Środki ostrożności uwagi

Transkrypt

1 QUANTA Lite Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka dsdna SC ELISA Przeznaczenie Test ten jest przeznaczony do pomiaru in vitro ilości swoistych autoprzeciwciał IgG przeciwko dwuniciowemu kwasowi dezoksyrybonukleinowemu (dsdna) w surowicy człowieka, co, w połączeniu z innymi wynikami klinicznymi, ma na celu ułatwienie diagnozy tocznia rumieniowatego układowego (SLE). Dostarczany jest materiał wystarczający na przebadanie maksymalnie 40 próbek z duplikatem lub 88 próbek pojedynczych, z krzywą kalibracji oraz kontrolą pozytywną, negatywną i jednoniciową kontrolą DNA. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Autoprzeciwciała przeciwko DNA rozpoznają albo jednoniciowy (ss) albo dwuniciowy (ds) DNA. Autoprzeciwciała przeciwko ssdna nie są swoiste dla choroby i występują w wielu chorobach autoagresyjnych, włączając w to: polekowy toczeń rumieniowaty układowy, mieszaną chorobę tkanki łącznej, reumatoidalne zapalenie stawów, twardzinę i zespół Sjogrena. Natomiast autoprzeciwciała przeciwko dsdna powiązane są bardziej z SLE 1,2,3 gdzie, jak się uważa, powstawanie kompleksów immunologicznych odgrywa główną rolę w patogenezie tej choroby. Osadzanie się kompleksów immunologicznych prowadzi do zapalenia i nerkowych oraz naczyniowych objawów tej choroby 4. Nagłe zaostrzenie SLE zazwyczaj poprzedza wzrost poziomu przeciwciał przeciwko dsdna, po którym, w szczytowym okresie nasilenia ataku choroby, następuje gwałtowny jego spadek 5. Obserwacja ta potwierdza potrzebę regularnego monitorowania u pacjentów z SLE poziomu autoprzeciwciał przeciwko dsdna. Zasada badania Mikrodołki są wstępnie pokryte antygenem dsdna z grasicy cielęcej. Kalibratory, kontrole i rozcieńczone próbki pobrane od pacjenta są dodawane do dołków, a autoprzeciwciała rozpoznające antygen dsdna wiążą go podczas pierwszej inkubacji. Po płukaniu dołków w celu usunięcia wszystkich niezwiązanych białek, dodawany jest oczyszczony koniugat kozi przeciw-ludzkiego IgG peroksydazy. Koniugat wiąże się z wychwyconym ludzkim autoprzeciwciałem, a nadmiar niezwiązanego koniugatu jest usuwany dzięki kolejnemu etapowi płukania. Związany koniugat uwidacznia się za pomocą substratu 3,3,5,5 -tetrametylobenzydyny (TMB), który daje niebieski produkt reakcji. Jego intensywność jest proporcjonalna do stężenia autoprzeciwciał w próbce. W celu zatrzymania reakcji do każdego dołka dodawany jest kwas siarkowy. Powoduje to uzyskanie żółtego zabarwienia końcowego, które jest odczytywane przy długości fali 450 nm. Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta antygenem dsdna grasicy cielęcej (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Kontrola negatywna ELISA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i surowicę ludzką bez ludzkich przeciwciał przeciwko dsdna, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 3. Kalibrator A dsdna SC ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 4. Kalibrator B dsdna SC ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 5. Kalibrator C dsdna SC ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 6. Kalibrator D dsdna SC ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 7. Kalibrator E dsdna SC ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej 8. Kontrola pozytywna dsdna SC, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko dsdna, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 9. Rozcieńczalnik do próbek typu III, 2 fiolki barwa żółta, zawierający Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 10. Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x zabarwienie czerwone, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 11. Kontrola jednoniciowa dsdna SC, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i rozcieńczone przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko ssdna, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 12. Koniugat HRP dsdna SC IgG, 1 fiolka zabarwienie niebieskie, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 13. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 14. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0,344 M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%) w kontrolach, rozcieńczalnik i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka. Rozcieńczalnik do próbek zawiera Proclin 150. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. W związku z tym, kontrola pozytywna dsdna SC, jednoniciowa kontrola dsdna SC, kalibratory A E dsdna SC oraz kontrola negatywna ELISA powinny być obsługiwane w taki sam sposób, jak potencjalnie zakaźny materiał. 8 1

2 3. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Ten produkt może być używany wyłącznie przez odpowiednio przeszkolony personel. 3. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. Wszelkie odchylenia mogą wpłynąć na procedurę testu i wyniki badania. Należy zwrócić uwagę na określone uwagi i ostrzeżenia zamieszczone w tej instrukcji obsługi. 4. Odczynniki o innych numerach serii zestawów NIE są wymienne między sobą. W przypadku wykonywania dużej liczby testów należy dopilnować, aby wszystkie odczynniki pochodziły z TEJ SAMEJ serii. Wszystkie używane płytki muszą być wyjęte z tej samej torebki foliowej. Zastąpienie jakiegokolwiek komponentu może prowadzić do nieprawidłowych wyników. 5. Aby uniknąć zanieczyszczenia odczynnika, należy stosować wyłącznie nowe lub czyste naczynia szklane/plastikowe. Nie wolno wlewać nieużytych odczynników z powrotem do butelek. 6. Należy upewnić się, że bufor rozcieńczany jest w czystym pojemniku. W przypadku, gdy wykazuje on jakiekolwiek oznaki zanieczyszczania mikrobiologicznego lub mętnieje, należy go wyrzucić i przygotować nowy roztwór. 7. Nie pozostawiać otwartych butelek z odczynnikiem. Odparowanie lub zanieczyszczenie spowoduje niespójność wyników. 8. Substrat TMB nie może być narażony na działanie światła lub wody. 9. Nie używać skażonej bakteryjnie, hemolizowanej lub lipemicznej surowicy ani próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia. 10. Zalecane jest stosowanie skalibrowanych pipet i odpowiednich próbek wewnętrznej QC. 11. Użycie zautomatyzowanych systemów analitycznych, naczyń do rozcieńczania próbek lub innych zautomatyzowanych przyrządów może skutkować rozbieżnością wyników w porównaniu do ręcznej procedury. Odpowiedzialnością każdego z laboratoriów jest pełne zatwierdzenie systemu i dopilnowanie, aby wyniki mieściły się w limitach zdefiniowanych w tym dokumencie oraz powiązanym Atest QC. 12. Wszystkie używane przyrządy muszą być kalibrowane i obsługiwane zgodnie z instrukcjami producenta. Warunki przechowywania 1. Zestaw powinien być przechowywany w temperaturze 2 8 C i nie wolno go zamrażać. Nieodpowiednie temperatury przechowywania będą mieć wpływ na wyniki. 2. