BACTEC S.I.R.E. Drug Kit

Transkrypt

1 BACTEC S.I.R.E. Drug Kit PP118JAA 2007/06 Polski PRZEZNACZENIE Zestaw leku BACTEC S.I.R.E. zawiera œrodki przeciwko drobnoustrojom do stosowania wraz z po ywk¹ BACTEC 12B Medium przy badaniu pr¹tków gruÿlicy (Mycobacterium tuberculosis). Podstawowym zastosowaniem zestawu jest wykorzystywanie go wraz z urz¹dzeniem BACTEC 460TB. Przy jakoœciowych badaniach wra liwoœci M. tuberculosis z hodowli zaleca siê stosowanie jako œrodków dodatkowych do po ywki BACTEC 12B Culture Medium leków BACTEC S.I.R.E. (streptomycyny, izoniazydu, ryfampiny i etambutolu). STRESZCZENIE ORAZ PODSTAWOWE ZASADY DZIA ANIA Procedura BACTEC badania wra liwoœci pr¹tków Mycobacterium na lek opiera siê na tej samej podstawowej zasadzie, która jest wykorzystywana w metodzie konwencjonalnej, z tym wyj¹tkiem, e stosuje siê po ywkê ciek³¹ i zamiast zliczania kolonii po oko³o 3 tygodniach wzrost monitoruje siê radiometrycznie, a wyniki uzyskuje siê po 4-12 dniach. Za pomoc¹ metody BACTEC okreœla siê wra liwoœæ na leki, postêpuj¹c zgodnie ze zmodyfikowan¹ wersj¹ konwencjonalnej metody proporcji. 1 Za proporcjê krytyczn¹ dla opornoœci przyjmuje siê 1% dla wszystkich leków przeciwgruÿliczych. Oznacza to, e je eli opornoœæ wykazuje 1% lub wiêcej populacji Mycobacterium, hodowlê uznaje siê za oporn¹ w odniesieniu do wyniku podawanego przez pracowniê. Opornoœæ oznacza siê poprze z porównanie prêdkoœci wzrostu w fiolce kontrolnej i w fiolkach z po ywk¹ 12B Medium, zawieraj¹cych badany lek. ZASADY PROCEDURY Podstawowa zasada radiometrycznego testu opornoœci Mycobacterium BACTEC jest podobna do zasad wykorzystywanych w pierwotnej procedurze izolowania. Przy wzroœcie Mycobacterium w po ywce 7H12, zawieraj¹cej substrat wyznakowany 14 C, bakterie wykorzystuj¹ substrat i tworzy siê 14 CO 2. Iloœæ wykrywanego 14 CO 2 œwiadczy o prêdkoœci wzrostu w fiolce, a wyra a siê j¹ w postaci indeksu wzrostu (GI, Growth Index ). Jeœli badane drobnoustroje s¹ wra liwe na œrodek przeciwgruÿliczy dodany do po ywki, dochodzi do zahamowania wzrostu. To zahamowanie mo na wykrywaæ jako zmniejszenie lub bardzo niewielkie zwiêkszenie dziennego GI w porównaniu z kontrol¹. Je eli jednak drobnoustroje s¹ oporne, nie dochodzi do zahamowania lub te jest ono bardzo nieznaczne. Podczas wyznaczania 1% wartoœci opornoœci inokulum w fiolce kontrolnej powinno zawieraæ stukrotnie mniejsz¹ iloœæ bakterii ni fiolka zawieraj¹ca lek. Po inokulacji codziennie bada siê fiolkê z lekiem i fiolkê kontroln¹. Porównuje siê prêdkoœæ zwiêkszania siê GI, czyli iloœciow¹ zmianê w stosunku do dnia poprzedniego oznaczan¹ symbolem delta (Δ) GI fiolki kontrolnej i fiolek zawieraj¹cych leki. Je eli dzienne zwiêkszanie siê GI w fiolce z lekiem jest równe lub wiêksze ni w fiolce kontrolnej, badane drobnoustroje uznaje siê za oporne na lek. W przypadku populacji wra liwej dzienne zwiêkszenie GI by³oby wiêksze dla kontroli ni dla fiolki zawieraj¹cej lek. Na przyk³ad, je eli 1% populacji Mycobacterium wykazuje opornoœæ na izoniazyd (INH), to 99% bakterii ulega³oby zahamowaniu przez INH, a zaledwie 1% wykazywa³oby wzrost w fiolce