(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

Transkrypt

1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 2013/52 EP B1 (13) (51) T3 Int.Cl. C12N 15/85 ( ) C12N 15/70 ( ) C12N 5/10 ( ) C12Q 1/68 ( ) G01N 33/50 ( ) (54) Tytuł wynalazku: Narzędzia i metody w charakteryzowaniu aktywności immunotoksycznej substancji ksenobiotycznych (30) Pierwszeństwo: PL 9803 (43) Zgłoszenie ogłoszono: w Europejskim Biuletynie Patentowym nr 2006/40 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: Wiadomości Urzędu Patentowego 2014/08 (73) Uprawniony z patentu: International Institute of Molecular and Cell Biology, Warszawa, PL Institute for Medical Biology of the Polish Academy of Sciences, Łódź, PL Nofer Institut for Occupational Medicine, Łódź, PL Proteon Pharmaceuticals S.A., Łódź, PL (72) Twórca(y) wynalazku: PL/EP T3 ERIK ULLERAS, Uppsala, SE GUNNAR NILSSON, Stockholm, SE TOVE RINGERIKE, Oslo, NO ROBERT JAN VANDEBRIEL, Bilthoven, NL AURELIA WALCZAK-DRZEWIECKA, Łódź, PL KHALID AL-NEDAWI, Montreal, CA JANINA WYCZÓŁKOWSKA, Łódź, PL MACIEJ STĘPNIK, Łódź, PL JOANNA ARKUSZ, Łódź, PL KONRAD RYDZYŃSKI, Łódź, PL VIOLETTA ADAMCZEWSKA, Warszawa, PL DOMINIKA TRZASKA, Warszawa, PL MACIEJ OLSZEWSKI, Warszawa, PL URSZULA BIAŁEK-WYRZYKOWSKA, Warszawa, PL JAROSŁAW DASTYCH, Warszawa, PL MARTINUS LOVIK, Oslo, NO (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Rafał Witek WTS RZECZNICY PATENTOWI WITEK, ŚNIEŻKO I PARTNERZY ul. R. Weigla Wrocław Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).

2 2 PZ/0129/EP/RW Opis DZIEDZINA WYNALAZKU [0001] Przedmiotem wynalazku są metody charakterystyki in vitro testowanej substancji w celu ustalenia jej aktywności biologicznej, w szczególności jej potencjalnej toksyczności, a przede wszystkim immunotoksyczności. Przedmiotem wynalazku są także produkty użyte podczas wykonywania takiego testu, a w szczególności zestaw linii komórkowych oraz kwasów nukleinowych przydatnych w ich wytworzeniu. TŁO WYNALAZKU [0002] Każdego roku nowe substancje chemiczne wprowadzane są do otoczenia pracy i do środowiska, które razem z tymi już obecnymi mogą zwiększać ryzyko wystąpienia różnych niekorzystnych dla zdrowia skutków. Dane epidemiologiczne jasno pokazują wzrost częstości występowania zaburzeń immunologicznych, co częściowo może być związane z narażeniem na kontakt z ksenobiotykami, jak na przykład dzieje się w przypadku chorób o podłożu alergicznym, w tym astmy wśród populacji krajów uprzemysłowionych. Układ odpornościowy składa się z bardzo wrażliwej i specyficznej sieci wzajemnych oddziaływań komórkowych i humoralnych, które, kiedy zostaną rozregulowane, powodują ogólne złe funkcjonowanie procesów fizjologicznych. Immunotoksyczność jest rozumiana, jako zdolność danej substancji do pogarszania funkcjonowania układu odpornościowego człowieka lub zwierzęcia. [0003] Badanie immunotoksyczności jest trudnym procesem i raczej jest powszechnie akceptowane, że nie wystarczy przeprowadzić jednego badania, aby przekonać się o poziomie immunotoksyczności danej substancji. Strategie badania immunotoksyczności, które zostały opracowane i przeszły proces walidacji, oparte są na zastosowaniu szeregu testów. Podczas testowania immunotoksyczności często proponuje się dwupoziomowe (ang. two-tier) podejście. Pierwszy poziom wielu badań przesiewowych ma za zadanie wykryć ogólne nieprawidłowości występujące w układzie odpornościowym, jak np. zmiany morfologiczne, podczas gdy drugi poziom badań to bardziej dogłębna ocena funkcji immunologicznych w wyniku kontaktu z daną substancją. Większość opracowanych i zwalidowanych testów immunotoksyczności wymaga użycia zwierząt eksperymentalnych. Testy te polegają na połączeniu badań in vivo, ex vivo oraz in vitro funkcji immunologicznych i często wykorzystują wyizolowane komórki układu odpornościowego, zwykle limfocyty. Trudności związane z testami prognostycznymi do wykrywania immunotoksyczności są częściowo związane z licznymi molekularnymi i komórkowymi tarczami działania immunotoksyn, które należy wziąć pod uwagę. [0004] Zgłoszenie WO99/37142 dotyczy produkcji zwierząt transgenicznych w badaniach dotyczących cukrzycy typu 1. Dokument opisuje sposób produkcji transgenicznych nieludzkich ssaków posiadających transgen kodujący immunologicznie indukowane białko autofluorescencyjne. Wymieniony sposób polega na chromosomalnym wstawieniu do genomu nieludzkiego ssaka pierwszej sekwencji DNA kodującej promotor cytokinowy funkcjonalnie powiązany z drugą sekwencją DNA kodującą wymienione białko autofluorescencyjne, takie jak białko zielonej fluorescencji (ang. Green Fluorescent Protein GFP) lub jego wzmocnione odmiany (ang. enhanced Green Fluorescent Protein EGFP). M.in. komórki somatyczne z trangenicznego ssaka zostały zastrzeżone. [0005] Zgłoszenie WO02/22786 ujawnia linię komórkową stanowiącą ludzką linię komórkową zdolną do produkcji wybranej cytokiny związanej z odpowiedzią zapalną u ludzi i transferowaną wektorem zawierającym DNA kodujące czynnik regulujący cytokiny (ang. Cytokine Regulatory Factor CRF) pod

3 3 PZ/0129/EP/RW kontrolą promotora oraz wektor zawierający DNA kodujące wykrywalne białko markerowe pod kontrolą promotora odpowiadającego na indukcję cytokiny. Ujawniona linia komórkowa może być stosowana w badaniach przesiewowych mających na celu zidentyfikowanie substancji o działaniu przeciwzapalnym, kiedy podczas hodowli w warunkach nadprodukcji CRF w transfekowanych komórkach wybrana cytokina jest indukowana i białko markerowe jest produkowanie w wykrywalnych ilościach, a po dodaniu testowanej substancji do hodowanych komórek obserwuje się zmniejszenie ilości białka markerowego. Ponadto, dsrna jest dodawane do hodowanych komórek w ilości efektywnie stymulującej produkcję cytokiny w komórkach wykazujących nadprodukcję cytokiny, dodawany jest również czynnik inicjujący, taki jak octan mirystynianu forbolu (PMA), jonofory wapnia, maślan sodu, endotoksyna oraz cytokiny. Zgłoszenie WO00/75660 ujawnia metody skriningu badanego czynnika w celu wykrycia zdolności redukcji osteoklastycznej resorpcji kości. W korzystnym przykładzie wykonania metoda obejmuje skrining umożliwiający wykrycie zdolności do hamowania ekspresji czynnika martwicy nowotworu (ang. Tumor Necrosis Factor - TNF) poprzez działanie na odpowiadający na TNF element hamujący w promotorze TNF (TNF-Re) lub poprzez działanie na kompleks utworzony przez receptor estrogenowy na TNF-Re. Dokument ujawnia skrining umożliwiający identyfikację badanego czynnika posiadającego zdolność modulacji osteoklastycznej resorpcji kości obejmujący: (a) kontakt receptora estrogenowego (ER) i genu znajdującego się pod kontrolą modyfikowanego promotora TNF z testowanym czynnikiem i (b) wykrycie poziomu różnicy ekspresji genu w porównaniu z kontrolą. Metoda jest przydatna podczas skriningu czynników, które zmniejszają osteoklastyczną resorpcję kości oraz podczas skriningu mającego zidentyfikować substancje, które modulują ekspresję TNF, co skutkuje zmniejszeniem osteoklastycznej resorpcji kości. [0006] Zgłoszenie WO dostarcza systemów, metod, przesiewaczy, odczynników i zestawów odczynników dla optycznego systemu analizy komórek umożliwiającego ustalenie rozkładu, otoczenia lub aktywności znakowanych fluorescencyjnie cząstek reporterowych w komórce podczas skriningu dużej liczby substancji w celu identyfikacji takich substancji, które wywierają specyficzny wpływ na poszczególne funkcje biologiczne. [0007] Zgłoszenie WO ujawnia metodę uzyskiwania informacji ilościowych dotyczących wpływu na odpowiedź komórkową w nieuszkodzonych mechanicznie oraz permeabilizowanych żywych komórkach, która to metoda obejmuje rejestrowanie zmian w przestrzennie rozproszonym świetle emitowanym przez luminofor, jako zmianę w intensywności światła mierzoną przez urządzenie dedykowane do pomiarów zmian intensywności fluorescencji. Obecny w komórce luminofor jest zdolny do zmiany rozkładu w sposób, który jest związany ze stopniem wpływu i/lub modulacji przez składnik, który jest zdolny do zmiany rozkładu w sposób, który jest związany ze stopniem wpływu. [0008] Podejmowane są próby przeprowadzania testów immunotoksyczności in vitro przy użyciu izolowanych komórek układu odpornościowego. Podczas przeprowadzania takich testów przewiduje się aktywność immunosupresyjną, kiedy odpowiedź proliferacyjna lub funkcje fizjologiczne takie jak aktywność NK (ang. natural killer naturalny zabójca) komórek układu odpornościowego są hamowane, a immunostymulację przewiduje się, kiedy wykrywana jest regulacja w górę tych odpowiedzi. Możliwe działanie immunomodulujące jest szczególnie trudne do oceny in vitro z powodu braku wystarczającej wiedzy dotyczącej molekularnych i komórkowych mechanizmów pośredniczących w wywoływaniu tego efektu.

4 4 PZ/0129/EP/RW Szczególny problem w używaniu testów in vitro wynika z faktu, że zazwyczaj nie biorą one pod uwagę możliwej roli metabolizmu w działaniu ksenobiotyków. [0009] Mianem cytokin określa się zazwyczaj białka wydzielane przez komórki, które wywierają wpływ na zachowanie innych komórek. Są one produkowane przez wiele typów komórek i wywierają wpływ na komórki różnego pochodzenia poprzez specyficzne receptory. Uważa się, że cytokiny są kluczowymi regulatorami, które organizują odpowiedź immunologiczną poprzez połączenie rozproszonych elementów układu odpornościowego w jedną funkcjonalną całość. Cytokiny są zgrupowane w rodziny: hematopoetyny, interferony, chemokiny i rodzinę TNF. Limfocyty T, wśród których obserwuje się różnorodność związaną z pełnieniem różnych funkcji, produkują największą ilość cytokin. [0010] Istnieje coraz więcej dowodów na to, że przynajmniej niektóre typy immunotoksyczności, takie jak te prowadzące do nadwrażliwości i autoimmunizacji związane są z modulacją ekspresji poszczególnych genów cytokinowych w komórkach układu odpornościowego oraz komórkach innego typu. Wydaje się, że efekt ten jest ważny w przypadku immunotoksyczności związanej z metalami ciężkimi i pochodnymi aminokwasów wiązanymi z zespołem eozynofilia-mialgia (USA, 1986). Pokazano, że pochodne aminokwasów, które były domniemanymi czynnikami etiologicznymi wymienionej epidemii, indukują ekspresję silnie immunomodulującej cytokiny, IL-5, w komórkach układu odpornościowego. IL-4, cytokina niezwykle istotna w rozwoju odpowiedzi alergicznej, była wydzielana przez limfocyty i komórki tuczne po kontakcie z metalami ciężkimi, co wskazuje na wysoką korelację pomiędzy działaniem ksenobiotyków in vitro (zwiększenie produkcji IL-4 przez komórki układu odpornościowego) oraz in vivo (zwiększenie produkcji IgE u zwierząt eksperymentalnych). Pewne cytokiny, które wykazują ekspresję przez komórki inne niż komórki układu odpornościowego, są również ważnymi sygnałami modulującymi odpowiedź odpornościową. Na przykład, istnieją doniesienia, że niektóre chemiczne alergeny stymulują keratynocyty do ekspresji pewnych cytokin, takich jak IP-10, MIP-2, IL-1β oraz IL-10. Niektóre typy immunosupresji mogą także obejmować modulację ekspresji cytokin, jak zostało zaobserwowane w przypadku azatiopryny lub cyklosporyny A, które hamują ekspresję IL-2 w limfocytach. [0011] W świetle zaprezentowanego stanu wiedzy, pożądane jest opracowanie nowych metod badania (immuno)toksyczności in vitro, które nie tylko wskazywałyby na zaburzenia układu odpornościowego, ale także pozwalałyby wyjaśnić potencjalny mechanizm immunomodulacji. Takie podejście wykorzystywałoby wiedzę o plejotropowym działaniu cytokin, które regulują różne procesy związane z układem odpornościowym. [0012] Zatem, głównym celem tego wynalazku jest rozwój nowego systemu charakterystyki aktywności biologicznej ksenobiotyków in vitro. Szczególnym celem wynalazku jest umożliwienie wykonywania łatwych i wiarygodnych testów ich toksyczności, a w szczególności immunotoksyczności. OPIS WYNALAZKU [0013] Wynalazek dotyczy reporterowej linii komórkowej wybranej spośród: linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (C/p1-5 3 TNFα-dEGFP/2), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (EL/pI-5 IL2-dEGFP/6), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (EL/p2-5 IL4-dEGFP/2), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (EL/p1-5 IFNγ-dEGFP/3), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod

5 5 PZ/0129/EP/RW numerem dostępu (EL/p2-5 IL10-dEGFP/5), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (J/p4-5 IL1β-dEGFP/4). [0014] Inny aspekt wynalazku odnosi się również do zestawu linii komórkowych rozpoznawalnego, dlatego że zawiera przynajmniej jedną reporterową linię komórkową według wynalazku, jak wspomniano wyżej, oraz przynajmniej jedną linię komórkową będącą pozytywną kontrolą wykazującą konstytutywną ekspresję sekwencji genu reporterowego, gdzie sekwencja genu reporterowego jest funkcjonalnie powiązana z sekwencją regulatorową wykazującą ekspresję konstytutywną, która zawiera przynajmniej jeden element spośród następujących: 3 UTR GAPDH, promotor/enhancer CMV, promotor-aktyna lub ich pochodne. [0015] W szczególnym przykładzie wykonania linia komórkowa będąca pozytywną kontrolą jest transformowana plazmidem składającym się z sekwencji wybranych spośród następujących: SEQ ID NO:36 (p1-3 GAPDH/d1EGFP-N1), SEQ ID NO:37 (p2-3 GAPDH/EGFP-F), SEQ ID NO:38 (p3-3 GAPDH/EGFP-F), SEQ ID NO:38 (p3-3 GAPDH/EGFP-F),SEQ ID NO:39 (pca-egfp-f), SEQ ID NO:40 (pca-d1egfp). [0016] W przykładzie wykonania linią komórkową będącą pozytywną kontrolą jest linia komórkowa zdeponowana w ECACC pod numerem dostępu (C/pCA-EGFP-F/2) lub linia komórkowa zdeponowana w ECACC pod numerem dostępu (EL/pCA-dEGFP/9). [0017] Inny aspekt wynalazku odnosi się również do metody otrzymywania charakterystyki badanej substancji charakteryzującej się tym, że a) testowana substancja wchodzi w kontakt z linią reporterową, jak zdefiniowano powyżej, lub przynajmniej z jedną linią reporterową, jak zdefiniowano powyżej, w połączeniu z linią komórkową będącą pozytywną kontrolą jak zdefiniowano powyżej, b) oznaczana jest zmiana poziomu ekspresji genu reporterowego powodowana przez testowaną substancję, c) zmiana poziomu ekspresji oznaczona w punkcie (b) jest przyjmowana, jako charakterystyka immunotoksyczności badanej substancji. [0018] W szczególnym przykładzie wykonania metoda charakteryzuje sie tym, że etap (a) i (b) są przeprowadzane na wszystkich liniach komórkowych należących do kolekcji, jak zdefiniowano powyżej, i tym, że zmiany poziomu ekspresji jak w punkcie (b) są określane we wszystkich liniach komórkowych i otrzymuje się profil ekspresji charakteryzujący immunotoksyczność substancji jak w punkcie (c) i profil ten jest porównywany z wynikami znanych substancji immunotoksycznych. [0019] Inny aspekt wynalazku odnosi się do użycia linii komórkowej zgodnie z wynalazkiem lub kolekcji linii komórkowych zgodnie z wynalazkiem, jak zdefiniowano powyżej, do badania immunotoksyczności badanej substancji. [0020] Zaprezentowany układ nie wykorzystuje zwierząt eksperymentalnych, lecz zamiast tego jest oparty na zestawie unieśmiertelnionych linii komórkowych reprezentujących różne fenotypy komórek, które regulują odpowiedź immunologiczną in vivo. Ekspresja licznych genów cytokin przez te linie komórkowe została przetestowana w jednolitym układzie o wysokiej przepustowości. W tym celu stworzono wyspecjalizowane reporterowe linie komórkowe, które zostały zastosowane do wykrywania sygnałów, które regulują w górę lub w dół ekspresję cytokin immunomodulujących po kontakcie tych komórek z testowanymi substancjami, np. ksenobiotykami. Reporterowe linie komórkowe zostały stworzone poprzez modyfikację genetyczną linii

6 6 PZ/0129/EP/RW komórkowych in vitro. Wszystkie otrzymane klony komórkowe zostały scharakteryzowane i przetestowane przy użyciu zestawu modelowych immunotoksyn, które wykazują działania niepożądane in vivo. Cały panel reporterowych linii komórkowych został wstępnie zwalidowany, jako narzędzie do testowania immunotoksyczności przy użyciu danych uzyskanych przy użyciu ugruntowanych testów jako testów referencyjnych. [0021] Głównym osiągnięciem wynalazku jest stworzenie nowego narzędzia pozwalającego na wykrywanie możliwej (immuno)toksyczności związanej z ksenobiotykami poprzez przeprowadzenie testu in vitro. Narzędzie to składa się z szeregu reporterowych linii komórkowych, które regulują ekspresję transgenu kodującego białko fluorescencyjne w taki sam sposób, w jaki regulują ekspresję cytokin. Ekspresja białka fluorescencyjnego pozwala na szybkie (prawie w czasie rzeczywistym) wykrycie międzykomórkowych sygnałów prowadzących do zmian w ekspresji genów cytokinowych w wyniku kontaktu komórki z testowaną substancją. [0022] W preferencyjnym sposobie wykonania wynalazku pojedyncze badanie, w którym wykorzystuje się chip komórkowy, pozwala na wykrycie możliwych oddziaływań testowanych ksenobiotyków z różnymi tkankowo specyficznymi tarczami molekularnymi, takimi jak cząsteczki przekazywania sygnału i czynniki transkrypcyjne oraz pozwala stworzyć charakterystyczny dla danego związku wzór odpowiedzi. [0023] Przeprowadzono wstępną walidację nowego systemu testowania względem danych opartych na istniejących testach. [0024] W szczególności obejmuje to standaryzację chipu komórkowego względem kilku modelowych ksenobiotyków (substancji znanych ze swojej aktywności immunotoksycznej in vivo). [0025] Ta informacja pozwala wyciągnąć wniosek, że opracowanie wyspecjalizowanych genetycznie zmodyfikowanych linii komórkowych dostarcza użytecznego biologicznego markera dla badania immunotoksyczności oraz, że ta technologia może zostać rozszerzona na inne obszary alternatywnego testowania toksyczności. [0026] Sposób według niniejszego wynalazku może również znaleźć zastosowanie, jako łatwa metoda charakterystyki substancji chemicznych, np. na etapie skriningu biblioteki nowych substancji chemicznych lub podczas poszukiwania nowych leków. DOKŁADNY OPIS RYCIN [0027] Ryciny 1-19 przedstawiają schemat plazmidów otrzymanych zgodnie z procedurą opisaną w Przykładzie 1. Sekwencje tych plazmidów ujawniono w Spisie sekwencji. Ryciny 20 i 21 przedstawiają wyniki testów żywotności komórek według Przykładu 7. Ryciny przedstawiają wyniki wstępnych testów reporterowych linii komórkowych, co zostało opisane w Przykładzie 7. Ryciny przedstawiają wyniki badań działania pewnych substancji przy użyciu prototypu chipu komórkowego. DOKŁADNY OPIS WYNALAZKU [0028] Aby otrzymać reporterowe linie komórkowe o pożądanym fenotypie unieśmiertelnione, ssacze linie komórkowe wyprowadzone z komórek układu odpornościowego różnego pochodzenia oraz kilka typów

7 7 PZ/0129/EP/RW komórek nie związanych z układem odpornościowym transfekowano genami reporterowymi kodującymi białko fluorescencyjne. Geny reporterowe składają się z sekwencji kodujących białko fluorescencyjne i sekwencji regulatorowych kontrolujących ekspresję cytokin. W celu stworzenia reporterowych linii komórkowych zastosowano różne podejścia eksperymentalne. W Przykładzie 1 oraz w Przykładzie 2 ujawniono podejścia eksperymentalne z zastosowaniem systemu stabilnej transfekcji, podczas której geny reporterowe zostały w sposób przypadkowy wbudowane do chromosomu. Ewentualne wady wykryte w reporterowych liniach komórkowych otrzymanych przy zastosowaniu takiego protokołu eksperymentalnego zostaną później poprawione poprzez modyfikację oryginalnych wektorów ekspresyjnych oraz stworzenie kolejnego zestawu transfektantów według Przykładu 3 i Przykładu 4. W celu odtworzenia skomplikowanych mechanizmów regulatorowych kontrolujących ekspresję genów cytokin w danych liniach komórek układu odpornościowego zastosowano metody targetowania genowego według Przykładu 5 i Przykładu 6. Scharakteryzowano fenotyp reporterowych linii komórkowych otrzymanych z zastosowaniem wymienionych modyfikacji genetycznych oraz przebadano otrzymane reporterowe linie komórkowe przy użyciu wybranych ksenobiotyków według Przykładu 7. Następnie, zestaw wybranych linii komórkowych, fluorescencyjny chip komórkowy, został zgrupowany i przetestowany. Chip komórkowy przeszedł proces testowania i wstępnej walidacji według Przykładu 8. Wzory sygnałów wykrywających modulację ekspresji cytokin otrzymane przy użyciu fluorescencyjnego chipu komórkowego podczas testów z wybranym ksenobiotykiem zostały następnie porównane z wynikami otrzymanymi przy użyciu dostępnych testów oraz z dostępnymi danymi klinicznymi. [0029] Główny aspekt wynalazku dotyczy przygotowania układu do badania immunotoksyczności in vitro. Wymaga to przygotowania linii komórkowych, w których sygnały regulujące ekspresję wybranych cytokin, będą wywoływać wzrost danej fluorescencji. Zestaw genów cytokinowych i linii komórkowych zaprezentowany w Tabeli I został wykorzystany, jako wyjściowy przy opracowaniu chipu komórkowego. Tabela I Gen cytokinowy Linie komórkowe transfekowane plazmidem Gen reporterowym reporterowy IL-2 Białaczka T-komórkowa (EL-4) EGFP/dEGFP Grasiczak (BW5147.3) EGFP/dEGFP IFN-γ Białaczka T-komórkowa (EL-4) EGFP/dEGFP Grasiczak (BW5147.3) EGFP/dEGFP IL-4 Białaczka T-komórkowa (EL-4) EGFP/dEGFP Komórki tuczne (C57.1) EGFP/dEGFP TNF-α Makrofagi-monocyty (J774A.1) EGFP/dEGFP Fibroblasty (3T3 L1) EGFP/dEGFP Komórki tuczne (MC/9, C57.1) degfp IL-1β Makrofagi-monocyty (J774A.1) degfp Keratynocyty (HEL-30) degfp Fibroblasty (3T3 L1) degfp Kontrola (promotor Komórki tuczne (C57.1) degfp

8 CMV promotor β- aktyna) 8 Fibroblasty (3T3 L1) Keratynocyty (HEL-30) Białaczka T-komórkowa (EL-4) Grasiczak (BW5147.3) Makrofagi-monocyty (J774A.1) EGFP/dEGFP degfp EGFP/dEGFP EGFP EGFP/dEGFP [0030] Do testowania i wstępnej walidacji prototypu chipu komórkowego użyto związków z listy związków chemicznych posiadających dowiedzione właściwości immunotoksyczne oraz, w niektórych przypadkach, z częściowo rozumianym mechanizmem działania. Listę tych związków przedstawiono w Tabeli II. Tabela II Substancja Typ aktywności Możliwe działanie na ekspresję genów cytokinowych Cyklosporyna Supresja Hamowanie produkcji cytokin Dioksyna Supresja Zmiany w produkcji cytokin (hamowanie i/lub aktywacja) Pentamidyna Supresja Hamowanie ekspresji cytokin Rapamycyna Supresja Zmiany w transkrypcyjnym mechanizmie regulującym produkcję cytokin Talidomid Supresja Zmiany w transkrypcyjnym mechanizmie regulującym produkcję cytokin TBTO, Tlenek Supresja Możliwe hamowanie produkcji bis(tributylocyny) cytokin Alergeny roztoczy kurzu Antygen Nieznane domowego Benzokaina Alergen Nieznane Penicylina Alergen Nieznane TDI, 2,4-diizocyjanianotoluen Alergen Indukcja ekspresji cytokin typu Th2 MDI, 4,4'-diizocyjanian Alergen Nieznane difenylometanu DNCB, dinitrochlorobenzen Alergen kontaktowy Indukcja ekspresji cytokin 4,4'-diizocyjanian Alergen kontaktowy Nieznane dicykloheksylometanu HCB, heksachlorobenzen Immunostymulacja, indukcja Aktywacja ekspresji cytokin reakcji autoimmunologicznej, immunomodulacja

9 9 PZ/0129/EP/RW HgCl 2 Indukcja reakcji Indukcja ekspresji cytokin typu autoimmunologicznej, Th2 immunomodulacja Sól platyny (tetrachloroplatynian) Immunostymulacja, alergen Nieznane oddechowy SDS Środek drażniący Nieznane [0031] Zgodnie z jednym sposobem wykonania według niniejszego wynalazku otrzymano oraz wybrano unikalne linie komórkowe, które mogą zostać użyte przy stosowaniu sposobu według wynalazku lub mogą być przykładem kolekcji linii komórkowych zgodnie z wynalazkiem. Linie komórkowe według niniejszego wynalazku zostały zdeponowane w ECACC (Europejska Kolekcja Kultur Komórkowych). Zostały one zaprezentowane w Tabeli III. Tabela III Nazwa Tymczasowy nr Macierzysta linia Transfekowany przy dostępu nadany przez komórkowa użyciu ECACC C/pCA-EGFP-F/ C57.1 pca-egfp-f C/p1-5 3 TNFαdEGFP/ C57.1 p1-5 3 TNFα/d1EGFP- N1 EL/pCA-dEGFP/ EL4 pca-d1egfp EL/p1-5 IL2-dEGFP/ EL4 p1-5 IL2/d2EGFP-1 EL/p2-5 IL4-dEGFP/ EL4 p2-5 IL4/d1EGFP-N1 EL/p1-5 IFNγ-dEGFP/ EL4 p1-5 IFNγ/d2EGFP-1 EL/p2-5 IL10-dEGFP/ EL4 p2-5 IL10/d2EGFP-1 /p4-5 IL1β-dEGFP/ J774A.1 p4-5 IL1β/d1EGFP-N1 Każda z wymienionych linii komórkowych została wybrana spośród kolekcji linii komórkowych otrzymanych na podstawie korzystnej charakterystyki podsumowanej poniżej. Ta charakterystyka została określona zgodnie ze szczegółowym opisem zawartym w każdym przykładzie. C/pCA-EGFP-F/2 jest kontrolną linią komórkową. Fluorescencja EGFP tej linii komórkowej została sprawdzona przy użyciu urządzenia FACS oraz mikroskopu fluorescencyjnego. Linia ta wykazuje stabilną ekspresję EGFP. EL/pCA-dEGFP/9 jest kontrolną linią komórkową. Fluorescencja EGFP tej linii komórkowej została sprawdzona przy użyciu urządzenia FACS oraz mikroskopu fluorescencyjnego. Linia ta wykazuje stabilną ekspresję EGFP. C/p1-5 3 TNFα-dEGFP/2 jest linią komórkową, w której ekspresja EGFP jest powiązana z ekspresją TNF-α. Fluorescencja EGFP jest stymulowana przez PMA/jonomycynę oraz antygen/ige. Ta linia komórkowa

10 10 PZ/0129/EP/RW wykazywała słabe hamowanie fluorescencji EGFP w obecności substancji immunosupresyjnych. A zatem wykrywa hamujące działanie związków chemicznych, które może skutkować immunosupresją. EL/p1-5 IL2-dEGFP/6 jest linią komórkową, w której ekspresja EGFP jest powiązana z ekspresją IL-2. Fluorescencja EGFP jest stymulowana przez PMA/jonomycynę. Ta linia komórkowa wykazywała hamowanie fluorescencji EGFP w obecności substancji immunosupresyjnych. A zatem wykrywa hamujące działanie związków chemicznych, które może skutkować immunosupresją. EL/p1-5 IFNγ-dEGFP/3 jest linią komórkową, w której ekspresja EGFP jest powiązana z ekspresją IFN-γ. Fluorescencja EGFP jest stymulowana przez PMA/jonomycynę. Ta linia komórkowa wykazywała hamowanie fluorescencji EGFP w obecności substancji immunosupresyjnych. A zatem wykrywa hamujące działanie związków chemicznych, które może skutkować immunosupresją. Ta linia komórkowa wykazywała zwiększoną fluorescencję EGFP w obecności możliwych immunomodulatorów. A zatem wykrywa aktywujące działanie związków chemicznych, które może skutkować immunomodulacją. EL/p2-5 IL4-dEGFP/2 jest linią komórkową, w której ekspresja EGFP jest powiązana z ekspresją IL-4. Fluorescencja EGFP jest stymulowana przez PMA/jonomycynę. EL/p2-5 IL10-dEGFP/5 jest linią komórkową, w której ekspresja EGFP jest powiązana z ekspresją IL-10. Fluorescencja EGFP jest stymulowana przez PMA/jonomycynę. J/p4-5 IL1β-dEGFP/4 jest linią komórkową, w której ekspresja EGFP jest powiązana z ekspresją IL-1. Fluorescencja EGFP jest stymulowana przez LPS. Ta linia komórkowa wykazywała zwiększoną fluorescencję EGFP w obecności substancji immunostymulujących. A zatem wykrywa takie działanie związków chemicznych, które może skutkować immunomodulacją. [0032] W celu przedstawienia sensu wynalazku opis wynalazku został rozszerzony o Przykłady 1-8. Jednakże naszym celem nie jest przedstawienie zastrzeżeń ograniczonych do sposobów wykonania opisanych w Przykładach, ponieważ, opierając się na zaprezentowanym sensie wynalazku oraz dostępnej wiedzy, eksperci będą potrafili opracować inne warianty mieszczące się w zakresie określonych zastrzeżeń. Przykład 1. Konstrukcja wektorów ekspresyjnych dla stabilnej transfekcji [0033] Stworzenie konstruktów DNA, w których ekspresja reporterowego białka fluorescencyjnego zależy od sekwencji regulatorowych pochodzących z różnych genów cytokinowych. Te wektory ekspresyjne są narzędziami niezbędnymi do przeprowadzenia modyfikacji genetycznej linii komórkowych i zostaną zastosowane w Przykładzie 2. Metodyka i materiały do badań [0034] Zebrano sekwencje zawierające elementy regulatorowe regionów promotora powyżej końca 5 genów cytokin: IL-2, IFN-γ, IL-4, IL-1α oraz TNF-α. DNA uzyskano z trzech źródeł: klony dostępne w domenie publicznej, amplifikacja PCR pożądanych fragmentów genów z genomowego DNA, a następnie klonowanie produktu PCR, chemiczna synteza oligonukleotydów. Dostępne komercyjnie plazmidy zawierające gen GFP zostały zastosowane, jako szkielet konstruktu. Sekwencje promotorowe zostały wklonowane bezpośrednio powyżej miejsca inicjacji transkrypcji GFP za pomocą standartowych technik klonowania kierunkowego; kiedy było to niezbędne, zastosowano syntetyczne adaptery oligonukleotydowe. Wybrano pozytywne klony oraz zweryfikowano sekwencję DNA plazmidów przy pomocy automatycznego sekwencjonowania DNA.