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 C. 3. Termin ważności zestawu jest podany na zewnętrznej etykiecie. Pobieranie próbek 1. Próbki krwi powinny być pobierane poprzez wkłucie dożylne, powinny w naturalny sposób skrzepnąć, a surowica powinna zostać oddzielona. 2. Surowica przed analizą może być przechowywana w temperaturze 2 8 C do 7 dni 6 lub dłużej, jeśli zostanie podzielona i będzie przechowywana w temperaturze -20 C lub niższej. 3. Należy unikać wielokrotnego rozmrażania i zamrażania. 4. Próbki surowicy nie powinny być inaktywowane ciepłem, ponieważ może to dać fałszywie pozytywne wyniki. Badanie Dostarczone materiały Broszura z instrukcjami: Zawiera wszystkie szczegóły badania. Atest QC: Przedstawia oczekiwane wyniki serii. Dołki powlekane dsdna SC: 12 dających się rozdzielić 8-dołkowych płytek powleczonych antygenem dsdna z grasicy cielęcej. Każda płytka jest pakowana w torebkę foliową z zamknięciem strunowym, która zawiera dwa woreczki z osuszaczem. Kontrola Negatywna ELISA: 1 butelka zawierająca 1,2 ml rozcieńczonej surowicy ludzkiej. Oczekiwana wartość jest podana na ateście QC. Gotowe do użycia. Kalibratory dsdna SC: 5 butelek, z których każda zawiera 1,2 ml rozcieńczonej surowicy ludzkiej wraz z autoprzeciwciałami przeciwko dsdna w poniższych stężeniach: 1000, 333, 111, 37, 12,3 IU/ml. Gotowe do użycia. Kontrola pozytywna dsdna SC: 1 butelka zawierająca 1,2 ml rozcieńczonej surowicy ludzkiej. Oczekiwana wartość jest podana na ateście QC. Gotowe do użycia. 2

3 Rozcieńczalnik do próbek Typ III: 2 butelek zawierających 50 ml buforu do rozcieńczania próbek. Barwa żółta, gotowy do użycia. Koncentrat do płukania HRP (40X): 1 butelka zawierająca 25 ml 40-krotnie stężonego buforu do płukania dołków. Kontrola jednoniciowa dsdna SC: 1 butelka zawierająca 1,2 ml rozcieńczonej surowicy ludzkiej. Oczekiwana wartość jest podana na ateście QC. Gotowe do użycia. Koniugat HRP dsdna SC IgG: 1 butelka zawierająca 10 ml oczyszczonego, znakowanego peroksydazą przeciwciała przeciwko ludzkiemu IgG. Barwa niebieska. Gotowe do użycia. Chromogen TMB: 1 butelka zawierająca 10 ml chromogenu TMB. Gotowe do użycia. Roztwór zatrzymujący HRP: 1 butelka zawierająca 10 ml kwasu siarkowego 0,344M. Gotowe do użycia. Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Automatyczna myjka do płytek z mikropłytkami: Zalecane, ale płukanie płytek może również być wykonywane ręcznie. Czytnik płytek: Umożliwia pomiar gęstości optycznej przy długości fali 450 nm z odniesieniem powietrznym. Woda destylowana lub dejonizowana: Powinna być najwyższej możliwej jakości Skalibrowane mikropipety: Do dozowania 1000, 100 i 10 µl Pipeta wielokanałowa: Zalecana do dozowania 100 µl koniugatu, substratu i roztworu zatrzymującego. Probówki szklane/plastikowe: Do roztworów próbek Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. Doprowadzić zestaw do temperatury pokojowej Zestaw jest przeznaczony do pracy w temperaturze pokojowej (20 24 C). Wyjąć zestaw z miejsca przechowywania i pozostawić w temperaturze pokojowej na około 60 minut. Dołków nie wolno wyjmować z torebki foliowej, dopóki nie osiągną temperatury pokojowej. Uwaga: Zestawy mogą znajdować się w temperaturze pokojowej maks. przez 1 tydzień. 2. Zawartość zestawu Lekko wymieszać każdy składnik zestawu przed użyciem. 3. Roztwór buforu do płukania (koncentrat 40x) Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, mniejszą ilość można przygotować dodając 2,0 koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każdy z 16 dołków, które będą użyte. Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez C. 1 tydzień w temperaturze 2 8 o 4. Roztwór próbki Rozcieńczyć 10 µl każdej próbki z 1000 µl rozcieńczalnika do próbek (1:101) i dobrze wymieszać. Uwaga: Rozcieńczona próbka musi być użyta w ciągu 8 godzin. 5. Obsługa paska i ramki Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Ustawić od dołka A1, napełniając kolumny na płytce od lewej do prawej. Podczas wykonywania czynności z płytką należy ścisnąć długie krawędzie ramki, aby uniknąć wypadnięcia dołków. Uwaga: Umieścić jak najszybciej nieużyte dołki w torebce foliowej wraz z dwiema torebkami z osuszaczem i dobrze zamknąć torebkę, aby ograniczyć kontakt z wilgocią. Należy zwrócić uwagę, aby nie rozerwać lub przekłuć torebki foliowej, patrz poniżej. OSTRZEŻENIE: Narażenie dołków na działanie wilgoci lub zanieczyszczenie przez kurz lub inne widoczne zanieczyszczenia spowoduje degradację antygenu, co spowoduje niski poziom precyzji badania i potencjalnie uzyskanie fałszywych wyników. Procedura badania 1. Dodawanie próbki Dodać 100 µl każdego kalibratora, kontroli i rozcieńczonej próbki (1:101) do odpowiednich dołków dostarczonej płytki. Uwaga: Próbki powinny być jak najszybciej umieszczone na płytce, aby ograniczyć odchylenia badania, a po dodaniu ostatniej próbki należy włączyć stoper. Inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 minut. 2. Przemywanie Procedura płukania jest kluczowym elementem i wymaga szczególnej uwagi. Nieprawidłowo wypłukana płytka da niedokładne wyniki o niskim poziomie precyzji i wysokim poziomie tła. Po inkubacji wyjąć płytkę i wypłukać dołki 3 razy przy użyciu µl buforu do płukania na każdy dołek. Wypłukać płytkę za pomocą automatycznej myjki do płytek lub ręcznie, zgodnie z poniższymi wskazówkami. Po przeprowadzeniu końcowego zautomatyzowanego płukania należy odwrócić płytkę i strzepnąć dołki wysuszyć na bibule. Płytki można płukać ręcznie w następujący sposób: a. Usunąć zawartość płytki do zlewu b. Strzepnąć dołki do sucha nad bibułą. c. Napełnić każdy dołek µl buforu do płukania za pomocą pipety wielokanałowej. d. Delikatnie potrząsnąć płytką na płaskiej powierzchni. e. Powtórzyć etapy od a do d dwa razy f. Powtórzyć etap a i b. 3. Dodawanie koniugatu Dodać 100 µl koniugatu do każdego dołka, osuszyć bibułą górną część dołków, aby usunąć zachlapania. Uwaga: Aby uniknąć zanieczyszczenia, nie wolno umieszczać koniugatu z powrotem w butelce z odczynnikiem. Inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 minut. 4. Płukanie Powtórzyć etap 2. 3

4 5. Dodawanie chromogenu (TMB) Dodać 100µl chromogenu TMB do każdego dołka, osuszyć bibułą górną część dołków, aby usunąć zachlapania. Uwaga: Aby uniknąć zanieczyszczenia, nie wolno umieszczać nadmiaru TMB z powrotem w butelce z odczynnikiem. Inkubować w pokojowej temperaturze w ciemności przez 30 minut. 6. Zatrzymywanie Wlać 100 µl roztworu zatrzymującego do każdego dołka. Spowoduje to zmianę barwy z niebieskiej na żółtą. 