PASTOREX MENINGITIS 25 testów

Transkrypt

1 PASTOREX MENINGITIS 25 testów TESTY DO WYKRYWANIA ANTYGENÓW ROZPUSZCZALNYCH I DO IDENTYFIKACJI NEISSERIA MENINGITIDIS A, C, Y/W135, B / E.COLI K1, HAEMOPHILUS INFLUENZAE b, STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE, STREPTOCOCCUS B 1

2 1- ZNACZENIE KLINICZNE Głównymi czynnikami etiologicznymi bakteryjnego zapalenia opon mózgowych są: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae typu b i paciorkowce betahemolizujące z grupy B. Ostre, zagrażające życiu zakażenie, jakim jest bakteryjne zapalenie opon mózgowych, wymaga szybkiego wykrycia czynnika etiologicznego i wdrożenia odpowiedniego leczenia. Klasyczna metoda hodowli, mimo iż niezbędna dla oznaczenia wrażliwości na antybiotyki i potwierdzenia identyfikacji, jest długotrwała a uzyskany wynik jest często fałszywie ujemny, gdy materiał do badania był nie odpowiednio transportowany lub przechowywany, a także, gdy przed pobraniem materiału został podany antybiotyk. Szybszą identyfikację drobnoustrojów wywołujących zakażenie umożliwiają metody immunologiczne, pozwalające na wykrywanie rozpuszczalnych antygenów bakterii, występujących podczas zakażenia w płynach fizjologicznych, jak płyn mózgowo-rdzeniowy, mocz, surowica. Niniejszy zestaw odczynników pozwala na wykrycie polisacharydowych antygenów niektórych, szczególnie chorobotwórczych grup serologicznych lub serotypów następujących gatunków bakterii: Streptococcus pneumoniae (83 typy); Haemophilus influenzae typu b, Neisseria meningitidis z grupy A, z grupy B / E.coli K1, z grupy C, z grupy Y/W135 i Streptococcus sp. z grupy B. Polisacharyd otoczki dwoinki Neisseria meningitidis z grupy serologicznej B ma słabe właściwości antygenowe i trudno jest otrzymać przeciwciała królicze w sposób powtarzalny reagujące ze swoistym antygenem. Dlatego w teście zastosowano mysie monoklonalne przeciwciała, dające swoistą i powtarzalna reakcję z antygenem polisacharydowym meningokoków z grupy serologicznej B. Antygen Neisseria meningitidis z grupy serologicznej B jest identyczny z polisacharydowym antygenem E.coli K1. Homologia antygenowa pomiędzy Neisseria meningitidis z grupy B i E.coli K1 umożliwia diagnostykę zapalenia opon mózgowych o etiologii E.coli u noworodków, gdyż czynnikiem etiologicznym w około 80% przypadków jest szczep K1. Należy pamiętać, że za zapalenie opon mózgowych u noworodków i wcześniaków są głównie odpowiedzialne E.coli i paciorkowce z grupy B, natomiast zakażenia meningokokowe występują w tej grupie wiekowej bardzo rzadko. 2- ZASADA METODY Antygen obecny w badanym materiale klinicznym jest wykrywany za pomocą cząstek lateksowych opłaszczonych swoistymi homologicznymi przeciwciałami. Występujący w próbce antygen reaguje z przeciwciałami, powodując aglutynację cząstek lateksu. Przy braku swoistego antygenu, zawiesina lateksu pozostaje jednorodna. 3- SKŁAD ZESTAWU 1. PASTOREX MENINGITIS 25 testów, nr kat zawiera: Odczynnik 1 (R1): Lateks N.meningitidis B/E.coli K1 1 fiolka zawierająca 0,4 ml czerwonego lateksu opłaszczonego mysimi przeciwciałami monoklonalnymi swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy B/E.coli K1. Odczynnik 2 (R2): Kontrola ujemna Neisseria meningitidis grupy B/E.coli K1 1 fiolka zawierająca 0,4 ml czerwonego lateksu opłaszczonego mysimi przeciwciałami monoklonalnymi skierowanymi przeciwko toksynie tężcowej. 2