z lekiem. Prêdkoœæ wzrostu w fiolce z lekiem by³aby podobna do prêdkoœci wzrostu w fiolce kontrolnej, w której umieszczono zaledwie 1/100 tej iloœci bakterii, która znalaz³a siê w fiolce z lekiem. ODCZYNNIKI Fiolki z lekiem BACTEC S.I.R.E. zawieraj¹ nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki przed przeprowadzeniem badania: Liofilizowane œrodki przeciwko drobnoustrojom w ka dej fiolce: Streptomycyna...1,2 mg Izoniazyd...0,02 mg Ryfampina...0,4 mg Etambutoll...1,5 mg Ostrze enia i œrodki ostro noœci: Do u ytku diagnostycznego in vitro. Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny. W próbkach klinicznych mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirus zapalenia w¹troby i ludzki wirus nabytego braku odpornoœci (HIV). Przy kontakcie z ka dym materia³em zanieczyszczonym krwi¹ lub innymi p³ynami ustrojowymi nale y przestrzegaæ Uniwersalnych œrodków ostro noœci 2-5 i zaleceñ obowi¹zuj¹cych w danej instytucji. Przed u yciem ka d¹ fiolkê nale y oceniæ pod k¹tem obecnoœci uszkodzeñ, zanieczyszczeñ lub pogorszenia jakoœci. NIE WOLNO u ywaæ fiolek wykazuj¹cych cechy zanieczyszczenia. Fiolki wykazuj¹ce cechy uszkodzenia nale y wyrzucaæ. W rzadkich przypadkach szklana butelka mo e byæ pêkniêta i podczas zdejmowania pokrywki albo innych manipulacji mo e dojœæ do z³amania jej szyjki. Przed pobraniem próbek z dodatnich fiolek hodowli z po ywk¹ 12B w celu za³o enia nowej hodowli, barwienia itp. nale y uwolniæ gaz, który mo e zostaæ wytworzony w wyniku metabolizmu bakterii. Nale y zawsze stosowaæ metody aseptyczne i ustalone œrodki ostro noœci, zabezpieczaj¹ce przed zagro eniem mikrobiologicznym. Procedury nale y przeprowadzaæ w odpowiedniej komorze bezpieczeñstwa biologicznego w pomieszczeniu z odpowiednim systemem wentylacji, zgodnie z zaleceniami CDC. 6 Przy manipulacji próbkami i hodowlami, zawieraj¹cymi drobnoustroje potencjalnie patogenne, nale y u ywaæ odpowiedniej odzie y ochronnej, maski i rêkawiczek. Stosowaæ siê do zaleceñ CDC i OSHA. W celu zmniejszenia do minimum mo liwoœci wycieku w czasie inokulacji stosowaæ strzykawki z ig³ami zamocowanymi na sta³e lub fabrycznie zamkniête koñcówki Luer-Lok. Stê enie leków, stosowane w konwencjonalnym badaniu wra liwoœci na leki, mo e byæ ró ne w ró nych pracowniach. Du e znaczenie ma dobranie równowa nego stê enia leku badanego przy badaniu wra liwoœci metod¹ BACTEC, je eli chce siê porównaæ wyniki uzyskane dwiema ró nymi metodami. Dodanie odpowiedniej iloœci leku badanego do po ywki hodowlanej jest kluczowym etapem w badaniu wra liwoœci. Zalecenia co do przechowywanie Fiolki z lekiem BACTEC S.I.R.E. nale y przechowywaæ w suchym, ch³odnym miejscu (2 8 C); nie nale y ich wystawiaæ na bezpoœrednie dzia³anie œwiat³a s³onecznego. Po rozprowadzeniu mo na je przechowywaæ nie d³u ej ni przez 3 dni w temperaturze 2 8 C lub mo na je zamroziæ do temperatury -20 C lub ni szej i przechowywaæ do szeœciu miesiêcy. Zamra aæ w ma³ych porcjach. Unikaæ wielokrotnego zamra ania i rozmra ania. Data wa noœci dotyczy nieotwartej butelki z liofilizowan¹ zawartoœci¹, przechowywanej w warunkach zgodnych z zaleceniami.

