QUANTA Lite TPO ELISA Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka

Transkrypt

1 QUANTA Lite TPO ELISA Do diagnostyki in vitro Złożoność CLIA: Wysoka Przeznaczenie Test ELISA QUANTA Lite TPO jest testem immunoenzymatycznym (ELISA) do półilościowego wykrywania autoprzeciwciał peroksydazy tarczycowej (TPO) w surowicy ludzkiej. Obecność przeciwciał przeciwko antygenowi ludzkiej peroksydazy może być wykorzystywana w połączeniu z wynikami klinicznymi oraz innymi testami laboratoryjnymi w celu wsparcia diagnozy autoagresyjnych chorób tarczycy, takich jak zapalenie tarczycy Hashimoto i choroba Gravesa. Podsumowanie i wyjaśnienie testu Szeroko implikowano udział krążeniowych autoprzeciwciał tarczycy w etiologii chorób autoimmunologicznych tarczycy i w praktyce klinicznej zarówno przeciwciała tyroglobulinowe oraz mikrokosmkowe są rutynowo oznaczane. 1,2 Autoprzeciwciała surowicy przeciwko antygenom mikrokosmkowym tarczycy powszechnie występują u pacjentów z chorobami autoimmunologicznymi tarczycy i ich występowanie dobrze koreluje ze zmianami histologicznymi w przypadku choroby Hashimoto. 3 Przeciwciała przeciwko antygenom przeciwkosmkowym tarczycy są pozytywne u 70 90% pacjentów z przewlekłym zapaleniem tarczycy. Te przeciwciała występują także u 64% pacjentów z pierwotną niedoczynnością tarczycy, 50% z tyreotoksykozą, 10% z wolem prostym i 17% z guzami tarczycy. 4 Autoprzeciwciała tyroglobulinowe są wykrywane w wysokich mianach głównie w przypadku autoimmunologicznej chorobie Gravesa. Autoprzeciwciała surowicy przeciwko tyroglobulinie/kolidowi stwierdzano u 40 70% pacjentów z przewlekłym zapaleniem tarczycy i u niewielkich odsetków pacjentów z tyreotoksykozą oraz wolami nietoksycznymi. 5,6 Okazało się, że główny antygen znaleziony w mikrosomach tarczycy jest enzymatyczną peroksydazą tarczycowa lub TPO. 7 Badania opracowywane z oczyszczoną TPO mają wiele atutów w stosunku do badań wykorzystujących bardziej surowe preparaty całych mikrosomów, które mogą zawierać tyroglobulinę oraz inne niezidentyfikowane antygeny. 8 Ostatnie badania wykazały, że autoprzeciwciała reagują podobnie do rekombinatu ludzkiej peroksydazy tarczycowej oraz natywnej TPO oczyszczonej z tkanki. 9 Autoprzeciwciała tarczycy zostały przebadane klasycznie, przy użyciu reakcji precypitacji, 10 wiązania lateksu 11, hemoaglutynacji 12 oraz poprzez immunofluorescencję. 13,14 Ostatnio zostały opracowane nowsze techniki ELISA Te badania ELISA okazały się bardziej czułe niż hemoaglutynacja lub immunofluorescencja 15,17 i jednocześnie są bardziej obiektywne i nie są podatne na działanie czynników hamujących aglutynację 18 lub przeciwciał heterofilnych. Technika ELISA wykorzystywana w tym teście jest czuła, swoista i obiektywna. Może być ona wygodnie stosowana do testowania dużych i małych ilości próbek. Zasada badania Oczyszczony rekombinat ludzkiego antygenu TPO wiąże się z dołkami płytek polistyrenowych w warunkach, które zabezpieczają antygen w jego reaktywnym stanie. Wstępnie rozcieńczone kontrole oraz surowice pacjentów są dodawane do oddzielnych dołków umożliwiając związanie wszelkich występujących przeciwciał przeciwmikrosomalnych z unieruchomionym antygenem. Niezwiązana próbka jest wypłukiwana i do każdego dołka dodawany jest koniugat znakowanego enzymem przeciwciała przeciw-ludzkiego IgG. Druga inkubacja umożliwia przeciwciałom przeciw-ludzkim IgG znakowanym enzymem związać się z dowolnymi przeciwciałami pacjenta, które zostały przytwierdzone do mikrodołków. Po wypłukaniu wszelkich niezwiązanych przeciwciał przeciw-ludzkich IgG znakowanych enzymem, aktywność pozostałego enzymu bada się dodając substrat chromogeniczny i mierząc intensywność powstałej barwy. Badanie może zostać ocenione