3 Odczynnik 3 (R3): H.influenzae b 1 fiolka zawierająca 0.4 ml białego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami swoistymi dla Haemophilus influenzae typu b. Odczynnik 4 (R4): S.pneumoniae 1 fiolka zawierająca 0.4 ml zielonego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami swoistymi dla Streptococcus pneumoniae. Odczynnik 5 (R5): Streptococcus B: 1 fiolka zawierająca 0.4 ml żółtego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami swoistymi dla Streptococcus z grupy B. Odczynnik 6 (R6): N.meningitidis A 1 fiolka zawierająca 0.4 ml niebieskiego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy A. Odczynnik 7 (R7): N.meningitidis C 1 fiolka zawierająca 0.4 ml czerwonego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy C. Odczynnik 8 (R8): N.meningitidis Y/W135 1 fiolka zawierająca 0.4 ml różowego lateksu opłaszczonego króliczymi przeciwciałami swoistymi dla Neisseria meningitidis z grupy Y/W135. Odczynnik 9 (R9): Poliwalentna kontrola ujemna 1 fiolka zawierająca 0.4 ml śliwkowego lateksu opłaszczonego immunoglobulinami IgG pochodzącymi od nie immunizowanych królików. Odczynnik 10 (R10): Poliwalentna kontrola dodatnia Kontrolę dodatnią stanowi liofilizowany ekstrakt antygenowy, rekonstytuowany za pomocą 1 ml jałowej wody. Zawiera on antygeny polisacharydowe N.meningitidis A, C, B, Y/W135, H.influenzae b, Streptococcus B i S.pneumoniae. Objętość odczynnika wystarcza na 20 reakcji. Wszystkie odczynniki zawierają jako konserwant 0.02% tiomersalu. Odczynniki: R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 i R9 zawierają azydek sodu w stężeniu poniżej 0.1%. Jednorazowe karty do aglutynacji Jednorazowe patyczki do aglutynacji. 2. PASTOREX MENINGITIS INDIVIDUAL LATEX TESTS (25 testów każdy) Pojedyncze testy lateksowe (nie zawierają kontroli) - N.meningitidis A (R6) nr kat N.meningitidis C (R7) nr kat N. meningitidis B/ E.coli K1 (R1) nr kat Streptococcus B (R5) nr kat Streptococcus pneumoniae (R4) nr kat

4 - Haemophilus influenzae typu b (R3) nr kat PASTOREX MENINGITIS Control nr kat Kontrole dla pojedynczych odczynników lateksowych (2 x 25 testów) - 2 fiolki z kroplomierzem zawierające 0.4 ml kontroli ujemnej (R9). - 2 fiolki z liofilizowaną kontrolą dodatnią, rekonstytuowaną za pomocą 1 ml jałowej wody (R10). - 2 fiolki z kroplomierzem zawierające 0,4 ml kontroli ujemnej dla N.m.B/E.coli K1 (R2). - Jednorazowe karty do aglutynacji. - Jednorazowe patyczki do aglutynacji. 3. PASTOREX MENINGITIS Diluent 1 butelka zawierająca 40 ml rozcieńczalnika do surowicy nr kat PRZECHOWYWANIE Wszystkie odczynniki zachowują trwałość do daty ważności wskazanej na opakowaniu, jeżeli przechowywane są w temp C i nie są zanieczyszczone mikrobiologicznie (także po otwarciu). Zrekonstytuowana poliwalentna kontrola dodatnia (R10) jest trwała przez 1 miesiąc w temp C (nie zanieczyszczona mikrobiologicznie) lub dłużej po rozporcjowaniu i zamrożeniu w temp. -20 C. Fiolki z odczynnikami lateksowymi należy przechowywać pionowo. ODCZYNNIKÓW LATEKSOWYCH NIE MOŻNA ZAMRAŻAĆ. 5- INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY Pipety pobierające objętość 1 kropli (40-50 μl) do nanoszenia badanego materiału. Probówki serologiczne lub probówki Eppendorfa. Blok grzewczy lub łaźnia wodna o temp. 100 C. Wirówka do probówek. Pojemnik z płynem dezynfekcyjnym. Jałowa woda destylowana, jałowa sól fizjologiczna lub rozcieńczalnik (61717). 6- ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA Uzyskanie prawidłowego wyniku zależy od przestrzegania Dobrej Praktyki Laboratoryjnej: Odczynniki oraz próbki podczas testu powinny mieć temperaturę pokojową ( C). Nie dotykać pól reakcyjnych na karcie do aglutynacji. Do każdej badanej próbki zmieniać pipetę lub końcówkę pipety. Przed użyciem wstrząsnąć fiolkę z lateksem. Wycierać końcówkę zakraplacza, aby uzyskać wykalibrowane krople. 4

