Do diagnostyki In Vitro PRZEZNACZONY TYLKO NA EKSPORT. NIE JEST PRZEZNACZONY DO SPRZEDAŻY W STANACH ZJEDNOCZONYCH.

Transkrypt

1 QUANTA Flash Odczynniki Scl Do diagnostyki In Vitro PRZEZNACZONY TYLKO NA EKSPORT. NIE JEST PRZEZNACZONY DO SPRZEDAŻY W STANACH ZJEDNOCZONYCH. Przeznaczenie QUANTA Flash Scl-70 to test chemiluminescencji (CIA) do półilościowego wykrywania autoprzeciwciał przeciwko Scl-70 w surowicy człowieka w urządzeniu BIO-FLASH. Test ten jest wykorzystywany w połączeniu z wynikami klinicznymi w ocenie pewnych chorób autoimmunologicznych takich jak twardzina układowa. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Autoprzeciwciała skierowane przeciwko strukturom wewnątrzkomórkowym, a zwłaszcza antygenom jądrowym stanowią cechę charakterystyczną układowych chorób autoimmunologicznych (ang. systemic autoimmune rheumatic diseases, SARD). 1 Przeciwciała skierowane przeciwko Scl-70/ Topoizomerazie1 (topo-1) stanowią wysoce swoisty marker do rozpoznawania twardziny układowej (ang. systemic sclerosis, SSc) znanej także jako twardzina. 1,2 Przeciwciała anty-scl-70 występują u 20 40% pacjentów z SSc oraz u do 70% of pacjentów z rozproszoną postacią skórną twardziny układowej i są wiązane z poważnym postępem choroby. 2 Chociaż zgłaszane w innych patologiach, a zwłaszcza toczniu rumieniowatym układowym (ang. systemic lupus eryhtematosus, SLE), 3 przeciwciała anty-scl-70 są użytecznym marker rozpoznawania SSc. Przeciwciała przeciwko białkom Scl-70 są praktycznie wyłączne w próbkach z przeciwciałami anty-rna Pol III lub anty-centromer. 4 Zasady badania Oczyszczonym rekombinowanym antygenem Scl-70 opłaszcza się paramagnetyczne kulki, które przechowuje się we wkładzie z odczynnikiem w warunkach utrzymujących antygen w jego stanie reaktywnym. Gdy wkład do testu gotowy jest do pierwszego użycia, do probówki zawierającej zakonserwowane kulki dodaje się roztwór buforu i kulki miesza się z buforem. Następnie wkład z odczynnikiem umieszcza się w urządzeniu BIO-FLASH. Urządzenie wstępnie rozcieńcza próbkę surowicy pacjenta w układzie płuczącym dodanym do jednorazowej plastikowej kuwetki. Małe ilości rozcieńczonej próbki surowicy pacjenta, kulki opłaszczone Scl-70 i bufor testowy łączy się w drugiej kuwetce i miesza. Kuwetkę inkubuje się w temperaturze 37 C. Następnie kulki magnetyzuje się i kilkukrotnie płucze. Potem do kuwetki dodaje się przeciwciało skoniugowane z izoluminolem i inkubuje w temperaturze 37 C. Ponownie kulki magnetyzuje się i kilkukrotnie płucze. Po dodaniu odczynników ( wyzwalaczy ) do kuwetki koniugat izoluminolu wywołuje luminescencję. Światło wyprodukowane w wyniku tej reakcji mierzy się w umownych jednostkach luminescencji (ang. Relative Light Units, RLU) przy użyciu układu optycznego BIO-FLASH. Ilość jednostek RLU odpowiada ilości związanego koniugatu izoluminolu, co z kolei odpowiada ilości przeciwciał anty-scl-70 związanych z kulkami opłaszczonymi Scl-70. W teście QUANTA Flash Scl-70 wykorzystuje się predefiniowaną, właściwą dla każdej serii testu, krzywą wzorcową (ang. Master Curve), którą analizator odczytuje z kodu kreskowego znajdującego się na wkładzie z odczynnikiem. W oparciu o wyniki uzyskane przy użyciu dwóch kalibratorów tworzy się właściwą dla urządzenia krzywą roboczą (ang. Working Curve), którą wykorzystuje się do obliczenia liczby jednostek chemiluminescencji (CU) na bazie RLU otrzymanych dla każdego pacjenta. 1