11 11 PZ/0129/EP/RW [0035] Następnie, wybrano sekwencje regulatorowe w regionie 3 UTR tego samego wybranego genu cytokinowego. Plazmidy z pierwszej serii konstruktów GFP zastosowano, aby otrzymać drugą serię konstruktów. Sekwencje 3 UTR zawierające sygnał poli-a oraz sygnały stabilizujące mrna zawarte w oryginalnym plazmidzie GFP zostały zastąpione przez DNA kodujące sekwencje 3 UTR genu cytokinowego, które zostało wstawione bezpośrednio za kodonem stop GFP. Kiedy było to niezbędne, zastosowano syntetyczne adaptery oligonukleotydowe. Wybrano pozytywne klony oraz zweryfikowano sekwencję DNA plazmidów przy pomocy automatycznego sekwencjonowania DNA. W rezultacie otrzymano konstrukty przynajmniej 5 wektorów ekspresyjnych zawierających tylko sekwencje promotorowe oraz przynajmniej 5 wektorów ekspresyjnych zawierających zarówno promotor, jak i sekwencje w rejonie 3 UTR pochodzące z genów cytokinowych. Zestaw sekwencji regulatorowych 5 w górę od promotora [0036] Sekwencje zawierające elementy regulatorowe regionów promotorowych 5 w górę od promotora IL-4 wklonowane do plazmidu pcat otrzymano w prezencie od Dr Melissy Brown (Uniwersytet Atlanty, Atlanta, USA). Sekwencje promotorowe dla IL-2, IFN-γ, IL-1β oraz TNF-α otrzymano podczas klonowania opartego o metodę PCR przy użyciu mysiego genomowego DNA wyizolowanego z Balb/c jako matrycy. [0037] Do klonowania sekwencji pochodnych IL-2 oraz IFN-γ przygotowano DNA genomowe z końca ogona myszy Balb/c. To DNA posłużyło, jako matryca do amplifikacji PCR. Startery PCR zostały zaprojektowane na podstawie sekwencji genomowych mysiej IL-2 (X52618) i IFN-γ (M28381), dostępnych w bazie GenBank. Startery zostały zaprojektowane w ten sposób, aby obejmować region w górę od promotora, w przypadku IL- 2 od pozycji do +25, a w przypadku IFN-γ od pozycji do +34, względem miejsca startu transkrypcji oznaczanego +1. Założono, że należy zawrzeć duży region powyżej promotora, aby sekwencja zawierała wiele przypuszczalnych elementów regulatorowych. Startery (TAG Copenhagen) zostały następnie użyte do amplifikacji PCR przy użyciu zestawu PCR core kit (Roche Biochemicals). Produkty PCR odpowiedniej wielkości zostały wycięte z żelu agarozowego, oczyszczone przy użyciu zestawu do ekstrakcji DNA z żelu QiaQuick (Qiagen), następnie sprawdzono ich integralność na żelu agarozowym i dokonano ligacji z wektorem do klonowania PCR pgem-t Easy (Promega). Otrzymanym po ligacji plazmidem transformowano komórki E. coli JM109, a następnie wyselekcjonowano komórki zawierające insert przy użyciu ampicyliny. Wyekstrahowano plazmidowe DNA z wielu klonów przy użyciu zestawu QiaSpin miniprep kit (Qiagen). Następnie sprawdzono obecność oraz orientację produktu PCR w plazmidach stosując trawienie restrykcyjne z użyciem kilku enzymów restrykcyjnych. Na koniec potwierdzono obecność oraz orientację regionów regulatorowych 5 powyżej IL-2 i IFN-γ stosując automatyczne sekwencjonowanie (ABI 377 DNA sequenator) z obu końców przy użyciu starterów, które hybrydyzują z wektorem. [0038] Podjęto decyzję, aby zamiast promotora IL-1α sklonować promotor IL-1β. Przyczyną zmiany pierwotnego założenia był fakt, że cała sekwencja DNA mysiego promotora IL-1β była dostępna w genetycznych bazach danych, w przeciwieństwie do sekwencji promotora IL-1α. Chociaż być może istnieją różnice w regulacji transkrypcyjnej genów IL-1 alfa oraz IL-1 beta, ale mimo to działają one przez ten sam receptor na powierzchni komórki i mają podobne funkcje. [0039] Do klonowania sekwencji pochodnych TNF-α oraz IL-1β przygotowano DNA genomowe z wątroby myszy Balb/c. To DNA posłużyło, jako matryca do amplifikacji PCR. Startery PCR zostały zaprojektowane na

12 12 PZ/0129/EP/RW podstawie dostępnych w bazach danych sekwencji genomowych mysiego TNF-α (U066950) i IL-1β (X04964). Fragment mysiego promotora IL-1β (-500/+11) o długości 511 pz został zamplifikowany metodą PCR przy użyciu polimerazy Taq (MBI Fermentas). Produkt PCR został wklonowany do wektora klonującego ptadvance (Clontech). Fragment promotora IL-1β (-4093/+11) o długości 4093 pz został zamplifikowany metodą PCR przy użyciu termostabilnej polimerazy o wysokiej wierności AccuTaq LA (Sigma). Produkt PCR został zligowany z wektorem klonującym do tępych końców pcr-bluntii-topo (Invitrogen). Mieszaninę po ligacji zastosowano do transformacji komórek E.coli JM109, a następnie wyselekcjonowano komórki posiadające insert przy użyciu kanamycyny. Obecność promotora IL-1β w klonach bakteryjnych została sprawdzona przy użyciu metody PCR. Wyekstrahowano plazmidowe DNA z wielu klonów przy użyciu zestawu Plasmid Miniprep Plus kit (A&A Biotechnology) i sprawdzono obecność oraz orientację insertu zawierającego promotor IL1-β stosując trawienie restrykcyjne z użyciem kilku enzymów restrykcyjnych. Na koniec potwierdzono sekwencję oraz orientację regionów regulatorowych 5 powyżej IL-1β stosując automatyczne sekwencjonowanie (ABI 377 DNA sequenator) z obu końców przy użyciu starterów, które hybrydyzują z wektorem. Fragment mysiego promotora TNF-α (-2012/+263) o długości 2276 pz otrzymano stosując podobny protokół eksperymentalny. W skrócie, przeprowadzono reakcję PCR z zastosowaniem polimerazy AccuTaq LA i wklonowano produkt PCR do wektora pcr-bluntii-topo. Po przeprowadzeniu transformacji bakterii sprawdzono obecność i orientację regionów promotorowych TNF- α w klonach bakteryjnych stosując metodę PCR i analizę restrykcyjną. Na koniec potwierdzono sekwencję oraz orientację promotora TNF-α stosując automatyczne sekwencjonowanie. Tworzenie pierwszej serii konstruktów reporterowych [0040] Pierwsza seria konstruktów reporterowych składa się z szeregu plazmidów, w których ekspresja genów reporterowych jest napędzana przez sekwencje promotorowe cytokin: IL-4, IL-2, IFN-γ, IL-1β i TNF-α. Wszystkie konstrukty reporterowe oparte są na plazmidzie pegfp-1 (Clontech) zawierającym białko wzmocnionej zielonej fluorescencji (EGFP), jako gen reporterowy lub na plazmidzie pd1egfp-n1 (Clontech) zawierającym zdestabilizowane białko wzmocnionej zielonej fluorescencji (d1egfp) jako gen reporterowy. [0041] Aby otrzymać konstrukt reporterowy GFP pod kontrolą promotora IL-4 fragment DNA o długości 120 pz zawierający minimalną sekwencję promotorową IL-4 został wycięty z plazmidu -87 IL-4 pcat przy użyciu enzymów restrykcyjnych HindII i XbaI. To DNA zostało następnie zligowane z plazmidem ptadvance (Clontech). Na następnym etapie, promotor IL-4 został wycięty z plazmidu ptadvance przy użyciu HindIII i ApaI, oczyszczony w trakcie elektroforezy na żelu agarozowym i zligowany z plazmidem pegfp-1 przeciętym tymi samymi enzymami. Wyizolowano plazmidowe DNA z klonów bakteryjnych opornych na kanamycynę i potwierdzono integralność konstruktów reporterowych stosując trawienie restrykcyjne z użyciem enzymów ApaI / HindIII oraz HincII / HindIII oraz poprzez sekwencjonowanie. Otrzymany plazmid został nazwany p1-5 IL4/EGFP-1. [0042] Aby otrzymać konstrukty reporterowe GFP pod kontrolą promotorów IL-2 i IFN-γ sklonowane metodą PCR regiony regulatorowe 5 IL-2 i IFN-γ zostały wycięte z plazmidów pgem-t Easy zawierających inserty w odwrotnej orientacji przy użyciu enzymów restrykcyjnych ApaI i PstI. Otrzymane fragmenty DNA zostały oczyszczone przy użyciu elektroforezy na żelu agarozowym oraz zestawu do ekstrakcji z żelu QiaQuick (Qiagen), ich integralność została sprawdzona na żelu agarozowym, a następnie te fragmenty DNA zostały

13 13 PZ/0129/EP/RW zligowane z wektorem pegfp-1 przeciętym enzymami restrykcyjnymi ApaI i PstI w obrębie polilinkera tuż powyżej genu kodującego EGFP. Przeprowadzono transformację bakterii, wybrano kolonie i wyizolowano plazmidy oraz sprawdzono, czy te plazmidy zawierają inserty promotorów IL-2 i IFN-γ stosując trawienie restrykcyjne z użyciem kilku enzymów restrykcyjnych. Integralność konstruktów reporterowych potwierdzono stosując automatyczne sekwencjonowanie (ABI 377 DNA sequenator) z obu końców przy użyciu starterów, które hybrydyzują z wektorem. Otrzymane plazmidy nazwano p1-5 IL2/EGFP-1 oraz p1-5 INFγ/EGFP-1. [0043] Aby otrzymać konstrukt reporterowy GFP pod kontrolą promotora IL-1β, zastosowano fragment regionów regulatorowych 5 mysiej IL-1β o długości 511 pz wycięty z plazmidu ptadvance przy użyciu enzymów restrykcyjnych AseI i EcoRV (NEB), którym zastąpiono promotor CMV w plazmidzie pd1egfp-n1. Promotor CMV usunięto przy użyciu enzymów restrykcyjnych AseI i Eco47III (NEB, MBI Fermentas). Obecność regionów regulatorowych 5 IL-1β potwierdzono metodą PCR oraz trawieniem restrykcyjnym enzymem BamHI (NEB). Integralność konstruktu reporterowego, który został nazwany p1-5 ILβ/d1EGFP-N1, potwierdzono stosując automatyczne sekwencjonowanie (ABI 377 DNA sequenator) przy użyciu starterów hybrydyzujących z wektorem. Następnie, fragment regionów regulatorowych 5 IL-1β o długości 4104 pz wycięto z wektora pcr-blunt II-TOPO przy użyciu enzymów restrykcyjnych EcoRV i KpnI (NEB). Wektor pd1egfp-n1 zmodyfikowano poprzez usunięcie promotora CMV stosując enzymy restrykcyjne AseI i NheI (NEB), następnie wytworzono tępe końce poprzez działanie nukleazą fasoli mung (NEB) i zligowano wektor. Promotor EcoRV/KpnI IL-1β został zligowany ze zmodyfikowanym plazmidem pd1egfp-n1 przeciętym enzymami restrykcyjnymi SmaI i KpnI. Obecność promotora IL-1β potwierdzono metodą PCR oraz restrykcją z zastosowaniem enzymu Eco88I (MBI Fermentas). Integralność otrzymanego plazmidu, nazwanego p3-5 IL1β/d1EGFP-N1 potwierdzono poprzez sekwencjonowanie. [0044] Aby otrzymać konstrukt reporterowy GFP pod kontrolą promotora TNF-α, zastosowano fragment regionów regulatorowych 5 o długości 2526 pz wycięty z plazmidu pcr-bluntii-topo przy użyciu enzymów restrykcyjnych AseI i EcoRV (NEB). Promotor CMV został usunięty z plazmidu pd1egfp-n1 poprzez trawienie enzymami Ecl136II/VspI (MBI Fermentas). Zarówno insert o długości 2526 pz, jak i powstały wektor bez promotora o długości 4251 pz oczyszczono podczas elektroforezy na żelu agarozowym i zligowano przy pomocy ligazy T4 (Gibco BRL). Po skriningu klonów bakteryjnych, mającym na celu identyfikację odpowiedniego produktu ligacji, plazmid o długości 6777 pz, nazwany p1-5 TNFα/d1EGFP-N1, został zidentyfikowany i oczyszczony. Sekwencja plazmidu została zweryfikowana przy pomocy automatycznego sekwencjonowania. Plazmid ten zawiera cały region promotorowy TNF-α, za nim znajduje się fragment otwartej ramki odczytu TNF-α o długości 107 pz oraz przypadkowo wygenerowany linker o długości 80 pz na początku otwartej ramki odczytu d1egfp. [0045] Aby otrzymać konstrukt reporterowy EGFP pod kontrolą promotora aktyny wycięto promotor CAG zawierający enhancer CMV oraz kurzy promotor beta-aktyny przy użyciu enzymów restrykcyjnych AseI i Eco47III z dostępnego komercyjnie plazmidu pqe-trisystem (Qiagen) i zligowano z plazmidem pegfp-f (Clontech) w miejscu promotora CMV (wycięty przy użyciu enzymów restrykcyjnych AseI i Eco47III), powyżej sekwencji kodującej EGFP. Sekwencję powstałego konstruktu, pca-egfp-f, potwierdzono stosując analizę restrykcyjną. Zestaw sekwencji regulatorowych 3 w dół od promotora

14 14 PZ/0129/EP/RW [0046] Do klonowania sekwencji regulatorowych 3 UTR w dół od promotora pochodzących z IL-4, IL-2, IFN-γ, IL-1β i TNF-α odpowiadające sekwencje zostały zamplifikowane metodą PCR z DNA genomowego otrzymanego z końca ogona (IL-2 i IFN-γ) lub z wątroby (IL-4, IL-1β i TNF-α) myszy Balb/c. [0047] Aby sklonować sekwencję 3 UTR IL-4 zaprojektowano startery oparte na sekwencji genomowej IL-4 (X05253), w ten sposób, aby obejmowały one cały 3 UTR IL-4, także sygnał poliadenylacji. Przy użyciu tych starterów zamplifikowano metodą PCR fragment DNA a długości 154 pz i wklonowano do wektora ptadvance (Clontech). Sekwencję sklonowanego 3 UTR IL-4 zweryfikowano za pomocą automatycznego sekwencjonowania. [0048] Aby otrzymać elementy regulatorowe obecne w 3 UTR IL-2 i IFN-γ zaprojektowano startery PCR tak, aby obejmowały regiony 3 UTR, łącznie z kodonem stop i sygnałem poliadenylacji. Startery zostały zaprojektowane w oparciu o dostępne w bazach danych sekwencje mrna IL-2 (X01772) i IFN-γ (K00083). Startery antysensowne zaprojektowano w taki sposób, aby zawierały one miejsca restrykcyjne dla AfIII. Fragment 3 UTR IL-2 o długości 357 pz oraz fragment 3 UTR IFN-γ o długości 645 pz zamplifikowane metodą PCR z genomowego DNA wklonowano niekierunkowo do wektora pgem-t Easy (Promega). Tożsamość oraz orientację insertów potwierdzono następnie stosując trawienie restrykcyjne z użyciem kilku enzymów restrykcyjnych. [0049] Aby sklonować 3 UTR IL-1β zaprojektowano startery oparte na genomowej sekwencji IL-1β (X04964) w taki sposób, aby zawierały one cały 3 UTR IL-1β, łącznie z sygnałem poliadenylacji. Przy użyciu tych starterów zamplifikowano metodą PCR fragment DNA o długości 455 pz i wklonowano do wektora ptadvance (Clontech). Sekwencję sklonowanego 3 UTR IL-1β zweryfikowano za pomocą automatycznego sekwencjonowania. [0050] Aby otrzymać elementy regulatorowe obecne w 3 UTR TNF-α zaprojektowano startery oparte na sekwencji genomowej TNF-α (U06950) w taki sposób, aby obejmowały one cały 3 UTR TNF-α, łącznie z sygnałem poliadenylacji. Przy użyciu tych starterów fragment DNA od długości 994 pz zamplifikowany metodą PCR został wklonowany do wektora ptadvance. Sekwencję sklonowanego 3 UTR TNF-α zweryfikowano za pomocą automatycznego sekwencjonowania. [0051] Aby otrzymać elementy regulatorowe obecne w 3 UTR GAPDH zaprojektowano startery oparte na sekwencji genomowej GAPDH (U06950) w taki sposób, aby obejmowały one cały 3 UTR GAPDH, łącznie z sygnałem poliadenylacji. Przy użyciu tych starterów fragment DNA od długości 184 pz zamplifikowany metodą PCR został wklonowany do wektora ptadvance. Sekwencję sklonowanego 3 UTR GAPDH zweryfikowano za pomocą automatycznego sekwencjonowania. Tworzenie drugiej serii konstruktów reporterowych [0052] Druga seria konstruktów reporterowych składa się z wielu plazmidów, w których ekspresja genu reporterowego regulowana jest sekwencjami promotora oraz 3 UTR cytokin: IL-4, IL-2, IFN-γ, IL-1β i TNF-α. Konstrukty reporterowe oparte są na plazmidach pegfp-1 i pegfp-f oraz pd1egfp-n1 i pd2egfp-1 (Clontech) zawierających odpowiednio białko wzmocnionej zielonej fluorescencji (EGFP) oraz destabilizowane białko wzmocnionej zielonej fluorescencji (degfp) jako gen reporterowy. [0053] Aby otrzymać wektor ekspresyjny EGFP, w którym sekwencje regulatorowe 3 genu IL-4 kontrolują stabilność transkryptu EGFP, wektor ptadvance zawierający cały 3 UTR IL-4 został strawiony enzymem

15 15 PZ/0129/EP/RW EcoRI (NEB) i otrzymany fragment został wligowany za kodonem stop EGFP do wektora pegfp-f przy użyciu miejsca EcoRI. Obecność 3 UTR IL-4 potwierdzono stosując cięcie enzymem EcoRI oraz metodę PCR. Odpowiednią orientację 3 UTR IL-4 potwierdzono stosując cięcie enzymami ScaI i BsmI (NEB). W końcu, sekwencja została potwierdzona za pomocą automatycznego sekwencjonowania. Skonstruowany wektor, nazwany p2-3 IL4/EGFP-F, zawiera pochodzące od SV40 sekwencje 3 UTR, łącznie z miejscami poliadenylacji. Eksperymenty Northern blot pokazały, że te miejsca poliadenylacji były wykorzystywane podczas procesu transkrypcyjnego. Zatem, na następnym etapie wektor p2-3 IL4/EGFP-F został zmodyfikowany poprzez usunięcie interferujących sygnałów poliadenylacji SV40. Plazmid został strawiony BsmI (NEB) i nukleazą Bal-31, ponownie zligowany, a następnie użyty do transformacji komórek E.coli. Po izolacji plazmidu brak sekwencji zawierających sygnały poliadenylacji SV40 w zmodyfikowanym plazmidzie, nazwanym p3-3 IL4/EGFP-F, potwierdzono poprzez trawienie BsmI i sekwencjonowanie. Następnie wycięto 3 UTR IL-4 z plazmidu ptadvance stosując enzym EagI (NEB) i wligowano do miejsca NotI (NEB) poniżej kodonu stop EGFP w wektorze pd1egfp-n1. Obecność insertu potwierdzono metodą PCR oraz trawieniem enzymem EagI, a orientacja została sprawdzona poprzez trawienie enzymem PstI (MBI Fermentas). Sekwencja otrzymanego plazmidu, nazwanego p1-3 IL4/d1EGFP-N1, została potwierdzona poprzez sekwencjonowanie. Aby otrzymać wektor ekspresyjny EGFP, w którym zarówno sekwencje 5 jak i 3 regulatorowe genu IL-4 kontrolują ekspresję genu reporterowego, wektor p1-5 IL4/d1EGFP-N1 zawierający promotor IL-4 i otwartą ramkę odczytu d1egfp oraz wektor p1-3 IL4/d1EGFP-N1 zawierający otwartą ramkę odczytu d1egfp i 3 UTR IL-4 zostały strawione enzymami AgeI (MBI Fermentas) oraz HincII (NEB). Fragment DNA zawierający otwartą ramkę odczytu d1egfp i 3 UTR IL-4 otrzymany podczas trawienia p1-3 IL4/d1EGFP-N1 został następnie zligowany z fragmentem DNA zawierającym sekwencję wektora i promotor IL-4 pochodzący z p1-5 IL4/d1EGFP-N1. Mapa restrykcyjna nowego konstruktu, nazwanego p1-5 3 IL4/EGFP-N1, została zweryfikowana trawieniem enzymem Eco52I (MBI Fermentas), a następnie podczas sekwencjonowania. [0054] Aby otrzymać wektory ekspresyjne EGFP, w których sekwencje regulatorowe zarówno 5, jak i 3 genów IL-2 i IFN-γ kontrolują ekspresję genu reporterowego, zastosowano następującą strategię. Na początku, odpowiednie sekwencje 3 UTR wklonowano do wektora pd2egfp-1. W tym celu sygnały poliadenylacji pochodzące od SV40 obecne w wektorze pd2egfp-1 zostały usunięte przy użyciu enzymów restrykcyjnych NotI i AfIII. Sekwencje 3 UTR zostały następnie wycięte z wektora klonującego produkty PCR pgem-t Easy przy użyciu enzymów restrykcyjnych NotI i AfIII i fragmenty zawierające sekwencje 3 UTR zostały zligowane z wektorem pd2egfp-1 przeciętym enzymami NotI i AfIII. W następnym kroku regiony promotorowe IL-2 i IFN-γ zostały wycięte, odpowiednio z plazmidów p1-5 IL2/EGFP-1 oraz p1-5 INFγ/EGFP- 1, przy użyciu enzymów restrykcyjnych XhoI i BamHI. Fragmenty te zostały oczyszczone na żelu i wligowane do wektorów pd2egfp-1 zawierających sekwencje 3 UTR przy użyciu miejsc XhoI i BamHI w polilinkerze powyżej genu d2 EGFP. Mapy restrykcyjne nowych konstruktów, nazwanych p1-5 3 IL2/d2EGFP-1 oraz p1-5 3 INFγ/d2EGFP-1, zostały zweryfikowane poprzez trawienie restrykcyjne z zastosowaniem kilku enzymów restrykcyjnych oraz podczas sekwencjonowania. [0055] Skonstruowano dwa wektory ekspresyjne, w których zarówno sekwencje regulatorowe 5, jak i 3 IL-1β kontrolują ekspresję genu reporterowego. 3 UTR IL-1β został wycięty z wektora ptadvance przy użyciu

16 16 PZ/0129/EP/RW enzymu Eco52I (MBI Fermentas) i wligowany do wektorów p1-5 IL1β/d1EGFP-N1 i p3-5 IL1β/d1EGFP-N1 strawionych enzymem NotI (NEB). Obecność sekwencji 3 UTR IL-1β w obydwu plazmidach potwierdzono metodą PCR, a orientacja tych sekwencji została sprawdzona przy użyciu cięcia enzymem HincII (NEB). Sekwencje nowych wektorów, nazwanych p1-5 3 IL1β/d1EGFP-N1 oraz p3-5 3 IL1β/d1EGFP-N1, zostały potwierdzone podczas sekwencjonowania. [0056] Aby otrzymać wektor ekspresyjny EGFP, w którym sekwencje regulatorowe 3 genu TNF-α kontrolują stabilność mrna transkryptu EGFP, przecięto wektor ptadvance zawierający cały 3 TNF-α enzymami HindIII oraz EcoRV (NEB), a otrzymany fragment został wligowany poniżej kodonu stop EGFP do wektora pegfp-f przy użyciu miejsc HindIII i SmaI. Obecność 3 UTR TNF-α potwierdzono trawieniem EcoRI i SspI (NEB) oraz metodą PCR. Sekwencja 3 UTR TNF-α została potwierdzona podczas automatycznego sekwencjonowania. Otrzymany wektor, nazwany p2-3 TN-Fα/EGFP-F, zawiera sekwencje 3 UTR pochodzące od SV40, łącznie z miejscami poliadenylacji. Ponieważ eksperymenty Northern blot przeprowadzone z plazmidem p2-3 IL4/EGFP-F pokazały, że miejsca poliadenylacji pochodzące od SV-40 są wykorzystywane podczas procesu transkrypcyjnego, wektor p2-3 TNFα/EGFP-F został zmodyfikowany poprzez usunięcie sekwencji poliadenylacji SV40. Plazmid p3-3 IL4/EGFP-F został strawiony enzymami AseI oraz HincII, aby usunąć kasetę CMV-GFP-3 UTR IL-4, oraz zligowany z kasetą wyciętą z plazmidu p2-3 TNFα/EGFP-F przy użyciu enzymów AseI i HincII. Obecność 3 UTR TNF-α w powstałym plazmidzie, nazwanym p3-3 TNFα/EGFP-F, została potwierdzona metodą PCR, a brak miejsc poliadenylacji SV40 został potwierdzony poprzez trawienie enzymem BsmI. Na następnym etapie, 3 UTR TNF-α został wycięty z plazmidu ptadvance przy użyciu enzymu EagI (NEB) i wligowany do wektora pd1egfp-n1 w miejsce NotI (NEB) poniżej kodonu stop EGFP. Obecność insertu potwierdzono metodą PCR oraz trawieniem enzymem Eco52I, a właściwa orientacja 3 UTR TNF-α została potwierdzona trawieniem enzymami BgIII i Bsu36I (MBI Fermentas). Sekwencję skonstruowanego plazmidu p1-3 TNFα/d1EGFP-N1 potwierdzono podczas sekwencjonowania. Aby otrzymać wektor ekspresyjny, w którym zarówno sekwencje regulatorowe 5, jak i 3 TNF-α kontrolują ekspresję genu reporterowego, zastosowano następującą strategię. Na początku usunięto 3 UTR SV40 z plazmidu p1-5 TNFα/d1EGFP-N1 stosując trawienie kolejno następującymi enzymami: Mva1269I (MBI Fermentas), nukleazą fasoli mung (NEB) oraz NotI (NEB). Fragment wektora bez 3 UTR SV40 o długości 6684 pz został następnie zligowany z fragmentem o długości 1039 pz zawierającym 3 UTR TNF-α wycięty z wektora p1-3 TNFα/d1EGFP-N1 przy użyciu endonukleaz NotI i EcoRV. Integralność skonstruowanego wektora, nazwanego p1-5 3 TNFα/d1EGFP-N1, sprawdzono podczas sekwencjonowania. [0057] Aby otrzymać wektor ekspresyjny EGFP, w którym sekwencje regulatorowe 3 GAPDH (kontrolny gen metabolizmu podstawowego) kontrolują stabilność mrna transkryptu EGFP, wektor ptadvance zawierający cały 3 UTR dla GAPDH został strawiony enzymem EcoRI (NEB), a otrzymany fragment został wligowany do wektora pegfp-f (Clontech) poniżej kodonu stop EGFP w miejscu EcoRI. Obecność 3 UTR GAPDH potwierdzono poprzez trawienie EcoRI oraz metodą PCR. Właściwą orientację 3 UTR /GSPDH potwierdzono poprzez trawienie StyI (NEB). W końcu, sekwencję konstruktu potwierdzono podczas automatycznego sekwencjonowania. Powstały wektor, nazwany p2-3 GAPDH/EGFP-F, zawiera sekwencje 3 UTR pochodzące z SV40, łącznie z miejscami poliadenylacji. Ponieważ eksperymenty Northern blot przeprowadzone z plazmidem p2-3 IL4/EGFP-F pokazały, że miejsca poliadenylacji pochodzące z SV-40 są

17 17 PZ/0129/EP/RW wykorzystywane podczas procesu transkrypcyjnego, wektor p2-3 GAPDH/EGFP-F został zmodyfikowany poprzez usunięcie sekwencji poliadenylacji SV40. Plazmid p3-3 IL4/EGFP-F strawiono enzymami AseI i HincII aby usunąć kasetę CMV-GFP-3 UTR IL-4 i zligowano z kasetą CMV-GFP-3 UTR GAPDH wyciętą z plazmidu p2-3 GAPDH/EGFP-F przy użyciu enzymów AseI i HincII. Obecność 3 UTR GAPDH w powstałym plazmidzie, nazwanym p3-3 GAPDH/EGFP-F, potwierdzono metodą PCR, a brak miejsc poliadenylacji pochodzących z SV40 podczas trawienia enzymem BsmI. Następnie, 3 UTR GAPDH usunięto z plazmidu ptadvance poprzez wycięcie enzymem EagI (NEB) i wligowano do wektora pd1egfp-n1 (Clontech) w miejsce NotI (NEB) poniżej kodonu stop EGFP. Obecność insertu potwierdzono metodą PCR i trawieniem enzymem Eco52I, a właściwą orientację 3 UTR GAPDH potwierdzono poprzez trawienie enzymem PstI (MBI Fermentas). Sekwencję powstałego plazmidu p1-3 GAPDH/d1EGFP-N1 potwierdzono poprzez sekwencjonowanie. [0058] W rezultacie otrzymano zestaw wektorów ekspresyjnych, w których sekwencja kodująca GFP znajduje się pod kontrolą sekwencji regulatorowych 5 pochodzących z genów cytokin, w formie wysoce oczyszczonego DNA, które można użyć do transfekcji komórek ssaczych. Ponadto, otrzymano zestaw wektorów ekspresyjnych, w których sekwencja kodująca GFP znajduje się pod kontrolą sekwencji regulatorowych 5 i 3 pochodzących z genów cytokin, w formie wysoce oczyszczonego DNA, które można użyć do transfekcji komórek ssaczych. Przykład 2. Klonowanie pierwszego zestawu reporterowych linii komórkowych [0059] Otrzymanie różnych linii komórkowych (Pierwsze pokolenie reporterowych linii komórkowych) o pożądanym fenotypie służących do badania immunotoksyczności poprzez wprowadzenie genu reporterowego do istniejących unieśmiertelnionych komórek pod kontrolą regulatorowych sekwencji DNA. Metodyka i materiały do badań [0060] Prace rozpoczęto poprzez transfekcję wybranych linii komórkowych wektorami ekspresyjnymi otrzymanymi w Przykładzie 1. Użyto następujących linii komórkowych: limfocyty T i hybrydoma limfocytów T, linie komórek tucznych, monocyty-makrofagi, fibroblasty i keratynocyty. Plazmidy zostały zlinearyzowane poprzez trawienie restrykcyjne, a komórki transfekowano podczas elektroporacji. [0061] Dane linie komórkowe transfekowano konstruktami GFP odpowiadającymi genom cytokin, o których wiadomo, że wykazują stosunkowo wysoki poziom ekspresji w tych komórkach po aktywacji. Transfektanty zostały wyselekcjonowane podczas hodowli w pożywkach selekcyjnych (G-418), a klony komórkowe uzyskano metodą granicznych rozcieńczeń. Klony zostały namnożone, a obecność sekwencji pochodzących z wektora została sprawdzona metodą RT-PCR. Pozytywne klony poddano kolejnemu cyklowi klonowania oraz skriningowi metodą RT-PCR. Powstałe klony namnożono w hodowlach na dużą skalę, a następnie zamrożono wiele próbek poszczególnych klonów. Linie komórkowe otrzymane na tym etapie użyto do dalszych badań oraz do wytworzenia stabilnych linii komórkowych. Oznaczono wiele cech otrzymanych linii komórkowych, takich jak ekspresja markerów na powierzchni komórki oraz odpowiedzi funkcjonalne specyficzne dla danych linii komórkowych (proliferacja zależna od CD3, degranulacja wywoływana przez IgE, fagocytoza wywoływana przez LPS). Następnie zastosowano czynniki immunologiczne oraz farmakologiczne mające na celu aktywowanie komórek i zmierzono w nich ekspresję GFP oraz ekspresję endogennych cytokin. To pokazało, czy geny reporterowe są aktywowane równolegle z genami odpowiednich cytokin.

