Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit

Transkrypt

1 INSTRUKCJA TECHNICZNA Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit Instrukcja użytkowania produktu AS1350 Przestroga: Kasety należy przenosić ostrożnie; krawędzie zamknięcia kasety mogą być ostre. INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA PRODUKTU AS Woods Hollow Rd. Madison, WI USA MDSS GmbH Schiffgraben Hanower, Niemcy Wersja poprawiona 5/18 TM395

2 Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit Dokumentacja techniczna jest dostępna na stronie internetowej pod adresem: Na tej stronie internetowej można sprawdzić, czy używana wersja niniejszej instrukcji technicznej jest aktualna. W przypadku pytań dotyczących korzystania z systemu należy wysłać wiadomość do działu pomocy technicznej firmy Promega na adres: techserv@promega.com 1. Opis Elementy produktu, warunki przechowywania i objaśnienie symboli Przeznaczenie produktu Ograniczenia stosowania produktu Przed rozpoczęciem A. Przygotowanie próbek FFPE B. Przygotowanie kaset Maxwell FFPE Cartridge Przebieg pracy analizatora Czynności po zakończeniu oczyszczania Rozwiązywanie problemów Źródło Podsumowanie zmian Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit jest dostępny wyłącznie w niektórych krajach. Produkt spełnia podstawowe wymogi unijnej dyrektywy 98/79/WE w sprawie wyrobów medycznych używanych do diagnozy in vitro. 1. Opis Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit (a) jest przeznaczony do stosowania w połączeniu z analizatorem Maxwell CSC Instrument w celu zapewnienia łatwej metody wydajnego i zautomatyzowanego oczyszczania genomowego DNA (gdna) z próbek FFPE (utrwalonych w parafinie) pobranych z ludzkiej piersi, płuca lub okrężnicy. Analizator Maxwell CSC Instrument jest dostarczany ze wstępnie zaprogramowanymi metodami oczyszczania i jest przeznaczony do stosowania ze wstępnie napełnionymi kasetami z odczynnikami oraz z dodatkowymi odczynnikami dostarczonymi w zestawie, co zwiększa wygodę i upraszcza stosowanie. Analizator może przetworzyć maksymalnie 16 próbek w czasie krótszym niż 60 minut, a oczyszczone DNA nadaje się do bezpośredniego wykorzystania w dalszych oznaczeniach opartych na amplifikacji, takich jak reakcja PCR. Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit umożliwia oczyszczanie kwasu nukleinowego przy wykorzystaniu cząsteczek paramagnetycznych, które zapewniają ruchomą fazę stałą stwarzającą optymalne warunki do wychwytywania próbki, przemywania i oczyszczania gdna. Analizator Maxwell CSC Instrument jest urządzeniem przeprowadzającym analizy w oparciu o cząsteczki magnetyczne. Umożliwia on skuteczne wiązanie gdna z cząsteczkami paramagnetycznymi w pierwszym dołku wstępnie napełnionej kasety i przenosi próbkę przez dołki kasety, mieszając ją podczas przetwarzania. Zastosowanie magnetycznego wychwytywania pozwala na uniknięcie często występujących problemów, takich jak zatkane końcówki lub częściowe przeniesienie odczynnika, co obniża jakość procesów oczyszczania w innych powszechnie stosowanych zautomatyzowanych systemach. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