7. Pomiar gęstości optycznej Odczytać gęstość optyczną (OD) każdego dołka przy długości fali 450 nm na czytniku mikropłytek, w ciągu 30 minut od zatrzymania reakcji. Kontrola jakości 1. Kontrola jakości Aby analiza była prawidłowa, muszą zostać spełnione następujące kryteria. Kalibratory, kontrole pozytywne, negatywne i jednoniciowe muszą być uwzględnione w każdym badaniu. Wartości uzyskane dla wszystkich kontroli powinny mieścić się w zakresach podanych w ateście QC. Kształt krzywej powinien być podobny do krzywej kalibracji, która jest przedstawiona na ateście QC. Jeśli powyższe kryteria nie są spełnione, analiza będzie nieprawidłowa i należy powtórzyć test. 2. Obliczyć średnie gęstości optyczne (tylko w przypadku badań prowadzonych w formie zdublowanej) W przypadku każdego kalibratora, kontroli i próbki należy obliczyć średnią gęstość optyczną (OD) zdublowanych odczytów. Funkcja procentowy współczynnik zmienności (% CV) dla każdej gęstości optycznej duplikatu powinien wynosić poniżej 15%. 3. Nanieść krzywą kalibracji Krzywa kalibracji może być naniesiona automatycznie lub ręcznie: nanosząc stężenie autoprzeciwciał przeciw dsdna na skali logarytmicznej w odniesieniu do gęstości optycznej na skali liniowej dla każdego kalibratora: Automatycznie użyć odpowiednio zatwierdzonego oprogramowania oraz dopasowania krzywej, które najlepiej pasuje do danych. Ręcznie na papierze logarytmicznym/milimetrowym nanieść płynną krzywą przechodzącą przez punkty (ale nie prostą linię od punktu do punktu). 4. Postępowanie w przypadku nietypowych punktów Jeśli jakiś punkt nie leży na krzywej, można go usunąć. Jeśli brak tego punktu spowoduje, że krzywa przybierze kształt nieprzypominający krzywej kalibracji próbki lub jeśli więcej niż jeden punkt okaże się nietypowy, badanie należy powtórzyć. 5. Obliczanie poziomów autoprzeciwciał w kontrolach i rozcieńczonych próbkach Odczytać poziom autoprzeciwciała przeciw dsdna w kontrolach i rozcieńczonych próbkach bezpośrednio z krzywej kalibracji. Wartości powinny mieścić się w zakresie określonym w ateście QC. Uwaga: wartości kalibratora zostały ustawione przez współczynnik 100, co stanowi roztwór próbki 1:101. Dalsze korekcje nie są wymagane. 6. Kalibracja badania Test ten skalibrowano w jednostkach IU/ml z zastosowaniem kalibratora referencyjnego WHO Wo80 7. Ograniczenia badania 1. Ten zestaw służy wyłącznie do wspomagania diagnozy. Wynik pozytywny sugeruje pewne choroby, które muszą być potwierdzone badaniami klinicznymi oraz innymi testami serologicznymi. 2. Wyniki uzyskane w ramach tego badania nie są dowodem diagnostycznym na obecność lub nieobecność choroby. 3. Przy uzyskaniu wyników granicznych badanie należy powtórzyć z użyciem nowej próbki lub w późniejszym terminie. Ważne jest, aby badać pacjentów regularnie tak, aby móc monitorować u nich zmiany w poziomie autoprzeciwciał przeciwko dsdna. Spodziewane wartości Zakres normalny został określona na podstawie surowicy pochodzącej od 113 normalnych krwiodawców. Górna granica wartości prawidłowych wyrażona jest jako średnie stężenie + 5 SD i odpowiada to 30 IU/ml, przy średniej wynoszącej 9,2 i SD równym 4,4 IU/ml. Te zakresy podano jedynie w celach orientacyjnych. Badania ELISA są bardzo wrażliwe i umożliwiają wykrycie niewielkich różnic w populacjach próbek. Zalecane jest, aby każde laboratorium określiło własny zakres normalny, na podstawie stosowanych technik i przyrządów populacyjnych. INTERPRETACJA < 30 IU/ml Wynik negatywny IU/ml Granica > 75 IU/ml Wynik pozytywny 4

