Działanie bakteriobójcze Środka biobójczego Clinell GAMA Healthcare Ltd. zbadane za pomocą Europejskiego Standardowego Testu według normy BS EN 1276:1997 wobec: Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 (ATCC 700603). Marzec 2007 Autor P. Humphreys Autoryzowane przez: P. Humphreys Uniwersytet w Huddersfield
Badania przeprowadzone przez: Uniwersytet Huddersfield Laboratorium mikrobiologiczne Huddersfield Szkoła Nauk Stosowanych, Queensgate, Huddersfield HD1 3DH Badania mikrobiologiczne Metoda badań Brytyjska/Europejska Norma BS EN 1276:1997. Rozcieńczenie-neutralizacja Procedury badań Pełen opis użytych szczegółów badania i procedur kontrolnych jest zamieszczony w Metodzie Badania Środek dezynfekujący Środek biobójczy Clinell GAMA Healthcare Ltd. Numer serii: N/A Data dostarczenia: czerwiec 2006 Warunki przechowywania: 20 ºC - 25 ºC Substancje czynne: nie wyszczególniono Wygląd rozcieńczonego produktu: bezbarwny, przejrzysty, czysty roztwór Substancja interferująca (Zakażenie kontrolne) 1. Symulowane warunki bez obciążeń organicznych: 0.3 g l -1 albuminy wołowej (stężenie końcowe) 2. Symulowane obciążenie organiczne 3.0 g l -1 albuminy wołowej (stężenie końcowe) Temperatura Pokojowa (23-25 ºC) Czas kontaktu 5 (± 10 s) minut. Badane Mikroorganizmy Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 Pożywka bakteryjna Tryptone Soya Agar, Lab M Inkubacja Płytki zostały poddane inkubacji w temperaturze 37 ºC przez 24-48 godzin. Rozcieńczalnik MRD, Lab M Neutralizator Neutralizator zawierający 60g/l Tween 80, 60g/l Saponiny, 2g/l L- Histydyny, 2g/l L-cysteiny w MRD
Metoda ogólna Przygotowano standardową zawiesinę badanych bakterii zawierającą 1.5 5.0 x 10 8 komórek bakteryjnych na ml -1. 1 ml substancji interferującej został wprowadzony pipetą do Uniwersalnej butelki, a następnie 1 ml zawiesiny badanych bakterii. Wszystko zostało wymieszane i zostawione na 2 minuty. Po 2 minutach dodano 8 ml środka biobójczego Gamma Health Care Ltd i wymieszano. Po czasie kontaktu wynoszącym 5 minut, próbka 1ml z mieszanki poddanej reakcji została wprowadzona pipetą do 9 ml neutralizatora i zostawiona na 5 minut. Próbka 1 ml została wtedy wprowadzona próbką do dwóch szalek Petriego i zmieszana z 15 ml pożywki bakteryjnej w temperaturze 47 ºC. Po nastawieniu szalki Petriego były poddane inkubacji w temperaturze 37 ºC. Jednostki tworzące kolonię zostały policzone po 2-3 dniach inkubacji i przeliczono frakcję organizmów, które przeżyły. Badany mikroorganizm Badany mikroorganizm Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 (ATCC 700603) jest szczepem wielolekoopornym, który: wykazuje umiarkowaną oporność na ceftriaxone i gentamicin, jest stosowany jako organizm kontrolny do produkcji beta-laktamazy o szerszym spektrum i produkuje beta-laktamazy SHV-18 jest oporny na ampicylinę, aztreonam, cefoxitin, cefpodoxime, ceftazidime, chloramphenicol, piperacillin i tetracyklinę Wymagania tej normy Produkt w czasie badania przy zachowaniu symulowanych warunków bez obciążeń organicznych (0.3 g l -1 albuminy wołowej) albo warunków z obciążeniami organicznymi (3 g l -1 albuminy wołowej) w żądanych warunkach dla badania (23 do 25 ºC, kontakt 5 minut, dla Klebsiella pneumoniae NCTC 13368, powinien wykazać redukcję przynajmniej 5 