2 Odczynniki 1. Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash Scl-70 zawiera poniższe odczynniki wystarczające do przeprowadzenia 50 oznaczeń: a. Kulki paramagnetyczne opłaszczone Scl-70 - zakonserwowane przed pierwszym użyciem. b. Bufor testowy bezbarwna ciecz. c. Środek śledzący IgG przeciwciała przeciwludzkie IgG znakowane izoluminolem, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant. 2. Bufor do odtwarzania 2, 1 fiolka zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwanty. Ostrzeżenia 1. Bufor testowy zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%), która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 3. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 4. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro. 2. Tego testu można używać jedynie z analizatorem BIO-FLASH. 3. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury odtwarzania. 4. Po otwarciu wkład z odczynnikiem musi być przechowywany w karuzeli na odczynniki tego urządzenia. Należy uważać, by nie rozlać odczynników w chwili, gdy wkład z odczynnikiem jest umieszczany w analizatorze po raz pierwszy. 5. Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem urządzenia. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, mogą spowodować zaburzenia w teście. Należy stosować się do zaleceń dotyczących procedury czyszczenia analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. Warunki przechowywania 1. Nieotwarte wkłady z odczynnikami oraz bufor do odtwarzania przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Otwarte wkłady z odczynnikami należy przechowywać wewnątrz analizatora. Zachowują one stabilność przez 60 dni, a po tym czasie należy je usunąć. Oprogramowanie BIO-FLASH monitoruje datę przydatności do użycia wkładów oraz serii wkładów z odczynnikami. 2

3 Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Próbki zawierające do 10 mg/dl bilirubiny, 200 mg/dl hemoglobiny, 1000 mg/dl trójglicerydów, 224 mg/dl cholesterolu bądź 500 IU/ml IgM czynnika reumatoidalnego nie powodowały zakłóceń w teście QUANTA Flash Scl-70. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI H18-A4 zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1. Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2. Jeżeli test nie zostanie zakończony w ciągu 8 godzin, próbki należy przechowywać w lodówce w temperaturze 2 8 C. 3. Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Procedura Dostarczone materiały 1 Wkład z odczynnikiem QUANTA Flash Scl-70 1 Bufor do odtwarzania 2 1 pipeta do przenoszenia Wymagane materiały niedołączone do zestawu Analizator BIO-FLASH z obsługującym je komputerem Układ płuczący BIO-FLASH (Numer kat.: ) Wyzwalacze BIO-FLASH (Numer kat.: ) Kuwetki BIO-FLASH (Numer kat.: ) Kalibratory QUANTA Flash Scl-70 (Numer kat.: ) Kontrole QUANTA Flash Scl-70 (Numer kat.: ) 3

4 Stosowanie analizatora chemiluminescencyjnego BIO-FLASH 1. Szczegółowe instrukcje odnośnie pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. Dodatkowe informacje i pomoc związaną z wykrywaniem i usuwaniem usterek w testach można uzyskać kontaktując się z działem pomocy technicznej firmy INOVA Diagnostics, Inc. dostępnym pod adresem i numerem telefonu podanym na końcu tej instrukcji. 2. W celu opróżnienia zbiornika na odpady stałe należy otworzyć szufladkę na odpady. Wyjąć zbiornik na odpady stałe i odpowiednio zutylizować zużyte kuwetki. Włożyć z powrotem zbiornik na odpady stałe, zamknąć szufladkę na odpady i kliknąć Yes w oknie Empty Waste Drawer. 3. Aby wymienić wyzwalacze, należy kliknąć przycisk Bulks Inventory F9 (na górze po prawej stronie). a. Na ekranie Inventory Bulks kliknąć przycisk Triggers po lewej stronie. Zostanie wyświetlone nowe okno zatytułowane Add Triggers Remove old bottles. b. Otworzyć i wyjąć szufladkę na odpady analizatora BIO-FLASH. Zutylizować wszelkie kuwetki znajdujące się w szufladce na odpady. Kliknąć Yes w oknie Empty Waste Drawer. Wyjąć butelki z wyzwalaczami z uchwytów i kliknąć Next. Odkręcić stare butelki z wyzwalaczami i zastąpić je nowymi wyzwalaczami. Czynności należy wykonywać po kolei i odpowiednio dopasować oznaczone kolorem zakrętki (biały do białego, czerwony do czerwonego). c. Stosować się do instrukcji w nowym oknie Add Triggers Add Trigger 2 bottle. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego, umieścić wyzwalacz 2 w uchwycie oznaczonym kolorem białym. Kliknąć Next. d. Stosować się do instrukcji w oknie Add Triggers Add Trigger 1 bottle. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego, umieścić wyzwalacz 1 w uchwycie oznaczonym kolorem czerwonym. Kliknąć Finish. Włożyć z powrotem i zamknąć szufladkę na odpady. 4. Aby wymienić zbiornik układu płuczącego, należy kliknąć przycisk Bulks Inventory F9 (na górze po prawej stronie). Na ekranie Inventory Bulks kliknąć przycisk Sys. Rinse. W nowym oknie Add System Rinse Remove bottles kliknąć Next. Stosować się do instrukcji w nowym oknie Add System Rinse Add bottle. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego, kliknąć Finish, jeśli będzie to konieczne. 5. W celu opróżnienia pojemnika na odpady płynne, na ekranie Inventory Bulks kliknąć przycisk Fluid Waste. Usunąć i zutylizować odpady płynne. Kliknąć Next. Po zaakceptowaniu kodu kreskowego kliknąć Finish. 4