spektrofotometrycznie, poprzez zmierzenie i porównanie intensywności barwy, która powstaje w dołkach z próbkami od pacjenta z barwą dołków kontrolnych. Odczynniki 1. Polistyrenowa płytka z mikrodołkami ELISA pokryta oczyszczonym rekombinatem antygenu TPO (12-1 x 8 dołków), z uchwytem w torebce foliowej zawierającej osuszacze 2. Negatywna kontrola ELISA, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i surowicę ludzką bez ludzkich przeciwciał przeciwko peroksydazie tarczycowej, wstępnie rozcieńczone, 1,2 ml 3. Kontrola TPO ELISA, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i przeciwciała surowicy ludzkiej 1

2 4. Kalibrator TPO ELISA A, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i przeciwciała surowicy ludzkiej 5. Kalibrator TPO ELISA B, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i przeciwciała surowicy ludzkiej 6. Kalibrator TPO ELISA C, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i przeciwciała surowicy ludzkiej 7. Kalibrator TPO ELISA D, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i przeciwciała surowicy ludzkiej 8. Kalibrator TPO ELISA E, 1 fiolka buforu zawierająca środek konserwujący i przeciwciała surowicy ludzkiej 9. Rozcieńczalnik do próbek HRP, 1 fiolka zabarwienie różowe, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS, Tween 20, stabilizatory białka i konserwant, 50 ml 10. Koncentrat do płukania HRP, 1 fiolka koncentratu 40x zabarwienie czerwone, zawiera sól fizjologiczną buforowaną TRIS i Tween 20, 25 ml. Instrukcje dotyczące rozcieńczania można znaleźć w sekcji Metody. 11. Koniugat HRP IgG, (kozi), przeciwciała przeciw-ludzkie IgG, 1 fiolka zabarwienie niebieskie, zawiera bufor, stabilizatory białka i konserwant, 10 ml 12. Chromogen TMB, 1 fiolka zawierająca stabilizatory, 10 ml 13. Roztwór zatrzymujący HRP, kwas siarkowy 0.344M, 1 fiolka bezbarwny, 10 ml Ostrzeżenia 1. OSTRZEŻENIE: Ten produkt zawiera substancję chemiczną (chloramfenikol 0,02%) w rozcieńczalniku do próbek, kontrolach i koniugacie, która według stanu Kalifornii wywołuje raka. 2. Wszystkie materiały pochodzenia ludzkiego używane w przygotowywaniu kontroli dla tego produktu zostały przetestowane i na podstawie metod zatwierdzonych przez FDA stwierdzono że nie zawierają przeciwciał przeciwko HIV, HBsAg i HCV. Jednak żadna metoda testowania nie może całkowicie zagwarantować braku obecności HIV, HBV, HCV lub innych czynników zakaźnych. W związku z tym kontrola TPO ELISA, kalibratory TPO ELISA i negatywna kontrola ELISA powinny być obsługiwane w taki sam sposób, jak potencjalnie zakaźny materiał Jako konserwant stosowany jest azydek sodu. Azydek sodu jest trucizną i może być toksyczny w przypadku połknięcia lub wchłonięcia przez skórę lub oczy. Azydek sodu może wchodzić w reakcję z ołowianą lub miedzianą instalacją wodociągową, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Jeśli do usuwania odczynników używane są zlewy, należy przepłukiwać je dużą ilością wody, aby nie dopuścić do gromadzenia się azydku. 4. Koniugat HRP zawiera rozcieńczoną trującą/korozyjną substancję chemiczną, która może być toksyczna w przypadku spożycia w dużej ilości. Aby uniknąć potencjalnych oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 5. Chromogen TMB zawiera środek drażniący, w który może być szkodliwy w przypadku wdychania, spożycia lub wchłonięcia przez skórę. Aby uniknąć urazów, należy unikać wdychania, spożycia lub kontaktu ze skórą i oczami. 6. Roztwór zatrzymujący HRP składa się z rozcieńczonego roztworu kwasu siarkowego. Unikać wystawienia na działanie zasad, metali lub innych związków, które mogą wchodzić w reakcje z kwasami. Kwas siarkowy jest trucizną i ma właściwości korozyjne. W razie połknięcia może być toksyczny. Aby uniknąć oparzeń chemicznych, należy unikać kontaktu ze skórą i oczami. 