5 Nanosząc odczynnik, pionowo trzymać fiolkę. Do każdej reakcji używać nowego patyczka. Zużyte materiały jednorazowe zinaktywować przez autoklawowanie lub dezynfekcję. Poliwalentną kontrolę dodatnią należy zrekonstytuować za pomocą jałowej wody destylowanej, unikając zanieczyszczenia. HIGIENA I BEZPIECZEŃSTWO PRACY Należy zapoznać się z najnowszymi metodami i zaleceniami dotyczącymi ochrony przed zakażeniem podczas pracy z materiałem biologicznym. Próbki materiałów klinicznych należy traktować jako potencjalnie zakaźne. Odczynniki lateksowe zawierają azydek sodu. Należy unikać kontaktu z oczami, ze skórą i błonami śluzowymi. Azydek sodu może reagować z miedzią i ołowiem, tworząc wybuchowe azydki metali. Aby zapobiec akumulacji azydków, po wylaniu odczynników spłukać zlew dużą ilością wody. 7- PROCEDURA: PMR, surowica, mocz PRÓBKI Test należy wykonać jak najszybciej po pobraniu materiału. Jeśli materiał trzeba przechować, można pozostawić go na kilka godzin w temp C lub na dłużej zamrozić w temp. -20 C (w tym przypadku zachować tylko supernatant po odwirowaniu ). Unikać rozmrażania i ponownego zamrażania. Badanie mikrobiologiczne (posiew) powinno zostać wykonane jako pierwsze aby uniknąć ryzyka zanieczyszczenia próbki. Minimalna objętość próbki potrzebna do testu lateksowego to 0.5 ml. A- Przygotowanie klinicznych. UWAGA: Do łaźni wodnej należy wstawiać próbówki wodoszczelne tak aby podczas inkubacji nie dostała się do nich woda. W miarę możliwości używać bloku grzewczego. a) PŁYN MÓZGOWO-RDZENIOWY (PMR) Bardzo mętny lub zawierający krwinki czerwone płyn mózgowo-rdzeniowy należy odwirować przez 5 minut przy 350g (2000 obrotów/min.) i zebrać supernatant. Ogrzać próbkę w temp. 100 C przez 3 minuty (blok grzewczy lub łaźnia wodna), a następnie odwirować przez 5 minut przy 3000g lub przefiltrować przez filtr o porach 0.45 μm. b) SUROWICA Do jednej objętości surowicy (0.5 ml) dodać 3 objętości (1.5 ml) rozcieńczalnika (nr kat 61717). Ogrzać próbkę w temp. 100 C przez 3 minuty w bloku grzewczym lub w łaźni wodnej. Odwirować przez 5 minut przy 3000g. 5

