STRESZCZENIE I WYJAŒNIENIA

Transkrypt

1 BACTEC Myco/F Lytic Culture Vials Middlebrook 7H9 z suplementem i bulion z infuzj¹ z serca i mózgu Do stosowania z aparatami BACTEC serii fluorescencyjnej PP162JAA 2008/01 Polski PRZEZNACZENIE Po ywka do hodowli BACTEC Myco/F Lytic, stosowana z urz¹dzeniami do posiewów krwi BACTEC serii fluorescencyjnej, jest nieselektywn¹ po ywk¹ hodowlan¹ do stosowania jako œrodek dodatkowy do po ywek do tlenowych posiewów krwi w celu odzyskiwania pr¹tków, dro d aków i grzybów z krwi. Po ywkê tê mo na tak e stosowaæ do posiewów ja³owych p³ynów ustrojowych, w których podejrzewa siê obecnoœæ dro d aków lub grzybów. STRESZCZENIE I WYJAŒNIENIA Od po³owy lat 80. XX wieku, w zwi¹zku ze zwiêkszaniem siê liczebnoœci populacji chorych z obni eniem odpornoœci, wzros³a czêstoœæ wystêpowania posocznicy wywo³ywanej przez drobnoustroje oportunistyczne, takie jak dro d aki, grzyby i pr¹tki. Mycobacterium tuberculosis (MTB) i pr¹tki inne ni pr¹tek gruÿlicy (MOTT, mycobacteria other than tuberculosis), zw³aszcza kompleks Mycobacterium avium (MAC), sta³y siê problemem. Od 1985 do 1992 roku liczba odnotowanych przypadków MTB wzros³a o 18%. W latach obserwacja przypadków AIDS ujawni³a u 5,5% pacjentów z AIDS rozsiane zaka enia pr¹tkami innymi ni pr¹tek gruÿlicy, np. MAC. Do roku 1990 zwiêkszenie liczby przypadków rozsianych zaka eñ pr¹tkami innymi ni pr¹tek gruÿlicy spowodowa³o, e skumulowana czêstoœæ wystêpowania takich zaka eñ dosz³a do 7,6% 1. Od pocz¹tku lat 80. XX w. zauwa a siê równie sta³y wzrost przypadków obecnoœci grzybów w krwiobiegu. Spowodowa³o to zwiêkszenie zapotrzebowania laboratoriów klinicznych na skuteczne procedury diagnostyczne wykrywania obecnoœci we krwi grzybów i pr¹tków. Oœrodki Zwalczania Chorób i Profilaktyki (CDC, Centers for Disease Control and Prevention) zalecaj¹, aby laboratoria do³o y³y wszelkich starañ w celu zastosowania najszybszych dostêpnych metod w diagnostyce zaka eñ pr¹tkami. Zalecenia te obejmuj¹ stosowanie po ywek p³ynnych do hodowli pr¹tków. 2-4 Urz¹dzenia BACTEC serii fluorescencyjnej przeznaczone s¹ do szybkiego wykrywania obecnoœci drobnoustrojów w próbkach klinicznych. Po ywka do hodowli Myco/F Lytic BACTEC jest preparatem Middlebrook 7H9 i bulionu z infuzj¹ z serca i mózgu, s³u ¹cym do odzyskiwania pr¹tków z próbek krwi oraz dro d aków i grzybów z krwi i ja³owych p³ynów ustrojowych. Dokonano specjalnych modyfikacji w celu zwiêkszenia wzrostu i odzyskiwania pr¹tków, dro d aków i grzybów. Modyfikacje te obejmuj¹ dodanie cytrynianu elazowo-amonowego w celu zapewnienia Ÿród³a elaza dla pewnych szczepów pr¹tków i grzybów, dodanie saponiny jako œrodka powoduj¹cego lizê krwi i dodanie swo istych bia³ek i cukrów jako dodatków od ywczych. Ka da fiolka zawiera sensor, wykrywaj¹cy zmniejszenie stê enia tlenu w fiolce na skutek metabolizmu i wzrostu drobnoustrojów. Sensor monitorowany jest przez aparat BACTEC serii fluorescencyjnej pod k¹tem zwiêkszania fluorescencji, proporcjonalnej do zmniejszania stê enia tlenu. Odczyt dodatni wskazuje na przypuszczaln¹ obecnoœæ ywych drobnoustrojów w fiolce. ZASADY PROCEDURY Fiolka do hodowli Myco/F Lytic BACTEC jest przeznaczona do szybkiego wykrywania obecnoœci pr¹tków we krwi oraz dro d aków i grzybów