18 18 PZ/0129/EP/RW Następnie opracowano test cytotoksyczności kompatybilny z pomiarami fluorescencji. Jest to konieczne, aby monitorować bezpośrednią cytotoksyczność badanych związków. Rezultatem tych eksperymentów jest opracowanie protokołu eksperymentalnego, który zostanie użyty w Przykładzie 7 do jednoczesnych pomiarów kinetyki żywotności komórek i sygnałów wywołujących ekspresję cytokin. [0062] W rezultacie niektóre spośród linii komórkowych badanych w Przykładzie 7 zostały zebrane, aby stworzyć panel reporterowych linii komórkowych, tzn. prototyp chipu komórkowego. Opracowanie pomiaru żywotności komórek kompatybilnego z wykrywaniem GFP [0063] Do przeprowadzenia wstępnych badań wybrano trzy testy do oceny żywotności komórek: NRU (pomiar wychwytu czerwieni obojętnej), NRR (pomiar uwalniania czerwieni obojętnej) oraz test MTT. Do przeprowadzenia tych testów zastosowano fibroblasty 3T3-L1 oraz dwa związki immunotoksyczne: HgCl 2 i SDS (dwa spośród związków z listy modelowych immunotoksyn w Tabeli II Aneksu Technicznego). W rezultacie określono efektywne stężenie HgCl 2 i SDS, które prowadzi do śmierci 50% komórek w populacji (EC50). Organizacja systemu bankowania linii komórkowych [0064] Do przechowywania klonów komórkowych wytworzonych w trakcie projektu wyznaczono oddzielne pomieszczenie w Instytucie Medycyny Pracy im. prof. J. Nofera. Aby zapewnić wolne miejsce potrzebne do przechowywania komórek zorganizowano dodatkowe zbiorniki kriogeniczne z ciekłym azotem. Opracowano standartowy protokół zbierania i zamrażania próbek. Przygotowano dokładny system kontroli bankowania próbek. Optymizacja protokołów do przeprowadzania stabilnej transfekcji i wykrywania EGFP [0065] Aby wytworzyć reporterowe linie komórkowe, stosowano różne protokoły do przeprowadzania stabilnej transfekcji. [0066] W przypadku adherentnych linii komórkowych zastosowano technikę transfekcji przy użyciu lipofektaminy. Według standartowego protokołu eksperymentalnego, 2 x 10 5 komórek wysianych na płytki 24- dołkowe w kompletnej pożywce DME (Sigma) przemyto pożywką bez surowicy i inkubowano przez ok. 2h w 37 C przy 5% CO 2. Następnie dodano DNA z lipofektaminą (Gibco) i inkubowano komórki przez kolejne 5h. Po inkubacji dodawano pożywkę zawierającą 20% FCS i hodowano komórki przez 24h i zastępowano wtedy pożywkę pożywką zawierającą 10% FCS. 72h po transfekcji dodawano pożywkę selekcyjną zawierającą G- 418 (Gibco) w stężeniu odpowiednim dla danej linii komórkowej i hodowano komórki przez ok. 7 dni. Aby sklonować komórki zawierające transgen, zastosowano metodę granicznych rozcieńczeń. Ekspresję GFP zweryfikowano urządzeniem FACS i przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego. [0067] W przypadku komórek zawiesinowych zastosowano technikę transfekcji opartą o elektroporację. Według standartowego protokołu eksperymentalnego, 1 x 10 7 komórek hodowanych w odpowiedniej pożywce elektroporowano z DNA w ilości od 20 do 50 µg. Komórki hodowano przez 48h w normalnej pożywce wzrostowej, aby mogły wydobrzeć, a następnie dodawano antybiotyk selekcyjny (G-418). Następnie komórki były bezpośrednio klonowane metodą granicznych rozcieńczeń lub były najpierw hodowane przez dodatkowy tydzień-dwa tygodnie w pożywce selekcyjnej, a później klonowane. Oporne klony namnożono, zamrożono oraz scharakteryzowano fenotypowo.

19 19 PZ/0129/EP/RW [0068] Aby sprawdzić protokół transfekcji i technikę wykrywania GFP zastosowano łatwo transfekowalną ludzką linię komórkową limfocytów T, Jurkat. Komórki Jurkat transfekowano plazmidem pegfp-f, w którym ekspresja EGFP kierowana jest przez promotor CMV. W rezultacie otrzymano liczne klony komórkowe charakteryzujące się wysoką ekspresją EGFP. Te linie komórkowe zostały użyte przez Zakład Amin Biogennych PAN, aby zbadać ekspresję EGFP przy pomocy fosfoimagera Multimager Typhoon 8600 (Molecular Dynamics). Klonowanie pierwszego zestawu reporterowych linii komórkowych [0069] Aby otrzymać linie komórkowe do testowania immunotoksyczności o pożądanym fenotypie z genem reporterowym pod kontrolą sekwencji regulatorowych DNA pochodzących z genu cytokiny, kilka linii komórkowych, których listę podano w Tabeli I Aneksu Technicznego, transfekowano konstruktami reporterowymi GFP. Na początku komórki transfekowano plazmidami, w których EGFP znajduje się pod kontrolą silnego promotora wirusowego (CMV), a zatem, linię komórek tucznych C57.1 oraz keratynocyty HEL-30 transfekowano plazmidem pegfp-f, a fibroblasty 3T3-L1 transfekowano plazmidami pegfp-f oraz pegfp-n1. Limfocyty EL4 i BW transfekowano plazmidem pegfp-c3. W rezultacie wytworzono różne linie komórkowe wykazujące ekspresję EGFP na różnym poziomie, a następnie linie te użyto, aby określić efekt stabilnej transfekcji i ekspresji EGFP na fenotyp linii komórkowej. W jednym spośród tych eksperymentów związanych z transfekcją monitorowanie ekspresji GFP przy pomocy urządzenia Multimager zastosowano na wczesnym etapie klonowania fibroblastów 3T3-L1 transfekowanych plazmidem pegfp-f. Powstała linia komórkowa fibroblastów T/pEGFP-F/1 została użyta w celu opracowania alternatywnej techniki wykrywania GFP (patrz WP.7). Komórki tuczne C57.1 wykazujące ekspresję EGFP pod kontrolą promotora CMV zastosowano w serii eksperymentów, mających na celu określenie efektu stabilnej transfekcji EGFP na cechy morfologiczne i funkcjonalne. Komórki te wykazywały ekspresję EGFP na poziomie, który można było łatwo wykryć przy użyciu urządzenia FACS lub pod mikroskopem fluorescencyjnym. Komórki C57/CMV- EGFP wykazywały morfologię taką samą, jak macierzyste komórki. Zaobserwowano zwiększenie liczby komórek gigantycznych w porównaniu z macierzystą linią komórkową. Podczas badania tych komórek w testach funkcjonalnych komórki te prezentowały normalną charakterystykę komórek tucznych. Zostały one uwrażliwione monoklonalnym IgE in vitro i odpowiedziały na antygen poprzez egzocytozę i produkcję cytokin. Poziom wydzielania mediatorów i produkcji cytokin w komórkach C57/CMV-EGFP był podobny do tego, który obserwowano w macierzystych komórkach tucznych C57.1. [0070] Następnie zastosowano opracowane w Przykładzie 1 konstrukty DNA, w których ekspresja GFP znajdowała się pod kontrolą sekwencji regulatorowych 5 i 3 genów cytokin. A zatem, komórki tuczne C57.1 transfekowano reporterowym plazmidem EGFP dla genu IL-4, p1-5 IL4/EGFP-1. Plazmid zlinearyzowano i transfekowano komórki stosując elektroporację. Otrzymane klony oporne na neomycynę namnożono w hodowlach na dużą skalę. Po drugim cyklu klonowania określono, że jeden z tych klonów ma odpowiednią charakterystykę fenotypową komórek tucznych i wykrywalną ekspresję EGFP. Powstała linia komórkowa, w której promotor minimalny IL-4 kontroluje ekspresję EGFP, została nazwana C57/5 IL4/1 (nazwa została zmieniona na C/p1-5 IL4-EGFP/002, zgodnie z systemem oznaczania w bazie danych reporterowych linii komórkowych) i jest kamieniem milowym M1 tego projektu. Tę linię komórkową wykorzystano do szeregu eksperymentów, mających na celu testowanie ekspresji EGFP w komórkach spoczynkowych i traktowanych

20 20 PZ/0129/EP/RW jonoforem. Z tych testów wyciągnięto wniosek, że komórki spoczynkowe wykazywały wysoką ekspresję EGFP, a przyczyną tego jest wysoka stabilność białka EGFP. Z kolei ta cecha wydaje się przysłaniać wzrost ekspresji EGFP po stymulacji komórki. Bazując na tych danych wyciągnięto wniosek, aby oprócz EGFP zastosować również destabilizowany wariant EGFP, nazwany degfp (patrz Przykład 3). [0071] Limfocytarne linie komórkowe EL4 i BW transfekowano konstruktem reporterowym dla IL-2 i IFN-γ, odpowiednio p1-5 INFγ/EGFP-1 i p1-5 IL2/EGFP-1. Pewne oporne klony powstałe w wyniku tych transfekcji zostały zamrożone. Komórki EL4 transfekowane plazmidem p1-5 IL2/EGFP-1 zastosowano do sprawdzenia spontanicznej i wywołanej przez PMA ekspresji mrna EGFP. Dla każdego typu reporterowych linii komórkowych otrzymano minimum 3 klony. Początkowo analizowano klony na podstawie bazowej ekspresji GFP i indukowalności. Początkową analizę przeprowadzono przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego, co okazało się być dobrą metodą wykrywania ekspresji GFP. Na skutek próby użycia czytnika do mikroskopu fluorescencyjnego pojawiła się potrzeba dalszej optymizacji protokołów eksperymentalnych i szczegółów technicznych. Kolejne analizy funkcjonalności przeprowadzono stosując cytometrię przepływową (FACS). Zbadano bazową ekspresję GFP w porównaniu z nietransfekowanymi komórkami oraz indukowalność ekspresji po aktywacji komórek TPA i jonomycyną. W przypadku klonów wywodzących się z linii EL4 posiadających GFP pod kontrolą elementów regulatorowych z IL-2 i IFN-γ zidentyfikowano wiele klonów z niską bazalną i wysoką indukowalną ekspresją GFP. Jeśli chodzi o klony wywodzące się z linii BW5147.3, wszystkie testowane klony wykazywały wykrywalną bazalną ekspresję GFP, ale żaden z tych klonów nie wykazywał zwiększonej ekspresji GFP po aktywacji TPA i jonomycyną. [0072] Limfocytarną linię komórkową EL4 transfekowano konstruktem reporterowym dla IL-4 p1-5 IL- 4/EGFP-1. Bazalną i indukowalną ekspresję EGFP wielu spośród opornych klonów otrzymanych w wyniku tych transfekcji przetestowano przy użyciu FACS i mikroskopu fluorescencyjnego. Żaden spośród klonów nie wykazywał zwiększonej ekspresji GFP po aktywacji TPA i jonoforem wapnia. [0073] W rezultacie otrzymano zestaw reporterowych linii komórkowych o odpowiedniej charakterystyce fenotypowej zawierających geny reporterowe w DNA chromosomalnym. Ponadto otrzymano metodę badania żywotności komórek kompatybilną z pomiarami ekspresji GFP. Przykład 3. Konstruowanie zmodyfikowanych wektorów ekspresyjnych do stabilnych transfekcji [0074] Aby zmodyfikować konstrukty DNA, w których ekspresja reporterowego białka fluorescencyjnego zależy od sekwencji regulatorowych pochodzących z genów cytokin poprzez wprowadzenie dodatkowych sekwencji regulatorowych i/lub modyfikację sekwencji kodujących białko fluorescencyjne. Te modyfikacje powinny doprowadzić do wzrostu stosunku maksymalnej ekspresji genu reporterowego do ekspresji bazowej. Ten cel został osiągnięty poprzez jedną lub kilka spośród następujących zmian: obniżenie spontanicznej bazowej ekspresji białka fluorescencyjnego; (i/lub) zwiększenie ilości białka reporterowego wykazującego ekspresję po stymulacji; (i/lub) zmianę typu białka fluorescencyjnego. Te zmodyfikowane wektory ekspresyjne (Zmodyfikowane Wektory Ekspresyjne do Stabilnej Transfekcji) są narzędziami do modyfikacji genetycznych linii komórkowych i zostaną zastosowane w Przykładzie 4. Metodyka i materiały do badań [0075] Konstrukty GFP otrzymane w Przykładzie 1 zmodyfikowano stosując standartowe techniki biologii molekularnej, poprzez trawienie enzymem restrykcyjnym i klonowanie kierunkowe pożądanych sekwencji. Te

21 21 PZ/0129/EP/RW sekwencje pochodziły z komercyjnie dostępnych wektorów ekspresyjnych lub zostały wprowadzone jako syntetyczne oligonukleotydy. Wybrano pozytywne klony i zweryfikowano sekwencje otrzymanych plazmidów. Zmiany w wektorach ekspresyjnych zależą od otrzymanych wyników. Obniżenie bazowej ekspresji GFP może wymagać wprowadzenia dodatkowych elementów regulatorowych takich jak silencery powyżej sekwencji kodującej GFP. Można również wprowadzić dodatkowe motywy heterologiczne destabilizujące mrna w regionie 3 UTR poniżej otwartej ramki odczytu GFP. [0076] Aby zwiększyć poziom ekspresji można zastosować powtarzające się tandemowo regulatorowe sekwencje promotora cytokin, można również wprowadzić znane heterologiczne motywy stabilizujące mrna w 3 UTR poniżej otwartej ramki odczytu GFP. [0077] Można zmodyfikować sekwencje liderowe w otwartej ramce odczytu GFP, co skutkuje zróżnicowanym transportem GFP do kompartmentów komórkowych. Białko fluorescencyjne można zastąpić jednym spośród modyfikowanych białek fluorescencyjnych, które mogą zmieniać stosunek sygnału do tła we fluorometrycznych odczytach ekspresji genu ze względu na inny poziom nakładania się z autofluorescencją. Można również przetestować geny reporterowe oparte na bioluminescencji jako możliwą alternatywę dla systemów GFP. [0078] Wszystkie te modyfikacje otrzymano poprzez zmianę istniejących wektorów ekspresyjnych przy użyciu standardowych technik biologii molekularnej, takich jak trawienie enzymami restrykcyjnymi, metoda PCR oraz ligacja. Wytworzenie konstruktów reporterowych degfp zawierających regiony regulatorowe 5 cytokin. [0079] Stworzono dwa konstrukty reporterowe zawierające degfp pod kontrolą sekwencji regulatorowych 5 IL-4. Pierwszy został stworzony w oparciu o plazmid p1-5 IL4/EGFP-1 (patrz WP1) strawiony enzymami SmaI i XhoI (MBI Fermentas). Wycięty fragment zawierający promotor minimalny dla IL-4 (-87/+5) wklonowano do plazmidu pd1egfp-n1* (pd1egfp-n1 zmodyfikowany poprzez usunięcie promotora CMV, patrz WP1) trawionego tą samą parą enzymów. Produkty ligacji sprawdzono stosując trawienie enzymami SmaI i Alw44I. Sekwencję skonstruowanego plazmidu, nazwanego p1-5 IL4/d1EGFP-N1, potwierdzono stosując automatyczne sekwencjonowanie. Do drugiego konstruktu reporterowego otrzymano metodą PCR (polimeraza Taq, MBI Fermentas) dłuższy region promotorowy IL-4 (-797/+5) przy użyciu plazmidu -797pCAT (prezent od Dr Melisy Brown, Uniwersytet Atlanty, Atlanta, USA). Produkt PCR został wklonowany do wektora ptadvance. Następnie wycięto promotor IL-4 z wektora ptadvance enzymami SmaI i VspI (MBI Fermentas) i wklonowany do plazmidu pd1egfp-n1* strawionego tą samą parą enzymów. Wynik ligacji potwierdzono trawieniem enzymami HindII i Eco52I. Sekwencję skonstruowanego plazmidu, nazwanego p2-5 IL4/d1EGFP-N1, potwierdzono stosując automatyczne sekwencjonowanie. [0080] Konstrukty reporterowe zawierające degfp pod kontrolą sekwencji regulatorowych 5 dla IL-2 i IFN-γ oparte są na konstruktach reporterowych zawierających EGFP regiony promotorowe dla IL-2 i IFN-γ wycięto z plazmidów p1-5 IL2/EGFP-1 i p1-5 INFγ/EGFP-1, używając enzymów, odpowiednio XhoI i BamHI. Otrzymane fragmenty DNA oczyszczono następnie na żelu i wligowano do plazmidu pd2egfp-1 (Clontech) strawionego tą samą parą enzymów. Produkty ligacji analizowano stosując trawienie przy użyciu kilku

22 22 PZ/0129/EP/RW enzymów restrykcyjnych. Sekwencje otrzymanych konstruktów, nazwanych p1-5 IL2/d2EGFP-1 i p1-5 INFγ/d2EGFP-1, potwierdzono stosując sekwencjonowanie. [0081] Skonstruowano dwa poprawione konstrukty reporterowe zawierające degfp pod kontrolą sekwencji regulatorowych 5 IL-1β. Naszym zamiarem było otrzymanie konstruktów reporterowych z sekwencjami intronowymi IL-1β, które podejrzewane są o posiadanie właściwości regulatorowych. Zaprojektowano startery PCR tak, aby obejmowały sekwencje od pz lub -500 pz powyżej miejsca startu transkrypcji do początku egzonu 2 (+820 pz) genu IL-1β. Fragmenty -500/+820 i -4093/+820 IL-1β otrzymane metodą PCR używając genomowego DNA myszy Balb/c jako matrycy i polimerazy o wysokiej wierności AccuTaq (Sigma) wklonowano do wektora pcr-blunt II-TOPO (Invitrogen). Sekwencje pochodzące z IL-1β wycięto następnie z wektora stosując enzymy EcoRV (NEB) i KpnI (NEB) i wklonowano do wektora pd1egfp-n1* strawionego enzymami SmaI (MB Fermentas) i KpnI (NEB). Obecność promotora IL-1β -500/+820 w pierwszym otrzymanym plazmidzie, nazwanym p2-5 IL1β/d1EGFP-N1, potwierdzono metodą PCR i stosując trawienie enzymem HincII. Obecność promotora IL-1β -4093/+820 w drugim otrzymanym plazmidzie, nazwanym p4-5 IL1β/d1EGFP-N1, potwierdzono metodą PCR i stosując trawienie enzymem Eco88I (MBI Fermentas). Sekwencje plazmidów p2-5 IL1β/d1EGFP-N1 i p4-5 IL1β/d1EGFP-N1 potwierdzono stosując automatyczne sekwencjonowanie. [0082] Aby otrzymać konstrukt reporterowy degfp pod kontrolą promotora aktyny, promotora CAG, który składa się z enhancera CMV i proksymalnego promotora kurzej β-aktyny został wycięty przy pomocy enzymów restrykcyjnych AseI i Eco47III z komercyjnie dostępnego wektora pqe-trisystem (Qiagen) i wligowany do wektora pd1egfp-n1 (Clontech) w miejsce promotora CMV (wycięty enzymami restrykcyjnymi AeI i Eco47III), powyżej sekwencji kodującej EGFP. Sekwencja powstałego konstruktu pca-d1egfp została potwierdzona podczas mapowania enzymami restrykcyjnymi. Wytworzenie konstruktów reporterowych degfp zawierających regiony regulatorowe 5 i 3 cytokin [0083] Aby otrzymać konstrukty reporterowe degfp zawierający zarówno promotor -87 jak i 3 UTR genu IL- 4, plazmidy p1-5 IL4/d1EGFP-N1 i p1-3 IL4/d1EGFP-N1 zostały strawione enzymami AgeI (MBI Fermentas) i HincII (NEB). Fragment zawierający d1egfp i 3 UTR wycięty z plazmidu p1-3 IL4/d1EGFP-N1 został wklonowany do plazmidu p1-5 IL4/d1EGFP-N1, zaraz poniżej promotora IL-4. Mapa restrykcyjna nowego konstruktu, nazwanego p1-5 3 IL4/d1EGFP-N1, była analizowana poprzez trawienie enzymem Eco52I (MBI Fermentas) i sekwencja tego plazmidu została zweryfikowana stosując automatyczne sekwencjonowanie. Aby otrzymać konstrukt reporterowy degfp zawierający zarówno promotor -797 i 3 UTR genu IL-4, plazmidy p2-5 IL4/d1EGFP-N1 i p1-3 IL4/d1EGFP-N1 zostały strawione enzymami AgeI (MBI Fermentas) i HincII (NEB). Fragment zawierający d1egfp i 3 UTR wycięty z plazmidu p1-3 IL4/d1EGFP-N1 został następnie wklonowany, zaraz poniżej promotora IL-4. Mapa restrykcyjna nowego konstruktu, nazwanego p2-5 3 IL4/d1EGFP-N1, analizowano poprzez trawienie enzymami Eco52I i SspI (NEB) i sekwencja tego plazmidu została zweryfikowana stosując automatyczne sekwencjonowanie. [0084] Aby otrzymać konstrukt reporterowy degfp zawierający zarówno regiony regulatorowe 5-500/+820, jak i 3 UTR genu IL-1β, 3 UTR IL-1β został wycięty z plazmidu ptadvance enzymem EagI (NEB) i wligowany do plazmidu p2-5 IL1β/d1EGFP-N1 strawionego enzymem NotI (NEB). Obecność insertu potwierdzono metodą PCR, a jego orientacja była analizowana poprzez trawienie enzymem Ecl136II (MBI Fermentas).

23 23 PZ/0129/EP/RW Sekwencja otrzymanego plazmidu, nazwanego p2-5 3 IL1β/d1EGFP-N1, została potwierdzona stosując automatyczne sekwencjonowanie. Aby otrzymać konstrukt reporterowy degfp zawierający zarówno region regulatorowy /+820, jak i 3 UTR genu IL-1β, 3 UTR IL-1β wycięto z plazmidu ptadvance enzymem EagI (NEB) i wligowany do plazmidu p4-5 IL1β/d1EGFP-N1 strawionego enzymem NotI (NEB). Obecność insertu została potwierdzona metodą PCR, a jego orientacja została poprzez trawienie enzymem Ecl136 (MBI Fermentas). Sekwencja otrzymanego plazmidu, nazwanego p4-5 3 IL1β3/d1EGFP-N1, została zweryfikowana stosując automatyczne sekwencjonowanie. [0085] W rezultacie otrzymano zestaw modyfikowanych wektorów ekspresyjnych w formie wysoce oczyszczonego plazmidu DNA, gotowego do transfekcji komórek ssaczych. Przykład 4. Klonowanie poprawionych reporterowych linii komórkowych [0086] Otrzymanie linii komórkowych (Druga Generacja Reporterowych Linii Komórkowych) o charakterystyce fenotypowej ulepszonej w stosunku do pierwszej generacji reporterowych linii komórkowych do testowania immunotoksyczności. Metodyka i materiały do badań [0087] Prace zaczną się poprzez transfekcję wybranych linii komórkowych przy użyciu wektorów ekspresyjnych GFP modyfikowanych jak opisano w Przykładzie 3. Zlinearyzowany plazmid DNA zostanie użyty do transfekcji komórek metodą elektroporacji. Transfektanty, do których zostanie wstawione pozachromosomalne DNA zostaną wyselekcjonowane podczas hodowli w obecności G-418 i sklonowane przy użyciu metody granicznych rozcieńczeń. Klony zostaną namnożone, a obecność wektorowego DNA zostanie zweryfikowana metodą PCR i namnożone w hodowlach na dużą skalę. Wiele próbek zostanie namnożonych. Następnie wszystkie ważne cechy fenotypowe tych linii komórkowych zostaną przebadane przy użyciu podejścia podanego do tego, opisanego w Przykładzie 2. Poziom ekspresji GFP i stosunek sygnału do tła zostanie sprawdzony. Otrzymane dane zostaną porównane do parametrów obserwowanych w liniach komórkowych otrzymanych w Przykładzie 2. W ten sposób zostanie pokazane, czy modyfikacje konstruktów genu reporterowego GFP poprawią wykrywanie indukowalnej ekspresji genu przy użyciu testów fluorymetrycznych i luminometrycznych. Jest pożądane, aby sklonować i scharakteryzować 3 do 4 linii komórkowych transfekowanych modyfikowanymi wektorami ekspresyjnymi GFP. Ta liczba linii komórkowych powinna być wystarczająca do weryfikacji naszych założeń. Niektóre spośród tych linii komórkowych zostaną użyte w Przykładzie 7, aby zbudować panel reporterowych linii komórkowych prototyp chipu komórkowego. Wyniki [0088] Aby otrzymać linie komórkowe o charakterystyce fenotypowej ulepszonej w porównaniu do pierwszej generacji reporterowych linii komórkowych do testowania immunotoksyczności linia limfocytarna EL4 i BW transfekowano konstruktem reporterowym dla IL-2 i IFN-Y, odpowiednio plazmidem p1-5 IL2/d2EGFP-1 i p1-5 INFγ/d2EGFP-1, (Przykład 3). Wiele spośród klonów opornych na neomycynę powstałych podczas tych transfekcji namnożono i scharakteryzowano. Niektóre z nich wykazywały niską bazalną ekspresję degfp, która była regulowana w górę po aktywacji TPA i jonomycyną do poziomu łatwo wykrywalnego przy użyciu FACS i mikroskopii fluorescencyjnej. W ten sposób otrzymano reporterową linię komórkową EL/p1-5 IL2-dEGFP/7. Chociaż klony posiadające destabilizowany wariant EGFP wykazywały niższą bazalną ekspresję w porównaniu z komórkami transfekowanymi EGFP, maksymalny poziom

24 24 PZ/0129/EP/RW indukowalnej ekspresji degfp był niższy niż w przypadku aktywowanych klonów EL4 posiadających transgen degfp. Limfocytarna linia komórkowa EL4 została również stransfekowana konstruktem reporterowym dla IL-4 p1-5 ILA/d1EGFP-N1 i p1-5 3 IL4/d1EGFP-N1. Po przeprowadzeniu tych transfekcji otrzymano wiele klonów opornych na neomycynę, dla których sprawdzono bazową i indukowalną ekspresję EGFP przy użyciu instrumentu FACS i mikroskopii fluorescencyjnej. Żaden z otrzymanych klonów nie wykazywał zwiększonej ekspresji GFP po aktywacji TPA i jonoforem wapnia. [0089] Komórki tuczne C57.1 transfekowano konstruktem reporterowym dla IL-4 p1-5 IL4/dIEGFP-N1 i pl- 5 3 IL4/d1EGFP-N1. Scharakteryzowano bazalną i indukowalną ekspresję GFP otrzymanych klonów, ale nie zaobserwowano indukcji ekspresji GFP. Powtórzono protokół transfekcji przy użyciu tych samych plazmidów i otrzymano wiele opornych klonów. [0090] Monocyty-makrofagi J774.1A transfekowano konstruktem reporterowymi dla TNF-α, p1-5 TNFα/d1EGFP-N1. Wybrano wiele opornych klonów i sklonowano. Scharakteryzowano bazową i indukowalną ekspresję GFP otrzymanych klonów przy pomocy mikroskopii fluorescencyjnej i przy zastosowaniu urządzenia FACS. Jeden spośród tych klonów odpowiedział na aktywację LPS poprzez zwiększenie fluorescencji GFP. [0091] Komórki tuczne C57.1 transfekowano dwoma konstruktami reporterowymi dla TNF-α, p1-5 TNFα/d1EGFP-N1i p1-5 TNF-α/d1EGFP-N1. Wybrano wiele opornych klonów i sklonowano. Scharakteryzowano bazową i indukowalną ekspresję GFP otrzymanych klonów przy pomocy mikroskopii fluorescencyjnej i przy zastosowaniu urządzenia FACS. 10 spośród tych klonów odpowiedziało na aktywację TPA i jonoforem A23 zwiększeniem fluorescencji GFP, którą można było łatwo wykryć używając mikroskopii fluorescencyjnej i przy użyciu urządzenia FACS. [0092] Komórki EL4 i C57 transfekowano kontrolnym plazmidem pca-diegfp, w którym ekspresja degfp znajduje się pod kontrolą promotora aktyny. Przetestowano ekspresję GFP powstałych klonów komórkowych i wykazano ekspresję bazalną, która nie jest indukowana po aktywacji. [0093] Fibroblasty 3T3-L1, keratynocyty Hel-30, monocyty-makrofagi J774.1A transfekowano konstruktami reporterowymi IL-1β p2-5 IL1β/d1EGFP-N1 i p4-5 IL1β/d1EGFP-N1. Ze względu na bardzo silną adhezję do plastiku było ciężko sklonować i namnożyć oporne komórki pochodzące od HEL-30. Obecnie badana jest alternatywna technika transfekcji tej linii komórkowej. Po transfekcji komórek J774A.1 otrzymano wiele opornych klonów i scharakteryzowano ich wybrane cechy fenotypowe i ekspresję GFP. Analiza rozmiarów komórek przeprowadzona przy pomocy urządzenia Coulter Multisizer II potwierdziła obserwacje przeprowadzone na tych liniach komórkowych pod mikroskopem, co sugerowało większy rozmiar komórek od oryginalnej linii J774.1A. Zarówno klony, jak i oryginalną linię, stymulowano LPS (1 µg/ml) i oceniano: produkcję NO przy użyciu reakcji Griessa, syntezę białka IL-1β (przy użyciu kitu do ELISA DuoSet (R&D)), GFP, ekspresję mrna IL-1β (RT-PCR przy użyciu RevertAidTM (Invitrogen)), fluorescencję GFP przy pomocy mikroskopu fluorescencyjnego wyposażonego w kamerę CCD. [0094] Dane z oznaczenia produkcji tlenku azotu sugerowały, że zarówno nietransfekowane komórki J774.1A, jak i wszystkie testowane klony były w podobnym stopniu aktywowane przy pomocy LPS. Podczas pomiarów syntezy białka IL-1β nie wykazano wykrywalnego poziomu białka w supernatantach stymulowanych komórek oraz duże ilości IL-1β w lizatach komórkowych. Wszystkie stymulowane klony

