PRACOWNIA HEMOSTAZY COZL

Transkrypt

1 dr n.med. Jarosław Kuna MLD COZL 2017

2 PRACOWNIA HEMOSTAZY COZL czas PT,APTT,TT Fibrynogen (met. Claussa) czas korekcji APTT D-Dimer

3 PRACOWNIA HEMOSTAZY COZL wykrywanie zaburzeń czynnościowych płytek krwi w wyniku stosowania kwasu acetylosalicylowego(aspiryna) lub klopidogrelu symulowany jest proces uszkodzenia naczynia in vitro i procesy adhezji płytek najczęstsze zaburzenia czynności płytek związane są z mocznicą, VWF, stosowanie ASA

4 diagnostyka laboratoryjna Journal of Laboratory Diagnostics 2012 Volume 48 Number Praca poglądowa Review Article Laboratoryjne metody oceny działania klopidogrelu oraz innych leków przeciwpłytkowych blokujących receptor P2Y 12 Laboratory methods for evaluating effectiveness of clopidogrel and other antiplatelet drugs blocking the P2Y 12 receptor Kamila Syska, Jacek Golański Zakład Zaburzeń Krzepnięcia Krwi Katedry Diagnostyki Laboratoryjnej Uniwersytetu Medycznego w Łodzi

5 PRACOWNIA HEMOSTAZY COZL-TROMBOELASTOMETRIA badanie układu hemostazy (tworzenia skrzepu oraz fibrynolizy) wykorzystywana w rozległych operacjach chirurgicznych zwiększone ryzyko krwawienia EXTEM,INTEM, FIBTEM,APTEM

6

7 Rycina 1. Schematyczny obraz temogramu

8 fizjologia i małopłytkowość ytopenia abnormal ( narrow ) EXEM and INTEM traces, in the presence of normal F

9 hiperfibrynoliza A - hyperfibrinolysis

10 diagnostyka nadkrzepliwości A - ROTEM traces in the 4 minute of the running tests B - ROTEM traces in the 60 minute of the running tests my obrazujące wstępną (A) i ostateczną (B) diagnostykę nadkrzepliwośc

11 Point-of-Care Testing A Prospective, Randomized Clinical Trial of Efficacy in Coagulopathic Cardiac Surgery Patients Christian Friedrich Weber, Dr. med.,* Klaus Görlinger, Dr. med., Dirk Meininger, P.D. Dr. med., Eva Herrmann, Prof. Dr. rer. nat., Tobias Bingold, Dr. med., Anton Moritz, Prof. Dr. med., Lawrence H. Cohn, M.D., Ph.D.,# Kai Zacharowski, Prof. Dr. med., Ph.D., F.R.C.A.** Table 4. Allogenic Blood Product Exposure and Administered Coagulation Factor Concentrates Intraoperative Postoperative Cumulative Conventional Group POC Group P Value Conventional Group POC Group P Value Conventional Group POC Group P Value Packed erythrocytes Transfused 45 (90) 33 (66) (82) 32 (64) (98) 42 (84) patients Units 3 (2; 5) 2 (0; 3) (1; 4) 2 (0; 2) (4; 9) 3 (2; 6) transfused U FFP Transfused 39 (78) 16 (32) (38) 7 (14) (80) 20 (40) patients Units 4 (2; 5) 0 (0; 3) (0; 2) 0 (0; 0) (3; 8) 0 (0; 3) transfused U PC Transfused 24 (48) 10 (20) (52) 23 (46) (66) 28 (56) patients Units 0 (0; 3) 0 (0; 0) (0; 2) 0 (0; 2) (0; 5) 2 (0; 2) transfused U Desmopressin Treated 27 (54) 26 (52) (18) 10 (20) (70) 36 (72) 1.0 patients Units 26 (0; 28) 23 (0; 32) (0; 0) 0 (0; 0) (0; 32) 28 (0; 32) administered g Fibrinogen Treated 26 (52) 23 (46) (28) 16 (32) (60) 32 (64) patients Units 2 (0; 4) 0 (0; 4) (0; 2) 0 (0; 2) (0; 6) 2 (0; 4) administered g PCC Treated 16 (32) 13 (26) (32) 12 (24) (52) 22 (44) patients Units 0 (0; 1,200) 0 (0; 600) (0; 1,200) 0 (0; 0) , 200 (0; 1,800) 0 (0; 1,800) administered IU rviia Treated 9 (18) 1 (2) (8) 0 (0) (24) 1 (2) patients Units administered IU 0 (0; 0) 0 (0; 0) (0; 0) 0 (0; 0) (0; 0) 0 (0; 0) The data are presented as numbers (%) or medians (25 th, 75 th percentiles). FFP fresh frozen plasma; IU international units; PC pooled platelet concentrate; PCC prothrombin complex concentrate; POC point-of-care; rviia recombinant activated factor VIIa concentrate.

