QUANTA Flash h-ttg IgG Reagents Do diagnostyki In Vitro

Transkrypt

1 QUANTA Flash h-ttg IgG Reagents Do diagnostyki In Vitro Przeznaczenie QUANTA Flash h-ttg IgG jest to test chemiluminescencji (CIA) do półilościowego wykrywania przeciwciał IgG przeciwko ludzkiej transglutaminazie tkankowej (h-ttg) w surowicy człowieka. W połączeniu z wynikami klinicznymi i innymi testami laboratoryjnymi do diagnozowania celiakii enteropatii związanej z nadwrażliwością na gluten, szczególnie u pacjentów z selektywnym niedoborem IgA, wykorzystać można badanie na obecność przeciwciał IgG przeciwko h-ttg. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Celiakia (ang. Celiac disease, CD) to choroba przewlekła, której główne cechy obejmują stan zapalny i charakterystyczne spłaszczenie błony śluzowej przewodu pokarmowego, którego skutkiem jest zespół złego wchłaniania znany pod nazwą enteropatii związanej z nadwrażliwością na gluten. Dokładna etiologia choroby pozostaje nieznana, ale gliadyna rozpuszczalna w alkoholu frakcja glutenu pszennego, jest zdecydowanie czynnikiem toksycznym. 1, 2 Pierwotnie do diagnozowania celiakii i stosowano serię biopsji jelitowych. Ostatnio zasugerowano wykonywanie badań serologicznych na obecność przeciwciał przeciwko gliadynie, śródmięsnej i ttg, jako badań przesiewowych wykonywanych u pacjentów z podejrzeniem enteropatii związanej z nadwrażliwością na gluten, jak również do monitorowania przestrzegania diety. 3 5 Europejskie Towarzystwo Gastroenterologii Pediatrycznej i Żywienia (European Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN)) w celu zmniejszenia liczby biopsji jelita potrzebnych do postawienia diagnozy zaleciło stosowanie markerów serologicznych, takich jak przeciwciała przeciwko gliadynie i śródmięsnej. 5 Stwierdzono, że antygenem śródmięsnej jest enzym ttg, odpowiedzialny za powstawanie wiązań sieciujących między białkami. 6 Antygen h-ttg uzyskano w wyniku zastosowania techniki rekombinacji i w porównaniu z antygenem z wątroby świnki morskiej może wykazywać się pewnymi zaletami. 7, 8 Wiele osób chorujących na celiakię z wystarczającym poziomem IgA nie wytwarza przeciwciał IgG przeciwko ttg. Większość osób z niedoborem IgA wytwarza takie przeciwciała IgG. Przegląd literatury wykazał, że 106 ze 108 (98%) pacjentów chorych na celiakię, u których występuje selektywny niedobór IgA, ma pozytywne wyniki przeciwciał IgG przeciwko ttg. 9 Zasady badania Oczyszczonym rekombinowanym antygenem h-ttg opłaszcza się paramagnetyczne kulki, które przechowuje się we wkładzie z odczynnikiem w warunkach utrzymujących antygen w jego stanie reaktywnym. Gdy wkład do testu gotowy jest do pierwszego użycia, do probówki zawierającej zakonserwowane kulki dodaje się roztwór buforu, a kulki miesza się z buforem. Następnie wkład z odczynnikiem umieszcza się w urządzeniu BIO-FLASH. 1

2 Urządzenie rozcieńcza próbkę surowicy pacjenta w stosunku 1:17 Układ płuczący dodanym do jednorazowej plastikowej kuwetki. Małe ilości rozcieńczonej próbki surowicy pacjenta, kulki opłaszczone h-ttg i bufor testowy łączy się w drugiej kuwetce i miesza. Kuwetkę tę inkubuje się w temperaturze 37 C. Następnie kulki magnetyzuje się i kilkukrotnie płucze. Potem do kuwetki dodaje się przeciwciało przeciwludzkie IgG skoniugowane z izoluminolem i inkubuje w temperaturze 37 C. Kulki ponownie magnetyzuje się i kilkakrotnie płucze. Po dodaniu do kuwetki odczynników ( wyzwalaczy ) koniugat izoluminolu wywołuje luminescencję. Światło wytworzone w wyniku tej reakcji mierzy się w umownych jednostkach luminescencji (ang. Relative Light Units, RLU) przy użyciu układu optycznego BIO-FLASH. Ilość jednostek RLU odpowiada ilości związanego koniugatu izoluminolu, co z kolei odpowiada ilości przeciwciał IgG przeciwko h-ttg związanych z kulkami opłaszczonymi h-ttg. W teście QUANTA Flash h-ttg IgG wykorzystuje się predefiniowaną, właściwą dla każdej serii testu, krzywą wzorcową, którą urządzenie odczytuje z kodu kreskowego znajdującego się na wkładzie z odczynnikiem. W oparciu o wyniki uzyskane po oznaczeniu dwóch kalibratorów tworzy się właściwą dla analizatora krzywą roboczą, którą oprogramowanie wykorzystuje do obliczenia liczby jednostek chemiluminescencji (ang. chemiluminescent units, CU) na podstawie wartości RLU otrzymanej dla każdej próbki. Odczynniki 1. Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash h-ttg IgG zawiera poniższe odczynniki wystarczające do przeprowadzenia 50 oznaczeń: a. kulki paramagnetyczne opłaszczone h-ttg, zakonserwowane przed pierwszym użyciem. b. Bufor testowy zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwanty. c. Środek śledzący IgG przeciwciało przeciwludzkie IgG znakowane izoluminolem, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant. 2. Bufor do odtwarzania, 1 fiolka barwa różowa, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwanty. Ostrzeżenia 1. Bufor testowy zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%), która według stanu Kalifornia wywołuje raka. 2. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją kanalizacyjną, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 3. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony indywidualnej. 4. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro. 2. Tego testu można używać jedynie z analizatorem BIO-FLASH. 3. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury odtwarzania. 4. Nie wolno używać surowicy lipemicznej, żółtaczkowej lub całkowicie zhemolizowanej. 2

