Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 1 z 9



Podobne dokumenty
DOT138v1 Instructions for Use Biofortuna SSPGo TM HLA No Template Control Kit BF Strona 1 z 7

Instrukcja używania zestawów do typowania antygenów zgodności tkankowej HLA SSPGo TM firmy Biofortuna (Biofortuna SSPGo TM HLA Typing Kits)

AmpliTest Babesia spp. (PCR)

Zestaw do wykrywania Chlamydia trachomatis w moczu lub w kulturach komórkowych

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

Zestaw do wykrywania Anaplasma phagocytophilum w kleszczach, krwi i hodowlach komórkowych

Zestaw do wykrywania Babesia spp. i Theileria spp. w kleszczach, krwi i hodowlach komórkowych

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA

AmpliTest GMO screening-nos (Real Time PCR)

AmpliTest Salmonella spp. (Real Time PCR)

AmpliTest Chlamydia/Chlamydophila (Real Time PCR)

TaqNova-RED. Polimeraza DNA RP20R, RP100R

Zestaw dydaktyczny. genotypowanie szczepów 5taphy/ococcus aureus metodą PCR-RFLP

Ćwiczenie 2. Identyfikacja płci z wykorzystaniem genu amelogeniny (AMGXY)

bi ~ Zestaw dydal<tyczny umożliwiający przeprowadzenie izolacji genomowego DNA z bakterii EasyLation Genomie DNA INSTRUI<CJA DLA STUDENTÓW

Gel-Out. 50 izolacji, 250 izolacji. Nr kat , Zestaw do izolacji DNA z żelu agarozowego. wersja 0617

Ćwiczenie 3. Amplifikacja genu ccr5 Homo sapiens wykrywanie delecji Δ32pz warunkującej oporność na wirusa HIV

MATERIAŁY SZKOLENIOWE DLA ZAKŁADÓW HIGIENY WETERYNARYJNEJ W ZAKRESIE LABORATORYJNEJ DIAGNOSTYKI AFRYKAŃSKIEGO POMORU ŚWIŃ

Badanie próbek żywności na obecność Genetycznie Zmodyfikowanych Organizmów. Rozdział 9

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu:

Ampli-LAMP Babesia canis

Zestaw do izolacji DNA z żeli agarozowych. Nr kat. EM08 Wersja zestawu:

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych

Modyfikacja genu wołowej beta-laktoglobuliny przy użyciu metody Overlap Extension PCR (wydłużania nakładających się odcinków)

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych. Nr kat. EM03 Wersja zestawu:

TaqNovaHS. Polimeraza DNA RP902A, RP905A, RP910A, RP925A RP902, RP905, RP910, RP925

ĆWICZENIE 1 i 2 Modyfikacja geu wołowej beta-laktoglobuliny przy użyciu metody Overlap Extension PCR (wydłużania nakładających się odcinków)

PCR bez izolacji testujemy Direct PCR Kits od ThermoFisher Scientific

Zestaw do oczyszczania DNA po reakcjach enzymatycznych

Techniki molekularne ćw. 1 1 z 6

Biologia medyczna, materiały dla studentów

umożliwiający wyl<rywanie oporności na HIV przy użyciu

Polimeraza Taq (1U/ l) 1-2 U 1 polimeraza Taq jako ostatni składniki mieszaniny końcowa objętość

Saccharomyces Transformer Kit zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Saccharomyces cerevisiae. Metoda chemiczna.