5 Sposób przygotowania Przygotowanie wkładu z odczynnikiem Przy pierwszym użyciu wkładu z odczynnikiem należy przebić zabezpieczenie na przechowywanych probówkach z odczynnikiem i zmieszać kulki opłaszczone białkiem Scl-70 z buforem do odtwarzania. Uwaga: Nie używać wkładu z odczynnikiem, jeśli widoczne są jakiekolwiek ślady uszkodzenia. 1. Umieścić wkład z odczynnikiem na stałym podłożu. Przytrzymać wkład z odczynnikiem w jednej dłoni. Drugą ręką zdecydowanym ruchem chwycić czerwony pasek zabezpieczający z tyłu wkładu z odczynnikiem i wyciągnąć go do końca. 2. Nacisnąć dwa paski po bokach przebijającej zatyczki (część szara) i nacisnąć górną część wkładu z odczynnikiem, aż zatrzaśnie się we właściwej pozycji zablokowania. Paski nie powinny być widoczne. 3. Odtworzyć odczynniki zestawu: a. Otworzyć fiolkę z buforem do odtwarzania i zebrać płyn dostarczoną pipetą. Zostanie użyta cała zawartość fiolki. b. Przesunąć drzwi w pokrywie wkładu z odczynnikiem do pozycji otwartej, delikatnie naciskając na wąską stronę wkładu z odczynnikiem i utrzymywać je w takiej pozycji. W sposób analityczny przenieść całą zawartość fiolki do probówki z odczynnikiem zawierającym kulki przez jeden otwór na górze wkładu z odczynnikiem. c. Zmieszać zawartość probówki z odczynnikiem zawierającym kulki, zasysając i zawieszając płyn co najmniej 30 razy. Jeśli będą widoczne grudki kulek, należy kontynuować mieszanie roztworu przez kolejne 30 razy. Jeśli nie uda się odtworzyć zawiesiny mikrocząstek, NIE WOLNO UŻYWAĆ WKŁADU. d. Przed wyjęciem pipety z probówki i jej wyrzuceniem należy upewnić się, że cały płyn został z niej usunięty. 4. Zdjąć naklejkę z górnej części wkładu z odczynnikiem odsłaniając trzy otwory. 5. Umieścić wkład z odczynnikiem w dowolnym wolnym gnieździe karuzeli na odczynniki urządzenia BIO-FLASH. Gdy wkład zostanie umieszczony na karuzeli na odczynniki, urządzenie wykonuje dodatkowe okresowe mieszanie kulek. 5

6 Kalibracja badania 1. Każda nowa seria wkładu z odczynnikiem musi zostać skalibrowana przed pierwszym użyciem. Oprogramowanie nie zezwoli na wykorzystanie nowej serii, dopóki nie zostanie ona skalibrowana. 2. Dokładne wskazówki, jak kalibrować wkład z odczynnikiem, można znaleźć w części zatytułowanej QUANTA Flash Scl Kalibratory w tej instrukcji. 3. Po zatwierdzeniu kalibracji skalibrowana seria wkładu z odczynnikiem jest gotowa do użycia. Programowanie i badanie próbek 1. Nacisnąć przycisk Worklist na górze ekranu i wybrać przycisk Racks na dole. 2. Wybrać statyw z próbkami do badania, zaznaczając nazwę tego statywu na ekranie lub skanując kod kreskowy za pomocą ręcznego skanera kodów kreskowych. Zeskanować lub wpisać nazwę próbki, wybrać typ próbki, typ pojemnika (probówka/kubeczek) i wybrać opcję Scl-70 z panelu testu. Powtórzyć te kroki dla wszystkich próbek. 3. Umieścić próbki w wybranych pozycjach na statywie na próbki i umieścić go na karuzeli na próbki analizatora. 4. Gdy wszystkie wymagane substancje znajdują się w analizatorze, na górze ekranu zostanie wyświetlona zielona ikona start. Aby rozpocząć badanie, należy nacisnąć ikonę Start F4. Kontrola jakości Kontrole testu QUANTA Flash Scl-70 (sprzedawane oddzielnie INOVA, numer kat ) obejmują zarówno pozytywną, jak i negatywną kontrolęscl-70. Wskazówki dotyczące metody wprowadzania wartości jednostek i odchylenia standardowego dla każdej kontroli do oprogramowania, jak również metody badania kontroli, można znaleźć w części zatytułowanej QUANTA Flash Scl Kontrole tej instrukcji. Kontrole należy stosować jednokrotnie każdego dnia używania testu, jednak użytkownicy powinni również wziąć pod uwagę krajowe/lokalne wymagania. Obliczanie wyników W firmie INOVA dla każdej nowej serii testu QUANTA Flash Scl-70 tworzona jest sześciopunktowa krzywa wzorcowa. Ta czteroparametryczna krzywa logarytmiczna jest zakodowana w kodzie paskowym każdego wkładu z odczynnikiem. Po skalibrowaniu wkładu z odczynnikiem do przekształcenia jednostek RLU w CU zostanie wykorzystana krzywa robocza właściwa dla urządzenia. Reaktywność przeciwciała względem Scl-70 może być następnie sklasyfikowana przy użyciu poniższej tabeli. Reaktywność CU Negatywna <20 Pozytywna 20 Reaktywność w CU jest bezpośrednio związana z mianem przeciwciał w próbce pochodzącej od pacjenta. Wzrosty i spadki stężeń przeciwciał u pacjenta będą odzwierciedlone w analogicznym wzroście lub spadku CU, która to zmiana jest proporcjonalna do ilości przeciwciał. Analityczny zakres pomiarowy (AMR) testu wynosi od 3,8 CU do 969,8 CU. Jeśli próbka od pacjenta da wynik mniejszy niż 3,8 CU, wówczas system BIO-FLASH wyświetli go jako <3,8 CU. Ponieważ wartość ta jest mniejsza niż 20 CU, wynik ten uznawany jest za negatywny. Jeśli próbka od pacjenta daje wynik większy niż 969,8 CU, wówczas system BIO-FLASH zgłosi go jako <969,8 CU. Wynik ten uznawany jest za pozytywny. Oprogramowanie BIO-FLASH udostępnia opcję automatycznego ponownego przeprowadzenia badania. Po wybraniu tej opcji, urządzenie automatycznie przebada ponownie każdą próbkę, która dała wynik >969,8 CU, rozcieńczając ją 20-krotnie i obliczając aktualną wartość CU z zastosowaniem współczynnika dodatkowego rozcieńczania. 6