3 2. Elementy produktu, warunki przechowywania i objaśnienie symboli PRODUKT ILOŚĆ NR KAT. Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit 48 preparatów AS1350 Do stosowania w diagnostyce in vitro. Wyłącznie do użytku przez specjalistów. Zawiera ilość wystarczającą do przeprowadzenia 48 zautomatyzowanych izolacji z próbek FFPE. Kasety Maxwell FFPE Cartridges są przeznaczone wyłącznie do jednorazowego użytku. 15 C 30 C 6010TB 48 Zestaw zawiera: 25 ml oleju mineralnego 20 ml buforu lizującego 2 1 ml proteinazy K (PK) 100 µl niebieskiego barwnika 1 ml RNazy A 48 kaset Maxwell FFPE Cartridges 50 tłoczków CSC/RSC Plungers 50 probówek do elucji (0,5 ml) 25 ml wody wolnej od nukleaz Warunki przechowywania: Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit należy przechowywać w temperaturze C. Informacje dotyczące bezpieczeństwa: Kasety z odczynnikami zawierają etanol i izopropanol. Substancje te należy traktować jako łatwopalne, szkodliwe i drażniące. Kasety Maxwell FFPE Cartridges są przeznaczone do stosowania z czynnikami potencjalnie zakaźnymi. Podczas pracy z czynnikami potencjalnie zakaźnymi należy nosić odpowiednie środki ochrony indywidualnej (np. rękawiczki i okulary ochronne). Należy przestrzegać obowiązujących w instytucji wytycznych dotyczących przenoszenia i utylizacji wszystkich czynników potencjalnie zakaźnych używanych z tym systemem. Przestroga: Kasety należy przenosić ostrożnie; krawędzie zamknięcia kasety mogą być ostre. Informacje dodatkowe: Elementy zestawu Maxwell CSC DNA FFPE Kit zostały dopuszczone do łącznego stosowania na podstawie odpowiednich procedur kwalifikacyjnych i testów kontroli jakości. Nie zaleca się mieszania elementów zestawu z elementami zestawów różnych serii. Należy używać wyłącznie elementów dostarczonych w zestawie. 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

4 Objaśnienie symboli Symbol Objaśnienie Symbol Objaśnienie Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro Autoryzowany przedstawiciel 15 C 30 C Przechowywać w temperaturze C Woods Hollow Rd. Madison, WI USA Producent Przestroga Środek drażniący Substancja rakotwórcza Zawiera ilość wystarczającą do przeprowadzenia n badań Conformité Européenne Ostrzeżenie. Zagrożenie biologiczne. Ostrzeżenie. Niebezpieczeństwo zmiażdżenia. Numer katalogowy Numer serii Nie używać ponownie 3. Przeznaczenie produktu Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit jest przeznaczony do stosowania w połączeniu z analizatorem Maxwell CSC Instrument oraz metodą oczyszczania DNA z próbek FFPE Maxwell CSC jako urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro (IVD), służące do zautomatyzowanej izolacji DNA z próbek FFPE (utrwalonych w parafinie) ludzkich tkanek pobranych z piersi, płuca lub okrężnicy. Oczyszczone DNA nadaje się do stosowania w oznaczeniach wykonywanych na potrzeby diagnostyki in vitro opartych na amplifikacji. Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit jest przeznaczony do stosowania w temperaturze C. Stosowanie zestawu poza tym zakresem temperatur może prowadzić do uzyskania nieprawidłowych wyników. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