log 10 całkowitej liczby żywych kolonii bakterii. Wyniki 1 Wyniki zostały podsumowane w Tabelach 1 i 2, pełen zestaw wyników jest w Tabeli 3. Warunki Badania Czas kontaktu (minuty) Uzyskana Redukcja Log10 0.3 g l -1 (bez obciążeń organicznych) 5 >5 1 3.0 g l -1 (z obciążeniami organicznymi) 5 >5 1 Tabela 1. Redukcja Log10 całkowitej liczby żywych kolonii Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 po 5 minutach wystawienia na badany materiał. Organizm porównawczy Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 Początkowe stężenie CFU ml -1 1.6 x 10 8 (150,164 1, 15, 16 2 ) CFU = liczba jednostek tworzących kolonie 1 całkowita liczba żywych kolonii bakterii, 1ml próbka zawiesiny bakteryjnej 10-6 2 ałkowita liczba żywych kolonii bakterii, 1ml próbka zawiesiny bakteryjnej 10-7 Końcowe stężenie CFU ml -1 bez obciążeń 0.3 g l -1 Albumina wołowa Liczba bakterii oznaczana metodą płytkową 0,0. (Rzeczywista redukcja 6 log 10 ) Końcowe stężenie CFU ml -1 z obciążeniami 3.0 g l -1 Albumina wołowa Liczba bakterii oznaczana metodą płytkową 0,0 (Rzeczywistaredukcja 6 log 10 ) Tabela 2 Reducja całkowita liczba żywych kolonii Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 po czasie ekspozycji 5 minut na badany materiał.
Omówienie Wyników W czasie badania wobec Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 przy czasie kontaktu 5 minut środek biobójczy Clinell GAMA Healthcare Ltd. spełnia wymagania Normy w symulowanych warunkach bez obciążeń i z obciążeniami organicznymi. Wnioski Zgodnie z Normą EN 1276:1997 partia dostarczonego środka biobójczego Clinell ma działanie działanie bakteriobójcze w czasie 5 minut w temperaturze pokojowej (23-25ºC) w warunkach bez obciążeń organicznych (0.3g/l albuminy wołowej) i warunkach z obciążeniami organicznymi (3g/l albuminy wołowej) dla szczepu odniesienia Klebsiella pneumoniae NCTC 13368. Podpisał Dr Paul Humphreys Szkoła Nauk Stosowanych Uniwersytet w Huddersfield 1 Patrz Tabela z wynikami w Załączniku 1.
Załącznik 1 Badany Mikroorganizm Klebsiella pneumoniae Bakteryjna Zawiesina Nv 1.6E+03 Walidacja warunków badania Bez obciążeń organicznych Vc 178 187 A 1.8E+02 Weryfikacja Metodologii Spełnione N jest między 1.5E+8 cfu/ml i 5E+8 cfu/ml, N = 1.6E+08 Tak N jest między 6E+2 cfu/ml i 3E+3 cfu/ml, Nv = 1.6E+03 Tak Bez obciążeń A 0.05 x Nv kiedy 0.05 x Nv = 7.8E+01 Tak Z obciążeniami A 0.05 x Nv kiedy 0.05 x Nv = 7.8E+01 Tak B 0.05 x Nv kiedy 0.05 x Nv = 7.8E+01 Tak Bez obciążeń C 0.5 x B kiedy 0.5 x B = 8.5E+02 Tak Z obciążeniami C 0.5 x B kiedy 0.5 x B = 8.5E+02 Tak Badanie walidacyjne Z obciążeniami organicznymi 193 192 1.9E+02 Kontrola Toksyczności Neutralizatora Vc 158 181 B 1.7E+02 Kontrola rozcieńczenia Neutralizatora Bez obciążeń organicznych Vc 173 182 C 1.8E+02 Log10 Reductions (cfu/ml) Bez obciążeń > 5.32 Z obciążeniami > 5.32 Test Zawiesinowy Z obciążeniami organicznymi 10-6 150 164 158 177 1.7E+02 10-7 15 16 N 1.6E+08 Bez obciążeń organicznych Vc < 15 15 Na < 1.5E+02 R > 2.E +05 Wyniki Procedury Testu Z obciążeniami organicznymi < 15 15 < 1.5E+02 > 2.E +05 Tabela 3. Badanie Klebsiella pneumoniae NCTC 13368 poddanej działaniu środka biobójczego Clinell GAMA Healthcare Ltd. przy użyciu normy BS EN 1276:1997. Tel: 01484 472771 e-mail: p.n.humphreys@hud.ac.uk