2014/07/11 A93A01237CPL A11A01641 60 ml 15 ml Pentra C200 Odczynnik diagnostyczny do oznaczania ilościowego in vitro stężenia mocznika / azotu mocznika krwi w surowicy i osoczu krwi lub moczu metodą kolorymetryczną. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.8 Wersja aplikacji a Surowica, osocze: UREA 01.xx Mocz: UREA 01.xx Zastosowanie a jest odczynnikiem diagnostycznym do ilościowego oznaczania in vitro stężenia mocznika/ azotu mocznika (produktu metabolizmu azotu) w surowicy i osoczu krwi ludzkiej oraz w moczu testem enzymatycznym UV z wykorzystaniem ureazy i dehydrogenazy glutaminianowej. Pomiary wykonane przy użyciu tego urządzenia wykorzystuje się w diagnostyce i leczeniu pewnych schorzeń nerek i zaburzeń metabolicznych. Aspekty kliniczne (1, 2) Mocznik jest produktem końcowym katabolizmu białek, zawierającym azot. Stan związany z podwyższonym poziomem stężenia mocznika we krwi znany jest jako mocznica (hiperuremia) lub azotemia. Aby odróżnić azotemię przednerkową od ponerkowej, wykonuje się oznaczenia mocznika i kreatyniny. Azotemia przednerkowa, wywoływana np. przez odwodnienie, przyspieszone spalanie białek, leczenie kortyzolem lub zmniejszoną perfuzją nerek, prowadzi do podwyższonego a Modyfikacja: dodano rozdział. b Modyfikacja: Odczynniki : modyfikacja. stężenia mocznika we krwi, podczas gdy wartości kreatyniny pozostają w granicach normy. W azotemii ponerkowej, powodowanej niedrożnością dróg moczowych, wzrasta zarówno stężenie mocznika jak i kreatyniny, jednak wzrost poziomu kreatyniny jest mniejszy. W schorzeniach nerek stężenie mocznika wzrasta przy znacznym spowolnieniu filtracji kłębuszkowej oraz gdy spożycie białka wynosi więcej niż 200 g na dzień. Metoda (3) Ureaza - GLDH: test enzymatyczny UV. Ureaza Mocznik + 2H 2 O > 2NH + 4 + 2 HCO - 3 GLDH 2-oksoglutaran + NH + 4 + NADH > L-glutaminian + NAD + + H 2 O (GLDH = Dehydrogenaza glutaminianowa) Odczynniki b jest produktem gotowym do użycia. Reagent 1: TRIS ph 7,8 2-oksoglutaran ADP Ureaza 150 mmol/l 9 mmol/l 0,75 mmol/l 7 ku/l 1 / 7
Reagent 1: GLDH (Dehydrogenaza glutaminianowa) Azydek sodu 1 ku/l < 1 g/l Wynik kontroli musi zawierać się w zdefiniowanych przedziałach ufności. Każde laboratorium powinno wypracować sposób postępowania w przypadku, gdy wyniki wykroczą poza wyznaczone przedziały. Reagent 2: NADH Azydek sodu 1,3 mmol/l < 1 g/l Produktu należy używać zgodnie z niniejszą ulotką. Producent nie może zagwarantować właściwego działania produktu, jeżeli zostanie on użyty w sposób inny od podanego. Postępowanie z preparatem 1. Wyjmij obie zatyczki kasety. 2. Jeżeli odczynnik zawiera pianę, usuń ją za pomocą plastikowej pipety. 3. Umieść kasetę w chłodzonej komorze odczynnikowej analizatora Pentra C200. Kalibrator Do celów kalibracji należy używać: Multical, nr ref. A11A01652 (do oddzielnego zakupu) 10 x 3 ml (liofilizat) Kontrola Do wewnętrznej kontroli jakości należy używać: N Control, nr ref. A11A01653 (wymaga osobnego zakupu) 10 x 5 ml (liofilizat) P Control, nr ref. A11A01654 (wymaga osobnego zakupu) 10 x 5 ml (liofilizat) Urine Control L/H, nr ref. A11A01674 (wymaga osobnego zakupu) 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Oznaczenie kontroli powinno być przeprowadzane raz dziennie i/lub po wykonaniu kalibracji. Częstość przeprowadzania kontroli oraz przedziały ufności powinny być ustalone w oparciu o wytyczne laboratoryjne oraz przepisy obowiązujące w danym kraju. Należy przestrzegać krajowych, regionalnych i lokalnych wytycznych dotyczących materiałów do kontroli jakości. Wymagane wyposażenie niewchodzące w skład produktu Zautomatyzowany kliniczny analizator biochemiczny: Pentra C200 Kalibrator: Multical, nr ref. A11A01652 Kontrole: N Control, nr