QUANTA Lite Thyroid T ELISA 708595 Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka

QUANTA Lite Thyroid T ELISA 708595 Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka Przeznaczenie QUANTA Lite TM Thyroid T jest to immunoenzymatyczny test (ELISA) do półilościowego oznaczania przeciwciał przeciwko tyreoglobulinie w surowicy człowieka. Obecność przeciwciał przeciwko antygenowi tyreoglobuliny, w połączeniu z objawami klinicznymi i innymi badaniami laboratoryjnymi, może być stosowana w celu wsparcia diagnostyki zapalenia tarczycy Hashimoto. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Szeroko implikowano udział krążeniowych autoprzeciwciał przeciwko tarczycy w etiologii chorób autoimmunologicznych tarczycy i w praktyce klinicznej oznaczane są rutynowo zarówno przeciwciała tyroglobulinowe oraz mikrokosmkowe. 1,2 Surowicze autoprzeciwciała przeciwko antygenom mikrokosmkowym tarczycy powszechnie występują u pacjentów z chorobami autoimmunologicznymi tarczycy i ich występowanie dobrze koreluje ze zmianami histologicznymi w przypadku choroby Hashimoto. 3 Przeciwciała przeciwko antygenom mikrokosmkowym tarczycy występują u 70-90% pacjentów z przewlekłym zapaleniem tarczycy. Te przeciwciała występują także u 64% pacjentów z pierwotną niedoczynnością tarczycy, 50% z tyreotoksykozą, 10% z wolem prostym i 17% z guzami tarczycy 4 Autoprzeciwciała tyroglobulinowe są wykrywane w wysokich mianach głównie w przypadku autoimmunologicznego zapalenia tarczycy (choroba Hashimoto) i choroby Gravesa. Autoprzeciwciała surowicze przeciwko tyreoglobulinie/koloidowi stwierdzono u 40-70% pacjentów z przewlekłym zapaleniem tarczycy oraz u mniejszego odsetka pacjentów z nadczynnością tarczycy i wolem tarczycowym nietoksycznym. 5,6 Badania w kierunku obecności autoprzeciwciał przeciwko tarczycy wykonywano stosując reakcje precypitacji, 7 wiązanie lateksu 8, hemoaglutynację 9 oraz immunofluorescencję. 10,11 Niedawno zostały opracowane nowsze techniki ELISA. 12-14 Wykazano, że są one bardziej czułe niż metody hemoaglutynacji lub immunofluorescencji 12,14 i jednocześnie są bardziej obiektywne, nie podlegając ingerencji czynników hamujących aglutynację 15 lub heterofilnych przeciwciał. Technika ELISA wykorzystywana w tym teście jest wrażliwa, swoista i obiektywna. Może być ona wygodnie stosowana do testowania dużych i małych ilości próbek. Zasada badania Oczyszczony ludzki antygen tyreoglobulinowy wiąże się z dołkami płytek polistyrenowych w warunkach, które zabezpieczają antygen w jego stanie natywnym. Wstępnie rozcieńczone kontrole i rozcieńczone surowice pacjentów są dodawane do oddzielnych dołków, umożliwiając obecnym przeciwciałom przeciwko tyreoglobulinie związanie się z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem przeciwciała przeciw-ludzkiego IgG. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgG znakowanym enzymem związać się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgG znakowanych enzymem, aktywność pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy. Badanie może zostać ocenione spektrofotometrycznie, poprzez zmierzenie i porównanie intensywności barwy, która powstaje w dołkach z próbkami od pacjenta z barwą dołków kontrolnych. Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta oczyszczonym antygenem tyreoglobulinowym (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Negatywna kontrola ELISA, 1 fiolka buforu zawierającego konserwant i ludzką surowicę bez żadnych ludzkich przeciwciał przeciwko tyreoglobulinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 3. Słabo pozytywna kontrola Thyroid T ELISA, 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko tyreoglobulinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 1