7. Podczas pracy z dostarczonymi odczynnikami należy stosować odpowiednie środki ochrony osobistej. 8. Rozlane odczynniki należy natychmiast usunąć. Należy przestrzegać wszystkich krajowych i lokalnych przepisów w zakresie utylizacji odpadów. Środki ostrożności 1. Ten produkt jest przeznaczonych do zastosowań diagnostycznych in vitro. 2. Zastąpienie składników dostarczonych w tym systemie innymi składnikami może skutkować osiągnięciem niespójnych wyników. 3. Niepełne lub nieprawidłowe płukanie i niewystarczające usunięcie płynu z płytek z dołkami ELISA wpłynie negatywnie na precyzję badań i/lub spowoduje wysoki poziom tła. 4. Dostosowanie tego badania do stosowania ze zautomatyzowanymi analizatorami próbek oraz innymi urządzeniami do pracy z płynami, w całości lub w części, może skutkować rozbieżnością wyników w stosunku do badań przeprowadzanych ręcznie. Obowiązkiem każdego laboratorium jest potwierdzenie, że wyniki testów uzyskanych na podstawie zautomatyzowanych badań mieszczą się w akceptowalnych limitach. 2

3 5. Na wyniki analizy wpływa wiele różnych czynników. Obejmują one temperaturę początkową odczynników, temperaturę otoczenia, dokładność i powtarzalność techniki pipetowania, dokładność płukania i usuwania płynu z dołków płytek ELISA, fotometr użyty do analizy wyników oraz czasy trwania inkubacji podczas badania. Uzyskanie dokładnych i powtarzalnych wyników wymaga staranności i precyzji. 6. Zalecane jest ścisłe przestrzeganie procedury testowej. 7. Niedokładne zamknięcie torebki z zamknięciem strunowym, zawierającej płytki z mikrodołkami i osuszaczami, spowoduje degradację antygenu i brak precyzji badania. 8. Dwukrotne lub wielokrotne użycie koniugatu HRP z jednej butelki w pewnym okresie czasu może spowodować niedopuszczalnie niski poziom absorbancji. Aby nie dopuścić do takiej sytuacji istotne jest przestrzeganie wszystkich zaleceń dotyczących procedur pracy z koniugatem HRP. 9. Zanieczyszczenie chemiczne koniugatu HRP może być spowodowane nieprawidłowym czyszczeniem lub płukaniem sprzętu lub narzędzi. Pozostałości typowych laboratoryjnych substancji chemicznych, takich jak formalina, substancja wybielająca, etanol lub detergent, z czasem spowoduje degradację koniugatu HRP. Po użyciu chemicznych substancji czyszczących/dezynfekujących dokładnie wypłukać cały sprzęt i wszystkie narzędzia. Warunki przechowywania 1. Wszystkie odczynniki z zestawu przechowywać w temperaturze 2 8 C. Nie zamrażać. Odczynniki są trwałe do daty ważności, pod warunkiem, że są przechowywane i używane zgodnie z instrukcjami. 2. Nieużyte płytki z mikrodołkami pokrytymi antygenem powinny być starannie zamknięte w torebce foliowej z osuszaczami i przechowywane w temperaturze 2 8 C. 3. Rozcieńczony bufor do płukania zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 C. Pobieranie próbek Ta procedura powinna być wykonana z próbką surowicy. Dodanie azydku lub innych konserwantów do próbek analitycznych może mieć negatywny wpływ na wyniki. Nie używać próbek zawierających widoczne zanieczyszczenia, skażonych bakteryjnie lub podgrzanych. Należy unikać całkowicie zhemolizowanej lub lipemicznej surowicy albo próbek. Po pobraniu surowica powinna być oddzielona od skrzepu. Dokument CLSI (uprzednio NCCLS) H18-A2 zaleca następujące warunki przechowywania próbek: 1) Przechowywać próbki w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 8 godzin. 