7 Interpretacja wyników Test QUANTA Flash może wykrywać małe różnice w populacjach pacjentów. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych kontroli i populacji pacjentów, zgodnie z indywidualnie ustalonymi procedurami. Zaleca się, by wyniki zgłaszane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki uzyskano przy zastosowaniu immunologicznego testu chemiluminescencji INOVA QUANTA Flash Scl-70. Nie można stosować zamiennie wartości uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych innych producentów. Rząd wielkości poziomów raportowanego przeciwciała nie może być zawsze skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Nie u wszystkich pacjentów z twardziną układową wykrywa się przeciwciała anty-scl Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 3. Nieprawidłowe odtworzenie kulek opłaszczonych białkiem Scl-70 może doprowadzić do uzyskania niższych wartości niż w przypadku, gdyby kulki odtworzono w sposób prawidłowy. 4. Charakterystyka wyników tego testu nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. Spodziewane wartości W celu ustalenia spodziewanych wartości przebadano surowicę pochodzącą od 446 zdrowych krwiodawców. Średnia wynosiła <3,8 CU, a 95% zostało obliczone jako <3,8CU. Czułość i swoistość kliniczna Do klinicznej walidacji metody wykorzystano 67 próbek pobranych od pacjentów z twardziną układową (SSc), 61 z niepełnym zespołem CREST, 20 z reumatoidalnym zapaleniem stawów, 79 z toczniem rumieniowatym układowym, 10 z wirusowym zapaleniem wątroby typu B, 10 z wirusowym zapaleniem wątroby typu C, 8 z wirusem ludzkiego niedoboru odporności 9 z kiłą, 9 z chorobą zapalną jelit i 6 od pacjentów z nieznanymi patologiami. Dodatkowo uwzględniono próbki od 446 zdrowych krwiodawców. Wyniki badania przedstawiono poniżej: Rozpoznanie Choroba Analiza Badanie kliniczne (N=705) SSc inna niż Łącznie (95% przedział ufności) SSc Pozytywna 24 8* 32 Czułość = 35,8% (24,5 48,5%) QUANTA Flash Negatywna Swoistość = 98,7% (97,5 99,5%) Scl-70 Łącznie Łącznie = 92,8% (90,6 94,6%) *Jedna osoba zdrowa, 1 zakaźna, 2 pacjentów z niepełnym zespołem CREST i 4 pacjentów z SLE było pozytywnych w teście BIO-FLASH, ale nie chorowało na SSc (por. Mahler 2010). 7