2 POBIERANIE PRÓBKI Do badañ wra liwoœci u ywa siê izolowanych, czystych, aktywnie rosn¹cych kolonii. Dok³adny opis: zobacz ulotkê do opakowania po ywki 12B Medium (PP116JAA) i Podrêcznik dotycz¹cy zestawu i procedury systemu BACTEC 460TB (MA-0029). PROCEDURA Dostarczane materia³y: Zestaw z lekiem BACTEC S.I.R.E. Materia³y wymagane, ale niedostarczane: Po ywka BACTEC 12B Medium, urz¹dzenie BACTEC 460TB, p³yn do rozcieñczania BACTEC, strzykawka 5 ml, woda destylowana/dejonizowana, strzykawka tuberkulinowa z ig³¹ przymocowan¹ na sta³e, roztwór odka aj¹cy, 70% alkohol izopropylowy. Procedura badania Leki BACTEC S.I.R.E. (streptomycyna, izoniazyd, ryfampina i etambutol) s¹ dostarczane w postaci liofilizowanej. Nale y postêpowaæ zgodnie ze standardow¹ procedur¹ i stosowaæ odpowiednie stê enie leków. Stê enie leków po rozprowadzeniu w 5 ml ja³owej wody destylowanej/dejonizowanej i po rozcieñczeniu (zgodnie z potrzeb¹) jest nastêpuj¹ce: Wspó³czynnik Iloœæ dodawana do Ostateczne stê enie w Lek Po rozprowadzeniu rozcieñczenia Stê enie/ml po ywki 12B Medium po ywce 12B Medium/mL Streptomycyna 5 ml 240 µg 0,1 ml 6,0 µg Streptomycyna 5 ml Rozcieñczenie 1:3 80 µg 0,1 ml 2,0 µg* Izoniazyd 5 ml 4 µg 0,1 ml 0,1 µg* Ryfampina 5 ml 80 µg 0,1 ml 2,0 µg* Etambutol 5 ml 300 µg 0,1 ml 7,5 µg Etambutol 5 ml Rozcieñczenie 1:3 100 µg 0,1 ml 2,5 µg* *Równowa nik stê enie krytycznego zalecanego przez CDC. Przyk³ady konwencjonalnych równowa nych stê eñ po ywek dla leków pierwszego i drugiego rzutu mo na znaleÿæ w Podrêczniku dotycz¹cym zestawu i procedury BACTEC 460TB, rozdzia³ IV. Je eli do osi¹gniêcia po ¹danego stê enia leku (zob. wy ej) niezbêdne jest rozcieñczenie, nale y w warunkach aseptycznych dokonaæ rozcieñczenia w wodzie destylowanej/dejonizowanej. Energicznie wstrz¹sn¹æ. Przygotowanie po ywki lekowej: Stosowaæ œwie o sporz¹dzony roztwór leku lub rozmroziæ probówkê z zamro onego zapasu roztworu leku. Za pomoc¹ strzykawki jednorazowej 1 ml dodaæ dok³adnie 0,1 ml do 4-mililitrowej fiolki z po ywk¹ BACTEC 12B Medium. Do ka dego leku u yæ oddzielnej strzykawki. Nale y zwróciæ uwagê, aby w strzykawce nie znalaz³y siê pêcherzyki powietrza i aby nie u ywaæ ostatniej 0,1 ml porcji ze strzykawki. Wszystkie fiolki po ywki 12B Medium stosowane w badaniu nale y przed badaniem poddaæ testom wstêpnym na urz¹dzeniu BACTEC 460TB, aby utworzyæ atmosferê CO 2 i wykluczyæ wszystkie fiolki, w których GI wynosi³by 20 lub wiêcej. Przygotowanie inokulum bakteryjnego: Do rozpoczynania badania wra liwoœci u ywa siê aktywnie rosn¹cych hodowli M. tuberculosis w po ywce 12B Medium lub na po ywce sta³ej. Je eli na fiolce BACTEC 12B jest napis 10", nale y dokonaæ ponownej inkubacji i przeprowadzaæ codzienne badanie. Przy rozpoczynaniu badania wra liwoœci nale y korzystaæ z poni szej tabeli. ODCZYT DZIENNY DZIA ANIE GI Inkubowaæ przez jeszcze jeden dzieñ, po czym rozpocz¹æ badanie. GI Rozpocz¹æ badanie tego samego dnia. GI 800 Rozcieñczyæ w stosunku 1:2, stosuj¹c 1 ml p³ynu do rozcieñczania; rozpocz¹æ badanie. Je eli zachodzi potrzeba od³o enia na póÿniej badania wra liwoœci, fiolkê 12B nale y zamroziæ. Badanie wra liwoœci nale