Opis przedmiotu zamówienia wraz z wymaganiami technicznymi i zestawieniem parametrów

RT31-020, RT , MgCl 2. , random heksamerów X 6

AmpliTest Panel odkleszczowy (Real Time PCR)

Syngen Gel/PCR Mini Kit

fix RNA Roztwór do przechowywania i ochrony przed degradacją próbek przeznaczonych do izolacji RNA kat. nr. E0280 Sierpień 2018

Ćwiczenie 5 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych

Genomic Mini AX Plant Spin

AE/ZP-27-74/16 Załącznik Nr 6

PathogenFree DNA Isolation Kit Zestaw do izolacji DNA Instrukcja użytkownika

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Analityka Medyczna 2016

Syngen Gel/PCR Mini Kit

Genomic Mini AX Milk Spin

Biochemia: Ćw. 11 Metoda RT-PCR

E.coli Transformer Kit

Metody badania ekspresji genów

ALGALTOXKIT F Procedura testu

GeneMATRIX Agarose-Out DNA Purification Kit

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 26/11

Genomic Mini AX Bacteria+ Spin

ELEKTROFOREZA. Wykonanie ćwiczenia 8. ELEKTROFOREZA BARWNIKÓW W ŻELU AGAROZOWYM

Odczynnik do izolacji RNA z tkanek zwierzęcych, roślinnych oraz linii komórkowych

AmpliTest BVDV (Real Time PCR)

ROTA-ADENO Virus Combo Test Device

Zestaw do izolacji genomowego DNA z bakterii

AmpliTest TBEV (Real Time PCR)

Genomic Micro AX Blood Gravity 96-well

INSTRUKCJA STOSOWANIA

Ćwiczenie numer 6. Analiza próbek spożywczych na obecność markerów GMO

Zakład Biologii Molekularnej Materiały do ćwiczeń z przedmiotu: BIOLOGIA MOLEKULARNA Farmacja 2016

Oferta firmy Argenta Spółka z ograniczoną odpowiedzialnością Sp.k. plastikowe materiały zużywalne do laboratorium PCR:

Genomic Micro AX Swab Gravity Plus

Zestaw do izolacji genomowego DNA z drożdży

Ćwiczenie 7 Klonowanie DNA w wektorach plazmidowych

PL B1. UNIWERSYTET PRZYRODNICZY W LUBLINIE, Lublin, PL BUP 04/14. SYLWIA OKOŃ, Dąbrowica, PL KRZYSZTOF KOWALCZYK, Motycz, PL

Genomic Maxi AX Direct

Olerup SSP Instrukcja użycia

Olerup SSP Instrukcja użycia

Total RNA Zol-Out. 25 izolacji, 100 izolacji

Autor: dr Mirosława Staniaszek

Genetyczne modyfikowanie organizmów Kierunek OCHRONA ŚRODOWISKA, II rok semestr letni 2015/16

Laboratorium Wirusologiczne

Załącznik nr 4 Metodyka pobrania materiału przedstawiona jest w osobnym Instrukcja PZH

Syngen Viral Mini Kit. Syngen Viral

CEL ĆWICZENIA: Zapoznanie się z przykładową procedurą odsalania oczyszczanych preparatów enzymatycznych w procesie klasycznej filtracji żelowej.

Genomic Maxi AX zestaw do izolacji genomowego DNA wersja 0616

Laboratorium 8. Badanie stresu oksydacyjnego jako efektu działania czynników toksycznych

SZCZEGÓŁOWY OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA Część I

Instrukcja ćwiczeń Biologia molekularna dla II roku Analityki Medycznej. Reakcja odwrotnej transkrypcji. Projektowanie starterów do reakcji PCR.

Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System, czyli Mercedes wśród termocyklerów do analizy PCR w czasie rzeczywistym

Oznaczenie polimorfizmu genetycznego cytochromu CYP2D6: wykrywanie liczby kopii genu

Laboratorium z bionanostruktur. Prowadzący: mgr inż. Jan Procek Konsultacje: WT D- 1 8A

GeneMATRIX Basic DNA Purification Kit

Obsługa pipet automatycznych. 2,0 μl 10,0 μl 20,0 μl 20 μl 100 μl 200 μl

Syngen Fungi DNA Mini Kit

Olerup SSP Instrukcja użycia

INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA

Genomic Midi AX. 20 izolacji

SNAP* BVD. Bovine Virus Diarrhea Antigen Test Kit. Zestaw diagnostyczny do wykrywania antygenu wirusa biegunki i choroby błon śluzowych bydła (BVD-MD)