4. Kontrola silnie pozytywna Thyroid T ELISA (kalibrator A), 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko tyreoglobulinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 5. Thyroid T ELISA (kalibrator B), 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko tyreoglobulinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 6. Thyroid T ELISA (kalibrator C), 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko tyreoglobulinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 7. Thyroid T ELISA (kalibrator D), 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko tyreoglobulinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 8. Thyroid T ELISA (kalibrator E), 1 fiolka buforu zawiera konserwant i przeciwciała surowicy ludzkiej przeciwko tyreoglobulinie, wstępnie rozcieńczona, 1,2 ml 9. Rozcieńczalnik do próbek HRP, 1 fiolka zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 10. Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x zabarwienie czerwone, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 11. Koniugat HRP IgG, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgG, 1 fiolka zabarwienie niebieskie, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 12. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 13. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0,344 M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (0,02% chloramfenikol) w rozcieńczalniku do próbek, kontrolach i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono, że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. Z tego powodu słabo pozytywna kontrola Thyroid T ELISA, silnie pozytywna kontrola testu Thyroid T ELISA i kontrola negatywna testu ELISA powinny być przeprowadzane w taki sam sposób jak materiał potencjalnie zakaźny. 16 3. Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować osiągnięciem niespójnych wyników. 3. Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła. 2

4. Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w akceptowalnych limitach. 5. Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga staranności i precyzji. 6. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. 7. Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i osuszaczami, spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania. 8. Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może dać niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP. 9. Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowoduje degradację koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/dezynfekujących dokładnie wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia. Warunki przechowywania 1. Przechowywać wszystkie odczynniki zestawu w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2 8 C. 3. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 C. Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub lipemicznej surowicy albo próbek. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument NCCLS H18-A2 zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2) Jeżeli test nie zostanie zakończony w ciągu 8 godzin, próbki należy przechowywać w lodówce w temperaturze 2 8 C. 3) Jeżeli test nie zostanie zakończony w ciągu 48 godzin, lub do wysłania próbki, należy zamrozić do temperatury -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Badanie Dostarczone materiały 1 Płytka z mikrodołkami Thyroid T ELISA (12-1 x 8 dołków), z uchwytem 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej testu ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli Thyroid T ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej Thyroid T ELISA (kalibrator A) 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora B Thyroid T ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibrator C Thyroid T ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibrator D Thyroid T ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora E Thyroid T ELISA 1 50 ml rozcieńczalnika do próbek HRP 3