12 Anestezjologia i Ratownictwo 2013; 7: Anestezjologia Ratownictwo Nauka Praktyka / Anaesthesiology Rescue Medicine Science Practice ARTYKUŁ POGLĄDOWY/REVIEW PAPER Otrzymano/Submitted: Poprawiono/Corrected: Zaakceptowano/Accepted: Akademia Medycyny Zastosowanie tromboelastometrii w monitorowaniu dynamiki narastania, jakości i lizy skrzepu krwi pełnej nowe możliwości szybkiej i pewnej diagnostyki Application of thromboelastometry in monitoring of dynamics of formation, quality and lysis of the whole blood clot - new possibilities for rapid and reliable diagnosis Janusz Trzebicki 1, Gabriela Kuźmińska 1, Barbara Nicińska 1, Edyta Flakiewicz 1, Agnieszka Kulik 2, Tomasz Łazowski 1 1 I Klinika Anestezjologii i Intensywnej Terapii, Warszawski Uniwersytet Medyczny 2 Klinika Chirurgii Ogólnej i Transplantacyjnej, Warszawski Uniwersytet Medyczny G1 n=60 rutynowe testy oceny hemostazy G2 n=67 monitorowanie hemostazy + tromboelastometria FFP G1vsG2 p<0,05 KKCZ,KKP G1vsG2 p>0,05

13 Co wpływa na fałszywe wyniki układu krzepnięcia przygotowanie pacjenta (aktywność fizyczna,dieta,używki,leki) pobranie próbki (identyfikacja,niewłaściwy sprzęt,antykoagulant,proporcje,hemoliza) transport (temperatura,czas,warunki) przechowywanie (temperatura,czas) wirowanie (temperatura,czas,prędkość)

14 Co wpływa na fałszywe wyniki układu krzepnięcia

15 Czas transportu a badania układu hemostazy transport w specjalnych izotermicznych pojemnikach w statywach w pozycji pionowej mrożone osocze w pojemnikach z suchym lodem dokumentacja trwania czasu transportu i temperatury rozmrażamy próbki szybko i sprawdzamy występowanie precypitatów, ( kontrola stężenia fibrynogenu nie może się różnić o więcej niż 20% wartości przed zamrożeniem)

16 Oznaczenia wykonane z mrożonego osocza ryzyko wydłużenia czasu PT i APTT dopuszcza się w wyjątkowych przypadkach mrożenie materiału -20C (2 tygodnie) -70C (12miesięcy) Van Den Besselaar AM, Witteveen E, van der Meer FJ. Long- term stability of frozen pooled plasmas stored at -70 degrees C, -40 degrees C, and -20 degrees C for prothrombin time and International Normalized Ratio (INR) assessment. Thromb Res 2013; 131(4):

17 różne doniesienia.

