BIOINFORMATYKA Gromadzenie informacji: Literatura naukowa, Sekwencje DNA, RNA, białek, charakterystyczne motywy, Inne cząsteczki biologiczne, Struktury, Interakcje białek, Profile ekspresji, Szlaki biochemiczne, Choroby, Mapy genetyczne OGÓLNODOSTĘPNE BAZY DANYCH SQ Sequence 1634 BP; 413 A; 537 C; 378 G; 306 T; 0 other; ctatatagcg tcaatcagtt ggattaaacc cagagaccat acaccgaaca ccatgctaat 60 gcacgaaaaa ctcatggccg ggcagttctt cgatctcaag actggtaagt tggccacgcc 120 ccttggtttc tcctcgatcc gtaaactaac aaatcccctc tctctctcaa tctttgcaga 180 tcgcaagccc ctgatgcacc accaccagta ccagcaccac cagcagcaac cgctgcacca 240 cttgccgcac agccaattgc cggttcaggg atccttgggc ctgcccaaaa tggatctgta 300 cacggcctac gcctaccagc agcagttgct gggagctgcc ctcagtcagc agcaacaaca 360 gcaacagcag cagcagcaac atcagcagct gcagcagcag catacctcct ctgcagaggt 420 cctggatctt tcccgtcgat gtgacagcgt agagacgccc aggaagactc cctcgccgta 480 tcaaacaagc tacagctacg gcagtggttc cccctcggct tcgcccacca gcaatcttct 540 gtatgccgcc caaatgcaac agcagcaaca tcagcagcaa caacagcaac agcagcagca 600 gcaacaatta gcctccctgt atcccgcttt ttactacagc aacatcaagc aggagcaagc 660 //
Metody sekwencjonowania: Enzymatyczna terminacji łańcuchów DNA - 1975 (100 kpz / dzień / urządzenie) Enzymatyczna rejestrująca aktywność polimerazy Hybrydyzacyjna / h. z wykorzystaniem ligazy Bezpośredni odczyt sekwencji nukleotydów na unieruchomionej pojedynczej cząsteczce Miliardy pz na dzień / urządzenie
Przetwarzanie informacji - wnioskowanie: Na potrzeby baz danych Na potrzeby projektów badawczych: Edycja i opis podstawowych cech sekwencji Wyszukiwanie charakterystycznych rejonów w sekwencjach Projektowanie oligonukleotydów Porównywanie, poszukiwanie polimorfizmu, filogenetyka Przewidywanie struktury cząsteczek istniejących Projektowanie nowych cząsteczek
J.Craig Venter - wizjoner nauki czy biotechnologiczny biznesman? Genom ludzki Metagenomika Organizm syntetyczny
Adams MD i in., Science, 21 czerwca 1991
Cele projektu poznania genomu ludzkiego Ustalić sekwencję 3 miliardów par zasad z ludzkiego DNA, Zidentyfikować wszystkie z około 22000 genów w DNA człowieka, Przechowywać tę informację w bazach danych, Opracować narzędzia do analizy danych, Przenieść związane z projektem technologie do sektora prywatnego Zwrócić uwagę na wynikające z projektu problemy ważne ze względów etycznych, cywilno-prawnych i społecznych. http://genomics.energy.gov/
Sekwencjonowanie hierarchiczne w HGP: najpierw zmapowanie wielkoinsertowych klonów, potem sekwencjonowanie losowe Zastosowane przez J.C. Venter a sekwencjonowanie losowe całego genomu (whole genome shotgun sequencing) omija etap mapowania klonów Intl. Hum. Gen. Seq. Cons. (2001), Nature 409: 860-921.
CELERA GENOMICS Adams MD et al., (2000) Science 287(5461):2185-95
Human Genome Project & CELERA GENOMICS 26-06-2000 J. Craig Venter & Bill Clinton & Francis Collins
Intl. Hum. Gen. Seq. Cons. (2001) Nature 409: 860-921 Udział 20 ośrodków z 6 krajów Hierarchical shotgun sequencing DNA od wielu osób 15 miesięcy* Wybór kolekcji klonów o minimalnym zachodzeniu, pokrywających chromosomy Losowe sekwencjonowanie głównie klonów BAC i PAC (8 bibliotek) (wielkość fragmentów sekwencjonowanych itp. zależne od ośrodka) Pokrycie genomu 4,5 x (dla klonów) Intl. Hum. Gen. Seq. Cons. (2001) Nature 409: 860-921.