25 25 PZ/0129/EP/RW (hodowla w butelkach 25 cm 2, konfluencja 70-80%) wykazywały ekspresję mrna dla GFP oraz jednoczesną ekspresję mrna dla IL-1β. Ekspresję GFP obserwowano po 6 i po 12 h stymulacji LPS i potem spadała ona powoli po 24 h. Co jednak ciekawe, tylko dwa spośród tych pięciu klonów wykazywały zwiększenie fluorescencji GFP po stymulacji. [0095] Po transfekcji komórek 3T3-L1 otrzymano wiele opornych klonów i scharakteryzowano ich bazową i indukowalną ekspresję GFP. Przy użyciu instrumentu FACS przetestowano odpowiedź na stymulację LPS 40 otrzymanych klonów. Dwa spośród tych klonów odpowiedziały na LPS poprzez zwiększenie fluorescencji GFP. Przykład 5. Konstrukcja wektorów ekspresyjnych do targetowania genowego [0096] Przygotowanie szeregu wektorów DNA do targetowania genowego. Te wektory to narzędzia potrzebne do rozwoju linii immunologicznych (Przykład 6), w których wybrane miejsca (loci) genów cytokin zostaną zastąpione przez geny reporterowe. Metodyka i materiały do badań [0097] Zastosowana zostanie strategia targetowania określonych genów wykorzystująca wektor z długą ciągłą sekwencją homologiczną do loci wybranych jako cele. Na początku pozyskane zostaną klony DNA nakładające się z mysimi genami cytokin lub zmapowane obok tych genów. Dostępne są mapy restrykcyjne odpowiednich części mysiego DNA chromosomalnego obejmujące miejsca dla IL-4, IL-5 i IFN-γ, które to geny celowano z sukcesem u myszy otrzymując fenotyp knock-out. Konstrukty do targetowania genowego będą zawierać fragment DNA o długości 6 kpz nakładający się z regionem kodującym targetowany gen cytokinowy. Dla każdego targetowanego miejsca pożądane jest przygotowanie trzech wektorów, z których każdy sekwencję homologiczną i różniących się typem markerów selekcyjnych. Konstrukcja wektorów celujących oparta będzie na szkielecie standartowego wektora zawiera taką samą długą pbluescript. Region kodujący GFP z sekwencjami 3 UTR cytokiny przyległymi do kodonu Stop będą otrzymane jako pochodne wektorów GFP otrzymanych w Przykładzie 1. W pierwszym typie wektorów sekwencje kodujące GFP, za którymi znajdują się fragmenty 3 UTR genów cytokin, zostaną wstawione w obrębie sekwencji homologicznej o długości 6 kpz i zastąpią otwartą ramkę odczytu cytokiny. Kaseta Neo lub Hyg oflankowana parą sekwencji loxp zostanie wstawiona poniżej sygnału terminacji transkrypcji dla genu cytokinowego, a za nią będzie się znajdować długi przylegający fragment celującej sekwencji homologicznej. Poprzez wprowadzenie genu tk blisko końca sekwencji homologicznej o długości 3 kpz poniżej genu wytworzony zostanie drugi typ wektorów celujących, które pozwolą na zastosowanie techniki selekcji komórek pozytywna-negatywna (PNS). Wektory zostaną skonstruowane przy użyciu standartowych technik manipulacji DNA, m.in. trawienia enzymami restrykcyjnymi oraz ligacji. Syntetyczne adaptery oligonukleotydowe i wytworzone metodą PCR fragmenty DNA zostaną użyte, jeśli będzie to niezbędne, w celu połączenia pożądanych sekwencji DNA i w celu wprowadzenia poszczególnych sekwencji do konstruktu. Po transformacji pozytywne klony E.coli zostaną wybrane dzięki analizie miniprep. Po weryfikacji sekwencji plazmidu przy pomocy automatycznego sekwencjonowania duże ilości plazmidowego DNA zostaną powielone i oczyszczone. Wyniki [0098] Prace eksperymentalne dotyczące podejścia celowania genowego do rozwoju reporterowych linii komórkowych zostały rozpoczęte poprzez użycie konstruktu targetującego IL-2/GFP o długości 9 kpz

26 26 PZ/0129/EP/RW otrzymanego od Dr Hua Gu (Laboratorium Immunologii, NIH Rockville, USA). Plazmid ten, zawierający sekwencję o długości 2 kpz, która obejmuje region IL-2 w stronę 5 końca, otwartą ramkę odczytu GFO z pgreenlantern (Life Technologies), kasetę Neo i fragment genomowej IL-2 o długości 4 kpz, został pomyślnie użyty do stworzenia myszy transgenicznej (Immunity 9: ). Zweryfikowano integralność wektora, zamplifikowano i oczyszczono plazmidowe DNA i zastosowano je w szeregu eksperymentów. Oryginalny plazmid został zmodyfikowany poprzez dodanie kasety TK na końcu 3, co pozwala na zastosowanie techniki selekcji komórek pozytywna-negatywna (PNS). W tym celu zastosowano plazmid ppnt zawierający gen kinazy tymidynowej wirusa opryszczki pospolitej pod kontrolą mysiego promotora kinazy fosfoglicerynianowej (plazmid BCCM/LMBP i kolekcja DNA, Gent, Belgia). Aby zidentyfikować miejsca w plazmidzie pil-2/gfp, które mogłyby zostać wykorzystane do wklonowania kasety TK, przeprowadzono rozległe mapowanie restrykcyjne. Zidentyfikowano tylko kilka enzymów, które przecinały wektor w jednym miejscu i nie niszczyły sekwencji celującej IL2/GFP. Te miejsca restrykcyjne nie odpowiadają żadnym dostępnym miejscom w plazmidzie ppnt. Aby ominąć problem braku miejsc w konstrukcie celującym, przeklonowano kasetę TK o wielkości 2.8 kpz do plazmidu pbluescript. Sprawdzono również alternatywną, opartą na metodzie PCR, strategię klonowania. [0099] W rezultacie, pożądane jest otrzymanie zestawu genów do celowania genowego zawierających długie fragmenty DNA nakładające się z regionem kodującym danej cytokiny, sekwencją kodującą GFP, markerem lub markerami selektywnymi, w formie wysoce oczyszczonego DNA, którym można transfekować ssacze komórki. Przykład 6. Wykorzystywanie technologii targetowania genowego do wytworzenia reporterowych linii komórkowych [0100] Tworzenie unieśmiertelnionych komórek układu odpornościowego, w których sygnały regulujące ekspresję genu cytokin będą w zamian regulować ekspresję genu reporterowego. A zatem, cała złożoność mechanizmów regulatorowych kontrolujących produkcję cytokin, ze wszystkimi działającymi elementami cis i trans będzie wpływać na poziom ekspresji GFP. Metodyka i materiały do badań [0101] Wektory otrzymane w Przykładzie 5 zostaną użyte do celowania sekwencji w miejscach (loci) genu wybranej cytokiny. Zastosowane zostaną wektory zaprojektowane do pozytywnej selekcji z neomycyną (G- 418) lub higromycyną oraz wektory do selekcji pozytywna-negatywna (PNS). Wektory będą linearyzowane enzymami restrykcyjnymi, a następnie będą wprowadzane do komórek podczas elektroporacji. Komórki będą umieszczane w pożywkach selektywnych. Selekcja komórek będzie oparta na G418 lub higromycynie w przypadku procedury pozytywnej selekcji, a na G-418 i następnie gancyklowirze w przypadku procedury selekcji pozytywna-negatywna. Oporne komórki będą klonowane metodą granicznych rozcieńczeń. Obecność pożądanych modyfikacji genomowych w klonach zostanie sprawdzona metodą PCR. Następnie, przy użyciu metody Southern blot, zostanie sprawdzone, czy przy użyciu wybranych klonów uda się przeprowadzić celowanie genowe. Klony te zostaną namnożone podczas hodowli na dużą skalę. Przeprowadzone zostaną testy mające na celu poznanie charakterystyki fenotypowej linii komórkowych otrzymanych na tym etapie. Następnie pożądane będzie aktywowanie tych komórek i pomiar ekspresji GFP. Udane wstawienie transgenicznego insertu w specyficznym miejscu skutkować będzie otrzymaniem

27 27 PZ/0129/EP/RW pojedynczego allelu zmodyfikowanego w ten sposób, aby wykazywać ekspresję GFP zamiast mrna cytokiny. W następnym kroku będzie pożądane, aby obydwa allele genu zastąpić GFP i porównać otrzymany fenotyp z tym po zamianie pojedynczego allela. W tym celu zostanie zastosowana linia komórkowa z pojedynczym insertem transgenicznym, która celuje inne allele. Jedną możliwą strategią jest użycie wektora celującego z innymi markerami selektywnymi oraz odnalezienie pośród transfektantów tych, które posiadają podwójną oporność. Alternatywną strategią jest usunięcie kasety neomycynowej z insertu transgenicznego i użycie markeru oporności na neomycynę po raz kolejny. Klony zostaną sprawdzone metodą PCR i klony negatywne, jeśli chodzi o kasetę Neo i wrażliwe na neomycynę zostaną wybrane. Od tego momentu drugi cykl celowania genowego jest podobny dla obydwu strategii opisanych powyżej i stosowane są procedury eksperymentalne opisane dla pierwszego eksperymentu celowania genowego. Różnice będą takie, że podczas skriningu zastosowane zostaną inne startery PCR oraz sondy do Southern blot. Zostaną zaprojektowane w ten sposób, aby zweryfikować całkowity brak sekwencji kodujących cytokin w genomowym DNA. Wyniki [0102] Konstrukt celujący IL-2/GFP o wielkości 9 kpz został zlinearyzowany i użyty do transfekcji komórek EL4 opartej na elektroporacji. Transfekowane komórki wyselekcjonowano przy użyciu G-418.Podczas klonowania metodą granicznych rozcieńczeń otrzymano 26 klonów, dla których scharakteryzowano typ insercji. W tym celu wykonano Southern blot genomowego DNA wyizolowanego z tych klonów i strawionego EcoRI. Chociaż jeden z tych klonów dał sygnał odmiennego rozmiaru niż oczekiwano na podstawie niemodyfikowanego miejsca IL-2, wniosek końcowy jest taki, że zaszła tylko przypadkowa inkorporacja DNA.a zatem, oryginalny plazmid jest modyfikowany poprzez dodanie kasety TK na końcu 3, co pozwoli na zastosowanie techniki selekcji komórek pozytywna-negatywna (PNS). Chociaż żaden z opornych klonów nie wykazywał inkorporacji transgenu DNA w miejscu (locus), niektóre klony wykazywały odpowiednią charakterystykę fenotypową, więc zostały dodane do kolekcji reporterowych linii komórkowych. [0103] W rezultacie, ciągle jest pożądane otrzymanie jednej lub wielu linii komórkowych zmodyfikowanych genetycznie w taki sposób, aby jeden lub dwa allele genu cytokinowego zastąpione były przez region kodujący gen reporterowy GFP. Przykład 7. Opracowanie protokołu eksperymentalnego do testowania odpowiedzi reporterowych linii komórkowych na ksenobiotyki [0104] Zweryfikowanie, czy odpowiedzi reporterowych linii komórkowych na zestaw scharakteryzowanych immunotoksyn są wykrywalne i powtarzalne. Wybranie linii komórkowych do stworzenia prototypowego panelu reporterowych linii komórkowych. Przygotowanie wystandaryzowanego protokołu eksperymentalnego, który mógłby zostać zastosowany do testowania interesujących substancji przy użyciu tego prototypowego panelu reporterowych linii komórkowych. Metodyka i materiały do badań [0105] Hodowla komórek i warunki testu zostaną zoptymizowane tak, aby otrzymać podobny poziom bazowej fluorescencji i najlepszy stosunek sygnału do tła. Preferowany format tych eksperymentów to testowanie komórek umieszczonych na płytkach wielodołkowych. Wybrane substancje immunomodulujące będą dodawane w zwiększającym się stężeniach i mierzona będzie ekspresja GFP w testowanych

28 28 PZ/0129/EP/RW komórkach. W tym celu komórki aktywowane lub spoczynkowe inkubowane będą w obecności lub bez badanych związków i przeprowadzony zostanie kinetyczny pomiar fluorescencji GFP. Ten sygnał fluorescencji dostarczy informacji na temat możliwej modulacji odpowiedzi komórkowej prowadzącej do zwiększenia lub inhibicji ekspresji cytokin. W oparciu o otrzymane dane opracowany zostanie protokół eksperymentalny, który pozwoli na zastosowanie kilku linii komórkowych reprezentujących różne linie komórkowe w pojedynczym teście. Wyniki ułatwią wybranie linii komórkowych do złożenie i testowania całego panelu reporterowych linii komórkowych, prototypu chipu komórkowego. Linie komórkowe wybrane do chipu komórkowego muszą spełniać następujące kryteria: Charakterystyka fenotypowa identyczna jak w przypadku oryginalnej linii komórkowej Zdolność dawania wykrywalnego sygnału fluorescencji w odpowiedzi na specyficzne dla danej linii bodźce immunologiczne i farmakologiczne Niski poziom spontanicznej fluorescencji związanej z GFP Stabilność wszystkich pożądanych charakterystyk po wielu pasażach (kilku miesiącach hodowli) Pożądane jest uzyskanie wiedzy niezbędnej do optymizacji prototypu chipu komórkowego. W szczególności ważne jest zgromadzenie danych eksperymentalnych na temat poziomu wrażliwości wykrywania przy pomocy fluorescencji zmian ekspresji genów obserwowanych w przypadku wybranych ksenobiotyków. Otrzymane dane powinny wskazywać możliwe problemy i sugerować przyszły rozwój. Bazując na wynikach otrzymanych przy użyciu komercyjnie dostępnych fluoroimagerów możemy również określić wymagania techniczne dla detektora fluorescencji, co może dodatkowo ulepszyć ten test. Namnożenie reporterowych linii komórkowych [0106] Klony komórkowe zostały namnożone i przetransportowane do miejsca bankowania. W banku komórek przechowywanych jest wiele próbek ponad 50 reporterowych klonów komórkowych transfekowanych GFP o odpowiedniej charakterystyce fenotypowej. Charakterystyka fenotypowa reporterowych linii komórkowych [0107] Ponieważ aktywacja TPA i jonomycyną odzwierciedla aktywację limfocytów T tylko do pewnego stopnia, testowano inne sposoby aktywacji reporterowych linii komórkowych pochodzących od EL4. Testowano możliwość zastosowania przeciwciała anty-cd3 do aktywacji limfocytów T EL-4. W serii eksperymentów hodowano reporterowe klony EL4 na płytkach pokrytych przeciwciałami anty-cd3. Analiza FACS ekspresji GFP pokazała, że przeciwciało anty-cd3 nie indukowało ekspresji GFP. Aby sprawdzić funkcjonalność płytki pokrytej przeciwciałami anty-cd3, wykonano test proliferacji. Wyniki pokazały, że przeciwciało anty-cd3 powodowało zahamowanie proliferacji komórek EL4, co zostało wcześniej pokazane. Obecnie sprawdzana jest możliwość użycia konkawaliny A, innego aktywatora limfocytów T. [0108] Aby skorelować dane dotyczące ekspresji GFP z efektem na ekspresję endogennego mrna cytokiny przeprowadzono analizę RT-PCR. Nietransfekowane komórki EL4 i BW aktywowano TPA i jonomycyną lub przeciwciałem anty-cd3 i przygotowano RNA. Po syntezie cdna wykonano RT-PCR, aby wykryć ekspresję IL-2, IFN-γ i GAPDH (kontrola). Oogólnie wyniki zgadzają się z danymi odnośnie ekspresji GFP. W komórkach BW nieindukowanych i po aktywacji nie wykryto mrna ani dla IL-2, ani dla IFN-γ.

29 29 PZ/0129/EP/RW W komórkach EL4 ekspresja IL-2 i IFN-γ była indukowana przez TPA i jonomycynę, ale nie przez przeciwciało anty-cd3. Wykrywanie białka zielonej fluorescencji [0109] Porównano różne metody pomiarów fluorescencji GFP w reporterowych liniach komórkowych w dwóch laboratoriach. Wstępne testy przy użyciu komórek wykazujących konstytutywną ekspresję GFP pokazały, że wykrywanie GFP jest możliwe przy użyciu czytników ELISA. W Norweskim Instytucie Zdrowia Publicznego (NIPH) porównano FluoStar i FACS, podczas gdy w instytucie RIVM porównano FluoStar, FluoImager i mikroskopię fluorescencyjną. Zaobserwowano dobrą ilościową korelację pomiędzy wynikami otrzymanymi odpowiednio przy użyciu FluoStar i FACS oraz pomiędzy FluoStar i FluoImager oraz dobrą ilościową korelację z mikroskopią fluorescencyjną. Testowanie żywotności komórek [0110] Prace mające na celu określenie zakresu toksycznego wszystkich substancji chemicznych wymienionych w Tabeli II dla wszystkich linii komórkowych opracowanych w trakcie projektu posunęły się na przód. Podstawowym stosowanym testem cytotoksyczności był test uwalniania LDH. Różne testy cytotoksyczności przeprowadzono niezależnie w dwóch laboratoriach. Dane zaprezentowane odpowiednio na Rycinie 20 i 21 porównano i przeanalizowano, co pozwoli na zadecydowanie o zakresie stężeń, które zostaną zastosowane do testowania Fluorescencyjnego Chipu Komórkowego. Dodatkowo dokonano pomiarów cytotoksyczności związanej z rozpuszczalnikiem, aby wykluczyć możliwość wpływu rozpuszczalnika na wynik testu. Wstępne testy odpowiedzi reporterowych linii komórkowych na modelowe ksenobiotyki [0111] Zbadano efekt tetrachloroplatynianu i siarczanu niklu na reporterową linię komórkową J/p4-5 IL1βdEGFP/4. Na początku zmierzono poziom NO w supernatantach testowanych komórek narażonych na działanie tych substancji. Zarówno tetrachloroplatynian, jak i siarczan niklu powodowały zwiększenie poziomu NO. Chociaż linie komórkowe stymulowane tymi związkami nie wykazywały zauważalnej fluorescencji pod mikroskopem, zaobserwowano zwiększenie ilości mrna dla GFP w klonie stymulowanym tetrachloroplatynianem (100 µm) przez 6 h. [0112] Efekt cyklosporyny A, rapamycyny i TCDD (dioksyna) na wybrane limfocytarne reporterowe linie komórkowe został oceniony niezależnie w trzech laboratoriach. Przetestowano wpływ cyklosporyny A, rapamycyny i TCDD (dioksyna) na bazową i indukowalną ekspresję GFP w komórkach EL4 oraz reporterowych komórkach dla IL-2, EL/p1-5 IL2-EGFP/3 i EL/p1-5 IL2-dEGFP/6. Bazowa ekspresja GFP komórek pochodzących od EL-4 nie uległa zmianie pod wpływem traktowania komórek żadnym z powyższych związków chemicznych. Skutkiem aktywacji komórek EL4 TPA i jonoforem był wzrost fluorescencji EGFP w pomiarach dokonywanych za pomocą FACS, mikroskopu fluorescencyjnego i czytnika płytek Fluorostar. Wykazano, że cyklosporyna A zahamowała całkowicie ekspresję GFP indukowaną przez aktywację do poziomu bazowego (Ryciny 23 i 24). Taki hamujący efekt cyklosporyny obserwowano niezależnie w trzech laboratoriach przeprowadzających takie eksperymenty. Ponadto, takie hamowanie ekspresji EGFP wykryto przy zastosowaniu wszystkich trzech technik pomiaru EGFP (tzn. FACS, mikroskop fluorescencyjny i Fluorostar). Rapamycyna i TCDD nie wywarły żadnego wpływu na ekspresję GFP indukowaną poprzez aktywację. A zatem, otrzymano ważny dowód koncepcji testowania przy użyciu

30 30 PZ/0129/EP/RW Fluorescencyjnego Chipu Komórkowego, mianowicie wykryto obecność modelowego ksenobiotyku immunosupresyjnego (cyklosporyny A,; Rycina 24) przy pomocy odczytu opartego na mikropłytkach. Dodatkowa analiza oparta na metodzie RT-PCR pokazała, że traktowanie komórek cyklosporyną A zahamowało zwiększenie ekspresji IL-2 i IFN-γ w aktywowanych reporterowych liniach komórkowych, podczas gdy rapamycyna i TCDD nie miały żadnego wpływu na ekspresję (Rycina 25). Wyniki te pokazują, że cyklosporyna A równolegle hamowała indukcję endogennych genów cytokin i reporterowego transgenu GFP. [0113] Transfekowane GFP klony komórkowe BW również zostały zastosowane do sprawdzenia efektu związków immunomodulujących. Cyklosporyna A, rapamycyna i TCDD nie wpływały na bazową ekspresję GFP, a ponieważ nie można było indukować ekspresji GFP, nie było możliwe analizowanie wpływu na aktywowaną ekspresję. Przykład 8. Wstępna walidacja nowego testu względem dostępnych danych dotyczących zwierzęcej i ludzkiej immunotoksyczności. Prototyp chipu komórkowego. Metodyka i materiały do badań [0114] Prace rozpoczną się od dostarczenia wszystkim współpracownikom panelu reporterowych linii komórkowych prototypu chipu komórkowego złożonego w poprzednich przykładach. Standaryzowany protokół przeprowadzania takiego testu, opracowany w Przykładzie 7, zostanie wdrożony we wszystkich współpracujących laboratoriach. Wszystkie laboratoria zastosują następnie taki sam zestaw testowanych substancji. W tym przykładzie zastosowany zostanie nie tylko zestaw ksenobiotyków z określonymi właściwościami immunotoksycznymi (patrz Tabela 2), ale też zestaw obojętnych substancji, dla których jest mało prawdopodobne, aby wywierały efekt immunotoksyczny in vivo. Wszystkie eksperymenty zostaną przeprowadzone z użyciem całego zestawu reporterowych linii komórkowych, prototypu chipu komórkowego. Zebranie wzorów odpowiedzi na te ksenobiotyki pozwoli na porównanie tych wzorów z dostępnymi danymi. Przeprowadzone zostanie porównanie wzorów wygenerowanych przez modelowe immunotoksyny, substancje, które mogą zostać zaklasyfikowane jako substancje drażniące, ale nieposiadające właściwości immunomodulujących oraz kontrolne substancje obojętne, inne niż ksenobiotyki. Następne znane i nieznane (ślepe) próby ksenobiotyków zostaną przetestowane w równoległych eksperymentach we wszystkich laboratoriach. Porównanie danych otrzymanych niezależnie w laboratoriach uczestniczących w badaniach dostarczy wstępnych danych odnośnie powtarzalności odpowiedzi reporterowych linii komórkowych oraz wrażliwości technologii na drobne różnice w protokołach eksperymentalnych. Pożądane jest otrzymanie informacji w formacie dwuwymiarowych wzorów, które opisują działanie różnych modelowych ksenobiotyków (substancji, o których wiadomo, że posiadają właściwości immunomodulujące in vivo) na różne geny w różnych liniach komórkowych. Wyniki Przygotowanie do prac eksperymentalnych [0115] Do wykrywania fluorescencji zastosowano czytnik fluorescencji, luminescencji i absorbancji Fluorstar Galaxy Multiwell (BMG Labtechnologies). Dwa laboratoria otrzymały dwie linie komórkowe 3T3-L1/CMV-

31 31 PZ/0129/EP/RW EGFP i HEL-30/CMV-EGFP i zastosowały je do testowania protokołów pomiarów fluorescencji i żywotności komórek. Ekspozycja na ksenobiotyki / Układ Chipu Komórkowego [0116] Komórki wysiano na 24-dołkowych mikropłytkach w gęstości 0.5x10 6 komórek/ml, a końcowa objętość wynosiła 1.5 ml/studzienkę. W każdym eksperymencie zastosowano dwie kontrole dla każdej linii komórkowej. Jedną kontrolą były komórki w pożywce wzrostowej, a drugą komórki w obecności mieszaniny indukującej (sól wapniowa jonomycyny (nr kat. #1-0634, Sigma) i 10 ng/ml PMA (Sigma)). W niektórych przypadkach mieszanina indukująca zawierała tylko jonomycynę lub LPS w stężeniu 100 ng/ml zamiast PMA i jonomycyny. Komórki inkubowano z różnymi związkami w takim stężeniu, które prowadziło do 10% cytotoksyczności, oraz w stężeniu 10x i 100x niższym w obecności lub przy braku mieszaniny indukującej. Komórki inkubowano w wilgotnej atmosferze, w 37 C i 5% CO 2. Po 4 h pobierano 0.5 ml każdej próbki i analizowano przy użyciu cytometrii przepływowej. Pozostałe części próbek inkubowano przez kolejne 20 h (w sumie 24 h), a następnie analizowano przy użyciu cytometrii przepływowej. Cytometria przepływowa [0117] Próbki analizowano przy pomocy cytometru przepływowego EPICS XL-MCL Coulter z oprogramowaniem do analizy danych Expo v.2 Analysis Software/ Expo32 (Applied Cytometry Systems, Sheffield, UK) lub innego odpowiedniego cytometru przepływowego. Komórki żywe i martwe zostały zbramkowane osobno, a wyniki opracowano bazują na fluorescencji wyłącznie żywych komórek. Ustalono odpowiednie regiony dla komórek kontrolnych i stosowano te same regiony dla indukowanych komórek kontrolnych i komórek poddanych działaniu związków chemicznych. Procent pozytywnych komórek i intensywność fluorescencji zapisywano i używano w dalszych obliczeniach. Prezentacja danych [0118] Z mediany intensywności fluorescencji żywych komórek wyliczono współczynniki. Komórki hodowane w obecności lub przy braku jonomycyny i PMA analizowano osobno. Każdemu klonu inkubowanemu w obecności lub przy braku jonomycyny i PMA, ale bez dodatkowych związków chemicznych, przypisywano współczynnik = 1, a stosując tę wartość wyliczano współczynniki dla pozostałych ekspozycji. W celu przeprowadzenia analizy statystycznej zgromadzono wyniki eksperymentów dla takich samych ekspozycji, zastosowano program do analizy statystycznej SigmaStat 2.03 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA). Analiza statystyczna [0119] Przeprowadzono jednoczynnikową analizę wariancji (one way ANOVA). W przypadku, gdy nie można było założyć normalności rozkładu stosowano test Kruskala-Wallisa. Jeśli różnice pomiędzy grupami były istotne statystycznie (p < 0.05), przeprowadzano test porównań wielokrotnych. W przypadku danych o rozkładzie normalnym stosowano test Bonferroniego i porównań wielokrotnych względem kontroli. Kontrolą była próbka inkubowana tylko w obecności lub przy braku PMA i jonomycyny. Przy braku normalności stosowano test Dunnetta dla porównań wielokrotnych względem kontroli. Związki chemiczne zastosowane do testowania prototypu chipu komórkowego [0120] Cyklosporynę A (do biologii molekularnej, Tolypocladium inflatum, minimalna czystość 95%, Sigma) rozcieńczono w etanolu, aby otrzymać roztwór wyjściowy (stock) o stężeniu 5 mg/ml, który przechowywano w -20 C. Roztwór wyjściowy rozcieńczano pożywką przed eksperymentem. Rapamycynę (minimalna czystość

32 32 PZ/0129/EP/RW 95%, Sigma) rozpuszczano w DMSO, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 2 mg/ml, który przechowywano w -20 C. Roztwór wyjściowy rozcieńczano pożywką przed eksperymentem. Izetionian pentamidyny (Sigma) rozpuszczano w DMSO, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 25 mg/ml, który przechowywano w -20 C. Roztwór wyjściowy rozcieńczano pożywką przed eksperymentem. Przygotowano roztwór wyjściowy (+/-) talidomidu (czystość > 98%, Sigma) o stężeniu 0.2 M i przechowywano go w -20 C. Roztwór wyjściowy rozcieńczano pożywką przed eksperymentem, przy czym otrzymywano biały osad. Po ponownym zawieszeniu, roztwór używano do kolejnych rozcieńczeń. Tlenek bis(tributylocyny) (TBTO; czystość 96%, Aldrich) rozcieńczono w etanolu, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 10 mm, który przechowywano w -20 C i rozcieńczano pożywką przed użyciem. Roztocza kurzu domowego D- pteronyssinus (ekstrakt alergenu Alutard SQ Depot) (roztwór do iniekcji, roztwór SQ-U/mL, ALK- Abelló, Horsholm, Dania) przechowywano w 4-8 C wg z aleceń producenta i rozcieńczano pożywką tuż przed użyciem. 2,4-dinitrochlorobenzen (DNCB) (czystość minimum 98%, Sigma) rozcieńczono w etanolu, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 2 mm, który przechowywano w -20 C i rozcieńczono pożywką przed użyciem. Benzokainę (4-aminobenzoesan etylu, Sigma) rozcieńczono w etanolu, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 0.5 M, który przechowywano w -20 C i rozcie ńczono pożywką przed użyciem. 2,4- diizocyjanianotoluen (TDI) (Sigma, czystość 95%) rozpuszczano w dzień eksperymentu w DMSO, aby otrzymać roztwór o stężeniu 0.1M. Ten roztwór wyjściowy rozcieńczano następnie pożywką do 1 mm, a następnie rozcieńczano bardziej pożywką. Warto zauważyć, że roztwór TDI / DMSO ma większą gęstość niż pożywka, spada na dno probówki i staje się nierozpuszczalny. Biały osad zawieszano, aby otrzymać równomierny roztwór przed rozcieńczeniem. Tetrachloroplatynian potasu (II) (czystość 99.99%,Aldrich) rozcieńczano w medium, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 30 mm, który przechowywano w -20 C i rozcieńczano pożywką przed użyciem. Sól sodową Penicyliny G (benzylopenicylinę) (aktywność > 1477 U/mg, Sigma) rozcieńczano w medium, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 200 mm, który przechowywano w -20 C i rozcieńczano pożywką przed użyciem. SDS (czystość > 85%,Merck) rozpuszczano w DMSO, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 100 mm, który przechowywano w -20 C i rozcieńczano pożywką przed użyciem. Chlorek rtęci (II) (minimalna czystość 99.5%, Merck) ) rozcieńczono w etanolu, aby otrzymać roztwór wyjściowy o stężeniu 6 mm, który przechowywano w -20 C i rozcieńczano pożywką przed użyciem. Prototyp chipu komórkowego [0121] Do utworzenia prototypowego chipu komórkowego zastosowano następujące linie komórkowe: EL/pCA-dEGFP/9, EL/p1-5 IL2-dEGFP/6, EL/p2-5 IL4-dEGFP/2, EL/p1-5 IFNγ-dEGFP/3 i EL/p2-5 IL10- degfp/5, otrzymane poprzez transfekcję konstruktami DNA zawierającymi region promotorowy pochodzący od β-aktyny, IL-2, IL-4, IFN-γ i IL-10. Prototypowy chip komórkowy zastosowano do testowania różnych substancji. Wyniki testowania efektu różnych substancji przy użyciu prototypowego chipu komórkowego Immunosupresanty [0122] Cyklosporyna A i rapamycyna to dobrze znane leki immunosupresyjne używane przy transplantacji narządów. Pentamidyna jest używana jako lek przeciw pierwotniakom, ale wykazano, że hamuje ekspresję

33 33 PZ/0129/EP/RW różnych cytokin. Talidomid jest stosowany jako lek przeciwzapalny. Pokazano wcześniej, że tlenek bis(tributylocyny) (TBTO) posiada właściwości immunosupresyjne, zarówno in vivo, jak i in vitro. Cyklosporyna A [0123] Rycina 26 przedstawia wyniki testowania efektu cyklosporyny A przy użyciu prototypowego chipu komórkowego: komórki transfekowane elementami regulatorowymi dla aktyny (czarne słupki), IL-2 (szare słupki), IL-4 (słupki w szerokie paski), IL-10 (słupki w romby) i IFN-γ (słupki w wąskie paski) połączonymi z EGFP, narażono na kontakt z 1 µm CsA, co prowadziło do 10% cytotoksyczności, oraz z rozcieńczeniami 1:10 i 1:100 przez 24 h przy braku (A) oraz w obecności (B) jonomycyny i PMA (1 µm / 10 ng/ml). W komórkach nieindukowanych (A), w najwyższym stężeniu wykryto statystycznie istotne zmiany w porównaniu do kontroli dla aktyny, IL-4 i IL-10. W rozcieńczeniu 1:10 tylko IL-4 i IL-10 różniły się znamiennie statystycznie od kontroli. W stymulowanych komórkach (B) ekspresja wszystkich testowanych genów była istotnie statystycznie inna od odpowiadającej kontroli, z wyjątkiem IL-4 przy rozcieńczeniu 1:100. Wykresy pokazują średnią wartość ± SEM (n = 3). Statystycznie istotne zmiany są oznaczone *, gdy p<0.05,**, gdy p<0.01 i ***, gdy p< Przerywana linia przedstawia poziom kontroli. [0124] Przy braku jonomycyny i PMA zaobserwowano istotny statystycznie, zależny od dawki spadek dla IL-4 i IL-10 przy 1 i 0.1 µm. Nieoczekiwanie, zaobserwowaliśmy statystycznie istotną wyższą ekspresję aktyny w najwyższym stężeniu (1 µm) (Rycina 26A), w obecności jonomycymy i PMA zaobserwowaliśmy znacząco niższą indukcję we wszystkich klonach, we wszystkich stężeniach, z wyjątkiem IL-4 w najniższym stężeniu (Rycina 26B). Działanie supresyjne CsA w stymulowanych komórkach zostało potwierdzone dla IL-2 i IFN-γ poprzez użycie klonów transfekowanych tymi samymi elementami regulatorowymi, ale połączonymi ze stabilną formą EGFP. W klonach tych w obecności jonomycyny i PMA, w wyniku ekspozycji na CsA zaobserwowano zależne od dawki zmniejszenie ekspresji IL-2 w stężeniu 0.01 µm i 0.1 µm (p < 0.01) oraz zmniejszenie ekspresji IFN-γ w stężeniu 0.01 µm (p < 0.01) i 0.1 µm (p < 0.001). W przypadku braku jonomycyny i PMA nie zaobserwowano żadnego wpływy CsA na te komórki (dane nie zostały pokazane). Rapamycyna [0125] Rycina 27 przedstawia wyniki testowania efektów rapamycyny przy użyciu prototypowego chipu komórkowego: komórki transfekowane elementami regulatorowymi dla aktyny (czarne słupki), IL-2 (szare słupki), IL-4 (słupki w szerokie paski), IL-10 (słupki w romby) i IFN-γ (słupki w wąskie paski) połączonymi z EGFP, narażono na kontakt z rapamycyną w stężeniu 10 µg/ml, które powodowało 10% cytotoksyczność, oraz z rozcieńczeniami 1:10 i 1:100 przez 24 h przy braku (A) oraz w obecności (B) jonomycyny i PMA (1 µm / 10 ng/ml). W komórkach nieindukowanych (A), w najwyższym stężeniu zaobserwowano statystycznie istotny spadek fluorescencji w porównaniu z kontrolą dla IL-4 i IL-10. W stężeniu 1:10 IL-1 była ciągle hamowana, podczas gdy dla aktyny zaobserwowano istotny statystycznie wzrost. Wyniki otrzymane dla komórek stymulowanych IL-2, IL-4 i IL-10 (B) w najwyższym stężeniu były istotnie statystycznie inne niż odpowiednie kontrole. W stężeniach 1:10 i 1:100 dla aktyny i IL-2 zaobserwowano statystycznie istotny wzrost w porównaniu do odpowiednich kontroli. Na rycinach pokazano średnią ± SEM (n = 3 dla IL-10 i IFN-γ, n = 4 dla aktyny i IL-4, n = 5 dla IL-2 ). Statystycznie istotne zmiany są oznaczone *, gdy p<0.05,**, gdy p<0.01 i ***, gdy p< Przerywana linia przedstawia poziom kontroli.