5 Próbki FFPE przygotowane z zastosowaniem 10-procentowej obojętnie buforowanej formaliny mogą być stosowane razem z zestawem Maxwell CSC DNA FFPE Kit. Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit nie jest przeznaczony do stosowania w ramach określonego badania diagnostycznego. Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit jest przeznaczony wyłącznie do użytku przez specjalistów. Wyniki diagnostyczne uzyskane przy wykorzystaniu DNA oczyszczonego za pomocą tego systemu należy interpretować w połączeniu z innymi danymi klinicznymi lub laboratoryjnymi. 4. Ograniczenia stosowania produktu Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit jest przeznaczony do użytku wyłącznie z próbkami FFPE tkanek pobranymi z ludzkiej piersi, płuca lub okrężnicy. Nie jest on przeznaczony do stosowania z próbkami tkanek typu innego niż FFPE, takimi jak próbki tkanek świeże lub zamrożone próbki tkanek, ani z próbkami FFPE pobranymi z tkanek innych niż ludzka pierś, płuco lub okrężnica. Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit nie jest przeznaczony do stosowania z próbkami innego rodzaju, w tym z próbkami innymi niż ludzkie, ani do oczyszczania RNA. Zestaw Maxwell CSC DNA FFPE Kit nie jest przeznaczony do użytku z próbkami tkanek przygotowanymi przy użyciu utrwalaczy innych niż 10-procentowa obojętnie buforowana formalina. Charakterystykę roboczą zestawu Maxwell CSC DNA FFPE Kit oceniono poprzez wyizolowanie DNA z próbek FFPE tkanek o wielkości od 0,1 mm 3 do 2,0 mm 3. Zestaw nie jest przeznaczony do stosowania z próbkami poza tym zakresem. Użytkownik odpowiada za ustalenie charakterystyki roboczej wymaganej do dalszych zastosowań diagnostycznych. W przypadku dalszych zastosowań diagnostycznych należy zastosować odpowiednie środki kontrolne w zakresie używania DNA oczyszczonego za pomocą zestawu Maxwell CSC DNA FFPE Kit. 5. Przed rozpoczęciem Materiały zapewniane przez użytkownika mikrowirówka pipetory i końcówki pipet do przenoszenia wstępnie przetworzonych próbek do wstępnie napełnionych kaset z odczynnikami probówki o pojemności 1,5 2,0 ml do inkubacji próbek (np. mikroprobówki o pojemności 1,5 ml [nr kat. V1231]) bloki grzejne ustawiona na temperaturę 56 C oraz 80 C (Uwaga: Należy ustawić potrzebną wysokość temperatury bloku grzejnego. Rzeczywista zmierzona temperatura bloku grzejny powinna być równa temperaturze w zakresie specyfikacji wzorcowania termometru użytego do pomiaru). Próbki FFPE o całkowitej objętości tkanki wynoszącej od 0,1 do 2,0 mm 3 (Uwaga: Próbki należy przechowywać w temperaturze pokojowej [15 30 C].) żyletki (Uwaga: Podczas korzystania z żyletek w celu usunięcia próbki ze szkiełka podstawowego należy zachować ostrożność.) 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

6 5.A. Przygotowanie próbek FFPE Obróbka wstępna wycinków 1. Umieścić wycinek w probówce mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml. Umieszczony na szkiełku podstawowym wycinek tkanki należy usunąć przy użyciu czystej żyletki. 2. Do probówek z próbką należy dodać 300 µl oleju mineralnego. Wirować przez 10 sekund. 3. Próbki podgrzewać przez 2 minuty do temperatury 80 C. Podczas przygotowywania mieszaniny wzorcowej podgrzane próbki należy pozostawić w temperaturze pokojowej. 4. Zgodnie z poniższą tabelą należy przygotować mieszaninę wzorcową przy użyciu bufora lizującego, proteinazy K oraz niebieskiego barwnika. Odczynnik Ilość/Reakcja Reakcje (liczba przebiegów + 1) Łącznie Bufor lizujący 224 µl n (n + 1) µl Proteinaza K 25 µl n (n + 1) µl Niebieski barwnik 1 µl n (n + 1) µl 5. Do każdej z probówek z próbką dodać 250 µl mieszaniny wzorcowej i wirować przez 5 sekund. 6. Wirować przez 20 sekund z prędkością g w celu oddzielenia warstw. Jeśli w warstwie wodnej (niższa, niebieska warstwa) obecne są grudki, należy delikatnie wymieszać fazę wodną przy użyciu pipety. 7. Probówki z próbką należy przenieść do bloku grzejnego podgrzanego do temperatury 56 C i inkubować przez 30 minut. 8. Probówki z próbką należy przenieść do bloku grzejnego podgrzanego do temperatury 80 C i inkubować przez 4 godziny. 9. Probówki z próbką należy przenieść na stół laboratoryjny i schładzać je przez 5 minut do temperatury pokojowej. 10. Do każdej probówki z próbką dodać 10 µl RNazy A. Wymieszać przez pipetowanie. 11. Inkubować przez 5 minut w temperaturze pokojowej (15 30 C). 12. Wirować w mikrowirówce z pełną prędkością przez 5 minut. 13. Niebieską fazę wodną zawierającą DNA należy natychmiast przenieść do dołka nr 1 kasety Maxwell FFPE Cartridge przed przystąpieniem do wykonywania czynności opisanych w części 6, krok 5. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

