QUANTA Lite ACA IgA III Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka

Transkrypt

1 QUANTA Lite ACA IgA III Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka Przeznaczenie Test QUANTA Lite TM ACA IgA III to test immunoenzymatyczny (ELISA) do półilościowego oznaczania przeciwciał IgA przeciwko kardiolipinie w surowicy ludzkiej. Obecność przeciwciał przeciwko kardiolipinie może być stosowana w połączeniu z objawami klinicznymi i innymi badaniami laboratoryjnymi, aby wspomóc ocenę ryzyka zakrzepicy u osób cierpiących na toczeń rumieniowaty układowy (SLE) lub zaburzenia toczniopodobne. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Występuje silny związek między obecnością przeciwciał przeciwko kardiolipinie (ACA) a zakrzepicą żylną i tętniczą. 1 Te odkrycia ujawniono po razy pierwszy podczas badania tocznia rumieniowatego układowego (SLE). Do wielu objawów tej choroby należy zakrzepica. Spośród wielu autoprzeciwciał znalezionych w SLE, stwierdzono, że dwa były skierowane przeciwko fosfolipidom, takim jak kardiolipina. 2 Chociaż większość doniesień o przeciwciałach przeciwko kardiolipinie koncentruje się na klasie przeciwciał IgG i/lub IgM 3,4 to niektóre nowe badania wskazują, że podwyższone poziomy przeciwciał przeciwko kardiolipinie klasy IgA także występują u pacjentów z SLE i powiązanymi zaburzeniami. 5,6,7,8 W tych badaniach wartości IgA były wyższe u pacjentów z powikłaniami naczyniowymi oraz małopłytkowością. 7 Zasada badania Oczyszczony antygen kardiolipiny wiąże się z dołkami płytek polistyrenowych w warunkach, które zabezpieczają antygen w jego stanie natywnym. Wstępnie rozcieńczone kontrole i rozcieńczone surowice od pacjentów są dodawane do oddzielnych dołków, umożliwiając obecnym przeciwciałom przeciwko kardiolipinie związanie się z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem przeciwciała przeciw-ludzkiego IgA. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgA znakowanym enzymem związać się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgA znakowanych enzymem, aktywność pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy. Po zatrzymaniu reakcji enzymatycznej dającej produkt barwny obecność lub brak przeciwciał przeciwko kardiolipinie jest oznaczana przez porównanie gęstości optycznej próbki z gęstością pięciopunktowej krzywej kalibracyjnej. Wyniki są podawane w formie półilościowej w standardowych jednostkach IgA przeciw-kardiolipinie (APL). Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta oczyszczonym antygenem kardiolipiny oraz β 2 GPI wołu (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Kontrola negatywna ACA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i surowicę ludzką bez ludzkich przeciwciał przeciwko kardiolipinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 3. Kontrola ACA IgA III, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko kardiolipinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 4. Kalibrator A ACA IgA III, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 5. Kalibrator B ACA IgA III, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 6. Kalibrator C ACA IgA III, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 7. Kalibrator D ACA IgA III, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 8. Kalibrator E ACA IgA III, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 9. Rozcieńczalnik do próbek ACA III, 1 fiolka zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną PBS, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 10. Koncentrat ACA III PBS, 1 fiolka koncentratu 20x barwa czerwona, zawierająca sól fizjologiczną buforowaną PBS, 50 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 11. Koniugat HRP IgA, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgA, 1 fiolka zabarwienie słomkowe, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 12. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 13. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0,344 M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera w koniugacie substancję chemiczną (0,02% chloramfenikol), która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 1

2 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. W związku z tym, kontrola ACA IgA III, kalibratory A E ACA IgA III oraz kontrola negatywna ACA powinny być obsługiwane w taki sam sposób, jak materiał potencjalnie zakaźny Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować osiągnięciem niespójnych wyników. 3. Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła. 4. Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w akceptowalnych limitach. 5. Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga staranności i precyzji. 6. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. 7. Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i osuszaczami, spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania. 8. Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może dać niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP. 9. Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowoduje degradację koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/dezynfekujących dokładnie wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia. Warunki przechowywania 1. Wszystkie odczynniki z zestawu przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2 8 C. 3. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 C. 2

