1.MEDIA BEZSUROWICZE WSTĘP NOWE TECHNOLOGIE SPIS MEDIÓW MEDIA O ZDEFINIOWANYM SKŁADZIE CHEMICZNYM...

Transkrypt

1 Spis treści 1.MEDIA BEZSUROWICZE WSTĘP NOWE TECHNOLOGIE SPIS MEDIÓW MEDIA O ZDEFINIOWANYM SKŁADZIE CHEMICZNYM PANEXIN NTA PANEXIN NTS PANEXIN BMM MEDIA BEZSUROWICZE (HIGH EFFICIENCY MEDIA) PANSERIN PANSERIN PANSERIN 293A PANSERIN 293S PANSERIN H PANSERIN C PANSERIN H PANSERIN T PANSERIN ProVero PANSERIN S SPODOPAN ENDOPAN 300 SL INNE MEDIA BEZSUROWICZE PANSERIN Panserin 411S PANSERIN PANSERIN PANSERIN PANSERIN 604ST PANSERIN 604SPF... 58

2 PANSERIN PANSERIN PANSERIN PX PANSERIN PX MEDIA BEZSUROWICZE DO HODOWLI KOMÓREK MACIERZYSTYCH POWERStem ESPro POWERStem ESPro POWERStem HE POWERStem HE POWERStem EST PowerStem MSC PowerStem HPSC POWERStem PEC DRZEWKA DECYZYJNE SUROWICE WSTĘP CERTYFIKAT COS SUROWICE BYDLĘCE SUROWICE PODDANE OBRÓBCE INNE SUROWICE ZWIERZĘCE SERA PLUS SUROWICA LUDZKA CERTYFIKAT ANALIZY MEDIA DO KULTUR KOMÓRKOWYCH WSTĘP MEDIA ALPHA MEM BME Z SOLAMI EARLE A POŻYWKA BSK-H POŻYWKA CLICKA POŻYWKA CMRL DMEM (Dulbecco s Modified Eagle Medium)

3 DMEM F GLASGOW MEM (BHK 21) POŻYWKA GRACE A (Grace s Insect Medium) POŻYWKA HAM S F POŻYWKA HAM S F ISCOVE S MODIFIES DULBECO S MEDIA (IMDM) POŻYWSKA IPL-41 do komórek owadzich JOKLIK- MEM L-15 (Leibovitz s L-15 Medium) POŻYWKA Mc COY S 5A POŻYWKA MCDB POŻYWKA 199 z SOLAMI EARLE A (M199) MEM Z SOLAMI EARLE A RPMI POŻYWKA SCHNEIDER A (Schneider s Drosophila Medium) POŻYWKA TC 100 DO KOMÓREK OWADZICH TNM-FH WAYMOUTH S MB 752/ Pożywka E William a (William s Medium E) MEDIA SPECYFICZNE ENDOPAN ENDOPAN PRO HAEMANGIOPAN (pożywka do hem angioblastu) HEPATOPAN (pożywka dla hepatocytów ludzkich) MELANOPAN (pożywka dla melanocytów) EHCPAN (pożywka dla komórek EHC) NEUROPAN (Pożywka dla komórek neuronalnych) STEMPAN (Pożywka dla komórek ES) EMEM Fibroblasts (pożywka dla fibroblastów) AMNIOPAN (pożywka do cytogenetyki prenatalnej) MARROWPAN (pożywka do komórek szpiku) DODATKI DO POŻYWEK

4 4.1 DODATKI DO MEDIÓW BUFOROWANE ROZTWORY SOLI BUFOROWANY ROZTWÓR DPBS ROZTWÓR SOLI EARLA ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI GEY A ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI HANK A ROZTWÓR A SOLI PUCK A ROZTWÓR SOLI TYRODE A AMINOKWASY i WITAMINY ANTYBIOTYKI I ŚRODKI PRZECIWGRZYBICZE ENZYMY DO DYSOCJACJI KOMÓREK KOLAGENAZA TYPU I KOLAGENAZA TYPU II KOLAGENAZA TYPU III TRYPSYNA I INNE CZYNNIKI PRZYLEGANIA KOLAGEN A KOLAGEN R (TYP I) LAMININA MYSIA ALBUMINY ROZTWÓR ŻELATYNY ROZTWORY DO SEPARACJI PANCOLL i POWERCOLL POŻYWKA DO IZOLACJI LIMFOCYTÓW KRIOKONSERWACJA DMSO (dimetylosulfotlenek) POŻYWKA MROŻENIOWA CRYOPAN LINIA PRODUKTÓW PAN SL-S USŁUGI WPROWADZENIE SPECJALNA OBRÓBKA RÓŻNYCH PARTII SUROWICY

5 5.3.BADANIA BIOCHEMICZNE TESTY NA CZYNNIKI PATOGENNE TESTY FUNKCJONALNE KOMÓRKI PODDAWANE OBRÓBCE ODCZYNNIKI DO BADAŃ BIOLOGICZNYCH CZYNNIKI WZROSTU LUDZKIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU MYSIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU SZCZURZE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU INNE CYTOKINY CHEMOKINY LUDZKIE CHEMOKINY MYSIE CHEMIKINY Pozostałe cytokiny BIOLOGIA MOLEKULARNA POLIMERAZY Taq Polimeraza DNA PANScript Polimeraza DNA PANScript red Polimerazy DNA Polimeraza DNA PANPhusion Polimerazy DNA PAN Hot Start PowerScript DNA-Polymerases short range (Polimeraza DNA PowerScript do krótkich fragmentów DNA) PowerScript long DNA Polymerase (Polimeraza do długich fragmentów DNA) Polimerazy DNA TrueScript Polimerazy DNA PAN Mix Polimerazy DNA PAN Mix red PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red ENZYMY MODYFIKUJĄCE PAN Ligation Kit (Zestaw do ligacji) Proteinaza K MARKERY MASY CZĄSTECZKOWEJ

6 7.3.1.PANLadder I PANLadder IV PANLadder V PANLadder VI ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ PAN DNA Clean PAN Dye Enhancer X-Gal IPTG Agaroza (molecular grade) DODATKI I BUFORY Bufor MgCl Bufor KCl (10x) Dodatek HiSpec Additive Dodatek PAN Mate Additive NUKLEOTYDY dNTP Sets (Zestawy dntp) dNTP Mix (mieszanina deoksyrybonukleotydów) dntps (Deoksyrybonukleotydy) MATERIAŁY LABORATORYJNE DETEKCJA MYKOLPLAZMY RIDASCREEN, Mycoplasma IFA * ŚRODKI ODKAŻAJĄCE Barrycidal Desipure C Barrydin

7 1. MEDIA BEZSUROWICZE 1.1.WSTĘP Informacje podstawowe: Hodowla komórkowa, czyli hodowanie in vitro (w probówce) komórek wyizolowanych z żywej tkanki, jest uznanym i wartościowym narzędziem w badaniach biomedycznych, pozwalającym na uzyskanie powtarzalnych wyników. Hodowle komórkowe pozwalają również na coraz wydajniejszą produkcję skutecznych substancji na wielką skalę w medycynie i badaniach (np. insulina, czynniki wzrostu, przeciwciała monoklonalne i czynniki krzepnięcia). Hodowla komórek z surowicą: Komórki w warunkach in vitro wymagają roztworów substancji odżywczych, nazywanych pożywkami, które naśladują środowisko in vivo (w żywym organizmie). Z drugiej strony pożywki te, będące mieszanką czynników odżywczych, soli, pierwiastków śladowych, czynników buforujących, czynników wzrostu, substancji ochronnych i wielu innych składników, muszą być uzupełnione naturalnymi, wysoce złożonymi dodatkami. Do niedawna nie tylko zwierzęca, ale również ludzka surowica była środkiem używanym w technologii produkcji, między innymi z braku innych możliwości. Funkcja surowicy w hodowli komórkowej: Czynniki hormonalne stymulują wzrost, namnażanie i różnicowanie. Czynniki przylegania umożliwiają lub ułatwiają przyczepianie komórek do naczyń hodowlanych (Biomatrix). Białka transportowe i wiążące dostarczają między innymi hormonów, minerałów i lipidów. Białka surowicy wiążą substancje toksyczne. Jednak surowica, głównie płodowa surowica bydlęca (FBS), może być przyczyną problemów z wielu powodów. Wady stosowania surowicy w hodowli komórkowej: Skład surowicy nie jest stały i zmienia się wraz z wiekiem płodu, pochodzeniem i sposobem żywienia zwierząt oraz porą roku. Poszczególne partie surowicy muszą być testowane pod kątem odpowiednich zastosowań przed użyciem. Wyniki doświadczeń często nie są przekonujące i porównywalne z powodu niezdefiniowanego i zmiennego składu surowicy. Ryzyko zakażenia bakteriami, grzybami, mykoplazmą i wirusami pochodzącymi z surowicy. Możliwość zanieczyszczenia produktu końcowego białkami i pirogenami pochodzącymi z surowicy. Czasochłonne oczyszczanie produktu końcowego z pożywki hodowlanej zawierającej surowicę. Dostępność i koszt surowicy. Hodowla bezsurowicza:

8 Z powodu wielu wad hodowli komórkowej w pożywkach zawierających surowicę, od pewnego czasu prowadzono testy zmierzające do opracowania warunków hodowli komórkowych bez surowicy. Zalety bezsurowiczej hodowli komórkowej: Niskie ryzyko zakażenia bakteriami, grzybami lub wirusami. Lepiej zdefiniowany i powtarzalny skład pozwala na bardziej przekonujące i porównywalne wyniki badań. Nie jest konieczne czasochłonne testowanie poszczególnych partii produktu. Eliminacja źródła czynników potencjalnie infekcyjnych (wirusy, priony). Ułatwienie oczyszczania produktu końcowego. Spełnienie wymagań prawnych dotyczących produktów stosowanych w medycynie. Ograniczenie zanieczyszczeń produktu końcowego przez pozostałości pożywki hodowlanej. Definicje: Pożywki bezsurowicze: Pożywki bezsurowicze mogą być używane bez żadnych suplementów lub dodatku surowicy. W niektórych przypadkach mogą zawierać zdefiniowane i oczyszczone składniki lub subfrakcje surowicy (n.p. albumina, transferyna lub insulina), lub użyte hydrolizaty białek lub wydzielin gruczołów (BPE, BBE). Pożywki bezbiałkowe: Pożywki bezbiałkowe wspomagają wzrost komórek nie zawierając przy tym żadnych białek. Mają wyższą zawartość aminokwasów i hydrolizatów roślinnych. Pożywki chemicznie zdefiniowane: Pożywki chemicznie zdefiniowane są całkowicie wolne od składników zwierzęcych i ludzkich. Wszystkie składniki maja znaną, chemicznie zdefiniowaną budowę i skład. To prowadzi do bardzo stałego i stabilnego składu o pozytywnym wpływie na jakość, powtarzalność i zmniejszenie zmienności pomiędzy partiami. Zapewnienie jakości: Każda partia jest produkowana wyłącznie z uprzednio przetestowanych składników aby zapewnić stałą i najwyższą jakość. Jakość naszej wody wolnej od pirogenów jest regularnie badana aby zapewnić najwyższy poziom czystości (0,055 µs/cm), gdyż nawet najmniejsza zmiana jakości może mieć szkodliwy wpływ na komórki w hodowli bezsurowiczej. Wszystkie partie produktów Panserin są kierowane do sprzedaży dopiero po zakończeniu procesu kontroli jakości i otrzymaniu wymaganych specyfikacji.

9 1.2 NOWE TECHNOLOGIE Podczas wielu lat badań firma PAN-Biotech rozwinęła, zoptymalizowała i wprowadziła na rynek dużą liczbę bezsurowiczych mediów odpowiednich dla wielu typów komórek. Cały proces rozwoju i optymalizacji wymaga dużego nakładu pracy czasu. Od momentu rozpoczęcia procesu wytwarzania nowego produktu do jego wypuszczenia na rynek może minąć nawet kilka lat. Firma przy każdym nowym projekcie stara się spoglądać na dany problem z bardzo szerokiej perspektywy, starając się wykorzystać najlepsze, innowacyjne rozwiązania wybiegając, tym samym naprzeciw potrzebom klientów. Dzięki temu właśnie, stworzony został przez PAN- Systech (filia PAN-Biotech) w pełni zautomatyzowany system do hodowli komórkowych. PAN-SysTech został wydzielony jako technologiczny odłam z Pan-Biotech- biotechnologicznej firmy o długoletnim stażu i wyrobionej pozycji na rynku niemieckim. Aktulanie PAN-Systech GmbH jest głównym producentem, uwzględniającym najnowsze osiągnięcia nauki i techniki, rozprowadzającym swoje wyroby na całym świecie. PAN-Systech rozwija, produkuje i wprowadza na rynek szeroką paletę innowacyjnych biotechnologicznych systemów, ukierunkowanych głównie na hodowle komórkowe, włączając w to najnowsze aplikacje technologiczne dotyczące procesów biologicznych. Z pełni zautomatyzowanymi systemami do hodowli komórkowych można realizować całkowicie nowe technologie. Dzięki systemom możliwym stało się prowadzenie hodowli różnych komórek jednocześnie w kompletnie odbiegających od siebie warunkach i pod stałą obserwacją mikroskopową. Wszystkie wykonywane przez użytkownika czynności np. : dodawanie indywidualnych składników, ewentualnie zmiana ich koncentracji, wywoływanie pozytywnego (usprawnienie wzrostu) bądź negatywnego efektu (zahamowanie wzrostu) na wzrost komórek, mogą być bezpośrednio mierzone w tym systemie. Wszystkie otrzymane przez nas wyniki, dane mogą być przechowywane i później ponownie odtwarzane. Pojawiające się w komórkach zmiany morfologiczne są natychmiast identyfikowane i oceniane w zależności od składu medium. PANsys300 PANsys4000 Szczegółowe informacje dotyczące systemów zautomatyzowanej hodowli komórek PANsys3000 i PANsys4000 znajdują się na stronie

10 Zautomatyzowany system hodowli komórek oferuje wyjątkowe funkcje i wiele zalet do opracowania pożywek bezsurowiczych: Redukcję czasu rozwoju poprzez bardziej przekonujące rezultaty Dopasowywanie optymalnych stężeń indywidualnych substancji Porównanie pomiarów produktów konkurencyjnych i zapisywanie wyników Warunki hodowli(temperatura, CO2) mogą być zmieniane w dowolnym momencie Całkowita kontrola indywidualnych serii, partii Dzięki systemowi byliśmy w stanie nie tylko rozwinąć gotowe do użycia media (z serii PANSERIN) ale także media o chemicznie zdefiniowanym składzie (Panexin NTA i Panexin NTS), jak również szeroką gamę bezsurowiczych mediów do hodowli komórek macierzystych (serię PowerStem). Rys.1 Komórki hodowane w Systemie PanSys Bezsurowcze, odżywcze media bez dodatku składników pochodzenia ludzkiego bądź zwierzęcego, podobnie bezbiałkowe media są również dostępne w asortymencie firmy PAN- Biotech. W odniesieniu do nowoczesnych i unikalnych technologii stosowanych do rozwoju bezsurowiczych mediów 2 generacji, nie jest wymagany proces adaptacji; jeśli chodzi o komórki wymagające ( np.komórki macierzyste), proces adaptacji do warunków bezsurowiczych trwa dłużej aczkolwiek nie jest problematyczny ze względu na istniejące szczegółowe zapisy i protokoły. W razie pojawienia się jakichkolwiek pytań, problemów, proszę kontaktować się z naszymi konsultantami.

11 1.3 SPIS MEDIÓW Media o chemicznie zdefiniowanym składzie Panexin NTA Panexin NTS 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml P P P P Panexin BMM 100 ml P04-951SA2 Media bezsurowicze,,high Efficiency PANSERIN 401 PANSERIN 604 PANSERIN 293A PANSERIN 293S PANSERIN H4000 PANSERIN C6000 PANSERIN H8000 PANSERIN T3 PANSERIN ProVero PANSERIN S2 SPODOPAN Endopan 300 SL ready-to-use Endopan 300 SL kit 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 500 ml 500 ml P M P P M P P M P P M P P M P P M P P M P P P P M P P P P P P P K Inne media bezsurowicze PANSERIN 411 PANSERIN 411S PANSERIN ml 500 ml 500 ml 1000 ml 100 ml 500 ml P M P P S1 P S P M P PANSERIN 413 with one supplement 500 ml P PANSERIN 416 with one supplement 500 ml P PANSERIN 604ST 500 ml P04-604ST PANSERIN 604SPF 500 ml P04-604SPF PANSERIN ml 500 ml P M P PANSERIN 801 with 6 supplements 500 ml P PANSERIN PX ml P04-710PX10 PANSERIN PX ml P04-710PX40

12 Media bezsurowicze do hodowli komórek macierzystych PowerStem ESPro 1 with LIF PowerStem ESPro 1 without LIF PowerStem ESPro 2 with LIF PowerStem ESPro 2 without LIF PowerStem HE1 PowerStem HE2 PowerStem EST PowerStem MSC PowerStem HPSC 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K P K

13 1.4. MEDIA O ZDEFINIOWANYM SKŁADZIE CHEMICZNYM PANEXIN NTA Panexin NTA jest kompletnym, chemicznie zdefiniowanym substytutem surowicy do hodowli komórek adherentnych w pożywce bez surowicy. PANEXIN NTA został opracowany w unikalnej technologii i zawiera 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS) dla optymalnego zapewnienia komórkom składników odżywczych i stymulatorów wzrostu. Gotowy do użytku, przygotowany sterylnie roztwór dodaje się do pożywki w końcowym stężeniu 10%. W sposób optymalny wspiera on rozwój wielu typów komórek adherentnych. Skład: Panexin NTA zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, hormony i czynniki przylegania w zoptymalizowanym stężeniu, oraz nowy 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS). Nie zawiera czynników wzrostu lub nieokreślonych hydrolizatów i peptonów. Przydatność: Panexin NTA jest odpowiedni do hodowli różnych komórek adherentnych bez surowicy. Szczególne zalety: Panexin NTA może być wykorzystywany do różnych linii komórkowych, całkowicie zastępując FBS. Ze względu na starannie wybrane i przetestowane poszczególne składniki, partie Panexin NTA są bardzo jednorodne. W związku z tym złożone badania poszczególnych partii stosowane przy FBS mogą być pominięte w przypadku wykorzystania Panexin NTA. Dotychczas stosowane pożywki podstawowe mogą być nadal używane. Panexin NTA jest całkowicie zdefiniowany chemicznie i nie zawiera nieokreślonych peptonów lub hydrolizatów. Dzięki temu w hodowli bezsurowiczej interpretacja wyników badań nad efektami dodawanych czynników wzrostu jest łatwiejsza i bardziej rzetelna. W przypadku linii komórkowych, które wymagają specyficznych czynników wzrostu, należy je dodać w zwykłym stężeniu jak dotychczas. Stosowanie: W wielu przypadkach hodowla bez surowicy może być prowadzona bez złożonych procedur adaptacyjnych dla linii komórek adherentnych, takich jak HEK293, CHO, L929, 3T3A. Rozmroź Panexin NTA w łaźni wodnej, w temperaturze 37 C. Unikaj wielokrotnego powtórnego zamrażania i rozmrażania. Pokryj komórki trypsyną/edta (np. roztworem 0,25%). Kiedy komórki staną się kuliste i odczepią się od podłoża dodaj inhibitor w celu inaktywacji trypsyny (trawienie zachodzi szybciej w temperaturze 37 C). Przenieś komórki do DPBS (bez Ca/Mg) i zwiruj je. Usuń supernatant sterylnie. Zawieś komórki w pożywce podstawowej (RPMI 1640, DMEM lub innej) i policz liczbę komórek.

14 Dodaj sterylnie 10% Panexin NTA do pożywki podstawowej zamiast FBS. Dodaj zawiesinę komórek do pożywki podstawowej uzupełnionej Panexin NTA. Posiej komórki w zagęszczeniu komórek/cm 2. Inkubuj komórki w zwykły sposób w inkubatorze w obecności CO 2, w temperaturze 37 C. W zależności od rodzaju komórek optymalne stężenie Panexin NTA może się wahać pomiędzy 5 a 15%, porównywalnie do stężenia FBS stosowanego zazwyczaj. Optymalne stężenie Panexin NTA powinno być ustalone dla każdej linii komórkowej. Próby najlepiej rozpoczynać od 10%, ponieważ takie stężenie daje najlepsze wyniki w większości komórek. Jako podstawowej pożywki można użyć klasycznych pożywek, takich jak RPMI 1640, DMEM (z wysoką lub niską zawartością glukozy), DMEM/F12, IMDM itd. Należy upewnić się, że L- glutamina jest obecna w wystarczającym stężeniu (ewentualnie uzupełnić L-glutaminę). W zależności od rodzaju komórek, mogą wystąpić pewne różnice w morfologii lub tempie wzrostu w porównaniu do różnych standardowych pożywek. W hodowli komórek adherentnych w wielu przypadkach stosuje się pożywkę DMEM lub DMEM/F12. Dla tych kombinacji uzyskano najlepsze wyniki przy dodatku 5% - 15% Panexin NTA. W przypadku bardziej wymagających komórek może być konieczna adaptacja do Panexin NTA. Instrukcje adaptacji do Panexin NTA: Głównym warunkiem pomyślnej adaptacji do hodowli bez surowicy są zdrowe komórki (wykazujące żywotność >90% w wykluczającym barwieniu błękitem trypanu), które powinny być zbierane w logarytmicznej fazie wzrostu. Komórki zbierz w zwykły sposób. Uzupełnij pożywkę podstawową 10% Panexin NTA = MedPAN (ostateczny roztwór pozostaje stabilny przez co najmniej 4 tygodnie w temperaturze 4 C ) Uzupełnij pożywkę podstawową 10% FBS = MedFBS. 1) 75% MedFBS : 25% MedPAN Posiej komórki komórek/cm 2. Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj przy 90% konfluencji. pasażuj komórki 2-3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 2) 50% MedFBS: 50% MedPAN Posiej komórki w zagęszczeniu komórek/cm 2. Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj przy 90% konfluencji. pasażuj komórki 2-3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 3) 25% MedFBS: 75% MedPAN

15 Posiej komórki w zagęszczeniu komórek/cm 2. Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj przy 90% konfluencji. pasażuj komórki 2-3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 4) 100% MedPAN Posiej komórki w zagęszczeniu komórek/cm 2. Obserwuj komórki pod mikroskopem. W przypadku niektórych komórek adaptacja do warunków bez surowicy może być utrudniona lub wręcz niemożliwa. Następujące środki mogą ułatwić pomyślną adaptację: Posiew większej ilości komórek (2-4 krotnie większa gęstość niż standardowo) Dodanie czynników wzrostu (jeżeli wiadomo, jakie czynniki mają pozytywny wpływ na odpowiednie komórki). Pokrycie szalek lub butelek hodowlanych czynnikami przylegania (takimi jak fibronektyna, laminina, kolagen, żelatyna lub inne). Zmiana podstawowej pożywki. Warto zauważyć, że zmiana pożywki na bogatszą lub bardziej złożoną może całkowicie rozwiązać problemy związane z hodowlą bez surowicy. Rys.1 Wydajność i stymulacja wzrostu komórek pod wpływem PANEXIN NTA w porówaniu do FBS (każdy 10% w DMEM/F12)

16 \tre bn CHO Cells 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 MDCK Cells 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 HEK 293 Cells 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 Primary human Fibroblasts 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 Rys.2 Różne typy linii komórkowych w DMEM/F12 z dodatkiem 10% PANEXIN NTA REFERENCJE: a) Hashimoto J et al. (2006) Regulation of Proliferation and Chondrogenic Differentation of Human Mesenchymal Stem Cells by Laminin-5 (Laminin-332). Stem Cells 24:2346 b) Traeger T et al. (2008) Detrimental Role of CC Chemokine Receptor 4 in Murine Polymicrobial Sepsis. Infection and Immunity 11:5285 PANEXIN NTA 100 ml 500 ml P P

17 PANEXIN NTS Panexin NTS jest kompletnym, chemicznie zdefiniowanym substytutem surowicy do hodowli komórek w zawiesinie w pożywce bez surowicy. PANEXIN NTS został opracowany w unikalnej technologii i zawiera 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS) dla optymalnego zapewnienia komórkom składników odżywczych i stymulatorów wzrostu. Gotowy do użytku, przygotowany sterylnie roztwór dodaje się do pożywki w końcowym stężeniu 10%. W sposób optymalny wspiera on rozwój wielu typów komórek. Skład: Zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe i hormony w zoptymalizowanym stężeniu oraz nowy 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS). Nie zawiera czynników wzrostu lub nieokreślonych hydrolizatów i peptonów. Przydatność: Hodowla różnych komórek w zawiesinie bez surowicy. Szczególne zalety: Panexin NTS może być wykorzystywany do różnych linii komórkowych, całkowicie zastępując FBS. Ze względu na wybrane i przetestowane poszczególne składniki, partie Panexin NTS są bardzo jednorodne. W związku z tym złożone badania poszczególnych partii stosowane przy FBS mogą być pominięte w przypadku wykorzystania Panexin NTS. Dotychczas stosowane pożywki podstawowe mogą być nadal używane. Panexin NTS jest całkowicie zdefiniowany chemicznie i nie zawiera żadnych czynników wzrostu, nieokreślonych peptonów lub hydrolizatów. Dzięki temu w hodowli bezsurowiczej interpretacja wyników badań nad efektami dodawanych czynników wzrostu jest łatwiejsza i bardziej rzetelna. W przypadku linii komórkowych, które wymagają specyficznych czynników wzrostu, należy je dodać w zwykłym stężeniu tak jak dotychczas. Stosowanie: W wielu przypadkach hodowla bez surowicy może być zastosowana bez złożonych procedur adaptacyjnych (w wielu ustalonych liniach komórkowych hodowanych w zawiesinie, takich jak HL60, K562 i komórkach hybrydoma). Rozmroź Panexin NTS w łaźni wodnej, w temperaturze 37 C. Unikaj wielokrotnego powtórnego zamrażania i rozmrażania. Komórki nieadherentne mogą być bezpośrednio przeniesione do pożywki (np. RPMI 1640, IMDM) uzupełnionej 10% Panexin NTS. Posiej komórki w zagęszczeniu 5 x x 10 5 komórek/ml. W zależności od rodzaju komórek optymalne stężenie Panexin NTS może się wahać pomiędzy 5 a 15%, porównywalnie do stężenia FBS stosowanego zazwyczaj. Optymalne stężenie Panexin

18 NTS powinno być ustalone dla każdej linii komórkowej. Próby najlepiej rozpoczynać od 10%, ponieważ takie stężenie daje najlepsze wyniki w większości komórek. Jako podstawowej pożywki można użyć klasycznych pożywek, takich jak RPMI 1640, DMEM (z wysoką lub niską zawartoscią glukozy), DMEM/F12, IMDM itd. Należy upewnić się, że L- glutamina jest obecna w wystarczającym stężeniu (ewentualnie uzupełnić L-glutaminę). W zależności od rodzaju komórek, mogą wystąpić pewne różnice w morfologii lub tempie wzrostu w przypadku różnych standardowych pożywek. W hodowli komórek nieadherentnych w wielu przypadkach stosuje się pożywkę RPMI 1640 lub IMDM. Dla tych kombinacji uzyskano najlepsze wyniki przy dodatku 5% - 15% Panexin NTS. W przypadku bardziej wymagających komórek może być konieczna adaptacja do Panexin NTS. Instrukcje adaptacji do Panexin NTS: Głównym warunkiem pomyślnej adaptacji do hodowli bez surowicy są zdrowe komórki (wykazujące żywotność >90% w wykluczającym barwieniu błękitem trypanu), które powinny być zbierane w logarytmicznej fazie wzrostu. Komórki zbierz w zwykły sposób. Uzupełnij pożywkę podstawową 10% Panexin NTS = MedPAN (ostateczny roztwór pozostaje stabilny przez co najmniej 4 tygodnie w temperaturze 4 C ). Uzupełnij pożywkę podstawową 10% FBS = MedFBS. 1) 75% MedFBS : 25% MedPAN Posiej komórki 5 x x 10 5 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj w przypadku dobrej proliferacji (np. >1 x 10 6 /ml). Pasażuj komórki 2-3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 2) 50% MedFBS: 50% MedPAN Posiej komórki 5 x x 10 5 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj w przypadku dobrej proliferacji (np. >1 x 10 6 /ml). Pasażuj komórki 2-3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 3) 25% MedFBS: 75% MedPAN Posiej komórki 5 x x 10 5 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj w przypadku dobrej proliferacji (np. >1 x 10 6 /ml). Pasażuj komórki 2-3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 4) 100% MedPAN

19 Posiej komórki 5 x x 10 5 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). Obserwuj komórki pod mikroskopem. W przypadku niektórych komórek adaptacja do warunków bez surowicy może być utrudniona lub wręcz niemożliwa. Następujące środki mogą ułatwić pomyślną adaptację: Posiew większej ilości komórek (2-4 krotnie większa gęstość niż standardowo) Zmiana podstawowej pożywki. Warto zauważyć, że zmiana pożywki na bogatszą lub bardziej złożoną może całkowicie rozwiązać problemy związane z hodowlą bez surowicy. Rys 1. Wydajność i stymulacja wzrostu komórek pod wpływem PANEXIN NTS w porównaniu do FBS (każdy w 10% RPMI) Ag8 Cells 10 % PANEXIN NTS in RPMI 1F7 Cells 10 % PANEXIN NTS in RPMI SP2 Cells 10 % PANEXIN NTS in RPMI Rys.2 Różne linie komórkowe zawieszone w RPMI z dodatkiem 10% PANEXIN NTS

20 Referencje: a) Breitbach K et al. (2009) Caspase-1 Mediates Resistance in Murine Melioidosis. Infection and Immunity 4:1589 b) Into T et al. (2008) Regulation of MyD88-Dependent Signaling Events by S Nitrosylation Retards Toll-Like Receptor Signal Transduction and Initiation of Acute-Phase Immune Responses. Molecular and Cellular Biology 4:1338 PANEXIN NTS 100 ml 500 ml P P

21 PANEXIN BMM Panexin BMM jest chemicznie zdefiniowanym substytutem surowicy do hodowli makrofagów ze szpiku kostnego myszy (makrofagi pochodzące z mysiego szpiku kostnego, murine bone marrow derived macrophages, BMM) w pożywce bez surowicy. Gotowy do użycia sterylny roztwór jest dodawany do pożywki podstawowej w końcowym stężeniu 5% (pożywka RPMI 1640, z dodatkiem 50µm Merkaptoetanolu i 2ng/ml GM-CSF). Skład: Zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, hormony i czynniki przylegania w zoptymalizowanym stężeniu. Nie zawiera czynników wzrostu lub nieokreślonych hydrolizatów i lizatów (np. peptonów). Przydatność: Panexin BMM został opracowany do hodowli mysich makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego w pożywce bez surowicy. Pozwala to na uzyskanie ustalonych warunków hodowli i powtarzalnych wyników. Szczególne korzyści: Panexin BMM został opracowany do hodowli mysich makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego w pożywce bez surowicy, w ustandaryzowanych warunkach. Wyniki będą bardziej porównywalne gdyż niezdefiniowane składniki obecne w hodowlach z surowicą są wyeliminowane. W Panexin BMM dojrzałe makrofagi wykazują doskonałą przyczepność do podłoża. Zastosowanie: Do hodowli w pożywce bez surowicy należy dodać 5% Panexin BMM do RPMI 1640, uzupełniony o 50µm merkaptoetanol i 2ng/ml GM-CSF (rekombinowane, mysie). Po izolacji szpiku myszy, zawiesić pojedyncze komórki w pożywce poprzez częste pipetowanie, następnie odwirować komórki przez 10 minut, 200 xg. Ponownie zawiesić wyizolowane komórki w pożywce bez surowicy i posiać komórki w 20 ml pożywki, w trzech 75 mm 2 butelkach hodowlanych. Hodować w inkubatorze w temperaturze 37 C i 5% CO 2. Odżywianie komórek powinno być przeprowadzone 5 i 7 dnia hodowli przez wymianę 10 ml pożywki na świeżą pożywkę. Po upływie 10 dni komórki mogą być zebrane. Referencje: a) Kristin Eske, Katrin Breitbach, Jens Kohler, Patimaporn Wongprompitak and Ivo Steinmetz (2008) Genartion of murine bone marrow derived macrophages in a standard serum-,free cell culture system,journal of immunological Methods. PANEXIN BMM 100 ml P04-951SA2

22 1.5. MEDIA BEZSUROWICZE (HIGH EFFICIENCY MEDIA) PANSERIN 401 Panserin 401 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli wielu adherentnych i nieadherentnych komórek bez surowicy. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 10 miesięcy Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu ani przylegania. Przydatność: Panserin 401 jest uniwersalną pożywką odpowiednią dla różnych typów komórek. W Panserin 401 mogą być hodowane komórki adherentne i nieadherentne. Dzięki temu że nie zawiera czynników wzrostu, istnieje możliwość zbadania efektu specjalnie dodanych czynników wzrostu na hodowle komórek. Panserin 401 nie zawiera żadnych czynników przylegania. W przypadku niektórych typów komórek wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych przez pokrycie żelatyną, kolagenem, poli-d-lizyną lub fibronektyną może umożliwić wzrost komórek w tej pożywce lub znacznie ułatwić ich wzrost. Wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych jest szczególnie ważne przy zakładaniu hodowli o małej gęstości. Przy każdym dostosowywaniu do pożywki bez surowicy, należy brać pod uwagę zmiany w komórkach. Zmiany te mogą dotyczyć morfologii, kariotypu, markerów powierzchniowych itd. Komórki rosnące w pożywce bez surowicy nie zawsze wyglądają tak samo jak te same komórki rosnące w pożywce z dodatkiem surowicy z których wyprowadziliśmy hodowle. Między innymi następujące komórki były pomyślnie hodowane w pożywkach bez surowicy: Hybrydoma Limfocyty Makrofagi Fibroblasty Melanocyty Komórki rakowe Komórki HEK Komórki HeLa Komórki CHO

23 Zastosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki jej nie zawierającej można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą, a następnie stopniowe jej zamienianie na jej substytuty bezsurowicze. Możemy dostarczyć Państwu wiele protokołów adaptacyjnych dla wielu typów komórek. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). Dla pewnych typów komórek najlepszym rozwiązaniem może być adaptacja przez stopniowe zmniejszanie stężenia nie tylko surowicy, ale również pożywki w której komórki były dotychczas hodowane. Pożywki Panserin zostały opracowane w celu wsparcia wzrostu komórek bez użycia surowicy. Z tego powodu uniwersalna pożywka (Panserin 401) nie zawiera żadnych czynników wzrostu. Dla komórek, które są uzależnione od konkretnych czynników wzrostu należy dodać te czynniki w wymaganym stężeniu. SP2/0-Ag-14 in Panserin 401 Bez wcześniejszej adaptacji L 929 in Panserin 401 Bez wcześniejszej adaptacji

24 Referencje: a) Pilar S et al. (2002) Contribution of CD3γ to TCR regulation and signaling in human mature T lymphocytes. International Immunology 11:1357 b) Toptan T et al. (2010) Rhadinovirus vector-derived human telomerase reverse transcriptase expression in primary T cells. Gene Therapy 17:653 c) Martin F et al. (2005) Lentiviral vectors transcriptionally targeted to hematopoietic cells by WASP gene proximal promotor sequences. Gene Therapy 12:715 d) Montzka K et al. (2010) Expansion of human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells: serum-reduced medium is better than conventional medium. Cytotherapy 5:587 Jeśli potrzebujesz więcej referencji zapraszamy na stronę: PANSERIN ml 500 ml P M P

25 1.5.2 PANSERIN 604 Panserin 604 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli transfekowanych i nie transfekowanych komórek CHO (jajnik chomika chińskiego) w hodowli adherentnej. Skład: Na bazie pożywki Glasgow, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników przylegania. Przydatność: Hodowla transfekowanych i nie transfekowanych komórek CHO w hodowli adherentnej. Zalety: Wysoko wzbogacona pożywka do szybkiego wzrostu i hodowli komórek adherentnych CHO. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do Panserin 406 można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą i stopniową jej zamianę na Panserin 406. To stopniowe dostosowanie komórek będzie szybciej zachodziło jeśli będziemy zakładać hodowle z większego stężenia komórek oraz gdy będziemy wymieniać pożywkę po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywki bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu. Zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych powinniśmy być pewni, że - jeśli używaliśmy trypsyny do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory trypsyny. W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 604 można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zaleca się hodowlę pierwotną w pożywce Panserin 604 z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe jej zamienianie na czystą pożywkę Panserin 604. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu -zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest

26 zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny. PANSERIN ml P M 500 ml P

27 PANSERIN 293A Panserin 293A jest kompletną, gotową do użycia pożywką nie zawierającą surowicy do hodowli adherentnej komórek HEK-293 Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie DMEM, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników wzrostu. Przydatność: Panserin 293A jest szczególnie wzbogaconą, optymalną pożywką dla wzrostu komórek HEK-293 w hodowli adherentnej. Komórki HEK- 293 są często stosowane do ekspresji rekombinowanych białek i namnażania adenowirusów. Panserin 293A wspomaga szybką adhezję i gwarantuje wysokie tempo wzrostu komórek. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 293A można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zaleca się założenie hodowli pierwotnej w pożywce z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe jej zamienianie na pożywkę Panserin 293A bez surowicy. Hodowla komórek bez surowicy jest bardziej wydajna przy większej ich gęstości. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku transferu komórek należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny. PANSERIN 293A 100 ml 500 ml P M P

28 PANSERIN 293S Panserin 293S jest kompletną, gotową do użycia pożywką nie zawierającą surowicy, odpowiednią do hodowli komórek HEK-293 w zawiesinie. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie DMEM/F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, cholesterolu, i hydrolizatów roślinnych. Panserin 239S nie zawiera żadnych białek ani składników pochodzenia ludzkiego ani zwierzęcego. Przydatność: Panserin 293S jest szczególnie wzbogaconą optymalną pożywką dla wzrostu komórek HEK-293 w zawiesinie i szybko prowadzi do ich dużej gęstości. Dzięki specjalnemu bezbiałkowemu składowi oczyszczanie końcowego produktu (rekombinowane białka, wirusy) może być wykonane łatwiej i taniej. Zlepianie się komórek zachodzi znacznie rzadziej niż w przypadku innych pożywek bezsurowiczych. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 293S można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zaleca się założenie hodowli pierwotnej w pożywce z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe jej zamienianie na pożywkę Panserin 293S bez surowicy. Hodowla komórek bez surowicy jest bardziej wydajna przy większej ich gęstości. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces.

29 Rys 1. Wykres ukazujący wzrost komórek HEK293 w PANSERIN 293S. PANSERIN 293S 100 ml 500 ml P M P

30 PANSERIN H4000 Panserin H4000 jest to pożywka bezbiałkowa gotowa do użycia, zoptymalizowana do wzrostu szpiczaka i komórek hybrydoma w hodowli zawiesinowej do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Panserin H4000 jest przeznaczona do hodowli tkankowych i komórkowych w bioreaktorach. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Panserin H4000 zawiera zrównoważoną mieszankę soli, aminokwasów, witamin, pierwiastków śladowych, hormonów i jest wzbogacona o wybrane hydrolizaty roślinne w celu optymalizacji wzrostu szpiczaka i linii komórkowych hybrydoma. Ponieważ pożywka Panserin H4000 jest wolna od składników pochodzenia ludzkiego i zwierzęcego, jest szczególnie przeznaczona do użytku w newralgicznych obszarach produkcyjnych (np. produkcja narzędzi diagnostycznych lub terapeutycznych), gdzie wymogi bezpieczeństwa zakazują stosowania składników ludzkich lub zwierzęcych. Przydatność: Hodowla szpiczaka i lini komórkowych hybrydoma do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Szczególne zalety: Skład bezbiałkowy Panserin H4000 z niskim stężeniem hydrolizatów roślinnych umożliwia wysokie zbiory komórek w połączeniu z doskonałą wydajnością produkcji przeciwciał monoklonalnych. Gotowa do użycia, wolna od białek pożywka pozwala na łatwość użytkowania, a w związku z tym zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia i zapewnia proste i niedrogie oczyszczanie produktów końcowych w dalszych procesach.

31 Stosowanie: Dostosowanie do hodowli bezbiałkowej. Większość linii komórkowych hybrydoma może być bezpośrednio przenoszona z pożywki zawierającej surowicę do Panserin H4000. Należy zauważyć, że gęstość posiewu powinna wynosić co najmniej 1-3 x 10 5 komórek. Dla cholesterolozależnych komórek (np. X63AG8.653) należy zastosować Panserin H8000 (nr kat.: P ). Bezpośrednia adaptacja do Panserin H4000: Użyj komórek w fazie logarytmicznej (80% maksymalnej gęstości) rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (np. RPMI 1640 z dodatkiem 10% FBS). Określ liczbę komórek i ich żywotność wybarwiając komórki błękitem trypanu. Posiej ok. 1-3 x 10 5 komórek/ml w ogrzanej pożywce Panserin H4000. Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37 C i 5% CO 2. Po osiągnięciu ok. 80% maksymalnego zagęszczenia komórek przenieś je do świeżej pożywki Panserin H4000. Początkowo utrzymuj wysoką gęstości posiewu aż komórki dostosują się do pożywki bezbiałkowej. Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą z dodatkiem surowicy, komórki należy przenosić do świeżej pożywki Panserin H4000 co 3-4 dni. Jeśli tempo wzrostu nie jest wystarczające lub maksymalna gęstość komórek nie została osiągnięta, należy wykonać opisaną poniżej pośrednią adaptację. Pośrednia adaptacja do Panserin H4000: Użyj komórek w fazie logarytmicznej (80% maksymalnej gęstości) rosnących w pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład RPMI 1640 z 10% FBS). Określ liczbę komórek i ich żywotność wybarwiając komórki błękitem trypanu. Posiej ok. 1-3 x 10 5 komórek/ml w ogrzanej pożywce Panserin H4000 z dodatkiem 5% FBS. Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37 C i 5% CO2. Po osiągnięciu ok. 80% maksymalnego zagęszczenia komórek przenieś je do świeżej pożywki Panserin H4000 z dodatkiem 2% FBS. Podczas następnego transferu użyj Panserin H4000 z dodatkiem 1% FBS, a ostatecznie Panserin H4000 z dodatkiem 0,1% FBS (w taki sam sposób jak opisano powyżej). Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą z dodatkiem surowicy, należy przenosić komórki do świeżej pożywki Panserin H4000 bez dodatku FBS co 3-4 dni.