Venter JC i in. (2001) Science 291: 1304-51 CELERA GENOMICS Whole genome shotgun DNA od 5 osób 9 miesięcy Wykorzystanie 500-600 ntd sekwencji końców klonów o średniej długości wstawki 2, 10 i 50 kpz Włączenie sekwencji z publicznych baz danych po pofragmentowaniu na 500 600 ntd kawałki Pokrycie genomu 5,11 x Venter JC i in. (2001) Science 291: 1304-51
Era genomów indywidualnych Genom referencyjny 2001/2003 HGP consortium & Celera Genomics Watson 2007 Venter 2007 Anonimowy Joruba, 2008 454 Life Sciences (Roche) JC Venter Institute Illumina (Solexa) 3 000 000 000$ 1 000 000 $ 70 000 000 $ 100 000 $??? Intl. Hum. Gen. Seq. Cons. (2001) Nature 409: 860-921. Venter JC i in. (2001) Science 291:1304-51 Wheeler DA i in. (2008) Nature 452: 872-6 http://jimwatsonse quence.cshl.edu/ (bez informacji o wariancie ApoE) Levy S. i in. (2007) PLoS Biology 5: e254 Anonimowy Han, Chiny, 2007 Beijing Genomics Institute
Diploidalny genom J.C. Venter a Metoda Sangera 32 mln odczytów sekwencji, pokrycie genomu 7,5 x 4,1 mln zmian (12,3 Mpz) 22% zmian to nie SNP (znaczenie duplikacji!) 44% genów heterozygotycznych Zróżnicowanie osobnicze ~1-2% Levy S. i in. (2007) PLoS Biology 5: e254
Konsekwencje znajomości genomu indywidualnego Warianty genów J.C. Venter a wskazują na zwiększone ryzyko wystąpienia m.in.: choroby alkoholowej, zachowań aspołecznych, uzależnienia od papierosów, innych uzależnień, chorób serca, ch. Alzheimer a Ujawnienie własnego genomu to również ujawnienie znacznej części genomu krewnych Jak wobec takiej informacji zachowają się ubezpieczyciele i pracodawcy? Efekt obserwowanych predyspozycji zależy w znacznej mierze od interakcji na poziomie proteomu i czynników środowiskowych Levy S. i in. (2007) PLoS Biology 5: e254
Jo Handelsman (2004) Microbiology and Molecular Biology Reviews 68: 669-685 METAGENOMIKA Zastosowanie nowoczesnych technik genomowych do badania populacji mikroorganizmów, występujących w danym środowisku, z ominięciem izolacji i hodowli laboratoryjnej poszczególnych gatunków
Wyprawa H.M.S. Challenger (1872-1876) pod kierownictwem Prof. Wyville Thomson a 68 000 MM 29 552 str. Sprawozdania Prawie 4000 nowych gatunków
Global Ocean Sampling Expedition (GOS)
Pobieranie próbek w trakcie ekspedycji GOS J.C. Venter Institute
Ekspedycja Global Ocean Sampling Pierwsza faza 8000MM 41 miejsc pobierania 7,7 mln sekwencji 6,3 mld pz 6,1 mln nowych białek 1700 brak podobieństwa Seria 3 publikacji PLOS Biology Marzec 2007
Minimal genome project Mycoplasma genitalium Fraser CM et al. (1995) Science, 270:397-403 517 genów (482 kodujących białka 382 niezbędnych) Około 580 000 pz Projekt zsyntetyzowania organizmu Sztuczny mikroorganizm - bioreaktor Piąta zasada, nowe aminokwasy Peptide Nucleic Acids (PNA)
W stronę syntetycznego życia Synteza bakteriofaga ΦX174 (5386 pz) 2003 r. Transplantacja genomu M. capricolum do cytoplazmy M. mycoides LC (2007) Syteza genomu Mycoplasma genitalium 582 970 pz (2008) Oligonukleotydy > 5-7 > 24 > 72 (1/8) > 144 (1/4) > 582,97 kpz (1/1) Klonowanie genomu M. mycoides w drożdżach i transplantacja do cytoplazmy M. capricolum. Transplantacja syntetycznego genomu do cytoplazmy > powstanie Synthii (Mycoplasma laboratorium) 2010?
Czy sekwencje genomów indywidualnych pomogą w leczeniu chorób? Czy w genach organizmów z mórz i oceanów jest odpowiedź na kryzys paliwowy? Czy lawinowy przyrost ilości informacji przerodzi się w jakość? Czy Synthia spełni pokładane w niej nadzieje?