Diagnostyka grzybów. 2) Preparat barwiony nigrozyną lub tuszem chińskim (przy podejrzeniu kryptokokozy) uwidocznienie otoczek Cryptococcus neoformans

Transkrypt

1 I Grzyby drożdżopodobne (drożdże) 1) Ocena morfologii kolonii na podłożu izolacyjnym (zwłaszcza konsystencja, zabarwienie): Candida: białe, kremowe Cryptococcus: białe, kremowe, śluzowate Uwaga! Gatunki Malassezia (za wyjątkiem M. pachydermatis głównie izolowany od zwierząt) nie wyrosną na standardowych podłożach izolacyjnych, ponieważ do wzrostu in vitro wymagają obecności lipidów. Wzrost tych grzybów można uzyskać na podłożu Sabourauda z dodatkiem oliwy z oliwek lub na specjalnych podłożach Dixona, Leeminga- Notmana. 2) Preparat barwiony nigrozyną lub tuszem chińskim (przy podejrzeniu kryptokokozy) uwidocznienie otoczek Cryptococcus neoformans 3) Przesiew grzyba na podłoże zubożone hodowla pod szkiełkiem nakrywkowym (technika wg Dalmau). Ocena mikroskopowa hodowli: Candida: w zależności od gatunku obecność blastospor, strzępek / pseudostrzępek, chlamydospor Cryptococcus: obecność okrągłych blastospor Geotrichum: obecność prostokątnych artrospor 4) Testy identyfikacyjne próba filamentacji (ang. germ tube test) umożliwia szybką identyfikację gatunków Candida albicans i Candida dubliniensis, które po 2-3 godzinach inkubacji w surowicy wykazują zdolność do tworzenia wypustek (filamentów ang. germ tube), testy fermentacyjne (zymogramy) umożliwia identyfikację gatunków na podstawie zdolności grzyba do przekształcania różnych cukrów do alkoholu i dwutlenku węgla (fermentacji) Opracowała: Magdalena Skóra Strona 1

2 testy asymilacyjne (auksamogramy węglowodanowe i azotowe) badają zdolność grzyba do asymilacji (przyswajania) różnych cukrów i związków azotowych jako jedynych źródeł węgla i azotu badanie zdolności grzyba do produkcji ureazy na podłożu z dodatkiem mocznika i wskaźnika barwnego np. odróżnienie rodzaju Geotrichum (wynik ujemny) od Trichosporon (wynik dodatni) oraz Candida (wynik ujemny) od Cryptococcus (wynik dodatni). Diagnostyka immunologiczna W przypadku podejrzenia inwazyjnej kandydozy oraz kryptokokozy można zastosować testy immunologiczne wykrywające antygeny grzybów oraz przeciwciała przeciwgrzybicze. Testy te nie mają zastosowania do rozpoznawania zakażeń powierzchniowych! Diagnostyka molekularna Dla Candida dostępne są testy komercyjne. Opracowała: Magdalena Skóra Strona 2

3 Uproszczony algorytm identyfikacji drożdży. Źródło: Krzyściak P., Skóra M., Macura A.B.: Atlas grzybów chorobotwórczych człowieka. Wyd. MedPharm, 2011 Opracowała: Magdalena Skóra Strona 3

4 II Grzyby pleśniowe 1) Ocena morfologii kolonii na podłożu izolacyjnym charakterystyczny wygląd grzybów strzępkowych 2) Przesiew grzyba na podłoża do oceny morfologii kolonii pleśni: Czapek-Dox (Aspergillus, Penicillium, Scopulariopsis), podłoże z ekstraktem słodowym, inne np. CYA. 3) Ocena morfologii kolonii na powyższych podłożach. 4) Ocena mikromorfologii grzyba: przygotowanie preparatów z hodowli, założenie mikrohodowli szkiełkowej. Metody immunologiczne W przypadku podejrzenia inwazyjnej aspergilozy można zastosować testy immunologiczne wykrywające antygeny grzybów oraz przeciwciała przeciwgrzybicze. Testy te nie mają zastosowania do rozpoznawania zakażeń powierzchniowych! Diagnostyka molekularna Dla Aspergillus dostępne są testy komercyjne. Opracowała: Magdalena Skóra Strona 4

5 III Dermatofity 1) Ocena morfologii kolonii na podłożu izolacyjnym (wzrost na podłożu Sabourauda z dodatkiem cykloheksymidu większość pleśni nie wzrasta w obecności tej substancji!) 2) Przesiew grzyba na specjalne podłoża do identyfikacji dermatofitów np.: agary Trichophyton 1 7 zestaw 7 podłoży do identyfikacji gatunków Trichophyton w zależności od zapotrzebowań odżywczych: podłoże Christensena (z dodatkiem mocznika i czerwieni fenolowej) wykrywanie ureazy, odróżnienie gatunków Trichophyton rubrum (wynik ujemny) od Trichophyton mentagrophytes (wynik dodatni) 3) Ocena mikromorfologii grzyba przygotowanie preparatów z hodowli, założenie mikrohodowli szkiełkowej. Metody immunologiczne Nie mają zastosowania. Metody molekularne Brak testów komercyjnych. Opracowała: Magdalena Skóra Strona 5