3 5. Po otwarciu, wkład z odczynnikiem musi być przechowywany w karuzeli na odczynniki tego urządzenia. Należy uważać, by nie rozlać odczynników w chwili, gdy wkład z odczynnikiem jest umieszczany w analizatorze po raz pierwszy. 6. Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem urządzenia. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, wybielacz, etanol lub detergent, mogą spowodować zakłócenia w teście. Należy przestrzegać zaleceń dotyczących procedury czyszczenia analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. Warunki przechowywania Nieotwarte wkłady z odczynnikami oraz bufor do odtwarzania przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki zachowują trwałość do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. Otwarte wkłady z odczynnikami należy przechowywać wewnątrz urządzenia. Oprogramowanie urządzenia BIO-FLASH monitoruje datę przydatności znajdującego się wewnątrz urządzenia wkładu oraz serii wkładu z odczynnikiem. System nie pozwala na użycie wkładu, którego termin ważności upłynął. Pobieranie, przygotowanie i obsługa próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub poddanych obróbce cieplnej. Nie używać surowicy lipemicznej, żółtaczkowej lub całkowicie zhemolizowanej. Po pobraniu surowica powinna zostać oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI H18-A4 zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1. Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2. Jeżeli test nie zostanie zakończony w ciągu 8 godzin, próbki należy przechowywać w lodówce w temperaturze 2 8 C. 3. Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Procedura Dostarczone materiały 1 Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash h-ttg IgG 1 Bufor do odtwarzania 1 Pipeta do przenoszenia Wymagane materiały niedołączone do zestawu Analizator BIO-FLASH z obsługującym go komputerem Układ płuczący BIO-FLASH (nr kat.: ) Wyzwalacze BIO-FLASH (nr kat.: ) Kuwetki BIO-FLASH (nr kat.: ) Kalibratory QUANTA Flash h-ttg IgG (Numer części: ) Kontrole QUANTA Flash h-ttg IgG (Numer części: ) 3

4 Stosowanie analizatora chemiluminescencyjnego BIO-FLASH 1. Szczegółowe instrukcje dotyczące pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. Dodatkowe informacje i pomoc związaną z wykrywaniem i usuwaniem usterek w testach można uzyskać kontaktując się z działem pomocy technicznej firmy INOVA Diagnostics, Inc. dostępnym pod adresem i numerem telefonu podanym na końcu tej instrukcji. 2. W celu opróżnienia zbiornika na odpady stałe należy otworzyć szufladkę na odpady. Wyjąć zbiornik na odpady stałe i odpowiednio zutylizować zużyte kuwetki. Włożyć z powrotem zbiornik na odpady stałe, zamknąć szufladkę na odpady i kliknąć Yes w oknie Empty Waste Drawer. 3. Aby wymienić wyzwalacze, należy kliknąć przycisk Bulks Inventory F9 (na górze po prawej stronie). a. Na ekranie Inventory Bulks kliknąć przycisk Triggers po lewej stronie. Zostanie wyświetlone nowe okno zatytułowane Add Triggers Remove old bottles. b. Należy otworzyć i wyjąć szufladkę na odpady analizatora BIO-FLASH. Zutylizować wszelkie kuwetki znajdujące się w szufladce na odpady stałe. Kliknąć Yes w oknie Empty Waste Drawer. Wyjąć butelki z wyzwalaczami z uchwytów i kliknąć przycisk Next. Odkręcić butelki ze starymi wyzwalaczami i zastąpić je nowymi wyzwalaczami. Czynności należy wykonywać po kolei i odpowiednio dopasować oznaczone kolorem zakrętki (biały do białego, czerwony do czerwonego). c. Przestrzegać instrukcji w nowym oknie Add Triggers Add Trigger 2 bottle. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego, umieścić wyzwalacz 2 w uchwycie oznaczonym kolorem białym. Kliknąć Next. d. Przestrzegać instrukcji w oknie Add Triggers Add Trigger 1 bottle. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego, umieścić wyzwalacz 1 w uchwycie oznaczonym kolorem czerwonym. Kliknąć Finish. Włożyć z powrotem i zamknąć szufladkę na odpady. 4. Aby wymienić zbiornik układu płuczącego, należy kliknąć przycisk Bulks Inventory F9 (na górze po prawej stronie). Na ekranie Inventory Bulks kliknąć przycisk Sys. Rinse. W nowym oknie Add System Rinse Remove bottles kliknąć Next. Przestrzegać instrukcji w nowym oknie Add System Rinse Add bottle. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego, kliknąć Finish, jeśli będzie to konieczne. 5. W celu opróżnienia pojemnika na odpady płynne na ekranie Inventory Bulks kliknąć przycisk Fluid Waste. Usunąć i zutylizować odpady płynne. Kliknąć Next. Po wymianie pustej butelki kliknąć Finish. 4