7 5.B. Przygotowanie kaset Maxwell FFPE Cartridge 1. Przed rozpoczęciem pracy z kasetami Maxwell FFPE Cartridges, tłoczkami CSC/RSC Plungers i probówkami do elucji należy zmienić rękawiczki. Kasety są ustawiane na tacy blatowej Maxwell CSC Deck Tray na zewnątrz analizatora, po czym taca blatowa, zawierająca kasety i próbki, jest przenoszona do analizatora w celu rozpoczęcia oczyszczania. Umieścić kasety przeznaczone do użycia na tacy blatowej Maxwell CSC Deck Tray (rysunek 2). Umieścić każdą kasetę na tacy blatowej tak, aby dołek nr 1 (największy dołek w kasecie) znajdował się jak najdalej od probówek do elucji. Nacisnąć kasetę, aby zatrzasnęła się w odpowiednim położeniu. Upewnić się, że oba końce kasety znajdują się w całości na tacy blatowej. Ostrożnie zdjąć zamknięcie tak, aby usunąć całe zamknięcie z górnej części kasety. Przed umieszczeniem kaset na tacy blatowej upewnić się, że cała taśma uszczelniająca i pozostałości kleju zostały usunięte. Przestroga: Z kasetami należy się obchodzić ostrożnie. Krawędzie zamknięcia kasety mogą być ostre. 2. Umieścić jeden tłoczek w dołku nr 8 każdej kasety. Uwaga: Należy używać wyłącznie tłoczków dostarczonych w zestawie Maxwell CSC FFPE Kit. Tłoczki do zestawów Maxwell 16 LEV oraz SEV nie są kompatybilne z analizatorem Maxwell CSC Instrument. 3. Umieścić pustą probówkę do elucji w położeniu probówki do elucji dla każdej kasety na tacy blatowej Maxwell CSC Deck Tray. Uwaga: Należy używać wyłącznie probówek do elucji dostarczonych w zestawie Maxwell CSC DNA FFPE Kit. Inne probówki do elucji mogą nie być zgodne z analizatorem Maxwell CSC Instrument, co może wpłynąć na wynik oczyszczania DNA. 4. Na dnie każdej probówki do elucji umieścić 50 μl wody wolnej od nukleaz. Uwaga: Należy używać wyłącznie wody wolnej od nukleaz dostarczonej w zestawie Maxwell CSC DNA FFPE Kit. Użycie innych buforów do elucji może wpłynąć na oczyszczanie DNA. Uwagi dotyczące przygotowania kasety Maxwell FFPE Cartridge 1. W przypadku przetwarzania mniej niż 16 próbek ustawić kasety na środku tacy blatowej. 2. Usunąć wszelkie wycieki próbki lub odczynnika z tacy blatowej Maxwell CSC Deck Tray, zgodnie z wytycznymi w Instrukcji obsługi analizatora Maxwell CSC Instrument. Nie należy stosować wybielacza do czyszczenia części analizatora. 1. Binding Buffer 2. Magnetic Particles 1 3. Wash Solution 2 4. Wash Solution Wash Solution 5 6. Wash Solution Empty 8. Empty 8 Well Content User Adds: Rysunek 1. Kaseta Maxwell FFPE Cartridge. Na rysunku pokazano zawartość kasety. Wstępnie przygotowana próbka FFPE jest dodawana do dołka nr 1, a tłoczek jest wprowadzany do dołka nr 8. 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