8 Porównanie metody z zastosowaniem analizatora predykatywnego Próbki do przeprowadzenia analizy porównawczej metody obejmowały próbki z klinicznej walidacji metody, których wyniki mieściły się w raportowanym zakresie testu. Próbki te badano zarówno przy użyciu testu QUANTA Flash Scl-70, jak i predykatowego testu ELISA. Porównanie metody (N=711) Scl-70 ELISA Pozytywna Negatywna Łącznie Pozytywna QUANTA Flash Scl-70 Negatywna CIA Łącznie Zgodność procentowa (95% przedział ufności) Procentowa zgodność wyników pozytywnych = 88,9% (70,8 97,6%) Procentowa zgodność wyników negatywnych = 98,8% (97,7 99,5%) Procentowa zgodność wyników łącznie = 98,5% (97,2 99,2%) Precyzja i powtarzalność Precyzję testu QUANTA Flash Scl-70 określono przeprowadzając badania próbek od 8 pacjentów, a uzyskane dane podsumowano poniżej: Zmienność w obrębie testu Zmienność między testami Próbka N Średnia SD % CV Próbka N Średnia SD % CV A 6 (CU) 8,7 0,8 9,4% A 6 (CU) 19,5 0,3 1,5% B 6 18,8 0,4 2,0% B 6 9,3 0,3 3,1% C 6 21,7 0,8 3,8% C 6 50,7 1,4 2,8% D 6 49,4 1,0 2,1% D 6 147,2 3,7 2,5% E 6 140,6 1,4 1,0% E 6 290,8 5,7 2,0% F 6 273,7 9,2 3,4% F 6 435,0 12,9 3,0% G 6 420,5 9,7 2,3% G 6 840,2 30,7 3,7% H 6 815,0 18,3 2,2% H 6 22,5 0,9 4,2% Granice wykrywania; liniowy i analityczny zakres pomiarowy Według CLSI EP17-A dolna granica wykrywania dla tego testu wynosi w przybliżeniu 560 RLU, co odpowiada 0,4 CU, czyli wartości, która znajduje się zdecydowanie poniżej dolnej granicy analitycznego zakresu pomiarowego. Górny limit wykrywania wynosi około RLU, co stanowi około 340% powyżej górnej granicy analitycznego zakresu pomiarowego. Cały zgłaszany analityczny zakres pomiarowy, od 3,8 CU do 969,8 CU, jest liniowy. Badanie liniowości przeprowadzono zgodnie z CLSI EP6-A, a uzyskane dane podsumowano poniżej: Próbka Zakres testu (CU) Nachylenie (95% przedział ufności) Przecięcie z osią Y (95% przedział ufności) R² 3 2,1-21,1 1,00 (0,92-0,99) -0,10 (-0,40-0,19) 1,00 1 5,1-51,6 0,96 (0,93-0,99) 0,07 (-0,85-1,00) 1, ,0-119,5 0,94 (0,90-0,98) 2,74 (0,08-5,41) 0, ,6-428,0 0,99 (0,96-1,01) 8,9 (1,8-16,0) 1, ,8-1476,0 1,03 (0,99-1,07) -2,94 (-38,44-32,56) 1,00 8

9 QUANTA Flash Scl Kalibratory Do diagnostyki In Vitro PRZEZNACZONY TYLKO NA EKSPORT. NIE JEST PRZEZNACZONY DO SPRZEDAŻY W STANACH ZJEDNOCZONYCH. Przeznaczenie Kalibratory QUANTA Flash Scl-70 są przeznaczone do stosowania z testem chemiluminescencji (CIA) QUANTA Flash Scl-70 w analizatorze BIO-FLASH. Każdy kalibrator ustala punkt odniesienia dla krzywej roboczej, którą wykorzystuje się do określenia ilości jednostek chemiluminescencji (CU) w pomiarach przeciwciał przeciw Scl-70 w surowicy. Podsumowanie i zasady badania W teście chemiluminescencji QUANTA Flash Scl-70 CIA wykorzystuje się predefiniowaną, właściwą dla każdej serii testu, krzywą wzorcową (Master Curve), która zakodowana jest w kodzie kreskowym na wkładzie z odczynnikiem. Kalibratory QUANTA Flash Scl-70 opracowano w celu uzyskania właściwej dla urządzenia krzywej roboczej na bazie parametrów krzywej wzorcowej, przy czym punkt decyzji zależy od charakterystyki wydajności i oceny klinicznej QUANTA Flash Scl-70 CIA. Przed oceną ich wartości kalibratory przebadano na wielu analizatorach z zastosowaniem wielu serii odczynników. Odczynniki 1. Kalibrator 1 QUANTA Flash Scl-70: Dwie (2) probówki opisane kodami kreskowymi zawierające 0,3 ml wstępnie rozcieńczonego odczynnika gotowego do użytku. Kalibratory zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko Scl-70 w buforze, stabilizatory białka oraz konserwanty. 2. Kalibrator 2 QUANTA Flash Scl-70: Dwie (2) probówki opisane kodami kreskowymi zawierające 0,3 ml wstępnie rozcieńczonego odczynnika gotowego do użytku. Kalibratory zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko Scl-70 w buforze, stabilizatory białka oraz konserwanty. Ostrzeżenia 1. Kalibratory zawierają substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%), która według stanu Kalifornia wywołuje raka. 2. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 3. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego względu kalibratory QUANTA Flash Scl-70 należy użytkować w ten sam sposób, jako materiał potencjalnie zakaźny Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony indywidualnej. 5. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. 9