2) Jeśli badanie nie zostanie zakończone w ciągu 8 godzin, schłodzić próbkę do temperatury 2-8 C. 3) Jeśli badanie nie zostanie ukończone w ciągu 48 godzin lub w przypadku transportu próbki, należy zamrozić ją w temperaturze -20 C lub niższej. Zamrożone próbki po rozmrożeniu i przed badaniem muszą zostać dobrze wymieszane. Badanie Dostarczone materiały 1 Płytka z mikrodołkami TPO ELISA (12-1 x 8 dołków), z uchwytem 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczona kontrola negatywna ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczona TPO ELISA 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora TPO ELISA A 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora TPO ELISA B 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora TPO ELISA C 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora TPO ELISA D 1 1,2 ml wstępnie rozcieńczonego kalibratora TPO ELISA E 1 50 ml rozcieńczalnika do próbek HRP 1 25 ml koncentratu do płukania HRP, koncentrat 40x 1 10 ml koniugatu przeciwciała IgG HRP, (kozie), przeciw-ludzkie IgG 1 10 ml chromogenu TMB 1 10 ml roztworu zatrzymującego HRP, kwas siarkowy 0,344M Wymagane materiały nie dołączone do zestawu Mikropipety na 5, 100, i 500 µl Jednorazowe końcówki mikropipet Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości Woda destylowana lub dejonizowana Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu HRP do płukania Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla odczytów przy dwóch długościach fali) 3

4 Sposób przygotowania Przed rozpoczęciem 1. Doprowadzić wszystkie odczynniki i próbki do temperatury pokojowej (20-26 o C) i dobrze wymieszać. 2. Rozcieńczyć koncentrat do płukania HRP w stosunku 1:40, dodając zawartość butelki koncentratu do płukania HRP do 975 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Jeśli cała płytka nie zostanie przetworzona w tym czasie, można przygotować mniejszą ilość. W tym celu należy dodać 2,0 ml koncentratu do 78 ml wody destylowanej lub dejonizowanej na każde 16 dołków, które będą użyte. Rozcieńczony bufor zachowuje trwałość przez 1 tydzień w temperaturze 2 8 o C. 3. Przygotować roztwór 1:101 każdej próbki pochodzącej od pacjenta, dodając 5 µl próbki do 500 µl rozcieńczalnika do próbek HRP. Rozcieńczone próbki muszą być użyte w ciągu 8 godzin od przygotowania. NIE ROZCIEŃCZAĆ kontroli TPO ELISA, kalibratorów TPO ELISA ani kontroli negatywnej ELISA. 4. Oznaczanie obecności lub braku autoprzeciwciał TPO wymaga dwóch dołków dla każdego z kalibratorów i kontroli oraz jednego lub dwóch dołków dla każdej próbki pacjenta. Zalecane jest wykonanie duplikatów próbek. 5. Przygotowanie krzywej wzorcowej. W przypadku 5-punktowej krzywej wzorcowej użyć WSTĘPNIE ROZCIEŃCZONYCH kalibratorów TPO ELISA od A do E, bezpośrednio z fiolki. Pięciopunktowa krzywa wzorcowa ma następujące wartości: Punkt A Wstępnie rozcieńczony kalibrator TPO ELISA A 1000,0 B Wstępnie rozcieńczony kalibrator TPO ELISA B 500,0 C Wstępnie rozcieńczony kalibrator TPO ELISA C 250,0 D Wstępnie rozcieńczony kalibrator TPO ELISA D 125,0 E Wstępnie rozcieńczony kalibrator TPO ELISA E 62,5 Jednostki TPO WHO Procedura badania 1. WSZYSTKIE ODCZYNNIKI PRZED ROZPOCZĘCIEM BADANIA MUSZĄ BYĆ DOPROWADZONE DO TEMPERATURY POKOJOWEJ (20 26 C). Umieścić wymaganą liczbę mikrodołków/pasków w uchwycie. Natychmiast umieścić nieużywane płytki w torebce foliowej zawierającej osuszacz i dobrze ją zamknąć, aby ograniczyć kontakt z parą wodną. 2. Do dołków dodać 100 µl wstępnie rozcieńczonej kontroli TPO ELISA, kalibratorów TPO ELISA od A do E, kontroli negatywnej ELISA i rozcieńczone próbki pochodzące od pacjentów. Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki. 3. Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Wlać µl rozcieńczonego buforu HRP do płukania do wszystkich dołków, a następnie go odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję odsysania, jak w przypadku dodawania próbki. 