y wówczas rozpocz¹æ w ci¹gu jednego tygodnia. Sporz¹dziæ jednorodne inokulum bakteryjne poprzez wci¹ganie po ywki do jednorazowej strzykawki z ig³¹ przymocowan¹ na sta³e na przemian z wypychaniem jej zawartoœci do fiolki. Czynnoœæ powtórzyæ kilkakrotnie bez wyjmowania ig³y z przegrody fiolki. To inokulum stosuje siê bezpoœrednio w badaniu wra liwoœci na leki. Hodowla na po ywce sta³ej: Sporz¹dziæ jednolit¹ zawiesinê kilku kolonii na po ywce sta³ej. Hodowla nie powinna mieæ wiêcej ni 4-5 tygodni. Dobraæ zmêtnienie zawiesiny tak, by odpowiada³o wartoœci 1,0 w skali McFarland przy stosowaniu schematu codziennego lub 0,5 przy stosowaniu schematu dla dni roboczych. Je eli nie jest znana ywotnoœæ lub wiek hodowli, nale y rozpocz¹æ z danej hodowli kolejn¹, na po ywce 12B Medium, aby uzyskaæ œwie y wzrost. Inokulacja: Fiolki z po ywk¹ 12B Medium ustawiæ na tacy i odpowiednio oznaczyæ (zwykle jako: kontrola, streptomycyna, izoniazyd, ryfampina, etambutol ). Bêdzie potrzebne po jednej fiolce dla ka dego stê enia leku i jedna fiolka kontrolna. (Mo na wykorzystaæ kartonowe tace transportowe). Po za³o eniu rêkawic gumowych, w komorze bezpieczeñstwa biologicznego inokulowaæ po 0,1 ml zawiesiny bakterii do ka dej fiolki z po ywk¹ 12B Medium BACTEC, zawieraj¹cej lek. Do inokulacji stosowaæ jednorazow¹ strzykawkê tuberkulinow¹ z ig³¹ przymocowan¹ na sta³e. W przypadku fiolki kontrolnej nie dokonywaæ bezpoœredniej inokulacji zawiesiny, lecz najpierw rozcieñczyæ zawartoœæ w stosunku 1:100, przenosz¹c 0,1 ml zawiesiny do 9,9 ml specjalnego p³ynu do rozcieñczania. Po starannym zmieszaniu (co najmniej 10-krotne odwrócenie do góry dnem) inokulowaæ 0,1 ml tego rozcieñczenia do kontrolnej fiolki z po ywk¹ 12B Medium (bez leku). Wierzcho³ek ka dej inokulowanej fiolki przetrzeæ gazikiem zamoczonym w odpowiednim œrodku odka aj¹cym i nastêpnie przetrzeæ 70% alkoholem. Inkubowaæ w temperaturze 37 C ±1 C. Schemat odczytu: Schemat badania codziennego: Fiolki badaæ codziennie (tak e w weekendy i œwiêta) mniej wiêcej o tej samej porze (± 2 h) na urz¹dzeniu BACTEC 460TB a do uzyskania w fiolce kontrolnej GI wynosz¹cego co najmniej 30. Badaæ co najmniej przez 4 dni i co najwy ej przez 12 dni. Przy tym schemacie badanie wra liwoœci na leki mo na rozpocz¹æ w dowolnym dniu tygodnia. Schemat badania w dni robocze: Procedura jest podobna jak przy opisanym powy ej badaniu codziennym, z nastêpuj¹cymi wyj¹tkami: 7 (a) Wszystkie hodowle dodatnie nale y zbieraæ razem i wszystkie badania wra liwoœci rozpoczynaæ tylko w pi¹tki. Nale y postêpowaæ zgodnie z procedurami opisanymi powy ej. (b) Je eli u ywa siê dodatniej fiolki BACTEC zob. tabelê powy ej. Badanie inokulowanych fiolek rozpoczynaæ w poniedzia³ek, pomijaj¹c weekend. Fiolki nale y badaæ co najmniej w poniedzia³ek, wtorek i œrodê (co najmniej przez 5 dni od inokulacji i co najwy ej przez 12 dni), mniej wiêcej o tej samej porze ka dego dnia (± 2 h). 2