5 Precyzja Precyzja w obrębie badania oraz pomiędzy badaniami została zmierzona za pomocą trzech próbek w zakresie krzywej kalibracji. Poniżej została podana wartość średnia i % CV dla każdej próbki: PRECYZJA W OBRĘBIE BADANIA n=16 Stężenie (IU/ml) % CV Próbka ,0 Próbka ,7 Próbka ,1 PRECYZJA POMIĘDZY BADANIAMI n=3 Stężenie (IU/ml) % CV Próbka ,2 Próbka ,5 Próbka ,6 Normalny zakres Poziomy autoprzeciwciała przeciw dsdna zostały zbadane w surowicy pochodzącej od 113 normalnych krwiodawców, a wyniki zostały przedstawione na poniższym wykresie. Zakładając, że dolna wartość graniczna wynosi 30 IU/ml, żadnej z próbek nie można uznać za dającą wynik graniczny lub pozytywny. Swoistość, wrażliwość, zgodność Zgodność, wrażliwość oraz swoistość względna zostały ustalone przy użyciu alternatywnego zestawu EIA do wykrywania przeciwciał przeciwko dsdna oraz testu immunofluorescencyjnego z wykorzystaniem pierwotniaka Crithidia luciliae na 69 próbkach. W celu porównania z testem wykorzystującym Crithidia luciliae, próbki dające w teście ELISA wyniki graniczne, uznano za dające wynik pozytywny. EIA Alternatywna EIA + Granica BINDAZYME Granica Anti-dsDNA EIA Wrażliwość względna 97,8% Swoistość względna 95,7% Zgodność względna 97,1% Crithidia luciliae Crithidia luciliae + - BINDAZYME Anti-dsDNA EIA Wrażliwość względna 95,7% Swoistość względna 91,3% Zgodność względna 94,2% Wrażliwość analityczna Swoistość została określona jako średnie stężenie + 2 SD przez 20 oznaczeń rozcieńczalnika próbki. To odpowiada 4,6 IU/ml 5

6 SUBSTANCJE INTERFERUJĄCE W celu sprawdzenia tych substancji posłużono się różnymi typami surowic, wykorzystując zestaw do Sprawdzania Interferencji A plus (Kokusai, Japonia). Substancja Bilirubina F (niezwiązana) Bilirubina C (koniugat) Hemoglobina hemolizowana Mlecz Czynnik reumatoidalny Stężenie 18,3mg/dl 19,0mg/dl 490mg/dl 1930 jednostek 50 IU/ml Nie zaobserwowano żadnej interferencji przy zastosowaniu niezwiązanej bądź skoniugowanej bilirubiny, hemoglobiny, lipidu i czynnika reumatoidalnego. Zakres pomiarowy Zakres pomiarowy badania wynosi 12, IU/ml. Podsumowanie badania 1. Dodać 100 µl każdego kalibratora, kontroli i rozcieńczonej próbki 1:101 do odpowiednich dołków. Inkubować przez 30 minut. Wypłukać. 2. Dodać 100 µl koniugatu do każdego dołka. Inkubować przez 30 minut. Wypłukać. 3. Dodać 100 µl substratu do każdego dołka. Inkubować przez 30 minut. 4. Dodać 100 µl roztworu zatrzymującego do każdego dołka. Zmierzyć absorbancję przy długości fali 450 nm. 6

7 Szablon płytki A B C D E F G H 7

8 Piśmiennictwo 1. Stollar B D. Antibodies to DNA. CRC Critical Review of Biochemistry, 1986; 20: Stollar B D. The specificity and applications of antibodies to helical nucleic acids. CRC Critical Review of Biochemistry, 1975; 3: Swaak AJ et al. Anti-dsDNA and complement profiles as prognostic guides in systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheumatism, 1979; 22: Koffler D et al. Systemic lupus erythematosis: Prototype of immune complex nephritis in man. J Exp Med, 1971; 134 (suppl): ter Borg EJ et al. Measurement of increases in anti-double stranded DNA antibody levels as a predictor of disease exacerbation on systemic lupus erythematosus, a long term, prospective study. Arthritis Rheumatism, 1990; 33: Protein Reference Unit Handbook of Autoimmunity (3rd Edition) 2004 Ed A Milford Ward. J. Sheldon, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield Feltkamp T E W. et al. The First International Standard for Antibodies to Double Stranded DNA. Annals of Rheumatic diseases, 1988; 47: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. QUANTA Lite jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics, Inc. Copyright Wszelkie prawa zastrzeżone Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Niemcy Tel.: Faks.: POL Czerwiec 2012 Wersja 2 8