4. Do każdego dołka Dodać 100 μl koniugatu IgG HRP. Koniugat powinien być usunięty z butelek z zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych. Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO Z POWROTEM WLEWAĆ NIEUŻYTEGO KONIUGATU DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w etapie Etap płukania: Powtórzyć etap Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w temperaturze pokojowej. 7. do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego HRP. Zachować tę samą sekwencję i czas dodawania roztworu zatrzymującego HRP, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków. 8. Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością fali może być długość 620 nm. Kontrola jakości 1. Aby wszystkie odczynniki i badania funkcjonowały prawidłowo, każdą serię próbek należy testować wraz z kontrolą TPO ELISA, kalibratorami TPO ELISA od A do E oraz kontrolą negatywną ELISA. 2. Należy zwrócić uwagę, że kontrola TPO ELISA, kalibratory TPO ELISA od A do E oraz kontrola negatywna ELISA są wstępnie rozcieńczone i nie będą one stanowić kontroli w przypadku procedur związanych z rozcieńczaniem próbek. 3. Dodatkowe kontrole mogą być przebadane zgodnie z wytycznymi lub wymaganiami lokalnych i/lub krajowych 4

5 przepisów lub organów normalizacyjnych. Dodatkowe odpowiednie surowice kontrolne można przygotować, dzieląc połączone próbki surowicy ludzkiej i przechowując je w temperaturze -20 C. 4. Aby wyniki badania mogły być uznane jako ważne, muszą zostać spełnione wszystkie poniższe kryteria. Jeśli jakiekolwiek kryterium nie będzie spełnione, badanie powinno być traktowane jako nieważne i powinno zostać powtórzone. a. Absorbancja wstępnie rozcieńczonego kalibratora TPO ELISA A musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli TPO ELISA, która z kolei musi być większa niż absorbancja wstępnie rozcieńczonej kontroli negatywnej ELISA. b. Absorbancja wstępnie rozcieńczonego kalibratora TPO ELISA A musi być większa niż 1,0, natomiast absorbancja wstępnie rozcieńczonej negatywnej kontroli ELISA nie może być większa niż 0,2. c. Absorbancja kontroli TPO ELISA musi być dwukrotnie większa od negatywnej kontroli ELISA lub wynosić powyżej 0,25. d. Stężenie kontroli TPO ELISA musi mieścić się w zakresie podanym na etykiecie. e. Dodatkowe wytyczne dotyczące odpowiednich praktyk QC można znaleźć w dokumencie CLSI (uprzednio NCCLS) C24-A3. Obliczanie wyników 1. Ustalić wartość średnią wszystkich zdublowanych odczytów. 2. Nanieść średnią absorbancję (gęstość optyczna) krzywej kalibratora w odniesieniu do rejestru ich stężeń. Użyć wykresu krzywej najlepszego dopasowania lub dopasowania punkt-punkt. Można również użyć wykresu logarytmicznego. 3. Ustalić nieznane stężenie TPO w jednostkach (WHO) z osi X, odczytując odpowiednią absorbancję na osi Y. Kalibratory i kontrola dla tego zestawu odnoszą się do norm odniesienia WHO dostępnych w WHO, preparat referencyjny MRC 66/ Wartości negatywnych mieszczą się w zakresie od 0 do 100 jednostek. Wyniki pozytywne są większe niż 100 jednostek. 5. Próbki powyżej zakresu z gęstością optyczną powyżej normy S1 mogą być podane jako > 1000 jednostek. Próbka również może być rozcieńczana w dalszym zakresie (tzn. 1:2 i 1:4 w rozcieńczalniku do próbek HRP) i ponownie przetestowana, aby przywrócić gęstość optyczną do zakresu wyznaczonego przez krzywą wzorcową. Poniżej został przedstawiony przykład typowej krzywej wzorcowej. Punkt Średnia gęstość optyczna Stężenie (jednostki WHO) A 1, ,0 B 1, ,0 C 0, ,0 D 0, ,0 E 0,306 62,5 Interpretacja wyników Badanie ELISA jest bardzo wrażliwe na technikę i jest w stanie wychwycić nawet najdrobniejsze różnice w populacjach pacjentów. Poniższe wartości są jedynie wartościami sugerowanymi. Każde laboratorium powinno ustalić własny normalny zakres na podstawie własnych technik, kontroli, sprzętu i populacji pacjentów, zgodnie z własnymi ustalonymi procedurami. 