serii BenchTop, które można przechowywać w temperaturze pokojowej. U nas każdy znajdzie coś dla siebie.

MARKERY 43 Markery DNA z serii BenchTop Markery DNA z serii BenchTop są dostarczane w stabilizującym roztworze 1X Blue/Orange Loading Dye. Mogą dzięki temu być przechowywane w temperaturze pokojowej (22 25 C) i nie ma potrzeby dodawania ich do buforu obciążającego przed naniesieniem na żel agarozowy. Fragmenty DNA można wybarwiać bromkiem etydyny lub barwnikiem Diamond Nucleic Acid Dye. bp bp bp bp 1,353 1,078 872 603 310 281/271 234 194 118 72 2,645 1,605 1,198 676 517 460 396 350 222 179 126 75/65 [51,36] bp 1,000 750 500 300 150 50 10,000 8,000 6,000 5,000 4,000 3,000 2,500 2,000 1,500 1,000 750 500 250, 253 1,500 1,000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 8651TA 2% agarose 2% agarose 2% agarose 0.7% agarose 2% agarose BenchTop φx174 DNA/HaeIII Markers Cat.# G7511 Load 5µl/lane. BenchTop pgem DNA Markers Cat.# G7521 Load 5µl/lane. BenchTop PCR Markers Cat.# G7531 Load 6µl/lane. BenchTop 1kb DNA Ladder Cat.# G7541 Load 6µl/lane. BenchTop 100bp DNA Ladder Cat.# G8291 Load 6µl/lane. BenchTop X174 DNA/HaeIII Markers G7511 250 µl zł 464, BenchTop pgem DNA Markers G7521 250 µl zł 438, BenchTop PCR Markers G7531 300 µl zł 460, BenchTop 1kb DNA Ladder G7541 600 µl zł 434, BenchTop 100bp DNA Ladder G8291 300 µl zł 208,

44 MARKERY Równoodstępowe drabinki DNA Równoodstępowe drabinki DNA są markerami DNA, w przypadku których odległości pomiędzy poszczególnymi prążkami są takie same. Każda drabinka jest dostarczana z buforem obciążającym 6X Blue/Orange Dye. Fragmenty DNA można wybarwiać bromkiem etydyny lub barwnikiem Diamond Nucleic Acid Dye. bp 4,000 3,900 3,800 3,700 3,600 3,500 3,400 3,300 3,200 3,100 3,000 2,900 2,800 2,700 2,600 2,500 2,400 2,300 2,200 2,100 2,000 1,900 1,800 1,700 1,600 1,500 1,400 1,300 1,200 1,100 1,000 900 800 700 600 500 400 [300 200 100] 1% agarose bp [6,400, 6,600] 6,200 5,800 5,400 5,000 4,600 4,200 3,800 3,400 3,000 2,800 2,600 2,400 2,200 2,000 1,800 1,600 1,400 1,200 1,000 800 600 400 200 1% agarose bp 10,000 9,000 8,000 7,000 6,000 5,000 4,000 3,000 2,000 1,000 0.7% agarose 8653TA 10bp DNA Step Ladder G4471 32,5 µg zł 243, 25bp DNA Step Ladder G4511 100 µg zł 243, 50bp DNA Step Ladder G4521 90 µg zł 243, 100bp DNA Step Ladder G6951 100 µg zł 507, 200bp DNA Step Ladder G6961 100 µg zł 455, 1kb DNA Step Ladder G6941 90 µg zł 303,

MARKERY 45 Drabinki DNA Drabinki DNA składają się z fragmentów o długości dobranej w taki sposób, że odległości pomiędzy prążkami na żelu są w przybliżeniu równe. Są dostarczane z buforem obciążającym 6X Blue/Orange Dye. Fragmenty DNA można wybarwiać bromkiem etydyny lub barwnikiem Diamond Nucleic Acid Dye. bp bp bp 1,000 750 500 1,500 1,000 900 800 700 600 500 400 300 200 10,000 8,000 6,000 5,000 4,000 3,000 2,500 2,000 1,500 1,000 300 150 100 750 500 50 250, 253 0094TA05_3A 0973TC03_5A 1409TA03_6A 8654TA 2% agarose PCR Markers Cat.# G3161 Load 5µl/lane. 2% agarose 100bp DNA Ladder Cat.# G2101 Load 5µl/lane. 0.7% agarose 1kb DNA Ladder Cat.# G5711 Load 5µl/lane. PCR Markers G3161 250 μl zł 390, 100bp DNA Ladder G2101 250 μl zł 329, 1kb DNA Ladder G5711 500 μl zł 399,

46 MARKERY Konwencjonalne markery DNA Konwencjonalne markery DNA uzyskuje się poprzez pełne trawienie enzymami restrykcyjnymi DNA faga Lambda, DNA faga X174 (postać replikacyjna) lub DNA plazmidowego. Fragmenty DNA można wybarwiać bromkiem etydyny lub barwnikiem Diamond Nucleic Acid Dye. bp 1258TB09_5A bp 23,130 9,416 6,557 4,361 2,322 2,027 [564, 125] 0.7% agarose 1258TA09_5A bp 0.7% agarose 21,226 7,421 5,804 5,643 4,878 3,530 1258TC09_5A bp 21,226 5,148 4,973 4,268 3,530 1,584 1,375 947 831 0.7% agarose 2,027 1,904 [564, 125] 1238TA09_5A 1,353 1,078 872 603 310 281 271 234 194 118 [72] 8% acrylamide 0265TA05_2A bp 726 713 553 500 311 249 200 8% acrylamide 427 417 413 151 140 118 100 82 66 48 42 24 40 0266TA05_1A bp 2,645 1,605 1,198 676 517 460 396 350 222 179 126 75 65 51 [36] 8% acrylamide 8655TA Lambda DNA/HindIII Markers G1711 100 µg zł 191, Lambda DNA/EcoRI Markers G1721 100 µg zł 191, Lambda DNA/EcoRI + HindIII Markers G1731 100 µg zł 191, X174 DNA/HaeIII Markers G1761 50 µg zł 646, X174 DNA/HinfI Markers G1751 50 µg zł 646, pgem DNA Markers G1741 50 µg zł 490,