32 PANSERIN H ml 500 ml P M P PANSERIN C6000 Panserin C6000 jest gotową do użycia pożywką bezbiałkową do zoptymalizowanego wzrostu komórek CHO i ich rekombinowanych pochodnych w hodowli zawiesinowej. Komórki te są często wykorzystywane do produkcji rekombinowanych białek dla celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Panserin C6000 jest odpowiednia do hodowli w butelkach hodowlanych i w bioreaktorach. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Panserin C6000 jest zrównoważoną mieszanką soli, aminokwasów, witamin, pierwiastków śladowych, hormonów i jest wzbogacona o wybrane hydrolizaty roślinne w celu optymalizacji wzrostu komórek CHO w hodowli zawiesinowej. Ponieważ pożywka Panserin C6000 jest wolna od składników pochodzenia ludzkiego i zwierzęcego, jest szczególnie przeznaczona do użytku w newralgicznych obszarach produkcyjnych (np. produkcja narzędzi diagnostycznych lub terapeutycznych), gdzie wymogi bezpieczeństwa zakazują stosowania składników ludzkich lub zwierzęcych. Przydatność: Hodowla bezbiałkowa komórek CHO i ich rekombinowanych pochodnych w hodowli zawiesinowej, do produkcji rekombinowanych białek dla celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: Opracowana przez naszą firmę pożywka bezbiałkowa Panserin C6000 z niskim stężeniem hydrolizatów roślinnych umożliwia wysoką całkowitą liczbę komórek w połączeniu z doskonałą szybkością produkcji rekombinowanych białek. Gotowa do użycia kompletna pożywka bezbiałkowa pozwala na łatwą obsługę hodowli, w związku z tym zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia i zapewnia proste i niedrogie oczyszczanie produktów końcowych. Ze względu na zoptymalizowany skład Panserin C6000 komórki rozwijają się i wzrastają w zawiesinie nie tworząc agregatów.

33 Stosowanie: Dostosowanie do hodowli w pożywce bezbiałkowej. Większość adherentnych komórek CHO może być bezpośrednio przenoszona z pożywki zawierającej surowicę do hodowli zawiesinowej w pożywce bezbiałkowej. W większości przypadków hodowla komórek w zawiesinie rozwija się w przeciągu 2 tygodni. Bezpośrednia adaptacja do Panserin C6000: Użyj adherentnych komórek w fazie logarytmicznej rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład DMEM z wysoką zawartością glukozy i 10% FBS). Usuń pożywkę zawierającą surowicę za pomocą pipety. Komórki przemyj PBS (bez Ca/Mg). Pokryj komórki trypsyną/edta (0,25%, 0,02%), (około 2 ml na butelkę T25). Usuń trypsynę po około 1 minucie. Inkubuj komórki dopóki nie zrobią się kuliste i nie odczepią się od podłoża (po około 5 minutach). Komórki przenieś do PBS i policzyć liczbę komórek. Posiej 5 x x 10 5 komórek/ml w ogrzanej pożywce Panserin C6000. Użyj naczyń do hodowli komórek w zawiesinie (np. Greiner Bio-One Code ). Inkubuj w temperaturze 37 C i 5% CO 2 w inkubatorze.

34 W ciągu kilku pierwszych dni komórki pozostaną w fazie spoczynku, gdzie często nie zachodzi proliferacja komórek. Po około 7 dniach komórki przyzwyczają się do pożywki bezbiałkowej i rozmnożą się do 1 x 10 6 komórek/ml. Przenoś komórki co 3 do 4 dni do świeżej pożywki. (Gęstość zasiewu 3-5 x 10 4 komórek/ml). Okres podwojenia komórek CHO w Panserin C6000: 16.5 godziny. PANSERIN C ml 500 ml P M P

35 PANSERIN H8000 Panserin H8000 jest gotową do użycia pożywką bezbiałkową do zoptymalizowanego cholesterolozależnego wzrostu szpiczaka i komórek hybrydoma w hodowli zawiesinowej do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Panserin H8000 jest odpowiedni do prowadzenia hodowli w bioreaktorach tkankowych i komórkowych. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Panserin H8000 składa się ze zrównoważonej mieszanki soli, aminokwasów, witamin, pierwiastków śladowych, hormonów, biodostępnego cholesterolu i jest wzbogacona o wybrane roślinne hydrolizaty w celu optymalizacji wzrostu cholesterolozależnych komórek szpiczaka i hybrydomy. Przydatność: Hodowla cholesterolozależnych komórek szpiczaka i hybrydomy do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Szczególne zalety: Specjalnie opracowana pożywka bezbiałkowa Panserin H8000 o niskim stężeniu hydrolizatów roślinnych umożliwia wysoką całkowita liczbę komórek w połączeniu z doskonałą wydajnością produkcji przeciwciał monoklonalnych. Panserin H8000 nie zawiera składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego i jest przeznaczony do użytku w newralgicznych obszarach produkcyjnych (np. produkcja narzędzi diagnostycznych lub terapeutycznych), gdzie wymogi bezpieczeństwa zakazują stosowania składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Gotowa do użycia kompletna pożywka bezbiałkowa pozwala na łatwą obsługę hodowli, w związku z czym zmniejsza ryzyko zakażenia i zapewnia proste i niedrogie oczyszczanie produktów końcowych. Stosowanie: Dostosowanie do hodowli w pożywce bezbiałkowej. Większość linii komórkowych hybrydoma może być bezpośrednio przenoszona z pożywki zawierającej surowicę do hodowli zawiesinowej w pożywce bezbiałkowej. Należy zauważyć, że gęstość posiewu powinna wynosić co najmniej 1 3 x 10 5 komórek. Bezpośrednia adaptacja do Panserin H8000: Użyj komórek hodowanych pożywce z surowicą, (np. RPMI 1640 z 10% FBS) w logarytmicznej fazie wzrostu (80% maksymalnej gęstość komórek). Określ liczbę komórek i żywotność za pomocą barwienia wykluczającego błękitem trypanu. Posiej 1-3 x 10 5 komórek / ml w ogrzanej pożywce Panserin H8000.

36 Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37 C i 5% CO 2. Po osiągnięciu około 80% maksymalnego zagęszczenia przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin H8000. Utrzymuj wysoką gęstość posiewu aż komórki dostosują się do pożywki bezbiałkowej. Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą w pożywce z surowicą należy przenosić komórki do świeżej pożywki Panserin H8000 co 3-4 dni. Jeśli tempo wzrostu nie jest wystarczające lub maksymalna gęstość komórek nie została osiągnięta, należy wykonać opisaną poniżej pośrednią adaptację do pożywki bezbiałkowej. Pośrednia adaptacja do Panserin H8000: Użyj komórek hodowanych pożywce z surowicą, (np. RPMI 1640 z 10% FBS) w logarytmicznej fazie wzrostu (80% maksymalnej gęstość komórek). Określ liczbę komórek i żywotność za pomocą barwienia wykluczającego błękitem trypanu. Posiej 1-3 x 10 5 komórek / ml w ogrzanej pożywce Panserin H8000 z dodatkiem 5% FBS. Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37 C i 5% CO 2. Po osiągnięciu około 80% maksymalnego zagęszczenia przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin H8000 z dodatkiem 2% FBS. Podczas następnego transferu użyj Panserin H8000 z dodatkiem 1% FBS, a ostatecznie Panserin H8000 z dodatkiem 0,1% FBS (w taki sam sposób jak opisano powyżej). Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą w pożywce z surowicą należy przenosić komórki do świeżej pożywki Panserin H8000 bez dodatku FBS co 3-4 dni. PANSERIN H ml 500 ml P M P

37 Zellen/ml PANSERIN T3 Panserin T3 jest gotową do użycia pożywką bez surowicy do hodowli komórek 3T3A w hodowli zawiesinowej. Skład: Panserin T3 jest w pełni zdefiniowaną, kompletną pożywką bez surowicy. Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu lub przylegania. Przydatność: Panserin T3 została opracowana do hodowli fibroblastów mysich (3T3A) w zawiesinie bez surowicy. Stosowanie: Przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin T3 jest zwykle możliwe bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Proces ten zachodzi łatwiej jeśli komórki są wysiewane w dużej gęstości (około 10 5 komórek/ml). Ważne jest, aby hodowle prowadzić w butelkach hodowlanych. Przez kilka pierwszych pasaży w hodowli bezsurowiczej tempo wzrostu jest niskie, ale później osiąga wysoki poziom. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli do pożywki bez surowicy. Tak więc komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu. Zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces Tage Fig. 2 Komórki 3T3 w Panserin T3 Rys. 1: Wzrost komórek 3T3 w Panserin T3 PANSERIN T3 100 ml 500 ml P P

38 PANSERIN ProVero Panserin ProVero jest kompletną, gotową do użycia pożywką bez surowicy do hodowli komórek adherentnych Vero (komórki nabłonka z nerki koczkodana zielonego). Skład: Na bazie DMEM/F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników przylegania. Przydatność: Panserin ProVero został opracowany do hodowli komórek adherentnych Vero. Stosowanie: W wielu przypadku przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin ProVero może być przeprowadzone bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce Panserin ProVero z dodatkiem surowicy, a następnie jej stopniowe zastępowanie pożywką bez surowicy. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywki bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu. Zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny).

39 cell/ml Growth of Vero cells in Panserin ProVero 6,00E+05 5,00E+05 4,00E+05 3,00E+05 2,00E+05 1,00E+05 0,00E Days Panserin ProVero DMEM/F % FBS Rys.1 Wzrost komórek Vero w Panserin ProVero Rys. 2 Komórki Vero w Panserin ProVero PANSERIN ProVero 100 ml 500 ml P M P

40 PANSERIN S2 Panserin S2 jest pożywką bezbiałkową optymalną dla wzrostu owadzich komórek S2 (muszki owocowej Drosophila) w kulturze zawiesinowej. Komórki owadów są szeroko stosowane w produkcji przemysłowej rekombinowanych białek. Skład: Panserin S2 zawiera aminokwasy, witaminy, sole, pierwiastki śladowe, lipidy i czynniki wspomagające wzrost w stężeniu zoptymalizowanym dla wzrostu komórek owadzich. Nie zawiera białek lub innych składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Przydatność: Panserin S2 jest odpowiednia do hodowli komórek Drosophila S2 i produkcji rekombinowanych białek (np. Baculovirus expression vector system, BEVS). Szczególne zalety: Panserin S2 jako pożywka bezbiałkowa jest wolna od składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Pozwala to na wytwarzanie rekombinowanych białek do celów medycznych i terapeutycznych. Ułatwia również łatwiejsze i tańsze oczyszczanie produktów końcowych z hodowli komórkowej. Panserin S2 gwarantuje wysoką gęstość i żywotność komórek ze zwiększoną produkcją białek rekombinowanych (BEVS). Zastosowanie: Dostosowanie do hodowli bezbiałkowych Optymalny zakres temperatur dla większości owadzich komórek to 25 C - 30 C (inkubacja 27 C ± 0,5 C). ph hodowli komórek Lepidoptera powinno wynosić od ph 6,0 do ph 6,4. Ciśnienie osmotyczne powinno być w zakresie mosm/kg. Dla optymalnego zaopatrzenia w tlen, należy lekko odkręcić zakrętki naczyń hodowlanych. Dostosowanie do hodowli bezbiałkowej Komórki owadzie które rosną na pożywce z surowicą powinny być zaadaptowane do pożywki bezbiałkowej. Można to zrobić przez dostosowanie bezpośrednie lub stopniowe. Komórki do hodowli zawiesinowej powinny pochodzić z połowy wykładniczej fazy wzrostu, o żywotności ponad 90% (barwienie wykluczające błękitem trypanu). Adaptacja bezpośrednia do Panserin S2: Przenieś komórki (w gęstości 1-2 x 10 6 komórek/ml) z pożywki zawierającej surowicę (np. Schneider s Drosophila Medium, FBS 5-10%) bezpośrednio do ogrzanej (27 C) pożywki bezbiałkowej Panserin S2. Kiedy hodowla osiągnie gęstość > 4 x 10 6 komórek/ml (po 4-7 dniach) przepasażuj komórki (w gęstości 5 x x 10 6 komórek/ml) do świeżej pożywki. Powtarzaj aż do uzyskanie żywotności co najmniej 80%. Uwaga: Komórki S2 rosną słabo przy gęstości mniejszej niż 5 x 10 5 komórek/ml

41 cell/ml (x10e6) Adaptacja pośrednia do Panserin S2 : Hoduj komórki w mieszaninie pożywki zawierającej surowicę i Panserin S2 w stosunku 1:1, w gęstości 1-2 x 10 6 komórek/ml. Gdy hodowla osiągnie gęstość > 4 x 10 6 komórek/ml załóż hodowlę dodając do używanej mieszaniny pożywek świeżej pożywki Panserin S2 w stosunku 1 : 1 Powtarzaj tę procedurę, aż stężenie surowicy spadnie poniżej 0,1% a żywotność komórek osiągnie >80%. Liczba komórek powinna przekraczać 5 x 10 6 komórek/ml. W celu utrzymania hodowli pasażuj komórki S2 w stosunku 1:2-1:5 kiedy gęstość osiągnie pomiędzy 6 a 20 x 10 6 komórek/ml. Rys 1. Komórki Drosophila S2 w Panserin S2 Drosophila S Drosophila Medium +FBS Panserin S days PANSERIN S2 100 ml 500 ml P P

42 SPODOPAN Spodopan jest bezbiałkową pożywką dla optymalnego wzrostu komórek owadzich takich jak Sf9 i Sf21 (Spodoptera frugiperda) w hodowli zawiesinowej. Komórki owadów są często wykorzystywane do celów przemysłowych do produkcji białek rekombinowanych. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Spodopan zawiera aminokwasy, witaminy, sole, pierwiastki śladowe, lipidy i czynniki wspomagające wzrost komórek owadzich. Nie zawiera białek i innych składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Przydatność: Spodopan nadaje się do hodowli komórek owadów i produkcji białek (np. Baculovirus expression vector system, BEVS). Szczególne zalety: Spodopan jako pożywką bezbiałkową wolną od składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. To pozwala na wytwarzanie rekombinowanych białek do celów medycznych i terapeutycznych. Ułatwia również łatwiejsze i tańsze oczyszczanie produktów końcowych hodowli komórkowej. Spodopan gwarantuje wysoką gęstość komórek ze zwiększoną produkcją białek rekombinowanych (BEVS). Stosowanie: Dostosowanie do hodowli bezbiałkowych Optymalny zakres temperatur dla większości komórek owadzich to 25 C - 30 C (inkubacja 27 C ± 0,5 C). ph hodowli komórek Lepidoptera powinno wynosić od ph 6,0 do ph 6,4. Ciśnienie osmotyczne powinno wynosić w zakresie mosm/kg. Dla optymalnego zaopatrzenia w tlen, należy lekko odkręcić zakrętki naczyń hodowlanych. Komórki owadzie, które rosną na pożywce z surowicą powinny być zaadaptowane do pożywki bezbiałkowej. Można to zrobić przez dostosowanie bezpośrednie lub stopniowe. Komórki do hodowli zawiesinowej powinny pochodzić z połowy wykładniczej fazy wzrostu o żywotności ponad 90% (barwienie wykluczające błekitem trypanu). Adaptacja bezpośrednia do Spodopan: Przenieś komórki (o gęstości 5 x 10 5 komórek/ml) z pożywki zawierającej surowicę (np. TNM- FH, FBS 5-10%) bezpośrednio do odgrzanej (27 C) pożywki bezbiałkowej Spodopan. Kiedy hodowla osiągnie gęstość > 2 x 10 6 komórek/ml (po 4-7 dniach) przepasażuj komórki (o gęstości 5 x 10 5 komórek/ml) do świeżej pożywki.

43 Powtarzaj aż do uzyskania żywotności co najmniej 80%. Adaptacja pośrednia do Spodopan: Hoduj komórki w pożywce zawierającej surowicę i Spodopan w stosunku 1:1. Wysiewaj komórki w gęstości 5 x 10 5 komórek/ml. Gdy hodowla osiągnie gęstość komórek > 1 x 10 6 załóż hodowlę dodając do używanej mieszaniny pożywek świeżej pożywki Spodopan w stosunku 1 : 1 Powtarzaj tę procedurę, aż stężenie surowicy spadnie poniżej 0,1% a żywotność komórek osiągnie >80%. Liczba komórek powinna przekraczać 1 x 10 6 komórek/ml. SPODOPAN 100 ml 500 ml P P

44 ENDOPAN 300 SL ENDOPAN 300 SL jest pierwszą kompletną bezsurowiczą pożywką specjalnie opracowaną do hodowli in vitro ludzkich komórek śródbłonka, zawierającą wszystkie składniki niezbędne do optymalnego wzrostu tych komórek. Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (10 12 ) komórek, jest jednym z największych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych (m.in. komórkowej odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran, stanach zapalnych, alergii, chorobach sercowo-naczyniowych, wzroście nowotworów). Ogromna liczba czynników rozpuszczalnych krążących we krwi lub uwalnianych przez sąsiadujące komórki kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych oraz inwazję i migrację leukocytów do śródbłonka, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Skład i zastosowanie: ENDOPAN 300 SL jest gotową do użycia kompleksową pożywką bezsurowiczą, opracowaną specjalnie do hodowli in vitro ludzkich komórek śródbłonka i zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego wzrostu tych komórek. Jest przeznaczona do stosowania w inkubatorze w temperaturze 37 C w atmosferze 5% CO 2. Zestaw ENDOPAN 300 SL wyposażony jest w substytut surowicy (PANEXIN SL-S) i suplementy w oddzielnych sterylnych opakowaniach. ENDOPAN 300 SL został zaprojektowany do hodowli bez surowicy komórek śródbłonka bezpośrednio po izolacji. Ta wyjątkowa pożywka jest zoptymalizowana pod kątem utrzymania i rozwoju komórek śródbłonka w warunkach hodowli bez surowicy. Komórki HUVEC hodowane w ENDOPAN 300 SL wykazują typową morfologię komórek śródbłonka i eksprymują swoiste markery komórek śródbłonka takie jak CD31 lub czynnik von Willebranda, a także wiążą lektynę UEA-1. Dodatkowo, w warunkach hodowli ENDOPAN 300 SL komórki HUVEC utrzymują szlaki transdukcji sygnału komórkowego typowe dla śródbłonka. Podczas stosowania ENDOPAN 300 SL tempo wzrostu komórek HUVEC jest podobne do uzyskanego dla komórek hodowanych w pożywkach typowych dla komórek śródbłonkowych z dodatkiem surowicy bydlęcej. Przydatność: ENDOPAN 300 SL jest odpowiedni do hodowli: Ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej Ludzkich komórek śródbłonka tętnicy pępowinowej Ludzkich komórek śródbłonka tętnicy płucnej Ludzkich komórek śródbłonka żyły odpiszczelowej Wykazano również, że ENDOPAN 300 SL można również stosować do hodowli komórek śródbłonka bydła, świń, szczurów, królików. Szczególne zalety: Biologia komórki śródbłonka poczyniła znaczne postępy dzięki badaniom komórek śródbłonka naczyń hodowanych in vitro. Tradycyjne pożywki hodowlane zawierają surowicę zwierząt. Postęp w dziedzinie pożywek o niskiej zawartości surowicy dla komórek śródbłonka poprawił jakość danych doświadczalnych uzyskiwanych w ostatnich latach. Jednakże komórki śródbłonka

45 mogą syntetyzować substancje, które nie mogą być wykryte ze względu na ich niskie stężenie lub efekt maskujący surowicy. W przeszłości szlaki sygnałowe w komórkach śródbłonka nie były możliwe do odczytania doświadczalnie, gdyż nawet niskie stężenie surowicy obecne w tradycyjnych pożywkach wywołuje nieokreślone i niepożądane stymulacje receptorów powierzchniowych komórek, jednak można to dopiero zauważyć w warunkach hodowli wolnej od surowicy. Jako że komórki śródbłonka znajdują się obecnie w centrum zainteresowania inżynierii tkankowej naczyń ze względu na potencjalne zastosowania terapeutyczne, obecność surowicy zwierzęcej jest w takich zastosowaniach niepożądana Stosowanie: Zaleca się stosowanie pożywek bez surowicy od początku hodowli. W przypadku tej pożywki nie jest wymagane stopniowe przechodzenie z pożywki z surowicą do warunków bezsurowiczych. Nie jest zalecane, aby przenosić komórki z pożywki z surowicą do ENDOPAN 300 SL bezpośrednio po pasażu komórek. Należy pozwolić komórkom po trypsynizacji na adhezję (ok. 24 godziny) przed zmianą na pożywkę bez surowicy. ENDOPAN 300 SL można również stosować do komórek uprzednio hodowanych w pożywce z surowicą. Początkowo niektóre komórki mogą obumierać w hodowli bezsurowiczej, wykazywać wolniejszy wzrost lub zmiany morfologii. Drobne zmiany w wyglądzie komórek nie powinny przeszkadzać w hodowli o ile żywotność i proliferacja pozostaje na stałym poziomie. Problemy te można przezwyciężyć dzięki wyższym gęstościom posiewu (bliskim konfluencji). Endopan 300 SL ready-to-use 500 ml P Endopan 300 SK kit with supplements 500 ml P K Reagenty: PANEXIN SL-S Serum Substitute for HUVEC cultures 25 ml P S SL-S Trypsin/EDTA 50 ml P SF SL-S Trypsin-Inhibitor 50 ml P SF SL-S Medium (Working Medium) 500 ml P SL-S Collagen 0.01 % 25 ml P SL-S Cryopan 25 ml P

46 1.6. INNE MEDIA BEZSUROWICZE PANSERIN 411 Panserin 411 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli wielu adherentnych i nieadherentnych komórek insulinozależnych bez surowicy (np. komórek CHO). Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2 C do +8 C Stabilność: 8 miesięcy Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i insuliny. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu ani przylegania. Przydatność: Panserin 411 jest uniwersalną pożywką odpowiednią dla różnych typów komórek. W Panserin 411 mogą być hodowane komórki adherentne i nieadherentne. Dzięki temu że nie zawiera czynników wzrostu, istnieje możliwość zbadania efektu specjalnie dodanych czynników wzrostu na hodowle komórek. Panserin 411 nie zawiera żadnych czynników przylegania. W przypadku niektórych typów komórek wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych przez pokrycie żelatyną, kolagenem, poli-d-lizyną lub fibronektyną może umożliwić lub znacznie ułatwić wzrost komórek w tej pożywce. Wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych jest szczególnie ważne przy zakładaniu hodowli o małej gęstości. Przy każdym dostosowywaniu do pożywki bez surowicy, należy brać pod uwagę zmiany w komórkach. Zmiany te mogą dotyczyć morfologii, kariotypu, markerów powierzchniowych itd. Komórki rosnące w pożywce bez surowicy nie zawsze wyglądają tak samo jak te same komórki rosnące w pożywce z dodatkiem surowic, z których wyprowadziliśmy hodowle. Zastosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki jej nie zawierającej można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą, a następnie stopniowe jej zamienianie na jej substytuty bezsurowicze. Możemy dostarczyć Państwu wiele protokołów adaptacyjnych dla wielu typów komórek. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej, jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym

47 komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). Dla pewnych typów komórek najlepszym rozwiązaniem może być adaptacja nie tylko przez stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy, ale również pożywki, w której komórki były dotychczas hodowane. Pożywka Panserin 411 nie zawiera żadnych czynników wzrostu. Dla komórek, które są uzależnione od konkretnych czynników wzrostu należy dodać te czynniki w wymaganym stężeniu. PANSERIN ml 500 ml P M P

48 PANSERIN 411S Panserin 411S jest kompletną, gotową do użycia pożywką do bezsurowiczej hodowli komórek szpiku i komórek limfatycznych w celu badania cytologicznego Skład: Na bazie RPMI 1640, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i hormonów. Przydatność: Panserin 411S jest kompletną pożywką bezsurowiczą do hodowli komórek szpiku i komórek limfatycznych z krwi obwodowej lub szpiku kostnego. Dlatego nadaje się do szybkiego namnażania komórek krwi w badaniach różnych typów białaczek (ALL, AML, CLL, CML, MPN, MDS). Techniki diagnostyczne stosowane w badaniu białaczki obejmują między innymi badania cytochemiczne, prążków chromosomowych, genetyki molekularnej, FISH. W Panserin 411S liczba i jakość podziałów metafazowych jest znacznie wyższa i niezależna od poszczególnych partii produktu, w porównaniu do pożywek zawierających surowicę. Przydatność: Komórki (1x10 7 ) wysiewa się w 5 ml Panserin 411S. W zależności od rodzaju testu i jakości badanego materiału przygotowuje się hodowlę pierwotną oraz 1-3 hodowle z opowiednimi czynnikami wzrostu. Czas hodowli to 24 do 72 godzin w temperaturze 37 C w inkubatorze z 5% CO 2. Preparaty chromosomowe przygotowuje się przy użyciu hipotonicznego roztworu KCl i utrwalacza Carnoy'a. PANSERIN 411S 500 ml 1000 ml P S1 P S

49 PANSERIN 412 Panserin 412 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli wielu rodzajów komórek adherentnych bez surowicy. Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i insuliny. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu ani przylegania. Przydatność: Panserin 412 jest uniwersalną pożywką odpowiednią dla różnych typów komórek adherentnych. Panserin 412 zawiera specjalne czynniki przylegania które umożliwiają pomyślną hodowlę komórek które w normalnych warunkach są słabo adherentne. Dzięki temu że nie zawiera czynników wzrostu, istnieje możliwość zbadania efektu specjalnie dodanych czynników wzrostu na hodowle komórek. Przy każdym dostosowywaniu do pożywki bez surowicy, należy brać pod uwagę zmiany w komórkach. Zmiany te mogą dotyczyć morfologii, kariotypu, markerów powierzchniowych itd. Komórki rosnące w pożywce bez surowicy nie zawsze wyglądają tak samo jak te same komórki rosnące w pożywce z dodatkiem surowicy, z których wyprowadziliśmy hodowle. Zastosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki jej nie zawierającej można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą, a następnie stopniowe jej zamienianie na jej substytuty bezsurowicze. Możemy dostarczyć Państwu wiele protokołów adaptacyjnych dla wielu typów komórek. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). Dla pewnych typów komórek najlepszym rozwiązaniem może być adaptacja nie tylko przez stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy, ale również pożywki w której komórki były dotychczas hodowane. Pożywki Panserin zostały opracowane w celu wsparcia wzrostu komórek bez użycia surowicy. Z tego powodu pożywka Panserin 412 nie zawiera żadnych czynników wzrostu, co pozwala na dokładniejszą analizę działania czynników wzrostu dodanych do hodowli. Dla komórek, które są

50 uzależnione od konkretnych czynników wzrostu należy dodać te czynniki w wymaganym stężeniu. PANSERIN ml 500 ml P M P

51 PANSERIN 413 Panserin 413 jest gotową do użycia pożywką do hodowli limfocytów z krwi pełnej. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Wraz z pożywką jest również dostarczana mieszanina czynników wzrostu, którą należy ją dodać do pożywki bezpośrednio przed rozpoczęciem hodowli. Przydatność: Pożywka Panserin 413 została opracowana w celu hodowli limfocytów z krwi pełnej. Komórki krwi zazwyczaj obumierają w hodowli dość szybko, jedynie limfocyty można hodować przez kilka podziałów. Aby uzyskać podziały komórek nieproliferujących muszą być one zastymulowane za pomocą mitogenów, głównie lektyn roślinnych (fitohemaglutynina, PHA). Stosowanie: 1. Izolacja limfocytów z krwi pełnej przez wirowanie w gradiencie gęstości. Zmieszaj krew heparynizowaną z DPBS w stosunku 1:1, i dodaj ostrożnie (tak aby uniknąć wymieszania faz) do probówki wirówkowej wypełnionej pożywką do separacji limfocytów (Pancoll o gęstości 1,077g/ml). Zwiruj przez 30 min, 400 x g, w temperaturze pokojowej (przy wyłączonym hamulcu wirówki). Widoczne będą 4 fazy: - górna: osocze - biaława, nieprzejrzysta: limfocyty - pożywka separacyjna - osad z erytrocytów i granulocytów Zbierz osocze pipetą i przenieś limfocyty świeżą pipetą do nowej probówki wirówkowej. Przemyj limfocyty DPBS (bez Ca/Mg) i zwiruj przez 10 min, 100 x g. Przemyj ponownie. 2. Hodowla i stymulacja limfocytów Zawieś limfocyty w Panserin 413. W celu stymulacji proliferacji limfocytów doprowadź gęstość komórek do około 1x10 5 i dodaj fitohemaglutyninę w stężeniu 2-10 µg/ml; czas hodowli to 48 do 72 godzin, w zależności od rodzaju i pochodzenia limfocytów oraz późniejszego zastosowania.

52 Prowadź hodowlę w pożywce Panserin 413. Po około 14 dniach należy przeprowadzić ponowną stymulację komórek. PANSERIN 413 with one supplement 500 ml P

53 PANSERIN 416 Panserin 416 to pożywka bezsurowicza (pożywka podstawowa) która po suplementacji czynnikami wzrostu jest odpowiednia do hodowli komórek dendrytycznych. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Wraz z pożywką jest również dostarczana mieszanina czynników wzrostu, którą należy dodać do pożywki bezpośrednio przed rozpoczęciem hodowli. Przydatność: Komórki dendrytyczne są to wysoce wyspecjalizowane komórki prezentujące antygen, które mogą inicjować i regulować antygenowo specyficzną odpowiedź immunologiczną. Zdolność ta może być wykorzystywana w celu wygenerowania odpowiedzi immunologicznej wobec pewnych białek komórek nowotworowych, dzięki czemu system odpornościowy sam może być w stanie walczyć przeciwko nowotworom. Komórki dendrytyczne zostały wyizolowane z wielu tkanek limfatycznych jak i nielimfatycznych u ludzi, myszy i innych gatunków. W celu wytworzenia szczepionek nowotworowych, komórki dendrytyczne mogą być produkowane z krwi obwodowej pacjentów chorych na nowotwór. Skuteczność szczepionek z komórek dendrytycznych została wykazana w badaniach klinicznych. Wychwyt antygenów: W niemal każdej tkance organizmu komórki dendrytyczne formują gęstą sieć komórek opiekuńczych, które pobierają składniki zewnątrzkomórkowe przez fagocytozę i endocytozę, i w ten sposób analizują swoje środowisko. Pobrane białka są poddawane rozkładowi wewnątrzkomórkowemu do peptydów, przyłączane do cząsteczek MHC (głównego układu zgodności tkankowej) i transportowane na powierzchnię komórek. Dzieki temu determinanty antygenowe z peptydów są rozpoznawalne dla komórek T. Podczas regeneracji komórki dendrytyczne mogą opuścić tkanki obwodowe i przenieść się do regionalnych węzłów chłonnych, gdzie wchodzą w interakcje z komórkami T. Z nienaruszonej tkanki komórki dendrytyczne docierają do węzłów chłonnych w inaktywowanym stanie. Funkcjonujący system monitorowania wyróżnia się zdolnością do szybkiego i specyficznego rozpoznania szkodliwych procesów oraz do podjęcia odpowiednich kroków przeciwko nim. W tym celu komórki dendrytyczne mają na swojej powierzchni receptory dla wielu sygnałów ostrzegawczych które mogą być emitowane z mikroorganizmów, dla przekaźników znajdujących się w ciele lub aktywowanych komórek T. Przykładem struktur pochodzenia bakteryjnego aktywujących komórki dendrytyczne są lipopolisacharydy z bakterii Gram-ujemnych, DNA bakteryjny bogaty w cytydyno-dinukleotydguanozyny (cpg), wirusowe dwuniciowe RNA. Endogennymi przekaźnikami dla których komórki dendrytyczne mają specjalne receptory i które wysyłają sygnał aktywujący są cytokiny, prostanoidy i nukleotydy adeninowe. Aktywowane limfocyty T mogą stymulować komórki dendrytyczne za pomocą liganda - CD40 zintegrowanego w błonie komórkowej. Aktywacja tych różnych receptorów powoduje istotne zmiany komórkowe, które można podsumować terminem dojrzewanie. Zdolność fagocytozy zostaje utracona.

54 Peptydy związane z cząsteczkami MHC występują w większym zagęszczeniu i są bardziej stabilne. Struktura cytoszkieletu zostaje zreorganizowana i zmienia się ekspresja receptorów chemokin co umożliwia komórkom dendrytycznym dostanie się z ogniska zapalenia do węzła limfatycznego. Jednoczesne pobudzanie cząsteczek na powierzchni komórki dendrytycznej oraz uwalnianie cytokin, np. interleukiny-12, pozwala komórkom dendrytycznym na efektywniejszą interakcję z limfocytami T. Indukcja odpowiedzi immunologicznej: W węzłach chłonnych komórki dendrytyczne wchodzą w interakcje z różnymi populacjami limfocytów. Przede wszystkim z komórkami T, które nie jeszcze nie miały kontaktu z antygenem: jeżeli receptor komórek T rozpoznaje przedstawiony antygen, komórki T są aktywowane. Ten główny proces odpowiedzialny za nabycie specyficzności odpowiedzi immunologicznej nazywany jest Priming. Cytotoksyczne komórki T rozwijają się z komórek CD8 i są w stanie zabić te komórki, które są rozpoznawane przez receptor komórek T. Szczepionki na nowotwór z komórkami dendrytycznymi: W komórkach nowotworowych zachodzi specyficzna ekspresja białek które mogą posłużyć jako antygen dla komórek T. Z reguły jednak nie jest to wystarczające dla układu odpornościowego do wytworzenia skutecznej odpowiedzi immunologicznej przeciw komórkom nowotworowym. Z jednej strony jest to spowodowane tym, że antygeny te są często również obecne w zdorowych tkankach w niskim zagęszczeniu, z drugiej strony komórki nowotworowe mają wiele strategii ucieczki przed odpowiedzią immunologiczną. Jednakże w licznych eksperymentach na zwierzętach wyraźnie pokazano, że tolerancja na nowotwory może być złamana przez szczepionki z komórek dendrytycznych. Tworzenie komórek dendrytycznych: Komórki dendrytyczne pochodzą z hematopoetycznych komórek prekursorowych w szpiku kostnym. Trzy różne subpopulacje, każda z charakterystycznymi funkcjami, zostały opisane u człowieka: szpikowe komórki dendrytyczne, komórki plazmocytoidalne i komórki Langerhansa skóry. Do szczepionek na nowotwór głównie używane są szpikowe komórki dendrytyczne, ponieważ są szczególnie zdolne do podejmowania i prezentacji antygenów. Komórki dendrytyczne charakterystyczne dla szpiku mogą być wytwarzane przez kultury in vitro monocytów hodowanych w obecności cytokin interleukiny 4 (IL 4) oraz czynnika stymulującego kolonie granulocytów makrofagów (GM-CSF). Alternatywnie komórki dendrytyczne mogą być generowane z hematopoetycznych komórek macierzystych CD34 + z krwi obwodowej. Przez dodanie czynników wzrostu, np. ligandu Klt3, udział komórek dendrytycznych we krwi, które zwykle stanowią tylko ok. 0,1-0,5% komórek jednojądrzastych, może być wielokrotnie zwiększony. Po aktywacji komórki dendrytyczne osiągają pełnię możliwości stymulacji komórek T. Do dojrzewania komórek dendrytycznych używana jest pożywka z dodatkiem cytokin (TNF-alfa), LPS lub warunkowana monocytami.

55 Produkcja i hodowla bez surowicy komórek dendrytycznych z jednojądrzastych komórek z krwi obwodowej (PBMC). Stosowanie: Separacja krwi przy użyciu pożywki do separacji (Pancoll g/ml) Próbki krwi powinny być przetwarzane jak najszybciej po pobraniu w celu osiągnięcia optymalnych rezultatów. Składowanie próbek krwi przez 24 godziny w temperaturze otoczenia powoduje między innymi zmniejszony odzysk limfocytów, zmianę markerów powierzchniowych i zmniejszoną odpowiedź na stymulację mitogenem. 1) Dodaj Pancoll (3 ml) do odpowiedniej probówki wirówkowej w sterylnych warunkach. 2) Ostrożnie pokryj pożywkę do rozdzielania rozcieńczoną próbką krwi (4 ml). Ważne: Nie mieszać próbki krwi z Pancoll! 3) Wiruj przy 400 x g przez minut w C 4) Po odwirowaniu, ostrożnie zdejmij górną fazę (zawierającą surowicę i płytki krwi) za pomocą pipety, bez mieszania warstwy z limfocytami. 5) Przenieś warstwę z limfocytami do nowej probówki wirówkowej nową pipetą. Ważne jest, aby całość zebrać w jak najmniejszej objętości. 6) Dodaj co najmniej 3 objętości roztworu soli fizjologicznej (6 ml) do limfocytów. 7) Ostrożnie zawieś limfocyty pipetą. 8) Wirowanie przy x g przez 10 minut w C. 9) Usuń supernatant. Powtórz płukanie (pkt. 6-9). Hodowla komórek dendrytycznych w pożywce bez surowicy Panserin 416: Po ostatnim etapie płukania jednojądrzaste komórki są przenoszone w gęstości 1 x 10 7 komórek/ml do pożywki Panserin 416. W celu usunięcia nieprzylegających komórek, hodowle są umieszczane w inkubatorze na 2 godziny. Następnie supernatant jest starannie usuwany i zastąpiony nową pożywką Panserin 416. GM-CSF (800 U/ml) i interleukina 4 (500 U/ml) są dodawane jako czynniki wzrostu. Naczynia hodowlane są inkubowane przez kolejne 6 dni w inkubatorze i co pół dnia pożywka jest wymieniana na nową, którą uzupełnia się GMCSF i IL-4. PANSERIN 416 with one supplement 500 ml P

56 PANSERIN 604ST Panserin 604ST jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO (jajnik chomika chińskiego) w hodowli zawiesinowej. Skład: Panserin 604ST jest całkowicie zdefiniowaną pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w zawiesinie. Nie zawiera żadnych składników pochodzenia zwierzęcego lub ludzkiego. Pożywka jest uzupełniona rekombinowanymi białkami w niskim stężeniu. Umożliwia to proste oczyszczanie produktu końcowego. Przydatność: Hodowla transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w hodowli zawiesinowej (bioreaktor) do produkcji rekombinowanych białek. Szczególne zalety: Panserin 604ST nie zawiera niezdefiniowanych lizatów lub roślinnych hydrolizatów. Panserin 604ST umożliwia skrócenie fazy adaptacji i bardzo dobre tempo wzrostu. Dzięki optymalnemu i zrównoważonemu składowi pożywki można w dużym stopniu uniknąć powstawania agregatów komórek. Szczególnie nadaje się do produkcji białek rekombinowanych w połączeniu z ułatwionym oczyszczaniem produktów końcowych ze względu na niską zawartość białka w pożywce. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 604ST można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w Panserin 604ST z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy aż do podjęcia hodowli w czystej pożywce Panserin 604ST. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości. Komórki powinny być wysiewane w gęstości co najmniej 5 x 10 4 komórek / ml. Po kilku pasażach w hodowli bezsurowiczej przy obniżonym wzroście komórki zaczynają osiągać wysokie wskaźniki wzrostu. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny).

57 PANSERIN 604ST 500 ml P04-604ST

58 PANSERIN 604SPF Panserin 604SPF jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO (jajnik chomika chińskiego) w hodowli zawiesinowej. Skład: Panserin 604SPF jest całkowicie zdefiniowaną pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w zawiesinie. Nie zawiera żadnych składników pochodzenia zwierzęcego lub ludzkiego. Pożywka jest uzupełniona rekombinowanymi białkami w niskim stężeniu. Umożliwia to proste oczyszczanie produktu końcowego i zastosowanie w skomplikowanych procedurach np. w produkcji leków. Przydatność: Hodowla transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w hodowli zawiesinowej (bioreaktor) do produkcji rekombinowanych białek. Szczególne zalety: Panserin 604SPF nie zawiera niezdefiniowanych lizatów lub roślinnych hydrolizatów. Panserin 604SPF umożliwia skrócenie fazy adaptacji i bardzo dobre tempo wzrostu. Dzięki optymalnemu i zrównoważonemu składowi pożywki można w dużym stopniu uniknąć powstawania agregatów komórek. Szczególnie nadaje się do produkcji białek rekombinowanych w połączeniu z ułatwionym oczyszczaniem produktów końcowych ze względu na niską zawartość białka w pożywce. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 604SPF można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w Panserin 604SPF z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy aż do podjęcia hodowli w czystej pożywce Panserin 604SPF. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości. Komórki powinny być wysiewane w gęstości co najmniej 5 x 10 4 komórek / ml. Po kilku pasażach w hodowli bezsurowiczej przy obniżonym wzroście komórki zaczynają osiągać wysokie wskaźniki wzrostu. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny).

59 PANSERIN 604ST 500 ml P04-604SPF

60 PANSERIN 701 Panserin 701 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli limfocytów z krwi pełnej. Warunki przechowywania: Przechowywanie: -20 C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), wzbogacone o dodatkowe pierwiastki śladowe, albuminę, cholesterol, lipidy i witaminy. Zawiera mitogen fitohemaglutyninę (PHA) do stymulacji wzrostu limfocytów. Przydatność: Pożywka Panserin 701 została opracowana w celu hodowli limfocytów z krwi pełnej bez surowicy. Zawiera roślinne lektyny (PHA) które stymulują podziały komórek. Stosowanie: 1. Izolacja limfocytów z krwi pełnej przez wirowanie w gradiencie gęstości. Zmieszaj krew heparynizowaną z DPBS w stosunku 1:1, i dodaj ostrożnie do probówki wirówkowej wypełnionej pożywką do separacji limfocytów (Pancoll o gęstości 1,077g/ml). Uwaga: pipetuj ostrożnie, aby uniknąć zmieszania faz! Zwiruj przez 30 min, 400 x g, w temperaturze otoczenia (hamulec powinien być wyłączony). Widoczne będą 4 fazy: - górna: osocze - biaława, nieprzejrzysta: limfocyty - pożywka separacyjna - osad z erytrocytów i granulocytów Zbierz osocze pipetą i nową pipetą przenieś limfocyty do nowej probówki wirówkowej. Przemyj limfocyty DPBS (bez Ca/Mg) i zwiruj przez 10 min, 100 x g. Powtórz przemywanie ponownie.