1. Wynik pozytywny wskazuje obecność przeciwciał peroksydazy tarczycowej i sugeruje możliwość występowania zapalenia tarczycy Hashimoto lub choroby Gravesa. 2. Wynik negatywny świadczy o tym, że nie występują przeciwciała przeciwko peroksydazie tarczycowej lub że ich poziom jest poniżej dolnej wartości granicznej badania. 3. Zalecane jest, aby wyniki raportowane przez laboratorium zawierały oświadczenie: Poniższe wyniki otrzymano przy wykorzystaniu zestawu INOVA QUANTA Lite TPO ELISA. Nie można stosować zamiennie wartości peroksydazy tarczycowej uzyskanych przy zastosowaniu metod testowych innych producentów. Rząd wielkości poziomów raportowanego IgG nie może być skorelowany z mianem punktu końcowego. Ograniczenia badania 1. Obecność kompleksów immunologicznych lub innych agregatów immunoglobuliny w próbce pochodzącej od pacjenta może powodować podwyższony poziom nieswoistego wiązania i wytwarzać fałszywe pozytywne wyniki w tym badaniu. 2. Nie wszyscy pacjenci z zapaleniem tarczycy Hashimoto mają pozytywny wynik na przeciwciała przeciwmikrosomalne lub TPO. 3. Wyniki tego badania powinny być użyte w powiązaniu z wynikami klinicznymi i innymi badaniami serologicznymi. 4. Charakterystyka wyników badania nie została ustanowiona dla podłoża innego niż surowica. 5

6 Spodziewane wartości Normalny zakres Przeprowadzono badania na łącznie 198 losowo wybranych próbkach. Ta grupa obejmuje 104 mężczyzn w wieku od 20 do 72 lat oraz 94 kobiety w wieku od 15 do 63 lat. Jedenaście próbek lub 5,5% dało wynik pozytywny. Sześć z 11 pozytywnych próbek pochodziło od kobiet, a pozostałe 5 próbek pochodziło od mężczyzn. Siedem z 11 pozytywnych próbek od zdrowych osób wykazało również wynik pozytywny wg metody ELISA na przeciwciała przeciwmikrosomalne tarczycy oraz/lub wg innych testów TPO ELISA dostępnych w handlu. Średnia wartość u zdrowej populacji męskiej wynosiła 17 jednostek, a wartość 36 jednostek została uzyskana w przypadku zdrowej żeńskiej populacji. Swoistość i wrażliwość względna Zdolność testu QUANTA Lite TPO ELISA do wykrywania autoprzeciwciał przeciwko peroksydazie tarczycowej (TPO) została oceniona poprzez porównanie z innym dostępnym w handlu testem TPO ELISA. Przebadano łącznie 88 próbek. Przebadano sześćdziesiąt dziewięć próbek przekazanych do laboratorium w celu przebadania pod kątem występowania autoprzeciwciał przeciwko tarczycy oraz dodatkowych 19 próbek od zdrowych osób. Poniżej zostały przedstawione wyniki: INOVA TPO * Wrażliwość względna 90,8% Wzorcowe TPO Swoistość względna 100% Skuteczność względna 92,6% * Jedna z tych próbek pochodziła od zdrowej populacji, a 4 zostały ocenione jako negatywne zarówno na podstawie immunofluorescencji jak i badania ELISA przeciwko mikrosomom tarczycy. W przypadku innych badań test QUANTA Lite TPO został również porównany z inną metodą ELISA w celu wykrycia autoprzeciwciał przeciwko ludzkiemu mikrosomowi tarczycy. Poniżej zostały przedstawione wyniki. INOVA TPO * Wrażliwość względna 80,5% ELISA mikrosomu Swoistość względna 92,7% - 17** 200 Skuteczność względna 89,7% * 13 z 15 próbek wykazało wysoki poziom przeciwciał tyroglobuliny ** 16 z tych 17 wykazało wynik pozytywny przy użyciu testu TPO ELISA Trzecie badanie porównało test QUANTA Lite TPO ELISA z badaniem niebezpośredniej fluorescencji, która jako substrat wykorzystuje skrawki tarczycy naczelnych. Poniżej zostały przedstawione wyniki: INOVA TPO Wrażliwość względna 100% Niebezpośrednia Swoistość względna 81,5% Immunofluorescencja - 5* 17 Skuteczność względna 89% ** 5 z tych próbek również wykazało wynik pozytywny przy użyciu testu TPO ELISA. Precyzja