MARKERY 47 Markery RNA Markery RNA firmy Promega służą do oznaczania długości jednoniciowego RNA w zakresie 0,28-6,58 kb, w żelu agarozowym z glioksalem lub formaldehydem. Po elektroforezie można uwidocznić fragmenty, korzystając z wybarwienia bromkiem etydyny. bases 6,583 4,981 3,638 2,604 1,908 1,383 955 623 0775TB09_4A 281 1% formaldehyde-agarose RNA Markers G3191 50 μl zł 637,

48 ENZYMY RESTRYKCYJNE ENZYMY RESTRYKCYJNE W 1978 roku biochemik William A. Linton rozpoczął samodzielną produkcję enzymów restrykcyjnych, które sprzedawał wśród naukowców w ten sposób stworzył on podstawę sukcesu firmy Promega. Do dziś stanowią one nieodłączny element oferty Genomic Essentials, zapewniając szybkie trawienie DNA w korzystnej cenie. NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Restriction Enzyme Tool Wyszukiwanie enzymów restrykcyjnych według nazwy, rozpoznawanej sekwencji lub wystających końców. Szybkie i łatwe wyszukiwanie enzymów do podwójnego trawienia bez konieczności wprowadzania każdego z enzymów z osobna. (To narzędzie należy także do aplikacji Promega App, która jest dostępna bezpłatnie poprzez App Store pod systemy Apple i Android). www.promega.com/restriction-enzyme-tool

ENZYMY RESTRYKCYJNE 49 Szybkie trawienie DNA w korzystnej cenie Enzymy restrykcyjne firmy Promega to oszczędność czasu bez dodatkowych kosztów. Wydajne trawienie DNA bez specjalistycznych buforów Potrzebują Państwo enzymów restrykcyjnych, które szybko i wydajnie tną DNA? Firma Promega przetestowała najczęściej stosowane enzymy restrykcyjne pod kątem trawienia DNA w ciągu 15 minut lub krócej. Stosowano wyłącznie standardowe enzymy i bufory. www.promega.com/rapid-digest SZYBKIE TRAWIENIE ZALECANY BUFOR INAKTYWACJA TERMICZNA TEMPERTURA INKUBACJI ENZYM NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATA LO GOWA SEKWENCJA AccI R6411 100 U z ł 299, GT5(A/C)(T/G) AC CA (T/G)(A/C)1TG R6415 500 U z ł 1.066, AKTYWNOŚĆ W BUFORZE A B C D E H G 50 75% 25 50% 25 50% 10 25% < 10% < 10% 25 50% 37 C MULTI CORE AccIII R6581 200 U z ł 364, T5CCGG A A GGCC1T Acc65I R6921 1500 U z ł 277, G5GTAC C C CATG1G AgeI R7251 100 U z ł 264, A5CCGG T T GGCC1A AluI R6281 500 U z ł 230, AG5CT TC1GA ApaI R6361 5000 U z ł 247, G GGCC5C C1CCGG G R4364 25 000 U z ł 949, F < 10% 10 25% 25 50% 25 50% b.d. b.d. < 10% 65 C D 10 25% 50 75% 75 100% 100% 75 100% 100 125%** 100% 37 C K 25 50% 25 50% 25 50% 50 75% b.d. b.d. 100% 37 C B 75 100% 100% 75 100% 10 25% b.d. b.d. 10 25% 37 C A 100% 50 75% 50 75% < 10% 10 25% < 10% 75 100% 37 C AvaII R6131 100 U z ł 130, G5G(A/T)C C C C(T/A)G1G R6135 1000 U z ł 746, C 50 75% 50 75% 100% 25 50% b.d. b.d. 25 50% 37 C BalI R6691 50 U z ł 381, TGG5CCA ACC1GGT R6695 250 U z ł 1.483, G 10 25% < 10% < 10% < 10% b.d. b.d. < 10% 37 C BamHI R6021 2500 U z ł 52, G5GATC C C CTAG1G R6025 12 500 U z ł 212, E 75 100%* 75 100% 75 100% 50 75% 100% 50 75% 75 100% 37 C * Niezalecane z racji możliwej aktywności gwiezdnej ** Aktywność w jednostkach na podstawie testów z zalecanym buforem. W buforze H niektóre enzymy wykazują podwyższoną aktywność B.d.= brak danych