5 Sposób przygotowania Przygotowanie wkładu z odczynnikiem Przy pierwszym użyciu wkładu z odczynnikiem, należy wykonać następujące czynności, aby dokładnie umieścić wkład w analizatorze BIO-FLASH. Uwaga: Nie używać wkładu z odczynnikiem, jeśli widoczne są jakiekolwiek ślady uszkodzenia. 1. Umieścić wkład z odczynnikiem na stałym podłożu. Przytrzymać wkład z odczynnikiem w jednej dłoni. Drugą ręką zdecydowanym ruchem chwycić czerwony pasek zabezpieczający z tyłu wkładu z odczynnikiem i wyciągnąć go do końca. 2. Nacisnąć dwa paski po bokach zatyczki przebijającej (część szara) i nacisnąć górną część wkładu z odczynnikiem, aż zatrzaśnie się we właściwej pozycji zablokowania. Paski nie powinny być widoczne. NIE ODWRACAĆ OTWARTEGO WKŁADU. 3. Odtworzyć mikrocząstki h-ttg: a. Otworzyć fiolkę z buforem do odtwarzania i pobrać płyn dostarczoną pipetą. Zostanie użyta cała zawartość fiolki. b. Przesunąć drzwi w pokrywie wkładu z odczynnikiem do pozycji otwartej, delikatnie naciskając na wąską stronę wkładu z odczynnikiem i utrzymywać je w takiej pozycji. W sposób analityczny przenieść całą zawartość fiolki do probówki z odczynnikiem zawierającym mikrocząstki przez jeden otwór na górze wkładu z odczynnikiem. c. Zmieszać zawartość probówki z odczynnikiem zawierającym mikrocząstki, zasysając i zawieszając płyn co najmniej 30 razy. Jeśli będą widoczne grudki mikrocząstek, należy kontynuować mieszanie roztworu kolejne 30 razy. Jeśli nie uda się odtworzyć zawiesiny mikrocząstek, NIE WOLNO UŻYWAĆ WKŁADU. d. Przed wyjęciem pipety z probówki i jej wyrzuceniem należy upewnić się, że cały płyn został z niej usunięty. 4. Zdjąć naklejkę z górnej części wkładu z odczynnikiem, odsłaniając trzy otwory. 5. Umieścić wkład z odczynnikiem w dowolnym wolnym gnieździe karuzeli na odczynniki urządzenia BIO-FLASH. Kalibracja badania 5