E.coli Transformer Zestaw do przygotowywania i transformacji komórek kompetentnych Escherichia coli

Powodzenie reakcji PCR wymaga właściwego doboru szeregu parametrów:

Zastosowanie metody RAPD do różnicowania szczepów bakteryjnych

PROJEKT WSPÓŁFINANSOWANY PRZEZ UNIĘ EUROPEJSKĄ Z EUROPEJSKIEGO FUNDUSZU ROZWOJU REGIONALNEGO 1 z 7

Ilość TAK TAK TAK TAK TAK TAK

Transkrypt:

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 1 z 9 Instrukcja używania testów do wykrywania kontaminacji na powierzchniach roboczych ( wipe test ) przy typowaniu antygenów zgodności tkankowej HLA SSPGo TM firmy Biofortuna (Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01) Wydanie 3 zmienione lipiec 2014

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 2 z 9 1. Przeznaczenie Test Biofortuna SSPGo HLA Wipe Test jest przeznaczony do monitorowania powierzchni roboczych oraz wyposażenia laboratoryjnego pod względem kontaminacji amplikonami powstałymi w wyniku reakcji PCR podczas stosowania produktów Biofortuna SSPGo. 2. Wprowadzenie PCR jest czułą techniką podatną na kontaminację amplikonami DNA pochodzącymi z wcześniejszych reakcji PCR. Zanieczyszczenie może być przyczyną uzyskiwania fałszywie dodatnich wyników amplifikacji w kolejnych reakcjach PCR, co z kolei może prowadzić do uzyskania nieprawidłowych wyników genotypowania. Amplikony powstałe w wyniku reakcji PCR mogą powodować kontaminację odczynników i badanych próbek, jak również sprzętu laboratoryjnego, np. pipet. Dlatego też odczynniki i sprzęt laboratoryjny należy regularnie monitorować pod względem kontaminacji. 3. Opis testu Każdy test SSPGo HLA Wipe Test składa się z paska z ośmioma probówkami do reakcji PCR zawierającymi bufor PCR poddany suszeniu sublimacyjnemu, polimerazę i primery swoiste dla genu HLA-DRA, gdzie powstaną amplikony o wielkości 187 pz z ludzkiego genomowego DNA. Ze względu na fakt, iż wszystkie zestawy firmy Biofortuna wykorzystują amplikony DRA jako kontrolę wewnętrzną, wszelkie zanieczyszczenia wynikające ze stosowania zestawów Biofortuna SSPGo będą posiadały zamplifikowany gen DRA i zostaną wykryte przez primery testu do wykrywania kontaminacji wipe test. Każdy pasek z ośmioma probówkami bada maksymalnie trzy obszary pod względem obecności kontaminacji. Każdy pasek zawiera kontrolę dodatnią i ujemną, stanowiące integralną część reakcji oraz kontrole inhibicji dla każdego badanego obszaru. W celu przebadania danego obszaru pod kątem kontaminacji należy go najpierw przetrzeć za pomocą wymazówki, którą następnie zanurza się w wodzie. Woda ta jest stosowana jako matryca w teście do wykrywania kontaminacji wipe test oraz służy do utworzenia mieszaniny z genomowym DNA w stosunku 50:50 w teście inhibicji reakcji PCR. Zaleca się regularne przeprowadzanie testów kontaminacji. Typowe obszary, które należy badać, to obszar przygotowywania DNA (pre -PCR), obszar konfiguracji PCR oraz obszar do wykonywania czynności po zakończeniu amplifikacji (post-pcr). Typowe elementy, które należy badać, to stoły robocze, pipety, wirówki, uchwyty lodówek i zamrażarek, klamki drzwi oraz statywy. Typowe roztwory, które należy badać, to bufory do przygotowywania próbek DNA oraz rozcieńczalniki DNA. Stosowane do wielu badań odczynniki wielokrotnego użytku, takie jak bufory PCR oraz polimeraza Taq, są szczególnie podatne na kontaminację, jednakże nie dotyczy to zestawów firmy Biofortuna, bowiem są one kompletne i wymagają jedynie dodania DNA.