we krwi i ja³owych p³ynach ustrojowych. Próbki krwi inokuluje siê do fiolki Myco/F Lytic BACTEC strzykawk¹ lub poprzez bezpoœrednie naci¹gniêcie ig³¹ przez przewód. Fiolkê umieszcza siê w aparacie BACTEC serii fluorescencyjnej i ci¹gle wstrz¹sa oraz inkubuje w temperaturze 35 C celem uzyskania maksymalnego odzysku. Rutynowy protokó³ badañ trwa 42 dni. Zalecany czas trwania protoko³u badañ to 7 dni dla dro d aków, 30 dni dla grzybów i 42 dni dla pr¹tków. Ka da fiolka zawiera sensor, wykrywaj¹cy zmniejszenie stê enia tlenu w fiolce na skutek metabolizmu i wzrostu drobnoustrojów. Sensor jest monitorowany przez aparat BACTEC serii fluorescencyjnej co 10 min. Analiza prêdkoœci zmniejszania siê stê enia tlenu, mierzona na podstawie zwiêkszania siê fluorescencji, umo liwia aparatowi serii fluorescencyjnej BACTEC ustalenie, czy wynik analizy fiolki za pomoc¹ aparatu jest dodatni. Odczyt dodatni wskazuje na przypuszczaln¹ obecnoœæ ywych drobnoustrojów w fiolce. Wykrywanie jest ograniczone do drobnoustrojów rosn¹cych w po ywce w temperaturze 35 C. Po ywka jest nieselektywna i sprzyja wzrostowi innych drobnoustrojów tlenowych, w tym bakterii. Je eli s¹ one obecne, mog¹ zak³ócaæ odzyskiwanie wolniej rosn¹cych pr¹tków, dro d aków i grzybów. Fiolki do hodowli, dla których wynik pozostaje ujemny po zakoñczeniu protoko³u badania, niewykazuj¹ce w ocenie wzrokowej cech wyniku dodatniego, usuwa siê z aparatu i przed utylizacj¹ wyja³awia. ODCZYNNIKI Fiolki do hodowli Myco/F Lytic BACTEC przed przeprowadzeniem badania zawieraj¹ nastêpuj¹ce aktywne sk³adniki: Lista sk³adników Woda destylowana...40 ml qs Pod³o e bulionowe Middlebrook 7H9 bez soli fosforanowych...0,12% (w/obj) Infuzja z mózgu i serca...0,5% (w/obj) Hydrolizat kazeinowy...0,10% (w/obj) Dodatek H...0,10% (w/obj) Inozytol...0,05% (w/obj) Glicerol...0,10% (w/obj) Polianetolosulfonian sodu...0,025% (w/obj) Polisorbat ,0025% (w/obj) Chlorowodorek pirydoksalu...0,0001% (w/obj) Cytrynian amonu elaza...0,006% (w/obj) Fosforan potasu...0,024% (w/obj) Saponina...0,24% (w/obj) Œrodek przeciwpieni¹cy...0,01% (w/obj) Sk³ad mo e byæ dostosowany do wymagañ specyficznego badania. Ta po ywka BACTEC jest dostarczana z dodatkiem CO 2 i O 2. Po ywka Myco/F Lytic BACTEC nie wymaga dodawania suplementów. Ka da 40 ml fiolka Myco/F Lytic BACTEC jest dostarczana w postaci gotowej do u ycia. Po otrzymaniu po ywka powinna byæ przejrzysta i mieæ zabarwienie jasnobursztynowe. Ostrze enia i œrodki ostro noœci Do u ytku diagnostycznego in vitro. Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny. W próbkach mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia w¹troby i wirus HIV. Podczas pracy z wszelkimi materia³ami zanieczyszczonymi krwi¹ i innymi p³ynami ustrojowymi nale y stosowaæ Standardowe œrodki ostro noœci 5-8 oraz przestrzegaæ wytycznych obowi¹zuj¹cych w danym laboratorium. Je eli zamierza siê odzyskiwaæ pr¹tki, zalecenia CDC-NIH zawieraj¹ instrukcjê umieszczenia urz¹dzenia do badañ w laboratorium badañ nad pr¹tkami, w którym mo liwe jest zastosowanie dodatkowych œrodków bezpieczeñstwa, niezbêdnych przy odzyskiwaniu pr¹tków 9. Do fiolek Myco/F Lytic BACTEC mieœci siê objêtoœæ wiêksza od zalecanej objêtoœci próbki (5 ml). Nale y sprawdzaæ stopieñ nape³nienia.