50 ENZYMY RESTRYKCYJNE SZYBKIE TRAWIENIE ZALECANY BUFOR INAKTYWACJA TERMICZNA TEMPERTURA INKUBACJI ENZYM NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATA LO GOWA SEKWENCJA BanI R6891 200 U z ł 234, G5G(T/C)(A/G)C C C C(A/G)(T/C)G1G BclI R6651 1000 U z ł 230, T5GATC A A CTAG1T BglI R6071 1000 U z ł 126, GCCN NNN5NGGC CGGN1NNN NCCG R6077 5000 U z ł 503, BglII R6081 500 U z ł 156, A5GATC T T CTAG1A R6085 2500 U z ł 577, R6087 10 000 U z ł 1.782, BsrSI R7241 500 U z ł 256, ACTG GN5 TGAC1CN BssHII R6831 100 U z ł 191, G5CGCG C C GCGC1G R6835 500 U z ł 728, BstEII R6641 2000 U z ł 234, G5GTNAC C C CANTG1G BstOI R6931 2000 U z ł 182, CC5(A/T) GG GG (T/A)1CC BstXI R6471 250 U z ł 186, CCAN NNNN5NTGG GGTN1NNNN NACC R6475 1000 U z ł 624, BstZI R6881 500 U z ł 234, C5GGCC G G CCGG1C CfoI R6241 3000 U z ł 303, G CG5C C1GC G ClaI R6551 500 U z ł 134, AT5CG AT TA GC1TA R6555 2500 U z ł 538, DdeI R6291 200 U z ł 117, C5TNA G G ANT1C R6295 1000 U z ł 438, DpnI R6231 200 U z ł 52, G me A5TC CT1 me AG DraI R6271 2000 U z ł 212, TTT5AAA AAA1TTT Eco47III R6731 50 U z ł 295, AGC5GCT TCG1CGA EcoICRI R6951 1000 U z ł 169, GAG5CTC CTC1GAG AKTYWNOŚĆ W BUFORZE A B C D E H G 25 50% 25 50% 10 25% < 10% b.d. b.d. 100% 50 C MULTI CORE C 10 25% 75 100% 100% 50 75% 50 75% 50 75% 10 25% 50 C D 10 25% 25 50% 75 100% 100% 25 50% 75 100% 100% 37 C D 25 50% 75 100% 75 100% 100% b.d. b.d. < 10% 37 C D 10 25% 25 50% 10 25% 100% b.d. b.d. 100% 65 C H 75 100% 50 75% 75 100% 50 75% b.d. 100% 75 100% 50 C D 25 50% 50 75% 50 75% 100% b.d. b.d. 100% 60 C C 10 25% 25 50% 100% 25 50% b.d. b.d. < 10% 60 C D < 10% 10 25% 25 50% 100% 100% 75 100% 10 25% / 50 C D < 10% < 10% 10 25% 100% 10 25% 75 100% 10 25% 50 C B 75 100% 100% 75 100% 25 50% b.d. b.d. 100% / 37 C C 75 100% 75 100% 100% 75 100% 100% 50 75% 100% 37 C D 25 50% 25 50% 50 75% 100% b.d. b.d. 25 50% / 37 C B 50 75% 100% 75 100% 50 75% b.d. b.d. 100% 37 C B 75 100% 100% 75 100% 50 75% b.d. b.d. 25 50% 37 C D < 10% 25 50% 50 75% 100% b.d. b.d. 25 50% 37 C B 10 25% 100% 75 100% < 10% 25 50% b.d. 100% 37 C

ENZYMY RESTRYKCYJNE 51 EcoRI R6011 5000 U z ł 104, G5AATT C C TTAA1G R6017 15 000 U z ł 251, H 25 50% 50 75% 50 75% 50 75% 75 100% 100% 100%* 37 C EcoRV R6351 2000 U z ł 126, GAT5ATC CTA1TAG R6355 10 000 U z ł 503, D 10 25% 25 50% 50 75% 100% 25 50% 50 75% 100% 37 C HaeII R6661 1000 U z ł 199, (A/G) GCGC5(T/C) (T/C)1CGCG (A/G) HaeIII R6171 2500 U z ł 230, GG5CC CC1GG R6175 10 000 U z ł 715, B 50 75% 100% 50 75% 10 25% b.d. b.d. 100% 37 C C 75 100% 75 100% 100% 50 75% b.d. b.d. 100% 37 C HhaI R6441 1000 U z ł 165, G CG5C C1GC G HincII R6031 200 U z ł 160, GT(T/C)5(A/G)AC CA(A/G)1(T/C)TG R6035 1000 U z ł 616, C 50 75% 75 100% 100% 50 75% b.d. b.d. 75 100% 37 C B 25 50% 100% 25 50% 50 75% 75 100% 50 75% 100% 37 C R6037 5000 U z ł 2.081, HindIII R6041 5000 U z ł 104, A5AGCT T T TCGA1A R6045 15 000 U z ł 256, E 25 50% 100% 75 100% 10 25% 100% 25 50% 50 75% 37 C HinfI R6201 1000 U z ł 160, G5ANT C C TNA1G R6205 5000 U z ł 585, B 50 75% 100% 75 100% 75 100% b.d. b.d. 50 75% 37 C HpaI R6301 100 U z ł 191, GTT5AAC CAA1TTG R6305 500 U z ł 720, J 25 50% 50 75% 25 50% 10 25% b.d. b.d. 100% 37 C HpaII R6311 1000 U z ł 277, C5CG G G GC1C R6315 5000 U z ł 1.053, A 100% 50 75% 50 75% 10 25% b.d. b.d. 100% 37 C Hsp92I R7151 500 U z ł 204, G(A/G)5CG (T/C)C C(T/C) GC1(A/G)G Hsp92II R7161 1000 U z ł 267, CATG5 1GTAC I-PpoI R7031 10 000 U z ł 447, CTCTC TTAA5GGTAGC GAGAG1AATT CCATCG KpnI R6341 2500 U z ł 212, G GTAC5C C1CATG G R6345 10 000 U z ł 590, F 10 25% 75 100% 50 75% 25 50% b.d. b.d. 10 25% 37 C K 10 25% 25 50% 25 50% < 10% b.d. b.d. < 10% 37 C I-PpoI 10 25% 25 50% 25 50% 25 50% b.d. b.d. b.d. 37 C J 100%* 25 50% 25 50% < 10% 25 50% < 10% 75 100% / 37 C MboI R6711 200 U z ł 225, 5GATC CTAG1 MboII R6723 100 U z ł 208, GAAGA(N)85 CTTCT(N)71 MluI R6381 1000 U z ł 212, A5CGCG T T GCGC1A C 10 25% 75 100% 100% 50 75% b.d. b.d. < 10% 37 C B 10 25% 100% 50 75% 75 100% b.d. b.d. 100% 37 C D 10 25% 25 50% 50 75% 100% 25 50% 100 125%** 10 25% / 37 C * Niezalecane z racji możliwej aktywności gwiezdnej ** Aktywność w jednostkach na podstawie testów z zalecanym buforem. W buforze H niektóre enzymy wykazują podwyższoną aktywność B.d.= brak danych