6 UWAGA: Nie wykonywać badania na próbkach osocza. Nie badano wpływu na wynik testu dużej ilości albuminy, lipidów, hemoglobiny i bilirubiny. Najlepsze wyniki uzyskuje się dla świeżej surowicy. c) MOCZ Aby zwiększyć stężenie antygenu, należy przed oznaczeniem zagęścić próbkę do 25x, stosując membranę typu Amicon B15 (Amicon, Francja). Ogrzać próbkę w temp. 100 C przez 3 minuty w bloku grzewczym lub w łaźni wodnej. Odwirować przez 5 minut przy 3000g lub przefiltrować przez filtr o porach 0.45 μm. B- Procedura testowa. Umieść kroplę (40 do 50 µl) wstępnie podgrzanej próbki supernatantu w każdym dołku płytki aglutynacyjnej Delikatnie wstrząśnij butelkami z odczynnikiem lateksowym. Przytrzymując butelkę w pionie, umieść jedną kroplę każdego odczynnika lateksowego na płytce jednorazowego użytku zgodnie ze wskazanym wzorem rozprowadzenia: R9, R6, R7, R1 i R2 w białych dołkach i R8, R3, R4 i R5 w czarnych dołkach. Zmieszaj odczynniki lateksowe i próbkę za pomocą pręcika; zmień pręcik dla każdego odczynnika. Obracaj delikatnie płytkę (~120 obr/min.) przez 10 minut i obserwuj proces aglutynacji w ciągu 10 minut (mieszadło typu orbitalnego można używać z prędkością ~120 obr/min.). 8- PROCEDURA: POSIEW KRWI W celu uzyskania wstępnej orientacji, sprawdź morfologię i barwienie według metody Grama Pobierz 1 do 2 ml dodatniego posiewu krwi. Wiruj przez 5 minut w 2000 g Umieść jedną kroplę (40 do 50 µl) supernatantu w każdym dołku na płytce jednorazowego użytku zgodnie z testowanymi odczynnikami lateksowymi i według barwienia Grama. Delikatnie wstrząśnij butelkami z odczynnikami lateksowymi wybranymi do przeprowadzenia testu. Przytrzymując butelkę w pionie, umieść jedną kroplę każdego wybranego odczynnika lateksowego na obrzeżach kropli supernatantu. Zmieszaj odczynniki lateksowe i próbkę za pomocą pręcika, zmieniając pręcik dla każdego odczynnika. Obracaj płytkę z prędkością ~120 obr./min. przez 5 minut. W ciągu tych 5 minut, obserwuj pod kątem pojawienia się aglutynacji. Niektóre media do posiewu krwi mogą wywoływać określone reakcje lub problemy z odczytywalnością. W przypadku kontroli ujemnej, użyj posiewu krwi zaszczepionego ze sterylną krwią lub z innym organizmem, innym niż te wykryte przez test PASTOREX TM w kierunku zapalenia opon mózgowych. 6

7 9- INTERPRETACJA WYNIKÓW REAKCJA DODATNIA Reakcja dodatnia jest wskazywana doskonałą aglutynacją widoczną gołym okiem w przeciwieństwie do kontroli ujemnej. Intensywność aglutynacji i czas pojawienia się zależy od stężenia antygenu w testowanej próbce. Niezgodność pomiędzy testem dodatniego antygenu i posiewem ujemnym można wyjaśnić nieobecnością żywych bakterii w próbce posiewu (leczenie antybiotykami rozpoczęło się przed pobraniem próbki lub warunki transportowe uniemożliwiły przetrwanie delikatnych bakterii). W większości przypadków, reakcja dodatnia z anty-n. meningitidis B/E.coli K1 u noworodków lub wcześniaków wskazuje na infekcję E.coli K1. U osób starszych prawdopodobniejszy jest Meningococcus B. Posiew z próbki musi potwierdzić diagnozę. REAKCJA UJEMNA Jednorodna zawiesina, bez zlepiania. WYNIKI NIEMOŻLIWE DO ZINTERPRETOWANIA Reakcja jest niemożliwa do zinterpretowania, jeżeli próbki zlepiają się z ujemnymi kontrolami lateksowymi (R2 lub R9) i/lub z więcej niż jednym odczynnikiem lateksowym w zestawie. W takim przypadku, zalecamy powtórzenie testu na innej próbce i odczekanie do momentu uzyskania wyników z posiewu. (Bardzo rzadko, infekcja może być spowodowana dwoma różnymi rodzajami bakterii). 10- PROCEDURA: GRUPOWANIE SZCZEPÓW BAKTERII ODOSOBNIONYCH NA AGARZE (kolonie ze świeżego i czystego posiewu) Do grupowania szczepów bakterii można wykorzystać odczynnika lateksowego Y/W135. W celu określenia tych grup zalecamy użycie tradycyjnej przeciwsurowicy (zestaw Y,W135, 29E: nr ref , 3 x 1 ml) W celu uzyskania wstępnej orientacji przed wykonaniem testu: Sprawdź morfologię i barwienie według Grama. W przypadku bakterii gramoujemnych, przetestuj pod kątem oksydazy (dodatni dla N. meningitidis, ujemny dla E.coli K1). W przypadku bakterii gramododatnich przeprowadź test katalazy. (Nie testuj szczepów katalazo dodatnich). Za pomocą tej techniki nie można zidentyfikować szczepów nie hermetyzowanych S.pneumonia i Haemophilus influenzae. a) Grupowanie : N. meningitides(tylko A, B, C), H. influenzae, E. coli, S. pneumoniae Umieść kroplę 30 µl sterylnego roztworu soli w dołku na płytce jednorazowego użytku. Próbka: - W przypadku Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzea i Escherichia coli, odpowiednik pętli 1 µl to maks. 2 do 3 kolonii. - W przypadku Streptococcus pneumoniae, odpowiednik pętli 5 µl, to minimum 10 do 12 kolonii. Ostrożnie zemulguj kolonie z próbki w sposób pozwalający na uzyskanie jednorodnej zawiesiny. 7