18 Czas transportu a badania układu hemostazy diagnostyka laboratoryjna Journal of Laboratory Diagnostics Diagn Lab 2014; 50(1): Rekomendacje Recommendations Postępowanie przedanalityczne w laboratoryjnej diagnostyce zaburzeń hemostazy Zalecenia Sekcji Laboratoryjnej Diagnostyki Zaburzeń Hemostazy Polskiego Towarzystwa Diagnostyki Laboratoryjnej Preanalytical procedure in laboratory diagnostics of coagulation disorders Recommendations of the Haemostatic Disorders Working Group, Polish Society of Laboratory Diagnostics

19 Czas transportu a badania układu hemostazy Badanie pełna krew [godziny] *nie mniej niż ** osocze super-ubogopłytkowe (podwójne wirowanie) bd brak wiarygodnych danych materiał po odwirowaniu [godziny] osocze (-20 C)* [tygodnie] osocze (-70 C)* [miesiące] PT 6 6 bd bd APTT 1 4 bd bd HIT lub APS** (osocze) Inne (osocze) dimer D 4 (25 C), 12 (4 C) 4 (25 C), 24 (4 C) 2 12

20 Influence of temperature and storage duration on measurement o -dimers, fibrinogen, prothrombin time and t... - PubMed - NCBI , 21:01 PubMed Abstract Full text links Int J Lab Hematol Oct;35(5): doi: /ijlh Epub 2013 May 30. Influence of temperature and storage duration on measurement of activated partial thromboplastin time, D-dimers, fibrinogen, prothrombin time and thrombin time, in citrate-anticoagulated whole blood specimens. Abstract 1 Zhao Y, Lv G. INTRODUCTION: We report the effect of temperature and storage duration on a range of haematological analytes: activated partial thromboplastin time (APTT), D-dimers, fibrinogen (Fbg), prothrombin time (PT) and thrombin time (TT). All analytes were measured using a Sysmex CA7000 System with SIEMENS reagents. METHODS: One hundred and sixty patients were divided into two groups: samples from group A (80 patients) were used to assess the effect of storage at room temperature (RT) (0, 4, 8 and 24 h), and samples from group B (80 patients) were used to determine the effect of storage at 4 C. Percentage changes compared with baseline results (T = 0 result) were calculated, and clinically relevant differences were defined as a percentage change of >10%. RESULTS: Changes in APTT, D-dimer, Fbg, PT and TT results following 4, 8 and 24 h storage were statistically significant at RT and 4 C. For D-dimer, Fbg, PT and TT at both RT and 4 C, the mean percentage changes after all storage periods were <10%, but for APTT, the mean percentage change following 24 h storage was >10% and exceeded the analytical within-batch imprecision. CONCLUSION: We demonstrate that a storage time interval up to 24 h for D-dimers, Fbg, PT, and TT, and 8 h for APTT at either RT or 4 C is acceptable.

21 OPEN SUBJECT AREAS: PRE-CLINICAL STUDIES PROTEASES BIOCHEMICAL ASSAYS BIOPHYSICAL CHEMISTRY Received 19 November 2013 Accepted 8 January 2014 Published 27 January 2014 Correspondence and requests for materials should be addressed to Z.X.S. (zxshao@yeah. Effects of storage time and temperature on coagulation tests and factors in fresh plasma Limin Feng 1, Ying Zhao 1, Hongcan Zhao 2 & Zhexin Shao 3 1 Department of Laboratory Medicine, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou , China, 2 Department of Laboratory Medicine, The First People s Hospital of Hangzhou, Hangzhou , China, 3 Department of Hospital Office, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou , China. Coagulation tests and factors measurements have been widely applied in clinical practice. Pre-analytical conditions are very important in laboratory assessment.here,we aim to determine the effects of storage time and temperature on activated partial thromboplastin time (APTT), fibrinogen (Fbg), prothrombin time (PT), the international normalized ratio (INR), thrombin time (TT), factor VIII activity (FVIII:C), and factor IX activity (FIX:C) in fresh plasma. Seventy-two blood samples were tested after storage for 0 (baseline), 2, 4, 6, 8, 12, and 24 h at 256C (room temperature) and 46C (refrigeration) in two centers. The mean percentage change of greater than 10% and the numbers of samples with greater than 10% percentage changes more than 25% were used to determine clinically relevant difference. We demonstrated that samples for Fbg, PT/INR, and TT could be safely stored for #24 h; FVIII:C for #2 h; FIX:C for #4 h both at 46C and 256C; and APTT for #12 h at 46C and #8 h at 256C.