52 ENZYMY RESTRYKCYJNE SZYBKIE TRAWIENIE ZALECANY BUFOR INAKTYWACJA TERMICZNA TEMPERTURA INKUBACJI ENZYM NR KATALOG. ILOŚĆ CENA KATA LO GOWA SEKWENCJA MspI R6401 2000 U z ł 212, C5CG G G GC1C R6405 10 000 U z ł 780, MspA1I R7021 1000 U z ł 286, C(A/C)G5C(G/T)G G(T/G)C1G(C/A)C NarI R6861 200 U z ł 186, GG5CG CC CC GC1GG NciI R7061 1000 U z ł 256, CC5(C/G) GG GG (G/C)1CC NcoI R6513 200 U z ł 251, C5CATG G G GTAC1C R6515 1000 U z ł 902, NdeI R6801 500 U z ł 342, CA5TA TG GT AT1AC NheI R6501 250 U z ł 212, G5CTAG C C GATC1G R6505 1250 U z ł 811, NotI R6431 200 U z ł 121, GC5GGCC GC CG CCGG1CG R6435 1000 U z ł 486, NruI R7091 200 U z ł 212, TCG5CGA AGC1GCT NsiI R6531 250 U z ł 217, A TGCA5T T1ACGT A PstI R6111 3000 U z ł 82, C TGCA5G G1ACGT C R6115 15 000 U z ł 4, PvuI R6321 100 U z ł 61, CG AT5CG GC1TA GC R6325 500 U z ł 234, PvuII R61 1000 U z ł 160, CAG5CTG GTC1GAC R65 5000 U z ł 542, RsaI R6371 1000 U z ł 195, GT5AC CA1TG SacI R6061 1000 U z ł 126, G AGCT5C C1TCGA G R6065 5000 U z ł 503, SacII R6221 500 U z ł 191, CC GC5GG GG1CG CC SalI R6051 2000 U z ł 4, G5TCGA C C AGCT1G R6055 10 000 U z ł 1.127, AKTYWNOŚĆ W BUFORZE A B C D E H B 75 100% 100% 75 100% 25 50% b.d. b.d. 25 50% 37 C MULTI CORE C 25 50% 100%* 100% 10 25% b.d. b.d. 100% 37 C G 75 100% 50 75% 75 100% 25 50% b.d. b.d. 50 75% 37 C B 100%* 100% 25 50% 25 50% b.d. b.d. 50 75% 37 C D 50 75% 75 100% 75 100% 100% 100% 100 125%** 75 100% 37 C D < 10% < 10% 25 50% 100% b.d. b.d. 25 50% 37 C B 75 100% 100% 75 100% 10 25% 75 100% 10 25% 100% 37 C D < 10% 10 25% 25 50% 100% 25 50% 100 125%** 25 50% 37 C K < 10% < 10% < 10% 50 75% b.d. b.d. 10 25% 37 C D 10 25% 50 75% 50 75% 100% 25 50% < 125 %** 10 25% / 37 C H 10 25% 50 75% 50 75% 50 75% 25 50% 100% 25 50% 37 C D 10 25% 25 50% 50 75% 100% b.d. b.d. < 10% 37 C B 25 50% 100% 50 75% 25 50% b.d. b.d. 50 75% 37 C C 75 100% 75 100% 100% < 10% b.d. b.d. < 10% 37 C J 75 100% 25 50% 25 50% < 10% 100% 25 50% 100% 37 C C 100% 50 75% 100% 50 75% 25 50% < 125 %** < 10% 37 C D < 10% 10 25% 25 50% 100% 25 50% 25 50% < 10% 37 C

ENZYMY RESTRYKCYJNE 53 Sau3AI R6191 100 U z ł 152, 5GATC CTAG1 R6195 500 U z ł 590, B 25 50% 100% 75 100% < 10% b.d. b.d. 100% 37 C ScaI R6211 1000 U z ł 199, AGT5ACT TCA1TGA SfiI R6391 250 U z ł 195, GGCCN NNN5NGGCC CCGGN1NNN NCCGG K < 10% 100%* 50 75% 75 100% b.d. b.d. 10 25% 37 C B 75 100% 100% 75 100% 25 50% 75 100% 50 75% 75 100% 50 C SgfI R7103 250 U z ł 264, GCG AT5CGC CGC1TA GCG SmaI R6121 1000 U z ł 121, CCC5GGG GGG1CCC R6125 5000 U z ł 486, C 25 50% 25 50% 100% < 10% b.d. b.d. < 10% / 37 C J < 10% < 10% < 10% < 10% < 10% < 10% 100% 25 C SnaBI R6791 100 U z ł 204, TAC5GTA ATG1CAT R6795 500 U z ł 798, B 50 75% 100% 50 75% < 10% b.d. b.d. 100% 37 C SpeI R6591 200 U z ł 251, A5CTAG T T GATC1A R6595 1000 U z ł 980, B 75 100% 100% 75 100% 75 100% 100% 25 50% 100% 37 C SphI R6261 200 U z ł 4, G CATG5C C1GTAC G R6265 1000 U z ł 1.218, K 75 100% 75 100% 100%* 75 100% 100% < 125 %** 10 25% 37 C SspI R6601 500 U z ł 303, AAT5ATT TTA1TAA StuI R6421 400 U z ł 186, AGG5CCT TCC1GGA TaqI R6151 1000 U z ł 186, T5CG A A GC1T R6155 10 000 U z ł 993, E 10 25% 50 75% 50 75% 75 100% 100% 100 125%** 50 75% 37 C B 75 100% 100% 75 100% 50 75% b.d. b.d. 50 75% 37 C E 10 25% 25 50% 50 75% 50 75% 100% b.d. 100% 65 C Tru9I R7011 200 U z ł 256, T5TA A A AT1T VspI R6851 500 U z ł 173, AT5TA AT TA AT1TA XbaI R6181 2000 U z ł 195, T5CTAG A A GATC1T R6185 10 000 U z ł 759, F 75 100% 50 75% 75 100% 25 50% b.d. b.d. 25 50% 65 C D < 10% 25 50% 75 100% 100% b.d. b.d. < 10% 37 C D 50 75% 75 100% 75 100% 100% 100% 100 125%** 100% 37 C XhoI R6161 3000 U z ł 173, C5TCGA G G AGCT1C R6165 10 000 U z ł 477, D 25 50% 75 100% 75 100% 100% 25 50% 100 125%** 10 25% 37 C XmaI R6491 50 U z ł 234, C5CCGG G G GGCC1C R6495 250 U z ł 880, B 50 75% 100% 25 50% < 10% 25 50% < 10% 50 75% 37 C XmnI R7271 500 U z ł 195, GAANN5NNT TC CTTNN1NNAAG R7273 2500 U z ł 741, B 75 100% 100% 75 100% 10 25% b.d. b.d. 75 100% 37 C * Niezalecane z racji możliwej aktywności gwiezdnej ** Aktywność w jednostkach na podstawie testów z zalecanym buforem. W buforze H niektóre enzymy wykazują podwyższoną aktywność B.d.= brak danych

54 ENZYMY MODYFIKOWANE ENZYMY MODYFIKOWANE Niezbędne narzędzie w biologii molekularnej nastawionej na wysoką jakość. Niczego nie wolno pozostawiać przypadkowi. Również enzymy uważane za proste muszą być najwyższej jakości. Produkty firmy Promega stanowią podstawę sukcesu. Oferujemy termostabilne fosfatazy, różne polimerazy DNA i RNA, ligazy oraz kinazy.