i powtarzalność Precyzja i powtarzalność badania zostały przebadane przez przeprowadzenie sześciu powtórzeń każdej negatywnej, umiarkowanie pozytywnej i silnie pozytywnej próbki w sześciu oddzielnych badaniach. Średnia wartość wyników silnie pozytywnych wyniosła 815, umiarkowanie pozytywnych wyniosła 294, a wartość negatywnych wyników wyniosła 53 jednostki. Poniżej znajduje się podsumowanie odchylenia standardowego oraz współczynnika zmienności dla każdej próbki. Negatywna Silnie pozytywna Średnio pozytywna SD CV SD CV SD CV Łącznie 6,0 11,1% 44,4 5,4% 28,3 9,6% W ramach serii 4,6 8,5% 33,5 4,1% 21,4 7,2% Pomiędzy seriami 6,6 12,5% 45,2 5,5% 25,9 8,7% QUANTA Lite jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics, Inc. 6

7 Piśmiennictwo 1. Davies TF and DeBernardo E. Thyroid autoantibodies and disease. In "Autoimmune Endocrine Disease", TF Davies, ed., Wiley, New York, NY, 1983, p Wall JR and Kuroki T. Immunologic factors in thyroid disease. Medical Clinics of North America, 69: 913, Hall R and Evered DC. Autoimmune thyroid disease: thyroiditis. In "Endocrinology", DeGroot LJ, et al., eds., Grune and Stratton, New York, NY, 1979, p Delespesse G, et al. Thyroid autoimmunity. In Thyroiditis and Thyroid Function, Bastenie PA and Evans AM, eds., Pergamon Press, Oxford, 1972, p Balfour BM, et al. Fluorescent antibody studies in human thyroiditis: autoantibodies to an antigen of the thyroid colloid distinct from thyroglobulin. Br J Exp Pathol, 43:307, Tung KSK, et al. Antithyroid antibodies in juvenile lymphocytic thyroiditis. Am J Clin Pathol, 61: 549, Kotani T, et al. Detection of autoantibodies to thyroid peroxidase in autoimmune thyroid diseases by micro-elisa and immunoblotting. J Clin Endrocrinol Metab, 62: 928, Feldt-Rasmussen U. Analytical and clinical performance goals for testing autoantibodies to thyroperoxidase, thyroglobulin, and thyrotropin receptor. Clinical Chemistry, 42: 160, Gut P, et al. Recombinant human thyroid peroxidase produced in insect cells has similar properties to native human thyroid peroxidase. Thyroid. 10:543-50, Doniach D and Roitt IM. Autoimmunity in Hashimoto's disease and its implications. J Clin Endocrinol Metab, 17: 1293, Philip JR, et al. A latex particle precipitation test in the diagnosis of thyroid disease. J Clin Pathol, 15: 148, Fulthorpe AJ, et al. A stable sheep cell preparation for detecting thyroglobulin auto-antibodies and its clinical applications. J Clin Pathol, 14: 654, Holborrow J, et al. Cytoplasmic localization of complement-fixing auto-antigen in human thyroid epithelium. Br J Exp Pathol, 40: 583, Doniach D. Thyroid autoimmune disease: symposium on thyroid gland. J Clin Pathol, 20: 385, Ohwovoriole AE, et al. Improved ELISA for thyroid microsomal auto-antibodies, comparison with hemagglutination and immunofluorescent techniques. Int Arch Allergy Appl Immun, 86: 183, Hoshijima Y, et al. A sensitive enzyme immunoassay for anti-thyroglobulin antibody using Fabhorseradish peroxidase conjugate. J Immunl Methods, 96: 121, Roman SH, et al. Enzyme-linked immunosorbent microassay and hemagglutination compared for detection of thyroglobulin and thyroid microsomal autoantibodies. Clin Chem, 30: 246, Wilkin TJ, et al. A passive hemagglutination (TRC) inhibitor in thyrotoxic serum. J Clin Endocrinol, 10: 507, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, Fifth Edition,

8 Wyprodukowano przez: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA Stany Zjednoczone Ameryki Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady): Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych): support@inovadx.com Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Niemcy Tel.: Faks.: POL Maj 2011 Wersja 0 8