6 1. Każda nowa seria wkładu z odczynnikiem musi zostać wykalibrowana przed pierwszym użyciem. Oprogramowanie nie zezwoli na wykorzystanie nowej serii, dopóki nie zostanie ona skalibrowana. 2. Dokładne wskazówki, jak kalibrować wkład z odczynnikiem, można znaleźć w części zatytułowanej QUANTA Flash h-ttg IgG Calibrators tej instrukcji. 3. Po zatwierdzeniu kalibracji skalibrowana seria wkładu z odczynnikiem jest gotowa do użycia. Programowanie i badanie próbek 1. Nacisnąć przycisk Worklist na górze ekranu i wybrać kartę Racks na dole. 2. Wybrać statyw z próbkami do badania, zaznaczając nazwę tego statywu na ekranie lub skanując kod kreskowy za pomocą ręcznego skanera kodów kreskowych. Zeskanować lub wpisać nazwę próbki, wybrać typ próbki, typ pojemnika (probówka/kubeczek) i wybrać z panelu testu opcję h_ttg_igg. Powtórzyć te czynności dla wszystkich próbek. 3. Umieścić próbki w wybranych pozycjach na statywie na próbki i umieścić go na karuzeli na próbki analizatora. 4. Gdy wszystkie wymagane substancje znajdują się w analizatorze, na górze ekranu zostanie wyświetlona zielona ikona start. Aby rozpocząć badanie, należy nacisnąć ikonę Start F4. Kontrola jakości Kontrole testu QUANTA Flash h-ttg IgG (sprzedawane oddzielnie INOVA, numer produktu ) obejmują zarówno kontrolę pozytywną jak i negatywną h-ttg IgG. Szczegółowe wskazówki dotyczące metody wprowadzania do oprogramowania wszystkich wymaganych informacji dla każdej kontroli, jak również metody badania kontroli, można znaleźć w instrukcji w części zatytułowanej QUANTA Flash h-ttg IgG Controls Kontrole należy stosować jednokrotnie każdego dnia używania testu, jednak użytkownicy powinni również wziąć pod uwagę krajowe/lokalne wymagania. Obliczanie wyników W firmie INOVA dla każdej nowej serii testu QUANTA Flash h-ttg IgG tworzona jest pięciopunktowa krzywa wzorcowa. Parametry krzywej są zakodowane w kodzie kreskowym każdego wkładu z odczynnikiem. W trakcie kalibracji na podstawie krzywej wzorcowej tworzona jest krzywa wzorcowa dla danego urządzenia. Jest ona wykorzystywana do konwersji wartości RLU na CU. Następnie, zgodnie z tabelą poniżej, można zaklasyfikować reaktywność przeciwciał IgG przeciw h-ttg. Reaktywność CU Negatywna <20 Słabo pozytywna Pozytywna >30 Reaktywność w CU jest bezpośrednio związana z mianem autoprzeciwciał w próbce pochodzącej od pacjenta. Wzrosty i spadki stężeń autoprzeciwciał u pacjenta będą odzwierciedlone w analogicznym wzroście lub spadku CU, która to zmiana jest proporcjonalna do ilości przeciwciał. Analityczny zakres pomiarowy (AMR) testu (określony przez najniżej i najwyżej położony punkt na krzywej wzorcowej) to 3,75 CU do 2560,0 CU, co odpowiada liniowemu zakresowi testu. Jeśli próbka od pacjenta daje wynik większy niż 3,75 CU, wówczas system BIO-FLASH wyświetli go jako >3,8 CU. Ponieważ wartość ta jest mniejsza niż 20 CU, wynik ten uznawany jest za negatywny. Jeśli próbka od pacjenta daje wynik większy niż 2560,0 CU, wówczas system BIO-FLASH wyświetli go jako >2560,0 CU. Wynik ten uznawany jest za pozytywny. Oprogramowanie BIO-FLASH udostępnia opcję automatycznego ponownego przeprowadzenia badania. Jeśli wybrano tę opcję, urządzenie automatycznie wykona ponowną analizę próbki, dla której wynik wynosi >2560,0 CU po dodatkowym 10-krotnym rozcieńczeniu, dzięki czemu zmierzona wartość będzie odpowiadać AMR. Ostateczny wynik zostanie obliczony przez oprogramowanie z uwzględnieniem dodatkowego współczynnika rozcieńczenia. Ponieważ najwyższa zmierzona wartość to 2560,0 CU, najwyższa wartość, jaką można wyświetlić, to 25,600 CU. Interpretacja wyników 6

7 Każde laboratorium powinno zweryfikować dostarczony przez producenta zakres odniesienia i może ustalić swój zakres prawidłowy na podstawie własnych kontroli i populacji pacjentów, zgodnie z indywidualnie ustalonymi procedurami. Zaleca się, aby wyniki dostarczane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki uzyskano przy zastosowaniu immunologicznego testu chemiluminescencji INOVA QUANTA Flash h- ttg IgG. Nie można stosować zamiennie wartości uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych innych producentów. Ograniczenia badania 1. Nie u wszystkich pacjentów z celiakią i opryszczkowatym zapaleniem skóry występują autoprzeciwciała IgG h-ttg. Wyniki tego testu powinny być użyte w powiązaniu z wynikami badań klinicznych i innych testów serologicznych. 2. Wyniki tego testu powinny być użyte w powiązaniu z wynikami badań klinicznych i innych testów serologicznych. 3. Nieprawidłowe odtworzenie kulek opłaszczonych h-ttg może doprowadzić do uzyskania niższych wartości niż w przypadku, gdyby kulki odtworzono w sposób prawidłowy. 4. Charakterystyka wyników tego testu nie została ustanowiona dla macierzy innych niż surowica. Spodziewane wartości Wartości graniczne testu określono, przeprowadzając badanie 446 scharakteryzowanych klinicznie próbek próbek krwi z jednego pobrania od pacjentów w sposób jednoznacznie zdiagnozowanych jako cierpiących jako lub nie cierpiących na celiakię (a nie będących na diecie bezglutenowej). W tym zestawie szkoleniowym wspomniane próbki 117 klinicznie pozytywnych i 329 klinicznie negatywnych wykorzystano do dopasowania wartości granicznych testu do 20 CU tak, aby zoptymalizować czułość i swoistość testu odpowiednio do 49,6% i 97,6%. Porównanie metody z zastosowaniem analizatora predykatywnego Próbki do przeprowadzenia analizy porównawczej metody obejmowały próbki z klinicznej walidacji metody (pacjenci z CD, bez CD i z opryszczkowatym zapaleniem skóry), których wyniki mieściły się w zgłaszanym zakresie testu. Próbki te badano zarówno przy użyciu testu QUANTA Flash h-ttg IgG jak i predykatowego testu ELISA. Porównanie metody (N = 111) QUANTA Flash h-ttg IgG CIA Pozytywna Negatywna Łącznie h-ttg IgG ELISA Pozytywna Negatywna Łącznie * Zgodność procentowa (95% ufności) Zgodność wyników pozytywnych = 90,2% (76,9 97,3%) Zgodność wyników negatywnych = 100% (94,9 100%) Zgodność łącznie = 96,4 (9,1 98,6%) *U trzech pacjentów test ELISA wykazał wynik niski pozytywny (2 DH i 1 CD). Czwarty pacjent pochodził z grupy bez CD. 7