ENZYMY MODYFIKOWANE 55 Fosfatazy alkaliczne Fosfatazy alkaliczne katalizują hydrolizę grup 5 -fosforanowych cząsteczek DNA, RNA oraz trifosforanów rybo- i dezoksy rybonukleozydów. Podczas klonowania są one stosowane, aby zapobiec ponownej ligacji linearyzowanych wektorów. Porównanie fosfataz alkalicznych TSAP CIAP Aktywacja termiczna Temperatura inaktywacji 74 C n.d. Czas inkubacji 15 min 2 30min Wymagany/zalecany specjalistyczny bufor Aktywność we wszystkich buforach do enzymów restrykcyjnych firmy Promega Wymagane ilości w jednostkach enzymatycznych w buforach do enzymów restrykcyjnych 1 2 n.d. Użyteczność w selekcji białych/niebieskich kolonii TSAP = Thermosensitive Alkaline Phosphatase (termoczuła fosfataza alkaliczna) CIAP = Calf Intestinal Alkaline Phosphatase (fosfataza alkaliczna z jelita cielęcego) Alkaline Phosphatase, Calf Intestinal (CIAP) M1821 1000 U zł 303, TSAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase M9910 100 U zł 329, Polimerazy DNA Polymerase I Zależna od DNA polimeraza DNA z aktywnością egzonukleazy 5 a3 i 3 a5 M2051 500 U zł 399, M2055 2500 U zł 1.639, Odpowiednia do licznych zastosowań, Np. znakowania radioaktywnego DNA metodą nick translation i syntezy dwuniciowego cdna DNA Polymerase I Large (Klenow) Fragment Zależna od DNA polimeraza DNA z aktywnością egzonukleazy 3 a5 i bez aktywności egzonukleazy 3 a5 M2201 150 U zł 273, M2206 500 U zł 581, Wypełnianie wystających końców 5 wyznakowanymi lub niewyznakowanymi dntp, sekwencjonowanie jedno- lub dwuniciowych matryc DNA i wiele innych zastosowań DNA Polymerase I Large (Klenow) Fragment, Exonuclease Minus M2181 100 U zł 160, Zależna od DNA polimeraza DNA bez aktywności egzonukleazy Znakowanie losowych starterów Tworzy wystający koniec 3 długości 1 bp T4 DNA Polymerase Katalizuje syntezę 3 a5 drugiej nici DNA na matrycy jednoniciowego DNA ze starterem M4211 100 U zł 295, M4215 500 U zł 1.053, Do zastosowań, w których błędy parowania zasad są niedopuszczalne

56 ENZYMY MODYFIKOWANE SP6 RNA Polymerase Ekstremalnie wysokie powinowactwo do sekwencji promotora SP6 i ekstremalnie duża swoistość P1085 1000 U zł 672, P1081 5000 U zł 2.393, Czystość >90% potwierdzona elektroforezą w żelu poliakrylamidowym w obecności SDS Wbudowywanie trifosforanów nukleozydów wyznakowanych 32P, P, 3H i 35S T3 RNA Polymerase Ekstremalnie wysokie powinowactwo do sekwencji promotora T3 i ekstremalnie duża swoistość P2083 1000 U zł 191, Czystość >90% potwierdzona elektroforezą w żelu poliakrylamidowym w obecności SDS Wbudowywanie trifosforanów nukleozydów wyznakowanych 32P, P, 3H i 35S T7 RNA Polymerase Ekstremalnie wysokie powinowactwo do sekwencji promotora T7 i ekstremalnie duża swoistość P2075 1000 U zł 212, P2077 5000 U zł 837, Czystość >90% potwierdzona elektroforezą w żelu poliakrylamidowym w obecności SDS Wbudowywanie trifosforanów nukleozydów wyznakowanych 32P, P, 3H i 35S Ligazy T4 DNA Ligase Katalizuje ligację dwóch nici DNA poprzez grupy 5 -fosforanową i 3 -hydroksylową M1801 100 U zł 108, M1804 500 U zł 412, Znajduje zastosowanie przy wklejaniu wstawek DNA z wystającymi końcami 5 lub 3 oraz z tępymi końcami Użyteczność w selekcji białych/niebieskich kolonii LigaFast Rapid DNA Ligation System Ligacja wystających końców w 5 min i tępych końców 15 min w temperaturze pokojowej M8221 30 reakcji zł 507, M8225 150 reakcji zł 2.085, Użyteczność w selekcji białych/niebieskich kolonii T4 RNA Ligase Katalizuje zależną od ATP ligację jednoniciowego RNA lub DNA do ufosforylowanych końców 5 jednoniciowego RNA lub DNA M1051 500 U zł 5, Kinazy i systemy znakowania DNA T4 Polynucleotide Kinase Katalizuje przeniesienie grupy γ-fosforanowej z ATP na koniec 5 polinukleotydu M4101 100 U zł 113, M4103 1000 U zł 629, DNA 5 End-Labeling System Kompletny system znakowania jedno- i dwuniciowego RNA lub DNA U2010 10 reakcji zł 373,

