Wpływ egzogennych fosfolipidów na HDL

Wielkość: px

Rozpocząć pokaz od strony:

Download "Wpływ egzogennych fosfolipidów na HDL"

Seweryna Niemiec
7 lat temu
Przeglądów:

1 Wpływ egzogennych fosfolipidów na HDL Praca wykonana w Katedrze Biochemii Klinicznej GUMed Anna Gliwińska V OML PROMOTOR prof. dr hab. Andrzej Szutowicz OPIEKUN Dr n. przyr. Małgorzata Wróblewska

2 Krążenie apo A-I pomiędzy cząstkami należącymi do różnych podfrakcji HDL podstawą transportu zwrotnego cholesterolu Prawdopodobny mechanizm włączania apo A-II do cząstek HDL

3 Cel pracy Celem pracy były badania nad procesem powstawania cząstek o cechach prekursorów HDL, zawierających apolipoproteinę A-II, w wyniku oddziaływania pomiędzy liposomami lecytynowymi i lipoproteinami wysokiej gęstości nie zmodyfikowanymi przez ultrawirowanie.

4 Materiały Pulowana surowica S-HDL - HDL uzyskane przez wytrącenie lipoprotein zawierających apo B heparyną i MnCl 2 Liposomy z lecytyny jaja kurzego Mieszaniny inkubacyjne surowicy lub S-HDL z liposomami lecytynowymi Osady heparyna-cacl 2 - uzyskane przez wytrącenie z mieszanin inkubacyjnych frakcji pre-β i liposomów za pomocą heparyny i CaCl 2 Supernatanty zawierające α-hdl - uzyskane znad osadów heparyna-cacl 2 Metody Elektroforeza w żelu agarozowym Elektroforeza dwukierunkowa w żelu poliakrylamidowym w warunkach niedenaturujących Immunodetekcja frakcji lipoproteinowych zawierających apo AI i apo A-II Wytrącanie liposomów i frakcji pre- β z mieszanin inkubacyjnych za pomocą heparyny i CaCl 2 Oznaczanie ilości FL, CHW metodą enzymatyczną Oznaczanie ilości apolipoprotein metodą nefelometryczną

5 Dystrybucja apo A-I w surowicy i S-HDL Rozdział metodą elektroforezy dwukierunkowej/ immunoblotting z przeciwciałami przeciwko ludzkiej apo A-I Surowica S-HDL Precypitacja lipoprotein zawierających apo B heparyną i MnCl 2 nie wpływa na rozmieszczenie frakcji α-hdl i nie pozbawia HDL cząstek pre-β

6 Dystrybucja apo A-II w surowicy i w S-HDL Rozdział metodą elektroforezy dwukierunkowej/ immunoblotting z przeciwciałami przeciwko ludzkiej apo A-II Rozdział metodą elektroforezy w żelu agarozowym/ immunoblotting z przeciwciałami przeciwko ludzkiej apo A-I lub apo A-II Surowica S-HDL W surowicy i w S-HDL apo A-II związana jest z frakcją α-hdl.

7 Dystrybucja apoa-i i apoa-ii w mieszaninie S-HDL i liposomów Rozdział metodą elektroforezy dwukierunkowej/ immunoblotting z przeciwciałami przeciwko ludzkiej apo A-II. L-FL/HDL-FL 5:1 apoa-i apoa-ii Po inkubacji S-HDL z liposomami zarówno apo A-I jak i apo A-II przemieszczają się do nowych frakcji lipoproteinowych wędrujących z ruchliwością pre-β. Frakcje te są heterogenne i złożone z kilku klas cząstek. Część apo A-II przemieszcza się też do liposomów.

8 Dystrybucja apo A-I i apo A-II w mieszaninie surowicy i liposomów Rozdział metodą elektroforezy dwukierunkowej/ immunoblotting z przeciwciałami przeciwko ludzkiej apo A-I lub apo A-II. L-FL/HDL-FL 5:1 apoa-i apoa-ii Po inkubacji surowicy z liposomami apo A-I i apo A-II przemieszczają się do cząstek o ruchliwości pre-β Cząstki pre-β zawierające apo A-II mają większe rozmiary apo A-II uwolnione z HDL wbudowują się do VLDL?

9 Zmiany zawartości lipidów i apolipoprotein w α-hdl po interakcji z liposomami Po inkubacji S-HDL z liposomami frakcje preβ i liposomy wytrącano za pomocą heparyny i CaCl 2. Stężenia lipidów mierzono w supernatantach zawierających α-hdl, stężenia apolipoprotein w osadach heparyna-cacl 2. Wyniki przedstawiają wartość średnią ± SE dla n=3 Proporcjonalnie do stężenia FL liposomów w mieszaninie inkubacyjnej: - cząstki α-hdl akceptują znaczne ilości FL, - cząstki α-hdl tracą znaczną część CHW, - cząstki α-hdl tracą od kilku do kilkunastu procent zawartości apo A-I i apo A-II.

10 Wpływ stężenia fosfolipidów egzogennych na rodzaj cząstek we frakcji pre-β powstającej podczas interakcji S-HDL z liposomami. Po inkubacji S-HDL z liposomami frakcje pre-β i liposomy wytrącano za pomocą heparyny i CaCl 2. Osady heparyna-cacl 2 rozdzielano w gradiencie żelu poliakrylamidowego. Analiza rozkładu wielkości cząstek zawierających apo A-I i/lub apoa-ii we frakcjach pre-β przy stosunkach L-FL/HDL-FL 3:1 i 5:1 wykazała, że każda subpopulacja rozdziela się na porównywalne klasy cząstek niezależnie od stosunku L-FL/HDL-L. Cząstki pre-β zawierające apo A-I i/lub apo A-II powstają przy określonych stosunkach ilościowych lipidów i białek.

11 Wnioski W wyniku oddziaływania pomiędzy HDL i liposomami lecytynowymi, apo A-I i apoa-ii oddzielają się od HDL. Uwolnione apolipoproteiny wiążąc się z FL i CHW tworzą nowe populacje cząstek wędrujących z ruchliwością pre-β podczas rozdziału elektroforetycznego w żelu agarozowym. Cząstki o ruchliwości pre-β zawierające apo A-I lub/i apo A-II powstają przy określonych stosunkach ilościowych lipidów i białek. Apo A-II uwalniana z HDL w środowisku pełnej surowicy prawdopodobnie wiąże się częściowo z cząstkami VLDL. Powstawanie cząstek zawierających apo A-II o ruchliwości pre-β może świadczyć o możliwym udziale apo A-II w przemianach HDL zachodzących w osoczu.

Podobne dokumenty

SEMINARIUM 2 15. 10. 2015

SEMINARIUM 2 15. 10. 2015 Od tłuszczu pokarmowego do lipoprotein osocza, metabolizm, budowa cząsteczek lipoprotein, apolipoproteiny, znaczenie biologiczne, enzymy biorące udział w metabolizmie lipoprotein,