22 Table 2 The stabilities of PT/INR, APTT, Fbg, TT, FVIII:C, and FIX:C Mean percentage change (%) 2 h 4 h 6 h 8 h 12 h 24 h Acceptable Time (h) 4uC 25uC 4uC 25uC 4uC 25uC 4uC 25uC 4uC 25uC 4uC 25uC 4uC 25uC PT (s) INR APTT (s) * 17.46* 20.4* 12 8 TT (s) Fbg (g/l) FVIII:C (%) * * * * * * * * * * 2 2 FIX:C (%) * 29.67* 28.76* * * * * * 4 4 *indicates that changes.10% in individual samples occurred in.25% of samples.

23 Table 3 The optimal storage conditions of coagulation tests and factors in fresh plasma Reference Temperature PT INR APTT Fbg TT FVIII:C FIX:C Zhao et al. [2] 4uC 24 h - 8 h 24 h 24 h uC 24 h - 8 h 24 h 24 h - - Wang et al. [8] 4uC 6 h - 6 h uC 4 h - 4 h Saghir et al. [10] 4uC h uC 4 h - 2 h van Geest-Daalderop et al. [12] 4uC 6 h 6 h uC 6 h 6 h Kemkes-Matthes et al. [13] 4uC uC 24 h - 8 h 8 h 24 h - - Wang et al. [15] 4uC uC 8 h - 6 h 8 h 8 h - - Oddoze et al. [16] 4uC h uC h Rao et al. [17] 4uC 24 h - 12 h uC 24 h - 12 h : no result.

24 doświadczenia własne

25 Doświadczenia własne 14 osób - grupa kontrolna ( osoby zdrowe ) przeprowadzono oznaczenie czasu PT i APTT niezwłocznie po pobraniu oraz po 2h 6h i 12h,materiał przechowywano w temperaturze pokojowej i lodówce 8C.

26 ANALIZA STATYSTYCZNA uzyskane wyniki scharakteryzowano z użyciem średniej arytmetycznej i odchylenia standardowego Po sprawdzeniu normalności rozkładu i jednorodności wariancji. Do porównania wielu parametrów zależnych zastosowano analizę wariancji z powtarzanym pomiarem. Do porównania wartości wyjściowej czasu PT i APTT vs 2h 6h i 12h użyto testu Dunetta,natomiast dla porówniania wyników czasu PT i APTT w temp pokojowej i lodówce użyto testu t- Studenta. Przyjęto 5% błąd wnioskowania i związany z nim poziom istotności p<0,05 wskazujący na istnienie istotnych statystycznie różnic bądź zależności. Zastosowano oprogramowanie komputerowe Statistica v.10.0 (Stat-Soft, Polska).

27 Wstępne wyniki APTT temp pokojowa i lodówka APTT vs APTT 2hpok p=0,9934 APTT vs APTT 6hpok p=0,526 APTT vs APTT 12hpok p=0,1088 APTT vs APTT 2hlod p=0,9857 APTT vs APTT 6hlod p=0,348 APTT vs APTT 12hlod p=0,0045

28 Wstępne wyniki PT temperatura pokojowa i lodówka PT vs PT 2h pok p=0,903 PT vs PT 6h pok p=0,7214 PT vs PT 12h pok p=0,6846 PT vs PT 2h lod p=0,9371 PT vs PT 6h lod p=0,8014 PT vs PT 12h lod p=0,3914

29 lp. APTT PT APTT 2 h pok PT 2 h pok APTT 6 h pok PT 6 h pok APTT 12 h pok PT 12 h pok APTT 2 h lod PT 2 h lod APTT 6 h lod PT 6 h lod APTT 12 h lod PT 12 h lod wartośći średnie czasu APTT i PT w żadnej z grup nie różniły się o więcej niż 10% od wartości wyjściowej.