61 2. Hodowla i stymulacja limfocytów Zawieś limfocyty w Panserin 701 w zagęszczeniu 1 x Fitohemaglutynina (PHA) w Panserin 701 stymuluje podział limfocytów. Czas inkubacji wynosi od 48 do 72 godzin, w zależności od rodzaju i pochodzenia limfocytów i w zależności od dalszego wykorzystania. Dalszą hodowle można przeprowadzać w Panserin 413. Po około 14 dniach należy przeprowadzić ponowną stymulację komórek przy użyciu Panserin 701. PANSERIN ml 500 ml P M P

62 PANSERIN 801 Panserin 801 to gotowa do użycia pożywka bez surowicy do hodowli ludzkich keratynocytów. Skład: Pożywka MCDB-153 jest stosowana jako podstawa, która musi być uzupełniona o dostarczone dodatki tuż przed użyciem. Te dodatki to: Nabłonkowy czynnik wzrostu (EGF) Insulina Hydrokortyzon Etanoloamina Fosfoetanolamina Wyciąg z przysadki (BPE) Przydatność: Pożywka Panserin 801 została opracowana do hodowli ludzkich keratynocytów w pożywce bez surowicy. Panserin 801 selektywnie wspomaga wzrost keratynocytów i jednocześnie zapobiega przerostowi fibroblastów. Zastosowanie: Rozmroź dostarczone dodatki. Dodaj do pożywki podstawowej w warunkach sterylnych. Trypsynuj keratynocyty a następnie przepłucz komórki i zablokuj aktywność trypsyny inhibitorem trypsyny (10 mg/ml). Przepłucz komórki ponownie i oznacz ich gęstość. Doprowadź gęstość komórek do komórek/ml w hodowli wtórnej (początkowa gęstość posiewu 1-5 x 10 6 komórek/cm 2 ). Hoduj keratynocyty w pożywce Panserin 801 uzupełnionej dodatkami, w inkubatorze. Naczynia hodowlane mogą być pokryte alternatywnie czynnikami przylegania (kolagen, fibronektyna lub naturalne/syntetyczne fragmenty tych czynników). PANSERIN 801 with 6 supplements 500 ml P

63 PANSERIN PX10 Panserin PX10 jest gotową do użycia kompletną pożywka bez surowicy do hodowli szpiczaka i komórek hybrydoma do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i hormonów. Podłoże nie zawiera żadnych hormonów wzrostu. Przydatność: Hodowla szpiczaka i komórek hybrydoma do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Szczególne zalety: Panserin PX10 jest gotową do użycia pożywką wolną od surowicy do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Nie zawiera niezdefiniowanych lizatów ani hydrolizatów peptonów. Ze względu na zoptymalizowany skład Panserin PX10 znacząco stymuluje wzrostu nawet przy niskiej gęstości posiewu. Oprócz doskonałych właściwości wzrostu komórek Panserin PX10 wykazuje doskonałe właściwości klonowania. Konwencjonalne systemy bezsurowicze często wymaga długich i pracochłonnych procedur oraz gęstego wysiewu do 10 5 komórek/ml. W przeciwieństwie do nich większość klonów może być bezpośrednio przeniesiona do hodowli w Panserin PX10. W Panserin PX10 klony można uzyskać bez większych trudności. Komórki Sp2/0-Ag-14 zostały przeniesione z pożywki zawierającej surowicę (RPMI 1640 z 10% FBS) bezpośrednio do Panserin PX10. Wysiew o gęstości 1,000 komórek / ml. Dla porównania hodowla Sp2/0-Ag-14 w RPMI 1640 z 10% FBS.

64 Rys. 1 Typowa krzywa wzrostu dla komórek SP2/O-Ag-14 w Panserin PX10 Stosowanie: Ogrzej Panserin PX10 do 37 C. Przenieś komórki hybrydomy bezpośrednio do Panserin PX10. W większości przypadków gęstość 1000 komórek/ml jest wystarczająca. Hoduj komórki w zwykły sposób w inkubatorze z 5% CO 2 w temperaturze 37 C, lub w bioreaktorze Izoluj przeciwciała monoklonalne z supernatantu. W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin PX10 można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce Panserin PX10 z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy aż do podjęcia hodowli w czystej pożywce Panserin PX10. Chociaż Panserin PX10 podtrzymuje wzrost komórek nawet przy małych gęstościach, to w trakcie dostosowania do pożywki bezsurowiczej komórki powinny być wysiewane w większej gęstości (5 x x 10 4 komórek/ml). Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu -

65 zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. PANSERIN PX ml P04-710PX10

66 PANSERIN PX40 Panserin PX40 jest gotową do użycia kompletną do pożywką bez surowicy do hodowli wielu rodzajów komórek. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12 z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników przylegania. Podłoże nie zawiera żadnych hormonów wzrostu. Przydatność: Hodowla komórek adherentnych bez surowicy (np. HEK, L929, CHO, MDCK, MDBK, 3T3A). Szczególne zalety: Panserin PX40 jest gotową do użycia, wolną od surowicy pożywką do hodowli wielu rodzajów komórek adherentnych. Ponadto dzięki dodaniu czynników przylegania Panserin PX40 pozwala na hodowlę nawet bardzo wymagających komórek po krótkiej fazie adaptacji. Nie zawiera niezdefiniowanych peptonów ani hydrolizatów. Stosowanie: Dostosowanie do pożywki bez surowicy. Wiele linii komórkowych może być bezpośrednio przeniesionych z hodowli adherentnej w pożywce zawierającej surowicę do pożywki Panserin PX40 bez surowicy. Po kilku pasażach w hodowli bezsurowiczej przy obniżonym wzroście komórki zaczynają osiągać wysokie wskaźniki wzrostu porównywalne z osiąganymi w pożywce zawierającej surowicę.

67 Bezpośrednia adaptacja do Panserin PX40: Użyj adherentnych komórek w fazie logarytmicznej rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład DMEM z wysokim stężeniem glukozy i 10% FCS). Usuń pożywkę zawierającą surowicę za pomocą pipety. Komórki przemyj PBS (bez Ca/Mg). Pokryj komórki trypsyną/edta (0,25%, 0,02%), (około 2 ml na butelkę T25). Usuń trypsynę po około 1 minucie. Inkubuj komórki dopóki nie zrobią się kuliste i nie odczepią się od podłoża (po około 5 minutach). Zablokuj aktywność pozostałej trypsyny za pomocą inhibitora trypsyny (stężenie 1 mg/ml, 1-2 ml roztworu inhibitora na butelkę T25). Przenieś komórki do Panserin PX40 i odwiruj ponownie. Przenieś komórki do Panserin PX40 i policz liczbę komórek. Posiej 5 x x 10 5 komórek/ml w ogrzanej wcześniej Panserin PX40. Inkubacja w 37 C i 5% CO 2. Przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin PX40 przy około 80% konfluencji. Pośrednia adaptacja do Panserin PX40: Użyj adherentnych komórek w fazie logarytmicznej rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład DMEM z wysokim stężeniem glukozy i 10% FCS). Usuń pożywkę zawierającą surowicę za pomocą pipety. Komórki przemyj PBS (bez Ca/Mg). Pokryj komórki trypsyną/edta (0,25%, 0,02%), (około 2 ml na butelkę T25). Usuń trypsynę po około 1 minucie. Inkubuj komórki dopóki nie zrobią się kuliste i nie odczepią się od podłoża (po około 5 minutach). Zablokuj aktywność pozostałej trypsyny za pomocą inhibitora trypsyny (stężenie 1 mg/ml, 1-2 ml roztworu inhibitora na butelkę T25). Przenieś komórki do Panserin PX40 i odwiruj ponownie. Przenieś komórki do Panserin PX40 i policz liczbę komórek. Posiej 5 x x 10 5 komórek/ml w ogrzanej wcześniej Panserin PX40 z dodatkiem 5% FCS. Inkubacja w 37 C i 5% CO 2. Przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin PX40 z dodatkiem 2% FCS przy około 80% konfluencji. Przy kolejnych pasażach przenieś komórki do Panserin PX40 z 1% FCS i wreszcie 0,1% FCS (zgodnie z tą samą procedurą). PANSERIN PX ml P04-710PX40

68 1.7.MEDIA BEZSUROWICZE DO HODOWLI KOMÓREK MACIERZYSTYCH POWERStem ESPro1 PowerStem ESPro1 jest łatwą w użyciu pożywką bez surowicy do hodowli zarodkowych komórek macierzystych myszy (mesc). Te pluripotentne komórki są wyprowadzane z blastocyst i mogą być ustabilizowane do linii komórkowej. Po wstrzyknięciu do blastocysty mogą tworzyć wszystkie typy tkanek w chimerach, w tym komórki płciowe. W pożywce PowerStem ESPro1, mysie zarodkowe komórki macierzyste w większości zachowują stan niezróżnicowany i mogą uczestniczyć w tworzeniu linii płciowej. Zawartość: Pożywka PowerStem ESPro1 składa się z: PowerStem ESPro1 basal medium (pożywka podstawowa) PowerStem ESPro1 growth supplement (suplement wzrostu), który dodaje się w czasie użytkowania. PowerStem ESPro1 LIF supplement, który dodaje się w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: PowerStem ESPro1 basal medium: przechowywać w ciemności, w temperaturze od +2 do +8 C. PowerStem ESPro1 growth supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20 C. PowerStem ESPro1 LIF supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20 C. Skład: PowerStem ESPro1 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem ESPro1 jest w pełni zdefiniowane chemicznie i nie zawiera peptonów lub hydrolizatów. Uwaga: Uzupełniona PowerStem ESPro1 zawiera LIF w stężeniu 10 µg/l. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie LIF, należy dodać LIF dodatkowo do pożywki. Przydatność: Do hodowli zarodkowych komórek macierzystych myszy (mesc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. PowerStem ESPro1 jest specjalnie zaprojektowane do tworzenia myszy knock-out z modyfikowanych genetycznie zarodkowych komórek macierzystych w pożywce bez surowicy. Dowiedziono również, że pożywka PowerStem ESPro1 jest odpowiednia do hodowli i namnażania komórek progenitorowych nowotworów. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem ESPro1 pozwala na hodowlę i namnażanie mysich zarodkowych komórek macierzystych (mes) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Hodowla mysich zarodkowych komórek macierzystych może być zainicjowana bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych),

69 komórki wykazują wysoki poziom proliferacji, i w większości pozostają w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, nabłonkowe itp.). Po wstrzyknięciu komórek do blastocysty mogą one tworzyć chimery, dzięki czemu można tworzyć zwierzęta, których genom został uprzednio poddany manipulacjom w hodowli komórkowej (n.p. myszy knock-in lub knock-out). Przygotowanie pożywki PowerStem ESPro1: Podstawowa pożywka PowerStem ESPro1 basal medium wymaga uzupełnienia suplementami PowerStem ESPro1 growth supplement i PowerStem ESPro1 LIF supplement. Aby uzyskać 500 ml kompletnej pożywki PowerStem ESPro1 należy dodać 50 ml rozmrożonego PowerStem growth supplement ESPro1 i 1 ml PowerStem ESPro1 LIF supplement do 450 ml pożywki podstawowej PowerStem ESPro1 basal medium. Stosowanie: Przygotować szalki powleczone żelatyną, pokrywając je 0,2% roztworem żelatyny przez co najmniej 10 min w inkubatorze. Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być zawsze utrzymywane w stosunkowo dużym zagęszczeniu w celu utrzymania ich pluripotencji. Najlepiej zakładać hodowlę wtórną z hodowli sub-konfluentnej (o konfluencji 70% - 80%) Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być trypsynowane w zwykły sposób (np. 0,25% roztworem trypsyny). Kiedy komórki staną się kuliste i odłączą się od powierzchni (proces ten można przyspieszyć w temperaturze 37 C), należy zawiesić je w DPBS przez dokładne wielokrotne przepipetowanie, a następnie zwirować przez 5 minut w 180 xg w temperaturze pokojowej. Usunąć supernatant w sposób sterylny. Ponownie zawiesić osad komórek w DPBS przez wielokrotne przepipetowanie. Dobre zawieszenie komórek jest ważne w celu uzyskania pojedynczych komórek lub bardzo małych agregatów (2-3 komórki). Większe skupiska komórek nie powinny występować. Ze względu na brak surowicy, PowerStem ESPro1 nie powoduje inaktywacji trypsyny; aby zatrzymać aktywność trypsyny należy zastosować jej inhibitory. Po przeliczeniu komórek należy wysiać je na szalki hodowlane pokryte żelatyną w pożywce PowerStem ESPro1. Inkubować komórki w zwykły sposób w inkubatorze w temperaturze 37 C i atmosferze 5% CO 2. Wymieniać pożywkę PowerStem ESPro1 na świeżą co drugi dzień. Komórki powinny być rozdzielane w stosunku między 1:4 a 1:8 w zależności od tempa wzrostu. Uwaga: W przypadku badań wymagających różnicowania komórek nie należy dodawać LIF.

70 mes-cells in PowerStem ESPro1 JM8-cells in PowerStem ESPro1 mes-cells in medium with 10% FBS PowerStem ESPro 1 z LIF PowerStem ESPro 1 bez LIF 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit P K P K P K P K

71 POWERStem ESPro2 PowerStem ESPro2 jest pożywką bez surowicy do hodowli i namnażania zarodkowych komórek macierzystych myszy (mesc). Pożywka PowerStem ESPro2 jest specjalnie zaprojektowana do namnażania zarodkowych komórek macierzystych myszy bez różnicowania. Aby poddać namnożone komórki różnicowaniu należy zastosować odpowiednie procedury i czynniki różnicowania. Zawartość: Pożywka PowerStem ESPro2 składa się z: PowerStem ESPro2 basal medium (pożywka podstawowa) PowerStem ESPro2 growth supplement (suplement wzrostu), który dodaje się w czasie użytkowania. PowerStem ESPro2 LIF supplement, który dodaje się w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: PowerStem ESPro2 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C PowerStem ESPro2 growth supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20 C PowerStem ESPro2 LIF supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20 C Skład: PowerStem ESPro2 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem ESPro2 jest w pełni zdefiniowana chemicznie i nie zawiera peptonów ani hydrolizatów. Uwaga: Uzupełniona PowerStem ESPro2 zawiera LIF w stężeniu 10 µg/l. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie LIF, należy dodać LIF dodatkowo do pożywki. Przydatność: PowerStem ESPro2 jest pożywką specjalnie zaprojektowaną do hodowli mysich zarodkowych komórek macierzystych (mesc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. PowerStem ESPro2 jest odpowiednie do tworzenia myszy knock-out z modyfikowanych genetycznie zarodkowych komórek macierzystych w pożywce bez surowicy. Dowiedziono również, że pożywka PowerStem ESPro2 jest odpowiednia do hodowli i namnażania komórek progenitorowych nowotworów. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem ESPro2 pozwala na hodowlę i namnażanie mysich zarodkowych komórek macierzystych (mesc) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Hodowla mysich zarodkowych komórek macierzystych może być zainicjowana bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych), komórki wykazują wysoki poziom proliferacji i w większości pozostają w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można

72 poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, śródbłonkowe itp.). Przygotowanie pożywki PowerStem ESPro2: Podstawowa pożywka PowerStem ESPro2 basal medium wymaga uzupełnienia suplementami PowerStem ESPro2 growth supplement i PowerStem ESPro2 LIF supplement. Kompletna pożywka PowerStem ESPro2 (pożywka podstawowa z dodatkiem suplementów) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C. Stosowanie: Przygotować szalki powleczone żelatyną, pokrywając je 0,2% roztworem żelatyny przez co najmniej 10 min w inkubatorze. Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być zawsze utrzymywane w stosunkowo dużym zagęszczeniu w celu utrzymania ich pluripotencji. Najlepiej zakładać hodowlę wtórną z hodowli sub-konfluentnej (o konfluencji 70% - 80%) Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być trypsynowane w zwykły sposób (np. 0,25% roztworem trypsyny). Kiedy komórki staną się kuliste i odłączą się od podłoża (proces ten można przyspieszyć w temperaturze 37 C), należy zawiesić je w DPBS przez dokładne wielokrotne przepipetowanie, a następnie zwirować przez 5 minut w 180 xg w temperaturze pokojowej. Usunąć supernatant w sposób sterylny. Ponownie zawiesić osad komórek w DPBS przez wielokrotne przepipetowanie Dobre zawieszenie komórek jest ważne w celu uzyskania pojedynczych komórek lub bardzo małych agregatów (2-3 komórki). Większe skupiska komórek nie powinny występować. Ze względu na brak surowicy, PowerStem ESPro2 nie powoduje inaktywacji trypsyny; aby zablokować aktywność trypsyny należy zastosować jej inhibitory Po przeliczeniu komórek należy wysiać je na szalki hodowlane pokryte żelatyną, w pożywce PowerStem ESPro2. Inkubować komórki w zwykły sposób w inkubatorze w temperaturze 37 C i atmosferze 5% CO 2. Wymieniać pożywkę PowerStem ESPro2 na świeżą co drugi dzień. Komórki powinny być rozdzielane w stosunku między 1:4 a 1:8 w zależności od tempa wzrostu. Uwaga: W przypadku badań wymagających różnicowania komórek nie należy dodawać LIF. mes-cells in PowerStem ESPro2 mes-cells in PowerStem ESPro2 ES-cells in medium with 10% FBS

73 PowerStem ESPro 2 z LIF PowerStem ESPro 2 bez LIF 100 ml Kit 500 ml Kit 100 mlkit 500 ml Kit P K P K P K P K POWERStem HE1 PowerStem HE1 jest wyspecjalizowaną pożywką bez surowicy do hodowli i namnażania ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hesc) i indukowanych pluripotentnych komórek macierzystych (induced pluripotent stem cells, ipsc). Pluripotentne ludzkie zarodkowe komórki macierzyste oraz komórki ips mają zdolność różnicowania się we wszystkie typy komórek somatycznych, dlatego wiążą sie z nimi wielkie nadzieje medycyny regeneracyjnej. Nawet po długotrwałej hodowli komórki utrzymywane na matrigelu lub lamininie utrzymują normalny kariotyp i stałe tempo proliferacji. Zawartość: Pożywka PowerStem HE1 składa się z: PowerStem HE1 basal medium (pożywka podstawowa) PowerStem HE1 growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania Warunki przechowywania: PowerStem HE1 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C PowerStem HE1 growth supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20 C Skład: PowerStem HE1 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem HE1 jest w pełni zdefiniowana chemicznie i nie zawiera peptonów ani hydrolizatów. Uwaga: PowerStem HE1 zawiera b-fgf w stężeniu 20 µg/l. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie b-fgf, należy dodać b-fgf dodatkowo do pożywki. Przydatność: Do hodowli ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hesc) i indukowanych komórek pluripotentnych (ipsc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem HE1 pozwala na hodowlę i namnażanie ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hesc) i indukowanych komórek pluripotentnych (ipsc) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Komórki hes i ips

74 mogą być hodowane bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych), wykazując wysoki poziom proliferacji, i w większości pozostając w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, śródbłonkowe itp.). Przygotowanie pożywki PowerStem HE1: Podstawowa pożywka PowerStem HE1 basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem HE1 growth supplement. Przed użyciem rozmroź PowerStem HE1 growth supplement. Rozmrożony materiał powiniem być natychmiast zużyty lub rozporcjowany i przechowywany w temperaturze -20 C. Aby uzyskać 500 ml kompletnej pożywki PowerStem HE1 należy dodać 80 ml rozmrożonego suplementu wzrostu PowerStem HE1 growth supplement do 420 ml pożywki podstawowej PowerStem HE1 basal medium. Kompletna pożywka PowerStem HE1 (pożywka podstawowa z dodatkiem suplementów) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C Stosowanie: Przygotować szalki powleczone fibronektyną, pokrywając je roztworem fibronektyny (0.5 mg/ml sterylnej wody) przez co najmniej 30 min w inkubatorze. Zalecane ostateczne stężenie fibronektyny to 50 µg/10 cm 2. Fibronektynę można zastąpić macierzą zawnątrzkomórkową (Matrigel); zalecane rozcieńczenie to 1:40. Matrigel należy przygotować zgodnie z instrukcją producenta. Hodowla starterowa musi być wysokiej jakości i o dużym zagęszczeniu niezróżnicowanych komórek Czas zakładania hodowli wtórnej jest kluczowy. Nie należy pasażować komórek zbyt wcześnie, ponieważ spowoduje to słabsze wyniki wysiewania i komórki ulegną różnicowaniu. Hodowle powinny osiągnąć stan bliski konfluencji Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. Do pasażowania komórek użyć kolagenazy. Ogrzać odpowiednią ilość roztworu kolagenazy IV (10 mg/ml), pożywkę do płukania (DPBS) oraz pożywkę kompletną PowerStem HE1 do 37 C w łaźni wodnej Usunąć pożywkę i dodać 1-3 ml roztworu kolagenazy tak aby pokryć komórki Pozostawić na 3 min aby odczepić kolonie od podłoża. Nie pozostawiać na dłużej niż 3 min, gdyż może to spowodować słabe wyniki wysiewania i wywołać różnicowanie. Dodać 3 ml pożywki hodowlanej i delikatnie zebrać komórki pipetą 5 ml. Zebrać zawiesinę komórek, umieścić w stożkowej probówce i zwirować przez 5 min w 300 xg w temperaturze pokojowej Ponownie zawiesić komórki w pożywce PowerStem HE1 i wysiać bezpośrednio na szalkę pokrytą fibronektyną Komórki powinny być rozdzielane w stosunku 1:2 co 4-5 dni. Pożywka powinna być zmieniana codziennie.

75 hes-cells in PowerStem HE1 hes-cells colony in PowerStem HE1 hes-cells in medium with 10 % FBS PowerStem HE1 100 ml Kit 500 ml Kit P K P K

76 POWERStem HE2 PowerStem HE2 jest wyspecjalizowaną pożywką bez surowicy do hodowli i namnażania ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hesc) i indukowanych pluripotentnych komórek macierzystych (induced pluripotent stem cells, ipsc). Pluripotentne ludzkie zarodkowe komórki macierzyste oraz komórki ips mają zdolność różnicowania się we wszystkie typy komórek somatycznych, dlatego wiążą się z nimi wielkie nadzieje medycyny regeneracyjnej. Nawet po długotrwałej hodowli komórki utrzymywane na matrigelu lub lamininie utrzymują normalny kariotyp i stałe tempo proliferacji. Zawartość: Pożywka PowerStem HE2 składa się z: PowerStem HE2 basal medium (pożywka podstawowa) PowerStem HE2 growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: PowerStem HE2 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C PowerStem HE2 growth supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20 C Skład: PowerStem HE2 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem HE2 jest w pełni zdefiniowana chemicznie i nie zawiera peptonów ani hydrolizatów. Uwaga: PowerStem HE2 zawiera b-fgf w stężeniu 20 µg/l. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie b-fgf, należy dodać b-fgf dodatkowo do pożywki. Przydatność: Do hodowli ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hesc) i indukowanych komórek pluripotentnych (ipsc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem HE2 pozwala na hodowlę i namnażanie ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hesc) i indukowanych pluripotentnych komórek macierzystych (ipsc) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Komórki hes i ips mogą być hodowane bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych), wykazując wysoki poziom proliferacji i w większości pozostając w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, śródbłonkowe itp.).

77 Przygotowanie pożywki PowerStem HE2: Podstawowa pożywka PowerStem HE2 basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem HE2 growth supplement. Przed użyciem rozmroź PowerStem HE2 growth supplement. Rozmrożony materiał powiniem być natychmiast zużyty lub rozporcjowany i przechowywany w temperaturze -20 C. Aby uzyskać 500 ml kompletnej pożywki PowerStem HE2 należy dodać 80 ml rozmrożonego suplementu wzrostu PowerStem HE2 growth supplement do 420 ml pożywki podstawowej PowerStem HE2 basal medium. Kompletna pożywka PowerStem HE2 (pożywka podstawowa z dodatkiem suplementów) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C Stosowanie: Przygotować szalki powleczone fibronektyną, pokrywając je roztworem fibronektyny (0.5 mg/ml sterylnej wody) przez co najmniej 30 min w inkubatorze. Zalecane ostateczne stężenie fibronektyny to 50 µg/10 cm 2. Fibronektynę można zastąpić matrigelem; zalecane rozcieńczenie to 1:40. Matrigel należy przygotować zgodnie z instrukcją producenta. Hodowla starterowa musi być wysokiej jakości i o dużym zagęszczeniu niezróżnicowanych komórek. Czas zakładania hodowli wtórnej jest kluczowy. Nie należy pasażować komórek zbyt wcześnie, ponieważ spowoduje to słabsze wyniki wysiewania i komórki ulegną różnicowaniu. Hodowle powinny osiągnąć stan bliski konfluencji. Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. Do pasażowania komórek użyć kolagenazy. Ogrzać odpowiednią ilość roztworu kolagenazy IV (10 mg/ml), pożywkę do płukania (DPBS) oraz pożywkę kompletną PowerStem HE2 do 37 C w łaźni wodnej Usunąć pożywkę i dodać 1-3 ml roztworu kolagenazy tak aby pokryć komórki. Pozostawić na 3 min aby odczepić kolonie od podłoża. Nie pozostawiać na dłużej niż 3 min, gdyż może to spowodować słabe wyniki wysiewania i wywołać różnicowanie. Dodać 3 ml pożywki hodowlanej i delikatnie zebrać komórki pipetą 5 ml. Zebrać zawiesinę komórek, umieścić w stożkowej probówce i zwirować przez 5 min w 300 xg w temperaturze pokojowej. Ponownie zawiesić komórki w pożywce PowerStem HE2 i wysiać bezpośrednio na szalkę pokrytą fibronektyną. Komórki powinny być rozdzielane w stosunku 1:2 co 4-5 dni. Pożywka powinna być zmieniana codziennie. hes-cells in PowerStem HE2 hes-cells in PowerStem HE2 hes-cells in medium with 10 % FBS

78 PowerStem HE2 100 ml Kit 500 ml Kit P K P K POWERStem EST PowerStem EST to wolny od surowicy system do hodowli i namnażania zarodkowych komórek macierzystych myszy (mesc), a także ich późniejszego różnicowania w bijące kardiomiocyty (n.p. do testu EST zarodkowych komórek macierzystych). Test EST został formalnie zatwierdzony przez Europejskie Centrum Legalizacji Metod Alternatywnych (ECVAM) jako akceptowalny test embriotoksyczności in vitro. Test in vitro zarodkowych komórek macierzystych (EST) pozwala na zaklasyfikowanie potencjału embriotoksycznego odczynników i potencjalnych leków. W celu zbadania nowoopracowanych odczynników i leków, opracowano model prognostyczny na podstawie zahamowania różnicowania mysich zarodkowych komórek macierzystych w kardiomiocyty. Zastosowanie testu EST do testowania odczynników skraca czas, obniża koszty i pozwala zmniejszyć liczbę zwierząt w testach embriotoksyczności. Zawartość: Zestaw PowerStem EST składa się ze złożonej pożywki postawowej zawierającej sole, aminokwasy, witaminy i mikroelementy, do której tuż przed użyciem dodaje sie suplement (PowerStem EST growth supplement), składający się z mieszaniny białek, czynników wzrostu i hormonów. Aby utrzymać zarodkowe komórki macierzyste w stanie niezróżnicowanym i podtrzymać ich wzrost, do suplementowanej pożywki podstawowej (PowerStem EST basal medium) dodaje się mysi czynnik przeciwbiałaczkowy (mlif, 1000 U/ml, w postaci PowerStem EST LIF-supplement). W celu różnicowania w bijące kardiomiocyty, do suplementowanej pożywki podstawowej (PowerStem EST basal medium; bez dodatku mlif) dodaje się mieszankę czynników różnicowania (PowerStem EST differentiation supplement). Przydatność: Kardiomiocyty uzyskane przez różnicowanie komórek macierzystych mogą być użyte w wielu różnych zastosowaniach: w badaniach podstawowych w badaniu wczesnych procesów rozwojowych koniecznych do funkcjonalnej kardiogenezy in vitro w testach składników leków i odczynników chemicznych na mutagenność, cytotoksyczność I embriotoksyczność (test EST) w badaniach na obecność czynników blokujących angiogenezę (tworzenie naczyń włosowatych) analiza elektrokardiologiczna w badaniu leków nasercowych rozwój nowych substancji aktywnych Pożywka podstawowa (PowerStem EST basal medium) jest używana zarówno do namnażania jak i różnicowania komórek; zdefiniowane czynniki są dodawane w zależności od celu doświadczenia (podtrzymanie i wzrost lub różnicowanie komórek ES). Szczególne zalety: Różnicowanie mysich zarodkowych komórek macierzystych in vitro zachodzi dzięki użyciu płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Wykazano, że użycie FBS jest czynnikiem ograniczającym skuteczne różnicowanie zarodkowych komórek macierzystych w kardiomiocyty. Niektóre partie

79 FBS powodują słabe różnicowanie, a inne mogą je nawet całkowicie zablokować. Poszukiwanie odpowiedniej partii FBS i znaczące różnice między nimi powodują, że różnicowanie komórek w pożywce z surowicą pochłania wiele czasu i pieniędzy. W przeciwieństwie do hodowli z FBS, w warunkach bezsurowiczych liczba różnicujących komórek znacznie się zwiększa, przy dość stabilnym tempie różnicowania. Zestaw PowerStem EST skutecznie pobudza wzrost niezróżnicowanych komórek ES i wspomaga ich różnicowanie w bijące kardiomiocyty w warunkach bezsurowiczych, dzięki czemu w standardowych warunkach uzyskuje się łatwo porównywalne wyniki. Przygotowanie: PowerStem EST po uzupełnieniu dodatkami należy przechowywać temperaturze od +2 do +8 C chroniąc przed światłem. Po otwarciu butelki należy zużyć zawatość w ciągu 1 tygodnia. Wszystkie dodatkowe czynniki, takie jak mlif (Proliferation Supplement), jak i czynniki rożnicujące (Differentiation Supplement) powinny być dodane do pożywki podstawowej (Basal Medium, uzupełnione Growth Supplement) bezpośrednio przed użyciem. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania dodatków i zamrażania pełnej pożywki! Stosowanie: Adaptacja, hodowla i namnażanie niezróżnicowanych komórek ES Jeżeli hodowla była początkowo prowadzona w pożywce zawierającej surowicę komórki ES powinny być stopniowo adaptowane do pożywki bezsurowiczej uzupełnionej przez Growth Supplement i LIF Supplement. Zawartość FBS w pożywce jest powoli obniżana (w kolejnych pasażach) a zawartość PowerStem EST - podwyższana. Dzięki dodatkowi LIF (1000U/ml) komórki utrzymywane są w stanie niezróżnicowanym. Hodowla jest prowadzona w naczyniach pokrytych żelatyną 0.1%. Początkowa hodowla zarodkowych komórek macierzystych (ES) P1: 100% pożywki zawierającej surowicę - 0% PowerStem EST P2: 75% pożywki zawierającej surowicę - 25% PowerStem EST P3: 50% pożywki zawierającej surowicę - 50% PowerStem EST P4: 25% pożywki zawierającej surowicę - 75% PowerStem EST P5: 0% pożywki zawierającej surowicę - 100% PowerStem EST Test różnicowania: W celu przeprowadzenia różnicowania komórek należy dodać mieszaninę różnych czynników różnicujących (PowerStem EST differentiation supplement) do pożywki podstawowej uzupełnionej innymi dodatkami. Szczegółowa procedura testu różnicowania jest zamieszczona w ulotce dołączonej do PowerStem EST. Rys.1 Komórki ES hodowane w PowerStem EST z LIF

80 PowerStem EST 100 ml Kit 500 ml Kit P K P K POWERStem MSC1 PowerStem MSC1 jest łatwą do użycia pożywką pozbawioną składników pochodzenia zwierzęcego (ADCF) do hodowli i namnażania ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych (hmsc). PowerStem MSC1 jest zaprojektowana specjalnie do namnażania ludzkich komórek MSC bez ich różnicowania. PowerStem MSC1 podtrzymuje długoterminowy wzrost komórek MSC zachowując ich potencjał do różnicowania w różne linie komórkowe. Dodatkowo komórki MSC hodowane w PowerStem MSC1 namnażają się szybciej i wykazują ograniczenie zanieczyszczeń komórkami krwiotwórczymi na wczesnych pasażach w porównaniu do pożywek opartych na surowicy. Aby namnożone komórki MSC poddać różnicowaniu należy zastosować odpowiednie procedury i czynniki różnicowania. Zawartość: Pożywka PowerStem MSC1 składa się z: PowerStem MSC1 basal medium (pożywka podstawowa) PowerStem MSC1 growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: PowerStem MSC1 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C PowerStem MSC1 growth supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20 C (dostarczany w lodzie lub suchym lodzie, powinien być zużyty natychmiast po otrzymaniu lub może być ponownie zamrożony do późniejszego użytku) Zarówno PowerStem MSC1 basal medium jak i PowerStem MSC1 growth supplement mają gwarantowaną stabilność 6 miesięcy jeżeli są przechowywane w odpowiedni sposób. Pełna pożywka PowerStem MSC1 (basal medium + growth supplement) są stabilne przez 1 miesiąc jeżeli są przechowywane w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C. Nie zaleca się używania pożywki pełnej przez dłużej niż 1 miesiąc. Nie należy zamrażać pełnej pożywki PowerStem MSC1. Skład: PowerStem MSC1 zawiera sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, hormony i czynniki wzrostu, i wzbogacone ludzkie białka i lipidy w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem MSC1 jest wolne od czynników pochodzenia zwierzęcego (ADCF, xeno-free) i nie zawiera niezdefiniowanych peptonów ani hydrolizatów. Przydatność: Do hodowli ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych (hmsc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek i zdolności do dalszego różnicowania. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych.

81 Szczególne zalety: PowerStem MSC1 pozwala na hodowlę ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych (hmsc) w warunkach wolnych od czynników pochodzenia zwierzęcego (xeno-free). Ponieważ nie zawiera surowicy ludzkiej ani zwierzęcej tym samym umożliwia niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. PowerStem MSC1 jest całkowicie wolne od składników zwierzęcych (ADCF, xeno-free) i w związku z tym nadaje się do badań w medycynie regeneracyjnej i inżynierii tkankowej. Poprzez dodanie odpowiednich czynników, MSC mogą być poddane różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (np. tkanka kostna, chrzęstna, tłuszczowa itp.). Przygotowanie pożywki PowerStem MSC1: Podstawowa pożywka PowerStem MSC1 basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem EST growth supplement. PowerStem EST growth supplement należy rozmrozić przed użyciem, a następnie natychmiast dodać do pożywki podstawowej (basal medium). Pełna pożywka PowerStem MSC1 (basal medium + growth supplement) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C. Użytkowanie: Szczegółowe instrukcje dotyczące izolacji i hodowli komórek MSC można znaleźć na stronie hmsc in PowerStem MSC hmsc in PowerStem MSC hmsc in medium with 10% FBS The culture-expanded cell population expresses CD90 (Thy-1), CD105 (SH2) and CD73 (SH3/SH4), but lacks expression of CD34 and CD45. PowerStem MSC 100 ml Kit 500 ml Kit P K P K

82 POWERStem HPSC PowerStem HPSC jest specjalistyczną pożywką bezsurowiczą do hodowli i namnażania ludzkich krwiotwiórczych komórek macierzystych (komórek macierzystych hematopoezy, HPSC) i komórek linii mieloidalnej w hodowli zawiesinowej. Krwiotwórcze komórki macierzyste są CD34-pozytywne, i są najwcześniejszymi komórkami hematopoetycznymi które można zidentyfikować w szpiku kostnym, krwi obwodowej i krwi pępowinowej. Poprzez dodanie jednego lub więcej czynników różnicowania lub zmianę warunków hodowli można wywołać różnicowanie HPSC w różne rodzaje komórek linii krwiotwórczej. Zawartość: Pożywka PowerStem HPSC składa się z: PowerStem HPSC basal medium (pożywka podstawowa) PowerStem HPSC growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania. PowerStem HPSC cytokine supplement (suplement cytokin), który jest dodawany w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: PowerStem HPSC basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C PowerStem HPSC growth supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20 C PowerStem HPSC cytokine supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20 C PowerStem HPSC basal medium, PowerStem HPSC growth supplement oraz PowerStem HPSC cytokine supplement mają gwarantowaną stabilność 12 miesięcy jeżeli są przechowywane w odpowiedni sposób. Pełna pożywka PowerStem HPSC (basal medium + growth supplement + cytokine supplement) jest stabilna przez 3 miesiące jeżeli jest przechowywana w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C. Nie zaleca się używania pożywki pełnej przez dłużej niż 3 miesiące. Skład: PowerStem HPSC zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem HPSC jest w pełni chemicznie zdefiniowane i nie zawiera FBS ani innych składników pochodzenia zwierzęcego. Przydatność: Do hodowli i namnażania ludzkich krwiotwórczych komórek macierzystych CD34-pozytywnych ze szpiku kostnego, krwi obwodowej i krwi pępowinowej. Szczególne zalety: PowerStem HPSC pozwala na hodowlę ludzkich krwiotwórczych komórek macierzystych CD34- pozytywnych i komórek linii mieloidalnej w warunkach bezsurowiczych. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Krwiotwórcze komórki macierzyste mogą być hodowane bez komórek zrębu, wykazują wysokie tempo proliferacji i w większości pozostają w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie odpowiednich czynników różnicowania, komórki krwiotwórcze mogą być różnicowane in vitro w różne typy komórek linii hematopoetycznej.