1 25 ml koncentratu do płukania HRP, koncentrat 40x 1 10 ml koniugatu przeciwciała IgG HRP, (kozie), przeciw-ludzkie IgG 1 10 ml chromogenu TMB 1 10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0,344 M Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Mikropipety na 5, 100, 200 300 i 500 µl Jednorazowe końcówki mikropipet Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości Woda destylowana lub dejonizowana Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu HRP do płukania Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla odczytów przy dwóch długościach fali) Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20-26 o C) i dobrze wymieszać. 2. Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 2,0 ml koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte. Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 o C. 3. Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pochodzącej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl rozcieńczalnika do próbek HRP. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ słabo pozytywnej kontroli testu Thyroid T ELISA, silnie pozytywnej kontroli testu Thyroid T ELISA i kontroli negatywnej testu ELISA. 4. Ustalenie obecności lub nieobecności Thyroid T z zastosowaniem arbitralnych jednostek wymaga dwóch dołków dla każdej z trzech kontroli oraz jednego lub dwóch dołków dla każdej próbki od pacjenta. Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek. 5. W razie potrzeby, wyniki mogą być półilościowe w jednostkach WHO. Do 5 punktów krzywej standardowej, użyj rozcieńczonej tarczycy T ELISA wysokie dodatnie (kalibrator) i kalibratory B do E bezpośrednio z fiolki. Pięciopunktowa krzywa wzorcowa ma następujące wartości: Punkt Jednostki WHO Thyroid T A Wstępnie rozcieńczona silnie pozytywna Thyroid T ELISA kalibrator A 1000,0 B Wstępnie rozcieńczony kalibrator B Thyroid T ELISA 500,0 C Wstępnie rozcieńczony kalibrator C Thyroid T ELISA 250,0 D Wstępnie rozcieńczony kalibrator D Thyroid T ELISA 125,0 E Wstępnie rozcieńczony kalibrator E Thyroid T ELISA 62,5 Procedura badania 1. WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20 26 C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną. 2. Do dołków dodać 100 µl wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej Thyroid T ELISA, wysoko pozytywnej Thyroid T ELISA, kalibratorów B-E Thyroid T, jeśli to pożądane, kontroli negatywnej i rozcieńczonych próbek pochodzących od pacjentów. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki. 3. Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Dodać 200 300 µl rozcieńczonego buforu do płukania HRP do wszystkich dołków, a następnie odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i delikatnie strząsnąć ją na materiał chłonny, aby usunąć wszelkie pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w przypadku dodawania próbki. 4

4. Do każdego dołka dodać 100 µl koniugatu IgG HRP. Koniugat powinien być usunięty z butelek z zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych. Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO WLEWAĆ NIEUŻYTEGO KONIUGATU Z POWROTEM DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w etapie 2. 5. Etap płukania: Powtórzyć etap 3. 6. Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze pokojowej. 7. Do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków. 8. Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością fali może być długość 620 nm. Kontrola jakości 1. Aby upewnić się, że wszystkie odczynniki i procedury funkcjonują prawidłowo, każdą serię próbek należy testować wraz ze słabo pozytywną kontrolą Thyroid T ELISA, wysoko pozytywną kontrolą Thyroid T ELISA i kontrolą negatywną ELISA. 2. Uwaga: w związku z tym, że niska pozytywna kontrola Thyroid T ELISA, wysoka dodatnia Thyroid T ELISA oraz negatywna kontrola ELISA są wstępnie rozcieńczone, nie mają one zastosowania w metodach badań związanych z rozcieńczeniem próbek. 3. Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub krajowych przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze -20 C. 4. Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako nieważne i powinno zostać powtórzone. a. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej kontroli Thyroid T ELISA musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej słabo pozytywnej kontroli Thyroid T ELISA, która z kolei musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA. b. Absorbancja wstępnie rozcieńczonej wysoko pozytywnej kontroli Thyroid T ELISA musi być większa niż 0,8, natomiast absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA nie może przekroczyć 0,2. c. Absorbancja słabo pozytywnej kontroli testu Thyroid T ELISA musi być przynajmniej dwukrotnie wyższa od kontroli negatywnej testu ELISA lub przekraczać 0,25. d. Kontrola negatywna testu ELISA oraz wysoko pozytywna kontrola testu Thyroid T ELISA mają monitorować występowanie poważnych nieprawidłowości związanych z odczynnikami. Wysoko pozytywna kontrola testu Thyroid T ELISA nie zapewni precyzji na poziomie wartości granicznej testu. e. Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie NCCLS C24-A. Obliczanie wyników W pierwszej kolejności jest określana średnia gęstość optyczna każdego zestawu duplikatów. Reakcyjność każdej próbki można następnie obliczyć, dzieląc średnią gęstość optyczną próbki przez średnią gęstość optyczną niskiego pozytywnego Thyroid T ELISA. Otrzymany wynik mnoży się przez liczbę jednostek przypisanych do słabo pozytywnej kontroli Thyroid T ELISA, którą można znaleźć na etykiecie. Gęstość optyczna próbki Wartość próbki = x niska pozytywna Thyroid T ELISA (jednostki) gęstość optyczna Thyroid T ELISA (jednostki) 5

Reaktywność w sposób nieliniowy zależy od ilości obecnych przeciwciał. Wzrosty i spadki stężeń przeciwciał u pacjenta będą odzwierciedlone w analogicznym wzroście lub spadku reaktywności, jednak zmiana ta nie jest proporcjonalna (tzn. podwojenie stężenia przeciwciał nie oznacza podwojenia reaktywności). Aby wyrazić pół-ilościowe wyniki w jednostkach WHO, należy zastosować papierowy wykres logarytmiczny nanosząc jednostki każdego punktu (A-E) krzywej standardowej względem średniej gęstości optycznej. Należy użyć najlepszego dopasowania krzywej, łącząc punkty danych. Aby uzyskać jednostki WHO pacjenta należy odczytać punkt przecięcia średniej gęstości optycznej pacjenta z tą krzywą. Można również zastosować powszechnie znane programy do redukcji danych liniowych wykresu. Interpretacja wyników Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w populacjach pacjentów. Poniższe wartości są jedynie wartościami sugerowanymi. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami. Próbka następnie może być sklasyfikowana jako negatywna, słabo pozytywna, średnio pozytywna lub silnie pozytywna, zgodnie z poniższą tabelą. Jednostki Negatywny <0,6 Słabo pozytywna 0,6-1,0 Możliwe są wyniki od średnio pozytywnych do Silnie pozytywna >1,0 Jeśli są używane jednostki WHO, laboratorium musi określić własne zakresy. 1. Wynik pozytywny wskazuje na obecność przeciwciał przeciw tyreoglobulinie i sugeruje możliwość występowania zapalenia tarczycy Hashimoto. 2. Wynik negatywny świadczy o tym, że nie występują przeciwciała przeciwko tyreoglobulinie lub że ich poziom jest poniżej dolnej wartości granicznej badania. 3. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki zostały uzyskane przy użyciu zestawu INOVA QUANTA Lite Thyroid T ELISA. Nie można stosować zamiennie wartości przeciwciał przeciwko tyreoglobulinie uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych innych producentów. Rząd wielkości poziomów raportowanego IgG nie może być skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Obecność kompleksów immunologicznych lub innych agregatów immunoglobuliny w próbce pochodzącej od pacjenta może powodować podwyższony poziom nieswoistego wiązania i wytwarzać fałszywe pozytywne wyniki w tym badaniu. 2. Nie wszyscy chorzy na zapalenie tarczycy Hashimoto mają dodatnie przeciwciała przeciwko tyreoglobulinie. 3. Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 4. Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. Spodziewane wartości Oceniano zdolność QUANTA Lite Thyroid T ELISA do wykrywania przeciwciał przeciwko tyreoglobulinie porównując z dostępnym na rynku testem hemoaglutynacji. Wyniki testu hemaglutynacji zostały określone zgodnie z broszurą producenta. 6