8 Delikatnie wstrząśnij butelką z odczynnikiem lateksowym wybranym do identyfikacji; przytrzymując butelkę pionowo, umieść jedną kroplę tego odczynnika lateksowego na obrzeżach zawiesiny bakteryjnej. Zmieszaj odczynnik lateksowy i zawiesinę za pomocą pręcika. Obróć płytkę (~120 obr./min.). Obserwuj pojawienie się wyraźnej aglutynacji przez okres około 2 minut, Zatwierdź identyfikację gatunków za pomocą konwencjonalnego testu biochemicznego. b) Grupowanie: Steptococcus B (kolonie ß-haemolytic) Umieść 5 kolonii w bulionie bakteryjnym Todd Hewitt 2 ml. Inkubuj w kąpieli wodnej w temperaturze 37 C przez 2 do 3 godzin. Wiruj przez 5 minut w g. Umieść jedną kroplę (40 do 50 µl) supernatantu w dołku na płytce jednorazowego użytku. Delikatnie wstrząśnij butelką z odczynnikiem lateksowym; przytrzymując butelkę pionowo, umieść jedną kroplę tego odczynnika lateksowego na obrzeżach supernatantu. Zmieszaj odczynnik lateksowy i próbkę za pomocą pręcika. Obróć płytkę (~120 obr./min.). Obserwuj pojawianie się wyraźnej aglutynacji przez okres około 1 minuty. Zatwierdź identyfikację gatunków za pomocą konwencjonalnego testu biochemicznego. W celu bezpośredniego wydobywania z odizolowanych kolonii, użyj zestawu PASTOREX TM STREP (kod 61721) 11- KONTROLA JAKOŚCI TESTU Odczynniki lateksowe powinny być jednolite po zakończeniu wstrząsania. Dodatnia kontrola wielowartościowa R10 jest używana do weryfikacji każdej immunoreaktywności odczynnika lateksowego. W celu przeprowadzenia testu kontroli jakości, umieść kroplę (40 µl) kontroli dodatniej (R10) w każdym dołku na płytce jednorazowego użytku. Delikatnie wstrząśnij butelkami z odczynnikiem lateksowym. Przytrzymując butelkę w pionie, umieść jedną kroplę każdego odczynnika lateksowego na płytce jednorazowego użytku zgodnie ze wskazanym wzorem rozprowadzenia: R9, R6, R7, R1 i R2 w białych dołkach i R8, R3, R4 i R5 w czarnych dołkach. Zmieszaj odczynniki lateksowe i kontrolę dodatnią za pomocą pręcika, zmieniając pręcik dla każdego odczynnika lateksowego. Obracaj płytkę z prędkością ~120 obr./min. przez 10 minut. W czasie tych 10 minut obserwuj pod kątem pojawienia się aglutynacji (porównaj reakcje testowe lateksu z tymi z kontroli ujemnych lateksu). Intensywność aglutynacji i szybkość pojawienia się zależy od awidności antygenu/przeciwciała. Reakcje obserwowane przy każdym teście lateksowym mogą być różne. Te z NmB/Coli K1 są dokładniejsze od innych. Roztwór soli lub rozcieńczalnik (kod 61717) kontrolują nieobecność nieokreślonej aglutynacji każdego testu lateksowego. Do przeprowadzenia tego testu kontroli jakości, używany jest roztwór soli fizjologicznej lub rozcieńczalnik R11 (kod 61717) zgodnie z protokołem wielowartościowej kontroli dodatniej (patrz poprzednia procedura). 8