8 10828TB Rysunek 2. Ustawianie i konfiguracja tacy blatowej Maxwell CSC Deck Tray. Woda wolna od nukleaz jest dodawana do probówek do elucji w sposób przedstawiony na rysunku. 6. Przebieg pracy analizatora Metodę Maxwell CSC FFPE można pobrać ze strony internetowej firmy Promega: Więcej szczegółowych informacji zawiera Instrukcja techniczna instalacji metod Maxwell CSC nr TM Włączyć analizator Maxwell CSC Instrument i tablet. Interfejs użytkownika analizatora uruchomi się automatycznie, a analizator przeprowadzi autotest i ustawi w położeniu wyjściowym wszystkie ruchome części. 2. Wybrać opcję Rozpocznij na ekranie głównym. 3. Zeskanować lub wprowadzić kod kreskowy metody znajdujący się na etykiecie zestawu Maxwell CSC DNA FFPE Kit, aby automatycznie wybrać metodę, która zostanie zastosowana (rysunek 3). Uwaga: Kod kreskowy metody zestawu Maxwell CSC DNA FFPE Kit jest wymagany do przeprowadzenia oczyszczania DNA przy użyciu analizatora Maxwell CSC Instrument. Etykieta zestawu zawiera dwa kody kreskowe. Kod kreskowy metody pokazano na rysunku 3 poniżej. Jeżeli nie można zeskanować kodu kreskowego, należy skontaktować się z Serwisem technicznym firmy Promega. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

9 6. Przebieg pracy analizatora (ciąg dalszy) Rysunek 3. Etykieta zestawu z kodem kreskowym metody do zeskanowania. W czerwonym polu pokazano kod kreskowy metody do zeskanowania na etykiecie zestawu w celu rozpoczęcia cyklu oczyszczania. 4. Wybrać pozycje kaset, które zostaną wykorzystane (patrz Instrukcja obsługi analizatora Maxwell CSC Instrument) i zeskanować lub ręcznie wprowadzić wymagane dane identyfikacyjne próbki. Usunąć zaznaczenie wszystkich nieużywanych pozycji. Po wykonaniu opisanych powyżej czynności wybierz Kontynuuj. 5. Sprawdzić umieszczenie próbek w dołku nr 1 kasety (zgodnie z instrukcją postępowania przedstawioną w części 5.A), wypełnienie kaset w analizatorze, wypełnienie probówek do elucji zawartością 50 μl wody wolnej od nukleaz oraz umieszczenie tłoczków w dołku nr Przenieść tacę blatową Maxwell CSC zawierającą przygotowane kasety na blat analizatora Maxwell CSC Instrument. Upewnić się, że taca blatowa została umieszczona w analizatorze Maxwell CSC Instrument w taki sposób, że probówki do elucji znajdują się najbliżej drzwi. Tacę blatową można włożyć do analizatora wyłącznie w tej orientacji. W przypadku trudności z ustawieniem tacy blatowej na platformie sprawdzić, czy taca blatowa jest ułożona w prawidłowej orientacji. Upewnić się, że taca blatowa jest ustawiona na płasko na blacie analizatora. Uwaga: Tacę blatową Maxwell CSC Deck Tray należy trzymać za brzegi, aby uniknąć wypadnięcia kaset ze statywu. Ostrzeżenie: Niebezpieczeństwo zmiażdżenia. 7. Potwierdzić, że wszystkie czynności wskazane przed rozpoczęciem przetwarzania zostały wykonane i dotknąć przycisku Rozpocznij, aby zamknąć drzwi analizatora i rozpocząć przetwarzanie. 8. Analizator Maxwell CSC Instrument natychmiast rozpocznie cykl oczyszczania. Na ekranie będą wyświetlane wykonywane kroki oraz przybliżony czas do zakończenia cyklu. Uwaga: W przypadku przerwania cyklu przed jego zakończeniem analizator zmyje cząstki z tłoczków i wyrzuci tłoczki do dołka nr 8 kasety. Próbki zostaną utracone. Nie należy podejmować prób ponownego oczyszczenia próbek po przerwaniu cyklu analizatora. 9. Po zakończeniu automatycznego cyklu oczyszczania na ekranie tabletu zostanie wyświetlony komunikat informujący o zakończeniu metody: Koniec przebiegu TA 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