3 Bezpoœrednie badanie wra liwoœci na lek: Je eli próbka jest dodatnia ze wzglêdu na AFB w rozmazie, zwykle zawiera Mycobacterium w iloœci dostatecznej do wykonania badania wra liwoœci na lek w po ywce 12B Medium. Procedura jest w zasadzie taka sama, jak w przypadku poœredniego badania wra liwoœci. Ró nice w procedurze s¹ nastêpuj¹ce: Po obróbce próbki po ywkê hodowlan¹ inokulowaæ i sporz¹dziæ rozmaz do barwienia AFB. Zamroziæ pozosta³¹ czêœæ koncentratu próbki. Zbadaæ rozmaz AFB. Je eli jest on dodatni w metodzie Ziehla-Neelsena lub w metodzie fluorochromowej, rozpocz¹æ tego samego dnia badanie wra liwoœci. Do wszystkich fiolek zawieraj¹cych lek i do wszystkich fiolek niezawieraj¹cych leku (kontrolnych) dodaæ BACTEC PANTA. Do fiolek zawieraj¹cych lek dodaæ 0,1 ml dok³adnie zmieszanego koncentratu próbki. Koncentrat próbki rozcieñczyæ w stosunku 1:10 i inokulowaæ 0,1 ml do fiolki kontrolnej. Inkubowaæ w temperaturze 37 C i badaæ fiolki na urz¹dzeniu systemu BACTEC 460TB co 2-3 dni, co najwy ej przez 21 dni. Próbki o wybitnie dodatnim wyniku z rozmazu badaæ codziennie. Wyniki interpretowaæ, gdy GI kontroli osi¹ga 20 lub wiêcej. Wyniki potwierdziæ poœrednim badaniem wra liwoœci. Wyniki mo na wydawaæ dopiero po potwierdzeniu to samoœci M. tuberculosis testem BACTEC NAP lub innymi testami. Kontrola jakoœci NIE U YWAÆ fiolek po up³ywie ich daty wa noœci. NIE U YWAÆ fiolek, które wykazuj¹ pêkniêcia lub defekty; utylizowaæ fiolkê w odpowiedni sposób. Do ka dego zestawu S.I.R.E. s¹ do³¹czone certyfikaty kontroli jakoœci. W certyfikatach kontroli jakoœci znajduj¹c siê informacje o drobnoustrojach stosowanych do danego typu produktu. Przed u yciem nale y oceniæ wszystkie fiolki pod k¹tem ewentualnych cech pogorszenia jakoœci. Nie nale y u ywaæ fiolek wykazuj¹cych zmêtnienie, zanieczyszczenie lub zmianê zabarwienia (ciemniejsz¹ barwê). Nie nale y stosowaæ fiolek z lekiem S.I.R.E. wykazuj¹cych obecnoœæ wilgoci (brak pulchnego wygl¹du). Wydajnoœæ leków mo na sprawdzaæ poprzez badanie wra liwoœci jednego lub wiêcej ni jednego drobnoustroju kontrolnego za ka dym razem, gdy rozpoczyna siê badanie wra liwoœci. Nr ATCC Szczep M. tuberculosis, H37Rv wra liwy na leki S.I.R.E M. tuberculosis, H37Rv oporny na streptomycynê M. tuberculosis, H37Rv oporny na izoniazyd M. tuberculosis, H37Rv oporny na etambutol M. tuberculosis, H37Rv oporny na ryfampinê Nale y zawsze stosowaæ szczep H37Rv ATCC i powinien on zawsze wykazywaæ wra liwoœæ. Je eli ta hodowla wykazuje opornoœæ na jakikolwiek lek lub jeœli kontrola badania wra liwoœci jakiejœ hodowli nie wykazuje wzrostu (w ci¹gu 12 dni), wyniku nie nale y wydawaæ. Badanie powtórzyæ. W ramach codziennej obs³ugi nale y badaæ fiolki kontroli wydajnoœci (z zestawu kontroli wydajnoœci BACTEC) na urz¹dzeniu BACTEC. Je eli uzyskuje siê niskie odczyty, a fiolki kontroli wydajnoœci zosta³y prawid³owo zbadane, mo e to wskazywaæ na obecnoœæ problemów z urz¹dzeniem (zob. ulotkê do opakowania BACTEC PTK, PP046JAA). Nale y stosowaæ siê do wymagañ odnoœnie do kontroli jakoœci zgodnie z przepisami miejscowymi, krajowymi i/lub federalnymi, i do standardowych procedur kontroli jakoœci pracowni. Zaleca siê, aby u ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich zaleceñ CLSI (dawniej NCCLS) i przepisów CLIA, dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci. INTERPRETACJA WYNIKÓW Gdy