8 Czułość i swoistość kliniczna Do klinicznej walidacji metody wykorzystano próbki od 199 zdrowych krwiodawców, 71 od osób nie cierpiących na celiakię (kontrole), 68 stanowiły próbki z warsztatów ttg (18 CD i 50 bez CD (kontrole)), 23 dodatkowe próbki CD pochodziły z biblioteki surowic firmy INOVA, a 7 próbek pochodziło od znanych przypadków CD z selektywnym niedoborem IgA. Próbki te badano przy użyciu zestawu QUANTA Flash h-ttg IgG CIA. Wyniki badania przedstawiono poniżej: Kliniczne (N = 368) QUANTA Flash h-ttg IgG CIA Diagnoza Czułość i swoistość CD Bez CD Łącznie (95% ufności) Pozytywna 24 4* 28 Czułość = 50,0% (35,2-64,8%) Negatywna 24** Swoistość = 98,4% (96,4-99,5%) Łącznie *Trzej pacjenci pochodzili z grupy zdrowych krwiodawców, dwaj mieli również pozytywny wynik testów ELISA ttg IgA i DGP IgG/A. Czwarty pacjent miał wynik pozytywny przeciwciał pylori IgA H. **Dwunastu pacjentów miało również wynik negatywny na ELISA ttg IgG, 1 miał wyniki niski pozytywny, a pozostałych 11 pacjentów nie było przebadanych za pomocą testu ELISA Wyniki od 7 pacjentów CD z selektywnym niedoborem IgA są przedstawione w poniższej tabeli. CD z niedoborem IgA (N = 7) QUANTA Flash h-ttg IgG CIA Diagnoza Analiza CD Bez CD Łącznie (95% ufności) Pozytywna Czułość 85,7% (42,1 99,6%) Negatywna 1* 0 1 Łącznie *Ta próbka miała wynik niski pozytywny w teście ttg IgG ELISA. Precyzja i powtarzalność Precyzję testu QUANTA Flash h-ttg IgG określono, przeprowadzając badania próbek od 7 pacjentów zgodnie z CLSI EP5-A2; uzyskane dane podsumowano poniżej: W ramach serii Pomiędzy seriami Między dniami Łącznie Próbka N Średnia (CU) SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV Pacjent A ,6 26,9 3,4% 21,6 2,8% 44,9 5,7% 56,7 7,2% Pacjent B 88 46,7 1,7 3,5% 1,5 3,3% 2,7 5,9% 3,5 7,6% Pacjent C 88 21,0 0,7 3,3% 0,8 4,0% 1,1 5,1% 1,5 7,2% Pacjent D 88 25,0 0,8 3,3% 1,0 4,1% 1,3 5,3% 1,9 7,4% Pacjent E 88 34,0 1,1 3,1% 1,8 5,4% 2,0 5,9% 2,9 8,6% Pacjent F 88 20,6 0,8 3,9% 0,6 2,8% 1,2 5,7% 1,5 7,4% Pacjent G 88 13,8 0,6 4,1% 0,4 2,8% 0,6 4,2% 0,9 6,6% 8

9 Analityczny zakres pomiarowy: Granice i liniowość Według CLSI EP17-A dolna granica wykrywalności dla tego testu wynosi w przybliżeniu 582 RLU. Jest to wartość, która znajduje się zdecydowanie poniżej dolnej granicy analitycznego zakresu pomiarowego (3,8 CU). Cały analityczny zakres pomiarowy, od 3,8 CU do 2560,0 CU, jest liniowy. Badanie liniowości przeprowadzono zgodnie z CLSI EP6-A, a uzyskane dane podsumowano poniżej: Próbka Zakres testu Nachylenie Przecięcie z osią Y (CU) (PU 95%) (PU 95%) R² 1 od 8,5 do 286,6 1,02 (od 0,97 do 1,07) 2,2 (od -5,19 do 9,58) 0,99 2 od 10,0 do 191,7 1,12 (od 1,02 do 1,22) -2,63 (od -12,05 do 6,80) 0,98 3 od 54,5 do 1624,8 1,05 (od 0,99 do 1,10) -6,40 (od -52,19 do 39,41) 0,99 4 od 6,2 do 40,3 1,09 (od 0,97 do 1,22) -1,25 (od -4,14 do 1,63) 0,98 5 od 5,1 do 7,8 1,37 (od 0,70 do 2,05) -2,80 (od -7,08 do 1,49) 0,93 6 od 16,0 do 468,0 1,03 (od 1,00 do 1,07) -12,70 (-21,90 do -3,50) 1,00 7 od 857,0 do 3407,0 1,23 (od 0,98 do 1,48) -880,6 (od -1418,2 do -280,0) 0,96 9