10 Koniec przebiegu 10. Po zakończeniu metody postępować zgodnie z instrukcjami wyświetlanymi na ekranie, aby otworzyć drzwi. Sprawdzić, czy tłoczki znajdują się w dołku nr 8 kasety po zakończeniu cyklu. Wyjąć tacę blatową z analizatora i usunąć próbki poddane elucji z tacy blatowej. Jeżeli nie wszystkie tłoczki zostały usunięte ze słupka tłoczków: postępować zgodnie z monitami wyświetlanymi na ekranie, aby wykonać metodę czyszczenia w przypadku przerwanego cyklu; ewentualnie wybrać metodę czyszczenia na ekranie ustawień cyklu zakończonego powodzeniem, aby usunąć pozostałe tłoczki. 11. Probówki do elucji zawierające DNA należy zamknąć zatyczką i wyjąć natychmiast po zakończeniu cyklu, aby zapobiec odparowaniu eluatów. Wyjąć tacę blatową Maxwell CSC Deck Tray. Uwaga: Po zakończeniu procedury automatycznego oczyszczania taca blatowa Maxwell CSC Deck Tray może być nagrzana. Podczas zdejmowania statywu z platformy analizatora trzymać statyw po bokach. Przed rozpoczęciem odkażania przy użyciu promieniowania ultrafioletowego upewnić się, że próbki zostały usunięte z analizatora w celu zapobieżenia uszkodzeniu oczyszczonego kwasu nukleinowego. 12. Wyjąć kasety i tłoczki z tacy blatowej Maxwell CSC Deck Tray i zutylizować je jako odpady niebezpieczne zgodnie z procedurami obowiązującymi w instytucji. Kasety, tłoczki i probówki do elucji są przeznaczone do jednorazowego użytku. Nie wolno ponownie używać kaset Maxwell CSC Cartridges, tłoczków CSC/RSC Plungers ani probówek do elucji. 7. Czynności po zakończeniu oczyszczania Ustalić, czy uzysk próbki oczyszczonego DNA spełniają wymogi wejściowe dla odpowiedniego dalszego oznaczenia przed ich wykorzystaniem w tym oznaczeniu. Działanie zestawu oceniono na podstawie oczyszczania amplifikowanego DNA. Inne metody ilościowego oznaczania, w tym absorbancja i wiązanie barwnika fluorescencyjnego, mogą nie korelować z amplifikacją (1). Odczyty absorbancji dla oczyszczonych próbek FFPE mogą zawyżać wydajność; zaleca się stosowanie innych metod określających wydajność (1). Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