ref. A11A01653, oraz P Control, nr ref. A11A01654 Urine Control L/H, nr ref. A11A01674 Standardowy sprzęt laboratoryjny. c Surowica. Osocze pobrane z heparyną litową. Świeży mocz Firma HORIBA Medical nie prowadziła testów dla antykoagulantów innych niż wymienione na liście i w związku z tym nie zaleca ich używania dla potrzeb tego oznaczenia. Stabilność surowicy/osocza (1): 2 dni w temperaturze pokojowej 1 tydzień w temperaturze 4-8 C Stabilność w moczu (4): 4 tyg. w temperaturze -20 C, przy ph < 7,0 4 dni w temperaturze 4-8 C, jeżeli ph < 7,0 2 dni w temperaturze 20-25 C, jeżeli ph < 7,0 Zakres norm Każde laboratorium powinno wypracować swoje własne zakresy odniesienia. Wartości podane w niniejszej ulotce mają wyłącznie charakter orientacyjny. c Modyfikacja: dodano zalecenie. 2 / 7
Surowica, osocze (1): Mocznik BUN Dorośli: [mg/dl] [mmol/l] [mg/dl] Ogólnie 17-43 2,8-7,2 7,9-20,2 Kobiety < 50 lat 15-40 2,6-6,7 7,3-18,8 Kobiety > 50 lat 21-43 3,5-7,2 9,8-20,2 Mężczyźni < 50 lat 19-44 3,2-7,3 9,0-20,5 Mężczyźni > 50 lat 18-55 3,0-9,2 8,4-25,8 Mocznik BUN Dzieci: [mg/dl] [mmol/l] [mg/dl] 1-3 lat: 11-36 1,8-6,0 5,1-16,8 4-13 lat: 15-36 2,5-6,0 7,0-16,8 14-19 lat: 18-45 2,9-7,5 8,1-21,1 Ogólne środki ostrożności Niniejszy odczynnik jest przeznaczony wyłącznie do profesjonalnej diagnostyki in vitro. Nie połykać. Unikać zanieczyszczenia skóry i błon śluzowych. Przy pracy należy stosować standardowe laboratoryjne środki ostrożności. Kasety odczynnikowe są kasetami jednorazowego użytku, należy je utylizować zgodnie z lokalnymi przepisami. Należy uważnie zapoznać się z kartą charakterystyki (MSDS) dołączoną do odczynnika. Nie używać produktu, jeżeli można zaobserwować zmianę jego cech biologicznych, chemicznych lub fizycznych, co wskazuje na jego nieprzydatność do użytku. Mocz (5): Mocz [mmol/24h] BUN [mg/24h] 430-710 1207-1993 Przechowywanie i stabilność d Odczynniki, w nieotwieranych kasetach, zachowują stabilność do daty ważności podanej na etykiecie, o ile są przechowywane w temperaturze 2-8 C. Stabilność po otwarciu: patrz rozdział Wydajność przy użyciu w analizatorze Pentra C200. Nie wolno zamrażać odczynników. Uszkodzenie opakowania W przypadku zniszczenia opakowania ochronnego, nie należy używać odczynnika, jeżeli uszkodzenie mogło wpłynąć na jego właściwości. Wydajność przy użyciu w analizatorze Pentra C200 Dane przedstawione poniżej pochodzą z oznaczeń przeprowadzonych przy użyciu analizatora Pentra C200. Surowica, osocze Liczba oznaczeń: ok. 271 Stabilność robocza odczynników: Po otwarciu kaseta z odczynnikiem umieszczona w chłodzonej komorze analizatora Pentra C200 zachowuje stabilność przez 54 dni. Objętość próbki: 3 µl/oznaczenie Granica oznaczalności: Granicę oznaczalności określono zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP17-A (6) i wynosi ona: Mocznik: 0,58 mmol/l (3,48 mg/dl) BUN: 1,63 mg/dl Postępowanie z odpadami Należy postępować zgodnie z lokalnie obowiązującymi przepisami. Opisywany odczynnik jest konserwowany azydkiem sodu, obecnym w stężeniu poniżej 0,1%. Azydek sodu może wchodzić w reakcje z ołowiem lub miedzią, tworząc wybuchowe azydki metali. d Modyfikacja: modyfikacja informacji o przechowywaniu i stabilności. 3 / 7