30 PODSUMOWANIE potrzebny jest kompromis - różne ośrodki prezentują różne dane i zalecenia 24h przechowywanie próbek do oznaczeń czasu PT wg CLSI Adcock DM. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline - Fifth Edi- tion. CLSI document H21-A5. Clinical and Laboratory Standards Institute 2008; 28(5). Zhao Y, Lv G. Influence of temperature and storage duration on measurement of activated partial thromboplastin time, D-dim- ers, fibrinogen, prothrombin time and thrombin time, in citrate- anticoagulated whole blood specimens. Int J Lab Hematol 2013; 35(5): Feng L, Zhao Y, Zhao H, et al. Effects of storage time and tem- perature on coagulation tests and factors in fresh plasma. Sci Rep 2014; 4:3868. doi: /srep h przechowywanie próbek do oznaczenia czasu PT Lippi G, Salvagno GL, Montagnana M, et al. Quality standards for sample collection in coagulation testing. Semin Thromb He- most 2012; 38(6): Mackie I, Cooper P, Lawrie A, et al. Guidelines on the laboratory aspects of assays used in haemostasis and thrombosis. Int J Lab Hematol 2012; 35(1): 1-13.

31 doświadczenia własne - fibrynogen

32 Zmienna Fibrynogen Clauss g/l Fibrynogen optycznie g/l Fibrynogen BN prospec g/l Statystyki opisowe (fibrynogen) N ważnych Średnia Mediana Minimum Maksimum Dolny Górny Odch.Std. Kwartyl Kwartyl 53 3, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , Fibrynogen optycznie g/l = 1,3718+0,6953*x Fibrynogen BN prospec g/l = 0,3303+1,1354*x Fibrynogen Clauss g/l Fibryno Fibryno

33 Thrombosis Research 126 (2010) e428 e433 Contents lists available at ScienceDirect Thrombosis Research journal homepage: mres Regular Article Comparison of the fibrinogen Clauss assay and the fibrinogen PT derived method in patients with dysfibrinogenemia W. Miesbach a,, J. Schenk b, S. Alesci a, E. Lindhoff-Last c a Haemophilia Center, Medical Clinic III/Institute of Transfusion Medicine, Johann Wolfgang Goethe-University, Frankfurt am Main, Germany b University Hospital Saarland, Institute of Transfusion Medicine, Germany c Goethe University Frankfurt, Medical Clinic III/Department of Angiology, Germany

34 Table 2 Two fibrinogen assay methods for diagnosis of dysfibrinogenemia: A comparison of two assay brands for each method. Clauss assay Prothrombin (PT) derived assay Immun. Heat Global functional assay Fibrinogen Gene Patient STA FIB-C g/l ACL-Top FIB-C g/l STA Fib PTder g/l ACL-Top Fib PTder g/l g/l g/l PT sec TT sec RT Sec 1 b0.60 b Asp 318 Gly 2 b N120 Nd 3 b N120 A-a-Arg-16-Cys 4 b0.60 b N120 g-ala-357-thr 5 b N120 A-a-Arg-16-Cys 6 b N120 A-a-Arg-16-Cys acquired 8 b0.60 b N120 g-ala-357-thr 9 b0.60 b N120 g-ala-357-thr 10 b N120 A-a-Arg-16-Cys 11 b0.60 b N120 g-ala-357-thr 12 b N120 A-a-Arg-16-Cys 13 b N120 Nd 14 b N120 A-a-Arg-16-Cys A-a-Arg-16-Cys Nd 17 b Nd N120 Nd A-a-Arg-16-Cys 19 b N120 A-a-Arg-16-Cys N120 Nd 21 b Cys65Tyr N120 Nd Nd Nd 37 Nd 24 b Nd N120 A-a-Arg-16-Cys Nd A-a-Arg-16-Cys N120 A-a-Arg-16-Cys Nd acquired Median N120 Range N 120 Normal range b20

35

36 Dziękuje za uwagę