10 Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro. 2. Kalibratory QUANTA Flash Scl-70 przeznaczone są do zastosowania z testem QUANTA Flash Scl Nie przenosić kalibratorów do innych probówek. Kody kreskowe na probówkach wykorzystywane są przez analizator do dopasowania kalibratorów do odpowiedniego typu testu. 4. Po otwarciu probówki z kalibratorem można go stosować przez okres do 8 godzin lub można go wykorzystać do 4 kalibracji, następnie odczynnik należy wyrzucić. 5. Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem analizatora. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, mogą spowodować zaburzenia w teście. Należy stosować się do zaleceń dotyczących procedury czyszczenia analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. Warunki przechowywania 1. Nieotwarte kalibratory przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Otwarte kalibratory należy wyrzucić po 8 godzinach. Procedura 1. Każda nowa seria wkładu z odczynnikiem musi zostać skalibrowana przed pierwszym użyciem. Oprogramowanie nie zezwoli na wykorzystanie nowej serii, dopóki nie zostanie ona skalibrowana. 2. Aby upewnić się, że kalibratory są homogeniczne, należy każdy z nich wymieszać. Należy unikać powstawania piany, ponieważ pęcherzyki mogą zaburzać wykrywanie poziomu płynu przez analizator. Zdjąć zatyczkę z każdej probówki zawierającej kalibrator i umieścić obie z nich w statywie na próbki, przy czym kody kreskowe muszą skierowane być przodem do szczelin w statywie. Umieścić statyw na próbki w karuzeli na próbki analizatora BIO-FLASH i zamknąć drzwiczki. Analizator odczyta kody kreskowe na probówkach zawierających kalibratory i zidentyfikuje potrzebny wkład z odczynnikiem. Szczegółowe instrukcje odnośnie pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO-FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. 3. Analizator przebada każdy kalibrator w trzech powtórzeniach. Po przebadaniu kalibratorów oprogramowanie będzie wymagać zatwierdzenia kalibracji. Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options Ctrl-M ( ). Wybrać opcję Calibration Ctrl-F3. W oknie Calibration (Kalibracja) należy zaznaczyć odpowiedni test i kliknąć Details. 4. W nowym oknie Calibration Details należy wybrać rodzaj właśnie dokonanej kalibracji. Zostanie wyświetlona krzywa wzorcowa w formie linii przerywanej i nowa krzywa robocza w formie linii ciągłej. Jeśli wyniki kalibracji są ważne, wówczas na dole ekranu po lewej stronie zostanie wyświetlony przycisk zatwierdzenia. Należy kliknąć przycisk Validate Calibration. 5. Po zatwierdzeniu kalibracji skalibrowana seria wkładu z odczynnikiem jest gotowa do użycia. Zalecane jest, aby kontrole QUANTA Flash Scl-70 (sprzedawane oddzielnie nr produktu ) przebadać po uprzednim skalibrowaniu serii wkładu z odczynnikiem. 10

11 Identyfikowalność Nie ma dostępnej żadnej międzynarodowej surowicy referencyjnej dla przeciwciał anty-scl-70, która umożliwia standaryzację testów przeciwciał anty-scl-70. Zamiast tego zbadano surowicę referencyjną z Centrum Zwalczania i Zapobiegania Chorób (CDC) dla przeciwciał anty-scl-70 (przeciwciała anty-scl-70, Topoizomeraza DNA I, IS2135 ANA nr 9) i stężenie określono na >969,8 CU. Ograniczenia Kalibratory te są przeznaczone do przeprowadzenia 4 kalibracji. Całkowity czas przez jaki probówki z kalibratorem mogą pozostawać otwarte w analizatorze wynosi 8 godzin. Jeśli kalibratory pozostaną otwarte w analizatorze przez dłuższy okres czasu, wówczas należy jej wyrzucić. Stosowanie tych samych probówek z kalibratorami do więcej niż 4 kalibracji i/lub przez czas dłuższy niż 8 godzin może skutkować nieprawidłową kalibracją testu, co z kolei może doprowadzić do uzyskania błędnych wyników. 11