ENZYMY MODYFIKOWANE 57 Nukleazy Exonuclease III Tworzenie jednoniciowego DNA Katalizuje odcinanie kolejnych mononukleotydów M1811 5000 U zł 295, M1815 25 000 U zł 1.058, Szybkość degradacji można regulować, stosując różne temperatury inkubacji Możliwa inaktywacja termiczna w 75 C Ribonuclease H Hydrolizuje swoiście wiązania fosfodiestrowe RNA zhybrydyzowanego do DNA; tworzy produkty o końcach 3 -OH i 5 -P M4281 50 U zł 728, M4285 250 U zł 2.558, Mung Bean Nuclease Katalizuje cięcie endonukleotyczne jednoniciowego DNA i RNA, pozostawiając produkty z końcem 5 -P M4311 2000 U zł 325, RNase ONE Ribonuclease Katalizuje cięcie RNA M4261 1000 U zł 468, M4265 5000 U zł 1.608, RQ1 RNase-Free DNase Deoksyrybonukleaza I trawiąca jedno- lub dwuniciowe DNA do uzyskania nukleotydów 3 -OH M6101 1000 U zł 234, Produkt jest odpowiedni do zastosowań, przy których istotne jest otrzymanie RNA S1 Nuclease Rozcina endonukleolitycznie jednoniciowe DNA i RNA do uzyskania produktów o końcach 5 -P M5761 10 000 U zł 165, Dwuniciowe kwasy nukleinowe mogą ulec degradacji wyłącznie przy skrajnie wysokim stężeniu enzymu Inne enzymy Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, Recombinant Katalizuje dobudowywanie mononukleotydów do końca 3 -OH DNA przy jednoczesnym odcinaniu grup fosforanowych M1871 300 U zł 290, M1875 1500 U zł 1.023, Topoisomerase I Usuwa ujemne superskręcenie z koliście zamkniętej cząsteczki DNA M2851 200 U zł 551,

58 WEKTORY EKSPRESYJNE WEKTORY EKSPRESYJNE Promega oferuje wybór różnych wektorów ekspresyjnych do syntezy białek zarówno w układzie bezkomórkowym, jak i komórkowym. Wektory Flexi : maksymalna elastyczność i łatwość tworzenia białek fuzyjnych N- lub C-końcowych Standardowe wektory MCS: do konwencjonalnego klonowania z użyciem polilinkera (MCS)

WEKTORY EKSPRESYJNE 59 Wektory ekspresyjne Flexi Wszystkie wektory Flexi zawierają letalny dla bakterii gen barnazy, który jest unieczynniany po wprowadzeniu klonowanego DNA. Umożliwia to pozytywną selekcję produktów zakończonej powodzeniem ligacji wstawki. Gwarancja maksymalnej elastyczności Celowane klonowanie otwartych ramek odczytu (ORF) Łatwy transfer ORF do szerokiej gamy wektorów bez konieczności ponownego sekwencjonowania DNA Szybkie i uniwersalne generowanie białek fuzyjnych wyznakowanych na N- lub C-końcu Wybór z oferty wektorów Flexi E. coli Komórki ssacze Transkrypcja/translacja w systemie bezkomórkowym N-koniec C-koniec PRODUKT MARKER SELEKCYJNY ZASTOSOWANIE PROMOTOR EKSPRESJI MARKER BIAŁKA FUZYJNEGO NR KATA LOG. pf1a T7 Flexi Vector Ampicylina Indukowalna ekspresja natywnych T7 T7 C8441 zł pf1k T7 Flexi Vector Kanamycyna białek C8451 zł pfn2a (GST) Flexi Vector Ampicylina Ekspresja rozpuszczalnych T7 T7 GST C8461 zł pfn2k (GST) Flexi Vector Kanamycyna białek i oczyszczanie dzięki znacznikowi GST na N-końcu C8471 zł pf3a WG (BYDV) Flexi Vector pf3k WG (BYDV) Flexi Vector Ampicylina Ekspresja in vitro natywnych białek w ekstrakcie z kiełków pszenicy CENA T7, SP6 L5671 zł Kanamycyna L5681 zł pf25a ICE T7 Flexi Vector Ampicylina Ekspresja in vitro natywnych T7 L1061 zł pf25k ICE T7 Flexi Vector Kanamycyna białek w ekstrakcie z komórek owadzich L1081 zł pfn6a (HQ) Flexi Vector Ampicylina Indukowalna ekspresja białek T7 T7 HQHQHQ C8511 zł pfn6k (HQ) Flexi Vector Kanamycyna i oczyszczanie ich na niklowej kolumnie powinowactwa C8521 zł pfc7a (HQ) Flexi Vector Ampicylina Indukowalna ekspresja białek T7 T7 HQH- C8531 zł i oczyszczanie ich na niklowej QHQ pfc7k (HQ) Flexi Vector Kanamycyna C8541 zł kolumnie powinowactwa pf4a CMV Flexi Vector Ampicylina Wysoka konstytutywna ekspresja CMV T7 C8481 zł pf4k CMV Flexi Vector Kanamycyna natywnych białek C8491 zł pf5a CMV-neo Flexi Vector pf5k CMV-neo Flexi Vector pf9a CMV hrluc-neo Flexi Vector pfn10a (ACT) Flexi Vector pn11a (BIND) Flexi Vector Ampicylina/ neomycyna Kanamycyna/neomycyna M Ampicylina Neomycyna M Ampicylina/ neomycyna Wysoka konstytutywna ekspresja natywnych białek z markerem selekcyjnym stabilnej ekspresji Wysoka konstytutywna ekspresja natywnych białek z markerem selekcyjnym stabilnej ekspresji Interakcje białko-białko in vivo w systemach komórek ssaczych CMV T7 C9401 zł C9411 zł CMV T7 C9361 zł CMV CMV T7 T7 Domena aktywacji HSV VP16 Domena GAL4 wiążąca DNA C91 C9341 zł zł pf12a RM Flexi Vector Ampicylina Regulowana ekspresja białek 12λOP- C9431 zł pf12k RM Flexi Vector Ampicylina ssaczych Mini CMV C9441 zł pfn18a HaloTag T7 Flexi Vector pfn18k HaloTag T7 Flexi Vector Kanamycyna Analiza interakcji białkowych i oczyszczanie białek T7 T7 HaloTag G2751 zł Ampicylina G2681 zł