34 34 PZ/0129/EP/RW [0126] W przypadku braku PMA i jonomycyny zaobserwowano statystycznie istotny spadek IL-4 we wszystkich stężeniach rapamycyny (10; 1 i 0,1 µg/ml), podczas gdy dla IL-10 zaobserwowano ekspresję tylko w najwyższym stężeniu. Wykryto również statystycznie istotny wzrost aktyny w dwóch niższych stężeniach (Rycina 27A). W obecności jonomycyny i PMA, w najwyższym stężeniu, rapamycyna powodowała hamowanie IL-2, IL-4 i IL-10.Również IFN-γ był hamowany w najwyższym stężeniu, lecz analiza statystyczna nie potwierdziła tego trendu, ze względu na niską moc testu (Rycina 27B). W dwóch niższych stężeniach (1 i 0,1 µg/ml) zaobserwowano statystycznie istotny wzrost dla IL-2 i aktyny. IL-10 i IFN-γ wykazywały trend wzrostowy, podczas gdy nie zaobserwowano wpływu na IL-4. Pentamidyna [0127] Rycina 28 przedstawia wyniki testowania efektu rapamycyny przy użyciu prototypowego chipu komórkowego: komórki transfekowane elementami regulatorowymi dla aktyny (czarne słupki), IL-2 (szare słupki), IL-4 (słupki w szerokie paski), IL-10 (słupki w romby) i IFN-γ (słupki w wąskie paski) połączonymi z EGFP, narażono na kontakt z pentamidyną w stężeniu 30 µg/ml, które powodowało 10% cytotoksyczność, oraz z rozcieńczeniami 1:10 i 1:100 przez 24 h przy braku (A) oraz w obecności (B) jonomycyny i PMA (1 µm / 10 ng/ml). W komórkach nieindukowanych (A), w najwyższym stężeniu oraz w stężeniu 1:10 zaobserwowano statystycznie istotne zmiany w porównaniu z kontrolą dla aktyny i IL-10. W stymulowanych komórkach (B) w najwyższym stężeniu wszystkie testowane cytokiny różniły się istotnie statystycznie od swoich kontroli. W stężeniu 1:10 IL-2, IL-4 i IL-10 różniły się istotnie statystycznie od swoich kontroli. Na rycinach pokazano średnią ± SEM (n = 3, a dla IL-2 n = 4). Statystycznie istotne zmiany są oznaczone *, gdy p<0.05,**, gdy p<0.01 i ***, gdy p< Przerywana linia przedstawia poziom kontroli. [0128] Za obserwowano wzrost aktyny w dwóch najwyższych stężeniach pentamidyny (30 i 3 µg/ml), podczas gdy IL-10 była hamowana w tych stężeniach przy braku PMA i jonomycyny (Rycina 28A). w obecności jonomycyny i PMA pentamidyna wywierała aktywność supresorową, podczas gdy w najwyższym stężeniu wszystkie cytokiny zostały zahamowane, a w stężeniu 1:10 wszystkie cytokiny z wyjątkiem IFN-γ zostały zahamowane (Rycina 28B). Ekspresja aktyny nie zmieniła się w obecności pentamidyny w przypadku komórek aktywowanych PMA i jonomycyną dla żadnego testowanego stężenia. Talidomid [0129] Ponieważ w teście uwalniania LDH talidomid nie wykazywał toksyczności, stężenie 1 mm zostało użyte jako najwyższe. W przypadku komórek poddanych ekspozycji na talidomid bez PMA i jonomycyny nie zaobserwowano żadnych istotnie statystycznych zmian w porównaniu do odpowiednich kontroli, z wyjątkiem aktyny w stężeniu 1 mm (p < 0,05) i nawet wtedy spadek był niewielki (hamowanie 5-10%, dane niepokazane). Takie same wyniki były widoczne w obecności jonomycyny i PMA, tylko aktyna została zahamowana (p < 0,01). Natomiast, w eksperymentach dla IL-2 i IFN-γ połączonych ze stabilną formą EGFP przy braku jonomycyny i PMA zaobserwowano istotną statystycznie inhibicję wynoszącą 10% dla IL-2 w stężeniu 1 mm (p < 0,05). W obecności jonomycyny i PMA zarówno dla IL-2 i IFN-γ zaobserwowano zależną od dawki inhibicję, w stężeniu 1 mm (p < 0,001). W przypadku ekspozycji na talidomid nie wykryto żadnych efektów w dwóch niższych stężeniach. Tlenek bis(tributylocyny) (TBTO)

35 35 PZ/0129/EP/RW [0130] W eksperymentach przy użyciu IL-2 i IFN-γ połączonych ze stabilną formą EGFP, przy braku jonomycyny i PMA dla wszystkich testowanych stężeń TBTO (50; 5 i 0,5 µm) nie wykazano zmian ekspresji zarówno IL-2, jak i IFN-γ. W obecności jonomycyny i PMA zaobserwowano statystycznie istotne hamowanie wynoszące 10% IL-2 w rozcieńczeniu 1:10 (5 nm) (p < 0,01). Alergeny i czynniki wywołujące odpowiedź autoimmunologiczną [0131] Chcieliśmy także sprawdzić możliwość użycia panelu Chipu Komórkowego do wykrywania (i rozróżniania) różnych rodzajów alergenów. Uwzględniono trzy klasy alergenów: (1) alergię oddechową na alergeny białkowe związaną z IgE, jako przykładowy alergen zastosowano alergen roztoczy Der pi, (2) alergia kontaktowa na substancje o niskiej masie cząsteczkowej wywoływana przez limfocyty T swoiste dla koniugatów hapten-białko, jako przykładowe alergeny zastosowano 1-chloro-2,4-dinitrobenzen (silny alergen) i benzokainę (słaby alergen), i (3) chemiczne alergeny o niskiej masie cząsteczkowej, powodujące symptomy kliniczne podobne do alergii związanej z IgE, ale z nieznanym mechanizmem działania, jako przykładowy alergen zastosowano 2,4-diizocyjanianotoluen, dla którego obecność specyficznego IgE jest wykazywana w mniejszości przypadków, oraz tetrachloroplatynian toluenu, dla którego obecność specyficznego IgE jest regularnie wykazywana. Zastosowano również penicylinę G, ponieważ wiadomo o niej, że indukuje nadwrażliwość lekową u ludzi. Ponadto, zastosowano również środek drażniący (dodecylosiarczan sodu), ponieważ rozróżnienie pomiędzy środkami drażniącymi a alergenami kontaktowymi jest ważnym problemem w testowaniu alergii kontaktowej. W końcu, zastosowano też chlorek rtęci, ponieważ indukuje on podtypy Th1 i Th2, co prowadzi do wywołania odpowiedzi autoimmunologicznej. Der p alergen roztoczy kurzu domowego [0132] Rycina 29 przedstawia wyniki testowania efektu alergenu kurzu domowego Der p przy użyciu prototypowego chipu komórkowego: komórki transfekowane elementami regulatorowymi dla aktyny (czarne słupki), IL-2 (szare słupki), IL-4 (słupki w szerokie paski), IL-10 (słupki w romby) i IFN-γ (słupki w wąskie paski) połączonymi z EGFP, narażono na kontakt z 3000 SQU/ml Der p (najwyższe stężenie), oraz z rozcieńczeniami 1:10 i 1:100 przez 24 h przy braku (A) oraz w obecności (B) jonomycyny i PMA (1 µm / 10 ng/ml). W komórkach nieindukowanych (A) w najwyższym stężeniu, odnotowano statystycznie istotny wzrost w porównaniu do kontroli dla wszystkich klonów z wyjątkiem IL-10. W obecności stymulatorów nie zarejestrowano zmian we fluorescencji (B). Na rycinach pokazano średnią ± SEM (n = 3 dla IL-10, n = 4 dla aktyny i IL-4, n = 5 dla IFN-γ i n = 7 dla IL-2 ). Statystycznie istotne zmiany przy p < 0,05 są oznaczone *. Przerywana linia przedstawia poziom kontroli. [0133] Używaliśmy roztwór Der p wyprodukowany do testów skórnych prick i dodawaliśmy go do komórek w stężeniu 3000, 300 i 30 SQ- U/ml. Der p powodował wzrost fluorescencji w najwyższym stężeniu przy braku jonomycyny i PMA dla wszystkich klonów z wyjątkiem IL-10 (Rycina 29A). nie zaobserwowano znaczących zmian w obecności jonomycyny i PMA (Rycina 29B). 1-chloro-2,4-dinitrobenzen (DNCB) [0134] Rycina 30 przedstawia wyniki testowania efektu DNCB przy użyciu prototypowego chipu komórkowego: komórki transfekowane elementami regulatorowymi dla aktyny (czarne słupki), IL-2 (szare słupki), IL-4 (słupki w szerokie paski), IL-10 (słupki w romby) i IFN-γ (słupki w wąskie paski) połączonymi z EGFP, narażono na kontakt z DNCB w stężeniu 10 µm, które powodowało 10% cytotoksyczność, oraz z

36 36 PZ/0129/EP/RW rozcieńczeniami 1:10 i 1:100 przez 24 h przy braku (A) oraz w obecności (B) jonomycyny i PMA (1 µm / 10 ng/ml). W komórkach nieindukowanych (A) w najwyższym stężeniu zaobserwowano statystycznie istotny wzrost fluorescencji w porównaniu do kontroli dla aktyny, IL-2,IL-4 i IFN-γ. Po stymulacji nie zaobserwowano statystycznie znaczących zmian (B). Na rycinach pokazano średnią ± SEM (n = 3). Statystycznie istotne zmiany są oznaczone *, gdy p<0.05,**, gdy p<0.01 i ***, gdy p< Przerywana linia przedstawia poziom kontroli. [0135] Przy braku jonomycyny i PMA w najwyższym stężeniu (10 µm) DNCB zauważono zwiększoną ekspresję dla wszystkich klonów, z wyjątkiem IL-10. Najwyższy wzrost zaobserwowano w komórkach transfekowanych elementami regulatorowymi aktyny (Rycina 30A). W obecności jonomycyny i PMA nie zauważono statystycznie istotnych zmian, ale występował trend w stronę obniżania się fluorescencji w najwyższym stężeniu (Rycina 30B). Dla komórek transfekowanych stabilną formą EGFP otrzymano podobne rezultaty. DNCB nie zmieniało ekspresji IL-2 oraz IFN-γ w obecności jonomycyny i PMA, podczas gdy przy braku czynników aktywujących dla IFN-γ zauważono wyraźny zależny od dawki wzrost osiągający próg znamienności statystycznej przy najwyższym stężeniu (p < 0,001). Benzokaina [0136] Rycina 31 przedstawia wyniki testowania efektu benzokainy przy użyciu prototypowego chipu komórkowego: komórki transfekowane elementami regulatorowymi dla aktyny (czarne słupki), IL-2 (szare słupki), IL-4 (słupki w szerokie paski), IL-10 (słupki w romby) i IFN-γ (słupki w wąskie paski) połączonymi z EGFP, narażono na kontakt z benzokainą w stężeniu 1 mm (najwyższe stężenie), oraz z rozcieńczeniami 1:10 i 1:100 przez 24 h przy braku (A) oraz w obecności (B) jonomycyny i PMA (1 µm / 10 ng/ml). Dla aktyny w komórkach nieindukowanych (A), w najwyższym stężeniu widoczny jest statystycznie istotny wzrost fluorescencji w porównaniu do kontroli. W obecności czynników stymulujących przy najwyższym stężeniu zredukowany został poziom IL-2, IL-10 i IFN-γ. IL-2 i IL-10 były również hamowane w stężeniu 1:10 (B). Na rycinach pokazano średnią ± SEM (n = 3). Statystycznie istotne zmiany są oznaczone *, gdy p<0.05,**, gdy p<0.01 i ***, gdy p< Przerywana linia przedstawia poziom kontroli. [0137] Ponieważ nie zaobserwowano toksyczności benzokainy w teście uwalniania LDH, jako najwyższe zastosowano stężenie 1 mm. Przy braku PMA i jonomycyny zaobserwowano statystycznie istotny wzrost tylko dla aktyny w najwyższym stężeniu (Rycina 31A). w obecności PMA i jonomycyny statystycznie istotny hamujący efekt na IL-2 i IL-10 był widoczny w dwóch najwyższych stężeniach. IFN-γ również był hamowany, ale tylko w najwyższym stężeniu (Rycina 31B). 2,4-diizocyjanianotoluen (TDI) [0138] Rycina 32 przedstawia wyniki testowania efektu TDI przy użyciu prototypowego chipu komórkowego: komórki transfekowane elementami regulatorowymi dla aktyny (czarne słupki), IL-2 (szare słupki), IL-4 (słupki w szerokie paski), IL-10 (słupki w romby) i IFN-γ (słupki w wąskie paski) połączonymi z EGFP, narażono na kontakt z TDI w stężeniu 500 µm, które powodowało 10% cytotoksyczność, oraz z rozcieńczeniami 1:10 i 1:100 przez 24 h przy braku (A) oraz w obecności (B) jonomycyny i PMA (1 µm / 10 ng/ml). W komórkach nieindukowanych (A), w najwyższym stężeniu zaobserwowano statystycznie istotne zmiany fluorescencji w porównaniu z kontrolą dla IFN-γ. Natomiast, w przypadku komórek stymulowanych (B) w najwyższym stężeniu tylko IL-4 była statystycznie istotnie inna niż kontrola. Na rycinach pokazano średnią ± SEM (n = 3

37 37 PZ/0129/EP/RW dla aktyny, IL-4 i IL-10, n = 7 dla IL-2 i IFN-γ). Statystycznie istotne zmiany przy p<0.05 są oznaczone *. Przerywana linia przedstawia poziom kontroli. [0139] Komórki zostały narażone na kontakt z TDI w stężeniach 500, 50 i 5 µm. W przypadku braku jonomycyny i PMA tylko IFN-γ wykazywał statystycznie istotną indukcję, ale tylko w najwyższym stężeniu (Rycina 32A). Natomiast w obecności jonomycyny i PMA statystycznie istotny wzrost zaobserwowano dla IL- 4 i, znowu, tylko w najwyższym stężeniu (Rycina 32B). Tetrachloroplatynian potasu K 2 PtCl 4 [0140] W eksperymentach przy użyciu IL-2 i IFN-γ połączonych ze stabilną formą EGFP, komórki były poddane ekspozycji na K 2 PtCl 4 w stężeniu 100, 10 i 1 µm. w obecności jonomycyny i PMA ekspozycja skutkowała zależną od dawki redukcją ekspresji IL-2 i IFN-γ. Statystycznie istotne zmiany zaobserwowano dla stężenia 100 µm, dla IL-2 (p < 0,001) i dla IFN-γ (p < 0,05). Przy braku jonomycyny i PMA nie zaobserwowano żadnych zmian pod wpływem ekspozycji na K 2 PtCl 4. Penicylina G [0141] W naszych badaniach penicylina G nie wykazywała działania toksycznego. W zakresie testowanych stężeń (10; 1 i 0,1 mm) ekspozycja na penicylinę G nie powodowała zmian ekspresji, ani IL-2, ani IFN-γ w komórkach transfekowanych IL-2 i IFN-γ połączonych ze stabilną formą EGFP. Wyniki takie otrzymano zarówno w przypadku obecności PMA i jonomycyny, jak również przy ich braku. Dodecylosiarczan sodu (SDS) [0142] Komórki poddano ekspozycji na SDS w stężeniu 300; 30 i 3 µm. W komórkach transfekowanych IL-2 i IFN-γ połączonych ze stabilną formą EGFP, w obecności jonomycyny i PMA, ekspozycja na SDS skutkowała widoczną, zależną od dawki redukcję ekspresji IL-2, p < 0,05 w najwyższym stężeniu. Nie zaobserwowano natomiast wpływu na ekspresję IFN-γ. Przy braku jonomycyny i PMA nie zaobserwowano żadnych efektów. Chlorek rtęci (HgCl 2 ) [0143] Komórki transfekowane IL-2 i IFN-γ połączonymi ze stabilną formą EGFP poddano ekspozycji na chlorek rtęci w stężeniu 6; 0,6 i 0,06 µm. W przypadku obecności PMA i jonomycyny ekspozycja na chlorek rtęci skutkowała widoczną, zależną od dawki redukcją ekspresji IFN-γ osiągając próg znamienności statystycznej przy 6 µm (p < 0,05). Nie zaobserwowano jednak żadnego wpływu na ekspresję IL-2. Przy braku jonomycyny i PMA nie zaobserwowano żadnych efektów. Wnioski [0144] Opisany przykład wykonania systemu do testowania immunotoksyczności in vitro posiada wiele ważnych zalet. Inne metody pomiaru ekspresji cytokin, takie jak RT-PCR i ELISA, są bardziej czasochłonne. Zilustrowany system jest oparty na technologii fluorescencji, która umożliwia jednoczesną ocenę żywotności. Dostępnych jest wiele metod wykrywania fluorescencji, np. czytnik płytek Fluostar, mikroskopia fluorescencyjna lub cytometria przepływowa. Chociaż na początku projektu stosowano zarówno cytometrię przepływową, jak i pomiary oparte na płytkach, szybko zdecydowano, aby stosować cytometrię przepływową, ze względu na zalety, takie jak jednoczesny pomiar żywotności, możliwość pomiaru intensywności fluorescencji na komórkę i możliwość oceny wpływu na kształt i rozmiar komórki. [0145] Przeprowadzono wiele kontroli jakości opisanych gdzie indziej. Po pierwsze, transfekowane linie komórkowe i macierzyste linie komórkowe posiadają podobną ekspresję genów, zarówno bazalną, jak i w

38 38 odpowiedzi na stymulację. Po drugie, intensywność fluorescencji koreluje z ekspresją genu EGFP oraz genu macierzystego (macierzysty oznacza np. gen IL-4 w przypadku komórek transfekowanych IL-4/EGFP) i, w końcu, poziomy cytokin korelują z intensywnościami fluorescencji. [0146] Testowany panel składał się tylko z jednego typu komórek (EL4; limfocyty T). Zwiększony wybór typów komórek i cytokin zwiększyłby prawdopodobnie precyzję oraz wrażliwość Chipu Komórkowego. Jednym ograniczeniem w zilustrowanych systemach in vitro jest brak komórek prezentujących antygen. Aby substancja dała jakiś efekt w zilustrowanym systemie musi ona oddziaływać bezpośrednio z komórkami. Wysoki poziom białka w pożywce może zmniejszać interakcje pomiędzy substancją a komórką. Związki immunosupresyjne często wywierają efekt bezpośrednio na limfocyty T, co sugeruje, że białaczka T- komórkowa użyta w zilustrowanym przykładzie wykonania wynalazku jest odpowiednią docelową linią komórkową do oceny potencjału immunosupresyjnego. Jednakże czynniki uczulające często wywierają efekt na inne typy komórek, takie jak keratynocyty (KC) i komórki dendrytyczne (DC), co sugeruje, że limfocyty T mogą nie być odpowiednią linią docelową do oceny potencjału uczulającego. Pogląd ten jest poparty faktem, że zilustrowany przykład użycia, który wykorzystuje linię limfocytów T, był skuteczniejszy w wykrywaniu substancji immunosupresyjnych niż uczulających. Linie komórkowe pochodzące od keratynocytów i komórek dendrytycznych powinny być zawarte w panelu komórek użytych w chipie komórkowym. [0147] W większości modeli narażenia in vitro brakuje architektury narządowej, co zmniejsza możliwości oddziaływań pomiędzy komórkami, szczególnie jeśli jeden z typów komórek jest osiadły. Ten brak oddziaływań często utrudnia dojrzewanie komórek, uniemożliwiając ocenę wrażliwości komórek na toksyczne substancje na różnych etapach rozwoju. [0148] Zarówno stabilne jak i destabilizowane EGFP dostarczyło znaczących wyników. Wybór pomiędzy tymi typami wymaga dodatkowych testów. Reasumując, zilustrowany przykład użycia chipu komórkowego może być użyteczny we wstępnych badaniach służących identyfikacji immunotoksyczności. Linie komórkowe innego pochodzenia oraz dodatkowe związki powinny zostać przetestowane i być może zastosowane w innych przykładach użycia chipu komórkowego według niniejszego wynalazku. LISTA SEKWENCJI [0149] <210> 1 <211> 4994 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 1 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gactatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatgcat 360 ggtcgaggtg agccccacgt tctgcttcac tctccccatc tcccccccct ccccaccccc 420 aattttgtat ttatttattt tttaattatt ttgtgcagcg atgggggcgg gggggggggg 480 ggggcgcgcg ccaggcgggg cggggcgggg cgaggggcgg ggcggggcga ggcggagagg 540 tgcggcggca gccaatcaga gcggcgcgct ccgaaagttt ccttttatgg cgaggcggcg 600 gcggcggcgg ccctataaaa agcgaagcgc gcggcgggcg ggagtcgctg cgacgctgcc 660 ttcgccccgt gccccgctcc gccgccgcct cgcgccgccc gccccggctc tgactgaccg 720 cgttactccc acaggtgagc gggcgggacg gcccttctcc ttcgggctgt aattagcgct 780

39 accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct 840 ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg 900 cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt 960 gccctggccc accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc 1020 cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga 1080 gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga 1140 gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa 1200 catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga 1260 caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag 1320 cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct 1380 gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg 1440 cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga 1500 gctgtacaag tccggactca gatctaagct gaaccctcct gatgagagtg gccccggctg 1560 catgagctgc aagtgtgtgc tctcctgagg atccagatct cgagctcaag cttcgaattc 1620 tgcagtcgac ggtaccgcgg gcccgggatc caccggatct agataactga tcataatcag 1680 ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa 1740 cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg 1800 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 1860 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaacgc gtaaattgta agcgttaata 1920 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg 1980 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc 2040 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa 2100 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt 2160 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac 2220 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta 2280 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg 2340 cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 2400 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa 2460 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt 2520 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat 2580 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag 2640 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat 2700 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt 2760 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg 2820 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc 2880 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat 2940 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt 3000 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac 3060 tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg 3120 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc 3180 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa 3240 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc 3300 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg 3360 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg 3420 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa 3480 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg 3540 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct 3600 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc 3660 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa 3720 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat 3780 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt 3840 cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg 3900 cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa 3960 acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg 4020 ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc 4080 agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat 4140 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt 4200 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc

40 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt 4320 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac 4380 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt 4440 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct 4500 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga 4560 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac 4620 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg 4680 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt 4740 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc 4800 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg 4860 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc 4920 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc 4980 catgcattag ttat 4994 <210> 2 <211> 5050 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 2 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gactatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatgcat 360 ggtcgaggtg agccccacgt tctgcttcac tctccccatc tcccccccct ccccaccccc 420 aattttgtat ttatttattt tttaattatt ttgtgcagcg atgggggcgg gggggggggg 480 ggggcgcgcg ccaggcgggg cggggcgggg cgaggggcgg ggcggggcga ggcggagagg 540 tgcggcggca gccaatcaga gcggcgcgct ccgaaagttt ccttttatgg cgaggcggcg 600 gcggcggcgg ccctataaaa agcgaagcgc gcggcgggcg ggagtcgctg cgacgctgcc 660 ttcgccccgt gccccgctcc gccgccgcct cgcgccgccc gccccggctc tgactgaccg 720 cgttactccc acaggtgagc gggcgggacg gcccttctcc ttcgggctgt aattagcgct 780 accggactca gatctcgagc tcaagcttcg aattctgcag tcgacggtac cgcgggcccg 840 ggatccaccg gtcgccacca tggtgagcaa gggcgaggag ctgttcaccg gggtggtgcc 900 catcctggtc gagctggacg gcgacgtaaa cggccacaag ttcagcgtgt ccggcgaggg 960 cgagggcgat gccacctacg gcaagctgac cctgaagttc atctgcacca ccggcaagct 1020 gcccgtgccc tggcccaccc tcgtgaccac cctgacctac ggcgtgcagt gcttcagccg 1080 ctaccccgac cacatgaagc agcacgactt cttcaagtcc gccatgcccg aaggctacgt 1140 ccaggagcgc accatcttct tcaaggacga cggcaactac aagacccgcg ccgaggtgaa 1200 gttcgagggc gacaccctgg tgaaccgcat cgagctgaag ggcatcgact tcaaggagga 1260 cggcaacatc ctggggcaca agctggagta caactacaac agccacaacg tctatatcat 1320 ggccgacaag cagaagaacg gcatcaaggt gaacttcaag atccgccaca acatcgagga 1380 cggcagcgtg cagctcgccg accactacca gcagaacacc cccatcggcg acggccccgt 1440 gctgctgccc gacaaccact acctgagcac ccagtccgcc ctgagcaaag accccaacga 1500 gaagcgcgat cacatggtcc tgctggagtt cgtgaccgcc gccgggatca ctctcggcat 1560 ggacgagctg tacaagaagc ttagccatgg cttcccgccg gcggtggcgg cgcaggatga 1620 tggcacgctg cccatgtctt gtgcccagga gagcgggatg gaccgtcacc ctgcagcctg 1680 tgcttctgct aggatcaatg tgtagatgcg cggccgcgac tctagatcat aatcagccat 1740 accacatttg tagaggtttt acttgcttta aaaaacctcc cacacctccc cctgaacctg 1800 aaacataaaa tgaatgcaat tgttgttgtt aacttgttta ttgcagctta taatggttac 1860 aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt 1920 tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct taaggcgtaa attgtaagcg ttaatatttt 1980 gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat 2040 cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt 2100 ttggaacaag agtccactat taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt 2160 ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag 2220 gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa agggagcccc cgatttagag cttgacgggg 2280 aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc 2340 gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc

41 gctacagggc gcgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt 2460 atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct gataaatgct 2520 tcaataatat tgaaaaagga agagtcctga ggcggaaaga accagctgtg gaatgtgtgt 2580 cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat 2640 ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg 2700 caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg 2760 cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat tttttttatt 2820 tatgcagagg ccgaggccgc ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt 2880 tttggaggcc taggcttttg caaagatcga tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat 2940 gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg 3000 ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc 3060 gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca 3120 agacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct 3180 cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga 3240 tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg 3300 gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat 3360 cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga 3420 gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgagca tgcccgacgg 3480 cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg 3540 ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat 3600 agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct 3660 cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga 3720 cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg 3780 ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt 3840 ttccgggacg ccggctggat gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc 3900 caccctaggg ggaggctaac tgaaacacgg aaggagacaa taccggaagg aacccgcgct 3960 atgacggcaa taaaaagaca gaataaaacg cacggtgttg ggtcgtttgt tcataaacgc 4020 ggggttcggt cccagggctg gcactctgtc gataccccac cgagacccca ttggggccaa 4080 tacgcccgcg tttcttcctt ttccccaccc caccccccaa gttcgggtga aggcccaggg 4140 ctcgcagcca acgtcggggc ggcaggccct gccatagcct caggttactc atatatactt 4200 tagattgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat 4260 aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta 4320 gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa 4380 acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt 4440 tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgtcct tctagtgtag 4500 ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta 4560 atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca 4620 agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag 4680 cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa 4740 agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga 4800 acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc 4860 gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc 4920 ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt 4980 gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat taccgccatg 5040 cattagttat 5050 <210> 3 <211> 4989 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 3 taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg 60 tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct atgaccatga 120 ttacgccaag cttggtaccg agctcggatc cactagtaac ggccgccagt gtgctggaat 180 tcggcttaag tgcgtgtctc tccagaagcc cctgctaaca cagttgatgg agagcacaga 240 agcaccatcc agttaccaaa ctccaactgc aaagctccct cagcttaagc acaaggaggc 300 gagagaggtg acacacttct gggtgtgcat ctacgtgcct acctttgttc cgcacatcct 360 gacttaaaat gtacagctaa cccaggaaaa cccaatattt ttaatattga caccatctgc 420 acaattgtcc agggggaaat aatgcccatt tccaccacga tgacacactt gcgaatgtgt