12 QUANTA Flash Scl Kontrole Do diagnostyki In Vitro PRZEZNACZONY TYLKO NA EKSPORT. NIE JEST PRZEZNACZONY DO SPRZEDAŻY W STANACH ZJEDNOCZONYCH. Przeznaczenie Kontrole QUANTA Flash Scl-70 przeznaczone są kontroli jakości zestawu do testu chemiluminescencji (CIA) QUANTA Flash Scl-70, który przeprowadza się w urządzeniu BIO-FLASH. Podsumowanie i zasady badania W skład kontroli testu QUANTA Flash Scl-70 wchodzi kontrola negatywna i kontrola pozytywna. Każda z nich zawiera inną ilość przeciwciał przeciw Scl-70. Kontrola negatywna ma za zadanie posłużyć do oceny precyzji i dokładności testu przy bardzo małych stężeniach przeciwciał. Kontrola pozytywna ma za zadanie posłużyć do oceny precyzji i dokładności testu przy stężeniu przeciwciał od umiarkowanego do bardzo dużego. Odczynniki 1. Kontrola negatywna QUANTA Flash Scl-70: Dwie (2) probówki opisane kodami kreskowymi zawierające 0,5 ml odczynnika gotowego do użytku. Kontrole zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko Scl-70 w buforze, stabilizatory oraz środki konserwujące. 2. Kontrola pozytywna QUANTA Flash Scl-70: Dwie (2) probówki opisane kodami kreskowymi zawierające 0,5 ml odczynnika gotowego do użytku. Kontrole zawierają ludzkie przeciwciała przeciwko Scl-70 w buforze, stabilizatory oraz środki konserwujące. Ostrzeżenia 1. Kontrole zawierają substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%), która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 3. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego względu kontrole QUANTA Flash Scl-70 należy użytkować w ten sam sposób, jako materiał 5 potencjalnie zakaźny. 4. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony indywidualnej. 5. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. 12

13 Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych In Vitro. 2. Kontrole QUANTA Flash Scl-70 przeznaczone są do zastosowania z testem QUANTA Flash Scl Nie przenosić kontroli do innych probówek. Kody kreskowe na probówkach używane są przez analizator do identyfikacji kontroli. 4. Po otwarciu, każdą probówkę z kontrolą można używać do 15 razy, przy maksymalnym czasie przebywania w analizatorze wynoszącym 10 minut podczas jej wykorzystania. 5. Zanieczyszczenie chemiczne odczynników może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem analizatora. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, mogą spowodować zaburzenia w teście. Należy stosować się do zaleceń dotyczących procedury czyszczenia analizatora przedstawionych w podręczniku użytkownika BIO-FLASH. Warunki przechowywania 1. Nieotwarte kontrole przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Po otwarciu, każdą probówkę z kontrolą można używać do 15 razy, przy maksymalnym czasie przebywania w urządzeniu wynoszącym 10 minut podczas jej wykorzystania. Całkowity czas, przez jaki probówki z kontrolą mogą pozostawać otwarte w analizatorze wynosi 2,5 godz. lub 10 minut na wykorzystanie. Jeśli kontrole pozostaną w analizatorze otwarte, łącznie dłużej niż 2,5 godz., kontrole należy wyrzucić. Użytkowanie tych samych probówek z kontrolami ponad 15 razy i/lub przez czas dłuższy niż 2,5 godz. łącznie, może doprowadzić do otrzymania błędnych wyników. 3. Aby zapewnić odpowiednią stabilność, należy usunąć kontrole z systemu natychmiast po zbadaniu próbki i należy przechowywać je w temperaturze 2 8 C w zamkniętej oryginalnej fiolce. Procedura Tworzenie nowych materiałów KJ do badania Scl Przed pierwszym użyciem kontroli QUANTA Flash Scl-70 w analizatorze, do oprogramowania należy wprowadzić nazwę, serię, datę przydatności do użycia, wartość (lub dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym. 2. Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options Ctrl-M ( ). Wybrać opcję QC Ctrl-F2. Kliknąć przycisk New QC Material. 3. Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii. W pierwszej kolejności należy wprowadzić do oprogramowania nazwę, numer serii i datę ważności. Następnie kliknąć przycisk Add Assay. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję Show All Assays. Wybrać badanie Scl-70 z listy i kliknąć Add. Na końcu należy wprowadzić docelową dawkę i docelowe odchylenie standardowe (SD). Kliknąć Save. Procedurę należy przeprowadzić dla obu kontroli. Tworzenie nowej serii dla istniejących materiałów KJ. 1. Przed pierwszym użyciem nowej serii kontroli QUANTA Flash Scl-70 do oprogramowania należy wprowadzić serię, datę przydatności do użycia, wartość (lub dawkę) oraz informację o docelowym odchyleniu standardowym. 2. Na ekranie Instrument Summary kliknąć przycisk strzałki Choose more options Ctrl-M ( ). Wybrać opcję QC Ctrl-F2. Zaznaczyć pozycję badania Scl-70 w kolumnie po lewej stronie. Następnie zaznaczyć odpowiedni materiał kontrolny po prawej stronie ( SCL70N w przypadku kontroli negatywnej lub SCL70 w przypadku kontroli pozytywnej). Kliknąć przycisk New QC Lot. 13