60 WEKTORY EKSPRESYJNE Wybór z oferty wektorów Flexi E. coli Komórki ssacze Transkrypcja/translacja w systemie bezkomórkowym N-koniec C-koniec PRODUKT pfn19a HaloTag T7 SP6 Flexi Vector pfn19k HaloTag T7 SP6 Flexi Vector pfc20a HaloTag T7 SP6 Flexi Vector pfc20k HaloTag T7 SP6 Flexi Vector pfc14a HaloTag CMV Flexi Vector pfc14k HaloTag CMV Flexi Vector pfc15a HaloTag CMVd1 Flexi Vector pfc15k HaloTag CMVd1 Flexi Vector pfc16a HaloTag CMVd2 Flexi Vector pfc16k HaloTag CMVd2 Flexi Vector pfc17a HaloTag CMVd3 Flexi Vector pfc17k HaloTag CMVd3 Flexi Vector pfn21a HaloTag CMV Flexi Vector pfn21k HaloTag CMV Flexi Vector pfn22a HaloTag CMVd1 Flexi Vector pfn22k HaloTag CMVd1 Flexi Vector pfn23a HaloTag CMVd2 Flexi Vector pfn23k HaloTag CMVd2 Flexi Vector pfn24a HaloTag CMVd3 Flexi Vector pfn24k HaloTag CMVd3 Flexi Vector pfn29a His6HaloTag T7 Flexi Vector pfn29k His6HaloTag T7 Flexi Vector pfc30a His6HaloTag T7 Flexi Vector pfc30k His6HaloTag T7 Flexi Vector pfc27a HaloTag CMV-neo Flexi Vector pfc27k HaloTag CMV-neo Flexi Vector MARKER SELEKCYJNY ZASTOSOWANIE PROMOTOR EKSPRESJI MARKER BIAŁKA FUZYJNEGO NR KATA LOG. Kanamycyna Analiza interakcji białkowych T7 T7, SP6 HaloTag G1891 zł Ampicylina G1841 zł Kanamycyna Analiza interakcji białkowych T7 T7, SP6 Halo- Tag G1681 CENA zł Ampicylina G1691 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; wysoka ekspresja konstytutywna CMV T7 Halo- Tag G9651 zł Ampicylina G9661 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; umiarkowana ekspresja konstytutywna T7 CMVd1 T7, SP6 Halo- Tag G1611 zł Ampicylina G1601 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; niska ekspresja konstytutywna T7 CMVd2 T7, SP6 Halo- Tag G1591 zł Ampicylina G1571 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; bardzo niska ekspresja konstytutywna T7 CMVd3 T7, SP6 Halo- Tag G1551 zł Ampicylina G1321 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; wysoka ekspresja konstytutywna CMV T7 HaloTag G2821 zł Ampicylina G2831 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; umiarkowana ekspresja konstytutywna T7 CMVd1 T7, SP6 HaloTag G2841 zł Ampicylina G2851 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; niska ekspresja konstytutywna T7 CMVd2 T7, SP6 HaloTag G2861 zł Ampicylina G2871 zł Kanamycyna Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; bardzo niska ekspresja konstytutywna T7 CMVd3 T7, SP6 HaloTag G2881 zł Ampicylina G2981 zł Kanamycyna Indukowalna ekspresja białek i oczyszczanie ich na niklowej kolumnie powinowactwa lub z użyciem HaloTag T7 T7 His(6) HaloTag G8261 zł Ampicylina G81 zł Kanamycyna Indukowalna ekspresja białek i oczyszczanie ich na niklowej kolumnie powinowactwa lub z użyciem HaloTag T7 T7 His(6) Halo- Tag G8321 zł Ampicylina G8381 zł Kanamycyna Ampicylina/ neomycyna M Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; wysoka ekspresja konstytutywna z markerem selekcyjnym stabilnej ekspresji CMV T7 Halo- Tag G8421 G8431 zł zł

WEKTORY EKSPRESYJNE 61 NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Flexi Primer Design Tool Narzędzie Flexi Primer Design Tool generuje startery PCR do amplifikacji wybranej sekwencji kodującej, tak aby była odpowiednia do zastosowania w wektorach Flexi www.promega.com/primer-design-tool Standardowe wektory MCS Służą do konwencjonalnego klonowania z użyciem polilinkera (MCS). Wybór z oferty standardowych wektorów MCS E. coli Komórki ssacze Transkrypcja/translacja w systemie bezkomórkowym N-koniec C-koniec PRODUKT ph6htn His6HaloTag T7 Vector ph6htc His6HaloTag T7 Vector phtc HaloTag CMV-neo Vector phtn HaloTag CMV-neo Vector MARKER SELEKCYJNY Ampicylina ZASTOSOWANIE PROMOTOR EKSPRESJI MARKER BIAŁKA FUZYJNEGO Indukowalna ekspresja białek i oczyszczanie ich na niklowej kolumnie powinowactwa lub z użyciem HaloTag T7 T7 His(6) HaloTag Ampicylina T7 T7 His(6) Halo- Tag Ampicylina/ neomycyna M Obrazowanie komórek i analiza interakcji białkowych; wysoka ekspresja konstytutywna z markerem selekcyjnym stabilnej ekspresji CMV T7 Halo- Tag NR KATA LOG. G7971 G8031 G7711 CENA zł zł zł Ampicylina CMV T7 HaloTag G7721 zł pci-neo Mammalian Expression Vector psi Mammalian Expression Vector Wysoka konstytutywna ekspresja natywnych białek z markerem selekcyjnym stabilnej ekspresji Wysoka konstytutywna ekspresja natywnych białek CMV T7 E1841 zł 1.530, SV40 T7 E1721 zł 1.530, Monster Green Fluorescent Protein phmgfp Vector Obrazowanie komórek i inne bazujące na fluorescencji zastosowania fuzji białek badanych z białkami o podwyższonej fluorescencji zielonej CMV T7 MGFP E6421 zł 2.662, Zestawienie wszystkich naszych wektorów znajduje się również na naszej stronie internetowej pod adresem: www.promega.com/vectors

62 KOMPETENTNE KOMÓRKI KOMPETENTNE KOMÓRKI Nasze komórki są nie tylko bardzo kompetentne i odpowiednie do zastosowań klientów istnieje również możliwość wyboru!