83 Przygotowanie pożywki PowerStem HPSC: Podstawowa pożywka PowerStem HPSC basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem HPSC growth supplement i suplementem cytokin PowerStem HPSC cytokine supplement. PowerStem HPSC growth supplement i PowerStem HPSC cytokine supplement należy rozmrozić przed użyciem, a następnie natychmiast zużyć lub rozporcjować i zamrozić w temperaturze -20 C. Aby otrzymać 500 ml pełnej pożywki PowerStem HPSC należy dodać 13 ml rozmrożonego PowerStem HPSC growth supplement i 1 ml PowerStem HPSC cytokine supplement do 486 ml pożywki podstawowej PowerStem HPSC basal medium. Pełna pożywka PowerStem HPSC (basal medium + oba suplementy) jest stabilna przez 3 miesiące jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8 C. Użytkowanie: Namnażanie -Przygotować komórki jednojądrzaste (np. PBMC) z Pancoll human (P ). W celu dalszego wzbogacenia komórek CD34-pozytywnych użyj np. MiniMACS (Miltenyi) lub porównywalnego systemu zgodnie z instrukcjami producenta. Komórki CD34-pozytywne posiać w gęstości 2 x 10 4 komórek/ml w pełnej pożywce PowerStem HPSC, w inkubatorze w temperaturze 37 C i atmosferze 5% CO 2 w powietrzu. Przez około 3 dni obserwuje się wstępną fazę spoczynkową (lag) ponieważ większość hematopoetycznych komórek macierzystych znajduje się w fazie G0 (quiescent) Pożywkę wymienić na świeżą (pełną) co 3-4 dni Różnicowanie Erytropoetyna (EPO) i interleukina 6 (IL-6) stymulują różnicowanie komórek krwiotwórczych CD34-pozytywnych w prekursory czerwonych ciałek krwi (komórki BFU-E, ang. burst forming unit erythroid) W celu rozwoju komorek BFU-E należy dodać EPO 10 U/ml i IL-6 10 µg/ml (ostateczne stężenie) do pożywki hodowlanej. Hematopoetic stem cells from neonatal cord blood in PowerStem HPSC Referencje: Horschitz S et al. (2010) Generation of neuronal cells from human peripheral blood mononuclear cells. NeuroReport 21:185 Jeśli potrzebujesz więcej referencji zapraszamy na stronę PowerStem HPSC 100 ml Kit 500 ml Kit P K P K

84 POWERStem PEC1 Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (10 12 ) komórek, jest jednym z najwiekszych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych. Wiele czynników kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Tworzenie nowych naczyń krwionośnych odbywa się na drodze angiogenezy i waskulogenezy - procesu który ograniczony jest jedynie do rozwoju zarodkowego. W roku 1997 zaproponowano, że waskulogeneza pourodzeniowa może być ważnym machanizmem angiogenezy poprzez krążące we krwi komórki progenitorowe śródbłonka (PEC) pochodzące z krwi lub ze szpiku kostnego (Asahara i wsp., Science 1997). Wskutek tego komórki PEC przeszły wiele badań jako potencjalne źródło terapii komórkowej w celu naprawy zniszczonych naczyń krwionośnych. Badania na zwierzętach w sposób jasny pokazują, że podanie komórek PEC częściowo leczy zaburzenia sercowo-naczyniowe i uszkodzenia mięśnia sercowego (komórki PEC uczestniczą w tworzeniu nowych naczyń). Chociaż istnieje spór co do tożsamości progenitorów komórek śródbłonkowych, ostatnio zidentyfikowano populację komórek PEC która wykazuje ekspresję markerów zarówno śródbłonkowych jak i progenitorowych (Ingram i wsp., Blood. 2004; 104: 2752). Co istotne, te komórki badano na wysoki potencjał proliferacji w testach klonogeniczności, i dodatkowo zidentyfikowano poprzez tworzenie funkcjonalnych naczyń krwionośnych in vivo (Yoder i wsp., Blood. 2007; 109: 1801). Jako że komórki śródbłonka znajdują się obecnie w centrum zainteresowania inżynierii tkankowej naczyń ze względu na potencjalne zastosowania terapeutyczne, obecność pełnej surowicy zwierzęcej lub składników pochodzenia zwierzęcego jest w takich zastosowaniach niepożądana. Opis produktu: PowerStem PEC1 ready-to-use (P ) jest specjalnie opracowaną pożywką wolną od surowicy i składników pochodzenia zwierzęcego do hodowli in vitro ludzkich komórek progenitorowych śródbłonka (hpec), która zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego tworzenia kolonii, wzrostu klonogenicznego i szybkiej proliferacji tych komórek. Jest przeznaczona do stosowania w inkubatorze w temperaturze 37 C w atmosferze 5% CO 2. Należy unikać wielokrotnego podgrzewania pożywki pełnej (z dodatkami), przygotowywać jedynie ilość potrzebną do doświadczenia w osobnej sterylnej probówce. Zaleca się używanie 5 ml PowerStem PEC1 na butelkę T25. W przypadku większej lub mniejszej powierzchni hodowli należy odpowiednio dostosować objętość używanej pożywki. Po 24 godzinach od rozmrożenia komórek wymienić pożywkę i usunąć komórki które nie przyczepiły się do podłoża. W celu utrzymania hodowli i namnażania komórek należy wymieniać pożywkę co dwa lub trzy dni; dla

85 hodowli bliskich konfluencji lub dla jak najlepszej proliferacji sugerowane jest dodanie większej ilości pożywki lub jej częstsza wymiana. Przechowywać w ciemności w temperaturze +2 C do +8 C. Okres trwałości: 3 miesiące. Zestaw PowerStem PEC1 kit (P K) wyposażony jest w suplementy (przebadane dla komórek progenitorowych) w oddzielnych sterylnych opakowaniach. Pozwala to użytkownikowi na przygotowanie pożywki do specjalnych zastosowań. Na przykład VEGF, FGF-2 lub inne składniki mogą być pominięte w pełnej pożywce w przypadku szczególnych układów doświadczalnych. Należy jednak pamiętać, że taki skład nie zapewni optymalnego wzrostu komórek, dlatego nie można używać takiej pożywki do długoterminowej, rutynowej hodowli komórek PEC. Należy również zadbać aby podczas dodawania poszczególnych składników do pożywki zachowana była całkowita sterylność. Pożywka powinna być delikatnie ale dokładnie wymieszana po dodaniu wszystkich składników. Pożywkę podstawową (basal medium) i pożywkę pełną (z dodatkami) należy przechowywać w temperaturze +2 C do +8 C, a dodatki (suplementy) w temperaturze -20 C. Okres trwałości: 6 miesięcy. Pożywka podstawowa (basal medium), pożywka pełna (z dodatkami) ani pożywka ready-touse nie powinny być zamrażane! OSTRZEŻENIE: PowerStem PEC1 nie powoduje inaktywacji trypsyny; aby zatrzymać aktywność trypsyny należy zastosować jej inhibitory (roztwór inhibitora trypsyny P ). Aby uniknąć uszkodzenia komórki PEC powinny być wystawione na działanie trypsyny przez jak najkrótszy okres czasu. UWAGA: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie zatwierdzona do celów terapeutycznych ani diagnostycznych u zwierząt ani ludzi. PowerStem PEC1 jest pożywką odpowiednią do hodowli: Ludzkich śródbłonkowych komórek progenitorowych z krwi pępowinowej Ludzkich śródbłonkowych komórek progenitorowych z krwi obwodowej Ludzkich śródbłonkowych komórek progenitorowych ze szpiku kostnego Kontrola jakości: Każda partia PowerStem PEC1 jest badana na zdolność wspomagania proliferacji komórek na świeżo wyizolowanych ludzkich śródbłonkowych komórkach pierwotnych krwi pępowinowej aby zapewnić optymalne działanie i niezawodność. Dodatkowo pożywka jest badana na brak zakażeń mikrobiologicznych (bakterie, drożdże, grzyby, mykoplazma). PowerStem PEC1 ready to use PowerStem PEC1 kit 500 ml 500 ml P P K

86 1.8 DRZEWKA DECYZYJNE Różne typy komórek (limfocyty, komórki szpiczaka, komórki nowotworowe, hybrydoma, makrofagi, fibroblasty, melanocyty, komórki HEK i HeLa) Adherentne Nieadherentne Łatwo ulegające adhezji Trudno ulegające adhezji Niezależne od insuliny Zależne od insuliny Panserin 401 Panserin 412 Panserin 401 Panserin 411 Panserin PX40 Panserin PX40 Komórki szpiczaka (myeloma)/ Komórki hybrydoma Z białkiem Bez białka Niska gęstość wysiewania Średnia gęstość wysiewania Niezależne od cholesterolu Zależne od cholesterolu Panserin PX10 Panserin 401 Panserin H4000 Panserin H8000 Limfocyty Komórki HEK (293) Badania cytogenetyczne Z PHA Bez PHA adherentne nieadherentne Panserin 411S Panserin 413 Panserin 701 Panserin 293A Panserin 293S Komórki owadzie Sf9 Schneider s Drosophila S2 Sf21 Spodopan Panserin S2 Keratynocyty - Panserin 801

87 Komórki dendrytyczne - Panserin 416 Komórki śródbłonka HUVEC - Endopan 300L Zastępniki (substytuty) surowicy Dla komórek nieadherentnych Z dodatkiem czynników przylegania, dla komórek adherentnych Specjalny skład, bez składników pochodzenia zwierzęcego, dla komórek adherentnych Specjalny skład, bez składników pochodzenia zwierzęcego, dla komórek nieadherentnych Panexin NTS Panexin NTA Panexin NTA Pharma Grade Panexin NTS Pharma Grade Komórki CHO Adherentne Nieadherentne Chemicznie zdefiniowane, bez składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego, zawierające białko Chemicznie zdefiniowane, bez składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego, nie zawierające białka Bez składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego, nie zawierające białka, bardzo wysoka wydajność Panexin 604 Panexin 604ST Panexin 604SPF Panexin C6000 Komórki Vero - Panserin ProVero Komórki NIH 3T3A - Nieadherentne - Panserin T3

88 2. SUROWICE 2.1 WSTĘP Funkcja surowicy w hodowli komórkowej Stymulacja wzrostu komórek, proliferacji i różnicowania przez czynniki hormonalne. Czynniki przylegania ułatwiają i usprawniają przyłączanie komórek do płytek hodowlanych (biomatrix). Białka transportowe i wiążące między innymi dostarczają hormony, minerały i lipidy. Wiązanie substancji toksycznych przez białka surowicy. Surowice zwierzęce Niezależnie od linii komórkowej (tj. typu lub klasy komórek) surowica w dawce około 10-15% (całkowitej objętości cieczy) jest dodawana do hodowli komórkowej jako substancja odżywcza. Surowica produkowana z krwi zwierząt oraz tzw. FBS jest obecnie najbardziej rozpowszechniona, ponieważ zawiera szczególnie dużo czynników pobudzających wzrost, ze względu na swoje pochodzenie z krwi płodowej (płodów pozostałych po uboju bydła). Zalety PAN Biotech GmbH Własny surowiec z różnych krajów: Australia (atestowany dla USA), Południowa Afryka, Ameryka Południowa (Brazylia). Certyfikat zgodności nr: R CEP-Rev 00. Na licencji zgodnie z nowym rozporządzeniem UE nr 1774 / 2002 z wet. nr: DE Każda partia jest w pełni udokumentowana - od kraju pochodzenia do filtracji końcowego produktu. Nasze standardowe instrukcje obsługi mogą być okazane w dowolnym momencie. Wszystkie procedury, od pobierania surowicy do sterylnej filtracji produktu końcowego, są określone w SOP (standardowe procedury operacyjne) i zawsze mogą zostać przedstawione. Oferujemy specjalne rodzaje surowicy: dializowane, inaktywowane, filtrowane węglem aktywowanym, gamma-napromieniowane, pozbawione lipidów, ze zmniejszonym stężeniem gamma-globulin. Najwyższe standardy produkcji i bezpieczeństwa w produkcji surowicy. Najlepsze referencje od przemysłu i ośrodków naukowych. Bardzo dokładne testy i analizy (patrz certyfikat). Dokumentacje Certyfikat COS Sprawozdanie z produkcji Świadectwo analizy (CoA) Dokumenty weterynaryjne Dokumenty importowe Świadectwo pochodzenia

89 Walidacja ekstrakcji surowicy i jej przetwarzania Dokumenty eksportowe i importowe zgodne z obowiązującymi dyrektywami EU Protokół produkcji Wykorzystujemy wyłącznie surowice z obszaru gwarantującego brak BSE. Ponadto możemy także potwierdzić, że Republika Południowej Afryki, jako kraj pochodzenia surowicy, jest wolna od trzęsawki. Żadna partia surowicy z PAN-Biotech nie jest otrzymywana z Wielkiej Brytanii jako kraju pochodzenia. Nalegamy na składanie kompletnej dokumentacji, zawierającej certyfikat pochodzenia i świadectwa weterynaryjne, dokumenty przewozowe, świadectwa analizy, szczegółowy protokół produkcji. Każdy proces jest monitorowany indywidualnie dla każdej partii a następnie podsumowywany w protokole produkcyjnym. Proces produkcyjny Nieprzetworzona surowica jest pobierana z wybranych rzeźni poddawanych kontroli. Po otrzymaniu produkt jest sprawdzany, grupowany oraz sterylnie filtrowany (przez serię filtrów o coraz mniejszej wielkości porów). Po dekantacji surowica jest przechowywana w wysokiej jakości butelkach ze sterylnych tworzyw sztucznych (lub butelkach Nalgene), a kompleksowe badania są przeprowadzane w laboratorium kontroli jakości. Kontrola sterylności 5 ml każdej próbki jest zaszczepiona 20 ml pożywki bulionowej z caso - i tioglikolanami i inkubowana w 32 C i w temperaturze pokojowej. Ocena sterylności następuje po okresie 21 dni. Test na mykoplasmę 1. Metoda fluorochromowa DNA: Hodowle komórkowe są poddane obróbce zgodnie z metodą fluorochromową DNA z H33258 (bis-benzimid) i badane pod mikroskopem fluorescencyjnym w celu wykrycia zanieczyszczenia mykoplazmą. 2. Kultury bakterii: Porcje osadów z próbki surowicy w pożywce namnażajacej (dwufazowy bulion z surowicą końską) są inkubowane przez 14 dni w temperaturze 37 C w inkubatorze. Wzbogacony bulion jest następnie zaszczepiany na płytki agarowe. Ocenę pod mikroskopem przeprowadza się po 14 dniach inkubacji w warunkach beztlenowych w 37 C. L-formy bakteryjne (CWD) Specjalne wzbogacona pożywka jest używana do wykrywania L-form bakteryjnych. Test na obecność wirusów (antygen-przeciwciało) Wszystkie partie surowicy płodowej są badane pod kątem zakażenia wirusem BVD-MD, IBR- IPV, a także mikroorganizmami PI 3 w uznanym i niezależnym laboratorium.

90 Wzrost komórek Próbka surowicy jest stosowana jako dodatek do pożywki wzrostowej (10% surowicy) do hodowli fibroblastów mysich (L 929) i komórek mysiego szpiczaka (SP 2). Wykreśla się krzywą wzrostu przez okres 7 dni i dokonuje się oceny tempa podziałów, liczby i morfologii komórek. Zdolność tworzenia klonów 500 komórek hoduje się w 90 mm szalkach hodowlanych i inkubuje przez 14 dni w temperaturze 37 C, po czym komórki utrwala się i wybarwia. Rejestruje się następujące dane: liczebność koloni, wielkość klonów i morfologia komórek. Surowica jest badana z fibroblastami L 929 na wydajność zasiedlania oraz z SP 2 na wydajność klonowania. Wszystkie wartości określone w układach biologicznych stosuje się tylko do wskazanego systemu komórkowego. Oprócz tych rutynowych badań podejmujemy dalsze badania w różnych systemach komórkowych na życzenie klienta. Będzie nam miło spełnić państwa życzenia w tym zakresie. Badania chemii klinicznej Oznaczenia rutynowe, takie jak stężenie glukozy i zawartość białka całkowitego, wartość ph, osmolalność, pirogenność, hemoglobina i inne badania mogą oczywiście być również przeprowadzane.

91 Certyfikat COS

92 Historia: Firma PAN-Biotech GmbH powstała w 1988 roku i od roku 1994 produkuje i sprzedaje surowice zwierzęce. System jakości dla wytwarzania tych produktów to Certyfikat ISO (Dla jakość obsługi certyfikat ISO 9001 odnosi się do dodatku 1 i 2) Wytwarzana surowica była stosowanych jako surowiec do produkcji produktów biofarmaceutycznych. Procesy i urządzenia stosowane do produkcji surowicy są przyjazne dla środowiska, są walidowane, kontrolowane i gwarantują sterylną produkcję. Od zamówień surowego materiału do powstania surowicy gotowej do sprzedaży firma zapewnia pełną dokumentację i kontrolę. Deklaracja: Proces produkcji i kontroli jakości są prowadzone zgodnie z zaprezentowaną dokumentacją i przedstawiają odpowiedni system zapewnienia jakości zgodnie z normą jakości ISO Ten system zapewnia jakość i spójność partii. PAN-Biotech prowadzi wewnętrzny i zewnętrzny audyt systemu jakości w skali rocznej. Ponadto, PAN-Biotech regularnie kontroluje dostawców surowca oraz kontroluje obiekty, procesy produkcyjne i dokumentację w zakresie zbierania, transportu i przechowywania surowicy. PAN-Biotech jest gotów do kontroli, zgodnie z odpowiednimi aktami prawnymi, na wniosek właściwego organu przed i / lub po udzieleniu certyfikatu zgodności. Aidenbach, 01 stycznia 2009 Andreas Friedrich, Michael Wichmann Dyrektorzy PAN Biotech GmbH Nazwa posiadacza / PAN Biotech GmbH Miejsce produkcji: Gewerbepark Aidenbach / Niemcy

93 2.2. SUROWICE BYDLĘCE COS: CEP Płodowa surowica bydlęca: Afryka Południowa Testowana na mikoplazmę i wirusy, klasa zdrowotna 1a COS: CEP Płodowa surowica bydlęca: Ameryka Południowa Testowana na mikoplazmę i wirusy, klasa zdrowotna 1a COS: CEP Płodowa surowica bydlęca: Australia Testowana na mykolpazmę i wirusy Płodowa surowica bydlęca: pochodzenie USA Testowana na mykolpazmę i wirusy Płodowa surowica bydlęca: dopuszczona przez US Testowana na mykolpazmę i wirusy (zgodnie z listą Aphis) Cielęca surowica (od noworodka) Testowana na mykolpazmę i wirusy Surowica bydlęca 100 ml 500 ml 100ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 1501-Lot# 1502-Lot# 3301-Lot# 3301-Lot# 1301-Lot# 1302-Lot# 1401-Lot# 1402-Lot# 1701-Lot# 1702-Lot# 0401-Lot# 0402-Lot# P P Surowice poddane obróbce Surowica dializowana: METODA: Surowica jest dializowana przez błony z wykluczeniem 10 kda przeciwstawnie do roztworu soli fizjologicznej (alternatywnie: PBS), aż zawartość glukozy jest mniejsza niż 10 mg/dl. ZASTOSOWANIE: Badania integracji radioaktywnej. Zastosowania wolne od hormonów Badania nietolerujące drobnych cząsteczek, takich jak nukleotydy (hipoksantyna, tymidyna), aminokwasy (seryna, alanina, itp.), cukry lub metabolity. Płodowa surowica bydlęca dializowana Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P P Surowica oczyszczana aktywnym węglem METODA: Surowicę ogrzewa się w łaźni wodnej z dekstranem i aktywowanym węglem drzewnym. Węgiel aktywowany, wraz ze związanymi substancjami, usuwa się następnie przez wirowanie i filtrację. ZASTOSOWANIE: Praca przy obniżonej zawartości hormonów (sterydów). Praca przy ograniczeniu czynników wzrostu (zapobieganie różnicowaniu się komórek).

94 Badania receptorów (np. estrogenów). Minimalizuje zmienność pomiędzy partiami surowicy. Płodowa surowica bydlęca oczyszczana weglęm aktywnym Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P P Surowica inaktywowana termicznie METODA: Surowica jest podgrzewana przez 30 minut do 56 C w łaźni wodnej. ZASTOSOWANIE: Pomiary dehydrogenazy mleczanowej w supernatancie hodowli jako markera uszkodzenia komórek (LDH w surowicy jest niszczony poprzez inaktywację cieplną). Minimalizuje zmienność pomiędzy partiami surowicy (wszystkie termicznie wrażliwe składniki są zniszczone). Badania witamin i czynników wzrostu (są niszczone w całości lub częściowo, lub zmniejszone jest ich stężenie poprzez inaktywację cieplną). Zwiększenie ochrony przed wirusami, ponieważ inaktywowane są wirusy wrażliwe na temperaturę. Badania w których nie jest tolerowana obecność dopełniacza. Płodowa surowica bydlęca inaktywowana termicznie Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml 1901-Lot# 1902-Lot# Surowica wolna od tetracyklin METODA: Surowica jest testowana na brak tetracyklin przy użyciu systemu TEToff (lucyferaza). ZASTOSOWANIE: Ekspresja genów regulowana TET-on / TET-off Transfekcje Badania ekspresji Płodowa surowica bydlęca wolna od tetracyklin Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P P

95 Surowica pozbawiona lipidów METODA: Lipidy są usuwane z surowicy krwi metodą chromatografii powinowactwa. ZASTOSOWANIE: Badania metabolizmu lipidów Badania miażdżycy Płodowa surowica bydlęca pozbawiona lipidów Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P P Surowica sterylizowana promieniami gamma METODA: Surowica jest wystawiona na promieniowanie co najmniej 25 kgy. ZASTOSOWANIE: Produkcja biofarmaceutyczna Produkcja wirusów Produkcja szczepionek Produkcja elementów diagnostycznych Płodowa surowica bydlęca sterylizowana promieniami gamma Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P P Surowica o bardzo niskiej zawartości IgG METODA: Zawartość IgG (w FBS średnio 190 µg/ml) jest obniżona metodą chromatografii powinowactwa (kolumna powinowactwa białka G) do co najwyżej 5 µg/ml. ZASTOSOWANIE: Produkcja przeciwciał Przeciwciała monoklonalne Znaczniki radioaktywne Płodowa surowica bydlęca o niskiej zawartości IgG Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P P PANSera ES Opracowaliśmy nowy sposób przetwarzania surowicy płodowej do hodowli komórek zarodkowych.

96 ZALETY: Powtarzalne, stałe właściwości wzrostu. Większa wydajność klonowania. Więcej niezróżnicowanych klonów. Stała ścisła kontrola jakości. Nie ma potrzeby badania poszczególnych partii PANSera ES FBS,dedykowana do komórek ES Testowana na mykoplazmę i wirusy i testowana na komórkach ES 100 ml 500 ml 2601-Lot# 2602-Lot#

97 2.3 INNE SUROWICE ZWIERZĘCE Surowica kurczęca Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica ośla Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica koźla Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica Chomicza 100 ml 500 ml 100ml 500 ml 100 ml 500 ml P P P P P P Testowana na mykoplazmę i wirusy 10 ml P Surowica końska Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P P Surowica jagnięca Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica mysia Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica świńska 100 ml 500 ml 10 ml 100 ml P P P P Testowana na mykoplazmę Surowica królicza Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica szczurza Testowana na mikoplazmę i wirusy Surowica owcza Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 10 ml 100 ml 100 ml 500 ml P P P P P P E P P

98 2.4. SERA PLUS Surowica specjalna Dla celów badawczych Do produkcji szczepionek Do produkcji bioaktywnych białek (np. insulina) Do produkcji innych cząsteczek białek Sera Plus ZALETY: Powtarzalny, stały wzrost Stała - niska zawartości endotoksyn Większe bezpieczeństwo (wirusy, mykoplazma) Wiele linii komórkowych wykazuje lepsze właściwości wzrostu Nadaje się do wielu różnych komórek Stała ścisła kontrola jakości Powtarzalny, stały wzrost! Większe bezpieczeństwo w odniesieniu do braku wirusów! Sera Plus jest specjalnie przetwarzaną surowicą. Surowice wybranych partii są rozdzielane na poszczególne składniki za pomocą wyrafinowanych metod chromatograficznych, które są następnie mieszane razem zgodnie z określoną metodą. Celem jest produkcja surowicy o stałych właściwościach wzrostu (zdefiniowany skład) oraz o wyższym poziomie bezpieczeństwa w odniesieniu do braku wirusów. Badania wykazały, że nasze specjalne surowice są lepsze w testach przeprowadzonych przez klientów. W porównaniu z normalnymi surowicami FKS nasza specjalna surowica wspiera wzrost wielu typów komórek, równie dobrze a często jeszcze lepiej niż tradycyjne surowice. SeraPlus przetworzona FBS SeraPlus S przetworzona FBS 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml P P P P

99 2.5 SUROWICA LUDZKA Surowica ludzka jest wytwarzana z ludzkiego osocza przez dodanie chlorku wapnia. Po usunięciu skrzepu surowica ludzka jest przemywana i zagęszczana przez ultrafiltrację, a w końcu filtrowana przez kombinację filtrów membranowych i innych. Mamy w swojej ofercie surowice ludzkie różnego rodzaju, między innymi pozbawione lipidów, surowice AB, oczyszczone za pomocą sepharozy A, węgla, żywic. SUROWICE bez koagulantów ( Off the clot ) Surowice Off the clot są przygotowywane z pełnej krwi ludzkiej pobranej bez użycia koagulantów, która skrzepła w sposób naturalny w temperaturze pokojowej, a następnie została pozbawiona powstałego skrzepu przez wirowanie. Oferujemy jednostki pochodzące od jednego dawcy, jak również partie zmieszanej surowicy od różnych dawców. Surowica Off the clot jest filtrowana przez filtry membranowe i inne. Dostępne są surowice AB, męskie, żeńskie, mieszane, pochodzące od jednego dawcy, jak również zmieszane od różnych dawców. Ludzka surowica Ludzka AB surowica Ludzka AB surowica (męska) Ludzka surowica (of the clot) 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100ml 500 ml 100 ml 500 ml P P P P P P P P

100 2.6. CERTYFIKAT ANALIZY

101 3. MEDIA DO KULTUR KOMÓRKOWYCH 3.1. WSTĘP Chcesz tylko najwyższej jakości pożywek do hodowli komórek? W PAN-Biotech, doskonałe surowce i najwyższa technologia gwarantują pierwszorzędną jakość pożywek. Woda jest najważniejszym składnikiem płynnych pożywek, dlatego czystość wody jest niezwykle ważna dla jakości produktów. Woda której używamy ma poziom endotoksyn <0,005 EU/ml, a zatem jest najwyższej czystości. Nasze pożywki są umieszczane w kwarantannie do czasu zakończenia procedury kontroli jakości. To gwarantuje doskonałą jakość produktu. Zalety naszych pożywek do hodowli komórkowych: Wszystkie materiały używane przez naszą firmę są testowane zgodnie z najwyższymi standardami jakości. Standardowo używane są wysokiej klasy butelki Nalge - PET. Partie od 10 litrów do 4000 litrów. Usługa: optymalizacja produktu / dalszy rozwój dotychczas stosowanej pożywki na życzenie klienta. Oznaczenie CE zgodne z prawem produktów medycznych dostępne na życzenie. Pożywki z niestandardowymi składnikami: Jeśli potrzebujesz pożywki, które nie ma w naszym katalogu to prosimy o kontakt. Możemy wyprodukować każdy wariant składu pożywki, minimalna ilość zamówienia 20 x 500 ml. Okres trwałości Pożywki w proszku: 2 lata Pożywki płynne bez glutaminy: 2 lata Pożywki płynne z stabilną glutaminą: 2 lata Pożywki płynne z L-Glutaminą: 1 rok Pożywki płynne z L-glutaminą mogą być stosowane również po dacie ważności, ale muszą zostać uzupełnione o nową L-glutaminę. Okres trwałości zaczyna się od daty produkcji! Przechowywanie: Pożywki w proszku: + 2 C do + 8 C Pożywki płynne: + 2 C do + 8 C, chronić przed światłem Zapraszamy do skorzystania z doświadczenia PAN-Biotech GmbH. Nasza infrastruktura i doświadczenie umożliwia produkowanie specjalnie skomponowanych pożywek nawet przez dłuższy okres czasu w indywidualnie dobranych ilościach w zależności od zapotrzebowania klienta.

102 3.2. MEDIA ALPHA MEM Alpha MEM jest inną wersją MEM Eagle i zawiera większe stężenie aminokwasów. Ma również większe stężenie kwasu liponowego, witamin i pirogronianu. Pierwotnie opracowany do hodowli komórek nerki chomika, dziś jest używany w szerokim zakresie do hodowli komórek ssaczych. Alpha MEM zaspokaja między innymi potrzeby komórek szpiku kostnego w hodowli zawiesinowej i jako pojedyncza warstwa komórek (monolayer). Kolejną możliwością jest zastosowanie jako pożywki do separacji komórek lub do hodowli komórek owodni. Pożywki Płynne: Alpha MEM Eagle 500 ml PO Bez L-glutaminy Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO 3 Alpha MEM Eagle Bez L- glutaminy Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO ml PO Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO ml PO Alpha MEM Eagle 500 ml PO Z L- glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO 3 Alpha MEM Eagle Z stabil. glutaminą Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO ml PO Alpha MEM Eagle Z stabil. Glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO ml PO Specjalne media płynne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): Alpha MEM Eagle Z 4 mm L- Glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO ml PO Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 Bez glukozy PO

103 Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 Z 10 mm glukozą PO Alpha MEM Eagle Bez glutaminy Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej PO Alpha MEM Skład: Skład Zawartość mg/l Sole nieorganiczne Chlorek wapnia x 2H 2O 264,92 Siarczan magnezu, bezwodny 139,52 Chlorek potasu 400,.00 Chlorek sodu 6800,00 Diwodorofosforan(V) sodu (NaH 2PO 4) 140,00 Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna 1000,00 HEPES 5958,00 Kwas liponowy 0,2 Czerwień fenolowa 10,00 Pirogronian sodu 110,00 Aminokwasy L-alanina 25,00 L-arginina x HCl 126,64 L-asparagina x H 2O 50,00 Kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina x HCl x H 2O 100,00 L-cysteina 24,00 L-glutamina 292,00 Kwas L-glutaminowy 75,00 Glicyna 50,00

104 L-histydyna x HCl x H 2O 42,00 L-Izoleucyna 52,40 L-leucyna 52,40 L-lizyna x HCl 72,47 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 36,20 L-valina 46,00 Witaminy Kwas askorbinowy 50,00 D(+) biotyna 0,10 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,00 Kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoxine x HCl 1,00 Ryboflawina 0,10 Tiamina x HCl 1,00 Wiatmina B12 1,33 Rybonukleozydy Adenozyna 10,00 Cytydyna 10,00 Guanozyna 10,00 Urydyna 10,00 Deoksyrybonukleozydy 2 - deoksyadenozyna 10,00 2 -deoksycytydyna 11,00 2 -deoksyguanozyna 10,00 2 -deoksytymindyna 10,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l, wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l

105 Media w proszku: Alpha MEM Eagle Bez L-glutaminy Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO 3 10 L PO L PO Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Bez rybonukleozydami Bez deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO 3 10 L PO L PO Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO 3 10 L PO L PO Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO 3 Z 25mM HEPES 10 L PO L PO Podsumowanie: L-glutamina stab.glutamina rybonukleozydy deoksyrybonukleozydy dodatki x x x x x x x x x x x x x Patrz wyżej x x x Patrz wyżej x x x Patrz wyżej Patrz wyżej

106 BME Z SOLAMI EARLE A W latach pięćdziesiątych ubiegłego wieku stało się jasne, że u ssaków komórki potrzebują nie tylko 10 podstawowych aminokwasów, ale także cystyny, tyrozyny i glutaminy. W uzupełnieniu do tych trzech aminokwasów BME zawiera również osiem witamin z grupy B. Pierwotnie BME było wykorzystywane do hodowli mysich komórek L i komórek HeLa. Dzisiaj w wielu odmianach jest używane w wielu dziedzinach nauki. Poza hodowlą normalnych komórek ssaczych BME jest bardzo przydatne do hodowli komórek transformowanych. BME z EBSS 500 ml PO Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO 3 BME z EBSS 500 ml PO Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 BME z solami Earle s Skład: Skład Zawartość mg/l Sole nieorganiczne Inne składniki Aminokwasy Chlorek wapnia x 2H 2O 264,92 Siarczan magnezu, bezwodny 139,52 Chlorek potasu Chlorek sodu 6 800,00 Diwodorofosforan(V) sodu (NaH 2PO 4) 140,00 D(+)-glukoza bezwodna 1 000,00 HEPES 5 958,00 Czerwień fenolowa 10,00 L-arginina x HCl 21,00 L-cysteina 12,00 L-glutamina 292,00 L-histydyna base L-Izoleucyna 8,00 26,00

107 Witaminy L-leucyna L-lizyna x HCl L-metionina L-fenyloalanina L-treonina L-tryptofan L-tyrozyna L-valina D(+) biotyna D-pantotenian wapnia 26,00 36,47 7,50 16,50 24,00 4,00 18,00 23,50 1,00 1,00 Chlorek choliny 1,00 Kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoksal x HCl 1,00 Ryboflawina 0,10 Tiamina x HCl 1,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l, wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l Media w proszku: BME z EBSS 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 BME z EBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 BME z EBSS 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 BME z EBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3

108 Podsumowanie: L-glutamina stab.glutamina czerwień fenolowa HEPES Dodatki x x x Media płynne: BME z solami Hanks a BME z HBSS 500 ml PO Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO 3 BME z HBSS 500 ml PO Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO 3 Skład: Sole nieorganiczne Skład mg/l Chlorek wapnia x 2H 2O 185, 44 Siarczan magnezu, bezwodny Wodorofosforan di sodu 139,52 47,88 Chlorek potasu Chlorek sodu Diwodorofosforan potasu Inne składniki D(+)-glukoza HEPES Czerwień fenolowa Aminokwasy L-arginina x HCl L-cysteina L-glutamina L-histydyna base L-Izoleucyna L-leucyna L-lizyna x HCl L-metionina L-fenyloalanina L-treonina L-tryptofan 8 000,00 60, , ,00 10,00 21,00 12,00 292,00 8,00 26,00 26,00 36,47 7,50 16,50 24,00 4,00

109 Witaminy L-tyrozyna L-valina D(+) biotyna D-pantotenian wapnia Chlorek choliny Kwas foliowy myo-inozytol Amid kwasu nikotynowego Pyridoksal x HCl 1,00 Ryboflawina 0,10 Tiamina x HCl 1,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l, wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l Media w proszku: 18,00 23,50 1,00 1,00 1,00 1,00 2,00 1,00 BME z HBSS 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 BME z HBSS 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 BME z HBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 BME z HBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3

110 POŻYWKA BSK-H Mikrobiologiczna pożywka do hodowli Borrelia burgdorferi. Media płynne: BSK-H Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO 3 BSK-H Medium 500 ml P S1 Z 6% surowicą króliczą Z 2,2 g/l NaHCO 3 Bez L-glutaminy POŻYWKA CLICKA Pożywka Clicka to zmodyfikowana pożywka Eagle's Essential z dodatkiem soli Hanka (HMEM). Podłoże to zawiera większe stężenia aminokwasów EAA, z dodatkiem aminokwasów NEAA, pirogronianu sodu i prekursorów kwasów nukleinowych. Medium płynne: Click s Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z 1,35 g/l NaHCO 3 Medium w proszku: Click s Medium 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3

111 POŻYWKA CMRL-1066 CMRL jest pożywką bogatą w nukleozydy i witaminy. W przeszłości została opracowana do klonowania komórek nerki małpy oraz do długotrwałej hodowli komórek L. Nadaje się do wielu typów komórek ludzkich i małpich, a także dla innych komórek ssaczych, zwłaszcza przy użyciu surowicy końskiej i cielęcej. Skład mg/l Sole nieorganiczne Inne składniki Aminokwasy Chlorek wapnia x 2H 2O 264,92 chlorek potasu 400,00 magnesium anhydros 97,78 octan sodu x 3 H2O 83,00 Chlorek sodu 6 799,00 wodorofosforan disodu x 2H2O 139,75 cholesterol D(+)-glukoza bezwodna 0, ,00 glutation (red.) 10,00 HEPES 5 958,00 metylodeoksycytydyna 1,00 glukuronian sodu x H2O 4,00 tween 80 5,00 L-alanina 25,00 L-arginina x HCl 76,00 Kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina free base 199,66 L-cysteina 20,00 L-glutamina 100,00 Kwas L-glutaminowy 75,00 Glicyna 50,00 L-histydyna x HCl x H 2O 20,00 L-hydroksyprolina L-Izoleucyna 10,00 20,00

112 L-leucyna 60,00 L-lizyna x HCl 70,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 30,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 25,00 Witaminy kwas p- aminobenzoesowy 0,050 koenzymy Kwas askorbinowy D(+) biotyna D-pantotenian wapnia 50,000 0,010 0,010 Chlorek choliny 0,500 Kwas foliowy 0,010 myo-inozytol 0,050 Amid kwasu nikotynowego 0,025 kwas nikotynowy 0,025 pirydoksal x HCL 0,025 Pyridoxide x HCl 0,03 Ryboflawina 0,01 Tiamina x HCl 0,01 tiamina x HCl 0,01 kokarboksylaza x HCL 1,00 koenzym A trilithiumsalt x H2O 2,67 FAD NAD NADP UTP Deoksyrybonukleozydy 2 - deoksyadenozyna 2 -deoksycytydyna x HCL 2 -deoksyguanozyna 1,00 7,00 1,00 1,00 10, ,00

113 2 -deoksytymindyna 10,00 Płynne media: CMRL ml P Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO 3 CMRL ml P Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO DMEM (Dulbecco s Modified Eagle Medium) Pierwotnie opracowane do hodowli mysich komórek zarodkowych, DMEM jest dostosowany do hodowli szerokiego zakresu komórek, zwłaszcza jeśli pożywka jest uzupełniona przez dodanie FBS. DMEM jest modyfikacją pożywki Eagle z czterokrotnie zwiększoną zawartością aminokwasów i witamin. DMEM z 1.0 g / l glukozy jest standardową pożywką, natomiast DMEM z 4,5 g / l glukozy jest przeznaczony dla komórek o dużym zapotrzebowaniu energetycznym. Płynne media bez glukozy: DMEM bez glukozy 500 ml P S1 Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM bez glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM bez glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM bez glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez czerwieni fenolowej

114 DMEM bez glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 Media w proszku: DMEM bez glukozy 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez pirogronianu sodu Bez NaHCO 3 Bez czerwieni fenolowej Media płynne z 1,0 g/l glukozy: DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z stab. glutaminą Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez czerwieni fenolowej P S1 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Z L- glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez czerwieni fenolowej DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Z stab. Glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 Z 25mM HEPES

115 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Bez L- glutaminy Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez czerwieni fenolowej DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 Z 25 mm HEPES DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez czerwieni fenolowej DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez czerwieni fenolowej Media specjalne z 1,0 g/l glukozy (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez L-izoleucyny DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez fosforanów DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO 3 Bez wapnia SILAC-DMEM 500 ml P Z 1,0 g/l glukozy Z stab. glutaminą Z 3,7 g/l NaHCO 3 Z pirogronianem sodu Bez L-argininy Bez L-lizyny

116 DMEM Z 1,0 g/l glukozy 500 ml P S1 Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez L-seryny Bez chlorku choliny Z 3,7 g/l NaHCO 3 Media w proszku: DMEM z 1,0 g/l glukozy 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z pirogronianem sodu Bez NaHCO 3 DMEM z 1,0 g/l glukozy 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z pirogronianem sodu Z 25 nm HEPES Bez NaHCO 3 DMEM z 1,0 g/l glukozy 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Z pirogronianem sodu Z 25 nm HEPES Bez NaHCO 3 DMEM z 1,0 g/l glukozy 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO 3 Płynne media z 4,5 g/l glukozy: DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z stab. Glutaminą Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO 3

117 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z 25 mm HEPES Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z stab. glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 25 mm HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z stab.glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Bez czerwnieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z stab. L-glutaminą Z 25 mm HEPES Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3

118 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 2,2 g/l NaHCO 3 Media specjalne z 4,5 g/l glukozy (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Bez pirogronaniu sodu Bez chlorku wapnia Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Bez chlorku sodu Bez NaHCO 3 DMEM (10x) 500 ml P Z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Z NEAA Bez NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu z 1,5 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z stab. glutaminą Z 12,5 mm HEPES Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez L-argininy Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 5,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z stab. Glutaminą Z pirogronianem sodu Z 25 mm HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 0,5 g/l NaHCO 3

119 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Bez pirogronianu sodu Z 2,2g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Bez L-izoleucyny Z 3,7 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Bez L-cysteiny Bez L-metioniny Z 3,7 g/l NaHCO 3

120 Sole nieorganiczne Skład mg/l Chlorek wapnia bezwodny 200,00 Azotan żelaza (III) x 9 H 2O 0,10 Siarczan magnezu, bezwodny 97,66 Chlorek potasu Chlorek sodu 6400,00 Diwodorofosforan(V) sodu (NaH 2PO 4) 108,69 Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna 1000,00 HEPES 5958,00 Czerwień fenolowa 10,00 pirogronian sodu 110,00 Aminokwasy L-arginina x HCl 84,00 L-cysteina x 2HCL 62,58 L-glutamina 584,00 kwa L-glutaminowy 75,00 glicyna 30,00 L-histydyna x HCL x H2O 42,00 L-hydroksyprolina 10,00 L-Izoleucyna 104,80 L-leucyna 104,80 L-lizyna x HCl 146,20 L-metionina 30,00 L-fenyloalanina 66,00 L-seryna 42,00 L-treonina 95,20 L-tryptofan 16,00 L-tyrozyna x 2 Na 103,79 L-valina 93,60 witaminy kwas D-pantotenowy 4,00 Chlorek choliny 4,00

121 Kwas foliowy 4,00 myo-inozytol 7,00 Amid kwasu nikotynowego 4,00 Pyridoxinel x HCl 4,00 Ryboflawina 0,40 Tiamina x HCl 4,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l, wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l. Media w proszku: DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez pirogronianu sodu Bez NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez pirogronianu sodu Bez NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z pirogronianem sodu Bez NaHCO 3 DMEMM z 4,5 g/l glukozy 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez pirogronianu sodu Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez pirogronianu sodu Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z pirogronianem sodu Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3

122 Podsumowanie dla DMEM bez glukozy: L-glutamina stab. Glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa dodatki 01548S1 x x x x x x x x Podsumowanie dla DMEM z zawartością 1,0 g/l glukozy: L-glutamina stab. Glutamina pirogronian sodu czerwnień fenolowa HEPES dodatki x x x x x x x x x x x 02500S1 x x x x x 25 mm x x x 25mM x x Podsumowanie dla DMEM z zawartością 4,5 g/l glukozy: L-glutamina stab. Glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa HEPES dodatki X x X x X x x X x X x x X x x x x x x X x x X x x x x X x x X x X x Patrz wyżej

123 03510 X x Patrz wyżej x x Patrz wyżej x x X x Patrz wyżej x X x Patrz wyżej X x Patrz wyżej x X x Patrz wyżej x x X x Patrz wyżej x X x Patrz wyżej x x Patrz wyżej X x Patrz wyżej DMEM F12 Podłoże to wspiera wzrost prawie wszystkich lini komórkowych. Na przykład jest używany dla komórek trzustki, komórek Sertoliego lub do linii komórkowych, które są stosowane w produkcji białek ludzkich. Łączy w sobie zalety obu pożywek - DMEM (wysokie stężenie aminokwasów i witamin) i Ham s F12 (wyższe stężenie siarczanu cynku, putrescyny i kwasu linolowego). DMEM /F12 (1:1) 500 ml P Bez L-glutaminy Z 1,2 g/l NaHCO 3 DMEM/ F12 (1:1) 500 ml P Bez L-glutaminy Z 15 mm HEPES Bez NaHCO 3 DMEM /F12 (1:1) 500 ml P Z L-glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO3 DMEM/ F12 (1:1) 500 ml P Z L-glutaminą Z 15 mm HEPES Z 1,2 g/l NaHCO 3 DMEM /F12 (1:1) 500 ml P Z stab. glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO3 DMEM/ F12 (1:1) 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Z 1,2 g/l NaHCO 3

124 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500ml): DMEM/F12 (1:1) 500 ml P Bez L-glutaminy Z D-Valiną Z 1,2 g/l NaHCO 3 DMEM/F12 (1:1) 500 ml P bez L-glutaminy Bez glukozy Z 1,2 g/l NaHCO 3 DMEM/F12 (1:1) 500 ml P Z stab. L-glutaminą Z 15 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO 3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml P z stab. glutaminą Bez chlorku wapnia Z 15 mm HEPES Z 1,2 g/l NaHCO 3 DMEM/F12 (1:1) 500 ml P Z -glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 1,2 g/l NaHCO 3 Skład: Skład Sole nieorganiczne Chlorek wapnia, bezwodny Inne składniki azotan (V) żelaza (III) x 9 H2O Siarczan (VI) żelaza (II) x7 H 2 O Zawartość mg/l 116,00 0,05 0,42 chlorek potasu 311,80 siarczan miedzi x 5H2O 0,00 Chlorek magnezu x6 H 2 O 61,00 siarczan magnezu x 7 H2O 100,00 Chlorek sodu 6 999,50 wodorofosforan disodu, bezwodny 71,02 diwodorofosforan sodu x H2O siarczan cynku x 7 H2O D(+)-glukoza bezwodna Hipoksantyna 0,43 62, ,00 2,04

125 Aminokwasy Witaminy Kwas linolowy DL-α kwas liponowy Czerwień fenolowa Putrescyna x2hcl Pirogronian sodu Tymidyna L-alanina L-arginina x HCl L-asparagina x H 2 O Kwas asparaginowy L-cysteina x 2 HCl x H2O L-cysteina x 2 HCl x H 2 O L-glutamina Kwas L-glutaminowy Glicyna L-histydyna x HCl x H 2 O L-Izoleucyna L-leucyna L-lizyna x HCl L-metionina L-fenyloalanina L-prolina L-seryna L-treonina L-tryptofan L-tyrozyna L-valina Kwas D-pantotenowy D (+) biotyna Chlorek choliny 0,04 0,11 8,10 0,08 110,00 0,36 4,46 147,35 7,50 6,66 24,00 17,56 365,00 7,36 18,76 31,48 54,37 58,96 91,37 17,24 35,48 17,27 26,26 53,56 9,02 38,72 52,66 2,12 0,004 8,98

126 Kwas foliowy myo-inozytol Amid kwasu nikotynowego Pyridoxine x HCl Ryboflawina Tiamina x HCl Witamina B12 2,66 12,51 2,02 2,03 0,22 2,17 0,68 Media w proszku: DMEM /F12 (1:1 ) 10 L P bez L-glutaminy 50 L P bez NaHCO 3 DMEM /F12 (1:1 ) 10 L P Z L-glutaminą 50 L P bez NaHCO 3 DMEM /F12 (1:1 ) 10 L P bez L-glutaminy 50 L P bez NaHCO 3 z 15 nm HEPES DMEM /F12 (1:1 ) 10 L P Z L-glutaminą 50 L P bez NaHCO 3 z 15 nm HEPES DMEM /F12 (1:1 ) 10 L P Z L-glutaminą 50 L P bez NaHCO 3 z 25 mm HEPES

127 Podsumowanie: L-glutamina stab. Glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa HEPES dodatki X x x X x x X x X x 15 mm x X x 15 mm x X x 25 nm 3800 X x Patrz wyżej X x Patrz wyżęj x X Patrz wyżej x X x 15 nm Patrz wyżęj x X x 15 mm Patrz wyżej GLASGOW MEM (BHK 21) GMEM zostało opracowane jako modyfikacja BME dla hodowli pierwotnych komórek nerki noworodka chomika. Ta wersja posiada dwukrotnie większe stężenie witamin i aminokwasów. Sole nieorganiczne Skład bez fosforanu tryptozy mg/l z fosforanem tryptozy, mg/l Chlorek wapnia x 2 H2O 264,92 238,43 azotan (V) żelaza (III) x 9 H2O 0,10 0,09 siarczan magnezu bezwodny 139,57 125,64 chlorek potasu 400,00 360,00 Chlorek sodu 6 400, ,00 wodorofosforan disodu - 250,00 diwodorofosforan sodu x H2O 124,00 111,60 Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna 4 500, ,00 Aminokwasy Czerwień fenolowa 15,00 13,50 pepton z kazeiny ,00 pepton z mięsa - 500,00 ekstrakt z drożdzy - 500,00 L-arginina x HCl 42,00 37,80 L-cysteina 24,00 21,60 L-glutamina 292,00 262,80 L-histydyna x HCl x H 2 O 21,00 18,90