42 cactatctgc caccccttga cttccaggga ttagaaatta tttcagggta gcaatagcct 540 cttcccctaa gaattcccat caagcttctc ccccctcccc cacccttcag ttttgttgtg 600 aaatcagtta acccaaggga aaatttcaca gctcttcact tctgcttttt aggactataa 660 aacaagggag ggaaaacaag ttggacaaca aaccctgcaa gccgaattct gcagatgcta 720 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgcagt cgacggtacc gcgggcccgg 780 gatccaccgg tcgccaccat ggtgagcaag ggcgaggagc tgttcaccgg ggtggtgccc 840 atcctggtcg agctggacgg cgacgtaaac ggccacaagt tcagcgtgtc cggcgagggc 900 gagggcgatg ccacctacgg caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac cggcaagctg 960 cccgtgccct ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg cttcagccgc 1020 taccccgacc acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga aggctacgtc 1080 caggagcgca ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc cgaggtgaag 1140 ttcgagggcg acaccctggt gaaccgcatc gagctgaagg gcatcgactt caaggaggac 1200 ggcaacatcc tggggcacaa gctggagtac aactacaaca gccacaacgt ctatatcatg 1260 gccgacaagc agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa catcgaggac 1320 ggcagcgtgc agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga cggccccgtg 1380 ctgctgcccg acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc tgagcaaaga ccccaacgag 1440 aagcgcgatc acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac tctcggcatg 1500 gacgagctgt acaagaagct tagccatggc ttcccgccgg cggtggcggc gcaggatgat 1560 ggcacgctgc ccatgtcttg tgcccaggag agcgggatgg accgtcaccc tgcagcctgt 1620 gcttctgcta ggatcaatgt gtagatgcgc ggccgcgact ctagatcata atcagccata 1680 ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga 1740 aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat aatggttaca 1800 aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt 1860 gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt taatattttg 1920 ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc 1980 ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt 2040 tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc 2100 tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg 2160 tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga 2220 aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg 2280 ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg 2340 ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta 2400 tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt 2460 caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc 2520 agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc 2580 tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc 2640 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc 2700 ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt 2760 atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt 2820 ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg 2880 attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc 2940 tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg 3000 caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcaa 3060 gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc 3120 gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat 3180 ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg 3240 cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc 3300 gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag 3360 catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat gcccgacggc 3420 gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc 3480 cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata 3540 gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc 3600 gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac 3660 gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc 3720 catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt 3780 tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc 3840 accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga acccgcgcta 3900 tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg

43 gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat tggggccaat 4020 acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc 4080 tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca tatatacttt 4140 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata 4200 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag 4260 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa 4320 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt 4380 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc 4440 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa 4500 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa 4560 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc 4620 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa 4680 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa 4740 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg 4800 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc 4860 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg 4920 ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgccatgc 4980 attagttat 4989 <210> 4 <211> 5654 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 4 cgagctcgga tccactagta acggccgcca gtgtgctgga attcgccctt aagtgcgtgt 60 ctctccagaa gcccctgcta acacagttga tggagagcac agaagcacca tccagttacc 120 aaactccaac tgcaaagctc cctcagctta agcacaagga ggcgagagag gtgacacact 180 tctgggtgtg catctacgtg cctacctttg ttccgcacat cctgacttaa aatgtacagc 240 taacccagga aaacccaata tttttaatat tgacaccatc tgcacaattg tccaggggga 300 aataatgccc atttccacca cgatgacaca cttgcgaatg tgtcactatc tgccacccct 360 tgacttccag ggattagaaa ttatttcagg gtagcaatag cctcttcccc taagaattcc 420 catcaagctt ctcccccctc ccccaccctt cagttttgtt gtgaaatcag ttaacccaag 480 ggaaaatttc acagctcttc acttctgctt tttaggacta taaaacaagg gagggaaaac 540 aagttggaca acaaaccctg cagtggttcg aggcctaata ggctcatctg ggatcctctc 600 cagccaagct tccttgtgca agtaagtctc tctctctctc tgtctctctc tctctctgtc 660 tctctctatc tctctctctc tgtctctctc tctctgtctc tgtctgtctc tctctctgtc 720 tctgtctgtc tatctctctc tctctctgtc tgtctctgtc tctctctgtc tgtctctctc 780 tgtctctctg tctctctctc tgtctctctc tgtctctctc tctctctctc tttccccccc 840 ccccactgat ggactttggg ctttttattt ataaaaagta gctgtacctc catggtttgt 900 gaagtactct ggaaatgagt actgtctgta tagccgctga catctaaaag gcagctcctg 960 tcttgtagga aagcttcttt attagggttt ggctctgctg ttgcttcctt ccagagcatc 1020 ttcctaatgc tgttccccat gttgtagtga ccccccacac accctaaaat tattttcatt 1080 gctacttcat aactataatt ttgctactgt tatgaagtgt aaatatctgt gttatccaat 1140 ggtcttaggt gacccctgtg aaagggccac ttgactccaa aagggccact ggtctagacc 1200 tatacaacgg ctcctccgtt ccttcattcc tcagagacca gtttagcatg cctgccctga 1260 actagagcta agagaaacac atatgaagga cgcccctcgg ggagctaacg ctggatgccc 1320 acccactttc tttcttcaca caggtgtctg aagcagctat ggcaactgtt aagggcgaat 1380 tctgcagatg ggatccaccg gtcgccacca tggtgagcaa gggcgaggag ctgttcaccg 1440 gggtggtgcc catcctggtc gagctggacg gcgacgtaaa cggccacaag ttcagcgtgt 1500 ccggcgaggg cgagggcgat gccacctacg gcaagctgac cctgaagttc atctgcacca 1560 ccggcaagct gcccgtgccc tggcccaccc tcgtgaccac cctgacctac ggcgtgcagt 1620 gcttcagccg ctaccccgac cacatgaagc agcacgactt cttcaagtcc gccatgcccg 1680 aaggctacgt ccaggagcgc accatcttct tcaaggacga cggcaactac aagacccgcg 1740 ccgaggtgaa gttcgagggc gacaccctgg tgaaccgcat cgagctgaag ggcatcgact 1800 tcaaggagga cggcaacatc ctggggcaca agctggagta caactacaac agccacaacg 1860 tctatatcat ggccgacaag cagaagaacg gcatcaaggt gaacttcaag atccgccaca 1920 acatcgagga cggcagcgtg cagctcgccg accactacca gcagaacacc cccatcggcg 1980 acggccccgt gctgctgccc gacaaccact acctgagcac ccagtccgcc ctgagcaaag 2040 accccaacga gaagcgcgat cacatggtcc tgctggagtt cgtgaccgcc gccgggatca

44 ctctcggcat ggacgagctg tacaagaagc ttagccatgg cttcccgccg gcggtggcgg 2160 cgcaggatga tggcacgctg cccatgtctt gtgcccagga gagcgggatg gaccgtcacc 2220 ctgcagcctg tgcttctgct aggatcaatg tgtagatgcg cggccgcgac tctagatcat 2280 aatcagccat accacatttg tagaggtttt acttgcttta aaaaacctcc cacacctccc 2340 cctgaacctg aaacataaaa tgaatgcaat tgttgttgtt aacttgttta ttgcagctta 2400 taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact 2460 gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct taaggcgtaa attgtaagcg 2520 ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat cagctcattt tttaaccaat 2580 aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata gaccgagata gggttgagtg 2640 ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc 2700 gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt 2760 tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa agggagcccc cgatttagag 2820 cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg 2880 gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt aaccaccaca cccgccgcgc 2940 ttaatgcgcc gctacagggc gcgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc 3000 ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct 3060 gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtcctga ggcggaaaga accagctgtg 3120 gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca 3180 aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg 3240 cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc atagtcccgc ccctaactcc 3300 gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat 3360 tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg 3420 aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg caaagatcga tcaagagaca ggatgaggat 3480 cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga 3540 ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc 3600 ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga 3660 atgaactgca agacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg 3720 cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc 3780 cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg 3840 atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga 3900 aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc 3960 tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgagca 4020 tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg 4080 tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct 4140 atcaggacat agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg 4200 accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc 4260 gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac 4320 gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt 4380 cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga 4440 gttcttcgcc caccctaggg ggaggctaac tgaaacacgg aaggagacaa taccggaagg 4500 aacccgcgct atgacggcaa taaaaagaca gaataaaacg cacggtgttg ggtcgtttgt 4560 tcataaacgc ggggttcggt cccagggctg gcactctgtc gataccccac cgagacccca 4620 ttggggccaa tacgcccgcg tttcttcctt ttccccaccc caccccccaa gttcgggtga 4680 aggcccaggg ctcgcagcca acgtcggggc ggcaggccct gccatagcct caggttactc 4740 atatatactt tagattgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat 4800 cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc 4860 agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg 4920 ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct 4980 accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgtcct 5040 tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct 5100 cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg 5160 gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc 5220 gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga 5280 gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg 5340 cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta 5400 tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg 5460 ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg 5520 ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat

45 taccgccatg cattagttat cgctaccgga ctcagatctc gagctcaagc ttcgaattct 5640 gcagtcgacg gtac 5654 <210> 5 <211> 8438 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 5 cgctaccgga ctcagatctc gagctcaagc ttcgaattct gcagtcgacg gtaccgagct 60 cggatccact agtaacggcc gccagtgtgc tggaattcgc ccttggatcc tctaaggggc 120 ttgagttact tctgcagctc agccctttgt agcacaaaca gcttgtcttt taggatttgg 180 ctggctccac tccactgctg ctgctgttct tgatggtcat cccatggtac ttgcatctcc 240 aaaatgctgg ggtcttctgc tgcaactggg ctggacttat accagtactc tcctgggctc 300 tcttcatggt gacaagcctc aacttctctg tatgaccctt tcaatcctgg gccttcagct 360 gccactgagg ctgtattgtc agtgccaaga ctcagctgct cttccatgaa ccagtgtcac 420 ctgggtggct cttccacagg accaaatttg gctgccagtg gagaaataca actttggcca 480 tctctggaaa acagcttctg tgtgctctca gaaaacactt cccagaagat ttcacctcaa 540 taatgctgga cttttcttag tcactgctaa tttctcagct ccagctcacc agcactgagt 600 atctaagcaa agcaaaggtt tcatttttag tggttctgga atcttgttta tcgatgccta 660 ttcttcagcc ccagctaatg agatattatg ttatcacgga atcttaattc aatataacaa 720 atggccctga agaagtcttt aagcttcctt ctgaagcttc acaagtcagg cctccatctt 780 tgtgttgccc tcaacgtccc tatcttccaa gttcctagga acagctcacc aagaattgac 840 cactctatgg gttttcttgt acaaagtcct tccaaaacaa tatgctcagg tctgtcacag 900 tcatgtcaca gtaaatcttg gtgccaattc attttcattt aggttactat tactataatg 960 aaactccatg atcaaagcaa cttggggagg aaaggatgta ttctgcttac atttccacat 1020 cacagtttat catcaaagga agtcaggaca ggaactcaag caaggcagga acctggaacc 1080 aggagctgat gcagcgatca tggagggatg ctgctcactg gcttgctcct catggcttgt 1140 caacctactt tcttatagaa ccctggacca ccagcccagg gatggcacca cccacaacag 1200 gctgatttct ccccaagtaa ataccaatta ataaaatttc ctacaggctt gcctacagac 1260 agatcttttg gatgtatttt gtcagttaag gctcccttct ctctgatgat tctagcttgt 1320 gtctagttga cataaaacta accaggacag aaaagatgag agggaaagaa cagaccccta 1380 aggcctgtgc taagtcgtca acttaaggaa taagacaagg tctggagaaa gtaatgagga 1440 cagtcattgc ttagctctgt tctgagcaag aggataagta aagaagatgt agaacacata 1500 catcaactgg gcctgggagc tcgtgcctgt aatctcagtc cttgggagac aaatgcagga 1560 gaattgtcat gtacttgaag ccagtctggg ctgcacagta gtcatggtta tcacagcaat 1620 agaaagtaag taaaacaggt agcaaggcac tttcagcttt gaagaaatgc ctgcctccat 1680 cttggaggaa tgagatgtca gaacagaggg aaccttacag cttaaaagtg ctgagtgagt 1740 caagagctga aaagttcccc aaaagctaga gtgcccgtca ccatcctggc tttgccgact 1800 tcctcttttg ctttgttcat ttcctttgcc aacatcatca tcagtatcgt catcactatg 1860 ccacaccccc agcataacaa tttctatagt gagttatttc ttctactcat tggggaccaa 1920 aaaggaagtg tggtctgaga gacagggttt gatatacatg ttgtgcaact tgcctgctct 1980 ataacgacaa ggggaggaaa tttggagccc aagtcacagg gccaggatga ggtttgatag 2040 aacaatagag taccagaggc attgcccagt agttccaaaa tctccctcta gaagcaaaag 2100 aatcatcaac cagatcattg cctcctccca gacaaacctc ctcccatctc ttcatctctt 2160 actcacgatt aaatggccat tcgtcttcat gcatgtgcct tcctccaaat cctcccagac 2220 aaccactcct ctcaggcatc agctcaaggg tttaggagtg ttataactag cagatggtga 2280 agaagattct gtaactagac tgagctcaag gctcctgaaa aatcatccag ggagaaggga 2340 cttggagctg acactcaggc ccctagttac ccttctctgt cccctggttt tcaccatccc 2400 tggttcaact cacatcagca gaccaaagga gtctccaata atctctgtca ggacagccca 2460 taaaatcatc agaccttcca gccctgcaca caggctctga ggaaggtgtt agtccctcca 2520 ggcatagttt gaaatgtgga ccctgtgaag gcagaacaga aaaatgaacc agatggccca 2580 gacaggacct ctggattgtc tgcagaacta gataatacat cttataagac cttagtgctg 2640 agaactgacc attgctcacc aaactcaaaa gcaactgaga ccctgaacca tcttcagatt 2700 tcaaatcaaa catatagctg gtcaaaggca ggattcttct gtttgccttc ctgaaatcga 2760 gatgctgtga accaaattag gcaaaagaag gctgcctagt aagtaaacct tgtttcatag 2820 tagagccttg tctattcctc cttccaattc tgtctgtcta tttcccttca gtgctgcaga 2880 ataagctcag taaccaaaac atactaggta caaactcatc tgaatgaaca cattgccaaa 2940 ttcctactca cccgggctag ctcctactgc ctgcatccat ctgccaggca ctgtggagac 3000 ctggctctaa tggagtccac agactctctg agggctcagc aaaggagtta ggtttccact

46 gaggattcta ctatactgta gatgtgccca agagactgta tgcagcattc atatggcctg 3120 gttgctcatt ccatccaagc aagaagagct cccctgggta ggctccctgg gctctctgag 3180 ttagcagtct agtgatgctt gatatggcca agagacttgg tctccccaga tcttatagaa 3240 acaagaattt tccaaaacaa ttttttaggc aaagactatc tcttcacttt ttaagatgga 3300 ctgtgctcat gaacaggcag atgcctcgtt caccaccttt gcactgtgca acttaattca 3360 ggctcattct gctgatcacc tagcactgat atggtttcaa catgagactg gctatggtat 3420 tataagtacc ctggcagggc aggaaagcag gagtgggtgg gtgagtgggg gagcatcctc 3480 atagaggcag gggaggggga gaggataggg ggtttccgga ggggagacct ggaaaaggga 3540 taacatttga aatgtaaata aagaaaatat ccaataaaag aaaaaaataa gcaccctggc 3600 attatcagac tgcataggct tgcttccaga gttccctgac cctatgataa gtctacactg 3660 atacctgcat actgtgtgtg ccctgaccca cacaaggaag tgcgtgtctc tccagaagcc 3720 cctgctaaca cagttgatgg agagcacaga agcaccatcc agttaccaaa ctccaactgc 3780 aaagctccct cagcttaagc acaaggaggc gagagaggtg acacacttct gggtgtgcat 3840 ctacgtgcct acctttgttc cgcacatcct gacttaaaat gtacagctaa cccaggaaaa 3900 cccaatattt ttaatattga caccatctgc acaattgtcc agggggaaat aatgcccatt 3960 tccaccacga tgacacactt gcgaatgtgt cactatctgc caccccttga cttccaggga 4020 ttagaaatta tttcagggta gcaatagcct cttcccctaa gaattcccat caagcttctc 4080 ccccctcccc cacccttcag ttttgttgtg aaatcagtta acccaaggga aaatttcaca 4140 gctcttcact tctgcttttt aggactataa aacaagggag ggaaaacaag ttggacaaca 4200 aaccctgcaa gggcgaattc tgcagatggg atccaccggt cgccaccatg gtgagcaagg 4260 gcgaggagct gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc gacgtaaacg 4320 gccacaagtt cagcgtgtcc ggcgagggcg agggcgatgc cacctacggc aagctgaccc 4380 tgaagttcat ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc gtgaccaccc 4440 tgacctacgg cgtgcagtgc ttcagccgct accccgacca catgaagcag cacgacttct 4500 tcaagtccgc catgcccgaa ggctacgtcc aggagcgcac catcttcttc aaggacgacg 4560 gcaactacaa gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg aaccgcatcg 4620 agctgaaggg catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca 4680 actacaacag ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga 4740 acttcaagat ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac cactaccagc 4800 agaacacccc catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagcaccc 4860 agtccgccct gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg 4920 tgaccgccgc cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagaagctt agccatggct 4980 tcccgccggc ggtggcggcg caggatgatg gcacgctgcc catgtcttgt gcccaggaga 5040 gcgggatgga ccgtcaccct gcagcctgtg cttctgctag gatcaatgtg tagatgcgcg 5100 gccgcgactc tagatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa 5160 aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa 5220 cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa 5280 taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta 5340 aggcgtaaat tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca 5400 gctcattttt taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga 5460 ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg 5520 actccaacgt caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat 5580 caccctaatc aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag 5640 ggagcccccg atttagagct tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga 5700 agaaagcgaa aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa 5760 ccaccacacc cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg 5820 gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc 5880 tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtcctgagg 5940 cggaaagaac cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc 6000 agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc 6060 cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat 6120 agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc 6180 gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga 6240 gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aagatcgatc 6300 aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc 6360 cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct 6420 ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg 6480 acctgtccgg tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca

47 cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc 6600 tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga 6660 aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc 6720 cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc 6780 ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg 6840 ccaggctcaa ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct 6900 gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc 6960 tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc 7020 ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc 7080 agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga 7140 aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt 7200 ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg 7260 cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg aaacacggaa 7320 ggagacaata ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca 7380 cggtgttggg tcgtttgttc ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc actctgtcga 7440 taccccaccg agaccccatt ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt ccccacccca 7500 ccccccaagt tcgggtgaag gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg caggccctgc 7560 catagcctca ggttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa 7620 aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt 7680 ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt 7740 ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg 7800 tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca 7860 gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt 7920 agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga 7980 taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc 8040 gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact 8100 gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga 8160 caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg 8220 aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt 8280 tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt 8340 acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga 8400 ttctgtggat aaccgtatta ccgccatgca ttagttat 8438 <210> 6 <211> 9247 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 6 cgctaccgga ctcagatctc gagctcaagc ttcgaattct gcagtcgacg gtaccgagct 60 cggatccact agtaacggcc gccagtgtgc tggaattcgc ccttggatcc tctaaggggc 120 ttgagttact tctgcagctc agccctttgt agcacaaaca gcttgtcttt taggatttgg 180 ctggctccac tccactgctg ctgctgttct tgatggtcat cccatggtac ttgcatctcc 240 aaaatgctgg ggtcttctgc tgcaactggg ctggacttat accagtactc tcctgggctc 300 tcttcatggt gacaagcctc aacttctctg tatgaccctt tcaatcctgg gccttcagct 360 gccactgagg ctgtattgtc agtgccaaga ctcagctgct cttccatgaa ccagtgtcac 420 ctgggtggct cttccacagg accaaatttg gctgccagtg gagaaataca actttggcca 480 tctctggaaa acagcttctg tgtgctctca gaaaacactt cccagaagat ttcacctcaa 540 taatgctgga cttttcttag tcactgctaa tttctcagct ccagctcacc agcactgagt 600 atctaagcaa agcaaaggtt tcatttttag tggttctgga atcttgttta tcgatgccta 660 ttcttcagcc ccagctaatg agatattatg ttatcacgga atcttaattc aatataacaa 720 atggccctga agaagtcttt aagcttcctt ctgaagcttc acaagtcagg cctccatctt 780 tgtgttgccc tcaacgtccc tatcttccaa gttcctagga acagctcacc aagaattgac 840 cactctatgg gttttcttgt acaaagtcct tccaaaacaa tatgctcagg tctgtcacag 900 tcatgtcaca gtaaatcttg gtgccaattc attttcattt aggttactat tactataatg 960 aaactccatg atcaaagcaa cttggggagg aaaggatgta ttctgcttac atttccacat 1020 cacagtttat catcaaagga agtcaggaca ggaactcaag caaggcagga acctggaacc 1080 aggagctgat gcagcgatca tggagggatg ctgctcactg gcttgctcct catggcttgt 1140 caacctactt tcttatagaa ccctggacca ccagcccagg gatggcacca cccacaacag 1200 gctgatttct ccccaagtaa ataccaatta ataaaatttc ctacaggctt gcctacagac

48 agatcttttg gatgtatttt gtcagttaag gctcccttct ctctgatgat tctagcttgt 1320 gtctagttga cataaaacta accaggacag aaaagatgag agggaaagaa cagaccccta 1380 aggcctgtgc taagtcgtca acttaaggaa taagacaagg tctggagaaa gtaatgagga 1440 cagtcattgc ttagctctgt tctgagcaag aggataagta aagaagatgt agaacacata 1500 catcaactgg gcctgggagc tcgtgcctgt aatctcagtc cttgggagac aaatgcagga 1560 gaattgtcat gtacttgaag ccagtctggg ctgcacagta gtcatggtta tcacagcaat 1620 agaaagtaag taaaacaggt agcaaggcac tttcagcttt gaagaaatgc ctgcctccat 1680 cttggaggaa tgagatgtca gaacagaggg aaccttacag cttaaaagtg ctgagtgagt 1740 caagagctga aaagttcccc aaaagctaga gtgcccgtca ccatcctggc tttgccgact 1800 tcctcttttg ctttgttcat ttcctttgcc aacatcatca tcagtatcgt catcactatg 1860 ccacaccccc agcataacaa tttctatagt gagttatttc ttctactcat tggggaccaa 1920 aaaggaagtg tggtctgaga gacagggttt gatatacatg ttgtgcaact tgcctgctct 1980 ataacgacaa ggggaggaaa tttggagccc aagtcacagg gccaggatga ggtttgatag 2040 aacaatagag taccagaggc attgcccagt agttccaaaa tctccctcta gaagcaaaag 2100 aatcatcaac cagatcattg cctcctccca gacaaacctc ctcccatctc ttcatctctt 2160 actcacgatt aaatggccat tcgtcttcat gcatgtgcct tcctccaaat cctcccagac 2220 aaccactcct ctcaggcatc agctcaaggg tttaggagtg ttataactag cagatggtga 2280 agaagattct gtaactagac tgagctcaag gctcctgaaa aatcatccag ggagaaggga 2340 cttggagctg acactcaggc ccctagttac ccttctctgt cccctggttt tcaccatccc 2400 tggttcaact cacatcagca gaccaaagga gtctccaata atctctgtca ggacagccca 2460 taaaatcatc agaccttcca gccctgcaca caggctctga ggaaggtgtt agtccctcca 2520 ggcatagttt gaaatgtgga ccctgtgaag gcagaacaga aaaatgaacc agatggccca 2580 gacaggacct ctggattgtc tgcagaacta gataatacat cttataagac cttagtgctg 2640 agaactgacc attgctcacc aaactcaaaa gcaactgaga ccctgaacca tcttcagatt 2700 tcaaatcaaa catatagctg gtcaaaggca ggattcttct gtttgccttc ctgaaatcga 2760 gatgctgtga accaaattag gcaaaagaag gctgcctagt aagtaaacct tgtttcatag 2820 tagagccttg tctattcctc cttccaattc tgtctgtcta tttcccttca gtgctgcaga 2880 ataagctcag taaccaaaac atactaggta caaactcatc tgaatgaaca cattgccaaa 2940 ttcctactca cccgggctag ctcctactgc ctgcatccat ctgccaggca ctgtggagac 3000 ctggctctaa tggagtccac agactctctg agggctcagc aaaggagtta ggtttccact 3060 gaggattcta ctatactgta gatgtgccca agagactgta tgcagcattc atatggcctg 3120 gttgctcatt ccatccaagc aagaagagct cccctgggta ggctccctgg gctctctgag 3180 ttagcagtct agtgatgctt gatatggcca agagacttgg tctccccaga tcttatagaa 3240 acaagaattt tccaaaacaa ttttttaggc aaagactatc tcttcacttt ttaagatgga 3300 ctgtgctcat gaacaggcag atgcctcgtt caccaccttt gcactgtgca acttaattca 3360 ggctcattct gctgatcacc tagcactgat atggtttcaa catgagactg gctatggtat 3420 tataagtacc ctggcagggc aggaaagcag gagtgggtgg gtgagtgggg gagcatcctc 3480 atagaggcag gggaggggga gaggataggg ggtttccgga ggggagacct ggaaaaggga 3540 taacatttga aatgtaaata aagaaaatat ccaataaaag aaaaaaataa gcaccctggc 3600 attatcagac tgcataggct tgcttccaga gttccctgac cctatgataa gtctacactg 3660 atacctgcat actgtgtgtg ccctgaccca cacaaggaag tgcgtgtctc tccagaagcc 3720 cctgctaaca cagttgatgg agagcacaga agcaccatcc agttaccaaa ctccaactgc 3780 aaagctccct cagcttaagc acaaggaggc gagagaggtg acacacttct gggtgtgcat 3840 ctacgtgcct acctttgttc cgcacatcct gacttaaaat gtacagctaa cccaggaaaa 3900 cccaatattt ttaatattga caccatctgc acaattgtcc agggggaaat aatgcccatt 3960 tccaccacga tgacacactt gcgaatgtgt cactatctgc caccccttga cttccaggga 4020 ttagaaatta tttcagggta gcaatagcct cttcccctaa gaattcccat caagcttctc 4080 ccccctcccc cacccttcag ttttgttgtg aaatcagtta acccaaggga aaatttcaca 4140 gctcttcact tctgcttttt aggactataa aacaagggag ggaaaacaag ttggacaaca 4200 aaccctgcag tggttcgagg cctaataggc tcatctggga tcctctccag ccaagcttcc 4260 ttgtgcaagt aagtctctct ctctctctgt ctctctctct ctctgtctct ctctatctct 4320 ctctctctgt ctctctctct ctgtctctgt ctgtctctct ctctgtctct gtctgtctat 4380 ctctctctct ctctgtctgt ctctgtctct ctctgtctgt ctctctctgt ctctctgtct 4440 ctctctctgt ctctctctgt ctctctctct ctctctcttt cccccccccc cactgatgga 4500 ctttgggctt tttatttata aaaagtagct gtacctccat ggtttgtgaa gtactctgga 4560 aatgagtact gtctgtatag ccgctgacat ctaaaaggca gctcctgtct tgtaggaaag 4620 cttctttatt agggtttggc tctgctgttg cttccttcca gagcatcttc ctaatgctgt 4680 tccccatgtt gtagtgaccc cccacacacc ctaaaattat tttcattgct acttcataac

49 tataattttg ctactgttat gaagtgtaaa tatctgtgtt atccaatggt cttaggtgac 4800 ccctgtgaaa gggccacttg actccaaaag ggccactggt ctagacctat acaacggctc 4860 ctccgttcct tcattcctca gagaccagtt tagcatgcct gccctgaact agagctaaga 4920 gaaacacata tgaaggacgc ccctcgggga gctaacgctg gatgcccacc cactttcttt 4980 cttcacacag gtgtctgaag cagctatggc aactgttaag ggcgaattct gcagatggga 5040 tccaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg tggtgcccat 5100 cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc agcgtgtccg gcgagggcga 5160 gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg gcaagctgcc 5220 cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc gtgcagtgct tcagccgcta 5280 ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag gctacgtcca 5340 ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag acccgcgccg aggtgaagtt 5400 cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc atcgacttca aggaggacgg 5460 caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc cacaacgtct atatcatggc 5520 cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc cgccacaaca tcgaggacgg 5580 cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc atcggcgacg gccccgtgct 5640 gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg agcaaagacc ccaacgagaa 5700 gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc gggatcactc tcggcatgga 5760 cgagctgtac aagaagctta gccatggctt cccgccggcg gtggcggcgc aggatgatgg 5820 cacgctgccc atgtcttgtg cccaggagag cgggatggac cgtcaccctg cagcctgtgc 5880 ttctgctagg atcaatgtgt agatgcgcgg ccgcgactct agatcataat cagccatacc 5940 acatttgtag aggttttact tgctttaaaa aacctcccac acctccccct gaacctgaaa 6000 cataaaatga atgcaattgt tgttgttaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa 6060 taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt 6120 ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttaa ggcgtaaatt gtaagcgtta atattttgtt 6180 aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg 6240 caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg 6300 gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta 6360 tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg 6420 ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa 6480 gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct 6540 ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct 6600 acagggcgcg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt 6660 tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca 6720 ataatattga aaaaggaaga gtcctgaggc ggaaagaacc agctgtggaa tgtgtgtcag 6780 ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc 6840 aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa 6900 agcatgcatc tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc 6960 ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat 7020 gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt 7080 ggaggcctag gcttttgcaa agatcgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat 7140 tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta 7200 tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca 7260 ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcaaga 7320 cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga 7380 cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct 7440 cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg 7500 gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga 7560 gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca 7620 tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgagcatgc ccgacggcga 7680 ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg 7740 cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc 7800 gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt 7860 gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga 7920 gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc caacctgcca 7980 tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc 8040 cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac 8100 cctaggggga ggctaactga aacacggaag gagacaatac cggaaggaac ccgcgctatg 8160 acggcaataa aaagacagaa taaaacgcac ggtgttgggt cgtttgttca taaacgcggg