11 8. Rozwiązywanie problemów W przypadku pytań, na które nie można znaleźć odpowiedzi w niniejszym dokumencie, należy skontaktować się z lokalnym oddziałem firmy Promega lub jej dystrybutorem. Informacje kontaktowe są dostępne pod adresem: Adres techserv@promega.com Objawy Niższe od oczekiwanego stężenie DNA w eluacie Typowy wycinek FFPE powinien zapewniać Przyczyny i komentarze Działanie zestawu oceniono przez wyizolowanie DNA z próbek FFPE tkanek o wielkości od 0,1 mm 3 do 2,0 mm 3. Zestaw nie jest przeznaczony do pracy z próbkami o wielkości spoza tego zakresu. Należy używać wycinków, które mieszczą się w podanym zakresie. amplifikowane DNA w zależności od rozmiaru tkanki, Zestaw jest przeznaczony do użytku z próbkami FFPE liczby komórek, warunków i sposobu utrwalania tkanek pobranymi z ludzkiej piersi, płuca lub okrężnicy w formalinie oraz opracowania. Zestaw nie jest przeznaczony do użytku z próbkami tkanek typu innego niż FFPE, takimi jak świeże lub zamrożone próbki tkanek, ani z próbkami FFPE tkanek pobranymi z tkanek innych niż ludzka pierś, płuco lub okrężnica. Czas i temperaturę inkubacji przetestowano wyłącznie dla tkanek pobranych z ludzkiej piersi, płuca i okrężnicy. Zestaw nie jest przeznaczony do użytku z próbkami tkanek przygotowanymi przy użyciu utrwalaczy innych niż 10-procentowa obojętnie buforowana formalina. Należy skontaktować się z laboratorium patologii lub dostawcą w celu potwierdzenia, czy nie użyto innego utrwalacza. Roszczenia wynikające z zastosowania barwionych szkiełek podstawowych lub wycinków nie będą rozpatrywane. Proces oczyszczania należy powtórzyć z użyciem bezbarwnego szkiełka podstawowego lub wycinka. Działanie zestawu oceniono na podstawie oczyszczania amplifikowanego DNA. Inne metody ilościowego oznaczania, w tym absorbancja i wiązanie barwnika fluorescencyjnego, mogą nie korelować z amplifikacją. Należy zastosować ilościowego oznaczania amplifikacji w celu oceny oczyszczenia. 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

12 8. Rozwiązywanie problemów (cd.) Objawy Jakość poniżej oczekiwań Eluat zawiera znacznie pofragmentowane DNA lub inhibitory dalszych oznaczeń. Przyczyny i komentarze Wycinek tkanki wykorzystywany do oczyszczania może zawierać pofragmentowane DNA z powodu warunków i sposobów utrwalania w formalinie. Jeśli DNA było pofragmentowane przed oczyszczaniem ekstrakcyjnym, pofragmentowane DNA zostanie oczyszczone przy użyciu tego zestawu. Należy powtórzyć proces przy użyciu sąsiedniego wycinka w celu oceny, czy problem dotyczy wycinka czy procesu. Niektóre oznaczenia oparte na amplifikacji są szczególnie wrażliwe na obecność inhibitorów. Dalsze kontrole oznaczeń powinny zidentyfikować obecność inhibitorów amplifikacyjnych w eluacie. Użytkownik jest odpowiedzialny za sprawdzenie kompatybilności produktuz oznaczeniami na dalszych etapach. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18

13 9. Źródło 1. Bonin, S. et al. (2010) Multicentre validation study of nucleic acids extraction from FFPE tissues. Virchows Arch. 457, Podsumowanie zmian W wersji 5/18 niniejszego dokumentu wprowadzono następującą zmianę: 1. Dodano wymogi unijnej dyrektywy 98/79/WE w sprawie wyrobów medycznych stosowanych do diagnostyki in vitro. (a) Amerykańska publikacja patentowa nr 6,027,945, 6,368,800 i 6,673,631, europejska publikacja patentowa nr , i , japońska publikacja patentowa nr i , 2018 Promega Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone. Maxwell jest zastrzeżonym znakiem towarowym firmy Promega Corporation. Produkty mogą być przedmiotem zgłoszonych bądź przyznanych patentów lub mogą podlegać pewnym ograniczeniom. Więcej informacji można znaleźć na naszej stronie internetowej. Wszystkie ceny i dane techniczne mogą ulec zmianie bez wcześniejszego powiadomienia. Oświadczenia dotyczące produktów mogą ulec zmianie. Aby uzyskać aktualne informacje na temat produktów firmy Promega, należy skontaktować się z działem pomocy technicznej firmy Promega lub zapoznać się z katalogiem produktów firmy Promega dostępnym w Internecie. 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Nr telefonu (linia bezpłatna w USA) Faks TM395 Wersja poprawiona 5/18