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 3 z 9 4. Zawartość zestawu 12 pasków po 8 probówek do reakcji PCR, z których każda zawiera po 10 µl uprzednio dodanych primerów poddanych suszeniu sublimacyjnemu, polimerazę, dntp* oraz bufor. Każdy opakowany w folię pasek służy do wykonania testu kontaminacji trzech obszarów. Poniżej pokazano schemat paska dla ośmiu probówek reakcyjnych. Probówka reakcyjna Barwnik Zastosowanie 1 czerwony kontrola dodatnia: DNA 2 purpurowy kontrola ujemna: woda do nawilżenia wymazówki 3 niebieski test inhibicji w obszarze 1: 50% DNA, 50% z materiałem z wymazówki ( ) 4 purpurowy test kontaminacji w obszarze 1 5 niebieski test inhibicji w obszarze 2: 50% DNA, 50% z materiałem z wymazówki ( ) 6 purpurowy test kontaminacji w obszarze 2 7 niebieski test inhibicji w obszarze 3: 50% DNA, 50% z materiałem z wymazówki ( ) 8 purpurowy test kontaminacji w obszarze 3 36 sterylnych wymazówek 12x8 wieczek do pasków PCR 1 instrukcja użytkowania 1 certyfikat badania (Certificate of Analysis) Karty charakterystyki można pobrać ze strony internetowej firmy Biofortuna: www.biofortuna.com. Jeśli pobranie tych danych ze strony internetowej nie powiedzie się, prosimy o kontakt z lokalnym dystrybutorem. *CleanAmp dntp zostały wykorzystane w produktach SSPGo firmy Biofortuna na mocy licencji udzielonej przez firmę Trilink Biotechnologies Inc. 5. Niedostarczone odczynniki i sprzęt odpowiednie pipety i jałowe końcówki, np. pipety P10 z końcówkami o obj. 10 µl wyposażonymi w filtry zestaw/sprzęt do izolacji DNA spektrofotometr UV probówki polipropylenowe jałowa woda o stopniu czystości do biologii molekularnej termocykler spełniający następujące warunki: 96-dołkowa głowica z podgrzewaną do temperatury 104 C pokrywą, w celu eliminacji konieczności używania oleju, szybkość zmiany temperatury 1,0 C/s, zakres osiąganych temperatur między 4,0 C a 99,9 C, dokładność termiczna ± 0,25 C w zakresie od 35 C do 99 C, kalibracja temperatury względem wzorca, możliwość programowania zgodnie z warunkami termicznymi reakcji PCR podanymi w rozdziale 8 poniżej. Uwaga: szczegóły dotyczące konkretnego termocyklera znajdują się w dołączonym do niego przez producenta podręczniku użytkownika. Termocykler powinien być skalibrowany zgodnie z wytycznymi akredytacyjnymi Amerykańskiego Towarzystwa Zgodności Tkankowej i Immunogenetyki ( American Society of Histocompatibility and Immunogenetic, ASHI) lub Europejskiej Federacji Immunogenetyki (European Federation of Immunogenetics, EFI). odczynniki do elektroforezy w żelu (agaroza, 0,5 TBE, markery masy cząsteczkowej do analizy fragmentów DNA o wielkości do 1000 pz, roztwór bromku etydyny o stężeniu 10 mg/ml)