3 Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub lipemicznej surowicy albo próbek. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI (NCCLS) H18-A3 zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2) Jeśli badanie nie zostanie zakończone w ciągu 8 godzin, schłodzić próbkę do temperatury 2 8 C. 3) Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Badanie Dostarczone materiały 1 Płytka z mikrodołkami ELISA z kardiolipiną (12-1 x 8 dołków), z uchwytem 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ACA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli ACA IgA III 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora A ACA IgA III 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora B ACA IgA III 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora C ACA IgA III 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora D ACA IgA III 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora E ACA IgA III 1 50 ml rozcieńczalnika do próbek ACA III 1 50 ml koncentratu ACA III PBS, koncentrat 20x 1 10 ml koniugatu przeciwciała IgA HRP, (kozie), przeciw-ludzkie IgA 1 10 ml chromogenu TMB 1 10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0,344 M Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Mikropipety na 5, 100, i 500 µl Jednorazowe końcówki mikropipet Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości Woda destylowana lub dejonizowana Pojemnik na 1 l do rozcieńczonego koncentratu ACA III PBS Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla odczytów przy dwóch długościach fali) Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. WAŻNE: Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20-26 o C) i dobrze wymieszać. 2. Rozcieńczyć koncentrat ACA III PBS w stosunku 1:20, dodając zawartość butelki koncentratu ACA III PBS do 950 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 4,0 ml koncentratu do 76 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte. 3. Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pobranej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl rozcieńczalnika do próbek ACA III. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ kalibratorów A E ACA IgA III, kontroli ACA IgA III i kontroli negatywnej ACA 1: Ustalenie obecności lub nieobecności przeciwciał przeciwko kardiolipinie wymaga dwóch dołków dla każdego z kalibratorów i kontroli oraz jednego lub dwóch dołków dla każdej próbki pacjenta. Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek. 5. Przygotowanie krzywej wzorcowej: W celu wykreślenia 5-punktowej krzywej wzorcowej, dla uzyskania punktów A E, należy zastosować WSTĘPNIE ROZCIEŃCZONE kalibratory A E ACA IgA III pobrane bezpośrednio z fiolki. Pięciopunktowa krzywa wzorcowa ma następujące wartości: Punkt Jednostki fosfolipidów (APL) A Wstępnie rozcieńczony kalibrator A ACA IgA III 150,0 B Wstępnie rozcieńczony kalibrator B ACA IgA III 75,0 C Wstępnie rozcieńczony kalibrator C ACA IgA III 37,5 D Wstępnie rozcieńczony kalibrator D ACA IgA III 18,8 lub 18,75 E Wstępnie rozcieńczony kalibrator E ACA IgA III 9,4 lub 9,375 Procedura badania 1. WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20 26 C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną. 3

4 2. Dodać do dołków 100 µl każdego z pięciu kalibratorów, rozcieńczone próbki od pacjentów, kontrolę negatywną ACA oraz kontrolę ACA IgA III. UWAGA: Kontrola ACA IgA III oraz negatywna kontrola ACA są wstępnie rozcieńczone i gotowe do użycia. Wartość i dopuszczalny zakres kontroli ACA IgA III znajdują się na etykiecie fiolki. Jeśli kontrola nie wypadnie w dopuszczalnym zakresie zgodnym z tym wydrukowanym na etykiecie, należy powtórzyć serię. Jeśli w przypadku powtórzonego badania kontrola nie mieści się w ustalonym zakresie, należy skontaktować się z działem pomocy technicznej firmy INOVA. Zalecane jest wykonanie duplikatów wszystkich próbek. 3. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki. 4. Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Dodać µl rozcieńczonego buforu PBS ACA III do wszystkich dołków, a następnie go odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w przypadku dodawania próbki. 5. Do każdego dołka dodać 100 μl koniugatu IgA HRP. Koniugat powinien być usunięty z butelek z zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych. Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO WLEWAĆ NIEUŻYTEGO KONIUGATU Z POWROTEM DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w etapie Etap płukania: Powtórzyć etap Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze pokojowej. 8. Do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków. 9. W ciągu jednej godziny od zatrzymania reakcji odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością fali może być długość 620 nm. Kontrola jakości 1. Kontrola ACA IgA III, kalibratory ACA IgA III oraz kontrola negatywna ACA powinny być oznaczane z każdą serią próbek w celu potwierdzenia, czy wszystkie odczynniki i badania funkcjonują prawidłowo. 2. Należy zauważyć, że ponieważ kontrola ACA IgA III, kalibratory ACA IgA III i kontrola negatywna ACA są już wstępnie rozcieńczone, to nie będą one stanowić kontroli w przypadku procedur związanych z rozcieńczaniem próbek. 3. Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub krajowych przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze -20 C. 4. Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako nieważne i powinno zostać powtórzone. a. Absorbancja wstępnie rozcieńczonego kalibratora A ACA IgA III musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli ACA IgA III, która musi być większa od absorbancji wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ACA. b. Wstępnie rozcieńczony kalibrator A ACA IgA III musi mieć absorbancję wyższą niż 1,0, natomiast absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ACA nie może przekraczać 0,2. c. Absorbancja kontroli ACA IgA III musi być przynajmniej dwukrotnie wyższa od kontroli negatywnej ACA lub przekraczać 0,25. d. Stężenie kontroli ACA IgA III musi być w obrębie zakresu podanego na jej etykiecie. e. Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie CLSI (NCCLS) C24-A3. Obliczanie wyników 1. Ustalić wartość średnią wszystkich zdublowanych odczytów. 2. Wykreślić krzywą średniej absorbancji kalibratorów dla badania ACA IgA III w funkcji logarytmu ich stężeń. Użyć wykresu krzywej najlepszego dopasowania. Można również użyć wykresu logarytmicznego. Jednostki APL przypisane do kalibratorów znajdują się na fiolce kalibratora. 3. Ustalić nieznane stężenie APL ACA z osi X, odczytując odpowiednią absorbancję na osi Y. 4