9 Odczynniki lateksowe nie powinny być używane wtedy kiedy nie zlepiają się z wielowartościową kontrolą dodatnią (R10) lub kiedy w nieokreślony sposób zlepiają się z roztworem soli lub rozcieńczalnikiem (kod 61717) (może się zdarzyć z powodu nieprawidłowych warunków przechowywania zestawu lub zanieczyszczenia odczynnika lateksowego) 12- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA Odczynniki zostały przygotowane zgodnie z naszym systemem jakości, poczynając od materiałów wyjściowych, aż do ostatecznego produktu komercyjnego. Odczynniki każdej serii podlegają oznaczeniu kontrolnemu i są dopuszczane do użytkowania, jeśli spełniają wymagane kryteria. Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii. 13- CHARAKTERYSTYKA TESTU CZUŁOŚĆ Czułość każdego z odczynników zestawu określano, badając: Oczyszczony antygen rozpuszczony w soli Próbki kliniczne płynu mózgowo-rdzeniowego, oznaczone jako dodatnie metodą klasyczną (hodowla, preparat mikroskopowy) Szczepy bakterii wyizolowane na podłożu agarowym Mueller-Hinton, agar czekoladowy z PVS, Columbia z 5% krwią baranią. Antygen lub bakterie w próbce Rozcieńczony antygen (NaCl 9 ) Dolna granica wykrywania badanych PMR dodatnich badanych Szczepy dodatnich N.meningitidis gr.a 2.5 ng/ml N.meningitidis gr. B 62.5 ng/ml ND E.coli K1 1 1 N.meningitidis gr.c 2.5 ng/ml N.meningitidis gr.y 5 ng/ml ND - - N.meningitidis gr.w 2.5 μg /ml ND - - S.pneumoniae 95 ng/ml Streptococcus gr. B 20 ng/ml H.influenzae typu B 0.1 ng/ml

10 SWOISTOŚĆ Swoistość każdego z odczynników zestawu określano, badając: Jałowy PMR (a) lub PMR zawierający bakterie wywołujące zapalenie opon mózgowych oraz inne bakterie, nie wykrywane za pomocą odczynników lateksowych (b). Szczepy należące do gatunków: Neisseria, Branhamella, Moraxella, Acinetobacter, Kingella, Streptococcus, Haemophilus, oznaczano za pomocą heterologicznych odczynników lateksowych (c). Latex test Jałowy PMR (a) Zanieczyszczony PMR (b) badanych ujemnych badanych ujemnych badanych Szczepy (c) ujemnych N.meningitidis gr. A N.meningitidis gr. B E.coli K ND 41 40* N.meningitidis gr.c S.pneumoniae Streptococcus gr. B H.influenzae typu B badanych Losowo wybrany PMR ujemnych N.meningitidis gr.y/w * 1 Szczep Klebsiella pneumoniae dał reakcję niespecyficzną. HODOWLA KRWI W teście Pastorex Meningitis oznaczono 44 hodowle krwi. Uzyskano następujące wyniki: Czułość: 100% (4/4; hodowle zawierały 2 szczepy S.pneumoniae, 2 szczepy Streptococcus z grupy B). Swoistość: 100% (37/37). Dla odczynników R3, R4, R5, R6, R7 i R8. Swoistość: 98.2% (54*/55). Dla odczynnika R1. *Wśród 19 szczepów gronkowców koagulazo-ujemnych, dla 1 szczepu uzyskano nie swoistą reakcję dodatnią; wynik nie potwierdził się w badaniu próbki z hodowli na podłożu agarowym. 10