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 4 z 9 sprzęt do elektroforezy w żelu (aparat do elektroforezy, zasilacz, system do dokumentacj i żeli z transiluminatorem UV) Uwaga: jakiekolwiek odstępstwo od podanych warunków, takie jak inna szybkość zmiany temperatury termocyklera, może zakłócić interpretację wyników testu. 6. Środki bezpieczeństwa i ostrzeżenia Testy powinny być wykonywane wyłącznie przez odpowiednio przeszkolony personel. Ze wszystkimi odczynnikami należy obchodzić się zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej. Czynności poprzedzające reakcję PCR oraz następujące po niej należy wykonywać w osobnych pomieszczeniach. Nie należy przenosić materiałów używanych po zakończeniu reakcji PCR z powrotem do pomieszczenia, gdzie wykonywane były czynności poprzedzające reakcję PCR. Ostrzeżenie o zagrożeniu biologicznym: Wszystkie preparaty krwiopochodne należy traktować jako potencjalnie zakaźne. Ostrzeżenie o zagrożeniu biologicznym: Bromek etydyny jest substancją potencjalnie rakotwórczą. W przypadku jego stosowania należy zawsze nosić rękawiczki, fartuch laboratoryjny oraz okulary ochronne. Ostrzeżenie o zagrożeniu biologicznym: Należy zachować ostrożność podczas stosowania źródeł promieniowania UV należy zawsze nosić rękawiczki, fartuch laboratoryjny oraz okulary ochronne. Nigdy nie należy patrzeć bezpośrednio w źródło światła UV. Karty charakterystyki są dostępne na stronie internetowej www.biofortuna.com. 7. Przechowywanie i stabilność Zestawy Biofortuna SSPGo powinny być przechowywane w temp. 2-28 C. Odczynniki powinny być rekonstytuowane poprzez dodanie próbek DNA w ciągu 3 godzin od wyjęcia naczynek PCR z foliowych woreczków. Data ważności jest podana na opakowaniu. Nie stosować produktów po upływie daty ważności podanej na opakowaniu. Nie stosować zestawów, jeśli woreczki foliowe są rozdarte lub podziurawione, albo jeżeli w opakowaniu brakuje saszetki z środkiem suszącym. Tylko używanie dołączonych folii lub wieczek zapewnia szczelne zamknięcie naczyń do PCR po dodaniu DNA. Pominięcie tego etapu może spowodować odparowanie próbek podczas amplifikacji metodą PCR. Należy zwracać szczególną uwagę na krawędzie i rogi naczynek. Uwaga (1): W razie konieczności, wyjęte z opakowań foliowych płytki lub paski do PCR mogą być przechowywane do 3 godzin w temperaturze do 21 C przy wilgotności względnej nie wyższej niż 60% przed dodaniem DNA. Uwaga (2): Po dodaniu DNA, płytki lub paski do PCR wyjęte ze świeżo otwartych opakowań foliowych mogą być przechowywane do 24 godzin w temperaturze 2-8 C przed etapem PCR, o ile zostały szczelnie zakryte w celu uniknięcia strat powodowanych parowaniem. 8. Sposób użycia Uwaga: Częstym źródłem kontaminacji są pipety stosowane do nastawiania reakcji PCR, dlatego też zaleca się przecierać końcówkę pipety oraz, jeśli to możliwe, wewnętrzną powierzchnię jej korpusu. Zaleca się także, by wszystkie testy do wykrywania kontaminacji przeprowadzać za pomocą pipet, które zostały już przebadane i dały wynik ujemny. W przypadku wykrycia kontaminacji należy postępować zgodnie z wytycznymi obowiązującymi w danym laboratorium w celu wyeliminowania kontaminacji, a następnie ponownie zbadać dane obszary. 1. W miejscu wolnym od DNA podpisać sterylne, wolne od DNaz, polipropylenowe probówki o poj. 2 ml dla każdego obszaru badanego za pomocą testu typu wipe test. Oznaczyć dodatkową probówkę jako Kontrola ujemna.

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 5 z 9 2. Używając pipety, o której wiadomo, że nie została zanieczyszczona, do każdej probówki o poj. 2 ml dodać po 500 µl jałowej, destylowanej o stopniu czystości Molecular Grade. 3. Zamoczyć sterylną wymazówkę z plastikowym aplikatorem w każdej probówce. 4. Przetrzeć badany obszar nawilżonym aplikatorem. 5. Ułamać lub odciąć plastikowy trzonek aplikatora i umieścić wymazówkę w wyjściowej probówce o poj. 2 ml, zawierającej wodę. 6. Krótko wymieszać na wytrząsarce typu worteks. 7. Wyjąć i usunąć wymazówkę za pomocą wyjałowionej pęsety. 8. Wirować przez 1 minutę przy prędkości wynoszącej 10 000 do 13 000 obr./min w mikrowirówce w celu usunięcia strątów. 9. Otworzyć foliową torebkę z zestawem testowym. Wszystkie testy należy nawilżyć łączną objętością 10 µl płynu, jak pokazano na schemacie 1. 10. Kontrola ujemna: Dodać 10 µl jałowej o stopniu czystości Molecular Grade do probówki kontroli ujemnej 2 (kolor purpurowy). 11. Dodać po 5 µl jałowej do probówki reakcyjnej 1, 4, 6, 8. 12. Kontrola dodatnia: Dodać po 5 µl ludzkiego genomowego DNA o stężeniu 10 ng/µl do probówki reakcyjnej 1 (kolor czerwony) oraz do probówki reakcyjnej 3, 5 oraz 7 (kolor niebieski). 13. Reakcje testu do wykrywania kontaminacji wipe test : Dodać po 5 µl odwirowanego płynu ( zawierającej materiał z wymazówki, czyli ) z 1. badanego obszaru do probówki reakcyjnej 3 i 4, z 2. badanego obszaru - do probówki reakcyjnej 5 i 6 oraz z 3. obszaru badanego - do probówki reakcyjnej 7 i 8. 14. Wszystkie probówki reakcyjne posiadają po 10 µl objętości ponownie nawodnionych materiałów, jak pokazano na schemacie 1. Zamknąć probówki za pomocą dostarczonych wieczek i kontynuować badanie przy użyciu tradycyjnych parametrów reakcji PCR za pomocą zestawu SSPGo, jak pokazano poniżej. Schemat 1. Probówka 1 CZERWONY 5 µl jałowej 5 µl DNA Probówka 2 PURPUROWY 10 µl jałowej Probówka 3 NIEBIESKI Obszar 1 5 µl DNA Probówka 4 PURPUROWY Obszar 1 5 µl jałowej Probówka 5 NIEBIESKI Obszar 2 5 µl DNA Probówka 6 PURPUROWY Obszar 2 5 µl jałowej Probówka 7 NIEBIESKI Obszar 3 5 µl DNA Probówka 8 PURPUROWY Obszar 3 5 µl jałowej Testy kontrolne Testy do wykrywania kontaminacji 3 miejsca KOMENTARZ DOTYCZĄCY TWORZENIA ZAWIESINY: Upewnić się, czy mieszaniny PCR utworzyły zawiesinę z badanymi próbkami w ciągu 3 godzin od wyjęcia płytki z foliowego woreczka. KOMENTARZ DOTYCZĄCY WYSOKOŚCI PŁYTKI PCR/PROBÓWEK W PASKU: Zaleca się, aby wysokość płytek oraz probówek w paskach była taka sama, jeśli są wkładane do tego samego urządzenia do PCR. Różne wysokości mogą spowodować niewystarczający kontakt płytek lub probówek z pokrywą grzejną aparatu do PCR. Może to przyczynić się do zmniejszenia wydajności amplifikacji metodą PCR lub też jej braku. Parametry reakcji PCR Dla reakcji PCR należy stosować poniższe parametry. Upewnić się, czy parametr szybkości zmiany temperatury (ang. ramp speed) jest ustawiony na co najmniej 1 C na sekundę, a następnie włączyć pokrywę grzejną. Pełne instrukcje dotyczące sposobu użycia, patrz instrukcja obsługi termocyklera. Termocyklery powinny być skalibrowane zgodnie z regułami akredytacyjnymi Amerykańskiego Towarzystwa Zgodności Tkankowej i Immunogenetyki ( American Society of Histocompatibility and Immunogenetic, ASHI) lub Europejskiej Federacji Immunogenetyki (European Federation of Immunogenetics, EFI).