128 L-Izoleucyna 52,40 47,16 L-leucyna 52,40 47,16 L-lizyna x HCl 73,10 65,79 L-metionina 15,00 13,50 L-fenyloalanina 33,00 29,70 L-treonina 47,60 42,84 L-tryptofan 8,00 7,20 L-tyrozyna 36,20 32,52 L-valina 46,80 42,12 Witaminy Kwas D-pantotenowy 2,00 1,80 Chlorek choliny 2,00 1,80 Kwas foliowy 2,00 1,80 myo-inozytol 3,60 3,24 Amid kwasu nikotynowego 2,00 1,80 Pyridoxal x HCL 2,00 1,80 Ryboflawina 0,20 0,18 Tiamina x HCl 2,00 1,80 Media płynne: Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml P bez L- glutaminy bez fosforanu tryptozy z 2,75 g/l NaHCO 3 Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml P bez L-glutaminy z fosforanem tryptozy z 2,75 g/l NaHCO 3 Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml P z L-glutaminą bez fosforanu tryptozy z 2,75 g/l NaHCO 3 Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml P z L-glutaminą z fosforanem tryptozy z 2,75 g/l NaHCO 3 Media w proszku: Glasgow MEM (BHK 21) 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez fosforanu tryptozy Bez NaHCO 3 Glasgow MEM (BHK 21) 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Z fosforanem tryptozy Bez NaHCO 3

129 Glasgow MEM (BHK 21) 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez fosforanu tryptozy Bez NaHCO 3 Glasgow MEM (BHK 21) 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z fosforanem tryptozy Bez NaHCO POŻYWKA GRACE A (Grace s Insect Medium) Pożywka Grace została pierwotnie opracowana w celu hodowli komórek owadzich, w tym komórek SF9 i SF21. Ponadto jest odpowiednia do szerokiego spektrum komórek motyli (Lepidoptera). Skład mg/l Sole nieorganiczne Inne składniki Chlorek wapnia x 2 H2O Chlorek potasu Chlorek magnezu x 6 H2O 1324, , ,86 Siarczan magnezu, bezwodny Chlorek sodu 6 400,00 wodorofosforan sodu 876,92 Kwsa jabłkowy 670,00 Kwas bursztynowy 60,00 Fruktoza 400,00 Kwas fumarowy 55,00 D(+)-glukoza bezwodna 700,00 Α-kwas ketglutarowy 425,66 Sacharoza 26680,00 Β-alanina L-alanina L-arginina x HCL L-asparagina x H20 Kwas asparaginowy L-cysteina 200,00 225,00 700,00 350,00 350,00

130 Witaminy 19,18 L-glutamina 600,00 L- kwas glutaminowy 600,00 Glicyna 650,00 L-histydyna base 2500,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 75,00 L-lizyna x HCL 625,00 L-metionina 50,00 L-fenyloalanina 150,00 L-prolina 350,00 L-seryna 550,00 L-treonina 175,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna L - valina Kwas aminobenzoesowy D(+) biotyna Pantotenian wapnia Chlorek choliny Kwas filiowy 50,00 100,00 0,02 0,01 0,02 0,20 0,02 Myo-inozytol 0,02 Kwas nikotynowy 0,02 Piridoxine x HCL 0,02 Ryboflawina Tiamina x HCL 0,02 0,02 Media płynne: Grace's Insect Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO 3 Grace's Insect Medium 500 ml P Z L-glutaminą z 0,35 g/l NaHCO 3

131 Media w proszku: Grace's Insect Medium 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 Grace's Insect Medium 10 L P Z L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO POŻYWKA HAM S F12 W przeszłości pożywka Ham F12 była podstawową opcją do hodowli komórek CHO bez surowicy, a obecnie została zastąpiona przez lepsze pożywki bezsurowicze, takie jak oferowana przez nas C6000, która jest równocześnie bezbiałkowa. Jednak jest to odpowiednia pożywka dla komórek ssaczych, gdy jest uzupełniona przez FBS. Zawiera wysokie stężenie witamin, aminokwasów i pierwiastków śladowych. Zawartość siarczanu cynku jest zwiększona, zawiera również putrescynę i kwas linolowy. Ham s F12 Medium 500 ml P bez L-glutaminy Z 1,176 g/l NaHCO 3 Ham's F12 Medium 500 ml P Z stab.glutaminą Z 1,176 g/l NaHCO 3 Ham s F12 Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z 1,176 g/l NaHCO3 Ham's F12 Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 1,176 g/l NaHCO 3 Ham s F12 Medium 500 ml P Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 25 mm HEPES Z 1,176 g/l NaHCO 3 Ham's F12 Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,5 g/l NaHCO 3

132 Skład: Skład mg/l Sole nieorganiczne Chlorek wapnia bezwodny 33,3 Siarczan miedzi x 5 H20 0,003 Siarczan żelaza x 7 H20 0,834 Chlorek magnezu x 6 H20 122,00 Chlorek potasu 223,60 Chlorek sodu 7099,00 Wodorofosforan di sodu, 142,04 bezwodny Siarczan cynki x 7 H20 0,86 Inne składniki D(+) glukoza bezwodna 1801,60 aminokwasy HEPES 5958,00 Hipoksantyna 5,46 Kwas linolowy 0,084 DL-α-kwas liponowy 0,21 Czerwień fenolowa 1,20 Putrescyna x 2 HCL 0,16 Pirogronian sodu 110,10 tymidyna 0,73 Β-alanina 8,91 L-arginina x HCL 210,70 L-asparagina x H20 15,01 Kwas asparaginowy 13,31 L-cysteina x HCL x H20 35,12 L-glutamina 146,20 L- kwas glutaminowy 14,71 Glicyna 7,51 L-histydyna x HCL x H20 20,96 L-izoleucyna 3,94 L-leucyna 13,12 L-lizyna x HCL 36,54 L-metionina 4,48 L-fenyloalanina 4,96 L-prolina 34,53 L-seryna 10,51 L-treonina 11,91 L-tryptofan 2,04 L-tyrozyna 2Na x 2H20 7,84 L-valina D(+) biotyna 11,71

133 0,007 Pantotenian wapnia 0,24 Chlorek choliny 13,96 Kwas foliowy 1,32 Myo-inozytol 18,02 Amid kwasu amidowego 0,037 Piridoxine x HCL 0,062 Ryboflawina 0,038 Tiamina x HCL 0,34 Witamina B12 1,36 Media w proszku: Ham's F12 Medium 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 Ham's F12 Medium 10 L P Z glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 Ham's F12 Medium 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 Podsumowanie: L-glutamina Stab. Glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa HEPES dodatki X x x X x X 25 mm x x x x x x x Patrz wyżej POŻYWKA HAM S F10 Ham s F10 jest alternatywą Ham s F12 i była używana przede wszystkim do hodowli komórek CHO. Obecnie Ham s F10 może być używana do różnych hodowli komórkowych- z lub bez FBS. Znajduje zastosowanie na przykład w hodowli komórek pierwotnych szczurów i kurcząt, a także ludzkich komórek diploidalnych.

134 Sole nieorganiczne Skład mg/l Chlorek wapnia x 2H20 44,09 Siarczan miedzi x 5 H20 0,003 Siarczan żelaza x 7 H20 0,834 siarczan magnezu bezwodny 74,62 Chlorek potasu 285,00 diwodorofosforan potasu 83,00 chloerk sodu 7400,00 Wodorofosforan di sodu, bezwodny 153,7 siarczan cynku x 7 H20 0,029 Inne składniki D(+) glukoza bezwodna 1100,00 Hipoksantyna 4,08 DL-α-kwas liponowy 0,21 HEPES 5958 Czerwień fenolowa 1,2 Pirogronian sodu 110,00 2-deoksytymidyna 0,73 Β-alanina 8,91 L-arginina x HCL 211,00 L-asparagina x H20 15,00 Kwas asparaginowy 13,3 L-cysteina x HCL x H20 35,12 L-glutamina 146,2 L- kwas glutaminowy 14,7 Glicyna 7,51 L-histydyna x HCL x H20 21,00 L-izoleucyna 2,60 L-leucyna 13,10 L-lizyna x HCL 29,30 L-metionina 4,48 L-fenyloalanina 4,96 L-prolina 11,5 L-seryna 10,5 L-treonina 3,57 L-tryptofan 0,60 L-tyrozyna 1,81

135 L-Valina 3,50 D(+) biotyna 0,024 Pantotenian wapnia 0,715 Chlorek choliny 0,698 Kwas foliowy 1,32 Myo-inozytol 0,541 Amid kwasu amidowego 0,615 Piridoxine x HCL 0,21 Ryboflawina 0,376 Tiamina x HCL 1,01 Witamina B12 1,36 Kiedy w medium znajduje się 5958 mg/l HEPES, stęż, chlorku sodu wynosi 6900 mg/l. Media płynne: Hams F10 Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Z 1,2 g/l NaHCO 3 Hams F10 Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO 3 Hams F10 Medium 500 ml P Z stab. L-glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO 3 Hams F10 Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Z 1,2 g/l NaHCO 3 Z 25 mm HEPES Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): Hams F10 Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 1,2 g/l NaHCO 3 Hams F10 Medium 500 ml P Z stab. L-glutaminą Bez glukozy Z 1,2 g/l NaHCO 3 Media w proszku: Hams F10 Medium 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 Hams F10 Medium 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3

136 Podsumowanie: l-glutamina stab.glutamina czerwień fenolowa HEPES dodatki X x X x X x X 25 mm x X ISCOVE S MODIFIES DULBECO S MEDIA (IMDM) IMDM jest modyfikacją pożywki DMEM, o wyższej zawartości witamin, selenu i aminokwasów. Ponieważ jest suplementowana albuminą, transferyną i lipidami sojowymi, doskonale nadaje się do hodowli limfocytów, komórek szpiku i hybrydomy. Uwaga: dla komórek hybrydoma są dostępne bardziej wydajne pożywki bezbiałkowe, na przykład nasze PANSERIN H4000. Media płynne: IMDM bez L-glutaminy 500 ml P Z 3,024 g/l NaHCO 3 IMDM z L-glutaminą 500 ml P Z 3,024 g/l NaHCO 3 IMDM bez L-glutaminy 500 ml P Z 25 mm HEPES Z 3,024 g/l NaHCO 3 IMDM z L-glutaminą 500 ml P Z 25 mm HEPES Z 3,024 g/l NaHCO 3 IMDM z stab. L- glutaminą 500 ml P Z 25 mm HEPES Z 3,024 g/l NaHCO 3 IMDM z stab.glutaminą 500 ml P Z 25 mm HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 3,024 g/l NaHCO 3

137 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): IMDM bez L- glutaminy 500 ml P Z 1,0 g/l glukozy Z 3,024 g/l NaHCO 3 IMDM z stab.glutaminą 500 ml P Z 3,7 g/l NaHCO 3 IMDM z stab.glutaminą 500 ml Z 25 mm HEPES Bez czerwieni fenolowej 315 mosm Z 3,024 g/l NaHCO 3 P S1 IMDM z stab.glutaminą 500 ml Z 25 mm HEPES 320 mosm Z 3,024 g/l NaHCO 3 P S2 IMDM z L-glutaminą 500 ml P z 1,5 g/l NaHCO 3 Skład: Sole nieorganiczne Skład mg/l Chlorek wapnia x 2H20 218,56 chlorek potasu 330,00 azotan potasu 0,076 siarczan magnezu bezwodny siarczan magnezu bezwodny diwodorofosforan sodu x H20 139, ,00 125,00 selenian sodu 0,011 Inne składniki D(+) glukoza bezwodna 4500,00 Aminokwasy HEPES 5958,00 Czerwień fenolowa 110,00 Pirogronian sodu 15,00 Β-alanina 25,00 L-arginina x HCL 84,00

138 L-asparagina x H20 28,40 Kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina 70,00 L-glutamina 584,00 L- kwas glutaminowy 75,00 Glicyna 30,00 L-histydyna x HCL x H20 42,00 L-izoleucyna 105,00 L-leucyna 105,00 L-lizyna x HCL 146,00 L-metionina 30,00 L-fenyloalanina 66,00 L-prolina 40,00 L-seryna 42,00 L-treonina 95,00 L-tryptofan 16,00 L-tyrozyna 74,86 L-Valina 94,00 D(+) biotyna 0,013 Pantotenian wapnia 4,00 Chlorek choliny 4,00 Kwas foliowy 4,00 Myo-inozytol 7,20 Amid kwasu amidowego 4,00 Piridoxal x HCL 4,00 Ryboflawina 0,40 Tiamina x HCL 4,00 Witamina B12 0,013 Media w proszku: IMDM bez L-glutaminy 10 L P Bez NaHCO 3 50 L P IMDM z L-glutaminą 10 L P Bez NaHCO 3 50 L P IMDM bez L-glutaminy 10 L P Bez NaHCO 3 50 L P Z 25 mm HEPES

139 Podsumowanie: L-glutamina stab. Glutamina czerwień fenolowa HEPES dodatki X x X x X Patrz wyżej X 25 mm x X 25 mm x X 25 mm x 25 mm Patrz wyżej X Patrz wyżej 20451S1 x 25 mm Patrz wyżej 20150S2 x X 25 mm Patrz wyżej x X Patrz wyżej POŻYWSKA IPL-41 do komórek owadzich IPL-41 jest wykorzystania do hodowli komórek motyli i namnażania wirusów w tych liniach komórkowych. Pożywka ta jest na przykład używana do długoterminowych hodowli komórek spodotera zakażonych bakulowirusem. Skład: Sole nieorganiczne Skład heptamolibdenian amonu x 4 H20 mg/l 0,04 chlorek wapnia x 2 H20 662,31 chlorek kobaltu x 6 H20 0,05 chlorek miedzi x 2H20 0,20 siarczan żelaza (II) x 7 H20 siarczan magnezu bezwodny 0, ,4 chlorek magnezu x 4 H20 0,02 chlorek potasu 1200,00 chlorek sodu 2850,00 diwodorofosforan sodu x H ,00 chlorek cynku 0,04 Inne składniki kwas fumarowy 4,40

140 D (+) glukoza bezwodna 2500,00 sodowa sól kwasu α- ketoglutarowego 34,05 kwas jabłkowy 53,60 D-maltoza x H ,58 kwas bursztynowy 4,80 sacharoza 1650,00 Β-alanina 300,00 L-arginina x HCL 800,00 kwas asparaginowy 1300,00 L-asparagina x H2O 1477,14 L-cysteina 100,00 L-glutamina 1000,00 L- kwas glutaminowy 1500,00 Glicyna 200,00 L-histydyna base 200,00 L-hydroksyprolina 800,00 L-izoleucyna 750,00 L-leucyna 250,00 L-lizyna x HCL 700,00 L-metionina 1000,00 L-fenyloalanina 1000,00 L-prolina 500,00 L-seryna 200,00 L-treonina 200,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna 250,02 L-valina 500,00 kwas aminobenzoesowy 0,32 D (+) biotyna 0,16 D-pantotenian wapnia 0,008 chlorek choliny 20,00 kwasfoliowy 0,08 myo-inozytol 0,40 kwas nikotynowy 0,16 amid kwasu nikotynowego 0,16 pyridoxine x HCL 0,40 ryboflawina 0,08 Tiamina x HCL 0,08

141 Witamina B12 0,24 Media płynne: IPL-41 Insect Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO 3 IPL-41 Insect Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO 3 Media w proszku: IPL-41 Insect Medium 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO JOKLIK- MEM Modyfikacja MEM do hodowli zawiesinowych. Ze względu na brak chlorku wapnia w tym preparacie adhezja komórek jest zmniejszona. Skład: Sole nieorganiczne Skład mg/l chlorek magnezu x 6 H20 200,00 chlorek potasu 400,00 chlorek sodu 6500,00 diwodorofosforan sodu x H ,00 inne składniki D (+) glukoza bezwodna 2000,00 Aminokwasy czerwień fenolowa 10,00 L-arginina x HCL 126,00 L-cysteina 24,00 L-glutamina 294,00 L-histydyna base 31,00 L-izoleucyna 52,00 L-leucyna 52,00

142 L-lizyna x H2O 65,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 32,60 L-valina 46,00 D-pantotenian wapnia 1,00 chlorek choliny 1,00 kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 amid kwasu nikotynowego 1,00 pyridoxal x HCL 1,00 ryboflawina 0,10 Tiamina x HCL 1,00 Media płynne: Joklik-MEM 500 ml P Zmodyfikowane dla hodowli w spinnerze z EBSS (zmodyfikowany) Bez L-glutaminy Bez antybiotyku Bez chlorku wapnia Joklik-MEM 500 ml P HEPES Medium Z L-glutaminą Z 3,6 g/l NaHCO 3 Z 2,0 g/l NaHCO 3 Media w proszku: Joklik-MEM 10 L P P Zmodyfikowane dla hodowli w spinnerze 50 L P P Z EBSS (zmodyfikowany) Bez L-glutaminy Bez antybiotyku Bez chlorku wapnia Bez NaHCO3

143 L-15 (Leibovitz s L-15 Medium) L-15 nie zawiera wodorowęglanu sodu gdyż jest buforowane przez wysokie stężenie aminokwasów. Pożywka L-15 wspomaga wzrost komórek ustabilizowanych takich jak Hep-2, a także ludzkich komórek nerwowych i pierwotnych hodowli tkankowych. Z dodatkiem 10% bulionu (tryptose phosphate broth) nadaje się idealnie do hodowli owadzich linii komórkowych. Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l Chlorek wapnia x 2H 2O 185, 44 chlorek magnezu x 6 H2O 200,00 siarczan magnzeu suchy 139,52 Chlorek potasu 400,00 diwodorfosforan potasu 60,00 chlorek sodu 8000,00 wodorofosforan disodu 190,00 Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna 900,00 HEPES 5 958,00 Czerwień fenolowa 10,00 pirogronian sodu 550,00 Aminokwasy L-alanina 225,00 L-arginina base 500,00 L-asparagina x H2O 250,00 L-cysteina 120,00 L-glutamina 300,00 glicyna 200,00 L-histydyna base 250,00 L-izoleucyna 250,00 L-leucyna 125,00 L-lizyna x HCL 93,75 L-metionina 75,00 L-fenyloalanina 125,00 L-seryna 200,00 L-treonina 300,00 L-tryptofan 20,00 L-tyrozyna 300,00 L-valina 100,00 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,00 Kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00

144 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoxolx HCl 1,00 5' fosforan ryboflawiny 0,1075 thiamine monophosphate chloride 1,00 Media płynne: Leibovitz L-15 Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Bez NaHCO 3 Leibovitz L-15 Medium 500 ml P Z L-glutaminą Bez NaHCO 3 Leibovitz L-15 Medium 500 ml P Z stab. L-glutaminą Bez NaHCO 3 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): Leibovitz L-15 Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,0 g/l NaHCO 3 Leibovitz L-15 Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO 3 Media w proszku: Leibovitz L-15 Medium 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 Leibovitz L-15 Medium 10 L P Z L-glutamina 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3

145 POŻYWKA Mc COY S 5A Pożywka Mc Coy s jest pełną pożywką zawierającą wszystkie aminokwasy i witaminy. Jest ona używana do hodowli pierwotnych, takich jak komórki szpiku, dziąseł, nadnerczy, śledziony, płuc, zarodki szczurów i inne typy komórek. Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l Chlorek wapnia x 2H 2O 132,46 siarczan magnzeu suchy 139,52 chlorek potasu 400,00 chlorek sodu 6460 diwodorofosforan sodu x H2O 580,00 Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna 3 000,00 glutation (red.) 0,50 HEPES 5 958,00 Bacto-Pepton 600,00 Czerwień fenolowa 10,00 Aminokwasy L-alanina 13,36 L-arginina x HCL 42,10 L-asparagina x H2O 45,00 kwas asparaginowy 19,97 L-cysteina 24,24 L-glutamina 219,20 L-kwas glutaminowy 22,10 Glicyna 7,50 L-histydyna x HCL x H2O 20,76 L-hydroksyprolina 19,70 L-izoleucyna 39,36 L-leucyna 39,36 L-lizyna x HCL 36,50 L-metionina 14,90 L-fenyloalanina 16,50 L-prolina 17,30 L-seryna 26,30 L-treonina 17,90 L-tryptofan 3,10 L-tyrozyna 18,10 L-valina 17,60 witaminy kwas aminobenzoesowy 1,0 kwas askorbinowy 0,50 D (+) biotyna 0,20 D-Pantotenian wapnia 0,20

146 chlorek choliny 5,00 kwas foliowy 10,00 myo-inozytol 36,00 amid kwasu nikotynowego 0,50 kwas nikotynowy 0,50 pyridoxal x HCL 0,50 Pyridoxol x HCL 0,50 ryboflawina 0,20 tiamina x HCL 0,20 Witamina B12 2,00 Kiedy w medium znajduje się 5958 mg/ l HEPES, wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 5960 mg/l. Media płynne: Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) 500 ml P Z stab.l-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 Z 25 mm HEPES Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): Mc Coy's 5A Medium 500 ml P Bez glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO 3 Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) 500 ml P Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO 3

147 Media w proszku: Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 Podsumowanie: l-glutamina stab.glutamina czerwień fenolowa HEPES dodatki x x x x x x 25 mm Patrz wyżej x Patrz wyżej POŻYWKA MCDB 131 MCDB 131 jest pożywką o zmniejszonym dodatku surowicy do hodowli ludzkich komórek śródbłonka naczyń włosowatych. Musi być uzupełniona dializowaną surowicą oraz EGF i hydrokortyzonem. MCDB 153 jest pożywką o zdefiniowanym składzie optymalnym dla klonalnego wzrostu keranocytów ludzkich. Musi być uzupełniona o EGF, insulinę, hydrokortyzon, etanoloaminy i phosphoethanolaminy lub o surowicę. Do hodowli keratynocytów oferujemy naszą pożywkę Panserin 801 jako wolną od surowicy alternatywę. Płynne media: MCDB ml P Bez L-glutaminy Z 1,8 g/l NaHCO 3 MCDB ml P Z L-glutaminą Z 1,176 g/l NaHCO 3 MCDB ml P Bez L-glutaminy Z 1,176 g/l NaHCO 3 Z 25 mm HEPES

148 Specjalne media (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): MCDB ml P Bez L-glutaminy Z 1,176 g/l NaHCO 3 MCDB ml P Z L-glutaminą z 2,5 g/l NaHCO 3 MCDB ml P Bez L-glutaminy Bez wapnia Z 1,176 g/l NaHCO 3 Skład: MCDB MEDIA MCDB 131 MCDB 151 MCDB 153 MCDB 170 składniki: mg/l mg/l mg/l mg/l sole nieorganiczne metawanadan sodu 0,0006 0, , chlorek wapnia x 2 H2O 235,05 4,411 4, siarczek miedzi x 5 H2O 0,0012 0,0025 0, , siarczan żelaza 0,283 0,417 1,39 chlorek magnezu x 6 H2O siarczan magnezu suchy 1565,2 0, ,57 siarczan manganu x H2O 0,0002 0, , molibdenian amonu x 4 H2O 0,0037 0, , chlorek niklu x 6 H2O 0,0007 0, , chlorek potasu ,83 111,83 186,25 fosforan potasu bezwodny 68,05 octan sodowy x 3 H2O 500,21 500,21 chlorek sodu metakrzemian sodu x 9 H2O 2,09 0,142 0,1421 wodorofosforan disodu , ,088 selenian sodowy bezwodny 0,0039 0,0038 0,0052 chlorek cyny x H2O 0, , siarczan cynku x 7 H2O 0,0003 0,863 0,144 0,14375 inne składniki adenina 0,135 30,88 24,32 0,1351 D-glukoza ,6 HEPES DL-α kwas liponowy 0,0021 0,206 0,206 0,002063

149 czerwień fenolowa -Na 10 1,242 1,242 1,242 putrescyna x 2 HCL 0,002 0,1611 0,161 0, pirogroninan sodu tymidyna 0,024 0,727 0,727 0,07266 aminokwasy L-alanina 2,7 8,91 8,91 8,9 L-arginina xhcl 63,2 210,7 210,7 52,26 L-asparagina x H2O ,14 kwas asparaginowy 13,3 3,99 3,99 13,31 L-cysteina x HCL x H2O 35 42,04 42,04 8,55 Kwas glutaminiwy 4 14,71 14,71 14,71 L-glutamina ,2 877,2 292 glicyna 2,3 7,51 7,51 7,5 L-histydyna x HCL x H2O 42 16,77 16,77 15,52 L-izoleucyna 66 1,968 1,968 13,12 L-leucyna ,6 65,6 39,36 L-lizyna x HCL ,27 18,27 29,24 L-metionina 15 4,476 4,48 4,48 L-fenyloalanina 33 4,956 4,96 4,96 L-prolina 11,5 34,53 34,53 5,76 L-seryna 32 63,06 63,06 31,53 L-treonina 12 11,91 11,91 35,73 L-tryptofan 4,1 3,06 3,06 6,126 L-tyrozyna 18,1 22,52 3,41 9,06 L-valina 117,1 35,13 35,1 witaminy D-biotyna 0,0073 0,0146 0,0146 0, chlorek choliny 1,4 13,96 13,96 13,96 kwas foliowy 0,6 0,79 0,79 kwas folinowy x Ca 0, myo-inozytol 7,2 18,02 18,02 18,02 amid kwasu nikotynowego 6,1 0,0366 0, ,105 D-pantotenian wapnia 12 0,238 0,258 Pyridoxine x HCL 2,1 0,0617 0, ,02056 ryboflawina 0,0038 0,0376 0,0376 0,11292 Tiamina x HCL 3,4 0,337 0,337 0,3373 witamina B12 0,0036 0,407 0,407 0, POŻYWKA 199 z SOLAMI EARLE A (M199) M199 zostało pierwotnie opracowane do oznaczania zapotrzebowania fibroblastów zarodkowych kurczęcia na składnik odżywcze. Jednak pożywka ta działa bardzo dobrze w przypadku wielu

150 innych gatunków zwierząt. Na przykład jest używana do produkcji szczepionek w wirusologii. Do hodowli długoterminowych należy dodać surowicę. Media płynne: M199 z EBSS 500 ml P Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO 3 M199 z EBSS 500 ml P Z satb. glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 M199 z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 M199 z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO 3 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): M199 z EBSS 500 ml P Bez L-glutaminy Z 25 mm HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO 3 M199 z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO 3 M199 z EBSS 500 ml P Bez L-glutaminy Z 25 mm HEPES Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO 3 Medium 199 z solami Earle a Skład: Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l chlorek wapnia x 2 H2O 264,92 azotan żelaza III 0,72 Siarczan magnzuu suchy 139,52

151 Inne składniki Chlorek potasu 400,00 Octan sodu x 3 H2O 82,95 chlorek sodu 6800,00 diwodorofosforan sodu x H2O 140,00 siarczan adeniny 10,00 AMP 0,20 ATP 1,00 cholesterol 0,20 2-deoksyryboza 0,50 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 glutation (red.) 0,05 guanina x HCL 0,30 HEPES Hipoksantyna 0,30 czerwień fenolowa 10,00 D-ryboza 0,5 tymina 0,30 Tween 80 4,90 uracyl 0,30 Ksantyna 0,30 Aminokwasy L-alanina 25,00 L-arginina x HCL 70,00 kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina x HCL x H2O 0,10 L-cysteina 20,00 L-glutamina 100,00 L-kwas glutaminowy 67,00 Glicyna 50,00 L-histydyna x HCL x H2O 21,88 L-hydroksyprolina 10,00 L-izoleucyna 20,00 L-leucyna 60,00 L-lizyna x HCL 70,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 30,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 25,00 witaminy kwas aminobenzoesowy 0,05 kwas askorbinowy 0,05

152 D (+) biotyna 0,01 Kalcyferol 0,10 D-pantotenian wapnia 0,010 chlorek choliny 0,50 kwas foliowy 0,01 myo-inozytol 0,05 menadion 0,01 kwas nikotynowy 0,025 amid kwsu amidowego 0,025 pyridoxal x HCL 0,025 Pyridoxol x HCL 0,025 ryboflawina 0,01 DL-α- fosforan tokoferolu- Na2 0,01 tiamina x HCL 0,01 witamina A octan 0,14 Media w proszku: M199 z EBSS 10 L P z L- glutaminą 50 L P bez NaHCO 3 M199 z EBSS 10 L P z L-glutaminą 50 L P z 25 mm HEPES bez NaHCO 3 Podsumowanie: L-glutamina stab. Glutamina czerwień fenolowa HEPES dodatki x x x x x x x 25 mm mm Patrz wyżej mm Patrz wyżej x 25 mm Patrz wyżej

153 Medium 199 z solami Hank a Skład: Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l chlorek wapnia x 2 H2O 185,44 azotan żelaza III x 9 H2O 0,72 Siarczan magnezu suchy 139,68 chlorek potasu 400,00 octan sodu x 3 H2O 83,00 chlorek sodu 8000 diwodorofosforan disodu 47,68 siarczan adeniny 10,00 AMP 0,20 ATP 1,00 cholesterol 0,20 2-deoksyryboza 0,50 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 glutation (red.) 0,05 guanina x HCL 0,30 HEPES Hipoksantyna 0,30 czerwień fenolowa 10,00 D-ryboza 0,50 tymina 0,30 Tween 80 4,90 uracyl 0,30 Ksantyna 0,30 Aminokwasy L-alanina 25,00 L-arginina x HCL 70,00 kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina x HCL x H2O 0,10 L-cysteina 20,00 L-glutamina 100,00 L-kwas glutaminowy 67,00 Glicyna 50,00 L-histydyna x HCL x H2O 21,88 L-hydroksyprolina 10,00 L-izoleucyna 20,00 L-leucyna 60,00 L-lizyna x HCL 70,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00

154 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 30,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 25,00 witaminy kwas aminobenzoesowy 0,05 kwas askorbinowy 0,05 D (+) biotyna 0,01 Kalcyferol 0,10 D-pantotenian wapnia 0,01 chlorek choliny 0,50 kwas foliowy 0,01 myo-inozytol 0,05 menadion 0,01 kwas nikotynowy 0,025 amid kwsu amidowego 0,025 pyridoxal x HCL 0,025 Pyridoxol x HCL 0,025 ryboflawina 0,01 DL-α- fosforan tokoferolu- Na2 0,01 tiamina x HCL 0,01 witamina A octan 0,14 Media płynne: M199 z HBSS 500 ml P Bez glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO 3 M199 z HBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO 3 M199 z HBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Z 0,35 g/l NaHCO 3 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): M199 z HBSS (10X) 500 ml P Bez L-glutaminy Bez NaHCO 3

155 Media w proszku: M199 z HBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 M199 z HBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO MEM Z SOLAMI EARLE A MEM jest unowocześnioną pożywką BME i podstawą wielu modyfikacji. Ponieważ BME nie spełniała wszystkich wymagań niektórych komórek ssaczych i komórek HeLa musiała zostać opracowana nowa wersja pożywki. Dzisiaj MEM jest jedną z najczęściej używanych pożywek syntetycznych i pokazuje swoją wszechstronność przy uzupełnieniu aminokwasami i solami Hank a lub Earle'a. Nawet niewielka ilość FBS ma pozytywny wpływ na wzrost komórek. Media płynne bez glutaminy: MEM Eagle z EBSS 500 ml P Bez L-glutaminy Bez NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Bez glutaminy Z 25 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Bez glutaminy Z NEAA Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Bez L- glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO 3 Media specjalne bez glutaminy (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): MEM Eagle z EBSS 500 ml P Bez L- glutaminy Z D-valiną Z 2,2 g/l NaHCO 3 OPTIPAN 500 ml P MEM Eagle z EBSS Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO 3

156 Media w proszku bez glutaminy: MEM Eagle z EBSS 10 L P Bez L- glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 Media płynne z L-glutaminą: MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 20 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z 1,5 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Z NEAA Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 1,5 g/l NaHCO 3 OPTIPAN 500 ml P MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 Media specjalne z L-glutaminą (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z L-glutaminą Bez glukozy Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS (2x) 500 ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z 2 mm glutaminy Z 1 mm pirogronianu Z NEAA Z 1,5 g/l NaHCO 3

157 Media w proszku z L-glutaminą: MEM Eagle z EBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z NEAA Bez NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z NEAA Z 25 mm HEPES Z NaHCO 3 MEM Eagle z EBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 MEM z solami Earla Skład: Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l chlorek wapnia x 2 H2O 264,92 Siarczan magnezu suchy 139,52 chlorek potasu 400,00 chlorek sodu 6800,00 diwodorofosforan dosu x H2O 140,00 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 HEPES 5 958,00 czerwień fenolowa 10,00 Aminokwasy L-alanina 8,90 L-arginina x HCL 126,00 L-asparagina x H2O 13,20 L-kwas asparaginowy 13,30 L-cysteina 24,00 L-glutamina 292,00 L-kwas glutaminowy 14,70 Glicyna 7,50 L-histydyna x HCL x H2O 42,00 L-izoleucyna 52,00

158 L-leucyna 52,00 L-lizyna x HCL 72,50 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-prolina 11,50 L-seryna 10,50 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 36,00 L-valina 46,00 Witaminy D-pantotenian wapnia 1,00 chlorek choliny 1,00 kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 amid kwsu amidowego 1,00 pyridoxal x HCL 1,00 ryboflawina 0,10 tiamina x HCL 1,00 Kiedy w medium znajduje się 5958 mg/l HEPES, wtedy stężenenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l Płynne media z stab. Glutaminą: MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z satb. L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 MEM Eagle z EBSS 500 ml P Z stab. Glutaminą Z 25 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 Podsumowanie dla Pożywki MEM EBSS bez glutaminy: L-glutamina stab. Glutamina NEAA czerwień fenolowa HEPES dodatki x Patrz wyżej x x 25 mm X x x Patrz wyżej x Patrz wyżej

159 Podsumowanie dla MEM EBSS z L-glutaminą: L-glutamina stab. Glutamina NEAA czerwień fenolowa HEPES special x x x x Patrz wyżej x x Patrz wyżej x x 20 mm x x 25 mm Patrz wyżej x X x x x x x Patrz wyżej x x x Patrz wyżej Podsumowanie dla MEM EBSS z stab.glutaminą: L-glutamina stab. Glutamina NEAA czerwień fenolowa HEPES dodatki x x x x 25 mm MEM z solami Hank a Skład: Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l chlorek wapnia x 2 H2O 184,44 chlorek potasu 400,00 diwodorofosforan potasu bezwodny 60,00 siarczan magnezu suchy 139,52 chlorek sodu 8000,00 wodorofosforan disodu 47,88 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 HEPES 5 958,00 czerwień fenolowa 10,00 Aminokwasy L-alanina 8,90 L-arginina x HCL 126,00 L-asparagina x H2O 13,20

160 L-kwas asparaginowy 13,30 L-cysteina 24,00 L-glutamina 292,00 L-kwas glutaminowy 14,70 Glicyna 7,50 L-histydyna x HCL x H2O 42,00 L-izoleucyna 52,00 L-leucyna 52,00 L-lizyna x HCL 72,50 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-prolina 11,50 L-seryna 10,50 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 36,00 L-valina 46,00 Witaminy D-pantotenian wapnia 1,00 chlorek choliny 1,00 kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 amid kwsu amidowego 1,00 pyridoxal x HCL 1,00 ryboflawina 0,10 tiamina x HCL 1,00 Kiedy w medium znajduje się 5958,00 mg/l, wtedy stężenie chlorku ssodu wynosi 7500 mg/l Media płynne z L-glutaminą MEM Eagle z HBSS 500 ml P Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z HBSS 500 ml P Z L-glutaminą z 0,35 g/l NaHCO 3 MEM Eagle z HBSS 500 ml P Z stab. glutaminą Bez NaHCO 3 MEM Eagle z HBSS 500 ml P Z glutaminą Z 0,60 g/l NaHCO 3

161 Media w proszku: MEM Eagle z HBSS 10 L P Bez L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 MEM Eagle z HBSS 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO RPMI 1640 Pożywka ta została opracowana do hodowli prawidłowych i nowotworowych leukocytów, a także komórek szpiku i hybrydomy. Obecnie istnieją lepsze, wolne od surowicy pożywki do hodowli komórek hybrydomy, takie jak nasze Panserin H4000. Dodanie do RPMI różnych ilości FBS wystarczy aby otrzymać bardzo dobrą pożywkę dla wielu różnych linii komórkowych. Media płynne bez glutaminy: RPMI ml P Bez L-glutaminy Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Bez 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Z 25 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Z 25 mm HEPES Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Z 20 mm HEPES Z 0,85 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Bez NaHCO 3

162 Media specjalne bez glutaminy (minimalne zmówienie: 20 x 500 ml): RPMI ml P Bez L-glutaminy Z 20 mm HEPES Bez NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Bez glukozy Z 2,2 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Bez wapnia Z 2,2 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Bez L-glutaminy Z 15 mm HEPES Z 2,0 g/l NaHCO 3 Bez fosforanów RPMI L P RPMI ml P Bez L-glutaminy Bez L-tryptofanu Z 2,0 g/l NaHCO 3 Bez L-glutaminy 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 Media w proszku: RPMI L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 RPMI L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO 3

163 RPMI 1640 Media płynne z L-glutaminą: RPMI ml P Z L-glutaminą Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Z 2,2 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z L-glutaminą Z 20 mm HEPES Z 0,85 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z 2 mm L-glutaminą Z 1 mm pirogronianem sodu z 4,5 g/l glukozy Z 1,5 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z L-glutaminą Z 25 mm HEPES Z 2,0 g/l NaHCO 3 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): RPMI ml P Z L-glutaminą Z 110 mg/l pirogronianu Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z L-glutaminą Bez L-argininy Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z L-glutaminą Bez glukozy Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z L-glutaminą Bez L-trypofanu Z 2,0 g/l NaHCO 3

164 Media w proszku: RPMI L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 RPMI L P Z L-glutaminą 50 L P Z 25 mm HEPES Bez NaHCO 3 RPMI L P Z L-glutaminą 50 L P Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO 3 Skład: Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l Azotan wapnia x 4 H 2O 100,00 Chlorek potasu 400,00 Siarczan magnezu, bezwodny 48,84 Chlorek sodu 6000,00 Wodorofosforan disodu (Na 2HPO 4) 800,49 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 glutation (red.) 1,00 HEPES 5 958,00 czerwień fenolowa 10,00 Aminokwasy L-arginina x HCl 241,86 L-aspargina x H 2O 50,00 L-aspartamowy kwas 20,00 L-cystyna x 2HCl 65,19 L-glutaminowy Kwas 20,00 Glicyna 10,00 L-histydyna x HCl x H 2O 20,27 L-hydroksyprolina 20,00 L-Izoleucyna 50,00 L-leucyna 50,00 L-lizyna x HCl 40,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 15,00 L-prolina 20,00 L-seryna 30,00

165 L-treonina 20,00 L-tryptofan 5,00 L-tyrozyna x Na 28,83 L-valina 20,00 Witaminy Kwas p-aminobenzoesowy 1,00 D-(+)-Biotyna 0,20 Kwas D-pantotenowy (Vit. B5) 0,25 Chlorek choliny 3,00 Kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 35,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoxol x HCl 1,00 Ryboflawina 0,20 Thiaminex HCl 1,00 Vitamina B12 0,005 Media płynne z stab. Glutaminą: RPMI ml P Z stab. Glutaminą Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z stab. Glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3 Z 25 mm HEPES RPMI ml P Z stab. Glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,0 g/l NaHCO 3 Media specjalne z stab. glutaminą: RPMI ml P Z stab. Glutaminą Bez czerwieni fenolowej Bez glukozy Z 2,0 g/l NaHCO 3 RPMI ml P Z stab. Glutaminą Bez glukozy Z 2,0 g/l NaHCO 3

166 Podsumowanie dla RPMI bez glutaminy: L-glutamina stab.glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa HEPES dodatki x x 25 mm x Patrz wyżej x 25 mm Patrz wyżej x 25 mm Patrz wyżej x 20 mm Patrz wyżej x 20 mm Patrz wyżej x Patrz wyżej x Patrz wyżej x Patrz wyżej x 15 mm Patrz wyżej Podsumowanie dla RPMI z L-glutaminą: L-glutamina stab.glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa HEPES dodatki x x x x x x 10 mm Patrz wyżej x x 25 mm Patrz wyżej x x 20 mm Patrz wyżej x x x Patrz wyżej x x Patrz wyżej x x Patrz wyżej x x Patrz wyżej Podsumowanie dla RPMI z stab. Glutaminą: L-glutamina stab.glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa HEPES dodatki x x x x x 25 mm Patrz wyżej x x Patrz wyżej x Patrz wyżej

167 POŻYWKA SCHNEIDER A (Schneider s Drosophila Medium) Pierwotnie opracowana dla komórek Drosophila, nadaje się również do hodowli innych linii komórkowych muchówek. Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l chlorek potasu 1600,00 diwodorofosforan potasu 450,00 chlorek wapnia 600,00 Siarczan magnezu, bezwodny 2585,71 chlorek sodu 2100,00 wodorofosforan disodu 700,00 Inne składniki DL-kwas jabłkowy 600,00 kwas bursztynowy 60,00 kwas fumarowy 60,00 D (+) glukoza bezwodna 2 000,00 ekstrakt drożdżowy 2000,00 sól sodowa kwasu α ketoglutarowego 402,66 D (+) trehaloza x H2O 2210,00 Aminokwasy L-alanina 500,00 L-arginina base 600,00 L-kwas asparaginowy 400,00 L-cysteina free base 60,00 L-cysteina 16,60 L-glutamina 1800,00 L-kwas glutaminowy 800,00 Glicyna 250,00 L-histydyna base 400,00 L-izoleucyna 150,00 L-leucyna 150,00 L-lizyna x HCL 1650,00 L-metinina 150,00 L-prolina 1700,00 L-seryna 250,00 L-treonina 350,00 L-tryptofan 1000,00

168 L-tyrozyna 500,00 L-valina 300,00 Media płynne: Schneider s Drosophila Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Z 0,40 g/l NaHCO 3 Schneider s Drosophila Medium 500 ml P Z L- Glutaminą Z 0,40 g/l NaHCO 3 Media w proszku: Schneider s Drosophila Medium 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 Chlorek wapnia odseparowany Schneider s Drosophila Medium 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 Chlorek wapnia oddzielnie POŻYWKA TC 100 DO KOMÓREK OWADZICH TC 100 jest całkowicie wolną od surowicy pożywką (Oxford formulation) do hodowli komórek owadzich, zwłaszcza dla komórek SF9 i do hodowli wirusów. Jeśli chcieliby Państwo pracować z nowoczesnyą pożywką bezbiałkową do komórek owadzich SPODOPAN jest idealnym wyborem. Skład: Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l Chlorek wapnia x 2 H2O 1298,13 Chlorek potasu 2900,00

169 Chlorek magnezu x 6 H2O 2282,59 Inne składniki Siarczan magnezu suchy 1957,14 Diwodorofosforan sodu x H2O 970,00 D(+) glukoza bezwodna 1000,00 Bacto-tryptoza 2600,00 Aminokwasy L-alanina 225,00 L-arginina base 550,00 L-aspartamowy kwas 350,00 L-asaragina x H2O 391,97 L-cysteina 20,00 L-glutamina 600,00 L-kwas glutaminowy 600,00 Glicyna 650,00 L-histydyna x HCL x H2O 3400,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 75,00 L-lizyna x HCL 630,00 L-metionina 50,00 L-fenyloalanina 150,00 L-prolina 350,00 L-seryna 550,00 L-treonina 180,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna 55,00 L-valina 100,00 Witaminy Kwas p-aminobenzoesowy 0,02 D-(+)-Biotyna 0,01 Kwas D-pantotenowy (Vit. B5) 0,11 Kwas foliowy 0,02 myo-inozytol 0,02 Kwas nikotynowy 0,02 Pyridoxol x HCl 0,02 Ryboflawina 0,02 Thiamina x HCl 0,02 Vitamina B12 0,01