KOMPETENTNE KOMÓRKI 63 Kompetentne komórki Transformacja kompetentnych komórek E.coli nowo skonstruowanymi plazmidami umożliwia wybór i namnażanie żądanych klonów. Kompetentne komórki bakteryjne są w stanie przyjmować obce DNA i powielać je. Wysokiej jakości komórki E.coli są istotnym elementem skutecznych protokołów klonowania. Komórki Single-Use Competent Cells są komórkami E.coli o wysokim stopniu kompetencji, uzyskanej metodami chemicznymi, które są dostarczane w praktycznych porcjach po 50 µl. Transformację prowadzi się bezpośrednio w próbówce. W ten sposób można pominąć dodatkowe etapy dzielenia produktu na porcje, co pozwala uniknąć spadku wydajności transformacji, spowodowanego ponawianym zamrażaniem i rozmrażaniem. Gen oporności na ampicylinę (Amp R ) 1. DNA plazmidowe i wstawka podlegają cięciu tym samym enzymem restrykcyjnym Gen β-galaktozydazy (lacz) Plazmid Miejsca restrykcyjne Obce DNA Miejsca restrykcyjne Komórki Single-use Pro 5-alpha umożliwiają wydajną transformację niezmetylowanym DNA z reakcji PCR, syntezy cdna i wielu innych źródeł. Nieswoista aktywność endonukleazy I (enda1) została wyeliminowana, aby umożliwić przygotowanie plazmidów najwyższej jakości. Szczep jest oporny na fagi T1 (fhua2) i odpowiedni do prowadzenia selekcji białych/niebieskich kolonii poprzez α-komplementację genu β-galaktozydazy (Rys. 1). JM109 jest reca- i enda-ujemnym szczepem K, co minimalizuje rekombinację i poprawia jakość DNA plazmidowego. Ponadto komórki zawierają episom F, co umożliwia selekcję białych i niebieskich kolonii. Rysunek: Schemat prowadzenia selekcji kolonii białych i niebieskich, umożliwiający wyszukiwanie wektorów z wstawką DNA 2. Ligacja wstawki inaktywuje gen lacz 3. Transformacja rekombinowanymi plazmidami z genem oporności na ampicylinę 4. Wszystkie poddawane transformacji bakterie wysiewa się na płytkach z pożywką z dodatkiem ampicyliny i substratu β-galaktozydazy 5. Białe kolonie zawierają wstawkę, niebieskie nie Rekombinowany plazmid Bakteria 12112MA Single-Use Pro 5-alpha Competent Cells, >109cfu/µg L1221 1 ml zł 1.214, Single-Use JM109 Competent Cells, >108cfu/µg L2005 1 ml zł 698, Single-Use HB101 Competent Cells, >108cfu/µg L2015 1 ml zł 6, JM109 Competent Cells, >107cfu/μg L1001 1 ml zł 377, JM109 Competent Cells, >108cfu/μg L2001 1 ml zł 538, Dane dotyczące genotypów Dane dotyczące genotypów można znaleźć na naszej stronie w części Dane techniczne www.promega.com/genetic-markers

64 KOMPETENTNE KOMÓRKI NARZĘDZIA PROMEGA DLA PROFESJONALISTÓW Promega Colony Counter Aplikacja Colony Counter firmy Promega to narzędzie do szybkiego i łatwego zliczania kolonii na płytce agarowej. Wystarczy sfotografować płytkę, a aplikacja zliczy kolonie w ciągu kilku sekund. Dane można szybko przetwarzać, zaznaczając dodatkowe kolonie i wykluczając artefakty w postaci odbłysków. Zliczanie pojedynczych płytek lub uśrednianie wyników kilku płytek Powiększanie wybranego obszaru płytki, aby regulować zliczanie Ręczne dodawanie kolonii i usuwanie wyników fałszywie dodatnich Zapisywanie zdjęć płytek i zliczanie kolonii bez ograniczeń czasowych

KOMPETENTNE KOMÓRKI 65 Notatki

66 SERWIS Składanie zamówień przez faks: +48 22 531 06 69 Zamawiam (w sposób wiążący) następujące produkty: (Prosimy wypełniać formularz drukowanymi literami). ILOŚĆ NR KATALOG. Osoba do kontaktu Pani Pan Tytuł naukowy Nazwisko Imię Przedsiębiorstwo / Uczelnia Oddział / Instytut Telefon Faks Adres e-mail Numer klienta (jeśli znany) Adres do rozliczeń Towar dostarczyć na adres do rozliczeń Przedsiębiorstwo / Uczelnia Oddział / Instytut Ulica + numer lokalu Kod pocztowy + miejscowość Adres dostawy (jeśli jest inny) Przedsiębiorstwo / Uczelnia Oddział / Instytut Ulica + numer lokalu Data Podpis Kod pocztowy + miejscowość Podane ceny plus VAT obowiązują do 31.12.2014. Wysyłka zgodnie z Ogólnymi warunkami handlowymi podanymi na stronie www.promega.com/agb. Zastrzega się możliwość wystąpienia błędów.

ŻYWA PAGINA / POSZCZEGÓLNE ROZDZIAŁY 67 Wszystko, co trzeba, zawsze na czas. Helix swoboda prowadzenia badań! Helix to spersonalizowane miejsce przechowywania produktów Promega w laboratorium. Zamrażarka, lodówka i szafa utrzymująca temperaturę pokojową w inteligentnej technologii zaopatrywania magazynu i rozliczania zasobów. Pełne zaopatrzenie w te produkty firmy Promega, które są potrzebne w danym laboratorium. Helix gwarantuje klientom nieograniczoną dostępność produktów 24 godziny na dobę, 7 dni w tygodniu. Wszystkie produkty z tym znakiem można umieszczać w zamrażarce, lodowce lub szafi e utrzymującej temperaturę pokojową marki Helix. Więcej informacji na temat produktow Helix można znaleźć na stronie www.promega.com/helix 2013 Promega Corporation. All Rights Reserved. 9888878