5 Interpretacja wyników Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w populacjach pacjentów. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami. 1. Wynik pozytywny wskazuje na obecność przeciwciał IgA przeciwko kardiolipinie i może być stosowany z innymi testami serologicznymi oraz objawami klinicznymi do pomocy w ocenie wystąpienia ryzyka zakrzepicy u osób cierpiących na toczeń układowy rumieniowaty (SLE) i zaburzenia toczniopodobne. 2. Wyniki powinny być wyrażone w jednostkach APL. Na podstawie oceny 486 próbek prawidłowych oraz 139 próbek z pozytywnymi wynikami dla IgG, IgM i/lub IgA zasugerowano wartość graniczną 12 APL. Sugeruje się, aby każde laboratorium samodzielnie ustaliło swój zakres prawidłowy. Nawet podczas stosowania krzywej kalibracyjnej przy niskich poziomach nadal występuje zmienność wyników i częste są wyniki fałszywie pozytywne. 9 Z tego powodu sugerujemy, aby wartości od 12 do 20 APL włącznie uznawać za wątpliwe, natomiast wyniki pozytywne przypisywać do próbek pacjentów >20 APL. Harris i Pierangeli sugerują alternatywną półilościową metodę wyrażania wyników. 9 Sugerujemy, aby wartości APL uznawać za słabo do umiarkowanie pozytywne, natomiast wyniki powyżej 80 APL za wyniki wysoko pozytywne. 3. Wynik negatywny świadczy o tym, że nie występują przeciwciała IgA przeciwko kardiolipinie bądź ich poziom jest poniżej granicy wykrywania dla tego testu. 4. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki zostały uzyskane przy użyciu testu ELISA INOVA QUANTA Lite ACA IgA III. Wartości IgA przeciwko kardiolipinie uzyskane metodami badań różnych producentów nie mogą być stosowane zamiennie. Rząd wielkości poziomów raportowanego IgA nie może być skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Obecnie prowadzone są analizy znaczenia klinicznego ACA w przypadku chorób innych niż SLE. 2. Jeśli zostaną znalezione negatywne miana ACA, przy obecności wskazań klinicznych, wskazane może być przeprowadzenie badanie na obecność antykoagulantu tocznia lub inne dodatkowe badanie, np. przeciw-β 2 GPI. 3. Nie można postawić diagnozy na podstawie samych wyników ACA. Te wyniki muszą być interpretowane razem z wynikami fizycznymi. 4. Nie wolno rozpocząć leczenia jedynie na podstawie pozytywnego miana ACA. Muszą być również wykazane uzasadniające wskazania kliniczne. 5. Wysoki odsetek pacjentów z potwierdzoną aktywną lub seropozytywną kiłą będzie mieć podwyższone poziomy ACA. Należy przeprowadzić procedury potwierdzające, aby wykluczyć kiłę. 6. ACA może występować przejściowo podczas wielu infekcji. Pacjenci z pozytywnym wynikiem ACA powinni być poddani ponownym badaniom po upływie odpowiedniego czasu. 7. Obecność kompleksów immunologicznych lub innych agregatów immunoglobuliny w próbce pochodzącej od pacjenta może powodować podwyższony poziom nieswoistego wiązania i wytwarzać fałszywe pozytywne wyniki w tym badaniu. 8. Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. 9. Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 10. Jeśli koncentrat PBS ACA III przed użyciem nie zostanie podgrzany i dobrze wymieszany, możliwe jest uzyskanie niespójnych wyników. Spodziewane wartości Normalny zakres 486 próbek uzyskanych od losowo wybranych krwiodawców oznaczono za pomocą testu ACA IgA. Żadna nie była w zakresie wątpliwym GPL. Wszystkie 486 prawidłowych (100%) było mniejszych lub równych 10 APL. Prawidlowe IgA ACA h y c w lo id w ra p % ,2% 0,0% 7,2% 2,5% 0,2% 0,0% 0,0% Wartosc APL 5