170 Media płynne: TC 100 INSECT MEDIUM 500 ml P Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO 3 TC 100 INSECT MEDIUM 500 ml P Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO 3 Media w proszku: TC 100 INSECT MEDIUM 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Bez NaHCO 3 TC 100 INSECT MEDIUM 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO TNM-FH TNM-FH jest odmianą pożywka Grace. Ta zmiana, jeśli jest prawidłowo suplementowana, jest odpowiednia do hodowli wielu komórek motyli. Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l Chlorek wapnia x 2 H2O 1324,62 Chlorek potasu 2240,00 Chlorek magnezu x 6 H2O 2278,86 Siarczan magnezu suchy 1765,23 wodorofosforandi sodu 876,92 Inne składniki DL-kwas jabłkowy 670,00 Kwas bursztynowy 60,00 D-fruktoza 400,00 Kwas fumarowy 55,00 D(+) glukoza bezwodna 700,00 Ekstrakt z drożdży 3333,33 Sól sodowa kwasu α- 425,66 ketoglutarowego Hydrolizat laktalbuminy 3333,33

171 sacharoza 26680,00 Aminokwasy β-alanina 200,00 L-alanina 225,00 L-arginex x HCL 700,00 L-asaraginex x HCL 350,00 L-cysteina 19,18 L-glutamina 600,00 L-kwas glutaminowy 600,00 Glicyna 650,00 L-histydyna base 2500,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 75,00 L-lizyna x HCL 625,00 L-metionina 50,00 L-fenyloalanina 150,00 L-prolina 350,00 L-seryna 550,00 L-treonina 175,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna 50,00 L-valina 100,00 Witaminy Kwas p-aminobenzoesowy 0,02 D-(+)-Biotyna 0,01 Kwas D-pantotenowy (Vit. B5) 0,02 Kwas foliowy 0,20 myo-inozytol 0,02 Kwas nikotynowy 0,02 Pyridoxol x HCl 0,02 Ryboflawina 0,02 Thiamina x HCl 0,02 Media płynne: TNM-FH Medium 500 ml P Bez L-glutaminy Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Z 0,35 g/l NaHCO 3

172 TNM-FH Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Z 0,35 g/l NaHCO 3 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): TNM-FH Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Z 0,35 g/l NaHCO 3 Z 10 % FBS Media w proszku: TNM-FH Medium 10 L P Bez L-glutaminy 50 L P Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Bez NaHCO WAYMOUTH S MB 752/1 Pożywka Waymouth s MB 752/1 została opracowana do badań dotyczących żywienia i metabolizmu. Może być również wykorzystywana do hodowli linii komórek L, NCTC klon 929. Skład: Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l Chlorek wapnia x 2 H2O 120,00 Chlorek magnezu x 6 H2O 240,00 Siarczan magnezu suchy 130,96 Chlorek potasu 150,00 Diwodorofosforan potasu 80,00 Chlorek sodu 6000,00 Wodorofosforan di sodu bezwodny 300,00

173 Inne składniki D(+) glukoza bezwodna 5000,00 Glutation (red.) 15,00 HEPES 4766,40 Hipoksantyna 25,00 Czerwień fenolowa 10,00 L-arginina x HCL 75,00 L-kwas asparaginowy 60,00 L-cysteina x HCL xh2o 100,26 L-cysteina 15,00 L-glutamina 350,00 L-kwas glutaminowy 150,00 glicyna 50,00 L-histydyna x HCL x H2O 164,10 L-izoleucyna 25,00 L-leucyna 50,00 L-lizyna x HCL 240,00 L-metioinina 50,00 L-fenyloalanina 50,00 L-prolina 50,00 L-teronina 75,00 L-tryptofan 40,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 65,00 Witaminy Kwas askorbinowy 17,50 D-(+)-Biotyna 0,02 Kwas D-pantotenowy (Vit. 1,00 B5) Chlorek choliny 250,00 Kwas foliowy 0,40 myo-inozytol 1,00 Amid kwasu amidowego 1,00 Pyridoxol x HCl 1,00 Ryboflawina 1,00 Thiamina x HCl 10,00 Witamina B12 0,20 W przypadku gdy w medium znajduje się 5958 mg/l HEPES, wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 5500 mg/l. Media płynne: Waymouth s MB 752/1 Medium 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO 3

174 Media w proszku: Waymouth s MB 752/1 Medium 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO Pożywka E William a (William s Medium E) Pożywka E William sa jest wykorzystywana do hodowli długoterminowej dorosłych komórek nabłonka wątroby szczura. Media płynne: William s Medium E 500 ml P Bez L-glutaminy Z 2,24 g/l NaHCO 3 William s Medium E 500 ml P Z stab. glutaminą Z 2,24 g/l NaHCO 3 William s Medium E 500 ml P Z L-glutaminą Z 2,24 g/l NaHCO 3 William s Medium E 500 ml P Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,24 g/l NaHCO 3 Media specjalne (minimalne zamówienie: 20 x 500 ml): William s Medium E 500 ml P S1 Bez L-glutaminy Bez glukozy Z 2,24 g/l NaHCO 3 Skład: Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l Chlorek wapnia x 2 H2O 264,92 Azotan żelaza (III) 0,0001 Chlorek potasu 400,00 Siarczan miedzi (II) x 5 H2O 0,0001 Siarczan magnezu suchy 139,57

175 Chlorek magnezu x 4 HCL 0,0001 Chlorek sodu 6800,00 Inne składniki aminokwasy Diwodorofosforan sodu x H2O 140,00 Siarczan cynku x 7 H2) 0,002 D(+) glukoza bezwodna 2000,00 Glutation (red.) 0,03 HEPES 5958,00 methyllinoleat 0,03 Pirogronian sodu 25,00 Czerwień fenolowa 10,00 L-alanina 90,00 L-arginina free base 50,00 L-asparagina x H2O 20,00 L-kwas asparaginowa 30,00 L-cysteina 40,00 L-cystyna 20,00 L-glutamina 292,00 L-kwas glutaminowy 50,00 glicyna 50,00 L-histydyna base 15,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 75,00 L-lizyna x HCL 87,50 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 L-prolina 30,00 L-seryna 10,00 L-teronina 40,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 35,00 L-valina 50,00 Witaminy L-kwas askorbinowy 2,00 D(+)-biotyna 0,50 Kalcyferol 0,10 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,50 Kwas foliowy 1,00 Myo-inozytol 2,00 Menadion sodium 0,01 bissulfitr Amid kwasu 1,00 nikotynowego Pyridoxal x HCL 1,00

176 Ryboflawina 0,1 Tiamina x HCL 1,00 DL-α-fosforan tokoferolu- 0,01 Na2 Witamina A 0,10 Witamina B12 0,20 Media w proszku: William's Medium E 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO3 William's Medium E 10 L P Z L-glutaminą 50 L P Bez NaHCO 3 Z 25 mm HEPES Podsumowanie: L-glutamina stab.glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa dodatki x x x x x x x x x 20950S1 x x Patrz wyżej 3.2. MEDIA SPECYFICZNE ENDOPAN 3 Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (10 12 ) komórek, jest jednym z najwiekszych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych (m.in. komórkowej odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran, stanach zapalnych, alergii, chorobach sercowo-naczyniowych, wzroście nowotworów). Ogromna liczba czynników rozpuszczalnych krążących we krwi lub uwalnianych przez sąsiadujące komórki kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych oraz inwazję i

177 migrację leukocytów do śródbłonka, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Skład: ENDOPAN 3 ready-to-use jest gotową do użycia kompleksową pożywką bezsurowiczą, opracowaną specjalnie do hodowli in vitro ludzkich komórek śródbłonka i zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego wzrostu tych komórek. Jest przeznaczony do stosowania w inkubatorze w temperaturze 37 C w atmosferze 5% CO 2. Zestaw ENDOPAN 3 kit wyposażony jest w FBS i suplementy w oddzielnych sterylnych opakowaniach. Pozwala to użytkownikowi na przygotowanie pożywki do specjalnych zastosowań. Na przykład FBS, VEGF, FGF-2 lub inne składniki mogą być pominięte w pełnej pożywce w przypadku szczególnych układów doświadczalnych. Sub-confluent HUVEC in ENDOPAN 3 Confluent HUVEC in ENDOPAN 3 ENDOPAN ready to use 500 ml P ENDOPAN 3 kit z 6 suplementami 500 ml P K Reagenty: Kolagen G roztwór 0,01% 100 ml P ENDOPAN PRO Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (10 12 ) komórek, jest jednym z najwiekszych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych (m.in.

178 komórkowej odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran, stanach zapalnych, alergii, chorobach sercowo-naczyniowych, wzroście nowotworów). Ogromna liczba czynników rozpuszczalnych krążących we krwi lub uwalnianych przez sąsiadujące komórki kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych oraz inwazję i migrację leukocytów do śródbłonka, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Tworzenie nowych naczyń krwionośnych odbywa się poprzez angiogenezę i waskulogenezę - proces który uważano za zachodzący jedynie w rozwoju zarodkowym. W roku 1997 zaproponowano, że waskulogeneza pourodzeniowa może by ć ważnym machanizmem angiogenezy poprzez krążące we krwi komórki progenitorowe śródbłonka (PEC) pochodzące z krwi lub ze szpiku kostnego (Asahara i wsp., Science 1997). Wskutek tego komórki PEC przeszły wiele badań jako potencjalne źródło terapii komórkowej w celu naprawy zniszczonych naczyń krwionośnych. Badania na zwierzętach w sposób jasny pokazują, że podanie komórek PEC częściowo leczy zaburzenia sercowo-naczyniowe i uszkodzenia mięśnia sercowego (komórki PEC uczestniczą w tworzeniu nowych naczyń). W większości badań komórki PEC rozpoznaje się dzięki ekspresji CD34, CD133 lub VEGF-R2 (KDR). Ponieważ te cząsteczki są również obecne na powierzchni hematopoetycznych komórek progenitorowych, poleganie jedynie na markerach powierzchniowych nie może wykluczyć zanieczyszczenia komórkami krwiotwórczymi. Niedawno zidentyfikowano populację komórek PEC która wykazuje markery zarówno śródbłonkowe jak i progenitorowe, ale nie markery komórek krwiotwórczych (Ingram i wsp., Blood. 2004; 104: 2752). Co istotne, te komórki badano na wysoki potencjał proliferacji w testach klonogeniczności, i dodatkowo zidentyfikowano poprzez tworzenie funkcjonalnych naczyń krwionośnych in vivo (Yoder i wsp., Blood. 2007; 109: 1801). Skład: ENDOPAN PRO jest gotową do użycia pełną pożywką, opracowaną specjalnie do hodowli in vitro ludzkich komórek progenitorowych śródbłonka (hpec) i zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego tworzenia kolonii, wzrostu klonogenicznegi i szybkiej proliferacji. Zestaw ENDOPAN PRO kit wyposażony jest w FBS (wcześniej zbadany i przetestowany dla komórek progenitorowych) i suplementy w oddzielnych sterylnych opakowaniach. Pozwala to użytkownikowi na przygotowanie pożywki do specjalnych zastosowań.

179 ENDOPAN PRO ready to use 500 ml P ENDOPAN PRO kit z 6 suplementami 500 ml P K HAEMANGIOPAN (pożywka do hem angioblastu) Opis: Rozwój pierwotnych naczyń krwionośnych z różnicujących in situ hematopoetycznych komórek macierzystych jest nazywany waskulogenezą. Zarodkowy rozwój układu naczyniowego rozpoczyna się od tworzenia tzw. wysp krwi, które tworzone są pod wpływem czynników z rodziny czynników wzrostu fibroblastów (FGF) z mezodermalnych komórek żółtka. Komórki te nazywane są Haemangioblastami. Tworzą one zaczątek hematopoetycznych komórek macierzystych oraz prekursorowych komórek śródbłonka, angioblastów. Skład: Pożywka Heamangiopan z PAN-Biotech jest kompletną, gotową do użycia pożywką wyposażoną we wszystkie niezbędne dodatki (glutamina, czynniki wzrostu, bydlęca surowica płodowa). Przechowywana w temperaturze 4 C zachowuje właściwości przez co najmniej sześć miesięcy. HAEMANGIOPAN 500 ml P HEPATOPAN (pożywka dla hepatocytów ludzkich) Opis: Jak każdy ludzki narząd wątroba składa się z wielu rodzajów komórek o różnych funkcjach. Hepatocyty stanowią - pod względem liczby - 75% całkowitej liczby komórek wątroby i są najważniejszym elementem wątroby. Metabolizm, czyli przemiany chemiczne prawie wszystkich substancji które są przyjmowane w przez organizm, odbywa się w wątrobie. Skład: Pożywka do hodowli hepatocytów z PAN-Biotech jest dostarczana wraz z czterema dodatkami (suplementy powinny być przechowywane w temperaturze -20 C). Suplementy należy dodać do pożywki przed użyciem. Pożywka nie zawiera płodowej surowicy bydlęcej. HEPATOPAN z 4 suplementami 500 ml P

180 MELANOPAN (pożywka dla melanocytów) Opis: Melanocyty są osadzone w warstwie podstawnej i kolczystej naskórka. Wytwarzają one pigment melaninę i chronią skórę przed uszkodzeniem przez promienie UV. Jeżeli promieniowanie słoneczne jest zbyt silne melanocyty są uszkadzane i mogą się przekształcić w komórki rakowe. Skład: Pożywka do hodowli melanocytów z PAN-Biotech jest dostarczane wraz z siedmioma dodatkami (suplementy powinny być przechowywane w temperaturze -20 C). Suplementy należy dodać do pożywki przed użyciem. Pożywka nie zawierać płodowej surowicy bydlęcej. MELANOPAN z 7 suplemantami 500 ml P EHCPAN (pożywka dla komórek EHC) Opis: Pożywka EHC nadaje się do hodowli wczesnych komórek hematopoetycznych (EHC) w diagnostyce cytogenetycznej (np. ostra białaczka limfatyczna). Skład: Pożywka podstawowa uzupełniona FBS oraz mieszaniną czynników wzrostu. Dostarczone suplementy dodaje się do pożywki na krótko przed użyciem. EHVPAN kit Basal Medium Z antybiotykami/związkami antygrzybiczymi mix 20 ml Z suplementem A 25 x 1 ml 500 ml P NEUROPAN (Pożywka dla komórek neuronalnych) NEUROPAN basal medium (pożywka podstawowa) NEUROPAN basal medium wspiera rozwój komórek hipokampu i wielu innych neuronów ośrodkowego układu nerwowego. Warstwa odżywcza z astrocytów nie jest wymagana. NEUROPAN basal medium nie zawiera glutaminianu, który należy dodać do początkowej hodowli komórkowej (25µl). Przed użyciem NEUROPAN basal medium musi być uzupełniona o surowicę lub w przypadku hodowli bezsurowiczej o NEUROPAN 27. NEUROPAN 27 NEUROPAN 27 jest koncentratem do hodowli bezsurowiczej komórek nerwowych w powiązaniu z NEUROPAN basal medium.

181 NEUROPAN Basal Medium (Basismedium) 500 ml P NEUROPAN 27 suplement 20x 100ml 10ml P P NEUROPAN 27 suplement 50x 100ml 10ml P P NEUROPAN 27 suplement 20x z HSA 100ml 10ml P P NEUROPAN 27 suplement 20x bez antyoksydantów 100ml 10ml P P NEUROPAN 2 suplement 100x 100ml 10ml P P STEMPAN (Pożywka dla komórek ES) Komórki macierzyste są niewyspecjalizowane, z możliwością (potencjałem) do rozwoju w różne typy komórek (np. komórki serca, chrząstki, nerwy, krew, mięśnie). Komórki macierzyste są zdolne do namnażania bez utraty pluripotencji i do przekształcania się w wyspecjalizowane komórki poszczególnych narządów. W zależności od ich pochodzenia, są one podzielone na zarodkowe i dorosłe komórki macierzyste. Do hodowli zarodkowych komórek macierzystych PAN-Biotech opracował kompletną gotową do użycia pożywkę. Pożywka ta zawiera bydlęcą surowicę płodową. STEMPAN DMEM Z L-glutaminą Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez LiF 500 ml P STEMPAN GMEM Z L-glutaminą Z 2,75 g/l NaHCO3 Bez LIF 500 ml P EMEM Fibroblasts (pożywka dla fibroblastów) Na podstawie EMEM, ta pożywka została uzupełniona o większe ilości aminokwasów i witamin i zoptymalizowana dla poprawy wzrostu fibroblastów. Do hodowli fibroblastów pożywka ta musi być uzupełniona przed użyciem o 10% FBS. EMEM Fibroblast 500 ml P

182 AMNIOPAN (pożywka do cytogenetyki prenatalnej) Do cytogenetyki prenatalnej AMNIOPAN jest gotową do użycia pożywką do optymalizacji pierwotnej hodowli płodowych komórek ludzkich z punkcji owodni i biopsji kosmówki. Jest gotowa do użycia i może być używane natychmiast. Wspomaga szybką adhezję komórek. Gwarantowany szybki wzrost. Zapewnia doskonałe struktury chromosomów. Gwarantuje więcej niż zwykle metafaz. Łączy prędkość z bezpieczeństwem. Pomaga zaoszczędzić cenny czas (nie ma potrzeby testowania poszczególnych partii). W wielu przypadkach przewyższa właściwości wzrostu analogicznych kompozycji. Jest dostępna w postaci płynnej, w 100 ml pojemnikach. Dostarczana jest w stanie głęboko zamrożonym. Należy przechowywać w temperaturze -20 C. Należy unikać kilkukrotnego rozmrażania i ponownego zamrażania. Może być przechowywana przez ok. 1 tydzień w temperaturze +4 C. Może być przechowywana przez dłuższy czas w temperaturze -20 C. Okres przechowywania: 24 miesięcy. Zawiera FBS, glutaminy, czynniki wzrostu i gentamycynę. AMNIOPAN 100 ml P MARROWPAN (pożywka do komórek szpiku) Do cytogenetyki nowotworów komórek szpiku kostnego MARROWPAN jest gotową do użycia pożywką do optymalizacji hodowli komórek szpiku kostnego z punkcji. Jest gotowa do użycia i może być używana natychmiast. Gwarantowany szybki wzrost. Zapewnia doskonałe struktury chromosomów. Gwarantuje więcej metafaz niż zwykle. Łączy prędkość z bezpieczeństwem. Pomaga zaoszczędzić cenny czas (nie ma potrzeby testowania poszczególnych partii) W wielu przypadkach przewyższa właściwości wzrostu analogicznych kompozycji. Jest dostępna w postaci płynnej, w 100 ml pojemnikach. Dostarczana jest w stanie głęboko zamrożonym. Należy przechowywać w temperaturze -20 C. Należy unikać kilkukrotnego rozmrażania i ponownego zamrażania. Może być przechowywana przez ok. 1 tydzień w temperaturze +4 C.

183 Może być przechowywana przez dłuższy czas w temperaturze -20 C. Okres przechowywania: 24 miesiące. Zawiera FBS, glutaminę, czynniki wzrostu i gentamycynę. MARROWPAN 100 ml P

184 4. DODATKI DO POŻYWEK Maksymalna wydajność bez utraty jakości. Odczynniki PAN-Biotech są testowane zgodnie z najwyższymi możliwymi standardami jakości. Wszystkie odczynniki są przygotowywane zgodnie ze specyfikacją, sterylizowane i filtrowane przez filtry o średnicy porów do 0,2 µm. Przed dopuszczeniem do sprzedaży odczynniki poddawane są dokładnym testom jakości. Badana jest sterylność, wartość ph, osmo, endotoksyny, oraz przeprowadzanych jest wiele innych badań. 4.1 DODATKI DO MEDIÓW HAT suplement (50x) 100 ml P HT suplement (50x) 100 ml P HEPES bufor 1 M HEPES sól sodowa 100ml 500 ml 100 g 500 g P P P P P P Wodorowęglan sodu 7,5% 100 ml P Pirogronian sodu 100 mm 100 ml P ITS roztwór I (100x) ITS roztwór II (100x)-zmodyfikowany skład ITS I ITS III roztwór (100x)-zmodyfikowany skład ITS I 5 ml 10 ml 5 ml 10 ml 5 ml 10 ml P P P P P P Insulina bydlęca 10mg/ml 5 ml P Insulina ludzka 10 mg/ml,,rec.solution'' 10 ml P zrekominowana insulina ludzka 100 mg P woda sterylana do hodowli komórkowych β-merkaptoetanol 50 Mm w PBS 500 ml 1 L 20L 20 ml 100ml P P P P P fosforan tryptozy (50x) 130 g/l fosforanu tryptozy w wodzie destylowanej 100 ml P

185 Pluronic F % 100 ml P Ludzka transferyna apo 100 mg 500 mg 1g P P P Demecolcin roztwór 10 µg/ml 10 ml P Roztwór soli izotoniczny 500 ml P BUFOROWANE ROZTWORY SOLI BUFOROWANY ROZTWÓR DPBS Płynne roztwory soli: DPBS Bez jonów Ca i Mg 500 ml P DPBS (10x) Bez jonów Ca i Mg 500 ml P DPBS niesterylny Bez jonów Ca i Mg 2,5 L P DPBS z jonami Ca i Mg 500 ml P DPBS (10x) Z jonami Ca i Mg 500 ml P Skład: Składnik mg/l Sole nieorganiczne chlorek potasu 200,00 diwodofosforan potasu 200,00 chlorek sodu 8000,00 wodorofosforan disodu bezwodny 1150,00 chlorek wapnia x 2 H2O 133,00 chlorek magnezu x 6 H2O 100,00

186 Proszek: DPBS (10x) Bez jonów Ca i Mg 50 L P P DPBS (10x) Oddzielnie jony Ca i Mg 50 L P P ROZTWÓR SOLI EARLA Płynne: EBBS 500 ml P EBBS Bez czerwinenifenolowej 500 ml P EBBS Bez czerwinenifenolowej 500 ml P EBBS Bez czerwinenifenolowej Bez jonów Ca i Mg 500 ml P EBBS Z 2,2 g/l NaHCO3 Bez jonów Ca i Mg 500 ml P Specjalne roztwory (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): EBBS (10x) 500 ml P EBBS (10x) Bez czerwinenifenolowej Bez jonów Ca i Mg 500 ml P

187 Skład: Sole nieorganiczne Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu 400,00 Chlorek sodu 6800,00 Diwodorofosforan sodu x H2O 140,00 Chlorek wapnia x 2 H2O 264,92 Siarczan magnezu 139,57 Inne składniki D(+) glukoza bezwodna Czerwień fenolowa 2000,00 Proszek: EBBS 10 L 50 L P P P P ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI GEY A Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu 370,00 Chlorek sodu 7000,00 Wodorofosforan di sodu 120,00 Chlorek wapnia bezwodny 220,00 Chlorek magnezu x 6 H2O 210,00 Siarczan magnezu 34,20 bezwodny Diwodorofosforan potasu 30,00 bezwodny D(+) glukoza bezwodna 1000,00 Płynny roztwór: GBSS 100 ml 500 ml P P Proszek: GBSS Bez NaHCO3 10 L 50 L P P P P

188 ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI HANK A HBSS Z 0,35 g/l NaHCO3 100 ml 500 ml P P HBSS Bez czerwieni fenolowej Z 0,35 g/l NaHCO3 100 ml 500 ml P P HBSS Bez NaHCO3 100 ml 500 ml P P HBSS Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 100 ml 500 ml P P HBSS Bez jonów Ca i Mg Z 0,35 g/l NaHCO3 100 ml 500ml P P HBSS Bez czerwieni fenolowej Z 0,35 g/l NaHCO3 Bez jonów Ca i Mg 100 ml 500 ml P P HBSS Bez jonów Ca i Mg Bez 0,35 g/l NaHCO3 100 ml 500ml P P HBSS Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 Bez jonów Ca i Mg 100 ml 500 ml P P Skład: Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu 400,00 Chlorek sodu 8000,00 diwodorofosforan sodu 47,88 suchy Chlorek wapnia x 2 H2O 186,58 Siarczan magnezu 126,97 bezwodny Diwodorfosforan potasu 60,00 D(+) glukoza bezwodna Czerwień fenolowa 1000,00 10,00

189 Proszek: HBSS Bez NaHCO3 10 L 50 L P P P P HBSS Bez jonów Ca i Mg Bez NaHCO3 10 L 50 L P P P P ROZTWÓR A SOLI PUCK A Skład: Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu 400,00 Chlorek sodu 8000,00 D(+) glukoza bezwodna Czerwień fenolowa 1000,00 5,00 Płynny roztwór: Roztwór A soli Puck a 100 ml 500 ml P P ROZTWÓR SOLI TYRODE A Skład: Sole nieorganiczne Inne składniki Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu 200,00 Chlorek sodu 8000,00 Chlorek magnezu 100,00 Chlorek wapnia 200,00 Fosforan sodu 50,00 D(+) glukoza bezwodna 1000,00

190 Płynny roztwór: Roztwór soli Tyrode a 100 ml 500 ml P P Proszek: Roztwór soli Tyrode a Bez NaHCO3 10 L 50 L P P P P 4.3 Aminokwasy i witaminy BME bufor (50x), bez L-glutaminy 100 ml P BME bufor (50x), z L-glutaminą 100 ml P BME (50x)suplement, bez L-glutaminy proszek 1 L 5 L 10 L P P P P P P L-glutamina 200 mm 50 ml 100 ml P P Stab.glutamina 200 mm 50 ml 100 ml P P Glutamina w proszku 20 g 100g 500g P P P P P P Stab.glutamina w proszku 10g P P MEM (50x) bez L-glutaminy 100 ml P MEM (50x) z L-glutaminą 100 ml P MEM NEAA (100x) bez L-glutaminy 100 ml P Witaminy BME witaminy 100 ml P MEM (100x) roztwór witamin 100ml P ANTYBIOTYKI I ŚRODKI PRZECIWGRZYBICZE amphortercin B 250µg/ml 50 x 1ml P x 5 ml P ml P ml P Amphotericin B proszek 50 mg P P

191 100mg P P Amphotericin B water soluble powder 25 mg P P 50 mg P P Bacitracin proszek 10 g P P 25g P P Hygromycin B (50mg/ml) 20 ml P ml P Hygromycin B proszek 50mg P P 1g P P Gentamycyna siarczan 10 mg/ml 50 x1ml P x 5ml P ml P ml P Gentamycyna siarczan 50 mg/ml 50 x1ml P x 5ml P ml P ml P Gentamycyna siarczan proszek 1g P P 10g P P 25g P P Kanamycyna siarczan 5mg/ml 50 x1ml P x 5ml P ml P ml P Kanamycyna siarczan 10mg/ml 50 x1ml P x 5ml P ml P ml P Kanamycyna siarczan 50mg/ml 50 x1ml P x 5ml P ml P ml P Kanamycyna siarczan proszek 10g P P 50g P P Minocyclin 0,5 mg/ml 50ml P ml P Neomycyna siarczan 10 mg/ml 50ml P ml P Neomycyna siarczan proszek 10g P P 25g P P 100g P P Nystatyna roztwór units/ml 100 ml P Paneticin mg/ml 20 ml P

192 100 ml P Paneticin mg/ml 20 ml P ml P Paneticin 420 proszek 1g P P 5g P P 10g P P Pencylina /streptomycyna 50 x 1ml P units Pencillin/ml 50 x 5 ml P mg streptomycyny/ml 50ml P ml P Pencylina /streptmycyna/amfotercyna B mix 50 x 1ml P units Pencillin/ml 50 x 5 ml P mg streptomycyny/ml 50ml P µg amfotercyny B/ml w 0,85% saline 100 ml P Penicilina G sól potasowa proszek 25 g P P 100 g P P streptomycyna siarczan proszek 25g P P 50g P P 100g P P polymixin B siarczan 50 ml P units/ml 100 ml P polymixin B siarczan proszek 1g P P 5g P P 10g P P tiamulin 1 mg/ml 50 x 1ml P x 5 ml P ml P ml P zeocin 100 mg/ml 10 ml P ENZYMY DO DYSOCJACJI KOMÓREK KOLAGENAZA TYPU I Naturalna równowaga aktywności enzymu. Zalecana dla komórek z tkanki nabłonkowej, płucnej i tłuszczowej. Przechowywać w temperaturze 2-8 C.

193 KOLAGENAZA TYPU II Ze szczególnie wysoką aktywnością klostrypainy i trypsyny. Polecana do przygotowania komórek z tkanki tkanki nabłonkowej, tłuszczowej, z wątroby, kości, płuc i nadnerczy. Przechowywać w temperaturze 2-8 C KOLAGENAZA TYPU III Normalna aktywność kolagenazy przy minimalnej dodatkowej aktywności proteolitycznej. Szczególnie polecana do tkanki gruczołu piersiowego. Przechowywać w temperaturze 2-8 C KOLAGENAZA TYPU IV Wybrana niska aktywność trypsyny przy wysokiej aktywności kolagenazy i normalnym poziomie klostrypainy. Zalecana do izolowania komórek z trzustki. Przechowywać w temperaturze 2-8 C. kolagenaza typ I (Worthington - USA orgin) 100 mg LS g LS kolagenaza typ II (Worthington - USA orgin) 100 mg LS g LS kolagenaza typ III (Worthington _USA orgin) 100 mg LS g LS kolagenaza typ IV (Worthington -USA orgin) 100 mg LS g LS TRYPSYNA I INNE Zastosowanie: Do dysocjacji tkanek i warstw jednokomórkowych (monolayer) Przechowywanie: Roztwory w temperaturze -20 C (zamrożone) / Proszek w temperaturze od +2 C - +8 C Okres trwałości: Roztwory 24 miesięcy / Proszek 36 miesięcy. Okres trwałości rozpoczyna się wraz z datą produkcji. Nasza trypsyna jest testowana na mykoplazmę! Trypsyna 0,25% w PBS bez jonów Ca 2+ i Mg ml P ml P (10X) trypsyna 2,5% w PBS bez jonów Ca 2+ i Mg ml P

194 500 ml P Trypsyna 0,25%/EDTA 0,02% w PBS bez jonów Ca 2+ i Mg ml P ml P Trypsyna 0,25% /EDTA 0,02% w PBS bez z jonów Ca 2+ i Mg2+ z czerwienią fenolową 100 ml P ml P Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% w PBS bez Ca 2+ i Mg ml P ml P Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% w PBS bez Ca 2+ i Mg2+z czerwienią fenolową 100 ml P SP 500 ml P SP (10X) trypsyna 0,5%/EDTA 0,2% bez jonów Ca 2+ i Mg ml P ml P Trypsyna 0,05%/EDTA 0,1% w PBS bez CA2+ i Mg ml P ml P Trypsyna 0,25% 1 mm EDTA 4 w PBS bez Ca2+ i Mg ml P ml P Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% i HBSS bez Ca2+ i Mg ml P ml P Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% w HBSS bez Ca2+ i Mg2+z czerwienią fenolową 100 ml P ml P Trypsyna 0,25%/1 mm EDTA w HBSS bez Ca2+ i Mg2+ z czerw.fenolową 100 ml P ml P Trypsyna 0,05%/EDTA 4 Na 0,02% w HBSS z czerw.fenolową 100 ml P ml P Roztwór specjalny trypsyny (dla komórek ES) 100 ml P ml P (5X) roztwór specjalny trypsyny (dla komórek ES) 100 ml P ml P (10X) trypsyna 0,5%/EDTA 4 Na 5,3 mm bez czerw.fenolowej bez Ca2+ i Mg ml P ml P Inhibitor trypsyny 100 ml P ml P Trypsyna w proszku(1:250)pochodzenia świńskiego 25 g P P 100 g P P

195 500 g P P EDTA 1% w PBS bez Ca2+ i Mg ml P ml P Dispase II neutralne białka, grade II 100 ml P Dispase oczyszczona neytral prostase 10 mg LS CZYNNIKI PRZYLEGANIA KOLAGEN A Kolagen rozpuszczalny w kwasach pochodzący z bydlęcego łożyska Dodać tę samą ilość sterylnego PBS do kolagenu. Dodać 1 ml na 10 cm 2 naczynia hodowlanego i inkubować w +35 C do +37 C przez 30 min. Usunąć roztwór i przemyć jeden raz PBS; używać natychmiast. W kulturze jednowarstwowej normalnych ludzkich i mysich komórek wątroby z powodzeniem obserwuje się wzrost przez okres do jednego tygodnia, pod warunkiem że naczynia hodowlane zostały pokryte kolagenem A. Komórki świńskie w takich samych warunkach nie wymagają takiego przygotowania powierzchni. Wzrost komórek często można poprawić poprzez pokrycie powierzchni czynnikami przylegania takimi jak fibronektyna, kolagen, żelatyna czy polilizyna. Z powłoką kolagenu przeżywalność hepatocytów może wydłużyć się od jednego tygodnia do czterech tygodni. Przechowywanie: C kolagen A 1 x (6x5ml) P KOLAGEN R (TYP I) sterylny roztwór 0,2%: Kolagenu typu 1 z ogona szczurzego, 2 mg/ml w 0,1% kwasu octowego. Doskonałe podłoże do hodowli hepatocytów, fibroblastów i komórek nabłonka. sterylny roztwór 0,4%: Kolagenu typu 1 z ogona szczurzego, 4 mg / ml w 0,1% kwasu octowego. Doskonałe podłoża do hodowli hepatocytów, fibroblastów i komórek nabłonka.

196 Kolagen R 0,2% sterylny roztwór 20 ml P ml P Kolagen R 0,4% sterylny roztwór 20 ml P LAMININA MYSIA Ten wysoce oczyszczony preparat lamininy mysiej zwieksza adhezję komórek, migrację, wzrost i różnicowanie. Składa się z łańcuchów o łącznej masie cząsteczkowej (MW) 800 kd i jest używany do pokrywania naczyń hodowlanych. Źródło: Mysi guz Engelbreth-Holm-Swarm (EHS). Bufor do przechowywania: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) z 10 mg/ml siarczanu gentamycyny. Przechowywanie: Przechowywać w temperaturze -20 C lub w temperaturze -80 C. Czystość: Czystość> 90%, sprawdzana przez SDS-PAGE. Dane techniczne: Testy funkcjonalne: Wspomaga powstawania filamentów neuronowych komórek NG w teście rozrostu neurytów. Badania jałowości: Brak wzrostu bakterii lub grzybów po inkubacji w temperaturze 37 C przez 14 dni po testach sterylności USP XXIV, Rozdział 71. Brak zakażenia przez mykoplazmę potwierdzony PCR. Stężenia endotoksyn <20 EU/ml w teście LAL. Procedura powlekania: Zalecane stężenie podczas pracy wynosi 0,05-10 µg /cm 2 powierzchni wzrostu (0,05-10 mg / ml) w zależności od typu komórek. a. Rozmrozić na lodzie przez kilka godzin. Umieścić płytki na lodzie i ochłodzić końcówki pipet. W komorze laminarnej rozcieńczyć odpowiednio używając schłodzonych szalek. Rozprowadzić roztwór aby całkowicie pokryć dna dołków. b. Poniższa tabela stanowi przewodnik dla proponowanych objętości: Rodzaj naczynia Objętość lamininy na dołek 6 dołków (lub 35 mm do naczyń) 1 ml 24 dołków 200 ml 48 dołków 50 ml 96 dołków 20 ml c. Inkubować płytki w temperaturze 37 C przez 1 godzinę. Pod stołem laminarnym usunąć

197 nadmiar płynu z dołków. Wypłukać studzienki jeden raz pożywką hodowlaną, a następnie dodać komórki. Laminina mysia 1 mg P ALBUMINY Postępowanie z albuminami jako dodatkiem białka do hodowli tkankowych. Są one głównym składnikiem w osoczu krwi i są dodawane do pożywki hodowlanej w celu zwiększenia stabilności błon komórkowych i związania możliwych toksycznych pierwiastków śladowych. Bydlęca albumina surowicy krwi 25 g P g P g P g P g P Bydlęca albumina surowicy krwi wykrystalizowana 1g P g P g P g P Bydlęca albumina surowicy krwi microbiological grade 10g P g P g P g P Bydlęca albumina surowicy krwi H2 wolna od globulin 5g P g P Ludzka albumina krwi 25g P g P Królicza albumina krwi 10g P ROZTWÓR ŻELATYNY Roztwór żelatyny jest używany do pokrywania naczyń hodowlanych. Znajduje zastosowanie w hodowli komórek, w pracy z komórkami śródbłonka i zarodkowymi komórkami macierzystymi (ESc). roztwór żelatyny 0,1% w PBS 500 ml P roztwór żelatyny 2% w PBS 100 ml P

198 4.7. ROZTWORY DO SEPARACJI PANCOLL i POWERCOLL Izolacja komórek lub cząsteczek subkomórkowych jest często pierwszym krokiem w badaniach ekspresji genów lub w diagnostyce. Oprócz specyficznych metod separacji to metody fizyczne są najczęściej używane. W tych metodach różnice fizyczne, takie jak rozmiar i ładunek cząsteczek są wykorzystane w celu separacji. W tym celu stosowane są tzw. roztwory separacyjne (pożywki do wirowania). Pożywki te muszą spełniać następujące kryteria: muszą być w stanie utworzyć gradient gęstości w pożądanym zakresie żądana wartości ph i osmolalność musi być łatwo regulowana roztwór nie może być zbyt lepki w przypadku wysokie gęstości Nie mogą powodować funkcjonalnych lub morfologicznych zmian w materiale biologicznym Nie mogą przenikać przez błony biologiczne Nasz roztwór rozdzielający - Pancoll - jest wykonany z neutralnego, wysoko usieciowanego hydrofilowego polimeru sacharozy o średniej masie cząsteczkowej D. Powercoll składa się z zawiesiny koloidalnej cząstek krzemionki, wypełnianej poliwinylopirolidonem (PVP). Przechowywanie: od +2 C do temperatury otoczenia Właściwie składowane mogą być przechowywane przez co najmniej 36 miesięcy. Okres przechowywania liczy się od daty produkcji. Pancoll human, density/dichte 1,077 g/ml 100 ml P ml P Pancoll mouse, density/dichte 1,086 g/ml 100 ml P ml P Pancoll rat, density/dichte 1,091 g/ml 100 ml P ml P Pancoll animal, density/dichte 1,077 g/ml 100 ml P ml P Pancoll monocytes, density/dichte 1,068 g/ml 100 ml P ml P Pancoll Platelets, density/dichte 1,063 g/ml 100 ml P ml P Powercoll, density/dichte 1,077 g/ml 100 ml P ml P Powercoll, density/dichte 1,124 g/ml 100 ml P ml P

199 POŻYWKA DO IZOLACJI LIMFOCYTÓW Opis: Gotowe do użycia probówki Zalety: Zmniejszenie ryzyka zanieczyszczenia i mniej wymaganego czasu w związku z użyciem już wypełnionej fiolki z czynnikiem rozdzielającym. Porowata membrana zapobiega wprowadzeniu krwi podczas mieszania. Prowadzi to do poprawy separacji przy jednoczesnym zmniejszeniu zanieczyszczeń. Po odwirowaniu i oddzieleniu frakcji komórek membrana zapobiega zanieczyszczeniu limfocytów poprzez niepożądane typy komórek. Wcześniejsze rozcieńczenie krwi nie jest konieczne, ale może poprawić wynik separacji. Przed użyciem zapoznaj się z ulotką dołączona do Pancollu. Referencje: a) Berge M et al. (2010) Small interfering RNAs induce target-independent inhibition of tumor growth and vasculature remodeling in a mouse model of hepatocellular carcinoma. American Journal of Pathology (Epub ahead of print) b) Derfuss T et al. (2009) Contactin-2/TAG-1-directed autoimmunity is identified in multiple sclerosis patients and mediates gray matter pathology in animals. Proceedings of National Academy of Science 106:8302 c) Ladhoff J et al. (2009) Low immunogenicity of endothelial derivatives from rat embryonic stem cell-like cells. Cell Research 19:507 d) Meixenberger K et al. (2010) Listeria monocytogenes-infected human peripheral blood mononuclear cells produce IL-1s, depending on listeriolysin O and NLRP3. Journal of Immunology 184:922 e) Leiherer A et al. (2009) Uncoupling human immunodeficiency virus type 1 gag and pol reading frames: role of the transframe protein p6 in viral replication. Journal of Virology 83:7210

200 f) Jo J et al. (2010) Analysis of CD8 T-cell-mediated inhibition of hepatitis C virus replication using a novel immunological model. Gastroenterology 136:1391 Pancoll human, density/dichte 1,077 g/ml 25 x 50 ml P x 10 ml P Pancoll mouse, density/dichte 1,086 g/ml 25 x 50 ml P x 10 ml P Pancoll rat, density/dichte 1,091 g/ml 25 x 50 ml P x 10 ml P Pancoll animal, density/dichte 1,077 g/ml 25 x 50 ml P x 10 ml P KRIOKONSERWACJA DMSO (dimetylosulfotlenek) DMSO (dimetylosulfotlenek) to bezbarwny rozpuszczalnik organiczny który przenika całkowicie do komórki i zapobiega tworzeniu się szkodliwych kryształków lodu podczas zamrażania. Dimetylosulfotlenek (DMSO) 100 ml P Dimethylsulfoxide (DMSO) dla hodowli komórkowych 100 ml P POŻYWKA MROŻENIOWA Nasza pożywka mrożeniowa zalecana jest do głębokiego zamrażania. Podstawowym składnikiem jest DMEM uzupełniony mieszanką płodowej surowicy bydlęcej i DMSO. Skład ten gwarantuje wysoki wskaźnik przeżywalności i dobry wzrost komórek po rozmrożeniu. Medium mrożeniowe 50 ml P CRYOPAN Użytkowanie: Zamrażanie komórek z wykorzystaniem odczynnika CRYOPAN (w zbiorniku ciekłego azotu). Schłodzić (w lodówce) pożywkę mrożeniową, pożywkę hodowlaną i probówki mrożeniowe.

