BACTEC Standard /10 Aerobic /F Culture Vials

Transkrypt

1 BACTEC Standard /10 Aerobic /F Culture Vials PP105JAA 2008/01 Polski PRZEZNACZENIE Fiolki BACTEC do hodowli Standard/10 Aerobic/F (wzbogacony sojowo-kazeinowy bulion trawi¹cy z CO 2 ) s³u ¹ do hodowli tlenowej krwi. Podstawowe zastosowanie do aparatów BACTEC serii fluorescencyjnej do tlenowej, iloœciowej hodowli i odzysku mikroorganizmów (bakterii i dro d y) z krwi. STRESZCZENIE I OBJAŒNIENIE Próbka do badania jest inokulowana do jednej lub wiêcej fiolek, które s¹ umieszczane w aparacie fluorescencyjnym BACTEC w celu inkubacji i okresowego odczytu. Ka da fiolka zawiera chemiczny sensor, który mo e wykrywaæ zwiêkszenie iloœci CO 2 wytwarzanego w trakcie wzrostu drobnoustrojów. Sensor jest monitorowany przez aparat co 10 min pod k¹tem wzrostu fluorescencji, który jest proporcjonalny do iloœci obecnego CO 2. Odczyt dodatni wskazuje na przypuszczaln¹ obecnoœæ w fiolce ywych drobnoustrojów. Wykrywanie jest ograniczone do drobnoustrojów rosn¹cych na okreœlonym rodzaju pod³o a. ZASADY PROCEDURY Jeœli w badanej próbce, inokulowanej do fiolki BACTEC, obecne s¹ drobnoustroje, przy metabolizowaniu przez te drobnoustroje substratów znajduj¹cych siê w fiolce bêdzie uwalniaæ siê CO 2. Wzrosty fluorescencji sensora zawartego w fiolce, spowodowane przez wiêksz¹ iloœæ CO 2, s¹ monitorowane przez aparat fluorescencyjny BACTEC. Analiza tempa i wielkoœci wzrostu CO 2 umo liwia okreœlenie przez aparat fluorescencyjny BACTEC, czy fiolka jest dodatnia, tzn. czy badana próbka zawiera ywe drobnoustroje. ODCZYNNIKI Fiolki do hodowli Standard/10 Aerobic/F BACTEC zawieraj¹ nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki przed przeprowadzeniem badania: Lista sk³adników Woda destylowana (WTR) ml Bulion trawi¹cy sojowo-kazeinowy (SCB) ,0% (stê enie wagowe) Wyci¹g z dro d y (YEX) ,3% (stê enie wagowe) Wyci¹g z tkanek zwierzêcych (ATD) ,01% (stê enie wagowe) Sacharoza (SCR) ,1% (stê enie wagowe) Hemina (HEM) ,0005% (stê enie wagowe) Menadion (MEN) ,00005% (stê enie wagowe) Chlorowodorek pirydoksalu (witamina B 6 ) (PXH) ,001% (stê enie wagowe) Dwuwêglan sodowy (SBC) ,04% (stê enie wagowe) Polianetolosulfonian sodu (SPS) ,035% (stê enie wagowe) Wszystkie pod³o a BACTEC s¹ dostarczane z dodanym CO 2. Ostrze enia i œrodki ostro noœci Do stosowania w diagnostyce in vitro. Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny. W próbkach klinicznych mog¹ byæ obecne drobnoustroje chorobotwórcze, w tym wirusy zapalenia w¹troby i wirus HIV. Podczas pracy z materia³ami ska onymi krwi¹ i innymi p³ynami ustrojowym nale y przestrzegaæ Standardowych œrodków ostro noœci 1-4 oraz wytycznych obowi¹zuj¹cych w danej placówce. Przed u yciem ka d¹ fiolkê nale y oceniæ pod k¹tem œladów zniszczenia, zanieczyszczenia lub pogorszenia jakoœci. Fiolki maj¹ce oznaki zniszczenia lub zanieczyszczenia takie jak przeciek, zmêtnienie, zmiana barwy (na ciemniejsz¹), uwypuklenie lub wklêœniêcie przegrody, nie powinny byæ u ywane. W fiolce z zanieczyszczeniami mo e dojœæ do zwiêkszenia ciœnienia. Jeœli zanieczyszczona fiolka jest u ywana do bezpoœredniego pobierania materia³u, zanieczyszczone pod³o e hodowlane mo e byæ zassane do y³y pacjenta. Zanieczyszczenie fiolki mo e nie byæ ³atwo widoczne. Kiedy u ywa siê procedury bezpoœredniego pobierania materia³u, nale y monitorowaæ dok³adnie ten proces, aby unikn¹æ zassania materia³u do organizmu pacjenta. W rzadkich przypadkach szyjka fiolki mo e byæ pêkniêta i mo e od³amaæ siê podczas zdejmowania pokrywki albo w czasie obs³ugi. Tak e w rzadkich przypadkach fiolka mo e nie byæ zamkniêta wystarczaj¹co szczelnie W obu przypadkach zawartoœæ fiolki mo e wyciekaæ lub rozlaæ siê. Jeœli fiolka by³a inokulowana, materia³, który wyciek³ lub uleg³ rozlaniu nale y traktowaæ z ostro noœci¹ ze wzglêdu na to, e mo e on zawieraæ patogenne drobnoustroje (czynniki). Przed utylizacj¹ nale y wysterylizowaæ wszystkie inokulowane fiolki w autoklawie. Fiolki z hodowl¹, która da³a wynik dodatni, do podhodowli, barwienia itd.: Przed pobraniem próbki nale y wypuœciæ gaz, który czêsto jest wytwarzany w wyniku metabolizmu bakterii. Próbki nale y w miarê mo liwoœci pobieraæ w kabinie bezpieczeñstwa mikrobiologicznego w odpowiedniej odzie y ochronnej, w³¹czaj¹c w to rêkawiczki i maski. Dodatkowe informacje na temat podhodowli zob. rozdzia³ Procedury. Aby zminimalizowaæ potencjalny wyciek podczas inokulacji próbki do fiolki hodowlanej, nale y u yæ koñcówek z za³o onymi na sta³e ig³ami lub zakoñczeniami typu Luer-Lok. Instrukcja przechowywania Fiolki BACTEC s¹ gotowe do u ycia bezpoœrednio po otrzymaniu i nie wymagaj¹ rozcieñczenia ani innych zabiegów. Przechowywaæ w temperaturze 2 25 C w suchym miejscu. Chroniæ przed bezpoœrednim œwiat³em s³onecznym. POBIERANIE PRÓBKI Próbkê nale y pobraæ przy u yciu sterylnych technik, aby zredukowaæ mo liwoœæ zanieczyszczenia. Typowa objêtoœæ próbki to 8 10 ml. Zaleca siê inokulacjê próbki do fiolki BACTEC przy ³ó ku pacjenta. Najczêœciej do pobrania próbki u ywa siê strzykawki z koñcówk¹ typu Luer-Lok o pojemnoœci 10 ml lub 20 ml. Dogodnie jest u yæ: uchwytu igie³ Vacutainer i zestawu Vacutainer do pobierania krwi lub zestawu do pobierania krwi Vacutainer Safety- Lok lub innego zestawu motylkowego. Kiedy u ywa siê ig³y i zestawu przewodów (bezpoœrednie pobieranie), nale y uwa nie obserwowaæ kierunek przep³ywu krwi w momencie, kiedy zaczyna siê pobieranie próbki. Puste miejsce w fiolce zwykle przekracza 10 ml, tak e u ytkownik powinien monitorowaæ pobieran¹ objêtoœæ za pomoc¹ oznaczeñ co 5 ml na etykiecie fiolki. Po pobraniu wymaganych 8 10 ml przep³yw nale y zatrzymaæ przez zagiêcie przewodu i usuniêcie zestawu z fiolki BACTEC. Mog¹ byæ u ywane próbki o objêtoœci 3 ml, jednak odzysk nie bêdzie tak du y, jak przy wiêkszych objêtoœciach. Inokulowana fiolka BACTEC powinna byæ przetransportowana tak szybko, jak to mo liwe do laboratorium. PROCEDURA Nale y usun¹æ nakrêtkê ze szczytu fiolki BACTEC i sprawdziæ fiolkê pod wzglêdem pêkniêæ, zanieczyszczenia, nadmiernego zmêtnienia i uwypuklenia lub przeciêtych przegród. NIE NALE Y U YWAÆ, je eli zauwa y siê jakieœ uszkodzenia. Przed inokulacj¹ przetrzeæ przegrodê alkoholem (jodyna NIE JEST zalecana). Aseptycznie wstrzykn¹æ lub pobraæ bezpoœrednio 8 10 ml próbki na fiolkê. Jeœli u yje siê próbki o objêtoœci 3 4 ml, odzysk nie bêdzie tak du y jak przy wiêkszych objêtoœciach (zob. rozdzia³ Ograniczenia procedury). Inokulowane fiolki tlenowe powinny byæ umieszczone we fluorescencyjnym aparacie BACTEC tak szybko, jak to mo liwe do inkubacji i monitorowania. Jeœli umieszczenie inokulowanej fiolki w aparacie jest opóÿnione i widoczny jest wzrost, fiolka nie powinna byæ poddana badaniu we fluorescencyjnym aparacie BACTEC, lecz powinna byæ wykonana podhodowla, barwienie metod¹ Grama, a fiolka powinna byæ traktowana jako przypuszczalnie dodatnia. Fiolki umieszczone w aparacie bêd¹ badane automatycznie co 10 min w czasie rejestrowania przebiegu badania. Fiolki dodatnie bêd¹ oznaczane przez fluorescencyjny aparat BACTEC i identyfikowane jako dodatnie (patrz instrukcja obs³ugi w³aœciwego fluorescencyjnego aparatu BACTEC). Sensor wewn¹trz fiolki nie bêdzie wydawa³ siê inny w fiolkach dodatnich i ujemnych, jednak e fluorescencyjny aparat BACTEC mo e oznaczyæ ró nicê we fluorescencji.

2 Jeœli po zakoñczeniu okresu badania ujemna fiolka Standard/10 Aerobic/F BACTEC oceniana wzrokowo wydaje siê dodatnia (np. krew czekoladowa, uwypuklona przegroda, liza i (lub) znaczne przyciemnienie barwy krwi), fiolka powinna zostaæ poddana podhodowli, wybarwiona metod¹ Grama i traktowana jako przypuszczalnie dodatnia. Fiolki dodatnie powinny byæ poddane podhodowli; nale y wykonaæ wybarwiony metod¹ Grama rozmaz na szkie³ku podstawowym. W znakomitej wiêkszoœci przypadków pozwoli to dostrzec drobnoustroje i umo liwi wydanie lekarzowi wstêpnego wyniku badania. Z p³ynu w fiolkach BACTEC mo na przygotowaæ podhodowle do po ywek selektywnych i wykonaæ wstêpny bezpoœredni test wra liwoœci na œrodki przeciwbakteryjne. Podhodowle: Przed wykonaniem podhodowli ustawiæ fiolkê pionowo i umieœciæ wacik nasycony alkoholem nad przegrod¹. Aby obni yæ ciœnienie w fiolce, wbiæ steryln¹ ig³ê z odpowiednim filtrem lub wacikiem poprzez wacik i przegrodê. Ig³a powinna byæ usuniêta bezpoœrednio po obni eniu ciœnienia i przed pobraniem próbki z fiolki do podhodowli. Wk³ucie i wycofanie ig³y nale y wykonaæ w linii prostej, unikaj¹c jakichkolwiek ruchów obrotowych. W celu uzyskania maksymalnej wydajnoœci z izolatów z hodowli, fiolki, w których wynik hodowli by³ ujemny, nale y przed utylizacj¹ sprawdziæ za pomoc¹ barwienia i (lub) podhodowli. KONTROLA JAKOŒCI Nale y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymogami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów miejscowych, krajowych i (lub) federalnych, wymogami akredytacji i rutynowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium. Zaleca siê, aby u ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich zaleceñ CLSI (dawniej NCCLS) i przepisów CLIA, dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci. NIE U YWAÆ fiolek hodowlanych po up³ywie ich daty wa noœci. NIE U YWAÆ fiolek hodowlanych, je eli wykazuj¹ pêkniêcia lub defekty; fiolki utylizowaæ w odpowiedni sposób. Z ka dym opakowaniem kartonowym pod³o y dostarczane s¹ certyfikaty kontroli jakoœci. W certyfikatach kontroli jakoœci podane s¹ nazwy drobnoustrojów u ywanych do badañ, w tym hodowle ATCC wyszczególnione w normie CLSI Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media. 5 Czas niezbêdny do wykrycia w godzinach 72 h dla ka dego z drobnoustrojów wyszczególnionych w certyfikacie kontroli jakoœci tej po ywki: Streptococcus pyogenes ATCC Escherichia coli ATCC Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Pseudomonas aeruginosa ATCC Candida albicans ATCC Neisseria meningitidis ATCC Alcaligenes faecalis ATCC 8750 Haemophilus influenzae ATCC Staphylococcus aureus ATCC *szczep CLSI Po informacje dotycz¹ce kontroli jakoœci serii fluorescencyjnych aparatów BACTEC nale y siêgn¹æ do instrukcji w³aœciwego aparatu BACTEC. OGRANICZENIA PROCEDURY Zanieczyszczenie Nale y przedsiêwzi¹æ œrodki ostro noœci, aby zapobiec kontaminacji podczas pobierania i inokulacji do fiolki BACTEC. Zanieczyszczona próbka da odczyt pozytywny natomiast nie wskazuje na wynik znacz¹cy klinicznie. Takie ustalenie musi byæ wykonane przez u ytkownika na podstawie takich czynników jak: typ wykrytych drobnoustrojów, wystêpowanie tego samego drobnoustroju w wielu hodowlach, historia choroby pacjenta itd. Uzyskiwanie drobnoustrojów wra liwych na SPS z próbek krwi Poniewa krew mo e neutralizowaæ toksycznoœæ drobnoustrojów wra liwych na SPS (np. niektóre gatunki Neisseria), pobranie optymalnej wielkoœci próbki krwi (8 10 ml) znacznie zwiêksza szanse na wykrycie tych drobnoustrojów. Czêœæ szybko rosn¹cych drobnoustrojów, takich jak niektóre gatunki Haemophilus, do wzrostu wymaga czynników takich jak NAD lub czynnik V, które s¹ obecne w próbce krwi. Je eli próbka krwi jest bardzo ma³a (3,0 ml lub mniej), w celu wykrycia tych drobnoustrojów mo e byæ konieczne zastosowanie odpowiedniego dodatku. Jako dodatek wzbogacaj¹cy mo na zastosowaæ dodatek BACTEC FOS (Fastidious Organism Supplement). Organizmy niewykazuj¹ce ywotnoœci Wymaz szczepów zabarwionych metod¹ Grama z pod³o a mo e zawieraæ niewielk¹ liczbê niewykazuj¹cych ywotnoœci drobnoustrojów pochodz¹cych ze sk³adników pod³o a, odczynników barwi¹cych, olejku immersyjnego, szkie³ek szklanych i próbek u ywanych do inokulacji. Ponadto próbka pobrana od pacjenta mo e zawieraæ drobnoustroje, które nie bêd¹ ros³y w pod³o u lub w po ywkach u ywanych do podhodowli. Takie próbki powinny byæ posiewane na specjalnie do tego przygotowanych pod³o ach 6. Wykrywanie Streptococcus pneumoniae W pod³o ach tlenowych S. pneumoniae bêdzie zazwyczaj wykrywalny wzrokowo i przez aparat, jednak e w niektórych przypadkach ani w barwieniu metod¹ Grama, ani w rutynowej podhodowli nie bêdzie mo liwe wykrycie drobnoustroju. Je eli pod³o e beztlenowe zosta³o równie inokulowane, drobnoustrój mo e zazwyczaj zostaæ wykryty podczas wykonywania podhodowli na obecnoœæ bakterii tlenowych z fiolki zawieraj¹cej pod³o e dla bakterii beztlenowych, poniewa opisywano, e drobnoustrój ten dobrze namna a siê w warunkach beztlenowych 7. Rozwa ania ogólne Optymalny odzysk izolatów bêdzie osi¹gany poprzez dodawanie od 8 do10 ml krwi. U ycie mniejszych lub wiêkszych objêtoœci mo e niekorzystnie wp³ywaæ na odzysk i/lub czas detekcji. Krew mo e zawieraæ czynniki hamuj¹ce wzrost bakterii albo inne inhibitory, które mog¹ spowalniaæ wzrost drobnoustrojów albo go uniemo liwiaæ. Fa³szywie ujemne odczyty mo emy uzyskiwaæ na skutek obecnoœci pewnych drobnoustrojów, które nie wytwarzaj¹ odpowiedniej iloœci CO 2, niezbêdnej do wykrycia przez system albo te wtedy, gdy wzrost znacz¹cy zachodzi przed umieszczeniem fiolki w systemie. Wyniki fa³szywie dodatnie mog¹ zdarzaæ siê w przypadku znacznego podwy szenia liczby krwinek bia³ych. OCZEKIWANE WYNIKI Badania posianych hodowli wykonywano, u ywaj¹c poziomu inokulum 10 do 50 CFU na fiolkê hodowlan¹ kombinacji ATCC z dzikim szczepem bakteryjnym. Poni ej przedstawiamy listê drobnoustrojów, które zosta³y wykryte jako dodatnie w pod³o u Standard/10 Aerobic/F BACTEC w ci¹gu 5 dni. Acinetobacter anitratus Cryptococcus neoformans Proteus mirabilis Staphylococcus epidermidis Acinetobacter lwoffii Enterobacter cloacae Providencia stuartii Streptococcus pneumoniae Alcaligenes faecalis Enterococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pyogenes (grupa A) Candida (Torulopsis) glabrata Escherichia coli Salmonella typhimurium Xanthomonas maltophilia Candida albicans Haemophilus influenzae Serratia marcescens Corynebacterium J-K Klebsiella pneumoniae Staphylococcus aureus CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA Przeprowadzono badanie kliniczne, w którym porównywano po ywkê do hodowli krwi Standard/10 Aerobic/F BACTEC i po ywkê do hodowli krwi Standard Aerobic/F BACTEC. Oceniono w sumie 1384 par fiolek. Nie zaobserwowano wyników fa³szywie dodatnich. W czasie badania uzyskano trzy wyniki fa³szywie ujemne w po ywce do hodowli krwi Standard/10 Aerobic/F BACTEC. Wyliczony wspó³czynnik wyników fa³szywie ujemnych wyniós³ 0,2%. 2

3 W sumie wykryto 113 drobnoustrojów. Tabela 1 pokazuje izolaty wykryte przez okreœlone pod³o e. Spoœród nich 76 (67,3%) oceniono jako klinicznie znacz¹ce. Z 76 klinicznie znacz¹cych izolatów 53 izolaty (69,7%) zosta³y wykryte w obydwu pod³o ach, 8 (10,5%) wykryto tylko w pod³o u do hodowli krwi Standard/10 Aerobic/F BACTEC, a jedynie 15 (19,7%) zosta³o wykrytych tylko w pod³o u do hodowli krwi Standard Aerobic/F BACTEC. Ró nica miêdzy odzyskiem tylko w po ywce do hodowli krwi Standard/10 Aerobic/F BACTEC a odzyskiem tylko w po ywce do hodowli krwi Standard Aerobic/F BACTEC nie by³a statystycznie znamienna. Œredni czas do wykrycia we wszystkich grupach wynosi³ 20,4 h w po ywce do hodowli krwi Standard/10 Aerobic/F BACTEC w porównaniu z 21,5 h w po ywce do hodowli krwi Standard Aerobic/F BACTEC. TABELA 1: Odzyskiwanie izolatów w badaniu klinicznym typ po ywki Drobnoustroje Wykrywane TYLKO w pod³o u Wykrywane TYLKO w pod³o u Wykrywane w OBYDWU Standard/10 Aerobic/F Standard Aerobic/F pod³o ach GRAM UJEMNE GRAM DODATNIE DRO D AKI Wykaz drobnoustrojów odzyskiwanych w po ywce Standard/10 Aerobic/F BACTEC: Candida albicans Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae Candida tropicalis Haemophilus influenzae Staphylococcus aureus Gatunki Streptococcus Citrobacter diversus Klebsiella pneumoniae Staphylococcus coag. negative Enterobacter aerogenes Morganella morganii Staphylococcus haemolyticus Enterococcus faecalis Proteus mirabilis Streptococcus constellatus DOSTÊPNOŒÆ Nr kat. Opis BACTEC Standard/10 Aerobic/F Culture Vials (fiolki do hodowli), kaseta zawieraj¹ca 50 fiolek PIŒMIENNICTWO: 1. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M22-A3. Quality control of commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.) Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Howden, R.J., J. Clin. Path. 1976, 29:

4 4

5 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland U.S.A BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, FOS, Vacutainer, Luer-Lok and Safety-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.