Poprawność i precyzja: Powtarzalność (precyzja w trakcie pracy urządzenia) Przeprowadzane jest 20 oznaczeń dla 3 próbek o niskim, średnim oraz wysokim stężeniu oraz dla 2 kontroli, zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (7). Wartość średnia mocznika CV % mmol/l mg/dl 7,07 42,44 2,31 24,56 147,35 0,58 1 2,84 17,01 4,06 2 10,3 62,09 1,04 3 24,42 146,51 0,49 Wartość średnia BUN (mg/dl) CV % 19,86 2,31 68,96 0,58 1 7,96 4,06 2 29,06 1,04 3 68,57 0,49 Powtarzalność (precyzja całkowita) 3 szt. próbek o niskim, średnim i wysokim stężeniu oraz 2 kontrole są przez 20 dni poddawane podwójnym oznaczeniom (2 serie dziennie), zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP5-A2 (8). Wartość średnia mocznika CV % mmol/l mg/dl 7,26 43,58 2,79 24,67 148,01 1,45 1 2,93 17,58 5,74 2 10,55 63,29 2,07 3 24,64 147,82 1,84 Wartość średnia BUN (mg/dl) CV % 20,40 2,79 69,27 1,45 1 8,23 5,74 2 29,62 2,07 3 69,18 1,84 Zakres pomiaru: Mocznik: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 0,58 do 35,00 mmol/l (od 3,48 do 210,00 mg/dl), z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 175 mmol/l (1050 mg/dl). Liniowość odczynnika ustalono zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP6-A, jako 35,00 mmol/l (210,2 mg/dl) (9). BUN: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 1,63 do 98,30 mg/dl, z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 491,5 mg/dl. Liniowość odczynnika ustalono zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP6-A, jako 98,3 mg/dl (9). Korelacja: 81 próbek pobranych od pacjentów (surowica i osocze) koreluje się z komercyjnie dostępnym odczynnikiem, służącym jako wzorzec, zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP9-A2. (10). Wartości dla mocznika zawierały się w przedziale od 0,85 do 32,12 mmol/l (od 5,12 do 192,73 mg/dl). Wartości dla BUN zawierały się w przedziale od 2,40 do 90,20 mg/dl. Równanie dla otrzymanej linii allometrycznej (11) jest następujące: Mocznik: Y = 1,00 X + 0,04 (mmol/l) przy współczynniku korelacji r 2 = 0,992 BUN: Y = 1,01 X + 0,11 (mg/dl) przy współczynniku korelacji r 2 = 0,992 Czynniki zakłócające: Hemoglobina: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do 290 µmol/l (500 mg/dl). 4 / 7
Triglicerydy: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do stężenia Intralipid (świadczącego o lipemii) 7,0 mmol/l (612,5 mg/dl). Bilirubina Nie obserwuje się znaczącego całkowita: wpływu do 380 µmol/l (22,2 mg/dl). Bilirubina Nie obserwuje się znaczącego bezpośrednia: wpływu do 380 µmol/l (22,2 mg/dl). Young podaje także inne ograniczenia, a w szczególności listę leków oraz zmiennych przedanalitycznych, które według obecnego stanu wiedzy wpływają na wyniki tej metody (12, 13). Stabilność kalibracji: Odczynnik jest kalibrowany w dniu 0. Stabilność kalibracji jest kontrolowana przez wykonanie testów na 2 próbkach kontrolnych. Stabilność kalibracji wynosi 35 dni. Uwaga: Ponowną kalibrację odczynnika zaleca się w przypadku zmiany jego serii oraz w przypadku, gdy wyniki kontroli jakości wykroczą poza założony zakres. Wersja aplikacji: Mocznik: 01.xx BUN: 01.xx Mocz Liczba oznaczeń: ok. 271 Stabilność robocza odczynników: Po otwarciu kaseta z odczynnikiem umieszczona w chłodzonej komorze analizatora Pentra C200 zachowuje stabilność przez 54 dni. Objętość próbki: 3 µl/oznaczenie Granica oznaczalności: Granicę oznaczalności określono zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP17-A (6) i wynosi ona: Mocznik: 14,28 mmol/l (85,7 mg/dl) BUN: 40,10 mg/dl Poprawność i precyzja: Powtarzalność (precyzja w trakcie pracy urządzenia) Przeprowadzane jest 20 oznaczeń dla 3 próbek o niskim, średnim oraz wysokim stężeniu oraz dla 2 kontroli, zgodnie z zaleceniami procedury Valtec (7). Wartość średnia mocznika CV % mmol/l mg/dl 171,64 1030 2,31 277,76 1667 3,11 1 94,12 565 3,79 2 173,71 1042 2,90 3 322,02 1932 1,46 Wartość średnia BUN (mg/dl) CV % 482,0 2,31 780,0 3,11 1 264,3 3,79 2 487,8 2,90 3 904,2 1,46 Powtarzalność (precyzja całkowita) 3 szt. próbek o niskim, średnim i wysokim stężeniu oraz 2 kontrole są przez 20 dni poddawane podwójnym oznaczeniom (2 serie dziennie), zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP5-A2 (8). Wartość średnia mocznika CV % mmol/l mg/dl 164,9 989 4,31 257,9 1547 3,76 1 81,3 488 5,42 2 135,5 813 3,67 3 312,9 1878 3,90 5 / 7
