Zakażenie pszczoły miodnej patogenem Nosema ceranae. Diagnostyka infekcji wirusowych pszczoły miodnej

Transkrypt

1

2 Zakażenie pszczoły miodnej patogenem Nosema ceranae Diagnostyka infekcji wirusowych pszczoły miodnej

3 Plan 1. Znaczenie ekologiczne i gospodarcze pszczół 2. Choroby pszczół i ich diagnostyka 3. Podstawy technologii phage display 4. Opracowanie szybkiego testu polowego z zastosowaniem przeciwciał

4 alexanderwild.com królowa robotnica truteń

5 Jakie korzyści przynoszą pszczoły człowiekowi? producenci miodu wosku główni zapylacze

6 Jakie korzyści przynoszą pszczoły człowiekowi? 1,5 mln ton miodu na świecie Miód jest odżywczym produktem - cukry - 28% białek - kwasy tłuszczowe - witaminy i minerały - enzymy

7 Pszczoły w liczbach 90% drzew owocowych 30% roślin spożywczych trzecie zwierzę hodowlane 15 mld $ zysku (miód 150 mln) 1 mln kwiatów dziennie (rodzina)

8

9 Choroby pszczół

10 Zagrożenie wymarciem pszczół antybiotyki samobójstwa? CCD infekcje pestycydy drapieżniki

11 Infekcje grzybowe Nosema spp Objawy zakażenia N. ceranae problemy z powrotem do ula krótszy czas życia stan głodu immunosupresja

12 Infekcje grzybowe Nosema spp 1 dysk kotwiczący 2 egzospora 3 endospora 4 błona cytoplazmat. 5 polaroplast lameralny 6 polaroplast tubularny 7 włókno biegunowe 8 aparat jądrowy 9 wakuola tylna

13 Infekcje grzybowe Nosema spp

14 Niektóre wirusy infekujące pszczoły kompleks ABPV-KBV-IAPV wirus ostrego paraliżu pszczół kaszmirski wirus pszczół wirus izraelskiego paraliżu pszczół DWV, SV BQCV CBPV Robotnice A. mellifera zainfekowane DWV

15 Dicistroviridae

16 Diagnostyka chorób pszczół

17 Diagnostyka Nosema spp. i wirusów pszczelich Obecna diagnostyka Nosema nie jest możliwa w warunkach polowych transmisyjna mikroskopia elektronowa mikroskopia kontrastowofazowa multiplex PCR

18 Diagnostyka Nosema spp. - mikroskopia Nosema ceranae Nosema apis

19 Diagnostyka Nosema spp. - PCR ekstrakcja genomowego DNA multipleks PCR analiza produktów PCR

20 Technologia phage display

21 Podstawy technologii phage display selekcja in vitro prezentacja fagowa pozwala na selekcję białek rozpoznających wybrany cel molekularny z puli miliardów wariantów bezpośrednia zależność genotyp - fenotyp

22 bakteriofagi stosowane w phage display to fagi filamentowe (M13, Ff) McCafferty et al. Nature, 348(6301): , www3.nd.edu/~aseriann/chap5b.html/sld087.htm

23 Generacja przeciwciał monoklonalnych w technologii phage display

24 Podstawy technologii phage display fagmid fag pomocniczy E. coli

25 Fragmenty przeciwciał - scfv stabilne tanie w produkcji lepsze penetrowanie tkanki obniżona immunogenność szybciej usuwane z układu krwionośnego Clinical and Developmental Immunology, 2012, Article ID

26 wybór antygenu i metody immobilizacji biopanning, selekcja transdukcja E. coli namnażanie i oczyszczanie fagów kolejna runda selekcji

27

28

29 Opracowanie szybkiego testu polowego z zastosowaniem przeciwciał

30 Szybki test polowy - koncepcja

31 Selekcja przeciwciał skierowanych przeciw N. ceranae strategia Selekcja przeciwciał wobec rekombinowanego białka ściany spor Selekcja przeciwciał wobec oczyszczonych spor N. ceranae

32 Selekcja przeciwciał skierowanych przeciw N. ceranae pozyskanie materiału

33 Selekcja przeciwciał skierowanych przeciw N. ceranae strategia C A B C D E F G H C8 B10 F8

34 Selekcja przeciwciał skierowanych przeciw sporom N. ceranae rezultaty Uzyskanie przeciwciał rozpoznających specyficznie białko rekombinowane Uzyskanie przeciwciał rozpoznających oczyszczone spory Optymalizacja przeciwciał i konstrukcja testu paskowego

35 Selekcja przeciwciał skierowanych przeciw wirusom cele i strategia immobilizacja antygenu (peptydy i całe wirusy) selekcja elucja i analiza WYZWANIE: otrzymanie przeciwciał specyficznych wobec czterech różnych wirusów

36 Selekcja przeciwciał skierowanych przeciw wirusom cele i strategia scfv rozpoznające jedną cząsteczkę wirusa selekcja pozytywna selekcja negatywna selekcja pozytywna poszukiwanie odpowiadających klonów bez reakcji krzyżowych selekcja negatywna selekcja pozytywna

37 Podsumowanie Pszczoły odgrywają ogromną rolę w ekosystemie i gospodarce masowo giną Potrzebna jest metoda diagnostyczna, która umożliwi szybkie wykrycie infekcji w warunkach polowych W Pure Biologics pozyskujemy przeciwciała metodą prezentacji fagowej Obiecujące wyniki opracowywanego testu polowego do diagnostyki

38 Dziękuję za uwagę