14 3. Do każdego zestawu kontroli dołączony jest arkusz z danymi dotyczącymi tej właśnie serii. Wprowadzić informacje z tego arkusza do oprogramowania. Powinno to obejmować numer serii, datę przydatności do użycia, docelową dawkę oraz docelowe odchylenie standardowe. Jeśli to konieczne, kliknąć przycisk Add Assay. W nowym oknie należy zaznaczyć opcję Show All Assays. Wybrać badanie Scl-70 z listy i kliknąć Add. Kliknąć Save. Procedurę należy przeprowadzić dla obu kontroli. Zalecane jest, aby kontrole QUANTA Flash Scl-70 wykorzystywać jeden raz, każdego dnia kiedy ma zostać użyty test; jednak użytkownicy powinni także wziąć pod uwagę krajowe/lokalne wymagania. Aby upewnić się, że kontrole są homogeniczne, należy każdą z nich wymieszać przed użyciem. Należy unikać powstawania piany, ponieważ pęcherzyki mogą zaburzać wykrywanie poziomu płynu przez analizator. Zdjąć zatyczkę z każdej probówki zawierającej kontrolę i umieścić obie z nich w statywie na próbki, przy czym kody kreskowe muszą skierowane być przodem do szczelin w statywie. Umieścić statyw na próbki w karuzeli na próbki analizatora BIO-FLASH i zamknąć drzwiczki. Urządzenie odczyta kody kreskowe na probówkach zawierających kontrole i zidentyfikuje potrzebny wkład z odczynnikiem. Szczegółowe instrukcje odnośnie pracy z analizatorem chemiluminescencyjnym i oprogramowaniem BIO- FLASH można znaleźć w podręczniku użytkownika dołączonym do systemu BIO-FLASH. Identyfikowalność Nie ma dostępnej żadnej międzynarodowej surowicy referencyjnej dla przeciwciał anty-scl-70, która umożliwia standaryzację testów przeciwciał anty-scl-70. Zamiast tego zbadano surowicę referencyjną z Centrum Zwalczania i Zapobiegania Chorób (CDC) dla przeciwciał anty-scl-70 (przeciwciała anty-scl-70, Topoizomeraza DNA I, IS2135 ANA nr 9) i stężenie określono na >969,8 CU. Ograniczenia Kontrole te można wykorzystać 15 razy. Na etykiecie każdej probówki z kontrolą znajduje się szereg 15 pól, które można skreślać, aby śledzić ile razy kontrola została użyta. Całkowity czas, przez jaki probówki z kontrolą mogą pozostawać otwarte w analizatorze wynosi 2,5 godz. lub 10 minut na wykorzystanie. Jeśli kontrole pozostaną otwarte w urządzeniu przez dłuższy czas, wówczas należy je wyrzucić. Użytkowanie tych samych probówek z kontrolami ponad 15 razy i/lub przez czas dłuższy niż 2,5 godz.łącznie, może doprowadzić do uzyskania błędnych wyników. 14

15 Piśmiennictwo 1. Mahler M, Fritzler MJ: Epitope specificity and significance in systemic autoimmune diseases. Ann N Y Acad Sci 2010; 1183: Walker JG, Pope J, Baron M, Leclercq S, Hudson M, Taillefer S, Edworthy SM, et al. The development of systemic sclerosis classification criteria. Clin Rheumatol 2007, 26: Mahler M, Silverman ED, Schulte-Pelkum J, Fritzler MJ. Anti-Scl-70 (topo-i) antibodies in SLE: Myth or reality? Autoimmun Rev 2010, 9: Fritzler MJ, Rattner JB, Luft LM, Edworthy SM, Casiano CA, Peebles C, et al. Historical perspectives on the discovery and elucidation of autoantibodies to centromere proteins (CENP) and the emerging importance of antibodies to CENP-F. Autoimmun Rev 2011, 10: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 2009, Fifth Edition. 15

16 Zastosowane symbole Diagnostyczne urządzenie medyczne do zastosowań In Vitro Przed użyciem należy zapoznać się z instrukcją Ograniczenia temperaturowe Nie wykorzystywać ponownie Zagrożenia biologiczne Kod partii Numer katalogowy Termin przydatności do użycia Producent Autoryzowany przedstawiciel Zawiera ilość wystarczającą do przeprowadzenia < n > testów Kontrola pozytywna Kontrola negatywna Kalibrator 1 Kalibrator 2 Papierowe pudełko nadaje się do recyklingu Tą stroną do góry 16

17 QUANTA Flash jest znakiem zastrzeżonym handlowym firmy INOVA Diagnostics Inc. BIO-FLASH jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy Biokit S.A Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA Stany Zjednoczone Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): support@inovadx.com Autoryzowany przedstawiciel na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Niemcy Tel.: Faks: POL Marzec 2013 Wersja 2 17