Wartość średnia BUN (mg/dl) CV % 463 4,31 724 3,76 1 228 5,42 2 380 3,67 3 879 3,90 Zakres pomiaru: Mocznik: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 14 do 700 mmol/l (od 84 do 4200 mg/dl), z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 175 mmol/l (1050 mg/dl). Liniowość odczynnika ustalono zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP6-A, jako 700 mmol/l (4200 mg/dl) (9). BUN: Oznaczenie potwierdziło zakres pomiaru od 29,04 do 1911,61 mg/dl, z automatycznym rozcieńczeniem następczym do 491,5 mg/dl. Liniowość odczynnika ustalono zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP6-A, jako 1965,6 mg/dl (9). Korelacja: 90 pobrane od pacjentów próbki (mocz) koreluje się z komercyjnie dostępnym odczynnikiem, służącym jako wzorzec, zgodnie z zaleceniami CLSI (NCCLS), procedura EP9-A2 (10). Wartości dla mocznika zawierały się w przedziale od 10,34 do 680,77 mmol/l (od 62,1 do 4084,6 mg/l). Wartości dla BUN zawierały się w przedziale od 29,04 do 1911,61 mg/dl. Równanie dla otrzymanej linii allometrycznej (11) jest następujące: Mocznik: Y = 1,12 X + 4,94 (mmol/l) przy współczynniku korelacji r 2 = 0,9936 BUN: Y = 1,12 X + 82,80 (mg/dl) przy współczynniku korelacji r 2 = 0,9936 Czynniki zakłócające: Hemoglobina: Nie obserwuje się znaczącego wpływu do 200 µmol/l (345 mg/dl). Intralipid: Nie obserwuje się znaczącego wpływu, aż do zmętnienia Intralipidu (Intralipid, świadczący o lipemii) do wartości 7,0 mmol/l (612,5 mg/dl). Bilirubina Nie obserwuje się znaczącego bezpośrednia: wpływu do 627 µmol/l (36,7 mg/dl). Kwas Nie obserwuje się znaczącego askorbinowy: wpływu do 3,35 mmol/l (59,0 mg/dl). Young podaje także inne ograniczenia, a w szczególności listę leków oraz zmiennych przedanalitycznych, które według obecnego stanu wiedzy wpływają na wyniki tej metody (12, 13). Stabilność kalibracji: Odczynnik jest kalibrowany w dniu 0. Stabilność kalibracji jest kontrolowana przez wykonanie testów na 2 próbkach kontrolnych. Stabilność kalibracji wynosi 35 dni. Uwaga: Ponowną kalibrację odczynnika zaleca się w przypadku zmiany jego serii oraz w przypadku, gdy wyniki kontroli jakości wykroczą poza założony zakres. Wersja aplikacji: Mocznik: 01.xx BUN: 01.xx Współczynnik konwersji (1) Mocznik (mmol/l) = Mocznik (mg/dl) x 0,1665 BUN (mg/dl) = Mocznik (mg/dl)/ 2,14 BUN (mg/dl) = Mocznik (mg/dl)/ 0,3561 Ostrzeżenie Użytkownik ma obowiązek sprawdzić, czy niniejszy dokument dotyczy używanego odczynnika. Bibliografia 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellschaft (1998): 374-377. 2. Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company (1999): 1838. 3. Talke H, Schubert GE. Enzymatische Harnstoffbestimmung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg (Enzymatic determination of urea in blood and serum with the optical test according to Warburg). Klin. Wochenschr (1965) 43: 174-175. 6 / 7
4. Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st Ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany) (2001): 52-53. 5. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA) (2006): 2301. 6. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 7. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 8. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Method. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2 (2004) 24 (25). 9. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 10. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 11. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 12. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 13. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 7 / 7