201 Ztrypsynować komórki, następnie przenieść do pożywki hodowlanej i odwirować. Usunąć supernatant i ponownie umieści ć komórki w pożywce hodowlanej. Doprowadzić liczbę komórek do 1-5 x10 6 /ml. Komórki muszą być ponownie zawieszone w celu uniknięcia tworzenia agregatów. Wymieszać odwirowane komórki z taką samą objętością ochłodzonej pożywki mrożeniowej i przepipetować jednokrotnie w górę i w dół. Odpipetować 1 ml tej zawiesiny komórkowej do każdej probówki mrożeniowej. Przenieść probówki do lodówki na 15 minut, gdyż pożywka mrożeniowa musi przeniknąć do komórek. Po tym etapie zamrozić probówki w temperaturze -20 C na dwie godziny. Przez noc trzymać w oparach azotu. Następnie umieścić probówki w ciekłym azocie. Idealne tempo zamrażania: 1 C/minutę Cryopan I 10 ml P ml P Linia produktów PAN SL-S (SERUM-FREE Endothelial Culture System; System do hodowli komórek śródbłonkowych wolny od surowicy) Biologia komórek śródbłonka rozwinęła się bardzo dzięki badaniom komórek śródbłonka naczyń krwionośnych hodowanych in vitro. Poza zrozumieniem wielu procesów patologicznych i fizjologicznych udało się poznać różnorodne procesy sygnałowe dzięki badaniu komórek śródblonka w hodowli. Tradycyjnie pełne pożywki w hodowli śródbłonkowej zawierają surowicę zwierzęcą. Pojawienie się pożywek o niskiej zawartości surowicy poprawiło jakość danych doświadczalnych uzyskiwanych w ostatnich latach. Jadnakowoż komórki sródblonka są w stanie syntetyzować substancje które nie mogą być wykryte ze względu na ich niską zawartość lub maskujący efekt surowicy. W przeszłości szlaki sygnałowe w komórkach śródbłonka nie były możliwe do odczytania eksperymentalnie ponieważ nawet niskie stężenie surowicy obecne w pożywkach tradycyjnych powoduje niezdefiniowaną i niepożądaną stymulację receptorów powierzchniowych lub sygnałów wewnątrzkomórkowych, które mogą być uwidocznione jedynie w warunkach wolnych od surowicy. Jako że komórki śródbłonka znajdują się obecnie w centrum zainteresowania inżynierii tkankowej naczyń ze względu na potencjalne zastosowania terapeutyczne, obecność pełnej surowicy zwierzęcej jest w takich zastosowaniach niepożądana. Wszystkie produkty opisane poniżej są przeznaczone do użytku w systemie hodowli komórek śródbłonkowych wolnym od surowicy (SERUM-FREE Endothelial Culture System). Można stosować komórki śródbłonka pochodzące z różnych źródeł. Dla wygody użycia w tym systemie PAN Biotech GmbH oferuje komórki śródbłonka z pępowiny ludzkiej izolowane i hodowane w ścisłych warunkach bezsurowiczych. Informacje dotyczące składu, zastosowań, specjalnych zalet oraz sposobów użytkowania są podane dla każdego produktu osobno. W celu uzyskania

202 dodatkowych informacji na temat SERUM-FREE Endothelial Culture System z PAN Biotech GmbH proszę zapoznać się z dołączonymi ulotkami informacyjnymi. PANEXIN SL-S to prawdziwy zamiennik surowicy, który może w oełni zastąpić FBS w pożywce dla komórek śródbłonka będącej poza tym w pełni wyposażoną w inne dodatki. SL-S Trypsin/EDTA zostało specjalnie zaprojektowane do użytku w hodowlach bezsurowiczych. Stosunkowo niska aktywność trypsyny skutkuje delikatnym odklejaniem się komórek śródbłonka od podłoża; niskie stężenie czerwieni fenolowej służy jako wygodny wskaźnik jednocześnie zapewniając łagodne warunki dla komórek SL-S Medium jest pożywką do przepłukiwania naczyń hodowlanych po trypsynizacji aby zapewnić całkowity zbiór komórek, lub pożywką do krótkoterminowej inkubacji komórek śródbłonka w warunkach bezsurowiczych. Ta pożwka nie jest odpowiednia do wzrostu i długotrwałej hodowli komórek nabłonkowych. SL-S Trypsin Inhibitor (inhibitor trypsyny) jest zoptymalizowany aby zablokować aktywność trypsyny jednocześnie zapewniając komórkom śródbłonkowym idealne warunki aby odzyskały żywotność po działaniu trypsyny SL-S Collagen (kolagen) został opracowany jako gotowy do użytku roztwór do pokrywania nowych naczyń hodowlanych w subkulturach śródbłonkowych. SL-S Cryopan jest wolną od surowicy pożywką do kriokonserwacji śródbłonka umożliwiającą wysoką odzyskiwalność żywych komórek po rozmrożeniu. PANEXIN SL-S Serum Substitute for HUVEC cultures 25 ml P S SL-S Trypsin/EDTA 50 ml P SF SL-S Trypsin-Inhibitor 50 ml P SF SL-S Medium (Working Medium) 500 ml P SL-S Collagen 0.01 % 25 ml P SL-S Cryopan 25 ml P

203 5. USŁUGI 5.1.WPROWADZENIE PAN-Biotech oferuje szeroką gamę usług i procedur badawczych dla swoich produktów. Dostępne są następujące usługi i procedury testowe: Specjalna obróbka różnych partii surowicy Badania biochemiczne Badania na czynniki chorobotwórcze (bakterie, wirusy, grzyby) Testy funkcjonalne Obróbka komórek Każda z tych usług dostarczana jest szybko, efektywnie, przy użyciu najnowszych na daną chwilę technik i przy zachowaniu najwyższej jakości Możesz skorzystać z naszej wiedzy! Jeśli potrzebujesz specjalnych testów lub określonych usług powiedz nam o tym. W większości przypadków potrafimy pomóc naszym klientom. 5.2.SPECJALNA OBRÓBKA RÓŻNYCH PARTII SUROWICY Filtracja sterylna Sterylna filtracja odbywa się poprzez zatwierdzony proces. Surowica przechodzi przez szereg filtrów o coraz to mniejszej średnicy porów. Na ostatnim etapie filtracji surowica przechodzi przez sterylny filtr o średnicy porów 0.2 µm Ekstrakcja IgG Wykorzystując metodę chromatograficzną (chromatografię powinowactwa) przeciwciała w surowicy są niemal całkowicie usuwane (<5 µg/ml). Aktywność biologiczna surowicy nie ulega zmianie. Filtracja poprzez węgiel aktywny Surowicę ogrzewa się w łaźni wodnej z dekstranem i aktywowanym węglem drzewnym. Węgiel aktywowany, wraz z substancjami związanymi jest usuwany przez wirowanie i filtrację. Usuwanie lipidów (Dilipidisation) Lipidy są usuwane z surowicy krwi metodą chromatografii powinowactwa. Dializa Surowica jest dializowana przez błonę Da z roztworem soli fizjologicznej. Inaktywacja cieplna Surowica jest podgrzewana przez 30 minut w temperaturze 56 C w łaźni wodnej, w której to jest delikatnie wstrząsane kilka razy.

204 Promieniowania gamma Surowica jest napromieniowywana przez co najmniej 25 kgy. 5.3.BADANIA BIOCHEMICZNE Białka Test kolorymetryczny (reakcja biuretowa). Biwalentna miedź reaguje w roztworze alkalicznym z wiązaniem peptydowym albuminy dając charakterystyczny fioletowy kompleks biuretu. Intensywność zabarwienia jest wprost proporcjonalna do stężenia albuminy, co jest analizowane fotometrycznie. Osmolalność Osmolalność analizowana jest przez obniżenie temperatury krzepnięcia. Kalibracja osmometru odbywa się przy użyciu roztworów wzorcowych. Wartość ph Sprawdzana przy użyciu elektrod ph. Hemoglobina Stężenie hemoglobiny mierzone jest spektrofotometrycznie przy trzech różnych długościach fali. IgG Przeciwciała w agarozowym osadzie przy zachowaniu równowagi w stosunku do antygenów, które pipetowane do dołków żelowych, dyfundują na zewnątrz. Średnica pierścienia osadu jest proporcjonalna do stężenia roztworu zawierającego stosowany antygen. Trójglicerydy Enzymatyczny test kolorymetryczny oparty na reakcji Trindera. Cholesterol Enzymatyczny test kolorymetryczny. Glukoza Enzymatyczny test kolorymetryczny oparty na reakcji Trindera. Tetracyklina Surowice testowane są pod kątem przydatności dla systemów indukowanych tetracykliną. Jeśli taki system jest stosowany, opowiednia ekspresja białek jest możliwa jedynie przy braku tetracykliny. W związku z tym używane pożywki hodowlane oraz surowice nie mogą zawierać tetracykliny. Do badań używana jest linia komórek CHO, zawierająca kontrolowany przez tetracyklinę gen lucyferazy (CHO-Luc) w reporterowej konstrukcji genowej. Kiedy komórki te hodowane są bez tetracykliny, zostaje zaindukowana ekspresja enzymu lucyferazy która jest określana poprzez test Promegas.

205 Endotoksyny Endotoksyny są istotną częścią lipopolisacharydów zewnętrznej ściany komórkowej bakterii Gram-ujemnych. Zawartość endotoksyny określana jest metodą kinetyczną LAL (Limulus Amoebacytes Lysate). LAL składa się z wodnego ekstraktu z komórek krwi skrzypłocza (Limulus polyphemus). W obecności endotoksyny LAL powoduje zmętnienia pozwalające określić zawartość endotoksyny w próbce TESTY NA CZYNNIKI PATOGENNE Mykoplasma Mykoplazma należy do najmniejszych bakterii. Pozbawione ściany komórkowej mykoplazmy są bardzo zróżnicowane i mogą przechodzić przez jałowy filtr (0,2 µm). Zanieczyszczenia hodowli komórek mykoplazmą są częste i niełatwe do wykrycia, ponieważ nie zawsze powodują znaczące szkody. Stosowane są następujące systemy wykrywania: Kultury bakterii. Po zagęszczeniu w specjalnych podłożach w warunkach tlenowych i beztlenowych testu dokonuje się płytkach agarozowych. Po dodatkowej inkubacji wykonuje się analizę mikroskopową. Skażenia mykoplazmą rozpoznaje się po kształcie kolonii przypominających jajka na twardo. Barwnik fluorescencyjny wiążący DNA (DAPI, bisbenzimid). Zakażenia mogą być wykryte przez barwienie DNA mykoplazmy przy wykorzystaniu specjalnego fluorochromu wiążącego DNA - DAPI (4-6-diamidino-2-phenylindol-di-hydrochloride). Pod mikroskopem fluorescencyjnym mykoplazma identyfikowana jest jako równe, małe, jasno świecące punkty lub ich zgrupowania na zewnątrz komórek (często na błonie komórkowej). Ponieważ DNA mitochondrialne zabarwione jest jedynie nieznacznie, fluorescencja tła jest niewielka. Wykrywanie specyficznych enzymów mykoplazmy. Dzięki specjalnym zestawom testów mogą być wykrywane specyficzne enzymy. PCR RNA rybosomalnego. Amplifikowanie specyficznych fragmentów rrna mykoplazmy, rozdzielanie i identyfikacja elektroforetyczna. Testy wirusowe zgodne z wytycznymi EMEA Następujące badania wirusowe mogą być wykonywane zgodnie z wytycznymi EMEA CPMP/BWP/1793/02 (uwaga na wytyczne w sprawie stosowania surowicy bydlęcej w produkcji ludzkich biologicznych produktów leczniczych): Wirus choroby niebieskiego języka i pokrewne orbiwirusy Adenowirus bydlęcy Parwowirus bydlęcy Syncytialny wirus oddechowy, bydlęcy (BRSV) Bydlęcy wirus biegunki (BVDV)

206 Wirus wścieklizny Reowirus Poliomawirus bydlęcy (BPyV) Sterylność Brak zanieczyszczeń bakteryjnych lub grzybiczych jest weryfikowany przez inkubację z Caso- Bulionem lub Thioglycolat-Bulionem zgodnie z Pharm. Eur. Miano bakterii Wykrycie ogólnej liczby żywych bakterii tlenowych dokonywane poprzez filtrowanie przez membranę lub metodę plate-flush czy też metodę powierzchniową. Mikroorganizmy są wykrywane jako jednostki tworzące kolonie w 1 ml (CBU/ml) na odpowiednych płytkach. 5.5.TESTY FUNKCJONALNE Efektywność wysiewania (plating efficiency) Aby zbadać ten parametr mysie fibroblasty (L929) wysiewane są na szalki Petriego w bardzo małej gęstości (500 komórek/szalkę) z 20% surowicą i DMEM jako pożywką podstawową. Po okresie inkubacji (14 dni w inkubatorze w 37 C i 5% CO 2 ), kolonie komórek są liczone po uprzednim wybarwieniu (Giemsa). Wyniki normalizuje się w stosunku do surowicy referencyjnej. Efektywność klonowania (cloning efficiency) Wydajność klonowania pokazuje zdolność określonej partii surowicy do wspomagania procesu klonowania i wzrostu linii komórkowych szpiczaka mysiego i linii hybrydomy. Dlatego mysie komórki SP2/0-Ag14 wysiewa się na mikropłytkach (jedna komórka na studzienkę) z 20% w surowicy i RPMI 1640 jako pożywce podstawowej w bardzo małej gęstości. Po 7 dniach w inkubatorze w temperaturze 37 C i 5% CO 2 przelicza się kolonie komórek (całkowita wydajność klonowania). Wyniki są normalizowane względem surowicy referencyjnej. Test wzrostu W tym teście badana jest zdolność określonej partii surowicy do wspomagania procesu proliferacji mysich fibroblastów (L929) i komórek szpiczaka mysiego (SP2/0-Ag14). Komórki wysiewane są przy stosunkowo niskiej gęstości 1,000 komórek/ml dla SP2 i komórek/ml dla L929. Po inkubacji w temperaturze 37 C i 5% CO 2 komórki zostają policzone w komorze liczącej na drugi, piąty i siódmy dzień. Jednocześnie prowadzi się hodowlę kontrolną.

207 5.6.KOMÓRKI PODDAWANE OBRÓBCE Zakładanie i rozwój specjalnych hodowli komórkowych Ludzkie komórki pierwotne z różnych tkanek są izolowane i hodowane w określonych warunkach. Rozwój pożywek hodowlanych wykorzystywanych w unikalnych aplikacjach Pożywki bezsurowicze i bezbiałkowe (wzrostowe i różnicujące) opracowane i zoptymalizowane zostały z myślą o różnych liniach komórkowych i komórkach pierwotnych odpowiednio dla różnych zastosowań. Zakup i przetwarzania komórek specjalnych Izolacja, hodowanie i inkubacji specjalnych komórek zgodnie z życzeniem klienta.

208 6. ODCZYNNIKI DO BADAŃ BIOLOGICZNYCH Cytokiny, chemokiny i czynniki wzrostu z PAN-Biotech Cytokiny zyskują coraz większe znaczenie w biologii komórki. Zawierające cukier białka mają funkcje regulujące wzrost i różnicowanie komórek organizmu. Wiele cytokin, ogólnie nazywanych mediatorami (przekaźnikami), odgrywa również ważną rolę w reakcjach immunologicznych. Cytokiny, które przede wszystkim inicjują i regulują proliferację i różnicowanie komórek zwane są czynnikami wzrostu. Białka te, które są przekazywane jako sygnały z jednej komórki do drugiej, a więc są przekaźnikami informacji, odgrywają istotną rolę przede wszystkim w rozwoju organizmów wielokomórkowych. Czynniki wzrostu są wydzielane przez komórki do środowiska lub związane są z błoną. Działają kiedy rozpoznane zostaną przez receptor na powierzchni komórki docelowej. Tylko komórki posiadające specyficzny receptor dla odpowiedniega czynnika wzrostu (liganda) mogą odpowiedzieć na sygnał. Kiedy następuje związanie z ligandem poprzez zmianę konformacji, receptor ten generuje sygnał wewnątrz komórki, który z kolej powoduje, że geny mogą być uaktywniane lub wyłączane poprzez transfer innych sygnałów. PAN-Biotech może zaoferować szereg wysokiej jakości cytokin, czynników wzrostu, jak i chemokin czy też tzw. cytokin chemotaktycznych (chemoatraktantów), które mogą być wydzielane przez wiele rodzajów komórek np. przez fagocyty i komórki dendryczne a także przez komórki w tkankach. Chemokiny mogą przyciągać i aktywować leukocyty. Stąd też odgrywają ważną rolę jako pośrednicy w ukierunkowanej regulacji migracji leukocytów i wynikającym z niej procesie zapalnym.

209 6.1. CZYNNIKI WZROSTU LUDZKIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU: 4-1BBr Hu 4-1BB Receptor rec. CB μg CB μg CB mg Acrp30 Glob Hu Adiponectin Globular rec. CB μg CB μg CB mg Acrp30 HEK Hu Adiponectin glycosilated, HEK rec. CB μg CB μg CB mg Acrp30 Hu Adiponectin rec. CB μg CB μg CB mg Acrp30 Tri Hu Adiponectin Trimeric Form rec. CB μg CB μg CB mg Acrp30 His Hu Adiponectin, His tag rec. CB μg CB μg CB mg AITRL Hu AITRL rec. CB μg CB μg CB mg ANG-1 Hu Angiopoietin-1 rec. CB μg CB μg CB mg ANG-2 Hu Angiopoietin-2 rec. CB μg CB μg CB mg ANGPTL-3 Hu Angiopoietin-like Protein 3 rec. CB μg CB μg CB mg ANGPTL-4 Hu Angiopoietin-like Protein 4 rec. CB μg CB μg CB mg APO-J Hu Apoliprotein-J rec. CB μg CB μg CB mg Artemin Hu Artemin rec. CB μg CB μg CB mg BAFF Hu BAFF (BLyS) rec. CB μg CB μg

210 CB mg BAFF-R Hu BAFF (BlyS) Receptor rec. CB μg CB μg CB mg BD-3 Hu Beta Defensin -3 rec. CB μg CB μg CB mg BTC Hu Betacellulin rec. CB μg CB μg CB mg BMPR1A Hu Bone Morphogenetic protein Receptor-1A rec. CB μg CB μg CB mg BMP-2 Hu Bone Morphogenetic protein-2 rec. CB μg CB μg CB mg BMP-4 Hu Bone Morphogenetic protein-4 rec. P μg P μg P mg BMP-6 Hu Bone Morphogenetic protein-6 rec. CB μg CB μg CB mg BMP-7 Hu Bone Morphogenetic protein-7 rec. CB μg CB μg CB mg BMP-7 CHO Hu Bone Morphogenetic protein-7, CHO rec. CB μg CB μg CB mg BDNF Hu Brain-Derived Neurotrophic Factor rec. CB μg CB μg CB mg BNP Hu B-type Natriuretic Protein CB mg CB mg CB mg BNP Hu B-type Natriuretic Protein rec. CB μg CB μg CB mg CT-1 Hu Cardiotrophin-1 rec. CB μg CB μg CB mg CD4 (1-150) Hu CD4 (1-150) rec. CB μg CB μg CB μg

211 CD4 ( ) Hu CD4 ( ) rec. CB μg CB μg CB mg CD4 ( ) Hu CD4 ( ) rec. CB μg CB μg CB mg CD4 (26-226) Hu CD4 (26-226) rec. CB μg CB μg CB μg CD4 ( ) Hu CD4 ( ) rec. CB μg CB μg CB μg CNTF Hu Ciliary Neurotrophic Factor rec. CB μg CB μg CB mg CTGF Hu Connective Tissue Growth Factor a.a. rec. CB μg CB μg CB mg CTGF Hu Connective Tissue Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg CTLA-4 Hu Cytotoxic T-Lymphocyte Associated Antigen-4 rec. CB μg CB μg CB mg EG-VEGF Hu Endocrine Gland Vacular Endothelial Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg HuEndoglin Hu Endoglin rec. CB μg CB μg CB μg Endoglin Sf9 Hu Endoglin, Sf9 rec. CB μg CB μg CB μg EGF 21-Leu Hu Epidermal Growth Factor 21-Leu rec. CB μg CB μg CB mg EGF Hu Epidermal Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg

212 EGF Pichia Hu Epidermal Growth Factor, Pichia rec. CB μg CB μg CB mg EPO-a Fc Hu Erythropoietin-alpha Fc/Chimera rec. CB μg CB μg CB mg EPO-a Hu Erythropoietin-alpha rec. CB μg CB μg CB mg FGF-19 Hu Fibroblast Growth Factor-19 rec. CB μg CB μg CB mg FGF-21 Hu Fibroblast Growth Factor-21 rec. CB μg CB μg CB mg FGF-21 His Hu Fibroblast Growth Factor-21, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg FGF-22 Hu Fibroblast Growth Factor-22 rec. CB μg CB μg CB mg FGF-23 Hu Fibroblast Growth Factor-23 rec. CB μg CB μg CB mg FGF-4 Hu Fibroblast Growth Factor-4 rec. CB μg FGF-9 Hu Fibroblast Growth Factor-9 rec. CB μg CB μg CB mg FGF-1 Hu Fibroblast Growth Factor-acidic rec. CB μg CB μg CB mg FGF-1 Sf9 Hu Fibroblast Growth Factor-acidic, Sf9, rec. CB μg CB μg CB mg FGF-2 Hu Fibroblast Growth Factor-basic rec. CB μg CB μg CB mg FGF-2 Sf9 Hu Fibroblast Growth Factor-basic, Sf9, rec. CB μg CB μg CB mg Flt3 Hu Flt3-Ligand rec. CB μg CB μg

213 CB mg Flt3 Sf9 Hu Flt3-Ligand Sf9 rec. CB μg CB μg CB mg FST Hu Follistatin rec. CB μg CB μg CB mg GDNF Hu Glial-Derived Neurotrophic Factor rec. CB μg CB μg CB mg GMCSF/IL3 Hu gm-csf/il-3 Fusion Protein (PIXY321) rec. CB μg CB μg CB mg GMCSF Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. CB μg CB μg CB mg GM-CSF His Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg GMCSF Pichia Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor, Pichia rec. CB μg CB μg CB mg GMCSF Sf9 Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor, Sf9 rec. CB μg CB μg CB mg GCSF Hu Granulocyte-Colony Stimulating Factor rec. CB μg CB μg CB mg GCSF CHO Hu Granulocyte-Colony Stimulating Factor, CHO rec. CB μg CB μg CB mg GCSF His Hu Granulocyte-Colony Stimulating Factor, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg GDF5 Hu Growth and Differentiation factor 5 rec. CB μg CB μg CB mg

214 GHBP Hu Growth Hormone Binding Protein rec. CB μg CB μg CB mg HGH Hu Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg HGF Sf9 Hu Hepatocyte Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg HGF CHO Hu Hepatocyte Growth Factor, CHO, rec. CB μg CB μg CB mg IGFBP-1 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-1 rec. CB μg CB μg CB mg IGFBP-3 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-3 rec. P μg P μg P mg IGFBP-5 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-5 rec. CB μg CB μg CB mg IGFBP-6 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-6 rec. CB μg CB μg CB mg IGF1 des1-3 Hu Insulin Like Growth Factor-1 Des (1-3) rec. CB μg CB μg CB mg IGF-1 Hu Insulin Like Growth Factor-1 rec. CB μg CB μg CB mg IGF-2 Hu Insulin Like Growth Factor-2 rec. CB μg CB μg CB mg Insulin Hu Insulin rec. P mg P mg IRF-1 Hu Interferon Regulatory Factor-1 rec. P g CB μg CB μg CB mg IRF-3 Hu Interferon Regulatory Factor-3 rec. CB μg CB μg CB mg IFN-a 1 Hu Interferon-alpha 1 rec. CB μg

215 CB μg CB mg IFN-a 1a Hu Interferon-alpha 1a rec. CB μg CB μg CB mg IFN-a 1b Hu Interferon-alpha 1b rec. CB μg CB μg CB mg IFN-a 2a Hu Interferon-alpha 2a rec. CB μg CB μg CB mg IFN-a 2b Hu Interferon-alpha 2b rec. CB μg CB μg CB mg IFN-a 2b Yeast Hu Interferon-alpha 2b Saccharomyces rec. CB μg CB μg CB mg IFN-b 1a Hu Interferon-beta 1a rec. P μg P μg P mg IFN-b 1b Hu Interferon-beta 1b rec. CB μg CB μg CB mg IFN-g His Hu Interferon-gamma His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IFN-g Hu Interferon-gamma rec. P μg P μg P mg IL-1a Hu Interleukin-1 alpha rec. CB μg CB μg CB mg IL-1a His Hu Interleukin-1 alpha, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-1b Hu Interleukin-1 beta rec. CB μg CB μg CB mg IL-1b His Hu Interleukin-1 beta, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-1ra Hu Interleukin-1 receptor antagonist rec. CB μg CB μg

216 CB mg IL-1ra His Hu Interleukin-1 receptor antagonist, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-10 Hu Interleukin-10 rec. CB μg CB μg CB mg IL-10 CHO Hu Interleukin-10, CHO rec. CB μg CB μg CB mg IL-10 His Hu Interleukin-10, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-11 Hu Interleukin-11 rec. CB μg CB μg CB mg IL-12 p35 His Hu Interleukin-12 p35, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-12 p40 His Hu Interleukin-12 p40, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-12 Hu Interleukin-12 rec. CB μg CB μg CB mg IL-13 Hu Interleukin-13 rec. CB μg CB μg CB mg IL-13 His Hu Interleukin-13, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-15 Hu Interleukin-15 rec. CB μg CB μg CB mg IL-15 His Hu Interleukin-15, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-16 Hu Interleukin-16 rec. CB μg CB μg CB mg IL-16, His Hu Interleukin-16, His Tag rec. CB μg

217 CB μg CB mg IL-17 Hu Interleukin-17A rec. CB μg CB μg CB mg IL-18 Hu Interleukin-18 rec. CB μg CB μg CB mg IL-19 Hu Interleukin-19 rec. CB μg CB μg CB mg IL-2 Hu Interleukin-2 rec CB μg CB μg CB mg IL-20 Hu Interleukin-20 rec. CB μg CB μg CB mg IL-21 Hu Interleukin-21 rec. CB μg CB μg CB mg IL-22 Hu Interleukin-22 rec. CB μg CB μg CB mg IL-24 Hu Interleukin-24 rec. CB μg CB μg CB mg IL-3 Hu Interleukin-3 rec. CB μg CB μg CB mg IL-3 His Hu Interleukin-3, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-3 Sf9 Hu Interleukin-3, Sf9 rec. CB μg CB μg CB mg IL-33 Hu Interleukin-33 rec. CB μg CB μg CB mg IL-4 CHO Hu Interleukin-4 CHO rec. CB μg CB μg

218 CB mg IL-4 Hu Interleukin-4 rec. CB μg CB μg CB mg IL-4 His Hu Interleukin-4, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-5 Hu Interleukin-5 rec. CB μg CB μg CB mg IL-6 Hu Interleukin-6 rec. CB μg CB μg CB mg IL-6 CHO Hu Interleukin-6, CHO rec. CB μg CB μg CB mg IL-6 His Hu Interleukin-6, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-7 Hu Interleukin-7 rec. CB μg CB μg CB mg IL-7 His Hu Interleukin-7, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IL-7 Yeast Hu Interleukin-7, Saccharomyces rec. CB μg CB μg CB mg IL-9 Hu Interleukin-9 rec. CB μg CB μg CB mg KGF Hu Keratinocye Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg KGF-2 Hu Keratinocye Growth Factor-2 rec. CB μg CB μg CB mg

219 Leptin BD Hu Leptin Binding Domain rec. CB μg CB μg CB mg Leptin qa Hu Leptin Quadruple Antagonist rec. CB μg CB μg CB mg Leptin Hu Leptin rec. CB μg CB mg CB mg Leptin ta Hu Leptin Triple Antagonist rec. CB μg CB μg CB mg Leptin His Hu Leptin, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg LeukinFeron Hu LeukinFeron CB IU CB IU CB IU LFA-3 Hu Leukocyte Function Associated Antigen-3 Fusion Protein rec. CB μg CB μg CB mg LIF Hu Lif rec. CB μg CB mg MCSF Hu Macrophage Colony Stimulating Factor rec. CB μg CB μg CB mg Hu Macrophage Migration Inhibitor Factor, His MIF His-C Tag C-Terminus rec. CB μg CB μg CB mg MIF His-N Hu Macrophage Migration Inhibitor Factor, His Tag N-Terminus rec. CB μg CB μg CB mg MIA Hu Melanoma Inhibitory Activity Protein rec. CB μg CB μg CB mg Midkine Hu Midkine rec. CB μg CB μg CB mg

220 Myostatin propetide Hu Myostatin Propeptide rec. CB μg CB μg CB mg Myostatin Hu Myostatin rec. CB μg CB μg CB mg Myostatin His Hu Myostatin, His-Tag rec. CB μg CB μg CB mg b-ngf Hu Nerve Growth Factor beta rec. CB M 5 μg CB μg CB mg NRG1 Hu Neuregulin-1/Heregulin-b2 rec. CB μg CB μg CB mg Neuroglubin Hu Neuroglobin rec. CB μg CB μg CB mg NT-3 Hu Neurotrophin-3 rec. CB μg CB μg CB mg NT-4 Hu Neurotrophin-4 rec. CB μg NOG Hu Noggin rec. CB μg CB μg CB mg Omentin Hu Omentin rec. CB μg CB μg CB mg OSM Hu Oncostatin-M rec. CB μg CB μg CB mg OPG Hu Osteoprotegerin rec. CB μg CB μg CB mg OPG His Hu Osteoprotegerin, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg Periostin Hu Periostin rec. CB μg CB μg CB mg

221 HGH 20kDa Hu Pituitary Growth Hormone 20kDa rec. CB μg CB μg CB mg PLGF-1 Hu Placenta Growth Factor-1 rec. CB μg CB μg CB mg PLGF-2 Hu Placenta Growth Factor-2 rec. CB μg CB μg CB mg HGH Placental Hu Placental Corr Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg HGH 20kDa Hu Placental Growth Hormone 20kDa rec. CB μg CB μg CB mg PDGF-A Hu Platelet Derived Growth Factor-A rec. CB μg CB μg CB mg PDGF-AA Hu Platelet Derived Growth Factor-AA rec. CB μg CB μg CB mg PDGF-AB Hu Platelet Derived Growth Factor-AB rec. CB μg CB μg CB mg PDGF-B Hu Platelet Derived Growth Factor-B rec. CB μg CB μg CB mg PDGF-BB Hu Platelet Derived Growth Factor-BB rec. CB μg CB μg CB mg PDGF-BB Yeast Hu Platelet Derived Growth Factor-BB, Yeast rec. CB μg CB μg CB mg Pleiotrophin Hu Pleiotrophin rec. CB μg CB μg CB mg Pro-BMP-2 Hu Pro Bone Morphogenetic protein-2 rec. CB μg CB μg CB μg

222 PGRN Hu Progranulin rec. CB μg CB μg CB μg Prl Hu Prolactin rec. CB μg CB μg CB mg Prl-R Hu Prolactin Receptor rec. CB μg CB μg CB μg Prl His Hu Prolactin, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg Pro-NGF Hu Pro-Nerve Growth Factor rec. CB μg CB μg CB μg RELM-b Hu RELM-beta rec. CB μg CB μg CB mg Resistin Hu Resistin rec. CB μg CB μg CB mg Resistin His Hu Resistin, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg scd4 Hu Soluble CD4 rec. RE μg RE μg RE mg scd40l Hu soluble CD40 Ligand/TRAP rec. RE μg RE μg RE mg sil-2r Hu Soluble Iinterleukin-2 Receptor alpha rec. RE μg RE μg RE mg sil-6r Hu Soluble IL-6 Receptor alpha rec. RE μg RE μg RE mg srankl Hu Soluble RANK Ligand rec. RE μg RE μg RE mg stnfri Hu Soluble Tumor Necrosis Factor Receptor Inhibitor rec. RE μg RE μg RE mg

223 SCF Hu Stem Cell Factor rec. CB μg CB μg CB mg SCF Sf9 Hu Stem Cell Factor, Sf9, rec. CB μg CB μg CB mg TPO Hu Thrombopoietin rec. CB μg CB μg CB mg TPO CHO Hu Thrombopoietin, CHO, rec. CB μg CB μg CB mg TRAIL Hu TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand/Apo2L rec. CB μg CB μg CB mg TGF-b 1 Hu Transforming Growth Factor-Beta 1 rec. CB mg CB μg CB μg TGF-b ( ) Hu Transforming Growth Factor-Beta 3 ( ) rec. CB μg CB μg CB μg TGF-b 3 Hu Transforming Growth Factor-Beta 3 rec. CB μg CB μg CB μg rhutnfr Hu Tumor Necrosis Factor Receptor Fusion Protein rec. CB μg CB μg CB mg TNF-a Hu Tumor Necrosis Factor-alpha rec. CB μg CB μg CB mg TNF-a His Hu Tumor Necrosis Factor-alpha, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg TNF-a Mutant Hu Tumor Necrosis Factor-alpha, Mutant rec. CB μg CB μg CB mg TNF-b Hu Tumor Necrosis Factor-beta rec. CB μg CB μg CB mg TNF-b His Hu Tumor Necrosis Factor-beta, His Tag rec. CB μg CB μg

224 CB mg VEGF (121) Hu Vascular Endothelial Growth Factor (121) rec. CB μg CB μg CB mg Hu Vascular Endothelial Growth Factor (121), VEGF (121) Sf9 Sf9, rec. CB μg CB μg CB mg VEGF-His Hu Vascular Endothelial Growth Factor His Tag rec. CB μg CB μg CB mg VEGF Hu Vascular Endothelial Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg VEGF-C Hu Vascular Endothelial Growth Factor Related Protein rec. CB μg CB μg CB mg VEGF CHO Hu Vascular Endothelial Growth Factor, CHO rec. CB μg CB μg CB mg VEGF Sf9 Hu Vascular Endothelial Growth Factor, Sf9 rec. CB μg CB μg CB mg VEGF-I Hu Vascular Endothelial Growth Inhibitor rec. CB μg CB μg CB mg Vaspin Hu Vaspin rec. CB μg CB μg CB mg Visfatin Hu Visfatin rec. CB μg CB μg CB mg MYSIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU mil-9 Murine Interleukin-9 rec. CB μg CB mg

225 macrp30 HEK Murine Adiponectin glycosilated, HEK rec. CB μg CB μg CB mg mgacrp30 Murine Adiponectin rec. CB μg CB μg CB mg Acrp30 Tri Murine Adiponectin Trimeric Form rec. CB μg CB μg CB mg mb-ngf Murine beta Nerve Growth Factor CB μg CB μg CB mg mendoglin Murine Endoglin rec. CB μg CB μg CB mg megf Murine Epidermal Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg mfgf-21 Murine Fibroblast Growth Factor-21 rec. CB μg CB μg CB mg mfgf-21 His Murine Fibroblast Growth Factor-21, His Tag rec. CB μg CB μg CB mg mfgf-9 Murine Fibroblast Growth Factor-9 rec. CB μg CB μg CB mg mfgf-1 Murine Fibroblast Growth Factor-acidic rec. CB μg CB μg CB mg mfgf-2 Murine Fibroblast Growth Factor-basic rec. P μg P μg P mg mflt3 Murine Flt3-Ligand rec. CB μg CB μg CB mg mgmcsf Murine Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. CB μg CB μg CB mg mgcsf Murine Granulocyte-Colony Stimulating Factor rec. CB μg CB μg

226 CB mg migf-1 Murine Insulin Like Growth Factor-1 rec. CB μg CB μg CB mg mifn-g Murine Interferon-gamma rec. CB μg CB μg CB mg mil-1a Murine Interleukin-1 alpha rec. CB μg CB μg CB mg mil-1b Murine Interleukin-1 beta rec. CB μg CB μg CB mg mil-10 Murine Interleukin-10 rec. CB μg CB μg CB mg mil-12 Murine Interleukin-12 rec. CB μg CB μg CB mg mil-13 Murine Interleukin-13 rec. P μg P μg P mg mil-15 Murine Interleukin-15 rec. CB μg CB μg CB mg mil-16 Murine Interleukin-16 rec. CB μg CB μg CB mg mil-17 Murine Interleukin-17 rec. P μg P μg P mg mil-19 Murine Interleukin-19 rec. CB μg CB μg CB mg mil-2 Murine Interleukin-2 rec. CB μg CB μg CB mg mil-20 Murine Interleukin-20 rec. CB μg CB μg CB mg mil-3 Murine Interleukin-3 rec. CB μg CB μg

227 CB mg mil-4 Murine Interleukin-4 rec. CB μg CB μg CB mg mil-6 Murine Interleukin-6 rec. CB μg CB μg CB mg mil-7 Murine Interleukin-7 rec. P μg P μg P mg mleptin Murine Leptin rec. CB μg CB mg CB mg mleptin ta Murine Leptin Triple Antagonist rec. CB μg CB μg CB mg mmcsf Murine Macrophage Colony Stimulating Factor rec. P μg P μg P mg mpdgf-bb Murine Platelet Derived Growth Factor-BB rec. CB μg CB μg CB mg mprl Murine Prolactin rec. CB μg CB μg CB mg mrelm-a Murine RELM-alpha rec. CB μg CB μg CB mg mrelm-g Murine RELM-Gamma rec. CB μg CB μg CB mg mresistin Murine Resistin rec. CB μg CB μg CB mg mscd40l Murine soluble CD40 Ligand/TRAP rec. RE μg RE μg RE mg msrankl Murine Soluble RANK Ligand rec. RE μg RE μg RE mg mscf Murine Stem Cell Factor rec. CB μg CB μg CB mg

228 mtpo Murine Thrombopoietin rec. P μg P μg P mg mtnf-a Murine Tumor Necrosis Factor-alpha rec. CB M 5 μg CB μg CB mg rmvegf Murine Vascular Endothelial Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg mvegf Sf9 Murine Vascular Endothelial Growth Factor-Sf9 rec. CB μg mvisfatin Murine Visfatin rec. CB μg CB mg CB μg CB μg CB mg SZCZURZE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU rapo-j Rat Apoliprotein-J rec. CB μg CB μg CB mg rgmcsf Rat Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. CB μg CB μg CB mg rgh Rat Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg ril-5 Rat IL-5 rec. CB μg CB μg CB mg rigf-1 Rat Insulin Like Growth Factor-1 rec. CB μg CB μg CB mg rifn-g Rat Interferon-gamma rec. CB μg CB μg CB mg ril-1a Rat Interleukin-1 alpha rec. CB μg CB μg CB mg ril-1b Rat Interleukin-1 beta rec. CB μg CB μg

229 CB mg ril-10 Rat Interleukin-10 rec. CB μg CB μg CB mg ril-12 Rat Interleukin-12 rec. CB μg CB μg CB mg ril-13 Rat Interleukin-13 rec. CB μg CB μg CB mg ril-15 Rat Interleukin-15 rec. CB μg CB μg CB mg ril-18 Rat Interleukin-18 rec. CB μg CB μg CB mg ril-2 Rat Interleukin-2 rec. CB μg CB μg CB mg ril-3 Rat Interleukin-3 rec. CB μg CB μg CB mg ril-4 Rat Interleukin-4 rec. CB μg CB μg CB mg ril-6 Rat Interleukin-6 rec. CB μg CB μg CB mg rleptin Rat Leptin rec. CB μg CB mg CB mg rleptin ta Rat Leptin Triple Antagonist rec. CB μg CB μg CB mg rprl Rat Prolactin rec. CB μg CB μg CB mg rresistin Rat Resistin rec. CB μg CB μg CB mg rscf Rat Stem Cell Factor rec. CB μg CB μg

230 CB mg rtnf-a Rat Tumor Necrosis Factor-alpha rec. CB μg CB μg CB mg rvegf Rat Vascular Endothelial Growth Factor rec. CB μg CB μg CB mg rvegf-c Rat Vascular Endothelial Growth Factor Related Protein rec. CB μg CB μg CB mg rvegf-c (152) Rat Vascular Endothelial Growth Factor-C (152) rec. CB μg CB μg CB mg INNE CYTOKINY becgs ECGS (from bovine hypothalamus) CB μg bbtc Bovine Betacellulin rec. CB μg CB μg CB mg bfgf-2 Bovine Fibroblast Growth Factor-basic rec. P μg P μg P mg bghbp Bovine Growth Hormone Binding Protein rec. CB μg CB μg CB mg binsulin Bovine Insulin CB mg CB mg CB g bleptin Bovine Leptin rec. CB μg CB μg CB mg bpl Bovine Placental Lactogen rec. CB μg CB μg CB mg bprl-r Bovine Prolactin Soluble Receptor rec. CB μg CB μg CB mg cpl Caprine Placental Lactogen rec. CB μg CB μg

231 CB mg cgh Carprine Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg chgh Chicken Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg chleptin BD Chicken Leptin Binding Domain rec. CB μg CB μg CB mg chleptin Chicken Leptin rec. CB μg CB μg CB mg dgh Denis Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg digf-1 Denis Insulin Like Growth Factor-1 rec. CB μg CB μg CB mg dleptin Dog Leptin rec. CB μg CB μg CB mg hleptin Horse Leptin rec. CB μg CB μg CB mg ogh-a Ovine Growth Hormone Anatagonist rec. CB μg CB μg CB mg oghbp Ovine Growth Hormone Binding Protein rec. CB μg CB μg CB mg ogh Ovine Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg oifn-tau Ovine Interferon-Tau rec. CB μg CB μg CB mg oleptin qa Ovine Leptin Quadruple Antagonist rec. CB μg CB μg CB mg oleptin Ovine Leptin rec. CB μg CB μg

232 CB mg oleptin ta Ovine Leptin Triple Antagonist rec. CB μg CB μg CB mg opl Ovine Placental Lactogen rec. CB μg CB μg CB mg oprl-a Ovine Prolactin Antagonist rec. CB μg CB μg CB mg roprl Ovine Prolactin rec. CB μg CB μg CB mg oprl-r Ovine Prolactin Soluble Receptor rec. CB μg CB μg CB mg pgmcsf Porcine Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. CB μg CB μg CB mg pgh Porcine Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg phgf Porcine Hepatocyte Promoting Growth Factor CB μg CB μg CB mg pinsulin Porcine Insulin CB mg CB mg CB g pifn-g Porcine Interferon-gamma rec. CB μg CB μg CB mg pil-1a Porcine Interleukin-1 alpha rec. CB μg CB μg CB mg pil-1b Porcine Interleukin-1 beta rec. CB μg CB μg CB mg pil-10 Porcine Interleukin-10 rec. CB μg CB μg CB mg pil-15 Porcine Interleukin-15 rec. CB μg CB μg CB mg

233 pil-2 Porcine Interleukin-2 rec. CB μg CB μg CB mg pil-4 Porcine Interleukin-4 rec. CB μg CB μg CB mg pil-6 Porcine Interleukin-6 rec. CB μg CB μg CB mg pleptin Porcine Leptin rec. CB μg CB μg CB mg rptnf-a Porcine Tumor Necrosis Factor-alpha rec. CB μg CB μg CB mg ragh Rabbit Growth Hormone rec. CB μg CB μg CB mg raleptin Rabbit Leptin rec. CB μg CB μg CB mg rprl Rabbit Prolactin rec. CB μg CB μg CB mg raprl-r Rabbit Prolactin Soluble Receptor rec. CB μg CB μg CB mg 6.2. CHEMOKINY LUDZKIE CHEMOKINY ENA-78 Hu Epithelial Neutrophil-Activating Protein 78 (CXCL5) rec. CB μg CB μg CB mg Eotaxin Hu Eotaxin (CCL11) rec. CB μg CB μg CB mg Eotaxin His Hu Eotaxin (CCL11), His Tag rec. CB μg CB μg