10 QUANTA Flash h-ttg IgG Calibrators Do diagnostyki In Vitro Przeznaczenie Kalibratory QUANTA Flash h-ttg IgG przeznaczone są do zastosowania z testem chemiluminescencji (CIA) QUANTA Flash h-ttg IgG w urządzeniu BIO-FLASH. Każdy kalibrator ustala punkt odniesienia dla krzywej roboczej, którą wykorzystuje się do określenia ilości jednostek chemiluminescencji (CU) w pomiarach przeciwciał IgG przeciwko h-ttg w surowicy. Podsumowanie i zasady badania W teście QUANTA Flash h-ttg IgG CIA wykorzystuje się predefiniowaną, właściwą dla każdej serii testu, krzywą wzorcową (Master Curve), która zakodowana jest w kodzie kreskowym wkładu z odczynnikiem. Kalibratory QUANTA Flash h-ttg IgG opracowano w celu uzyskania właściwej dla urządzenia krzywej roboczej na bazie parametrów krzywej wzorcowej, przy czym punkt decyzji zależy od charakterystyki wydajności i oceny klinicznej QUANTA Flash h-ttg IgG CIA. Przed oceną ich wartości kalibratory przebadano na wielu analizatorach z zastosowaniem wielu serii odczynników. Odczynniki 1. Kalibrator 1 QUANTA Flash h-ttg IgG: Dwie (2) probówki oznakowane kodami kreskowymi, zawierające 0,3 ml wstępnie rozcieńczonego odczynnika gotowego do użytku. Kalibratory zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko h-ttg w buforze, stabilizatory oraz środki konserwujące. 2. Kalibrator 2 QUANTA Flash h-ttg IgG: Dwie (2) probówki oznakowane kodami kreskowymi, zawierające 0,3 ml wstępnie rozcieńczonego odczynnika gotowego do użytku. Kalibratory zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko h-ttg w buforze, stabilizatory oraz środki konserwujące. Ostrzeżenia 1. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowaniu kalibratorów dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciw HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego też względu kalibratory QUANTA Flash h-ttg IgG należy użytkować w ten sam sposób, jak materiał potencjalnie zakaźny Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony indywidualnej. 3. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro. 2. Kalibratory QUANTA Flash h-ttg IgG przeznaczone są do zastosowania z testem QUANTA Flash h-ttg IgG. 3. Nie przenosić kalibratorów do innych probówek. Kody kreskowe na probówkach wykorzystywane są przez analizator do dopasowania kalibratorów do odpowiedniego typu testu. 4. Po otwarciu probówki z kalibratorem i umieszczeniu jej w urządzeniu można zużyć ją w 10

11 ciągu 8 godzin. Po tym czasie odczynnik należy wyrzucić. 5. Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem urządzenia. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, wybielacz, etanol lub detergent, mogą spowodować zakłócenia w teście. Należy przestrzegać zaleceń dotyczących procedury czyszczenia analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. Warunki przechowywania 1 Nieotwarte kalibratory przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki zachowują trwałość do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Otwarte kalibratory należy wyrzucić po 8 godzinach. Procedura 1. Każda nowa seria wkładu z odczynnikiem musi zostać wykalibrowana przed pierwszym użyciem. Oprogramowanie nie zezwoli na wykorzystanie nowej serii, dopóki nie zostanie ona skalibrowana. 2. Aby upewnić się, że kalibratory są jednorodne, należy każdy z nich wymieszać. Należy unikać powstawania piany, ponieważ pęcherzyki mogą zaburzać wykrywanie poziomu płynu przez analizator. Zdjąć zatyczkę z każdej probówki zawierającej kalibrator i umieścić obie z nich w statywie na próbki, przy czym kody kreskowe muszą być skierowane przodem do szczelin w statywie. Umieścić statyw na próbki w karuzeli na próbki analizatora BIO-FLASH i zamknąć drzwiczki. Analizator odczyta kody kreskowe na probówkach zawierających kalibratory i zidentyfikuje potrzebny wkład z odczynnikiem. Szczegółowe instrukcje dotyczące pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. 3. Analizator przebada każdy kalibrator w trzech powtórzeniach. Po przebadaniu kalibratorów oprogramowanie będzie wymagać zatwierdzenia kalibracji. Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options Ctrl-M ( ). Wybrać opcję Calibration Ctrl-F3. W oknie Calibration należy zaznaczyć odpowiedni test i kliknąć Details. 4. W nowym oknie Calibration Details należy wybrać rodzaj właśnie dokonanej kalibracji. Zostanie wyświetlona krzywa wzorcowa w formie linii przerywanej i nowa krzywa robocza w formie linii ciągłej. Jeśli wyniki kalibracji są ważne, wówczas na dole ekranu po lewej stronie zostanie wyświetlony przycisk zatwierdzenia. Należy kliknąć przycisk Validate Calibration. 5. Po zatwierdzeniu kalibracji skalibrowana seria wkładu z odczynnikiem jest gotowa do użycia. Zalecane jest, aby kontrole QUANTA Flash h-ttg IgG (sprzedawane oddzielnie numer produktu ) przebadać po uprzednim skalibrowaniu serii wkładu z odczynnikiem. Identyfikowalność Obecnie nie istnieje żadna uznana międzynarodowa norma dotycząca pomiarów przeciwciał IgG przeciwko ludzkiej transglutaminazie tkankowej. Ograniczenia Kalibratory te są przeznaczone do przeprowadzenia 4 kalibracji. Całkowity czas przez jaki probówki z kalibratorem mogą pozostawać otwarte w analizatorze wynosi 8 godzin. Jeśli kalibratory pozostaną otwarte w analizatorze przez dłuższy okres, wówczas należy je wyrzucić. Stosowanie tych samych probówek z kalibratorami przez czas dłuższy niż 8 godzin może skutkować nieprawidłową kalibracją testu, co z kolei może doprowadzić do uzyskania błędnych wyników. 11