fiolki kontrolne osi¹gaj¹ wartoœæ GI wynosz¹c¹ 30 lub wiêcej, wyniki nale y interpretowaæ w nastêpuj¹cy sposób: je eli wartoœæ ΔGI jest mniejsza w fiolce z lekiem ni w fiolce z kontrol¹, populacja jest wra liwa; je eli jest wiêksza, populacja jest oporna. ΔGI (kontrola) > ΔGI (lek) wra liwoœæ ΔGI (kontrola) < ΔGI (lek) opornoœæ ΔGI (kontrola) ΔGI (lek) wartoœæ graniczna W tabeli poni ej przedstawiono dane uzyskane z M. tuberculosis hodowanego na po ywce sta³ej i badanego z zastosowaniem metody badania wra liwoœci BACTEC. Podobne dane uzyskano dla M. tuberculosis hodowanego pocz¹tkowo w po ywce 12B Medium. Ze wzglêdu jednak na mniejsz¹ liczbê komórek w inokulum, pocz¹tkowe odczyty mog¹ byæ ni sze. Dzienny odczyt GI Dzieñ Kontrola Streptomycyna Izoniazyd Ryfampina Etambutol ΔGI Wyniki Wra liwe Oporne Wra liwe Wra liwe OGRANICZENIA PROCEDURY Zmiana sposobu przygotowania inokulum wp³ywa na wyniki badania wra liwoœci zw³aszcza obecnoœæ du ych skupisk i nieprawid³owe rozcieñczenie 1:100 w fiolce kontrolnej. Je eli wzrost w fiolce kontrolnej jest niezadowalaj¹cy, badanie nale y powtórzyæ. Zanieczyszczenie Nale y zachowaæ ostro noœæ, aby nie dopuœciæ do zanieczyszczenia w czasie inokulacji do fiolki BACTEC 12B. Zanieczyszczona próbka da odczyt dodatni, lecz nie wskazuje na odpowiedni wynik kliniczny. Takiego ustalenia musi dokonaæ u ytkownik na podstawie analizy takich czynników, jak typ uzyskanego drobnoustroju, wystêpowanie tego samego drobnoustroju w wielu hodowlach, wywiad pacjenta, odpowiednie kontrole aparatury itd. Zanieczyszczenie mo e byæ tak e skutkiem nieprawid³owej konserwacji igie³ i przewodów BACTEC, niew³aœciwego oczyszczania przegrody lub nieprawid³owego dzia³ania jednostki g³owicy ig³y BACTEC (zob. instrukcjê obs³ugi i konserwacji TB Hood). Z powodu natury materia³u biologicznego zawartego w pod³o ach i wrodzonej ró norodnoœci organizmów u ytkownik powinien zdawaæ sobie sprawê z potencjalnej ró norodnoœci wyników przy wzroœcie niektórych organizmów. 3

4 OCZEKIWANE WARTOŒCI W przypadku ryfampiny, streptomycyny i izoniazydu zwykle pocz¹tkowo obserwuje siê przez kilka dni znaczne zmniejszenie GI, je eli populacja jest wra liwa. W przypadku etambutolu obserwuje siê zwykle niewielkie pocz¹tkowe zwiêkszenie GI, po czym wartoœci GI zaczynaj¹ siê zmniejszaæ. Prêdkoœæ zmniejszania siê GI zale y od prêdkoœci dzia³ania leku i od wra liwoœci bakterii. Je eli hodowla M. tuberculosis zawiera mieszan¹ populacjê drobnoustrojów wra liwych i opornych, wartoœci ΔGI w stosunku do czasu bêd¹ siê zmniejszaæ w zale noœci od odsetka populacji wra liwej. W przypadku bezpoœredniego badania wra liwoœci, powodzenie i niezbêdny czas bêdzie zale a³ od tego, czy rozmaz bêdzie dodatni. W literaturze opisywano, e œrednia, przy dobrej zgodnoœci z wynikami testów konwencjonalnych, wynosi dni. 8,9 CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCI W niektórych opublikowanych badaniach donoszono, e wyniki uzyskane metod¹ badania wra liwoœci BACTEC wykazywa³y dobr¹ zgodnoœæ z konwencjonaln¹ metod¹ proporcji (z wykorzystaniem po ywek 7H10/7H11) i z metod¹ stosunku opornoœci (z zastosowaniem po ywki z jaj Lowensteina- Jensena). 