- na szkiełko nakrywkowe nałóż szkiełko podstawowe z wgłębieniem, tak aby kropla znalazła się we wgłębieniu

Transkrypt

1 KONSPEKT MIKROBIOLOGIA I CHOROBY ZAKAŹNE Podstawy różnicowania bakterii i grzybów. Ćwiczenie 1 Ocena morfologii bakterii i grzybów: 1. Preparat przyżyciowy (mokry, tzw. świeży) w kropli wiszącej Technika wykonania preparatu: - na rogi s zkiełka nakrywkowego nanieś niewielką ilość wazeliny - na środku szkiełka umieść 2 oczka zawiesiny z hodowli płynnej bakterii/grzybów - na szkiełko nakrywkowe nałóż szkiełko podstawowe z wgłębieniem, tak aby kropla znalazła się we wgłębieniu - oglądaj w mikroskopie świetlnym Wykonaj preparat przyżyciowy z hodowli płynnej bakterii lub grzybów. Opisz wynik : 2. Barwienie złożone - metoda Grama Przygotowanie preparatu: odtłuszczone szkiełko podstawowe, nałożenie bakterii ( z hodowli płynnej 1-2 oczka ezy lub ze stałej - kropla soli + część kolonii bakteryjnej lub grzybiczej z podłoża stałego - rozprowadzenie na szkiełku - utrwalenie preparatu (nad płomieniem) - barwienie: 1. fiolet krystaliczny 3 min. Spłukać wodą 2.płyn Lugola 2 min. Spłukać wodą 3. Etanol kilka sekund Spłukać wodą 4. Fuksyna 30 sek. Spłukać wodą - po wyschnięciu oglądamy pod imersją Wykonaj barwienie preparatów własnych ze wskazanych przez nauczyciela hodowli stałych ziarniaków Gram(+), ziarniaków Gram(-), pałeczek Gram+, pałeczek Gram(-), drożdżaków każdy student wykonuje co najmniej 2 różne preparaty własne.

2 Preparaty pokazowe: 1. Obejrzyj pod mikroskopem i narysuj to co widzisz, uzupełnij pytania preparat barwiony czerwienią Kongo Co widać w tym barwieniu? Preparat barwiony metodą Ziehl -Neelsena Bakterie są koloru :.. Tło.. Wykorzystujemy w diagnostyce.. Preparat barwiony błękitem metylenowym Podaj przykłady zastosowania tego typu barwienia w diagnostyce 1. Agar krwawy agar z dodatkiem 5 % krwi baraniej (owczej) Obejrzyj rodzaje hemolizy paciorkowców na podłożu krwawym opisz wygląd Alfa Beta Gamma 2. Wykonaj test na obecność katalazy z podłoża krwawego z kolonii wskazanych przez asystenta i oceń czy są to bakterie katalazo-dodatnie czy katalazo ujemne. Wpisz wynik. Wykorzystywany jest do różnicowania.. od 3. Podłoże MacConkeya jest podłożem - określ typ. Kolonie laktozo+ są koloru Kolonie laktozo (-) są koloru 4. Podłoże Chapmana stosowane jest w diagnostyce Kolonie mannitolo+ są koloru podaj przykład Kolonie mannitolo(-) są koloru..

3 5. Uzupełnij : rodzaj podłoża czynnik wybiórczy czynnik różnicujący dla jakich drobnoustrojów możliwa barwa kolonii z krwią owczą Chapmana (MSA) MacConkeya czekoladowe Coccosel Pyocyanosel Sabourauda 6. Scharakteryzuj jakie bakterie mogą rosnąć na wskazanym przez asystenta podłożu chromogennym kierując się kolorem kolonii posługując się wzorcem kolorów danego podłoża. 7. Odczytaj test biochemiczny typu API - wskazany przez asystenta posługując się instrukcją do odczytu danego testu. 8. Opisz kolonie bakteryjne lub grzybicze ze wskazanej przez asystenta płytki kierując się następującymi cechami: Nazwa podłoża : Cecha różnicująca: Zapach kolonii - Wygląd kolonii- 9. Hodowla drobnoustrojów w podłożu płynnym zaznacz na rysunku w której części probówki rosną bakterie wybitnie tlenowe. Względnie beztlenowe i bezwzględnie beztlenowe.

4 ĆWICZENIE 2A,2B 1. Wykonaj własny preparat bezpośredni z plwociny, śliny lub wymazu z gardła. Zinterpretuj i podkreśl to co widzisz: komórki nabłonkowe, leukocyty, pałeczki Gram(+), pałeczek Gram (-), ziarniaki Gram(+), ziarniaki Gram(-), drożdżaki chlamydospory / blastospory, inne.. 2. Wykonaj preparat bezpośredni z materiałów klinicznych BAL-u lub plwociny pobranych od pacjentów z podejrzeniem zapalenia płuc. Podobnie jak w ćw. 1 zinterpretuj: komórki nabłonkowe, leukocyty, pałeczki Gram(+), pałeczek Gram (-), ziarniaki Gram(+), ziarniaki Gram(-), drożdżaki chlamydospory / blastospory, inne.. 3. Analogicznie jak wyżej oceń przynajmniej 5 gotowych preparatów z materiałów klinicznych z dróg oddechowych. 4. Pacjent z podejrzeniem zakażeń górnych, dolnych dróg oddechowych lub oka :zaproponuj schemat badania mikrobiologicznego, na podstawie gotowych podłoży z posiewem opisz drobnoustroje, zaproponuj identyfikację i na podstawie wykonanego antybiogramu, po jego ocenie wskaż Rodzaj pobieranego materiału ANGINA Zapalenie zatok Zapalenie spojówek Zapalenie płuc Zapalenie kanału słuchowego zewnętrznego Schemat badania mikrobiologicznego (rodzaj podłoży, czas inkubacji) Różnicowanie drobnoustrojów rodzaje testów Interpretacja antybiogramu Antybiotykoterapia celowana ustal najkorzystniejszą opcję terapeutyczną najkorzystniejszą terapię dla pacjenta 5. Wstępnie zidentyfikuj otrzymany szczep, wykonaj odpowiednie badania w celu ostatecznej identyfikacji i oznaczenia wrażliwości na leki.