2 Przy czynnoœciach zwi¹zanych z rozprzestrzenianiem Mycobacterium tuberculosis lub Mycobacterium bovis wyros³ymi w hodowli albo przy manipulowaniu tymi bakteriami zaleca siê postêpowanie zgodnie z zasadami bezpieczeñstwa biologicznego, poziom 3, i stosowanie odpowiedniego sprzêtu w odpowiednich pomieszczeniach 9. Przed u yciem ka da fiolka powinna byæ zbadana pod k¹tem kontaminacji takich jak zmêtnienie, uwypuklenie, zapadniêcie siê przegrody lub œlady przecieku. NIE U YWAÆ fiolek wykazuj¹cych cechy zanieczyszczenia, wycieku lub uszkodzenia. Zanieczyszczenie fiolki mo e nie byæ ³atwo widoczne. W fiolce z zanieczyszczeniami mo e dojœæ do zwiêkszenia ciœnienia Jeœli zanieczyszczona fiolka jest u ywana do bezpoœredniego pobierania materia³u, mo e dojœæ do zassania gazu lub zanieczyszczonego pod³o a hodowlanego do y³y pacjenta. W rzadkich przypadkach szyjka fiolki mo e byæ pêkniêta i mo e od³amaæ siê podczas zdejmowania pokrywki albo w czasie obs³ugi. Tak e w rzadkich przypadkach fiolka mo e nie byæ zamkniêta wystarczaj¹co szczelnie W obu takich przypadkach zawartoœæ fiolki mo e wyciekaæ lub rozlaæ siê, zw³aszcza przy odwróceniu fiolki do góry dnem. Aby zminimalizowaæ potencjalny wyciek podczas inokulacji próbki do fiolek do hodowli, nale y u yæ strzykawek z zakoñczeniami Luer-Lok. Nale y przestrzegaæ techniki inokulacji jedn¹ rêk¹ i u ywaæ odpowiedniego uchwytu do trzymania fiolki, aby unikn¹æ przypadkowego zak³ucia siê ig³¹. Przed utylizacj¹ nale y wysterylizowaæ wszystkie inokulowane fiolki Myco/F Lytic BACTEC w autoklawie. Fiolki z hodowl¹, która da³a wynik dodatni, do podhodowli, barwienia itd.: przed pobraniem próbki nale y wypuœciæ gaz, który czêsto jest wytwarzany w wyniku metabolizmu bakterii. Pobieranie próbek powinno byæ wykonane w kabinie bezpieczeñstwa mikrobiologicznego w odpowiedniej odzie y ochronnej, w³¹czaj¹c w to rêkawiczki i maski. Dodatkowe informacje na temat podhodowli zob. rozdzia³ PROCEDURY. Ciekn¹ce lub pêkniête fiolki PRZESTROGA: poniewa przeciekaj¹ca lub st³uczona inokulowana fiolka mo e spowodowaæ powstanie aerozolu zawieraj¹cego pr¹tki, w tym M. tuberculosis lub inne bakterie, nale y obchodziæ siê z ni¹ odpowiednio. Po stwierdzeniu wycieku lub przypadkowego st³uczenia inokulowanej fiolki w czasie pobierania lub transportu nale y zastosowaæ przyjêt¹ w danej placówce procedurê postêpowania w przypadku wycieku materia³u zawieraj¹cego drobnoustroje. Nale y co najmniej przestrzegaæ Standardowych œrodków ostro noœci. Fiolki nale y utylizowaæ w odpowiedni sposób. W rzadkich przypadkach, kiedy stwierdzi siê, e dosz³o do wycieku z fiolki lub przypadkowego st³uczenia fiolki w obrêbie aparatu, nale y natychmiast wy³¹czyæ aparat. Opró niæ dany obszar. Skontaktowaæ siê z osobami odpowiedzialnymi za bezpieczeñstwo lub zwalczanie zaka eñ w danej instytucji. Okreœliæ, czy jest niezbêdne wy³¹czenie lub zmiana ustawieñ jednostek zwi¹zanych z wentylacj¹ danego obszaru. Nie powracaæ do obszaru do momentu, a wszelkie ewentualne aerozole osi¹d¹ lub zostan¹ usuniête przez odpowiedni¹ wentylacjê. Nale y powiadomiæ BD Diagnostics, kontaktuj¹c siê telefonicznie z regionalnym przedstawicielem firmy BD. CDC wyda³y instrukcje odpowiedniego traktowania przypadkowego ska enia pr¹tkami spowodowanego st³uczeniem fiolek do hodowli lub uwolnieniem zawiesin bulionowych 9. Instrukcje przechowywania Przechowywaæ w temperaturze 2 25 C w suchym miejscu. Chroniæ przed bezpoœrednim œwiat³em s³onecznym. NIE U YWAÆ po up³ywie terminu wa noœci. POBIERANIE PRÓBKI UWAGA: zaleca siê, aby przed u yciem na po ywce przeæwiczyæ tê procedurê z odpowiednim personelem, aby zapewniæ w³aœciw¹ technikê pobierania próbek, zgodnie z opisem w tym rozdziale. Próbka musi byæ pobrana przy u yciu sterylnych technik, aby zredukowaæ mo liwoœæ zanieczyszczenia. Zakres objêtoœci krwi do hodowli wynosi od 1 ml do 5 ml, a maksymalny odzysk uzyskuje siê przy objêtoœci od 3 ml do 5 ml. Zaleca siê inokulacjê próbki przy ³ó ku pacjenta. Najczêœciej do pobrania próbki u ywa siê strzykawki z koñcówk¹ Luer-Lok. Dogodnie jest u yæ: uchwytu igie³ Vacutainer i zestawu Vacutainer do pobierania krwi lub zestawu do pobierania krwi Vacutainer Safety-Lok lub innego zestawu motylkowego. Jeœli u ywa siê ig³y i zestawu przewodów (bezpoœrednie pobieranie), nale y uwa nie obserwowaæ kierunek przep³ywu krwi w momencie, kiedy zaczyna siê pobieranie próbki krwi. Przed inokulacj¹ nale y zaznaczyæ na etykiecie piórem lub markerem poziom nape³nienia fiolki po ywk¹, aby zaznaczyæ pocz¹tek pobierania próbki. Pró nia w fiolce zwykle przekracza 5 ml, tak e u ytkownik powinien monitorowaæ pobieran¹ objêtoœæ za pomoc¹ oznaczeñ co 5 ml na etykiecie fiolki. Po pobraniu wymaganych 1 5 ml przep³yw nale y zatrzymaæ przez zagiêcie przewodu i usuniêcie ig³y z fiolki BACTEC. Fiolkê BACTEC nale y jak najszybciej przetransportowaæ do laboratorium i umieœciæ w aparacie BACTEC. Do pobrania próbek krwi od pacjenta mo na tak e u yæ probówki Vacutainer z ó³t¹ nakrêtk¹, zawieraj¹cej SPS. Probówka powinna byæ przetransportowana do laboratorium i umieszczona w aparacie tak szybko jak to mo liwe. PROCEDURA Dostarczane materia³y: fiolki do hodowli Myco/F Lytic BACTEC. Materia³y wymagane, ale niedostarczane: kabina bezpieczeñstwa mikrobiologicznego, autoklaw, jednostka wentylacyjna, œrodek odka aj¹cy dzia³aj¹cy przeciwko pr¹tkom, 70% alkohol izopropylowy, drobnoustroje do kontroli jakoœci (Mycobacterium intracellulare, ATCC 13950; Candida glabrata, ATCC 15545; i Cryptococcus neoformans, ATCC 13690), mikroskop i materia³y do barwienia szkie³ek i podhodowli fiolek. Inokulacja fiolek do hodowli Myco/F Lytic BACTEC 1. Nale y usun¹æ nakrêtkê ze szczytu fiolki i sprawdziæ fiolkê pod wzglêdem pêkniêæ, zanieczyszczenia, nadmiernego zmêtnienia i uwypuklenia lub przeciêtych przegród. NIE NALE Y U YWAÆ, je eli zauwa y siê jakiœ defekt. 2. Fiolkê z hodowl¹ oznaczyæ identyfikatorem próbki i zaznaczyæ lini¹ poziom nape³nienia po ywk¹ na etykiecie fiolki. 3. Przed inokulacj¹ przegrodê przetrzeæ alkoholem. Do fiolki wstrzykn¹æ aseptycznie strzykawk¹ lub wci¹gn¹æ bezpoœrednio, wykorzystuj¹c linie podzia³ki na etykiecie fiolki, 1 5 ml próbki na fiolkê (zob. rozdzia³ Ograniczenia procedury). Inokulowane fiolki powinny byæ umieszczone we fluorescencyjnym aparacie BACTEC tak szybko, jak to mo liwe do inkubacii i monitorowania. 4. Fiolki umieszczone w aparacie bêd¹ badane automatycznie w czasie rejestrowania protoko³u badania. Rutynowy czas trwania protoko³u badania wynosi 42 dni. Rutynowy czas trwania protoko³u badania to: 7 dni dla dro d aków, 30 dni dla grzybów i 42 dni dla pr¹tków. Instrukcja ustawiania d³ugoœci protoko³u, patrz w³aœciwa instrukcja obs³ugi BACTEC. Jeœli po zakoñczeniu okresu badania ujemna fiolka Myco/F Lytic BACTEC wydaje siê wzrokowo dodatnia (np. uwypuklona przegroda i (lub) zmêtnienie), z fiolki nale y wykonaæ podhodowlê, odpowiednio wybarwiæ i traktowaæ jako przypuszczalnie dodatni¹. 5. Fiolki dodatnie zostan¹ zidentyfikowane przez instrument BACTEC serii fluorescencyjnej. Sensor wewn¹trz fiolki nie bêdzie wykazywa³ dostrzegalnych wzrokowo ró nic miêdzy fiolkami z wynikiem dodatnim i ujemnym, jednak e instrument BACTEC serii fluorescencyjnej mo e wykazaæ ró nicê we fluorescencji sensora. Wszystkimi fiolkami dodatnimi nale y manipulowaæ w kabinie bezpieczeñstwa mikrobiologicznego. Zaleca siê stosowanie procedur poziomu 3 oraz odpowiedniego sprzêtu i pomieszczeñ. Z fiolek z wynikiem dodatnim nale y wykonaæ podhodowle i sporz¹dziæ odpowiedni rozmaz. Obróbka fiolki z dodatnim wynikiem w analizie w aparacie a) Fiolkê wyj¹æ z urz¹dzenia i umieœciæ w kabinie bezpieczeñstwa mikrobiologicznego. b) Fiolkê obróciæ, aby zmieszaæ zawartoœæ. c) Fiolkê odpowietrzyæ, aby wyrównaæ ciœnienie wewn¹trz fiolki z ciœnieniem atmosferycznym. d) Usun¹æ porcjê z fiolki (ok. 0,1 ml) celem wybarwienia preparatu (metod¹ AFB i Grama). e) Obejrzeæ rozmazy; wyniki wstêpne wydaæ dopiero po ocenie rozmazów. Podhodowla: podhodowlê nale y wykonaæ w kabinie bezpieczeñstwa mikrobiologicznego w odpowiedniej odzie y ochronnej, w³¹czaj¹c w to rêkawiczki i maski. Przed wykonaniem podhodowli ustawiæ fiolkê pionowo i umieœciæ wacik nasycony alkoholem nad przegrod¹. W celu eliminacji dodatniego ciœnienia w fiolce, które mo e powstaæ na skutek wzrostu drobnoustrojów stanowi¹cych zanieczyszczenie, wprowadziæ przez wacik nas¹czony alkoholem i przegrodê ja³ow¹ ig³ê 2

3 25-gauge (lub o mniejszej œrednicy), zaopatrzon¹ w odpowiedni filtr lub wacik. Ig³a powinna byæ usuniêta bezpoœrednio po obni eniu ciœnienia i przed pobraniem próbki z fiolki do podhodowli. Wk³ucie i wycofanie ig³y nale y wykonaæ w linii prostej, unikaj¹c jakichkolwiek ruchów obrotowych, które mog³yby trwale uszkodziæ przegrodê. Nie nak³adaæ z powrotem nak³adki na ig³ê. Ig³y i strzykawki wyrzucaæ do specjalnego, odpornego na przebicie pojemnika na odpady stanowi¹ce zagro enie biologiczne. KONTROLA JAKOŒCI Nale y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymaganiami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów lokalnych, krajowych lub federalnych, wymogami akredytacji oraz standardowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium. Zaleca siê, aby u ytkownik stosowa³ siê do odpowiednich wytycznych CLSI (dawniej NCCLS) i przepisów CLIA, dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci. Zaleca siê badanie ka dej nowej dostawy lub serii po ywki Myco/F Lytic BACTEC drobnoustrojami kontrolnymi ATCC, wymienionymi w poni szej karcie, przy czym fiolki z tymi drobnoustrojami s³u ¹ za kontrolê dodatni¹, a fiolka nieinokulowana za kontrolê ujemn¹. Drobnoustroje Czas wykrywania (w dniach) Mycobacterium intracellulare, ATCC Candida glabrata, ATCC < 3 Cryptococcus neoformans, ATCC < 3 Fiolki z wynikiem dodatnim nale y inokulowaæ z u yciem rozcieñczenia w stosunku 1:100 zawiesiny McFarland nr 1, hodowanej na pod³o u sta³ym. Fiolkê inokulowaæ 0,1 ml rozcieñczonej hodowli. Fiolka ta i nieinokulowana kontrola powinny zostaæ w³o one do aparatu i przetestowane. Fiolki inokulowane powinny zostaæ rozpoznane jako dodatnie przez aparat w ramach protoko³u badania. Kontrola ujemna powinna pozostaæ ujemna. Je eli nie uzyskuje siê oczekiwanych wyników kontroli jakoœci, po ywki nie u ywaæ i zwróciæ siê po dalsze instrukcje do lokalnego przedstawiciela firmy BD. Informacje na temat kontroli jakoœci w systemie BACTEC mo na znaleÿæ we w³aœciwej instrukcji obs³ugi BACTEC. Podawanie WYNIKÓW Dodatni wynik uzyskany z aparatu mo na potwierdziæ barwieniem rozmazu na obecnoœæ pr¹tków kwasoopornych lub barwieniem metod¹ Grama. Odczyt dodatni wskazuje na przypuszczaln¹ obecnoœæ ywych drobnoustrojów w fiolce. Je eli barwienie na kwasoopornoœæ jest dodatnie, przesiaæ na pod³o e sta³e i podaæ wynik jako: dodatni wynik uzyskany w aparacie, dodatni wynik rozmazu AFB, identyfikacja w toku. Je eli w rozmazach nie wykrywa siê drobnoustrojów, wykonaæ podhodowlê na po ywce sta³ej, ponownie (w ci¹gu 3 godzin od wyjêcia) umieœciæ fiolkê w aparacie jako wynik nadal ujemny i nadal prowadziæ badanie a do ukoñczenia protoko³u badania. Nie mo na podaæ wyniku. Wykonaæ podhodowle z fiolki Myco/F Lytic BACTEC w celu identyfikacji i badania wra liwoœci na leki. OGRANICZENIA PROCEDURY Fiolki Myco/F Lytic BACTEC s¹ nieselektywne i rosn¹ na nich tak e drobnoustroje tlenowe inne ni pr¹tki, dro d aki i grzyby. Fiolki z wynikiem dodatnim mog¹ zawieraæ jeden lub wiêcej gatunek pr¹tków i (lub) inne gatunki bakterii (nie pr¹tki). Je eli s¹ obecne szybko rosn¹ce drobnoustroje, mog¹ one maskowaæ wzrost wolniej rosn¹cych pr¹tków, dro d aków i grzybów. Konieczna jest podhodowla i dodatkowe czynnoœci. Zgodnoœæ morfologii mikroskopowej w Myco/F Lytic BACTEC nie zosta³a jak dot¹d ustalona. Dopuszczalna jest inokulacja krwi w objêtoœci 1 5 ml, ale optymalny odzysk uzyskuje siê przy zastosowaniu 3 5 ml. W badaniach wewnêtrznych z zastosowaniem objêtoœci krwi poni ej 3 ml M. intracellulare, M. malmoense, M. haemophilum i M. xenopi powodowa³y opóÿnienie wykrywania i (lub) jego os³abienie w po ywce Myco/F Lytic BACTEC. Przy u yciu krwi w objêtoœci ponad 5 ml mo e dojœæ do zwiêkszenia odsetka wyników fa³szywie dodatnich. Nale y przedsiêwzi¹æ œrodki ostro noœci, aby zapobiec kontaminacji podczas pobierania i inokulacji do fiolki BACTEC. Zanieczyszczona próbka da odczyt dodatni, co jednak nie oznacza wyniku istotnego klinicznie. Takie ustalenie musi byæ wykonane przez u ytkownika na podstawie takich czynników jak: wyniki barwienia, typ wykrytych drobnoustrojów, wystêpowanie tego samego drobnoustroju w wielu hodowlach, historia choroby pacjenta itp. Kwasoopornoœæ pr¹tków mo e siê ró niæ zale nie od szczepu, wieku i innych zmiennych. Krew mo e zawieraæ czynniki hamuj¹ce wzrost bakterii albo inne inhibitory, które mog¹ spowalniaæ wzrost drobnoustrojów albo go uniemo liwiæ. Fiolki Myco/F Lytic BACTEC inkubuje siê w temperaturze 35 C, co potencjalnie uniemo liwia odzysk pr¹tków wymagaj¹cych innej temperatury inkubacji (np. M. marinum, M. ulcerans i M. haemophilum). Odzysk tych drobnoustrojów wymaga dodatkowych metod hodowli. Penicillium purpurescens i Blastomyces dermatitidis by³y niewykrywalne w po ywce Myco/F Lytic BACTEC. Hansenula anomala, Exophiala jeamselmei, Actinomyces bovis, Rhodotorula rubra i Mucor ramosissimus przy niskim poziomie inokulum (<10 CFU/fiolkê) dawa³y ma³o powtarzalne wyniki w badaniach hodowli z posiewu. Odzysk tych drobnoustrojów wymaga dodatkowych metod hodowli. W badaniach wewnêtrznych i (lub) badaniach klinicznych w aparacie 9240 BACTEC za pomoc¹ po ywki Myco/F Lytic BACTEC uzyskano dodatnie wyniki dla nastêpuj¹cych izolatów: Mycobacterium terrae Mycobacterium abscessus Cryptococcus neoformans Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium xenopi Histoplasma capsulatum Mycobacterium avium Mycobacterium malmoense Aspergillus flavus Mycobacterium kansasii Mycobacterium haemophilum Aspergillus fumigatus Mycobacterium fortuitum Candida albicans Nocardia asteroides Mycobacterium intracellulare Candida glabrata Malasezzia furfur Mycobacterium gordonae Candida parapsilosis Trichophyton rubrum Mycobacterium szulgai Candida krusei Mycobacterium simiae Candida tropicalis Mycobacterium celatum Ajellomyces dermatitidis OCZEKIWANE WYNIKI W fiolce do hodowli z po ywk¹ Myco/F Lytic BACTEC oceniano, za pomoc¹ systemu do hodowli krwi 9240 BACTEC, hodowli krwi od pacjentów z podejrzeniem zaka enia pr¹tkami, dro d akami lub grzybami. Uzyskano 315 hodowli dodatnich; w 243 uzyskano drobnoustroje klinicznie istotne, z czego w 131 (53,9%) by³y to pr¹tki, w 35 (14,4%) dro d aki lub grzyby, a w 77 (31,7%) inne bakterie. Spoœród próbek krwi analizowanych w badaniu klinicznym, w jednym przypadku fiolki Myco/F Lytic BACTEC (0,7%) wynik okaza³ siê fa³szywie dodatni (odczyt z aparatu dodatni, rozmaz i (lub) podhodowla ujemne). Z 315 fiolek Myco/F Lytic z dodatnim odczytem z aparatu, w 11 (3,5%) wynik okaza³ siê fa³szywie dodatni. Spoœród 1488 próbek krwi analizowanych w badaniu klinicznym, w jednym przypadku fiolki Myco/F Lytic BACTEC (0,07%) wynik okaza³ siê fa³szywie dodatni (odczyt z aparatu dodatni, rozmaz i (lub) podhodowla ujemne). Spoœród 1173 fiolek do hodowli Myco/F Lytic BACTEC z ujemnym odczytem z aparatu, jedna (0,08%) okaza³a siê wynikiem fa³szywie ujemnym. Wspó³czynnik zanieczyszczenia w tej ocenie wyniós³ 3,3%. 3

4 Dystrybucjê czêstoœci pochodz¹cych z badañ klinicznych próbek dodatnich w fiolkach do hodowli Myco/F Lytic BACTEC, z zastosowaniem systemu do hodowli krwi BACTEC 9000, przedstawiono na RYS. 1 w odniesieniu do czasu do wykrycia (TTD) pr¹tków i na RYS. 2 w odniesieniu do TTD dro d aków i grzybów. RYSUNEK 1 RYSUNEK 2 CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA Po ywkê hodowlan¹ Myco/F Lytic BACTEC oceniano przy u yciu aparatu 9240 BACTEC w dwóch oœrodkach klinicznych, uwa anych za oœrodki referencyjne trzeciego stopnia du ych szpitalach akademickich, w ró nych obszarach geograficznych. Populacja pacjentów w tych oœrodkach obejmowa³a pacjentów zaka onych HIV, chorych z obni eniem odpornoœci, biorców przeszczepów i chorych z podejrzeniem zaka enia pr¹tkami. Po ywkê hodowlan¹ Myco/F Lytic BACTEC porównywano z po ywk¹ hodowlan¹13a BACTEC w zakresie odzyskiwania i wykrywania pr¹tków z próbek krwi. W czasie badania oceniono w sumie prawid³owo przygotowanych próbek krwi. Ca³kowita liczba patogennych izolatów pr¹tków, odzyskanych w czasie badania, wynosi³a 111 (zob. TABELA 1). Spoœród tych dodatnich wyników dziesiêæ izolatów (9%) odzyskano tylko w po ywce hodowlanej Myco/F Lytic BACTEC, a trzy (3%) tylko w po ywce hodowlanej 13A BACTEC. TABELA 1: PODSUMOWANIE ODZYSKU IZOLATÓW NA PO YWCE HODOWLANEJ MYCO/F LYTIC W BADANIACH KLINICZNYCH Drobnoustroje Ca³kowita Tylko po ywka Tylko po ywka Obie liczba izolatów Myco/F Lytic 13A po ywki Wszystkie pr¹tki patogenne: Mycobacterium avium Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium celatum Razem Po ywkê Myco/F Lytic BACTEC oceniano w aparacie 9240 BACTEC w czterech oœrodkach klinicznych, uwa anych za oœrodki referencyjne trzeciego stopnia du ych szpitalach akademickich. Populacja pacjentów w tych oœrodkach obejmowa³a pacjentów zaka onych HIV, chorych z obni eniem odpornoœci, biorców przeszczepów i chorych z podejrzeniem zaka enia grzybiczego. Po ywkê Myco/F Lytic BACTEC porównywano z systemem ISOLATOR (Wampole Laboratories, Cranbrook, NJ, USA) w odniesieniu do odzyskiwania i wykrywania dro d aków i grzybów z krwi. Fiolki Myco/F Lytic BACTEC inokulowano 1 5 ml krwi, a probówki ISOLATOR inokulowano 3 10 ml krwi. Osad z ISOLATOR posiewano na p³ytkê z agarem czekoladowym, z agarem z infuzj¹ z mózgu i serca z dodatkiem 5% krwi owczej i na agar z dekstroz¹ Sabouraud. Badaniom poddano ³¹cznie 748 próbek. Ca³kowita liczba patogennych izolatów dro d aków i grzybów, odzyskanych w czasie badania, wynosi³a 32 (zob. TABELA 2). Z tych wyników dodatnich siedem (22%) uzyskano tylko w po ywce Myco/F Lytic BACTEC, a szeœæ (19%) tylko w systemie ISOLATOR. 4

5 TABELA 2: PODSUMOWANIE ODZYSKU IZOLATÓW NA PO YWCE HODOWLANEJ MYCO/F LYTIC W BADANIU KLINICZNYM Drobnoustroje Ca³kowita Tylko po ywka Tylko Obie liczba izolatów Myco/F Lytic izolator po ywki Wszystkie grzyby patogenne: Candida albicans Candida glabrata Candida krusei Candida parapsilosis Candida tropicalis Cryptococcus neoformans Fusarium species Histoplasma capsulatum Razem DOSTÊPNOŒÆ Nr kat. Opis BACTEC Myco/F Lytic Culture Vials (fiolki do hodowli), kaseta zawieraj¹ca 25 fiolek BACTEC Myco/F Lytic Culture Vials (fiolki do hodowli), kaseta zawieraj¹ca 50 fiolek PIŒMIENNICTWO 1. Horsburg Jr., C.R Mycobacterium avium Complex Infection in the acquired immunodefieciency syndrome. New England Journal of Medicine 324: Tenover, F.C., et al, The resurgence of Tuberculosis: Is Your Laboratory Ready? Journal of Clinical Microbiology 31: Isolation and Identification of Mycobacterium tuberculosis: A Guide for the Level II Laboratory. U.S. Department of Health and Human Services, Atlanta, GA, Kent, P.T., and G.P. Kubica Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory. U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 8. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. U.S. Department of Health and Human Services Public Health Service/Centers for Disease Control, Atlanta, GA, May 1988 pp

6 6

7 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Vacutainer, Safety-Lok and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.