1,10-15 Oceniono tak e dok³adnoœæ i powtarzalnoœæ metody badania wra liwoœci BACTEC: wyniki czêsto uzyskiwano w ci¹gu 4-6 dni Badanie Huang i wsp., porównuj¹ce system BACTEC 460TB z metod¹ proporcji, da³o nastêpuj¹ce wyniki: 21 Tabela 1. Wyniki badañ wra liwoœci drobnoustrojów i indeksów wydajnoœci diagnostycznej, oceniane w systemie BACTEC 460TB, w porównaniu z metod¹ rozcieñczania na agarze, przeprowadzone na 47 izolatach M. tuberculosis. Liczba izolatów, dla których uzyskano wymienione wyniki Indeksy wydajnoœci diagnostycznej Lek, metoda, Agar W Agar R Swoistoœæ Czu³oœæ i stê enie leku* W obu W W obu O BACTEC O BACTEC W (%) (%) STR INH BACTEC 2,0 µg/ml ,8 BACTEC 0,1 µg/ml ,1 96,7 RMP BACTEC 2,0 µg/ml ,8 87,5 EMB BACTEC 2,0 µg/ml ,7 25 *W metodzie rozcieñczania na agarze leki badano w nastêpuj¹cym stê eniu: STR 2 µg/ml; INH 0,2 µg/ml; RMP 1,0 µg/ml, EMB 5 µg/ml. W = wra liwe; O = oporne. W badaniu przeprowadzonym przez Bemer i wsp. Porównywano system BACTEC 460TB S.I.R.E. z systemem BACTEC MGIT 960 S.I.R.E. Przebadano sto dziesiêæ szczepów, uzyskuj¹c ogóln¹ zgodnoœæ wynosz¹c¹ 93,5%. Czas obrotu wynosi³ od 4,0 do 10,0 dni dla BACTEC 460TB S.I.R.E. (œrednio 7,0 dni). 22 Tabela 2. Wyniki badania podatnoœci na leki klinicznych szczepów M. tuberculosis, badanych w systemach BACTEC MGIT 960 i BACTEC 460TB. Liczba wyników, które by³y: Lek Liczba testów W w obu O w MGIT 960; W w MGIT 960; O w obu Zgodnoœæ (stê enie w µg/ml) systemach W w 460TB O w 460TB systemach (%) INH (0,1) ,4 INH (0,4) ,7 RIF (2,0) ,1 EMB (2,5) ,4 EMB (7,5) ,4 STR (2,0) ,8 STR (6,0) ,6 Ca³kowita liczba testów ,5 W wra liwy; O oporny. W badaniu przeprowadzonym przez Bergmann i Woods porównywano leki: etambutol i streptomycynê w systemie BACTEC 460TB S.I.R.E. z metod¹ proporcji. Wyniki przedstawiono w poni szej tabeli: 23 Tabela 3. Pocz¹tkowe wyniki badania opornoœci na etambutol i streptomycynê w systemie BACTEC i metod¹ proporcji. Liczba wyników, które by³y: Lek system BACTEC MOP Liczba izolatów Etambutol W W 63 O O 8 W O 3 Streptomycyna W W 59 O O 14 O W 1 Skróty: MOP metoda proporcji; W, wra liwe; O, oporne. W oddzielnym badaniu Bergmann i Woods zajêli siê równie izoniazydem i streptomycyn¹ na systemie BACTEC 460TB S.I.R.E. i porównywali je z metod¹ proporcji: 24 4

5 Tabela 4. Wyniki badania wra liwoœci izolatów klinicznych M. tuberculosis metod¹ proporcji, BACTEC 460TB. Liczba izolatów z wynikami a : Leki MOP BACTEC i wynik 460TB Izoniazyd (stê enie niskie b ) Wra liwe Oporne 4 4 Izoniazyd (stê enie wysokie c ) Wra liwe Oporne 1 2 Ryfampina Wra liwe Oporne 3 3 a MOP metoda proporcji. b stê enie niskie 0,2 µg/ml dla metody proporcji i 0,1 µg/ml dla BACTEC 460TB. c stê enie wysokie 1,0 µg/ml dla metody proporcji i 0,4 µg/ml dla BACTEC 460TB. DOSTÊPNOŒÆ Numer katalogowy Opis Zestaw leków BACTEC S.I.R.E., 2 fiolki liofilizowanej streptomycyny, 2 fiolki liofilizowanego izoniazydu, 2 fiolki liofilizowanej ryifampiny, 2 fiolki liofilizowanego etambutolu BACTEC Isoniazid 1 fiolka liofilizowanego izoniazydu BACTEC 12B Medium 4 ml, 100 w opakowaniu. PIŒMIENNICTWO: 1. Canetti, G. et al. Advances in techniques of testing mycobacterial drug susceptibility, and the use of sensitivity test in tuberculosis programmes. Bull. W.H.O. 1969, 41: National Commitee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, PA. 3. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 5. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23: , Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Stager, C.E. et al. Identification and susceptibility testing of M. tuberculosis by direct inoculation of smear-positive specimens into BACTEC 12A media. Abstract, C301, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Bannister, E.R. et al. Comparison of detection, identification and drug susceptibility testing of mycobacteria by using the BACTEC radiometric method and conventional methods. Abstract C260, A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18: , Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13: Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric procedure and two conventional methods. J. Clin. Microbiol. 1985, 22: Vincke, G. et al. Rapid susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric technique. J. Antimicrobiol. Chemother. 1982, 10: Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123: , Good, R.C. et al. Reproducibility of drug susceptibility tests with M. tuberculosis. Abstract U5, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Siddiqi, S.H. et al. Accuracy and reproducibility of the BACTEC drug susceptibility testing of M. tuberculosis. Abstract 1041, I.C.A.A.C. Annual Meeting, Las Vegas, NV, Terrand, J.J. et al. Evaluation of the BACTEC radiometric method for detection of 1% resistant populations of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1985, 21: Woodley, C.L. Evaluation of streptomycin and ethambutol concentrations for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and conventional procedures. J. Clin. Microbiol. 1986, 23: Heifets, L.B. "Drug susceptibility in the chemotherapy of mycobacterial infection." C.R.C. Press, Inc., Boca Raton, FL, Huang, T., H. Tu, S. Lee, W. Huang and Y. Liu Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs: comparisons of the MGIT 960 and BACTEC 460 systems. Ann. Clini. Lab. Sci. 32:

6 22. Bemer, P., F., Palicova, S., Rüsch-Gerdes, H., Drugeon, and G., Pfyffer, Multicenter evaluation of fully automated BACTEC Mycobacteria Growth Indicator Tube 960 System for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 40: Bergmann, J.S., and G.L. Woods Reliability of mycobacteria growth indicator tube for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to ethambutol and streptomycin. J. Clin. Microbiol. 35: Bergmann, J.S., and G.L. Woods Evaluation of the ESP culture system II for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis isolates to four primary antituberculosis drugs. J. Clin. Microbiol. 36:

7 7

8 Becton, Dickinson and Company BENEX Limited 7 Loveton Circle Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Sparks, Maryland USA Shannon, County Clare, Ireland Tel.: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, MGIT, PANTA and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.