12 QUANTA Flash h-ttg IgG Controls Do diagnostyki In Vitro Przeznaczenie Kontrole QUANTA Flash h-ttg IgG przeznaczone są kontroli jakości zestawu do testu chemiluminescencji (CIA) QUANTA Flash h-ttg IgG, który przeprowadza się w urządzeniu BIO- FLASH. Podsumowanie i zasady badania W skład kontroli testu QUANTA Flash h-ttg IgG wchodzi kontrola negatywna i kontrola pozytywna. Każda z nich zawiera inną ilość przeciwciał IgG przeciwko h-ttg. Kontrola negatywna i pozytywna są używane do monitorowania analitycznego działania testu chemiluminescencyjnego QUANTA Flash h-ttg IgG. Odczynniki 1. Kontrola negatywna QUANTA Flash h-ttg IgG: Dwie (2) probówki opisane kodami kreskowymi zawierające 0,5 ml odczynnika gotowego do użytku. Kontrole zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko h-ttg w buforze, stabilizatory oraz środki konserwujące. 2. Kontrola pozytywna QUANTA Flash h-ttg IgG: Dwie (2) probówki opisane kodami kreskowymi zawierające 0,5 ml odczynnika gotowego do użytku. Kontrole zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko h-ttg, stabilizatory oraz środki konserwujące. Ostrzeżenia 1. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciw HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego też względu kontrole QUANTA Flash h-ttg IgG należy użytkować w ten sam sposób, jak materiał potencjalnie zakaźny Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony indywidualnej. 3. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro. 2. Kontrole QUANTA Flash h-ttg IgG przeznaczone są do zastosowania z testem QUANTA Flash h-ttg IgG. 3. Nie przenosić kontroli do innych probówek. Kody kreskowe na probówkach używane są przez analizator do identyfikacji kontroli. 4. Po otwarciu każdej probówki z kontrolą można użyć do 15 razy, przy średnim czasie przebywania w urządzeniu wynoszącym 10 minut na analizę, łącznie do 2½ godziny. 5. Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem urządzenia. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, wybielacz, etanol lub detergent, mogą spowodować zakłócenia w teście. Należy przestrzegać zaleceń dotyczących procedury czyszczenia analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. 12

13 Warunki przechowywania 1. Nieotwarte kontrole przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki zachowują trwałość do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Kontrole są przeznaczone do 15-krotnego użycia przy średnim czasie przebywania w urządzeniu na analizę wynoszącym 10 minut. Całkowity czas, przez jaki probówki z kontrolą mogą pozostawać otwarte w analizatorze, wynosi 2½ godziny. Jeśli kontrole pozostaną w analizatorze otwarte, łącznie dłużej niż 2½ godz., należy je wyrzucić. 3. Aby zapewnić odpowiednią stabilność, należy usunąć kontrole z systemu natychmiast po pobraniu próbki i przechowywać je w temperaturze 2 8 C w zamkniętej oryginalnej fiolce. Procedura Tworzenie nowego materiału QC dla testu h-ttg IgG: 1. Przed pierwszym użyciem kontroli QUANTA Flash h-ttg IgG w urządzeniu, do oprogramowania należy wprowadzić nazwę, serię, datę przydatności do użycia, wartość (lub dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym. 2. Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options Ctrl-M ( ). Wybrać opcję QC Ctrl-F2. Kliknąć przycisk New QC Material. 3. Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii. W pierwszej kolejności należy wprowadzić do oprogramowania nazwę, numer serii i datę ważności. Następnie kliknąć przycisk Add Assay. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję Show All Assays. Wybrać badanie h-ttg IgG z listy i kliknąć opcję Add. Na końcu należy wprowadzić docelową dawkę i docelowe odchylenie standardowe (SD). Kliknąć Save. Procedurę należy przeprowadzić dla obu kontroli. Tworzenie nowej serii dla istniejących materiałów kontroli jakości (KJ): 1. Przed pierwszym użyciem nowej partii kontroli QUANTA Flash h-ttg IgG do oprogramowania należy wprowadzić partię, datę przydatności do użycia, wartość (lub dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym. 2. Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options Ctrl-M ( ). Wybrać opcję QC Ctrl-F2. Zaznaczyć test h_ttg_igg w kolumnie po lewej stronie. Następnie należy zaznaczyć odpowiedni materiał kontrolny po prawej stronie ( TTGGN w przypadku kontroli negatywnej lub TTGGP w przypadku kontroli pozytywnej). Kliknąć przycisk New QC Lot. 3. Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii. Wprowadzić informacje z tego arkusza do oprogramowania. Powinno to obejmować numer serii, datę przydatności do użycia, docelową dawkę oraz docelowe odchylenie standardowe. Jeśli to konieczne, kliknąć przycisk Add Assay. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję Show All Assays. Wybrać badanie h-ttg IgG z listy i kliknąć opcję Add. Kliknąć Save. Procedurę należy przeprowadzić dla obu kontroli. Zalecane jest, aby kontrole QUANTA Flash h-ttg IgG wykorzystywać jeden raz, każdego dnia kiedy ma zostać użyty test; jednak użytkownicy powinni także wziąć pod uwagę krajowe/lokalne wymagania. Aby upewnić się, że kontrole są homogeniczne, należy każdą z nich wymieszać przed użyciem. Należy unikać powstawania piany, ponieważ pęcherzyki mogą zaburzać wykrywanie poziomu płynu przez analizator. Zdjąć zatyczkę z każdej probówki zawierającej kontrolę i umieścić obie z nich w statywie na próbki, przy czym kody kreskowe muszą być skierowane przodem do szczelin w statywie. Umieścić statyw na próbki w karuzeli na próbki analizatora BIO-FLASH i zamknąć drzwiczki. Urządzenie odczyta kody kreskowe na probówkach zawierających kontrole i zidentyfikuje potrzebny wkład z odczynnikiem. Szczegółowe instrukcje dotyczące pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. 13