5 6. Immunofluorescencja pośrednia i ELISA w diagnostyce zakażeń wywołanych przez M. pneumoniae, C. pneumoniae, wirusami (adeno-, grypy, paragrypy, RSV). Podaj zasadę testu (IFA), obejrzyj preparaty i opisz je. 7. Diagnostyka krztuśca przykładowe wyniki, interpretacja 8. Szybkie testy w praktyce klinicznej, oznaczanie antygenów/kwasów nukleinowych drobnoustrojów w materiale od pacjenta z podejrzeniem zakażeń dróg oddechowych. Wymień drobnoustroje i rodzaj badanego materiału, omów z asystentem przydatność kliniczną tych testów. Antygen nazwa bakterii Rodzaj materiału Przydatność kliniczna S. pyogenes S. pneumoniae L. pneumophila w. grypy EBV CMV NA KOLEJNE ZAJĘCIA PROSZĘ PRZYNIEŚĆ KAŁ

6 Ćwiczenie 3A,3B 1. Obejrzyj wybrane podłoża z posiewem kału wg następującego schematu: Nazwa podłoża Ocena wzrostu po jakim czasie Jakie bakterie identyfikujemy Wygląd kolonii Jednostka kliniczna Leczenie empiryczne/celowane/- podaj leki Agar krwawy McConkeya SS Sabourauda CCDA 2. Diagnostyka zakażeń Clostridium difficile obejrzyj wskazane testy, wpisz metodę badania, przydatność kliniczną oraz zapoznaj się z wynikami dodatnimi i ujemnymi Test na obecność dehydrogenazy w kale - Wykrycie toksyny A/B oraz szczepu hiperwirulentnego 3. Odczyn Widala opisz metodykę, zastosowanie testu 4. Wykrycie Rota/Adenowirusów w kale zasada testu, przykładowe wyniki badań opisz i oceń

7 5. Obejrzyj i narysuj preparat z hodowli Campylobacter 6. Odczytaj i wpisz na pasku poniżej przykładowy wynik badania metodą Western blot oznaczania swoistych przeciwciał IgG przeciwko Helicobacter pylori omów znaczenie testu w klinice. 7. Przeprowadź serotypowanie E.coli kierunku szczepu EPEC wynik zaznacz na rysunku: szczep + surowica szczep + kontrola NaCl UWAGA! Na następne ćwiczenia przynosimy swoje materiały kliniczne: mocz, wymaz z pochwy (kobiety), wymaz z cewki moczowej - do wyboru. Wymazówki do pochwy i cewki moczowej do pobrania w Zakładzie Mikrobiologii, pojemnik do moczu proszę kupić w aptece cena kilka groszy.

8 ĆWICZENIE 4A,4B 1. Wykonaj posiew moczu ezą kalibrowaną: Rodzaj podłoża- Czas inkubacji 2. Wykonaj i oceń preparat bezpośredni wykonany z wymazu z cewki moczowej i/lub pochwy. Narysuj, wskaż elementy fizjologiczne i ewentualnie takie które wskazują na patologię 3. Oceń wybrane 3 posiewy moczu pod kątem ilościowym i jakościowym 4. Oceń antybiogram wg norm EUCAST z wybranych drobnoustrojów izolowanych z zakażeń dróg moczowych: Gatunek:.. Antybiotyk/chemioterapeutyk strefa w mm R/S 5. Wskaż i narysuj charakterystyczne elementy preparatów bezpośrednich z pochwy klasyfikowanych jako: - waginoza - zakażenie

9 - drożdżyca 6. Zastosowanie testu do oznaczania DNA Chlamydia trachomatis 7.Podaj wynik posiewu moczu wykonanego na poprzednim ćwiczeniu: 8.Narysuj charakterystyczne elementy preparatu bezpośredniego z rzeżączki: 9.Neisseria - wykonanie testu na oksydazę wynik 10.Odczyn FTA-ABS - opisz metodę, obejrzyj preparat opisz w zeszycie 11.Diagnostyka Mycoplasma/Ureaplasma - Metoda półilościowa jakościowa zasada testu, obejrzyj przykładowe testy i wyniki badań opisz Metoda genetyczna przykładowe wyniki, zasada testu 12.Chlamydia trachomatis diagnostyka z wykorzystaniem DIF opisz zasadę testu, obejrzyj przykładowe preparaty 13.Omówienie wyników badań w kierunku HPV: Wpisz typy wysokoonkogenne: Tzw. średniego ryzyka:

10 Niskiego ryzyka: