M6 MICROGEN Campylobacter PRZEZNACZENIE TESTU M6 MICROGEN Campylobacter jest szybkim testem aglutynacji lateksowej przeznaczonym do potwierdzenia identyfikacji enteropatogennych, termofilnych bakterii z rodzaju Campylobacter, wyhodowanych na wybiórczych podłoŝach stałych z próbek kału od pacjentów z podejrzeniem bakteryjnego zapalenia jelit. Test jest przeznaczony wyłącznie do profesjonalnego uŝytku laboratoryjnego. ZASADA TESTU Cząsteczki lateksowe pokryte są króliczymi immunoglobulinami skierowanymi przeciw preparatom antygenowym z wybranych serotypów Campylobacter jejuni. Kiedy uczulone cząstki lateksu zmiesza się z zawiesiną zawierającą antygeny enteropatogennych szczepów Campylobacter, zajdzie czuła i swoista reakcja immunochemiczna, powodując aglutynację drobnych zawieszonych cząstek lateksowych w agregaty, które łatwo zobaczyć gołym okiem. SKŁAD ZESTAWU M6a Lateks testowy:, ml Cząsteczki lateksu pokryte króliczymi przeciwciałami przeciw antygenom Campylobacter. Konserwowane,99% azydkiem sodowym (niebieska nakrętka). M6b Lateks kontrolny:, ml Cząsteczki lateksu pokryte niespecyficznymi immunoglobulinami króliczymi. Konserwowane,99% azydkiem sodowym (Ŝółta nakrętka). M6c Kontrola dodatnia:, ml Zawiesina inaktywowanych antygenów Campylobacter reagująca z lateksem testowym i nie reagująca z lateksem kontrolnym. Konserwowane,99% azydkiem sodowym (czarna nakrętka). M6d Rozcieńczalnik do próbek: ml,8% roztwór izotoniczny soli konserwowany,99% azydkiem sodowym (biała nakrętka). Instrukcja uŝycia Jednorazowe karty reakcyjne Jednorazowe patyczki do mieszania DODATKOWE MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE WCHODZĄCE W SKŁAD ZESTAWU ezy bakteriologiczne płytki z pół-wybiórczym stałym podłoŝem agarowym dla Campylobacter (Preston Blood Free Agar) jednorazowe plastykowe probówki (pojemność ml) anaerostaty do zapewnienia mikroaerofilnych warunków hodowli cieplarka na C (jeŝeli nie ma, moŝe być cieplarka na 7 C) ŚRODKI OSTROśNOŚCI Bezpieczeństwo:. Odczynniki dostarczone w zestawie słuŝą jedynie do diagnostyki in vitro.. Azydek sodowy uŝywany jako konserwant w zestawie odczynników moŝe reagować z ołowianą i miedzianą armaturą, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Utylizować zalewając duŝą objętością wody, aby zapobiec osadzaniu się azydków.. Odpowiednie środki ostroŝności naleŝy podjąć podczas pracy i usuwania potencjalnych organizmów patogennych. OdkaŜać materiał zakaźny podchlorynem sodowym w końcowym stęŝeniu % przez min. Płynne ścieki zawierające kwas powinno się neutralizować przed dalszą obróbką.. Kontrola dodatnia została inaktywowana w czasie procesu wytwarzania. Jednak powinno się w czasie pracy z nią zachować takie środki ostroŝności, jak podczas pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. M6 MICROGEN Campylobacter Strona
Środki proceduralne:. MICROGEN Campylobacter powinien być uŝywany zgodnie z dołączoną instrukcją.. Pozwolić wszystkim odczynnikom na osiągnięcie temperatury pokojowej przed uŝyciem.. Nie rozcieńczać Ŝadnego odczynnika z zestawu.. Nie mieszać odczynników z róŝnych partii i zestawów.. Nie zamraŝać Ŝadnych odczynników. 6. UwaŜać, Ŝeby zakraplacz z odczynnikiem lateksowym nie dotknął próbek bakteryjnych. 7. Przed uŝyciem upewnić się, Ŝe karta reakcyjna jest czysta i sucha. PRZECHOWYWANIE I TERMIN WAśNOŚCI MICROGEN Campylobacter powinien być przechowywany w temp. - 8 C, kiedy nie jest uŝywany. Zestawu nie naleŝy uŝywać po upływie daty waŝności wydrukowanej na naklejce na kartonie. PRÓBKI Próbki kału naleŝy posiać na wybiórcze płytki agarowe bez krwi (Preston Blood Free Agar) w ilości,, g materiału na płytkę. Płytki powinny być inkubowane w atmosferze mikroaerofilnej w C przez 8 godz. Kolonie o morfologii przypominającej Campylobacter naleŝy pobrać i sprawdzić testem MICROGEN Campylobacter (zob. niŝej). SPOSÓB WYKONANIA Kontrola jakości: Aby potwierdzić, Ŝe odczynniki działają prawidłowo, naleŝy za kaŝdym razem, kiedy uŝywa się zestaw, wykonać następujący sprawdzian z kontrolą dodatnią:. Dodać po jednej µl kropli kontroli dodatniej do oddzielnych pól na karcie testowej.. NaleŜy obie krople sprawdzić z lateksem testowym i kontrolnym, jak opisano w Sposobie wykonania testu poniŝej.. NaleŜy podejrzewać degradację odczynnika, jeŝeli: Brak reakcji między lateksem testowym i kontrolą dodatnią LUB reakcja wykazuje znaczny spadek nasilenia z upływem czasu. Lateks kontrolny reaguje z kontrolą dodatnią. Odczynnik lateksowy staje się bezbarwny lub tworzy kłaczki, które nie znikają po delikatnym wytrząsaniu. Sposób wykonania testu:. Doprowadzić wszystkie odczynniki do temperatury pokojowej. Delikatnie wytrząsnąć odczynniki lateksowe, aby otrzymać jednorodną zawiesinę.. Nanieść po µl rozcieńczalnika do próbek na dwa pola na czystej, suchej karcie reakcyjnej.. Przy pomocy ezy pobrać kilka kolonii o morfologii przypominającej Campylobacter. JeŜeli wzrost na płytce jest skąpy, pobrać bakterie przy pomocy wymazówki. Zmieszać bakterie z kaŝdą z dwu kropli rozcieńczalnika do próbek na karcie reakcyjnej, aby powstała jednorodna zawiesina.. Dodać kroplę ( µl) lateksu kontrolnego do zawiesiny bakteryjnej na jednym polu karty. Podobnie dodać kroplę ( µl) lateksu testowego do drugiej zawiesiny bakteryjnej.. Zmieszać zawiesiny bakteryjne z odczynnikami lateksowymi uŝywając patyczki do mieszania, zaczynając od lateksu kontrolnego. Rozprowadzić mieszaninę na całym polu na karcie reakcyjnej. 6. Obracać delikatnie kartę, utrzymując płynne zawiesiny w ciągłym ruchu przez minuty. Obserwować, czy zachodzi aglutynacja. 7. Odczytać wyniki (zob. INTERPRETACJA PONIśEJ). 8. Wyrzucić zuŝyte karty i patyczki do mieszania do odpowiedniego środka dezynfekcyjnego. M6 MICROGEN Campylobacter Strona
INTERPRETACJA WYNIKÓW Na reakcję aglutynacji wskazuje widoczna agregacja cząstek lateksu. Nasilenie reakcji moŝe być róŝne i moŝna je oznaczyć zgodnie z następującą skalą: + reakcja - drobne, ale łatwo zauwaŝalne ziarnistości na mlecznym tle ++ reakcja - grube ziarnistości na mlecznym tle +++ reakcja - intensywne kłaczki cząsteczek wokół brzegów pola, na przejrzystym tle. Wyniki MICROGEN Campylobacter powinny być interpretowane w następujący sposób: Reakcja z lateksem Reakcja z lateksem testowym kontrolnym Interpretacja + Obecny Campylobacter Campylobacter nieobecny w wystarczającej ilości, aby wykryć go przy pomocy testu + + Niespecyficzna aglutynacja. Wynik niepewny* *Próbka, która powoduje aglutynację lateksu kontrolnego, nie moŝe być badana MICROGEN Campylobacter OGRANICZENIA TESTU. Wyniki powinny być interpretowane przez lekarza w połączeniu z wszystkimi dostępnymi informacjami klinicznymi i laboratoryjnym.. Nieswoista autoaglutynacja z lateksem kontrolnym nie wyklucza obecności Campylobacter, ale wynik powinien być podany jako niejednoznaczny. Próbka powinna zostać zbadana inną metodą.. Bardzo małe ilości Campylobacter mogą dawać ujemny wynik testu. Powinno się uŝywać 8 - godz. hodowle, aby zmaksymalizować wzrost bakterii. CHARAKTERYSTYKA PORÓWNAWCZA Oznaczono MICROGEN Campylobacter jako test potwierdzający identyfikację hodowli dwóch niezaleŝnych centrach zewnętrznych oraz we własnym laboratorium. Ogółem 7 próbek kału posiano na płytki z agarem wybiórczym i inkubowano 8 godz., a kolonie badano przy pomocy MICROGEN Campylobacter. MICROGEN Campylobacter dodatnie ujemne ogółem Metody dodatnie referencyjne ujemne 8 8 ogółem 8 7 Czułość: / = 98,6% Swoistość: 8/8 = 99,7% Skuteczność: /7 = 99,% Swoistość MICROGEN Campylobacter potwierdzono badając szeroki zakres wyhodowanych mikroorganizmów: drobnoustrój Termofilne Campylobacter: C. jejuni C. jejuni ssp. doylei C. coli C. upsaliensis C. laridis C. fetus liczba szczepów 7 Wynik MICROGEN Campylobacter reakcja dodatni ujemny nieswoista 7 M6 MICROGEN Campylobacter Strona
Nie termofilne Campylobacter: C. concisus C. hyointestinalis C. sputorum faecalis C. curvis Ściśle spokrewnione bakterie: Helicobacter pylori Helicobacter fellinae Helicobacter cinaedi Arcobacter butzleri Arcobacter skirrowii Inne niespokrewnione bakterie: Providencia stuartii Providencia alcaligenes Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Citrobacter spp. Citrobacter freundii Paciorkowce α Paciorkowce β Klebsiella pneumoniae Klebsiella edwardsii Proteus mirabilis Proteus vulgaris Salmonella spp Salmonella (Grupa B) Salmonella (Grupa C) Salmonella flexneri Shigella dysenteriae Shigella sonnei Aeromonas hydrophila Staphylococcus aureus Enterobacter agglomerans Yersinia enterocolitica Clostridium difficile Vibrio spp. Vibrio cholera Vibrio parahaemolyticus Hafnia alvei Acinetobacter spp. Acinetobacter baumanii DroŜdŜaki 9 (słaba) 9 (słaba) (słaba) (silna) Wszystkie badane termofilne Campylobacter reagowały z MICROGEN Campylobacter. Nie - termofilne Campylobacter nie reagowały, chociaŝ z badanych szczepów wykazywały słaba nieswoistą aglutynację Z grupy ściśle spokrewnionych bakterii, z szczepów Helicobacter pylori słabo reagowały w teście, a szczepy Helicobacter cinaedi reagowały krzyŝowo. Przebadano równieŝ szeroki zakres niespokrewnionych bakterii. śadne nie reagowały testem, oprócz szczepu Acinetobacter baumanii, który dawał silną nieswoistą aglutynację. POWTARZALNOŚĆ Powtarzalność wewnątrz serii ustalono, badając czułość produktu z jednej serii dla seryjnych rozcieńczeń antygenu referencyjnego oraz dodatniej kontroli z zestawu przy róŝnych okazjach. Miana końcowe otrzymane dla referencyjnych/kontrolnych antygenów były identyczne we wszystkich trzech rozcieńczeniach. M6 MICROGEN Campylobacter Strona
Odtwarzalność między seriami ustalano, badając czułość serii produktu wobec seryjnych rozcieńczeń antygenu referencyjnego i kontroli dodatnich z zestawów. Nie zaobserwowano Ŝadnych znaczących róŝnic między końcowym mianem pomiędzy trzema seriami. DODATEK Preston Blood Free Agar, nr kat.. GRASO Biotech Krąg A. 8- Starogard Gdański Dział Obsługi Klienta: 8 6, 8 6 6 6 do 6 wew., zamowienia@graso.com.pl; www.podloza.pl, www.grasobiotech.pl M6 MICROGEN Campylobacter Strona