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 6 z 9 Denaturacja 94 C 5 minut Denaturacja 96 C 15 sekund Annealing 66 C 50 sekund 10 cykli Polimeryzacja 72 C 30 sekund Denaturacja 96 C 15 sekund Annealing 64 C 50 sekund 20 cykli Polimeryzacja 72 C 30 sekund HOLD (utrzymanie temperatury) 15 C Elektroforeza żelowa Poniższe wskazówki dotyczą elektroforezy poziomej na żelu agarozowym: Przygotować 2% żel agarozowy w buforze 0,5x TBE. Po schłodzeniu żelu do temperatury ok. 60 C dodać bromek etydyny do uzyskania końcowego stężenia wynoszącego 0,5 µg/ml. Wylać żel i umieścić w nim grzebienie standardu microtitre (np. 12 x 8 zagłębień w odstępach 9 mm). Po zastygnięciu żelu wyjąć grzebienie i zalać żel buforem 0,5x TBE. Przenieść co najmniej 5 µl, lecz nie więcej niż 10 µl każdej reakcji z płytki lub paska probówek do odpowiedniego zagłębienia na żelu, zapisując położenie każdej reakcji. Do określania wielkości cząsteczek można skorzystać ze wzorca masy 100 pz. Prowadzić rozdział przez 20 minut w polu elektrycznym o natężeniu 10 V/cm. Szczegółowe informacje na temat poszczególnych urządzeń/wyposażenia, patrz instrukcje użytkowania wytwórcy aparatu do elektroforezy. Obrazowanie żeli powinno być przeprowadzone z użyciem systemu do dokumentacji żeli z transiluminatorem UV.

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 7 z 9 9. Interpretacja Wyniki badań dla obszarów, z których pobrano próbki, są ważne wyłącznie wtedy, gdy kontrola dodatnia daje wynik dodatni, a kontrola ujemna daje wynik ujemny. Badania dla obszarów, z których pobrano próbki, są ważne wyłącznie wtedy, gdy odpowiadające badanie kontroli inhibicji daje wynik dodatni. W przypadku obecności kontaminacji produktem PCR lub próbką DNA powinno się zaobserwować amplikony o wielkości 187 pz. Obecność wszelkich rozmazanych obrazów lub prążków o różnych rozmiarach także może wskazywać na kontaminację produktem reakcji PCR, natomiast obecność primerów-dimerów oraz innych artefaktów polimeryzacji primerów o wielkości mniejszej niż 100 pz należy zignorować. Probówka reakcyjna Barwnik Zastosowanie Wynik Wniosek Działanie 187 pz, Badanie ważne. Odpowiednie 1 czerwony użyciem innej kontroli DNA. Kontrola wynik dodatni DNA. Efektywna reakcja PCR. dodatnia Brak amplifikacji Badanie nieważne. Powtórzyć całe badanie z 187 pz, Badanie nieważne. Obecność Badać z użyciem innej 2 purpurowy wynik dodatni kontaminacji w wodzie i/lub na i pipety. Kontrola pipecie. ujemna Brak amplifikacji Badanie ważne. Brak kontaminacji w wodzie. 187 pz, Test kontaminacji ważny. Brak wynik dodatni inhibitorów. 3, 5, 7 niebieski Test inhibicji 4, 6, 8 purpurowy Test kontaminacji (wipe test) 10. Procedury zapewnienia i kontroli jakości Brak amplifikacji. 187 pz, wynik dodatni Brak amplifikacji Test kontaminacji nieważny. Obecność potencjalnych inhibitorów. Obecność kontaminacji. Wynik testu kontaminacji ujemny. Brak kontaminacji. Wyczyścić obszar sterylną wodą, powtórzyć. Odizolować i wyczyścić stosowane pipety. Wyczyścić zanieczyszczony obszar roztworem przeznaczonym do usuwania DNA. Powtórzyć badanie. Badanie testu: Amplikon PCR pochodzący z zestawu firmy Biofortuna został pozostawiony do wyschnięcia na powierzchni typu solid surface. Test do wykrywania kontaminacji przeprowadzono na nierozcieńczonym amplikonie, a następnie na amplikonie w rozcieńczeniach od 1x10 1 do 1x10 15. Amplikon został wykryty w rozcieńczeniach do 1x10 15 włącznie. Genomowe DNA pozostawiono do wyschnięcia na powierzchni typu solid surface. Test do wykrywania kontaminacji przeprowadzono na genomowym DNA o stężeniu 100 ng/µl, a następnie w rozcieńczeniach od 1x10 1 do 1x10 15. DNA wykryto w rozcieńczeniach do 1x10 3. 11. Bibliografia 1) Bunce M et al Tissue Antigens. 1995 Nov;46(5):355-67. 2) Saiki RK et al. Nature. 1986 Nov 13-19;324(6093):163-6.