234 CB mg Exodus-2 Hu Exodus-2 (CCL21) rec. P μg P μg P mg Fractalkine Hu Fractalkine (CX3CL1) rec. CB μg CB μg CB mg GRO-a Hu GRO-alpha (CXCL1) rec. CB μg CB μg CB mg GRO-b Hu GRO-beta/MIP-2 (CXCL2) rec. CB μg CB μg CB mg GRO-g Hu GRO-gamma (CXCL3) rec. CB μg CB μg CB mg HCC-1 Hu HCC-1 (CCL14) rec. CB μg CB μg CB mg I-309 Hu I-309 (CCL10 rec. CB μg CB μg CB mg IL-8 (1-72) Hu Interleuikin-8 (1-72) (CXCL8) rec. CB μg CB μg CB mg IL-8 (1-77) Hu Interleuikin-8 (1-77) (CXCL8) rec. CB μg CB μg CB mg IL-8 (1-77) His Hu Interleuikin-8 (1-77) (CXCL8), His Tag rec. CB μg CB μg CB mg IP-10 Hu IP-10 (CXCL10) rec. CB μg CB μg CB mg IP-10 His Hu IP-10 (CXCL10), His Tag rec. CB μg CB μg CB mg I-TAC Hu I-TAC (CXCL11) rec. P μg P μg P mg I-TAC His Hu I-TAC (CXCL11), His Tag rec. CB μg

235 CB μg CB mg Lymphotactin Hu Lymphotactin (XCL1) rec. CB μg CB μg CB mg Hu Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3) MIP-1a rec. CB μg CB μg CB mg MIP-1a His Hu Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3), His Tag rec. CB μg CB μg CB mg MIP-1b Hu Macrophage Inflammatory protein-1 beta (CCL4) rec. CB μg CB μg CB mg MIP-3b Hu Macrophage Inflammatory protein-3 beta (CCL19) rec. CB μg CB μg CB mg MIP-4 Hu Macrophage Inflammatory protein-4 (CCL18) rec. CB μg CB μg CB mg MIG Hu MIG (CXCL9) rec. P μg P μg P mg MCP- 1/MCAF Hu Monocyte Chemotactic Protein-1/MCAF (CCL2) rec. CB μg CB μg CB mg rmcp-2 Hu Monocyte Chemotactic Protein-2 (CCL8) rec. CB μg CB μg CB mg rmcp-3 Hu Monocyte Chemotactic Protein-3 (CCL7) rec. CB μg CB μg CB mg MCP-4 Hu Monocyte Chemotactic Protein-4 (CCL13) rec. CB μg CB μg CB mg NAP-2 Hu Neutrophil Activating Protein-2 (CXCL7) rec. CB μg CB μg CB mg PF-4 Hu Platelet Factor-4 (CXCL4) CB μg CB μg

236 CB mg Rantes Hu Rantes (CCL5) rec. CB μg CB μg CB mg SDF-1a Hu Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha (CXCL12) rec. CB μg CB μg CB mg SDF-1b Hu Stromal Cell-Derived Factor-1 beta (CXCL12) rec. CB μg CB μg CB mg MYSIE CHEMIKINY mc-10 Murine C-10 (CCL6) rec. CB μg CB μg CB mg meotaxin Murine Eotaxin (CCL11) rec. CB μg CB μg CB mg mkc Murine GRO/KC (CXCL1) rec. CB μg CB μg CB mg mgro-b Murine GRO-beta/MIP-2 (CXCL2) rec. CB μg CB μg CB mg mip-10 Murine IP-10 (CXCL10) rec. CB μg CB μg CB mg mmip-1 a Murine Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3) rec. CB μg CB μg CB mg mmip-3 b Murine Macrophage Inflammatory protein-3 beta (CCL19) rec. CB μg CB μg CB mg rmmig Murine MIG (CXCL9) rec. CB μg CB μg CB mg mmcp-1 Murine Monocyte Chemotactic Protein-1 (CCL2) rec. CB μg CB μg CB mg mmcp-3 Murine Monocyte Chemotactic Protein-3 (CCL7) rec. CB μg

237 msdf-1a msdf-1b CB μg CB mg Murine Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha (CXCL12) rec. CB μg CB μg CB mg Murine Stromal Cell-Derived Factor-1 beta (CXCL12) rec. CB μg CB μg CB mg Pozostałe cytokiny Skrót Opis Nr kat. Rozmiar pil-8 (1-72) Porcine Interleuikin-8 (1-72) (CXCL8) rec. CB μg CB μg CB mg rgro-b Rat GRO-beta/MIP-2 (CXCL2) rec. CB μg CB μg CB mg rmip-1a Rat Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3) rec. CB μg CB μg CB mg rmcp-1 Rat Monocyte Chemotactic Protein-1 (CCL2) rec. CB μg CB μg CB mg

238 7. BIOLOGIA MOLEKULARNA 7.1.POLIMERAZY Taq Polimeraza DNA Opis: Polimeraza Taq jest termo-stabilnym kompleksem polimerazy DNA otrzymywana w oryginalym procesie izolacji polimeraz DNA. Bufor do przechowywania i rozcieńczania 20 mm Tris-HCl (ph 8.0), 100 mm KCl, 0.1 mm EDTA, 1 mm DTT, 50% glicerol, 0.5% i 0,5 Nonidet P40 i 0.5% Tween 20. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która włącza 10 nmoli dntp we frakcję nierozpuszczalną w kwasie w 30 minut w temperaturze 72 C w standardowych warunkach: 25 mm TAPS (tris-(hydrooxymethyl)-methyl-amino-propansulfonic acid, sodium salt) ph 9,3 (w 25 C), 50 mm KCl, 2 mm 50 mm MgCl 2, 1 mm -merkaptoetanolu, po 200 µm datp, dgtp, dttp, 100 µm dctp (mieszaniana znakowanego P32 i nieznakowanego), 12.5 µg DNA z aktywowanej spermy łososia, w końcowej objętości 50 µl. Dołaczone bufory (zamiennie bufor pełny lub niepełny) - 10x PCR buffer with MgCl 2 : Stabilność Enzym ten jest stabilny przez ponad 12 miesięcy, jeśli jest przechowywany w temperaturze - 20 C. Enzym ten jest również stabilny przez kilka dni w temperaturze powyżej 20 C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg natywnego DNA lambda i 0,22 µg DNA lambda trawionego EcoRI w temperaturze 72 C w obecności jednostek Taq Polimerazy DNA. Właściwości i zastosowanie: Taq Polimeraza DNA jest termostabilną polimerazą DNA z T. aquaticus o wysokiej czystości z dobrą wiernością i wysoką wydajnością.

239 Taq DNA Polymerase with buffer and MgCl2 250 units MB Taq DNA Polymerase with buffer and MgCl with Phenol red 250 units MB PANScript Polimeraza DNA Właściwości i zastosowanie Powtarzalne wyniki Polimeraza Premium Taq nadaje się do szerokiego zakresu zastosowań Działanie przy fragmentach do 5Kb Pozostawia wolny koniec A Dostępny w postaci gotowej do użycia 2x mieszaniny reakcyjnej (PAN Mix i PAN Mix red) Rutynowe aplikacje PCR Produkty odpowiednie do klonowania TA PANScript jest powszechnie wykorzystywany przez biologów molekularnych którzy mogą polegać na jego solidnym działaniu. PANScript jest wysoce oczyszczoną termostabilną polimerazą DNA oferującą bardzo wysoką wydajność dla szerokiego zakresu matryc PCR i jest idealnym wyborem dla większości testów. PanScript zapewnia wysoką wydajność przy minimalnym tle. PANScript posiada aktywność 5 '- 3 ' egzonukleazy i pozostawia koniec A przez co produkt PCR może zostać wykorzystany do klonowania wektorów TA. PANScript dostarczany jest z 10-krotnym buforem do reakcji opartym na NH 4, który zapewnia optymalne warunki dla większości eksperymentów. Dodatkowe MgCl 2 pozwala na dostosowanie warunków reakcji do matrycy. Specyfika i wydajność PANScript można dodatkowo poprawić za pomocą dodatku 2x PAN Mate Additive (Nr kat. PAN737041), który jest przeznaczony dla DNA bogatego w GC lub AT, albo dla sekwencji z wysokim poziomem struktur drugorzędowych. PANScript Polimeraza DNA jest oczyszczana z Thermus aquaticus.

240 Warunki przechowywania PANScript może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 2 i po 1 godzinie inkubacji dlaodpowiednio - 1 µg natywnego DNA lambda i 0,22 µg DNA lambda trawionego EcoRI w temperaturze 72 C w obecności jednostek PANScript polimerazy DNA. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która włącza 10 nmoli dntp we frakcję nierozpuszczalną w kwasie w 30 minut w temperaturze 72 C. PANScript DNA-Polymerase 500 units MB units MB PANScript red Polimerazy DNA Opis Właściwości i zastosowanie: Łatwe rozpoznanie wzrokowe Bezpośrednie podawanie na żel agarozowy Równie wysoka wydajność jak w przypadku polimerazy DNA PANScript Pozostawia wolny koniec A Dostępny jako gotowa do użycia 2x mieszanina reakcyjna (PAN Mix Red) Rutynowe testy PCR Produkt odpowiedni do klonowania TA Wysoka wydajność Polimeraza DNA PANScript Red jest preparatem z grupy polimeraz DNA PANScript, który zawiera nietoksyczny i nieszkodliwy czerwony barwnik. Barwnik ten umożliwia łatwe i szybkie określenie reakcji w której to został dodany enzym, a także ułatwia potwierdzenia całkowitego

241 wymieszania. Po zakończeniu reakcji, próbki mieszaniny reakcyjnej mogą być bezpośrednio naniesione na żel agarozowy bez potrzeby dodawania dodatkowego buforu do nakładania gdyż mieszanka ma wystarczająco wysoką gęstość aby opadła na dno żelu. Czerwony barwnik migruje w kierunku dodatniej elektrody, zapewniając w ten sposób możliwość monitorowania postępu elektroforezy. Obecność barwnika nie ma wpływu na rutynowe manipulacje enzymatyczne, choć zdarzają się nieliczne wyjątki. W celu uzyskania reakcji o wystarczającej gęstości tak aby umożliwić bezpośrednie aplikowanie próbki na żel, zalecamy używanie min. 1.5 jednostek na 50 µl reakcji. Polimerazę DNA PANScript oczyszczono z Thermus aquaticus. Warunki przechowywania PANScript red może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 2 i po 1 godzinie inkubacji dlaodpowiednio - 1 µg natywnego DNA lambda i 0,22 µg DNA lambda trawionego EcoRI w temperaturze 72 C w obecności jednostek PANScript polimerazy DNA. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która włącza 10 nmoli dntp we frakcję nierozpuszczalną w kwasie w 30 minut w temperaturze 72 C. PANScript red DNAPolymerases 500 units MB Polimeraza DNA PANPhusion PANPhusion jest szybką polimerazą mającą zdolność naprawy DNA, pochodzącą z archeobakterii, która twory amplikony o tępych końcach. Jej wysoka termostabilnoś ć w połączeniu z aktywnością polimerazy DNA 5-3 i aktywnością egzonukleazy korygującej 3-5 powoduje, że PANPhusion jest idealnym enzymem do wszystkich zastosowań PCR. Rzeczywiście PANPhusion charakteryzuje się wspólczynnikiem błedu 4.4 x 10-7, dając 50- krotnie większą wierność niż polimeraza DNA z Thermus aquaticus (określone przy użyciu

242 zaadaptowanego testu wierności rpsl, Mo J.Y. i wsp., J. Mol. Biol. 1991; Fuji. S. i wsp., J. Mol. Biol. 1999). Dodatkowo dzięki swojej zwiększonej wydajności PANPhusion wykazuje nie tylko wyższe wskaźniki amplifikacji aż do 66 bp/s (co odpowiada 15s/kb) ale również skutkuje wyższą wydajnością niż większość dostępnych enzymów. Bufor do przechowywania 10 mm Tris-HCl, ph 8.0, 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, glicerol i stabilizatory Warunki przechowywania PANPhusion jest przesyłany na lodzie lub suchym lodzie. Wszystkie składniki zestawu powinny być umieszczone w temperaturze -20 C po otrzymaniu przesyłki. Nie zaleca się wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dntp w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72 C. PANPhusion DNA polymerase 250 units PAN units PAN Polimerazy DNA PAN Hot Start Opis Właściwości i zastosowanie Do PCR wymagającego tzw. hot-start Doskonała wydajność w testach ilościowych Wygodne przygotowanie w temperaturze pokojowej Pozostawia fragmenty A

243 Dostępne w gotowej do użycia wersji PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red Duża przydatność przy testach w czasie rzeczywistym (real-time) Produkt odpowiedni do klonowania TA PAN Hot Start jest aktywowaną cieplnie, termostabilną polimerazą DNA. Hot Start zapewnia lepszą specyfikę w porównaniu do standardowej polimerazy i eliminuje obecność niespecyficznych fragmentów. PAN Hot Start jest nieaktywny w temperaturze pokojowej, a zatem przed rozpoczęciem reakcji PCR wymaga aktywacji poprzez ogrzanie przez 10 minut. Następnie można prowadzić reakcję według istniejących protokołów postępowania z termostabilną polimerazą DNA. Specyfika i wydajność PAN Hot Start można dodatkowo poprawić za pomocą 2x PAN Mate Additive (Nr kat.pan737041), który jest przeznaczony do fragmentów DNA bogatych w GC lub AT, lub o wysokim poziomie występowania struktur drugorzędowych. Warunki przechowywania PAN Hot Start może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Bufory do rozcieńczeń i przechowywania 20 mm Tris-HCl, ph 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pbr322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72 C w obecności 20 jednostek PAN Hot Start Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dntp w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72 C. PAN Hot Start DNA Polymerase 250 units MB units MB units MB

244 PowerScript DNA-Polymerases short range (Polimeraza DNA PowerScript do krótkich fragmentów DNA) Właściwości i zastosowanie Idealna do problematycznych matryc, w których zwykła polimeraza Taq DNA nie zdaje egzaminu Idealna do fragmentów o długości do 5Kb Większa wierność niż w przypadku Taq Wysoka wierność PCR Nadaje się zarówno do klonowania TA jak i tępych końców Polimeraza DNA PowerScript short jest wysokowydajnym kompleksem enzymów zaprojektowanym dla szczególnie trudnych / problematycznych zastosowań wymagających wysokiej wierności PCR, których nie można przeprowadzić przy użyciu zwykłej polimerazy Taq. Polimeraza ta jest zalecana dla krótkich fragmentów DNA genomowego do 3 Kb, lub do 5 Kb w przypadku DNA Lambda. Specyfikacja odczynników 5x Hi-Spec Additive jest dodatkiem wzmacniającym specyfikę. Jeśli to konieczne, ponownie rozpuścić Hi-Spec przez ogrzewanie do 70 C i wytrząsanie (vortex). Bufor 20 mm Tris-HCl, ph 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory. Warunki przechowywania Polimeraza DNA PowerScript short może być przechowywana przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pbr322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72 C w obecności 20 jednostek PowerScipt short.

245 Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dntp w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72 C. PowerScript DNAPolymerases short range 250 units PAN units PAN PowerScript long DNA Polymerase (Polimeraza do długich fragmentów DNA) Opis Właściwości i zastosowanie Idealna do problematycznych matryc, w których typowe polimerazy Taq DNA nie zdaję egzaminu Idealna dla fragmentów o długości 2-20 Kb Większa wierność niż Taq Dostępna jako gotowa do użytku mieszanina reakcyjna (2x) Odpowiednia do PCR o wysokiej wierności Nadaje się zarówno do klonowania TA jak i tępych końców Polimeraza DNA PowerScript long jest wysokowydajnym kompleksem enzymów zaprojektowanym dla szczególnie trudnych / problematycznych matryc wymagających wysokiej wierności PCR, których nie można przeprowadzić przy użyciu zwykłej polimerazy Taq. Polimeraza DNA PowerScript long jest zalecana dla długich fragmentów genomowego DNA: od 2 do 20 Kb lub do 30 Kb fragmentów DNA Lambda. Przy pracy z DNA Lambda, najlepsze wyniki osiąga się w zakresie 2-20 Kb. PowerScipt Long jest naszą oryginalną recepturą. Specyfikacja odczynników 5x Hi-Spec Additive jest dodatkiem wzmacniającym specyfikę. Jeśli to konieczne, ponownie rozpuścić Hi-Spec przez ogrzewanie do 70 C i wytrząsanie (vortex). Bufor do przechowywania 20 mm Tris-HCl, ph 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory.

246 Warunki przechowywania Polimeraza DNA PowerScript short może być przechowywana przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pbr322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72 C w obecności 20 jednostek PowerScipt short. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dntp w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72 C. PowerScript DNA-Polymerase long range 250 units MB units MB Polimerazy DNA TrueScript Właściwości i zastosowanie Wysoka wierność w połączeniu z wysoką wydajnością Amplifikowane fragmenty do 5 Kb Bardzo wysoka wierność w późniejszym klonowaniu Klonowanie tępych końców Zgodny z DHPLC (wolny od detergentów) TrueScript jest termostabilnym enzymem posiadającym działanie 5 '- 3 ' polimerazy DNA i 3 '- 5 ' działanie egzonukleazy korygującej, oferującym wysoką wierność. TrueScript pozostawia produkty PCR o tępych końcach, do długości 5Kb. TrueScript dostarczany jest z 10-krotnym Bufor reakcyjny zawierającym MgSO 4, który zapewnia optymalne warunki reakcji końcowej (1,5 mm Mg 2+ ) w większości eksperymentów. W celu uzyskania optymalizacji warunków reakcji, dodatkowo dostarczany jest MgCl 2. Specyfika i wydajność TrueScript można dodatkowo poprawić za pomocą 2x PAN Mate Additive (Nr kat. PAN737041), który jest przeznaczony do DNA bogatego w GC lub AT, czy też o wysokim poziomie występowania struktur drugorzędowych.

247 Bufor 20 mm Tris-HCl, ph 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory. Warunki przechowywania TrueScript może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pbr322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72 C w obecności 20 jednostek Truescript. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dntp w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72 C. TrueScript DNA-Polymerases 250 units MB units MB Polimerazy DNA PAN Mix Opis Właściwości i zastosowanie Wygodny, wstępnie wymieszany i zoptymalizowany dwukrotnie stężony roztwór Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia Znacznie zmniejsza czas potrzebny na przygotowanie reakcji Powtarzalność wyników Bezpośrednia aplikacja na żel Rutynowe aplikacje PCR Produkt odpowiedni do klonowania TA Wysoka wydajność PAN Mix jest kompletną gotową do użycia mieszaniną reakcyjną zawierającą niezwykle stabilną polimerazę Taq DNA. Opracowana została pod kątem reakcji PCR z wielu popularnych matryc genomowych i cdna; użytkownik musi jedynie przed użyciem dodać wodę, matrycę i startery. PAN Mix znacznie skraca czas potrzebny do przygotowania reakcji i tym samym zmniejsza ryzyko zakażenia. Zapewniona jest większa powtarzalność wyników poprzez zmniejszenie liczby etapów pipetowania które mogą prowadzić do błędów. PAN Mix został zoptymalizowany dla wielu różnych matryc, jednak odatkowo został załączony roztwór 50mM MgCl 2 jeżeli byłoby konieczne jeszcze dokładniejsze dostosowanie.

248 Warunki przechowywania PAN Mix może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20 C lub do 2 tygodni w temperaturze +4 C. Powinno się unikać cyklicznego powtarzania zamrażania i rozmrażania. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pbr322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72 C w obecności 20 jednostek PAN Mix. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wbudowuje 10 nmoli dntp w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72 C. PAN Mix DNA-Polymerases 100 reactions MB reactions MB Polimerazy DNA PAN Mix red Opis Właściwości i zastosowanie Wygodny, wstępnie wymieszany i zoptymalizowany dwukrotnie stężony roztwór Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia Znacznie zmniejsza czas potrzebny na przygotowanie reakcji Powtarzalność wyników Bezpośrednia aplikacja na żel Rutynowe aplikacje PCR Produkt odpowiedni do klonowania TA Wysoka wydajność

249 PAN Mix red jest kompletną gotową do użycia mieszaniną reakcyjną zawierającą niezwykle stabilną polimerazę Taq DNA. Zawiera dodatkowo obojętny czerwony barwnik, który umożliwia łatwą i bezpośrednią aplikację do żelu. Nie ma potrzeby dodawania buforu do ładowania próbek gdyż mieszanina jest wystarczająco gęsta aby osiąść w żelu. PAN Mix red został opracowany pod kątem reakcji PCR z wielu popularnych matryc genomowych i cdna; użytkownik musi jedynie przed użyciem dodać wodę, matrycę i startery. Znacznie skraca to czas potrzebny do rozpoczęcia reakcji i zmniejsza ryzyko zakażenia. Zapewniona jest większa powtarzalność wyników poprzez zmniejszenie liczby etapów pipetowania które mogą prowadzić do błędów. PAN Mix Red został zoptymalizowany dla wielu różnych matryc, jednak dodatkowo został załączony roztwór 50mM MgCl 2 jeżeli byłoby konieczne jeszcze dokładniejsze dostosowanie. Warunki przechowywania PAN Mix red może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20 C lub do 2 tygodni w temperaturze +4 C. Powinno się unikać cyklicznego powtarzania zamrażania i rozmrażania. PAN Mix red DNA-Polymerases 100 reactions 100 reakcji MB reakcji MB PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red Opis Właściwości i zastosowanie Równie wysoka specyfika i wydajność jak w przypadku polimerazy PAN Hot Start DNA Większa specyfika i zredukowane tło Wygodny, wstępnie wymieszany i zoptymalizowany Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia Znacznie zmniejsza czas potrzebny na przygotowanie reakcji Powtarzalne wyników Produkt odpowiedni do klonowania TA Bardzo wysoka specyfika w reakcjach multiplex

250 PAN Hot Mix jest kompletną gotową do użycia dwukrotnie stężoną mieszaniną reakcyjną, która przed użyciem wymaga dodania wody, matrycy i starterów a następnie podgrzania do temperatury 95 C przez 10 minut. 10-cio minutowa aktywacja eliminuje obecność niespecyficznych produktów gdyż enzym nie jest aktywny w niższych temperaturach. PAN Hot Mix Red łączy w sobie wszystkie cechy i zalety PAN Hot Mix i zawiera dodatkowo obojętny, nietoksyczny i nieszkodliwy czerwony barwnik, który umożliwia łatwą i bezpośrednią aplikację próbek bezpośrednio na żel. Nie ma potrzeby dodawania buforu do nanoszenia próbek gdyż mieszanina jest wystarczająco gęsta aby osiąść w żelu, zapewnia również odpowiednie wymieszanie składników. PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red są oparte o naszą polimerazę DNA PAN Hot Start, która pozostawia wolne fragmenty A i która została zoptymalizowana dla wielu różnych matryc. Dodatkowo został załączony roztwór 50mM MgCl 2 jeżeli byłoby konieczne jeszcze dokładniejsze dostosowanie. PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red znacznie skraca czas potrzebny do przygotowania reakcji i zmniejsza ryzyko zakażenia. Zapewniona jest większa powtarzalność wyników poprzez zmniejszenie liczby etapów pipetowania które mogą prowadzić do błędów. Warunki przechowywania PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze - 20 C lub do 2 tygodni w temperaturze +4 C. Powinno się unikać cyklicznego powtarzania zamrażania i rozmrażania. PAN Hot Mix 100 reakcji PAN reakcji PAN PAN HotMix red 100 reakcji PAN reakcji PAN725022

251 7.2 ENZYMY MODYFIKUJĄCE PAN Ligation Kit (Zestaw do ligacji) Opis Właściwości i zastosowanie Znacznie zmniejsza czas potrzebny do klonowania DNA Szybka 5 do 15 minutowa procedura w temperaturze pokojowej Wydajna i niezawodna ligacja lepkich i tępych końców DNA Brak spadku wydajności transformacji Klonowanie DNA: fragmenty PCR, plazmidowe, kosmidowe, genomowe i wirusowe DNA Ligacja łączników Ponowna ligacja zlinearyzowanych plazmidów Ligacja dwuniciowych nukleotydów w wektory (plazmidowe i fagowe) PAN Ligation jest przeznaczony do wykonywania szybkiej i wydajnej ligacji zarówno lepkich jak i tępych końców DNA w temperaturze pokojowej. PAN Ligation jest ligazą T4 DNA, która została zmutowana w celu poprawy aktywności enzymu i zawiera specjalnie opracowany 4x PAN Ligation Buffer. Enzym katalizuje połączenie dwóch nici DNA pomiędzy końcem 5-fosforanowym a 3 - hydroksylowym sąsiednich grup nukleotydów zarówno tępych jak i lepkich końców. PAN Ligation liguje 99% lepkich końców /HindIII, lub 80% tępych końców /EcoRV w temperaturze pokojowej w 5 minut. 100% ligacki tępych końców można osiągnąć przez wydłużenie czasu ligacji do 15 minut w temperaturze pokojowej. Warunki przechowywania PAN Ligation Kit może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Bufor 10 mm Tris-HCl, ph 7.4, 100 mm NaCl, 1 mm DTT, 0.1 mm EDTA oraz 50% gliceryny. Warunki testu Q/C Każda partia PAN Ligation jest testowana pod kątem ligacji w pojedynczy prążek produktów trawienia DNA Labda zarówno przez HindIII jaki i EcoRV. Zligowane DNA jest następnie ponownie cięte aby upewnić się że nie zaszły zmiany we wzorze restrykcji.

252 PAN Ligation Kit 50 reactions 100 reakcji MB MB Proteinaza K Opis Właściwości i zastosowanie Szerokie spektrum proteazy seryny Aktywna w warunkach denaturujących Stabilność przy wysokich temperaturach Dostępna w postaci proszku i stabilizowanego stężonego roztworu Inaktywacja RNaz i DNaz podczas ekstrakcji kwasów nukleinowych Modyfikacja białek Trawienie białek Określenie lokalizacji enzymu Proteinaza K jest enzymem używanym do trawienia białek w większości technik biologii molekularnej. Enzym ten może być stosowany w 56 C do 4 godzin lub w 37 C przez całonocną inkubację. Proteinaza K jest stabilna, a wraz ze specjalnie opracowanym buforem może być użyta bezpośrednio po wyjęciu z zamrażarki. Zalecenia dotyczące stosowania - Rozpuścić 20 mg/ml w 50 mm Tris-HCl, 2 mm octanu wapnia, ph Proteinaza K może być stosowana w temperaturze 56 C do 4 godzin lub 37 C przez całonocną inkubację. - Proteinaza K posiada optymalne ph Aby usunąć zanieczyszczenia z preparatów kwasu nukleinowego używać w stężeniu roboczym 5 µg/ml Warunki przechowywania Proteinaza K może być przechowywana przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Zanieczyszczenia: Aktywność RNaz: Nie wykryto aktywności rybonukleaz na MS2RNA po 6-o godzinnej inkubacji w 37 C Aktywność DNaz: Nie wykryto aktywności na pbr322 po 6-o godzinnej inkubacji w 37 C Definicja jednostki: Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu która uwolni 1.0 µmol tyrozyny na minutę w 37 C, ph 7.5 Proteinase K 100 mg MB

253 7.3. MARKERY MASY CZĄSTECZKOWEJ PANLadder I Opis Właściwości 14 prążków od 200 bp do bp Dokładne wyznaczanie ilościowe Łatwe w identyfikacji Gotowe do użycia PANLadder I to popularny gotowy do użycia marker masy cząsteczkowej, specjalnie zaprojektowany do łatwego ilościowego oznaczania DNA jak i wyznaczania wielkości cząsteczek. Zestaw ten jest gotowy do użycia, co zapewnia oszczędność czasu, Należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder I tworzy wzór 14 równomiernie rozmieszczonych prążków o wielkości od 200 do bp. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążki o wielkości 1000 i bp mają najwyższą intensywność. Jeżeli używana jest standardowa objętoś ć 5 µl na jedną ścieżkę (720 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorm nie należy go używać do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder może być przechowywany w temperaturze -20 C do pierwszego użycia, a następnie w temperaturze +4 C do 6 miesięcy. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. PANLadder I 200 lanes PAN lanes PAN733026

254 7.3.2.PANLadder IV Opis Właściwości 10 prążków od 100 bp do 1000 bp Dokładne wyznaczanie ilościowe Łatwe w identyfikacji Gotowe do użycia PANLadder IV jest gotowym do użycia markerem mas cząsteczkowych, specjalnie zaprojektowanym do łatwego oznaczania ilościowego i ustalania wielkości. Zestaw ten jest gotowy do użycia i należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder IV tworzy wzór 10 równomiernie rozmieszczonych prążków od 100 bp do 1000 bp. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążek o wielkości 1000bp ma najwyższą intensywność. Każdy prążek jest dokładną wielokrotnością 100bp. Jeżeli używana jest standardowa objętoś ć 5 µl na jedną ścieżkę (580 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorm nie należy go używać do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder IV może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20 C lub do 12 miesięcy w temperaturze +4 C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Zaleca się wymieszanie na worteksie przed użyciem. PANLadder IV 200 lanes PAN lanes PAN733030

255 PANLadder V Właściwości 12 prążków od 25 bp do 500 bp Dokładne wyznaczanie ilościowe Łatwe w identyfikacji Gotowe do użycia PANLadder V jest gotowym do użycia markerem mas cząsteczkowych, specjalnie zaprojektowanym do łatwego oznaczania ilościowego i ustalania wielkości fragmentów DNA. Jest on przeznaczony specjalnie dla krótkich fragmentów, takich jak oligonukleotydy apoptotycznego DNA. Zestaw ten jest gotowy do użycia co pozwala na zaoszczędzenie czasu. Należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder V tworzy wzór 12 równomiernie rozmieszczonych prążków od 25 pb do 500 pb. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążki o wielkości 100 i 200 bp mają najwyższą intensywność. Jeżeli używana jest standardowa objętoś ć 5 µl na jedną ścieżkę (960 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorm nie należy go używać do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder V może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20 C lub do 12 miesięcy w temperaturze +4 C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Zaleca się wymieszanie na wytrząsarce (vortex) przed użyciem. PANLadder V 200 lanes PAN lanes PAN733032

256 7.3.4.PANLadder VI Właściwości 10 prążków od 10,090 bp do 48,500 bp Dokładne wyznaczanie ilościowe Łatwe w identyfikacji i orientacji Gotowe do użycia Tylko do elektroforezy pulsacyjnej PANLadder VI jest gotowym do użycia markerem masy cząsteczkowej, specjalnie zaprojektowanym do łatwego oznaczania ilościowego i oznaczania wielkości. Konieczne jest zastosowanie elektroforezy pulsacyjnej dla jak najlepszego rozdzielenia fragmentów od 29950bp do 48500bp. Zestaw ten jest gotowy do użycia i zapewnia oszczędność czasu. Należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder VI tworzy wzór 10 równomiernie rozmieszczonych prążków od 10,090 bp do 48,500 bp. Jeżeli używana jest standardowa objętość 10 µl na jedną ścieżkę (922 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążek o wielkości ma najwyższą intensywność. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorem nie należy używać go do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder VI może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20 C lub do 12 miesięcy w temperaturze +4 C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Zaleca się wymieszanie na wytrząsarce (vortex) przed użyciem. PANLadder VI 200 lanes PAN lanes PAN733034

257 7.4.ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ PAN DNA Clean Opis Właściwości i zastosowanie Bezkolumnowe oczyszczanie produktów PCR Odzysk do 98% po PCR Ekonomiczna, prosta i szybka metoda Produkty nadają się natychmiast do dalszych procesów Usuwa startery, dimery starterów, dntp i enzymy restrykcyjne Do oczyszczania lub zatężania DNA lub dsrna PAN DNA Clean jest nowatorskim, niedrogim rozwiązaniem, które zapewnia bezkolumnowy sposób oczyszczania kwasu nukleinowego. Umożliwia łatwą i szybką procedurę oczyszczania. PAN DNA Clean może być stosowany do oczyszczania lub zatężania DNA lub dsrna z produktów reakcji PCR lub trawienia enzymatycznego. Metoda ta jest łatwa i łączy wygodę, szybkość i doskonały odzysk. Prosta, wygodna i bezkolumnowa metoda PAN DNA Clean usuwa białka (takie jak enzymy restrykcyjne, polimerazy itp.) startery, dimery starterów i dntp. Bardzo prosta metoda użytkowania pozwala na wytrącania kwasów nukleinowych 75 bp bez potrzeby używania rozpuszczalników organicznych czy kosztownych kolumn. W przeciwieństwie do wielu metod opartych na oczyszczaniu kolumnowym, PAN DNA clean maksymalizuje odzysk z roztworów kwasów nukleinowych niezależnie od ich stężenia. PAN DNA Clean oczyszcza kwasy nukleinowe bez wykorzystywania soli chaotropowych (co często przyczynia się do denaturacji dupleksów DNA). PAN DNA Clean umożliwia użytkownikowi ponowne zawieszenie oczyszczonego kwasu nukleinowego w dowolnym buforze o dowolnej objętości pozwalając tym samym na dostosowanie procesu oczyszczania do potrzeb eksperymentu. Optymalizacja odzysku kwasów nukleinowych PAN DNA Clean został zaprojektowany aby zmaksymalizować odzysk kwasu nukleinowego po oczyszczeniu, zapewniając nawet do 98% odzysku oryginalnej próbki do dalszych procesów, takich jak klonowanie czy sekwencjonowanie. PAN DNA Clean wykazuje dużą uniwersalność, osiągając niezrównany poziom odzysku, niezależnie od ilości kwasów nukleinowych i stężenia. Warunki przechowywania PAN DNA Clean może być przechowywany w temperaturze pokojowej przez 12 miesięcy. Nie zamrażać. Unikać ekspozycji na światło.

258 PAN DNA Clean 1 x 5ml PAN x 12,5 ml PAN PAN Dye Enhancer Właściwości Redukcja kosztów sekwencjonowania Gotowy do użycia Nie wymaga optymalizacji Auto-sekwencjonowanie plazmidów i matryc PCR PAN Dye Enhancer zmniejsza koszty związane z auto - sekwencjonowaniem poprzez zmniejszenie ilości znakowanego terminatora potrzebnego w reakcji. Reakcje autosekwencjonowania mogą pozostawić do 80% niewykorzystanego znakowanych terminatorów, które zwykle wymagają usunięcia przed sekwencjonowaniem. PAN Dye Enhancer działa zapewniając optymalne warunki buforu, co pozwala nawet na 5-krotne rozcieńczenie znakowanego terminatore bez straty jakości sekwencjonowania. PAN Dye Enhancer nadaje się do sekwencjonowanie plazmidów i matryc PCR i nie wymaga optymalizacji. W przypadku niektórych matryc może być konieczne dostosowanie współczynnika rozcieńczenia. Warunki przechowywania PAN Dye Enhancer może być przechowywany przez 6 miesięcy w temperaturze -20 C.

259 PAN Dye Enhancer 250 templates MB templates MB X-Gal Opis Właściwości i zastosowanie Bardzo czyste, 99,5% (oczyszczanie przez TLC) Intensywny niebieski osad po hydrolizie Niebieskie / Białe systemy klonowania Immunoblotting Testy Immunocytochemiczne Podłoża do mikrobiologii i hodowli komórkowych 5-bromo-4-chloro-3-indolyl -D-galactopyranozyd (X-GAL) jest chromogennym substratem - galaktozydazy, który tworzy intensywnie niebieski osad. Może być używany w biologii molekularnej do wykrywania produktów genu gal, a także w mikrobiologii, gdzie jest używany do wykrywania mikroorganizmów które wykazują aktywność -galaktozydazy (zazwyczaj bakterii coli). Może być łączony z R-substratami do rozróżnienia dwóch gatunków organizmów na tej samej płytce. X-GAL jest rozpuszczalny w N, N-dimetyloformamidzie. Warunki przechowywania X-GAL może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20 C. Przechowywać chroniąc przed światłem.

260 X-Gal 1 g MB IPTG Opis Właściwości i zastosowanie Indukuje aktywność operonu laktozowego E. coli > 99,6% (za pomocą HPLC) Dostępne w postaci proszku i stabilizowanego stężonego roztworu Klasyfikacja na podstawie koloru (niebieski / biały) Indukcja operonu laktozowego dla ekspresji białka W obecności IPTG następuje wysoka ekspresja genów kontrolowanych przez sekwencje promotorowe / operatorowe lac lub tac. Isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside (IPTG) jest analogiem chemicznym galaktozy, który nie może być hydrolizowany przez enzym -galaktozydazę. W związku z tym indukuje on aktywność operonu laktozowego E. coli przez wiązanie i hamowanie represora lac nie ulegając jednocześnie degradacji. Geny kontrolowane przez sekwencje promotorowe / operatorowe lac lub tac wykazują wysoką ekspresję w obecności IPTG. Warunki przechowywania Chronić przed światłem. IPTG może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze - 20 C. IPTG 5 g MB Agaroza (molecular grade) Opis Wolna od DNaz i RNaz Doskonała wartość i przejrzystość Wysoka wytrzymałość żelu elektroforeza DNA / RNA Idealna do rozdzielania kwasów nukleinowych o szerokim zakresie rozmiarów, zwłaszcza dla dużych fragmentów (> 10 Kb) Agaroza (wolna od DNaz i RNaz) jest wyjątkowo czystym proszkiem agarozowym o wysokiej jakości (molecular biology grade, który był szczegółowo badany pod kątem skażenia RNazą. Agaroza zapewnia wysoką rozdzielczość DNA i RNA podczas elektroforezy oraz powtarzalne wyniki w róznych partiach produktu. Warunki przechowywania Chłodne, suche miejsce. Specyfikacja analityczna:

261 7.5. DODATKI I BUFORY Bufor MgCl2 Opis 50 mm MgCl 2 jest dogodnym stężeniem w większości eksperymentów w biologii molekularnej. Używać 1 µl na 50 µl reakcji aby uzyskać 1 mm stężenie końcowe Mg 2+. Warunki przechowywania 50 mm roztwór MgCl 2 należy przechowywać w temperaturze -20 C. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Skład 50 mm MgCl 2 w wodzie, wolne od DNaz i Rnaz. MgCl2 bufor 3 x 1,2 ml MB Bufor KCl (10x) Opis 10x bufor KCl zapewnia niezawodną pracę z 15 mm MgCl 2, który jest odpowiedni dla większości zastosowań. To czyni go idealnym buforem do większości eksperymentów. Warunki przechowywania Bufory reakcyjne 10x KCl powinny być przechowywane w temperaturze -20 C. Należy unikać wielokrotnych cykli zamrażania i rozmrażania. Skład 500 mm KCl, 100 mm Tris-CI (ph 8.8 w temperaturze 25 C), 15 mm MgCl 2, 1% Triton X mm. KCI bufor (10x) 3 x 1,2 ml MB

262 7.5.3.Dodatek HiSpec Additive Opis Właściwości i zastosowanie Eliminuje rozmazanie tła i fałszywe prążki Poprawia specyfikę Kompatybilny ze wszystkimi dostępnymi polimerazami DNA Idealny do trudnych matrycy Poprawa specyfikę każdej polimerazy DNA w reakcji enzymatycznej Dodatek HiSpec Additive jest popularnym związkiem mających na celu wyeliminowanie niepożądanych produktów ubocznych, takich jak rozmazywanie się tła i fałszywe prążki podczas amplifikacji DNA. Hi-Spec Additive idealnie nadaje się do trudnych matryc zawierających regiony bogate w GC w czy też powtarzające się sekwencje. Warunki przechowywania HiSpec Additive może być przechowywany przez 6 miesięcy w temperaturze -20 C HiSpec additive 3 x 1,2 ml PAN Dodatek PAN Mate Additive Opis Właściwości i zastosowanie Znacznie poprawia wydajność i specyfikę Zgodność ze wszystkimi dostępnymi termostabilnymi polimerazami DNA Idealny do trudnych matryc Zmniejsza rozmazywanie i tło Do reakcji polimerazy DNA gdzie specyficzność jest krytyczna Poprawia wydajność i specyfikę każdej z termostabilnych polimeraz DNA PAN Mate jest specjalnym dodatkiem (2x) do stosowania w reakcjach gdzie biorą udział termostabilne polimerazy DNA i jest przeznaczony do znacznej poprawy specyfiki reakcji. PAN Mate zapewnia zoptymalizowany skład odczynników, i nadaje się idealnie do trudnych matrycy z regionami DNA bogatymi w GC lub AT, powtarzające się sekwencje lub sekwencje z wysokim poziomem struktur drugorzędowych. PAN Mate umożliwia polimerazom DNA i oligonukleotydom na większy dostęp do DNA matrycowego. PAN Mate nie zawiera magnezu, dntps, lub składników buforu. W niektórych przypadkach może być konieczna optymalizacja stężenia magnezu.

263 Uwaga: PAN Mate nie powinien być stosowany w połączeniu z innymi dodatkami do reakcji polimerazy. PAN Mate jest zmienioną wersją dodatku PAN 5x HiSpec Additive (PAN737032). Warunki przechowywania PAN Mate Additive może być przechowywany przez 6 miesięcy w temperaturze -20 C. PAN Mate Additive 1 x 1,2 ml PAN NUKLEOTYDY dNTP Sets (Zestawy dntp) Opis Właściwości i zastosowanie Ultra-czysty: > 99% trójfosforanów (przez HPLC) Wydłużony okres trwałości - 24 miesiące w temperaturze -20 C Wolne od inhibitorów PCR Wolne od DNaz, RNaz i Nickaz Wyprodukowane przez Bioline w specjalnie wybudowanym laboratorium Nadaje się do wielu zastosowań, takich jak: Standardowe i długiozakresowe PCR Synteza cdna qpcr

264 Mikromacierze Sekwencjonowanie DNA DHPLC Znakowanie Zestaw gotowych do użycia roztworów dntp składający się z 4 oddzielnych 100mM roztworów datp, dgtp, dctp i dttp, przy ph 7.5, dostarczane jako sole litu w oczyszczonej wodzie. Do stosowania w reakcji polimeryzacji DNA, znakowania i sekwencjonowania. Jakość PCR na której można polegać. Wszystkie dntp dostarczane są jako sole litu w wodzie oczyszczonej przy ph 7.5. Sole litu mają większą odporność na wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie niż sole sodu. Rozwory te pozostają sterylne przez cały okres przechowywania ze względu na działanie bakteriostatyczne litu. Warunki przechowywania Zestaw dntp Sets może być przechowywany przez 24 miesięcy w temperaturze -20 C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Do długotrwałego użytkowania zaleca się rozporcjowanie na mniejsze próbki. dntp set (da, dc, dg, and dt) 100 mm 4 x 250 μl PAN mm 4 x (4 x 250 μl) PAN mm 4 x (20 x 250 μl) PAN739027