50 gttcggtccc agggctggca ctctgtcgat accccaccga gaccccattg gggccaatac 8280 gcccgcgttt cttccttttc cccaccccac cccccaagtt cgggtgaagg cccagggctc 8340 gcagccaacg tcggggcggc aggccctgcc atagcctcag gttactcata tatactttag 8400 attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat 8460 ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa 8520 aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca 8580 aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt 8640 ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg 8700 tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc 8760 ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga 8820 cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc 8880 agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc 8940 gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca 9000 ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg 9060 tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta 9120 tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct 9180 cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgccatgcat 9240 tagttat 9247 <210> 7 <211> 5504 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 7 ggccgccagt gtgctggaat tcggctttgt ttgtttgttt aatgaaattt atttcatact 60 catcaaagca atgtgctaat gcttcattca taaaaattct catccatatt ataggaacct 120 atttattctc agcttcaatg aaagacctca agtgcaaggc tatgaccaat tcatccccca 180 cacgttgaca gctaggttct gttctagaga gtgctgccta atgtcccctt gaatcaactt 240 aaatagatca accaatcaat aaatacataa ataaataggt aagtggttgc ccatcagagg 300 caaggaggaa acacaggctc tctttgaaca gaatgtgcca tggtttcttg tgaccctgag 360 cgacctgtct tggccgagga ctaaggagtg tcctagagat tgagctgtct gctcattcat 420 gacaagggag ctccttcaca tgccctgggg aaggcattag aaacagtcca gcccatactt 480 taaagccgaa ttctgcagat atccatcaca ctggcggccg cgactctaga tcataatcag 540 ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa 600 cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg 660 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 720 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta agcgttaata 780 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg 840 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc 900 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa 960 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt 1020 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac 1080 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta 1140 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg 1200 cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 1260 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa 1320 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt 1380 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat 1440 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag 1500 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat 1560 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt 1620 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg 1680 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc 1740 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat 1800 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt 1860 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac 1920 tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg 1980 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc 2040 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa

51 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc 2160 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg 2220 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg 2280 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa 2340 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg 2400 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct 2460 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc 2520 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa 2580 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat 2640 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt 2700 cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg 2760 cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa 2820 acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg 2880 ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc 2940 agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat 3000 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt 3060 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc 3120 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt 3180 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac 3240 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt 3300 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct 3360 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga 3420 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac 3480 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg 3540 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt 3600 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc 3660 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg 3720 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc 3780 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc 3840 catgcattag ttattaatgt gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt 3900 atgcttccgg ctcgtatgtt gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac 3960 agctatgacc atgattacgc caagcttggt accgagctcg gatccactag taacggccgc 4020 cagtgtgctg gaattcggct taagtgcgtg tctctccaga agcccctgct aacacagttg 4080 atggagagca cagaagcacc atccagttac caaactccaa ctgcaaagct ccctcagctt 4140 aagcacaagg aggcgagaga ggtgacacac ttctgggtgt gcatctacgt gcctaccttt 4200 gttccgcaca tcctgactta aaatgtacag ctaacccagg aaaacccaat atttttaata 4260 ttgacaccat ctgcacaatt gtccaggggg aaataatgcc catttccacc acgatgacac 4320 acttgcgaat gtgtcactat ctgccacccc ttgacttcca gggattagaa attatttcag 4380 ggtagcaata gcctcttccc ctaagaattc ccatcaagct tctcccccct cccccaccct 4440 tcagttttgt tgtgaaatca gttaacccaa gggaaaattt cacagctctt cacttctgct 4500 ttttaggact ataaaacaag ggagggaaaa caagttggac aacaaaccct gcaagccgaa 4560 ttctgcagat gctaccggac tcagatctcg agctcaagct tcgaattctg cagtcgacgg 4620 taccgcgggc ccgggatcca ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca 4680 ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg 4740 tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca 4800 ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc 4860 agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc 4920 ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc 4980 gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg 5040 acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca 5100 acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc 5160 acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg 5220 gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca 5280 aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga 5340 tcactctcgg catggacgag ctgtacaaga agcttagcca tggcttcccg ccggcggtgg 5400 cggcgcagga tgatggcacg ctgcccatgt cttgtgccca ggagagcggg atggaccgtc 5460 accctgcagc ctgtgcttct gctaggatca atgtgtagat gcgc

52 <210> 8 <211> 6169 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 8 ggccgccagt gtgctggaat tcggctttgt ttgtttgttt aatgaaattt atttcatact 60 catcaaagca atgtgctaat gcttcattca taaaaattct catccatatt ataggaacct 120 atttattctc agcttcaatg aaagacctca agtgcaaggc tatgaccaat tcatccccca 180 cacgttgaca gctaggttct gttctagaga gtgctgccta atgtcccctt gaatcaactt 240 aaatagatca accaatcaat aaatacataa ataaataggt aagtggttgc ccatcagagg 300 caaggaggaa acacaggctc tctttgaaca gaatgtgcca tggtttcttg tgaccctgag 360 cgacctgtct tggccgagga ctaaggagtg tcctagagat tgagctgtct gctcattcat 420 gacaagggag ctccttcaca tgccctgggg aaggcattag aaacagtcca gcccatactt 480 taaagccgaa ttctgcagat atccatcaca ctggcggccg cgactctaga tcataatcag 540 ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa 600 cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg 660 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 720 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta agcgttaata 780 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg 840 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc 900 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa 960 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt 1020 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac 1080 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta 1140 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg 1200 cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 1260 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa 1320 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt 1380 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat 1440 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag 1500 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat 1560 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt 1620 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg 1680 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc 1740 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat 1800 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt 1860 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac 1920 tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg 1980 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc 2040 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa 2100 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc 2160 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg 2220 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg 2280 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa 2340 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg 2400 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct 2460 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc 2520 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa 2580 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat 2640 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt 2700 cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg 2760 cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa 2820 acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg 2880 ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc 2940 agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat 3000 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt 3060 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc 3120 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt

53 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac 3240 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt 3300 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct 3360 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga 3420 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac 3480 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg 3540 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt 3600 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc 3660 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg 3720 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc 3780 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc 3840 catgcattag ttatcgctac cggactcaga tctcgagctc aagcttcgaa ttctgcagtc 3900 gacggtaccg agctcggatc cactagtaac ggccgccagt gtgctggaat tcgcccttaa 3960 gtgcgtgtct ctccagaagc ccctgctaac acagttgatg gagagcacag aagcaccatc 4020 cagttaccaa actccaactg caaagctccc tcagcttaag cacaaggagg cgagagaggt 4080 gacacacttc tgggtgtgca tctacgtgcc tacctttgtt ccgcacatcc tgacttaaaa 4140 tgtacagcta acccaggaaa acccaatatt tttaatattg acaccatctg cacaattgtc 4200 cagggggaaa taatgcccat ttccaccacg atgacacact tgcgaatgtg tcactatctg 4260 ccaccccttg acttccaggg attagaaatt atttcagggt agcaatagcc tcttccccta 4320 agaattccca tcaagcttct cccccctccc ccacccttca gttttgttgt gaaatcagtt 4380 aacccaaggg aaaatttcac agctcttcac ttctgctttt taggactata aaacaaggga 4440 gggaaaacaa gttggacaac aaaccctgca gtggttcgag gcctaatagg ctcatctggg 4500 atcctctcca gccaagcttc cttgtgcaag taagtctctc tctctctctg tctctctctc 4560 tctctgtctc tctctatctc tctctctctg tctctctctc tctgtctctg tctgtctctc 4620 tctctgtctc tgtctgtcta tctctctctc tctctgtctg tctctgtctc tctctgtctg 4680 tctctctctg tctctctgtc tctctctctg tctctctctg tctctctctc tctctctctt 4740 tccccccccc ccactgatgg actttgggct ttttatttat aaaaagtagc tgtacctcca 4800 tggtttgtga agtactctgg aaatgagtac tgtctgtata gccgctgaca tctaaaaggc 4860 agctcctgtc ttgtaggaaa gcttctttat tagggtttgg ctctgctgtt gcttccttcc 4920 agagcatctt cctaatgctg ttccccatgt tgtagtgacc ccccacacac cctaaaatta 4980 ttttcattgc tacttcataa ctataatttt gctactgtta tgaagtgtaa atatctgtgt 5040 tatccaatgg tcttaggtga cccctgtgaa agggccactt gactccaaaa gggccactgg 5100 tctagaccta tacaacggct cctccgttcc ttcattcctc agagaccagt ttagcatgcc 5160 tgccctgaac tagagctaag agaaacacat atgaaggacg cccctcgggg agctaacgct 5220 ggatgcccac ccactttctt tcttcacaca ggtgtctgaa gcagctatgg caactgttaa 5280 gggcgaattc tgcagatggg atccaccggt cgccaccatg gtgagcaagg gcgaggagct 5340 gttcaccggg gtggtgccca tcctggtcga gctggacggc gacgtaaacg gccacaagtt 5400 cagcgtgtcc ggcgagggcg agggcgatgc cacctacggc aagctgaccc tgaagttcat 5460 ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctc gtgaccaccc tgacctacgg 5520 cgtgcagtgc ttcagccgct accccgacca catgaagcag cacgacttct tcaagtccgc 5580 catgcccgaa ggctacgtcc aggagcgcac catcttcttc aaggacgacg gcaactacaa 5640 gacccgcgcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg aaccgcatcg agctgaaggg 5700 catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct ggggcacaag ctggagtaca actacaacag 5760 ccacaacgtc tatatcatgg ccgacaagca gaagaacggc atcaaggtga acttcaagat 5820 ccgccacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctcgccgac cactaccagc agaacacccc 5880 catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagcaccc agtccgccct 5940 gagcaaagac cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg tgaccgccgc 6000 cgggatcact ctcggcatgg acgagctgta caagaagctt agccatggct tcccgccggc 6060 ggtggcggcg caggatgatg gcacgctgcc catgtcttgt gcccaggaga gcgggatgga 6120 ccgtcaccct gcagcctgtg cttctgctag gatcaatgtg tagatgcgc 6169 <210> 9 <211> 8953 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 9 ggccgccagt gtgctggaat tcggctttgt ttgtttgttt aatgaaattt atttcatact 60 catcaaagca atgtgctaat gcttcattca taaaaattct catccatatt ataggaacct 120 atttattctc agcttcaatg aaagacctca agtgcaaggc tatgaccaat tcatccccca

54 cacgttgaca gctaggttct gttctagaga gtgctgccta atgtcccctt gaatcaactt 240 aaatagatca accaatcaat aaatacataa ataaataggt aagtggttgc ccatcagagg 300 caaggaggaa acacaggctc tctttgaaca gaatgtgcca tggtttcttg tgaccctgag 360 cgacctgtct tggccgagga ctaaggagtg tcctagagat tgagctgtct gctcattcat 420 gacaagggag ctccttcaca tgccctgggg aaggcattag aaacagtcca gcccatactt 480 taaagccgaa ttctgcagat atccatcaca ctggcggccg cgactctaga tcataatcag 540 ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa 600 cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg 660 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 720 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta agcgttaata 780 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg 840 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc 900 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa 960 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt 1020 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac 1080 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta 1140 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg 1200 cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 1260 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa 1320 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt 1380 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat 1440 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag 1500 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat 1560 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt 1620 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg 1680 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc 1740 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat 1800 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt 1860 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac 1920 tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg 1980 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc 2040 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa 2100 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc 2160 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg 2220 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg 2280 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa 2340 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg 2400 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct 2460 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc 2520 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa 2580 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat 2640 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt 2700 cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg 2760 cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa 2820 acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg 2880 ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc 2940 agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat 3000 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt 3060 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc 3120 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt 3180 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac 3240 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt 3300 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct 3360 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga 3420 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac 3480 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg 3540 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt 3600 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc

55 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg 3720 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc 3780 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc 3840 catgcattag ttatcgctac cggactcaga tctcgagctc aagcttcgaa ttctgcagtc 3900 gacggtaccg agctcggatc cactagtaac ggccgccagt gtgctggaat tcgcccttgg 3960 atcctctaag gggcttgagt tacttctgca gctcagccct ttgtagcaca aacagcttgt 4020 cttttaggat ttggctggct ccactccact gctgctgctg ttcttgatgg tcatcccatg 4080 gtacttgcat ctccaaaatg ctggggtctt ctgctgcaac tgggctggac ttataccagt 4140 actctcctgg gctctcttca tggtgacaag cctcaacttc tctgtatgac cctttcaatc 4200 ctgggccttc agctgccact gaggctgtat tgtcagtgcc aagactcagc tgctcttcca 4260 tgaaccagtg tcacctgggt ggctcttcca caggaccaaa tttggctgcc agtggagaaa 4320 tacaactttg gccatctctg gaaaacagct tctgtgtgct ctcagaaaac acttcccaga 4380 agatttcacc tcaataatgc tggacttttc ttagtcactg ctaatttctc agctccagct 4440 caccagcact gagtatctaa gcaaagcaaa ggtttcattt ttagtggttc tggaatcttg 4500 tttatcgatg cctattcttc agccccagct aatgagatat tatgttatca cggaatctta 4560 attcaatata acaaatggcc ctgaagaagt ctttaagctt ccttctgaag cttcacaagt 4620 caggcctcca tctttgtgtt gccctcaacg tccctatctt ccaagttcct aggaacagct 4680 caccaagaat tgaccactct atgggttttc ttgtacaaag tccttccaaa acaatatgct 4740 caggtctgtc acagtcatgt cacagtaaat cttggtgcca attcattttc atttaggtta 4800 ctattactat aatgaaactc catgatcaaa gcaacttggg gaggaaagga tgtattctgc 4860 ttacatttcc acatcacagt ttatcatcaa aggaagtcag gacaggaact caagcaaggc 4920 aggaacctgg aaccaggagc tgatgcagcg atcatggagg gatgctgctc actggcttgc 4980 tcctcatggc ttgtcaacct actttcttat agaaccctgg accaccagcc cagggatggc 5040 accacccaca acaggctgat ttctccccaa gtaaatacca attaataaaa tttcctacag 5100 gcttgcctac agacagatct tttggatgta ttttgtcagt taaggctccc ttctctctga 5160 tgattctagc ttgtgtctag ttgacataaa actaaccagg acagaaaaga tgagagggaa 5220 agaacagacc cctaaggcct gtgctaagtc gtcaacttaa ggaataagac aaggtctgga 5280 gaaagtaatg aggacagtca ttgcttagct ctgttctgag caagaggata agtaaagaag 5340 atgtagaaca catacatcaa ctgggcctgg gagctcgtgc ctgtaatctc agtccttggg 5400 agacaaatgc aggagaattg tcatgtactt gaagccagtc tgggctgcac agtagtcatg 5460 gttatcacag caatagaaag taagtaaaac aggtagcaag gcactttcag ctttgaagaa 5520 atgcctgcct ccatcttgga ggaatgagat gtcagaacag agggaacctt acagcttaaa 5580 agtgctgagt gagtcaagag ctgaaaagtt ccccaaaagc tagagtgccc gtcaccatcc 5640 tggctttgcc gacttcctct tttgctttgt tcatttcctt tgccaacatc atcatcagta 5700 tcgtcatcac tatgccacac ccccagcata acaatttcta tagtgagtta tttcttctac 5760 tcattgggga ccaaaaagga agtgtggtct gagagacagg gtttgatata catgttgtgc 5820 aacttgcctg ctctataacg acaaggggag gaaatttgga gcccaagtca cagggccagg 5880 atgaggtttg atagaacaat agagtaccag aggcattgcc cagtagttcc aaaatctccc 5940 tctagaagca aaagaatcat caaccagatc attgcctcct cccagacaaa cctcctccca 6000 tctcttcatc tcttactcac gattaaatgg ccattcgtct tcatgcatgt gccttcctcc 6060 aaatcctccc agacaaccac tcctctcagg catcagctca agggtttagg agtgttataa 6120 ctagcagatg gtgaagaaga ttctgtaact agactgagct caaggctcct gaaaaatcat 6180 ccagggagaa gggacttgga gctgacactc aggcccctag ttacccttct ctgtcccctg 6240 gttttcacca tccctggttc aactcacatc agcagaccaa aggagtctcc aataatctct 6300 gtcaggacag cccataaaat catcagacct tccagccctg cacacaggct ctgaggaagg 6360 tgttagtccc tccaggcata gtttgaaatg tggaccctgt gaaggcagaa cagaaaaatg 6420 aaccagatgg cccagacagg acctctggat tgtctgcaga actagataat acatcttata 6480 agaccttagt gctgagaact gaccattgct caccaaactc aaaagcaact gagaccctga 6540 accatcttca gatttcaaat caaacatata gctggtcaaa ggcaggattc ttctgtttgc 6600 cttcctgaaa tcgagatgct gtgaaccaaa ttaggcaaaa gaaggctgcc tagtaagtaa 6660 accttgtttc atagtagagc cttgtctatt cctccttcca attctgtctg tctatttccc 6720 ttcagtgctg cagaataagc tcagtaacca aaacatacta ggtacaaact catctgaatg 6780 aacacattgc caaattccta ctcacccggg ctagctccta ctgcctgcat ccatctgcca 6840 ggcactgtgg agacctggct ctaatggagt ccacagactc tctgagggct cagcaaagga 6900 gttaggtttc cactgaggat tctactatac tgtagatgtg cccaagagac tgtatgcagc 6960 attcatatgg cctggttgct cattccatcc aagcaagaag agctcccctg ggtaggctcc 7020 ctgggctctc tgagttagca gtctagtgat gcttgatatg gccaagagac ttggtctccc 7080 cagatcttat agaaacaaga attttccaaa acaatttttt aggcaaagac tatctcttca

56 ctttttaaga tggactgtgc tcatgaacag gcagatgcct cgttcaccac ctttgcactg 7200 tgcaacttaa ttcaggctca ttctgctgat cacctagcac tgatatggtt tcaacatgag 7260 actggctatg gtattataag taccctggca gggcaggaaa gcaggagtgg gtgggtgagt 7320 gggggagcat cctcatagag gcaggggagg gggagaggat agggggtttc cggaggggag 7380 acctggaaaa gggataacat ttgaaatgta aataaagaaa atatccaata aaagaaaaaa 7440 ataagcaccc tggcattatc agactgcata ggcttgcttc cagagttccc tgaccctatg 7500 ataagtctac actgatacct gcatactgtg tgtgccctga cccacacaag gaagtgcgtg 7560 tctctccaga agcccctgct aacacagttg atggagagca cagaagcacc atccagttac 7620 caaactccaa ctgcaaagct ccctcagctt aagcacaagg aggcgagaga ggtgacacac 7680 ttctgggtgt gcatctacgt gcctaccttt gttccgcaca tcctgactta aaatgtacag 7740 ctaacccagg aaaacccaat atttttaata ttgacaccat ctgcacaatt gtccaggggg 7800 aaataatgcc catttccacc acgatgacac acttgcgaat gtgtcactat ctgccacccc 7860 ttgacttcca gggattagaa attatttcag ggtagcaata gcctcttccc ctaagaattc 7920 ccatcaagct tctcccccct cccccaccct tcagttttgt tgtgaaatca gttaacccaa 7980 gggaaaattt cacagctctt cacttctgct ttttaggact ataaaacaag ggagggaaaa 8040 caagttggac aacaaaccct gcaagggcga attctgcaga tgggatccac cggtcgccac 8100 catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga 8160 cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta 8220 cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac 8280 cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa 8340 gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt 8400 cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct 8460 ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca 8520 caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa 8580 cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc 8640 cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca 8700 ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt 8760 cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc tgtacaagaa 8820 gcttagccat ggcttcccgc cggcggtggc ggcgcaggat gatggcacgc tgcccatgtc 8880 ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca ccctgcagcc tgtgcttctg ctaggatcaa 8940 tgtgtagatg cgc 8953 <210> 10 <211> 9762 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 10 ggccgccagt gtgctggaat tcggctttgt ttgtttgttt aatgaaattt atttcatact 60 catcaaagca atgtgctaat gcttcattca taaaaattct catccatatt ataggaacct 120 atttattctc agcttcaatg aaagacctca agtgcaaggc tatgaccaat tcatccccca 180 cacgttgaca gctaggttct gttctagaga gtgctgccta atgtcccctt gaatcaactt 240 aaatagatca accaatcaat aaatacataa ataaataggt aagtggttgc ccatcagagg 300 caaggaggaa acacaggctc tctttgaaca gaatgtgcca tggtttcttg tgaccctgag 360 cgacctgtct tggccgagga ctaaggagtg tcctagagat tgagctgtct gctcattcat 420 gacaagggag ctccttcaca tgccctgggg aaggcattag aaacagtcca gcccatactt 480 taaagccgaa ttctgcagat atccatcaca ctggcggccg cgactctaga tcataatcag 540 ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa 600 cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg 660 ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 720 tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta agcgttaata 780 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg 840 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc 900 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa 960 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt 1020 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac 1080 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta 1140 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg 1200 cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 1260 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa

57 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt 1380 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat 1440 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag 1500 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat 1560 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt 1620 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg 1680 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc 1740 gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat 1800 tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt 1860 cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac 1920 tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg 1980 tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc 2040 aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa 2100 tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc 2160 gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg 2220 aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg 2280 acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa 2340 atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg 2400 acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct 2460 tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc 2520 ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa 2580 cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat 2640 cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt 2700 cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg 2760 cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa 2820 acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg 2880 ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc 2940 agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat 3000 actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt 3060 tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc 3120 cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt 3180 gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac 3240 tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt 3300 gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct 3360 gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga 3420 ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac 3480 acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg 3540 agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt 3600 cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc 3660 tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg 3720 gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc 3780 ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc 3840 catgcattag ttatcgctac cggactcaga tctcgagctc aagcttcgaa ttctgcagtc 3900 gacggtaccg agctcggatc cactagtaac ggccgccagt gtgctggaat tcgcccttgg 3960 atcctctaag gggcttgagt tacttctgca gctcagccct ttgtagcaca aacagcttgt 4020 cttttaggat ttggctggct ccactccact gctgctgctg ttcttgatgg tcatcccatg 4080 gtacttgcat ctccaaaatg ctggggtctt ctgctgcaac tgggctggac ttataccagt 4140 actctcctgg gctctcttca tggtgacaag cctcaacttc tctgtatgac cctttcaatc 4200 ctgggccttc agctgccact gaggctgtat tgtcagtgcc aagactcagc tgctcttcca 4260 tgaaccagtg tcacctgggt ggctcttcca caggaccaaa tttggctgcc agtggagaaa 4320 tacaactttg gccatctctg gaaaacagct tctgtgtgct ctcagaaaac acttcccaga 4380 agatttcacc tcaataatgc tggacttttc ttagtcactg ctaatttctc agctccagct 4440 caccagcact gagtatctaa gcaaagcaaa ggtttcattt ttagtggttc tggaatcttg 4500 tttatcgatg cctattcttc agccccagct aatgagatat tatgttatca cggaatctta 4560 attcaatata acaaatggcc ctgaagaagt ctttaagctt ccttctgaag cttcacaagt 4620 caggcctcca tctttgtgtt gccctcaacg tccctatctt ccaagttcct aggaacagct 4680 caccaagaat tgaccactct atgggttttc ttgtacaaag tccttccaaa acaatatgct 4740 caggtctgtc acagtcatgt cacagtaaat cttggtgcca attcattttc atttaggtta

58 ctattactat aatgaaactc catgatcaaa gcaacttggg gaggaaagga tgtattctgc 4860 ttacatttcc acatcacagt ttatcatcaa aggaagtcag gacaggaact caagcaaggc 4920 aggaacctgg aaccaggagc tgatgcagcg atcatggagg gatgctgctc actggcttgc 4980 tcctcatggc ttgtcaacct actttcttat agaaccctgg accaccagcc cagggatggc 5040 accacccaca acaggctgat ttctccccaa gtaaatacca attaataaaa tttcctacag 5100 gcttgcctac agacagatct tttggatgta ttttgtcagt taaggctccc ttctctctga 5160 tgattctagc ttgtgtctag ttgacataaa actaaccagg acagaaaaga tgagagggaa 5220 agaacagacc cctaaggcct gtgctaagtc gtcaacttaa ggaataagac aaggtctgga 5280 gaaagtaatg aggacagtca ttgcttagct ctgttctgag caagaggata agtaaagaag 5340 atgtagaaca catacatcaa ctgggcctgg gagctcgtgc ctgtaatctc agtccttggg 5400 agacaaatgc aggagaattg tcatgtactt gaagccagtc tgggctgcac agtagtcatg 5460 gttatcacag caatagaaag taagtaaaac aggtagcaag gcactttcag ctttgaagaa 5520 atgcctgcct ccatcttgga ggaatgagat gtcagaacag agggaacctt acagcttaaa 5580 agtgctgagt gagtcaagag ctgaaaagtt ccccaaaagc tagagtgccc gtcaccatcc 5640 tggctttgcc gacttcctct tttgctttgt tcatttcctt tgccaacatc atcatcagta 5700 tcgtcatcac tatgccacac ccccagcata acaatttcta tagtgagtta tttcttctac 5760 tcattgggga ccaaaaagga agtgtggtct gagagacagg gtttgatata catgttgtgc 5820 aacttgcctg ctctataacg acaaggggag gaaatttgga gcccaagtca cagggccagg 5880 atgaggtttg atagaacaat agagtaccag aggcattgcc cagtagttcc aaaatctccc 5940 tctagaagca aaagaatcat caaccagatc attgcctcct cccagacaaa cctcctccca 6000 tctcttcatc tcttactcac gattaaatgg ccattcgtct tcatgcatgt gccttcctcc 6060 aaatcctccc agacaaccac tcctctcagg catcagctca agggtttagg agtgttataa 6120 ctagcagatg gtgaagaaga ttctgtaact agactgagct caaggctcct gaaaaatcat 6180 ccagggagaa gggacttgga gctgacactc aggcccctag ttacccttct ctgtcccctg 6240 gttttcacca tccctggttc aactcacatc agcagaccaa aggagtctcc aataatctct 6300 gtcaggacag cccataaaat catcagacct tccagccctg cacacaggct ctgaggaagg 6360 tgttagtccc tccaggcata gtttgaaatg tggaccctgt gaaggcagaa cagaaaaatg 6420 aaccagatgg cccagacagg acctctggat tgtctgcaga actagataat acatcttata 6480 agaccttagt gctgagaact gaccattgct caccaaactc aaaagcaact gagaccctga 6540 accatcttca gatttcaaat caaacatata gctggtcaaa ggcaggattc ttctgtttgc 6600 cttcctgaaa tcgagatgct gtgaaccaaa ttaggcaaaa gaaggctgcc tagtaagtaa 6660 accttgtttc atagtagagc cttgtctatt cctccttcca attctgtctg tctatttccc 6720 ttcagtgctg cagaataagc tcagtaacca aaacatacta ggtacaaact catctgaatg 6780 aacacattgc caaattccta ctcacccggg ctagctccta ctgcctgcat ccatctgcca 6840 ggcactgtgg agacctggct ctaatggagt ccacagactc tctgagggct cagcaaagga 6900 gttaggtttc cactgaggat tctactatac tgtagatgtg cccaagagac tgtatgcagc 6960 attcatatgg cctggttgct cattccatcc aagcaagaag agctcccctg ggtaggctcc 7020 ctgggctctc tgagttagca gtctagtgat gcttgatatg gccaagagac ttggtctccc 7080 cagatcttat agaaacaaga attttccaaa acaatttttt aggcaaagac tatctcttca 7140 ctttttaaga tggactgtgc tcatgaacag gcagatgcct cgttcaccac ctttgcactg 7200 tgcaacttaa ttcaggctca ttctgctgat cacctagcac tgatatggtt tcaacatgag 7260 actggctatg gtattataag taccctggca gggcaggaaa gcaggagtgg gtgggtgagt 7320 gggggagcat cctcatagag gcaggggagg gggagaggat agggggtttc cggaggggag 7380 acctggaaaa gggataacat ttgaaatgta aataaagaaa atatccaata aaagaaaaaa 7440 ataagcaccc tggcattatc agactgcata ggcttgcttc cagagttccc tgaccctatg 7500 ataagtctac actgatacct gcatactgtg tgtgccctga cccacacaag gaagtgcgtg 7560 tctctccaga agcccctgct aacacagttg atggagagca cagaagcacc atccagttac 7620 caaactccaa ctgcaaagct ccctcagctt aagcacaagg aggcgagaga ggtgacacac 7680 ttctgggtgt gcatctacgt gcctaccttt gttccgcaca tcctgactta aaatgtacag 7740 ctaacccagg aaaacccaat atttttaata ttgacaccat ctgcacaatt gtccaggggg 7800 aaataatgcc catttccacc acgatgacac acttgcgaat gtgtcactat ctgccacccc 7860 ttgacttcca gggattagaa attatttcag ggtagcaata gcctcttccc ctaagaattc 7920 ccatcaagct tctcccccct cccccaccct tcagttttgt tgtgaaatca gttaacccaa 7980 gggaaaattt cacagctctt cacttctgct ttttaggact ataaaacaag ggagggaaaa 8040 caagttggac aacaaaccct gcagtggttc gaggcctaat aggctcatct gggatcctct 8100 ccagccaagc ttccttgtgc aagtaagtct ctctctctct ctgtctctct ctctctctgt 8160 ctctctctat ctctctctct ctgtctctct ctctctgtct ctgtctgtct ctctctctgt 8220 ctctgtctgt ctatctctct ctctctctgt ctgtctctgt ctctctctgt ctgtctctct

59 ctgtctctct gtctctctct ctgtctctct ctgtctctct ctctctctct ctttcccccc 8340 cccccactga tggactttgg gctttttatt tataaaaagt agctgtacct ccatggtttg 8400 tgaagtactc tggaaatgag tactgtctgt atagccgctg acatctaaaa ggcagctcct 8460 gtcttgtagg aaagcttctt tattagggtt tggctctgct gttgcttcct tccagagcat 8520 cttcctaatg ctgttcccca tgttgtagtg accccccaca caccctaaaa ttattttcat 8580 tgctacttca taactataat tttgctactg ttatgaagtg taaatatctg tgttatccaa 8640 tggtcttagg tgacccctgt gaaagggcca cttgactcca aaagggccac tggtctagac 8700 ctatacaacg gctcctccgt tccttcattc ctcagagacc agtttagcat gcctgccctg 8760 aactagagct aagagaaaca catatgaagg acgcccctcg gggagctaac gctggatgcc 8820 cacccacttt ctttcttcac acaggtgtct gaagcagcta tggcaactgt taagggcgaa 8880 ttctgcagat gggatccacc ggtcgccacc atggtgagca agggcgagga gctgttcacc 8940 ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg 9000 tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc 9060 accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag 9120 tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc 9180 gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc 9240 gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac 9300 ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac aagctggagt acaactacaa cagccacaac 9360 gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac 9420 aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc agcagaacac ccccatcggc 9480 gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa 9540 gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc 9600 actctcggca tggacgagct gtacaagaag cttagccatg gcttcccgcc ggcggtggcg 9660 gcgcaggatg atggcacgct gcccatgtct tgtgcccagg agagcgggat ggaccgtcac 9720 cctgcagcct gtgcttctgc taggatcaat gtgtagatgc gc 9762 <210> 11 <211> 6917 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 11 ggcggccgcg aattcactag tgatgtaagc aacaggtgac aggttccccg ggcagcatct 60 ctagggtctg ggcctgcctt cacttctagg agcagctgga acagctaata ctgagcagta 120 gagctctgtg gcttatgaca catgtggtag tcaggcagcg actgattaca tcacctctcc 180 agccagaaac cccagctgct gtgtcaagga tgttaaaaat ggaaagtgca ccacagctgt 240 tggtagcttt ctccccaagc atcttaagaa actgggaggc caacctttgt aatgctgcca 300 attatgcaat gctctgtagg ggtgaacctt ggccccagga actcattcta caggctttta 360 gaaacgcggc catgtaaatt tctctaatgg aaacagctgg agaaatagag atgttgagcc 420 catgaggaca tcaaaggccc cactgtgtgg aaaagccccc acacaggaaa atgtgtgggc 480 ctgactcctt ccattctgga aggggaggcc tgagttgctt gggctgggat gagatgctga 540 agatctgaga agagagacaa gagcattgag gctgagagtt attaggtaga tgcccctcac 600 gatggcatgc ttaatctgaa ggcacagaag gtgatgatga ctaggagatt tgtccccatc 660 ctgctttcct tcagacatgc caacagggcc actatgatac cagaagttgt caagcttact 720 gcaagataca tgcagagttt tttgttgttt tctagaatac tgtccaatga ttggagaact 780 atcccagaac cattctctgt tctttgtgag agactttagg ccaacattcc ttacattgct 840 tagtcttcct gctttcacta ttccccagca tcaaaattac acttaaagta actatctcaa 900 aactctttac attgcccaac atccaacatt tctaggatgt tatctgtctc catccaagga 960 tcaggtcaat aggaagacag atggtgtgag agtagattct ggagtcagaa cattctagtt 1020 tcgaatcttc accctaccct ttactggcaa taaggctgag taacctcaat gatttatcta 1080 atctacccac agtgtgcatg tagcagtcaa agacaacttg tggagtcagt gagaactgac 1140 ttccaccttt atgtaagttc agggatcaga gagcaaggtt tgtatagcaa gccccttagt 1200 catctcatca ccctacatcc tcagttttca aatctacaaa atggggtagg tgtgtggtga 1260 ggcttatgtt aatctgtgta tttgcacata ttttctccct ttctatgtac cccaggatgt 1320 tttagatggt agataaatgt ctgcataaag actagaccag tacaagttat tagaaatggg 1380 gacaccacag gcaagctccc taagaaagac cccgtctcta ccagttgatt tggaactatg 1440 ttcctactcc atcacgcagc cagtgtacta cacggaggat aaggaatcca atgtatccta 1500 ttcaggtgac ccactgagaa cacgtgggat agtccctagc tattactctc agagtgccca 1560 ggtactttta ggataaaccc aaatctactg aattaggggg aagaaggttg gcaagatgcc 1620 tcagtggtaa aggctaggta gaggctagta gcagaggtag gcacacagac tggatgactt