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 8 z 9 12. Biofortuna HLA Wipe Test (v2): Arkusz z danymi o próbce Arkusz danych o próbce Zaleca się, aby sporządzić kopie tego arkusza przed rozpoczęciem wykonywania testu, bowiem zestaw testu do wykrywania kontaminacji na powierzchniach roboczych zawiera odpowiednią liczbę testów dla 36 obszarów (3 obszary na każdy pasek z 8 probówkami, 12 pasków w zestawie). Data przeprowadzenia badania: Badanie przeprowadził(a): Zatwierdził(a): Inne informacje: Numer partii zestawu: Probówka Barwnik Zastosowanie (patrz ulotka) Wynik badania Działanie Informacje o próbce 1 czerwony kontrola dodatnia: DNA 2 purpurowy kontrola ujemna: woda 3 niebieski test inhibicji w obszarze 1 4 purpurowy test kontaminacji w obszarze 1 5 niebieski test inhibicji w obszarze 2 6 purpurowy test kontaminacji w obszarze 2 7 niebieski test inhibicji w obszarze 3 8 purpurowy test kontaminacji w obszarze 3

Dot154v1 Instructions for Use for Biofortuna SSPGo TM HLA Wipe Test BF-40-01 Strona 9 z 9 13. Objaśnienia użytych symboli X Liczba testów P Przedstawiciel w krajach Wspólnoty Europejskiej i Sprawdzić w instrukcji użycia M Miejsce produkcji V Do diagnostyki in vitro H Data ważności 4: s 28: Temperatura przechowywania g Numer partii Rozprowadzane przez Global Trade Item Number 14. Dane kontaktowe wytwórcy Biofortuna Ltd 1 Hawkshead Road Croft Business Park Bromborough, CH62 3RJ, UK Telefon: +44 (0) 151 334 0182 E-mail: info@biofortuna.com Strona internetowa: www.biofortuna.com 15. Tłumaczenia FranÇaise: Traductions disponibles Deutsch: Übersetzungen verfügbar Español: Traducciones disponibles Italiano: Traduzioni disponibili České: Překlady k dispozici Danske: Tilgængelige oversættelser Έλληνες: διαθέσιμες μεταφράσεις Magyar: Fordítások Norske: Oversettelser tilgjengelig Polska: Tłumaczenia dostępne Português: Traduções disponíveis Россию: Переводы доступны Slovenskému: Preklady k dispozícii Türk: Çeviriler mevcut Svenska: Översättningar tillgängliga www.biofortuna.com