14 Identyfikowalność Obecnie nie istnieje żadna uznana międzynarodowa norma dotycząca pomiarów przeciwciał IgG przeciwko ludzkiej transglutaminazie tkankowej. Ograniczenia Kontrole te można wykorzystać 15 razy. Na etykiecie każdej probówki z kontrolą znajduje się szereg 15 pól, które można zakreślać, aby oznaczyć, ile razy kontrola została użyta. Całkowity czas, przez jaki probówki z kontrolą mogą pozostawać otwarte w analizatorze, wynosi 2½ godziny. Jeśli kontrole pozostaną otwarte w urządzeniu przez dłuższy czas, wówczas należy je wyrzucić. Piśmiennictwo 1. JS: Celiac Sprue. New England Journal of Medicine 1991, 325: Strober W: Gluten-sensitive enterophy: A nonallergic immune hypersensitivity of the gastrointestinal tract. J Allergy Clin. Immunol. 1986, 78: McMillan SA, Haughton DJ, Biggart JD, Edgar JD, Porter KG, McNeill TA: Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin, endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy. BMJ 1991, 303: Valdimarsson T, Franzen L, Grodzinsky E, Skogh T, Ström M: Is small bowel biopsy necessary in adults with suspected celiac disease and IgA anti-endomysial antibodies? 100% positive predictive value for celiac disease in adults. Digestive Diseases and Science 1996, 41: Walker-Smith JA, Guandalini S, Schmitz J,Shmerling DH, Visakorpi JK: Revised criteria for diagnosis of celiac disease: Report of working group of European Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN). Arch Diseases of Childhood 1990, 65: Dieterich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO, Schuppan D: Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nature Medicine 1997, 3: Sárdy M, Odenthal U, Kárpáti S, Paulsson M, Smyth N: Recombinant human tissue transglutaminase ELISA for the diagnosis of gluten-sensitive enteropathy. Clin Chem 1999, 45: Sblattero D, Berti I, Trevisiol C, Marzari R, Tommasini A, Bradbury A, Fasano A, Ventura A, Not T: Human recombinant tissue transglutaminase ELISA : an innovative diagnostic assay for celiac disease. Am J Gastroenterology 2000, 95: Villalta D, Alessio MG, Tampoia M, Tonutti E, Brusca I, Bagnasco M, Pesce G, Bizzaro N: Diagnostic accuracy of IgA anti-tissue transglutaminase antibody assays in Celiac disease patients with selective IgA deficiency. Ann NY Acad Sci 2007, 1109: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health 2007, Fifth Edition. 14

15 Zastosowane symbole Diagnostyczne urządzenie medyczne do zastosowań In Vitro Przed użyciem należy zapoznać się z instrukcją Ograniczenia temperaturowe Nie wykorzystywać ponownie Zagrożenia biologiczne Kod partii Numer katalogowy Termin przydatności do użycia Producent Autoryzowany przedstawiciel Zawiera ilość wystarczającą do przeprowadzenia < n > testów Kontrola pozytywna Kontrola negatywna Kalibrator 1 Kalibrator 2 Papierowe pudełko nadaje się do recyklingu Tą stroną do góry QUANTA Flash jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics Inc. BIO-FLASH jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy Biokit S.A

16 Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA Stany Zjednoczone Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): : support@inovadx.com Autoryzowany przedstawiciel na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Niemcy Tel.: Faks: POL Grudzień 2013 r. Wersja 2 16