11 14- OGRANICZENIA METODY Immunologiczna technika lateksowa w wielu wypadkach umożliwia wstępną identyfikację patogenu. Jednakże możliwe jest, że stężenie antygenów w badanej próbce jest niższe od progu detekcji dla lateksu i uzyskiwany jest wynik ujemny. W takiej sytuacji przydanym jest powtórzenie badania po pewnym czasie. Technika ta nie może zastępować hodowli bakteryjnej, która sama z siebie umożliwia wykonanie oznaczenia lekowrażliwości. Na rynku dostępnych jest wiele podłoży do hodowli krwi, czułość i swoistość oznaczenia nie jest gwarantowana dla wszystkich z tych podłoży (punkt 7D). Aktualnie dostępna jest jedynie niewielka liczba danych klinicznych i literaturowych dotyczących identyfikacji antygenów w surowicy i moczu metodą lateksową. Zidentyfikowano kilka nie spokrewnionych bakterii posiadających antygeny identyczne z badanymi. Możliwość reakcji krzyżowej powinna być zawsze rozważona (1, 4, 5). Wynik ostateczny, jak w przypadku każdego badania laboratoryjnego nie może być wydany w oparciu o pojedynczy test, ale zawsze w zestawieniu z danymi klinicznymi i wynikami badań biochemicznych, cytologicznych oraz immunologicznych. Wykrycie antygenów rozpuszczalnych w hodowli krwi, tak samo jak wyniki oznaczeń dla kolonii bakteryjnych izolowanych na podłożu agarowym, powinny być uzupełnione identyfikację gatunku szczepu bakteryjnego. 15- LITERATURA 1. BRADSHAW M.W., CHNEERSON R., PARKE J.C. Jr., ROBBINS J.B. Bacterial antigens cross-reactive with the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae, type b. Lancet, 1971, i (May 29), DENIS F. et MOUNIER M. Le diagnostic rapide des méningites cérébrospinales: techniques, résultats, limites et perspectives. Méd. Mal. Infect.,1984, 14, DENIS F., SAULNIER M. et CHIRON J.P. Diagnostic étiologique rapide des méningites purulentes par agglutination passive indirecte de particules de latex et par contre- immunoéléctrophorèse : expérience et perspectives. Bull. O.M.S., 1981, 59, KASPER D.L., WINKELHAKE J.L., ZOLLINGER W.D., BRANDT B.L., and ARTENSTEIN M.S. Immunochemical similarity between polysaccharide antigens of Escherichia coli 07:K1 (L) : NM and group B Neisseria meningitidis. J. Immunol., 1973, 110, LEE P.C. and WETHERALL B.L. Cross-reaction between Streptococcus pneumoniae and group C streptococcal latex reagent. J. Clin. Microbiol., 1987, 25, LEINONEN M. and HERVA E. The latex agglutination test for the diagnosis of meningococcal and Haemophilus influenzae meningitis. Scand. J. Infect.,1977, 9, LUND E. and HENRICHSEN J. Laboratory diagnosis, serology and epidemiology of Streptococcus pneumoniae. In Methods in Microbiology, T. Bergan and J.R. Norris edit., 1978, 12, chap. XI, (Academic press, London, New-York, San Francisco) 8. TESSIER F. Dépistage et identification des streptocoques du groupe B. Intérêt en périnatologie. Extrait de LABORAMA n 14, oct. 1982, Institut Pasteur Production edit. 11

12 9. NEWMAN R.B., STEVENS R.W. and GAAFAR H.A. Latex agglutination test for the diagnosis of Haemophilus influenzae meningitis. J. Lab. Clin. Med., 1970, 76, ROBBINS J.B., Mc CRACKEN G.H. Jr., GOTSCHLICH G.C., ORSKOV F., ORSKOV I., HANSON L.A. Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis. New Engl. J. Med. 1974, 290, P. GESLIN et coll., Centre National de Référence des Pneumocoques: Rapport d'activité ASUNCIÓN FENOLL, ISABEL JADO, DOLORES VICIOSO, AMALIA PÉREZ, and JULIO CASAL. Evolution of Streptococcus pneumoniae Serotypes and Antibiotic Resistance in Spain : Update (1990 to 1996). J. Clin. Microbiol.,1998, 36, Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) /2008 Fax : +33 (0)