Normalny zakres Wybrano i następnie poddano badaniu testem Thyroid T ELISA sto jeden losowo wybranych próbek surowicy. Średnia populacji próbki wyniosła 0,186 ze standardowym odchyleniem 0,087. Zakres wskaźnika populacji wynosi od 0,12 do 0,79. To badanie wykazuje, że normalna średnia próbka stanowi ponad 4,8 standardowych odchyleń poniżej wartości granicznej. Swoistość i wrażliwość względna Aby ustalić względną czułość i swoistość testu, 50 próbek przedstawionych do badania tarczycy badano zarówno hemaglutynacją oraz metodami ELISA. Spośród 50 próbek 30 było pozytywnych a 18 negatywnych wg obu metod. Jedna próbka była pozytywna w badaniu hemaglutynacją, lecz negatywna przy zastosowaniu metody ELISA. Ostatnia próbka była pozytywna wg ELISA ale negatywna w badaniu testem hemoaglutynacji. Wyniki testu Thyroid T ELISA przedstawiono w tabeli poniżej. INOVA + - + 30 1 Wrażliwość względna 96,8% HA Swoistość względna 94,7% - 1 18 Skuteczność względna 96,0% Precyzja i powtarzalność Precyzja i powtarzalność badania zostały przebadane przez przeprowadzenie sześciu powtórzeń każdej negatywnej, umiarkowanie pozytywnej i silnie pozytywnej próbki w czterech oddzielnych badaniach. Średnia wyników silnie pozytywnych wyniosła 4,58, umiarkowanie pozytywnych wyniosła 1,90, a negatywnych 0,197. Poniżej znajduje się podsumowanie odchylenia standardowego oraz współczynnika zmienności dla każdej próbki. Negatywny Silnie pozytywna Średnio pozytywna SD CV SD CV SD CV Łącznie 0,018 8,9% 0,257 5,6% 0,104 5,7% W ramach serii 0,015 7,4% 0,069 1,5% 0,048 2,5% Pomiędzy seriami 0,014 7,3% 0,284 6,2% 0,114 6,0% 7

Piśmiennictwo 1. Davies TF and DeBernardo E. Thyroid autoantibodies and disease. In Autoimmune Endocrine Disease, Davies TF, ed., Wiley, New York, NY, 1983, p. 127. 2. Wall JR and Kuroki T. Immunologic factors in thyroid disease. Medical Clinics of North America 69: 913, 1985. 3. Hall R and Evered DC. Autoimmune thyroid disease: thyroiditis. In: Endocrinology, DeGroot LJ, et al., eds, Grune and Stratton, New York, NY, 1979, p. 461. 4. Delespesse G, et al. Thyroid autoimmunity. In: Thyroiditis and Thyroid Function, Bastenie PA and Evans AM eds., Pergamon Press, Oxford, 1972, p. 39. 5. Balfour BM, et al. Fluorescent antibody studies in human thyroiditis: autoantibodies to an antigen of the thyroid colloid distinct from thyroglobulin. Br J Exp Pathol 43:307, 1961. 6. Tung KSK, et al. Antithyroid antibodies in juvenile lymphocytic thyroiditis. Am J Clin Pathol 61: 549, 1974. 7. Doniach D and Roitt IM. Autoimmunity in Hashimoto's disease and its implications. J Clin Endocrinol Metab 17: 1293, 1957. 8. Philip JR, et al. A latex particle precipitation test in the diagnosis of thyroid disease. J Clin Pathol 15: 148, 1962. 9. Fulthorpe AJ, et al. A stable sheep cell preparation for detecting thyroglobulin auto-antibodies and its clinical applications. J Clin Pathol 14: 654, 1961. 10. Holborrow J, et al. Cytoplasmic localization of complement-fixing auto-antigen in human thyroid epithelium. Br J Exp Pathol 40: 583, 1959. 11. Doniach D. Thyroid autoimmune disease: symposium on thyroid gland. J Clin Pathol, 20: 385, 1966. 12. Ohwovoriole AE, et al. Improved ELISA for thyroid microsomal auto-antibodies, comparison with hemagglutination and immunofluorescent techniques. Int Arch Allergy Appl Immun 86: 183, 1988. 13. Hoshijima Y, et al. A sensitive enzyme immunoassay for anti-thyroglobulin antibody using Fab-horseradish peroxidase conjugate. J Immunl Methods 96: 121, 1987. 14. Roman SH, et al. Enzyme-linked immunosorbent microassay and hemagglutination compared for detection of thyroglobulin and thyroid microsomal autoantibodies. Clin Chem 30: 246, 1984. 15. Wilkin TJ, et al. A passive hemagglutination (TRC) inhibitorin thyrotoxic serum. J Clin Endocrinol 10: 507, 1979. 16. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition QUANTA Lite jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics, Inc. Copyright 2011. Wszelkie prawa zastrzeżone Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): 877-829-4745 Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): 00 + 1 858-805-7950 support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Niemcy Tel.: +49-6894-581020 Faks.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628595POL Maj 2011 Wersja 0 8