6 Swoistość i wrażliwość względna Korelacja z testem ACA IgA drugiej generacji firmy INOVA Diagnostics Łącznie 625 próbek zbadano za pomocą testów IgA ACA drugiej i trzeciej generacji. Te próbki obejmowały 486 próbek prawidłowych wspomnianych w badaniu zakresu prawidłowego oraz 139 próbki od pacjentów o znanym wyniku pozytywnym IgG, IgM i/lub IgA przeciwko kardiolipinie. Poniżej zostały przedstawione wyniki. Test QUANTA Lite ACA IgA III (trzeciej generacji) - I Czułość względna 100% ACA IgA ELISA I* Swoistość względna 99,5% druga generacja Skuteczność względna 98,9% *Wątpliwe Precyzja i powtarzalność Precyzję pomiędzy seriami oraz powtarzalność testu zmierzono oznaczając dwa powtórzenia każdej próbki silnie pozytywnej i negatywnej w czterech oddzielnych testach w ciągu czterech kolejnych dni. Precyzję w ramach serii oraz powtarzalność testu zmierzono oznaczając szesnaście powtórzeń każdej próbki silnie pozytywnej i słabo pozytywnej w pojedynczym teście. Poniżej znajduje się podsumowanie wartości średniej, odchylenia standardowego oraz współczynnika zmienności dla każdej próbki. Silnie pozytywna Negatywny Średnia APL SD CV % Średnia APL SD CV % Łącznie 86,8 7,1 8,0% 3,6 0,4 9,9% W ramach serii 79,9 3,3 4,2% 4,0 0,8 18,6% Pomiędzy seriami 93,8 11,0 11,8% 3,1 0,1 1,3% 6

7 Piśmiennictwo 1. Lancet i, (1985). 2. Clinics in Rheumatic Diseases 8, , Harris EN: A reassessment of the antiphopholipid syndrome. J Rheumatol 17:733, McNeil HP, Chersterman CN, Krilis SA: Immunology and clinical importance of antiphospholipid antibodies. Advances in Immunol 49: 193, Gharavi AE, Harris EN, Asherson RA, Hughes GRV: Anticardiolipin Antibodies:Isotype distribution and phospholipid specificity. Ann Rheum Dis 46: 1, Mahmood T, Racis SP, Krey PR: IgA anti-cardiolipin antibody (acla) in systemic lupus erythematosus(sle). Arthritis and Rheum 33: R45, Kalunian DC, Peter JB, Middlekauff HR, Sayre J, Ando DG, Mangotich M, Hahn BH: Clinical significance of a single test for anti-cardiolipin antibodies in patients with systemic lupus erythematosus. The Am J Med 85: 602, Weidmann CE, Wallace DJ, Peter JB, Knight PJ, Bear MB, Klinenberg JR: Studies of IgG, IgM and IgA antiphospholipid antibody isotypes in systemic lupus erythematosus. J Rheumatol 15: 74, The VII th International Symposium on Antiphospholipid Antibodies, October 9-13, 1996, Louisiana State University Medical Center. 10. Centers for Disease Control/National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition,

8 QUANTA Lite and INOVA Diagnostics are registered trademarks Copyright 2011 All Rights Reserved Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Niemcy Tel.: Faks.: POL Lipiec 2011 Wersja 0 8