60 ttgtgtttag atttctgagt cacacaaggt gacaggagag aagttactag caagagttgg 1740 tctctgacct ccacaggtgt actgtggcac acacacacac acacactcat aatacatgtg 1800 cacaaatgca tgtacacata catacacaca tgcatacatg cacacacaca cactcatata 1860 cacacgcaca taaacatgct cacacacaca tacatgtgca cgcacatgca catactcata 1920 cacacatgaa cacatgtgtg tgtacacacg tgaaaatatt ttttaaaaat gaaagtgcaa 1980 ctagagacat ataaaataac accaacatcc ttagatgcaa cccttcctga gaatttgttg 2040 gacatcatac tctttttaaa aagcataata aacatcaaga cacttacaca aaatatgtta 2100 aattaaattt aaaacaacaa cgacaaaata gtacctcaag ctcaacaagc attttaggtg 2160 tccttagctt actatttctc tggctaactg tatgaagcca tctatcaccc tgtgtgcaat 2220 tagctcattg tgtagataag aaggtaaaac catcttgaaa caggaaacca atatccttcc 2280 tgtctaatca acaaatctaa aagatttatt cttttcatct atctcctctt gcgtttgtcc 2340 accacaacag gctgcttaca ggttcaggat ggttttgaca aagagaacat tttcatgagt 2400 tacttttgtg tctccacccc aaagaggaaa atttgtttca tacagaaggc gttcattgta 2460 tgaattaaaa ctgccaccta agtgtgggct aacccgacca agagggattt cacctaaatc 2520 cattcagtca gtgtatgggg gtttaaagaa attccagaga gtcatcagaa gaggaaaaac 2580 aaaggtaatg ctttctgcca cacaggtaga ctctttgaaa atatgtgtaa tatgtaaaac 2640 atcgtgacac ccccatatta tttttccagc attaacagta taaattgcct cccatgctga 2700 agagctgcct atcacccttg ctaatcactc ctcacatcga attcccgcgg ccgccatggc 2760 ggccgggagc atgcgacgtc gggcccggga tccaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg 2820 cgaggagctg ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg 2880 ccacaagttc agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct 2940 gaagttcatc tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct 3000 gacctacggc gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt 3060 caagtccgcc atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg 3120 caactacaag acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga 3180 gctgaagggc atcgacttca aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa 3240 ctacaacagc cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa 3300 cttcaagatc cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca 3360 gaacaccccc atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca 3420 gtccgccctg agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt 3480 gaccgccgcc gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac aagtaaagcg gccgcgactc 3540 tagatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca 3600 cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt 3660 gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt 3720 ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta aggcgtaaat 3780 tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt 3840 taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga ccgagatagg 3900 gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg actccaacgt 3960 caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc 4020 aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg 4080 atttagagct tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa 4140 aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc 4200 cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg 4260 cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca 4320 ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac 4380 cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga 4440 agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc 4500 ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc 4560 ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc 4620 tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga gctattccag 4680 aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg 4740 atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg 4800 ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc 4860 cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg 4920 tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt 4980 tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg 5040 cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat 5100 catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca

61 ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca 5220 ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa 5280 ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa 5340 tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc 5400 ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga 5460 atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc 5520 cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac 5580 caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg 5640 ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc 5700 atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg aaacacggaa ggagacaata 5760 ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg 5820 tcgtttgttc ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc actctgtcga taccccaccg 5880 agaccccatt ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt 5940 tcgggtgaag gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg caggccctgc catagcctca 6000 ggttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag 6060 gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac 6120 tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc 6180 gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat 6240 caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat 6300 actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct 6360 acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt 6420 cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg 6480 gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta 6540 cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg 6600 gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg 6660 tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc 6720 tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg 6780 gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat 6840 aaccgtatta ccgccatgca ttagttatta ctagcgctac cggactcaga tctcgagctc 6900 aagcttcgaa ttctgca 6917 <210> 12 <211> 7046 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 12 tcgagctcaa gcttcgaatt ctgcaggcgg ccgcgaattc actagtgatg taagcaacag 60 gtgacaggtt ccccgggcag catctctagg gtctgggcct gccttcactt ctaggagcag 120 ctggaacagc taatactgag cagtagagct ctgtggctta tgacacatgt ggtagtcagg 180 cagcgactga ttacatcacc tctccagcca gaaaccccag ctgctgtgtc aaggatgtta 240 aaaatggaaa gtgcaccaca gctgttggta gctttctccc caagcatctt aagaaactgg 300 gaggccaacc tttgtaatgc tgccaattat gcaatgctct gtaggggtga accttggccc 360 caggaactca ttctacaggc ttttagaaac gcggccatgt aaatttctct aatggaaaca 420 gctggagaaa tagagatgtt gagcccatga ggacatcaaa ggccccactg tgtggaaaag 480 cccccacaca ggaaaatgtg tgggcctgac tccttccatt ctggaagggg aggcctgagt 540 tgcttgggct gggatgagat gctgaagatc tgagaagaga gacaagagca ttgaggctga 600 gagttattag gtagatgccc ctcacgatgg catgcttaat ctgaaggcac agaaggtgat 660 gatgactagg agatttgtcc ccatcctgct ttccttcaga catgccaaca gggccactat 720 gataccagaa gttgtcaagc ttactgcaag atacatgcag agttttttgt tgttttctag 780 aatactgtcc aatgattgga gaactatccc agaaccattc tctgttcttt gtgagagact 840 ttaggccaac attccttaca ttgcttagtc ttcctgcttt cactattccc cagcatcaaa 900 attacactta aagtaactat ctcaaaactc tttacattgc ccaacatcca acatttctag 960 gatgttatct gtctccatcc aaggatcagg tcaataggaa gacagatggt gtgagagtag 1020 attctggagt cagaacattc tagtttcgaa tcttcaccct accctttact ggcaataagg 1080 ctgagtaacc tcaatgattt atctaatcta cccacagtgt gcatgtagca gtcaaagaca 1140 acttgtggag tcagtgagaa ctgacttcca cctttatgta agttcaggga tcagagagca 1200 aggtttgtat agcaagcccc ttagtcatct catcacccta catcctcagt tttcaaatct 1260 acaaaatggg gtaggtgtgt ggtgaggctt atgttaatct gtgtatttgc acatattttc 1320 tccctttcta tgtaccccag gatgttttag atggtagata aatgtctgca taaagactag

62 accagtacaa gttattagaa atggggacac cacaggcaag ctccctaaga aagaccccgt 1440 ctctaccagt tgatttggaa ctatgttcct actccatcac gcagccagtg tactacacgg 1500 aggataagga atccaatgta tcctattcag gtgacccact gagaacacgt gggatagtcc 1560 ctagctatta ctctcagagt gcccaggtac ttttaggata aacccaaatc tactgaatta 1620 gggggaagaa ggttggcaag atgcctcagt ggtaaaggct aggtagaggc tagtagcaga 1680 ggtaggcaca cagactggat gacttttgtg tttagatttc tgagtcacac aaggtgacag 1740 gagagaagtt actagcaaga gttggtctct gacctccaca ggtgtactgt ggcacacaca 1800 cacacacaca ctcataatac atgtgcacaa atgcatgtac acatacatac acacatgcat 1860 acatgcacac acacacactc atatacacac gcacataaac atgctcacac acacatacat 1920 gtgcacgcac atgcacatac tcatacacac atgaacacat gtgtgtgtac acacgtgaaa 1980 atatttttta aaaatgaaag tgcaactaga gacatataaa ataacaccaa catccttaga 2040 tgcaaccctt cctgagaatt tgttggacat catactcttt ttaaaaagca taataaacat 2100 caagacactt acacaaaata tgttaaatta aatttaaaac aacaacgaca aaatagtacc 2160 tcaagctcaa caagcatttt aggtgtcctt agcttactat ttctctggct aactgtatga 2220 agccatctat caccctgtgt gcaattagct cattgtgtag ataagaaggt aaaaccatct 2280 tgaaacagga aaccaatatc cttcctgtct aatcaacaaa tctaaaagat ttattctttt 2340 catctatctc ctcttgcgtt tgtccaccac aacaggctgc ttacaggttc aggatggttt 2400 tgacaaagag aacattttca tgagttactt ttgtgtctcc accccaaaga ggaaaatttg 2460 tttcatacag aaggcgttca ttgtatgaat taaaactgcc acctaagtgt gggctaaccc 2520 gaccaagagg gatttcacct aaatccattc agtcagtgta tgggggttta aagaaattcc 2580 agagagtcat cagaagagga aaaacaaagg taatgctttc tgccacacag gtagactctt 2640 tgaaaatatg tgtaatatgt aaaacatcgt gacaccccca tattattttt ccagcattaa 2700 cagtataaat tgcctcccat gctgaagagc tgcctatcac ccttgctaat cactcctcac 2760 atcgaattcc cgcggccgcc atggcggccg ggagcatgcg acgtcgggcc cgggatccac 2820 cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg 2880 tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 2940 atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 3000 cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 3060 accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 3120 gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg 3180 gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 3240 tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 3300 agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 3360 tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 3420 ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 3480 atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc 3540 tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggaggtgga ggagcaggat gatggcacgc 3600 tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca ccctgcagcc tgtgcttctg 3660 ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcg actctagatc ataatcagcc ataccacatt 3720 tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa 3780 aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag 3840 caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt 3900 gtccaaactc atcaatgtat cttaaggcgt aaattgtaag cgttaatatt ttgttaaaat 3960 tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa 4020 tcccttataa atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca 4080 agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg 4140 gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta 4200 aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg 4260 cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa 4320 gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg 4380 gcgcgtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct 4440 aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat 4500 attgaaaaag gaagagtcct gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt gtcagttagg 4560 gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta 4620 gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat 4680 gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac 4740 tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga 4800 ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg

63 cctaggcttt tgcaaagatc gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc atgattgaac 4920 aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga gaggctattc ggctatgact 4980 gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca gcgcaggggc 5040 gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg caagacgagg 5100 cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg ctcgacgttg 5160 tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag gatctcctgt 5220 catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg cggcggctgc 5280 atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc atcgagcgag 5340 cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa gagcatcagg 5400 ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgag catgcccgac ggcgaggatc 5460 tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat ggccgctttt 5520 ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac atagcgttgg 5580 ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc ctcgtgcttt 5640 acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt gacgagttct 5700 tctgagcggg actctggggt tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc tgccatcacg 5760 agatttcgat tccaccgccg ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg ttttccggga 5820 cgccggctgg atgatcctcc agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg cccaccctag 5880 ggggaggcta actgaaacac ggaaggagac aataccggaa ggaacccgcg ctatgacggc 5940 aataaaaaga cagaataaaa cgcacggtgt tgggtcgttt gttcataaac gcggggttcg 6000 gtcccagggc tggcactctg tcgatacccc accgagaccc cattggggcc aatacgcccg 6060 cgtttcttcc ttttccccac cccacccccc aagttcgggt gaaggcccag ggctcgcagc 6120 caacgtcggg gcggcaggcc ctgccatagc ctcaggttac tcatatatac tttagattga 6180 tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat 6240 gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat 6300 caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa 6360 accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa 6420 ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt 6480 aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt 6540 accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata 6600 gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt 6660 ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac 6720 gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga 6780 gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg 6840 ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa 6900 aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat 6960 gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcca tgcattagtt 7020 attactagcg ctaccggact cagatc 7046 <210> 13 <211> 7183 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 13 tcgagctcaa gcttcgaatt ctgcaggcgg ccgcgaattc actagtgatg taagcaacag 60 gtgacaggtt ccccgggcag catctctagg gtctgggcct gccttcactt ctaggagcag 120 ctggaacagc taatactgag cagtagagct ctgtggctta tgacacatgt ggtagtcagg 180 cagcgactga ttacatcacc tctccagcca gaaaccccag ctgctgtgtc aaggatgtta 240 aaaatggaaa gtgcaccaca gctgttggta gctttctccc caagcatctt aagaaactgg 300 gaggccaacc tttgtaatgc tgccaattat gcaatgctct gtaggggtga accttggccc 360 caggaactca ttctacaggc ttttagaaac gcggccatgt aaatttctct aatggaaaca 420 gctggagaaa tagagatgtt gagcccatga ggacatcaaa ggccccactg tgtggaaaag 480 cccccacaca ggaaaatgtg tgggcctgac tccttccatt ctggaagggg aggcctgagt 540 tgcttgggct gggatgagat gctgaagatc tgagaagaga gacaagagca ttgaggctga 600 gagttattag gtagatgccc ctcacgatgg catgcttaat ctgaaggcac agaaggtgat 660 gatgactagg agatttgtcc ccatcctgct ttccttcaga catgccaaca gggccactat 720 gataccagaa gttgtcaagc ttactgcaag atacatgcag agttttttgt tgttttctag 780 aatactgtcc aatgattgga gaactatccc agaaccattc tctgttcttt gtgagagact 840 ttaggccaac attccttaca ttgcttagtc ttcctgcttt cactattccc cagcatcaaa 900 attacactta aagtaactat ctcaaaactc tttacattgc ccaacatcca acatttctag

64 gatgttatct gtctccatcc aaggatcagg tcaataggaa gacagatggt gtgagagtag 1020 attctggagt cagaacattc tagtttcgaa tcttcaccct accctttact ggcaataagg 1080 ctgagtaacc tcaatgattt atctaatcta cccacagtgt gcatgtagca gtcaaagaca 1140 acttgtggag tcagtgagaa ctgacttcca cctttatgta agttcaggga tcagagagca 1200 aggtttgtat agcaagcccc ttagtcatct catcacccta catcctcagt tttcaaatct 1260 acaaaatggg gtaggtgtgt ggtgaggctt atgttaatct gtgtatttgc acatattttc 1320 tccctttcta tgtaccccag gatgttttag atggtagata aatgtctgca taaagactag 1380 accagtacaa gttattagaa atggggacac cacaggcaag ctccctaaga aagaccccgt 1440 ctctaccagt tgatttggaa ctatgttcct actccatcac gcagccagtg tactacacgg 1500 aggataagga atccaatgta tcctattcag gtgacccact gagaacacgt gggatagtcc 1560 ctagctatta ctctcagagt gcccaggtac ttttaggata aacccaaatc tactgaatta 1620 gggggaagaa ggttggcaag atgcctcagt ggtaaaggct aggtagaggc tagtagcaga 1680 ggtaggcaca cagactggat gacttttgtg tttagatttc tgagtcacac aaggtgacag 1740 gagagaagtt actagcaaga gttggtctct gacctccaca ggtgtactgt ggcacacaca 1800 cacacacaca ctcataatac atgtgcacaa atgcatgtac acatacatac acacatgcat 1860 acatgcacac acacacactc atatacacac gcacataaac atgctcacac acacatacat 1920 gtgcacgcac atgcacatac tcatacacac atgaacacat gtgtgtgtac acacgtgaaa 1980 atatttttta aaaatgaaag tgcaactaga gacatataaa ataacaccaa catccttaga 2040 tgcaaccctt cctgagaatt tgttggacat catactcttt ttaaaaagca taataaacat 2100 caagacactt acacaaaata tgttaaatta aatttaaaac aacaacgaca aaatagtacc 2160 tcaagctcaa caagcatttt aggtgtcctt agcttactat ttctctggct aactgtatga 2220 agccatctat caccctgtgt gcaattagct cattgtgtag ataagaaggt aaaaccatct 2280 tgaaacagga aaccaatatc cttcctgtct aatcaacaaa tctaaaagat ttattctttt 2340 catctatctc ctcttgcgtt tgtccaccac aacaggctgc ttacaggttc aggatggttt 2400 tgacaaagag aacattttca tgagttactt ttgtgtctcc accccaaaga ggaaaatttg 2460 tttcatacag aaggcgttca ttgtatgaat taaaactgcc acctaagtgt gggctaaccc 2520 gaccaagagg gatttcacct aaatccattc agtcagtgta tgggggttta aagaaattcc 2580 agagagtcat cagaagagga aaaacaaagg taatgctttc tgccacacag gtagactctt 2640 tgaaaatatg tgtaatatgt aaaacatcgt gacaccccca tattattttt ccagcattaa 2700 cagtataaat tgcctcccat gctgaagagc tgcctatcac ccttgctaat cactcctcac 2760 atcgaattcc cgcggccgcc atggcggccg ggagcatgcg acgtcgggcc cgggatccac 2820 cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg 2880 tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 2940 atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 3000 cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 3060 accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 3120 gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg 3180 gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 3240 tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 3300 agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 3360 tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 3420 ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 3480 atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc 3540 tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggaggtgga ggagcaggat gatggcacgc 3600 tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca ccctgcagcc tgtgcttctg 3660 ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcg ggaattcgat gccctcaata actatgtacc 3720 tcctgcttac aacacataag gctctctatt tatttaaata tttaacttta atttattttt 3780 ggatgtattg tttactatct tttgtaacta ctagtcttca gatgataaat atggatcttt 3840 aaagattctt tttgtaagcc ccaagggctc aaaaatgttt taaactattt atctgaaatt 3900 atttattata ttgaattgtt aaatatcatg tgtaggtaga ctcattaata aaagtattta 3960 gatgattcaa atataaataa gctcagatgt ctgtcatttt taggacagca caaagtaagc 4020 gctaaaataa cttctcagtt attcctgtga actctatctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt 4080 taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata 4140 ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt 4200 tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg 4260 aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt 4320 ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc 4380 ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg

65 cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct 4500 taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc 4560 tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg 4620 ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg 4680 aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa 4740 agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc 4800 agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg 4860 cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt 4920 ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga 4980 ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc 5040 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag 5100 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg 5160 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa 5220 tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc 5280 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc 5340 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga 5400 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa 5460 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct 5520 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat 5580 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt 5640 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta 5700 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga 5760 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg 5820 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg 5880 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc 5940 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag 6000 ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga 6060 acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt 6120 cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat 6180 tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa 6240 ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca 6300 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc 6360 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca 6420 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc 6480 tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta 6540 ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt 6600 ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc 6660 gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg 6720 ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg 6780 tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag 6840 ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc 6900 agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat 6960 agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg 7020 gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc 7080 tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt 7140 accgccatgc attagttatt actagcgcta ccggactcag atc 7183 <210> 14 <211> 5916 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 14 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 360 atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca

66 agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt 480 ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg 540 gaggtctata taagcagagc tggtttagtg aaccgtcaga tccgctagcg ctaccggact 600 cagatctcga gctcaagctt cgaattctgc agtcgacggt accgcgggcc cgggatccac 660 cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg 720 tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 780 atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 840 cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 900 accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 960 gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg 1020 gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 1080 tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 1140 agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 1200 tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 1260 ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 1320 atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc 1380 tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggcggtggc ggcgcaggat gatggcacgc 1440 tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca ccctgcagcc tgtgcttctg 1500 ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcc agtgtgctgg aattcggctg aagggaatgg 1560 gtgttcatcc attctctacc cagcccccac tctgacccct ttactctgac ccctttattg 1620 tctactcctc agagccccca gtctgtgtcc ttctaactta gaaaggggat tatggctcag 1680 agtccaactc tgtgctcaga gctttcaaca actactcaga aacacaagat gctgggacag 1740 tgacctggac tgtgggcctc tcatgcacca ccatcaagga ctcaaatggg ctttccgaat 1800 tcactggagc ctcgaatgtc cattcctgag ttctgcaaag ggagagtggt caggttgcct 1860 ctgtctcaga atgaggctgg ataagatctc aggccttcct accttcagac ctttccagac 1920 tcttccctga ggtgcaatgc acagccttcc tcacagagcc agcccccctc tatttatatt 1980 tgcacttatt atttattatt tatttattat ttatttattt gcttatgaat gtatttattt 2040 ggaaggccgg ggtgtcctgg aggacccagt gtgggaagct gtcttcagac agacatgttt 2100 tctgtgaaaa cggagctgag ctgtccccac ctggcctctc taccttgttg cctcctcttt 2160 tgcttatgtt taaaacaaaa tatttatcta acccaattgt cttaataacg ctgatttggt 2220 gaccaggctg tcgctacatc actgaacctc tgctccccac gggagccgtg actgtaattg 2280 ccctacagtc aattgagaga aataaagatc gcttggaaaa gaaatgtgat ttctgtcttg 2340 ggatgaagtc tgcatccatc tctttgcgga ggcctaaagt ctctgggtcc agatctcagt 2400 ctttataccc ctgggccatt aagaccccca agacccccgt ggaacaaaag gcagccaaca 2460 tccctacctc tcccccggaa acaggagcct aaccctaatt acctttgccc tggggcatgg 2520 gaatttccca ctctgggaat tcttaagccg aattctgcag atatccatca cactggcggc 2580 cgcgactcta gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa 2640 acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattgtt gttgttaact 2700 tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata 2760 aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttaag 2820 gcgtaaattg taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc 2880 tcatttttta accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc 2940 gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac 3000 tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca 3060 ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg 3120 agcccccgat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag 3180 aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc 3240 accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt caggtggcac ttttcgggga 3300 aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac attcaaatat gtatccgctc 3360 atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag tcctgaggcg 3420 gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag 3480 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc 3540 caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag 3600 tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc 3660 cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc 3720 tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa gatcgatcaa 3780 gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg 3840 gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct

67 gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac 3960 ctgtccggtg ccctgaatga actgcaagac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg 4020 acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg 4080 ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa 4140 gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca 4200 ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt 4260 gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc 4320 aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc 4380 ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg 4440 ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt 4500 ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag 4560 cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa 4620 tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct 4680 atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg 4740 gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ctagggggag gctaactgaa acacggaagg 4800 agacaatacc ggaaggaacc cgcgctatga cggcaataaa aagacagaat aaaacgcacg 4860 gtgttgggtc gtttgttcat aaacgcgggg ttcggtccca gggctggcac tctgtcgata 4920 ccccaccgag accccattgg ggccaatacg cccgcgtttc ttccttttcc ccaccccacc 4980 ccccaagttc gggtgaaggc ccagggctcg cagccaacgt cggggcggca ggccctgcca 5040 tagcctcagg ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa 5100 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt 5160 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt 5220 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt 5280 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga 5340 taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 5400 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 5460 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg 5520 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga 5580 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca 5640 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa 5700 acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt 5760 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac 5820 ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta tcccctgatt 5880 ctgtggataa ccgtattacc gccatgcatt agttat 5916 <210> 15 <211> 5841 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 15 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 300 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 420 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 480 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 540 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta 600 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg 660 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc 720 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg 780 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc 840 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag 900 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag 960 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac 1020 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac 1080 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc

68 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg 1200 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc 1260 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag 1320 ctgtacaagt ccggactcag atctaagctg aaccctcctg atgagagtgg ccccggctgc 1380 atgagctgca agtgtgtgct ctcctgagga tccagatctc gagctcaagc ttggtaccga 1440 gctcggatcc actagtaacg gccgccagtg tgctggaatt cggctgaagg gaatgggtgt 1500 tcatccattc tctacccagc ccccactctg acccctttac tctgacccct ttattgtcta 1560 ctcctcagag cccccagtct gtgtccttct aacttagaaa ggggattatg gctcagagtc 1620 caactctgtg ctcagagctt tcaacaacta ctcagaaaca caagatgctg ggacagtgac 1680 ctggactgtg ggcctctcat gcaccaccat caaggactca aatgggcttt ccgaattcac 1740 tggagcctcg aatgtccatt cctgagttct gcaaagggag agtggtcagg ttgcctctgt 1800 ctcagaatga ggctggataa gatctcaggc cttcctacct tcagaccttt ccagactctt 1860 ccctgaggtg caatgcacag ccttcctcac agagccagcc cccctctatt tatatttgca 1920 cttattattt attatttatt tattatttat ttatttgctt atgaatgtat ttatttggaa 1980 ggccggggtg tcctggagga cccagtgtgg gaagctgtct tcagacagac atgttttctg 2040 tgaaaacgga gctgagctgt ccccacctgg cctctctacc ttgttgcctc ctcttttgct 2100 tatgtttaaa acaaaatatt tatctaaccc aattgtctta ataacgctga tttggtgacc 2160 aggctgtcgc tacatcactg aacctctgct ccccacggga gccgtgactg taattgccct 2220 acagtcaatt gagagaaata aagatcgctt ggaaaagaaa tgtgatttct gtcttgggat 2280 gaagtctgca tccatctctt tgcggaggcc taaagtctct gggtccagat ctcagtcttt 2340 atacccctgg gccattaaga cccccaagac ccccgtggaa caaaaggcag ccaacatccc 2400 tacctctccc ccggaaacag gagcctaacc ctaattacct ttgccctggg gcatgggaat 2460 ttcccactct gggaattctt aagccgaatt ctgcagatgg gatccaccgg atctagataa 2520 ctgatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca 2580 cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt 2640 gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt 2700 ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta acgcgtaaat 2760 tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt 2820 taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga ccgagatagg 2880 gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg actccaacgt 2940 caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc 3000 aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg 3060 atttagagct tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa 3120 aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc 3180 cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg 3240 cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca 3300 ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac 3360 cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga 3420 agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc 3480 ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc 3540 ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc 3600 tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga gctattccag 3660 aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg 3720 atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg 3780 ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc 3840 cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg 3900 tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt 3960 tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg 4020 cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat 4080 catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca 4140 ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca 4200 ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa 4260 ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa 4320 tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc 4380 ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga 4440 atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc 4500 cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac 4560 caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg

69 ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc 4680 atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg aaacacggaa ggagacaata 4740 ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg 4800 tcgtttgttc ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc actctgtcga taccccaccg 4860 agaccccatt ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt 4920 tcgggtgaag gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg caggccctgc catagcctca 4980 ggttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag 5040 gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac 5100 tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc 5160 gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat 5220 caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat 5280 actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct 5340 acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt 5400 cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg 5460 gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta 5520 cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg 5580 gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg 5640 tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc 5700 tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg 5760 gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat 5820 aaccgtatta ccgccatgca t 5841 <210> 16 <211> 5792 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 16 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 300 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 420 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 480 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 540 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta 600 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg 660 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc 720 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg 780 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc 840 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag 900 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag 960 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac 1020 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac 1080 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc 1140 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg 1200 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc 1260 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag 1320 ctgtacaagt ccggactcag atctaagctg aaccctcctg atgagagtgg ccccggctgc 1380 atgagctgca agtgtgtgct ctcctgagga tccagatctc gagctcaagc ttggtaccga 1440 gctcggatcc actagtaacg gccgccagtg tgctggaatt cggctgaagg gaatgggtgt 1500 tcatccattc tctacccagc ccccactctg acccctttac tctgacccct ttattgtcta 1560 ctcctcagag cccccagtct gtgtccttct aacttagaaa ggggattatg gctcagagtc 1620 caactctgtg ctcagagctt tcaacaacta ctcagaaaca caagatgctg ggacagtgac 1680 ctggactgtg ggcctctcat gcaccaccat caaggactca aatgggcttt ccgaattcac 1740 tggagcctcg aatgtccatt cctgagttct gcaaagggag agtggtcagg ttgcctctgt 1800 ctcagaatga ggctggataa gatctcaggc cttcctacct tcagaccttt ccagactctt 1860 ccctgaggtg caatgcacag ccttcctcac agagccagcc cccctctatt tatatttgca

70 cttattattt attatttatt tattatttat ttatttgctt atgaatgtat ttatttggaa 1980 ggccggggtg tcctggagga cccagtgtgg gaagctgtct tcagacagac atgttttctg 2040 tgaaaacgga gctgagctgt ccccacctgg cctctctacc ttgttgcctc ctcttttgct 2100 tatgtttaaa acaaaatatt tatctaaccc aattgtctta ataacgctga tttggtgacc 2160 aggctgtcgc tacatcactg aacctctgct ccccacggga gccgtgactg taattgccct 2220 acagtcaatt gagagaaata aagatcgctt ggaaaagaaa tgtgatttct gtcttgggat 2280 gaagtctgca tccatctctt tgcggaggcc taaagtctct gggtccagat ctcagtcttt 2340 atacccctgg gccattaaga cccccaagac ccccgtggaa caaaaggcag ccaacatccc 2400 tacctctccc ccggaaacag gagcctaacc ctaattacct ttgccctggg gcatgggaat 2460 ttcccactct gggaattctt aagccgaatt ctgcagatgg gatccaccgg atctagataa 2520 ctgatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca 2580 cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttga cggtaccgcg 2640 ggcccgggat ccaccggatc tagataactg atcataatca gccataccac atttgtagag 2700 gttttacttg ctttaagcgt taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc 2760 agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag 2820 accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg 2880 gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca 2940 tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa 3000 gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg 3060 aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta 3120 accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg 3180 ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg 3240 ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag 3300 gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc 3360 cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt 3420 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca 3480 tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc 3540 cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg 3600 agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat 3660 caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct 3720 ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc 3780 tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc 3840 gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc 3900 acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg 3960 ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag 4020 aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc 4080 ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt 4140 cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc 4200 gccaggctca aggcgagcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc 4260 tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg 4320 ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag 4380 cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg 4440 cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg 4500 aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct 4560 tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc 4620 gcggggatct catgctggag ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga 4680 aggagacaat accggaagga acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc 4740 acggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg 4800 ataccccacc gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc 4860 accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg 4920 ccatagcctc aggttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta 4980 aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 5040 tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt 5100 tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt 5160 gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc 5220 agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg 5280 tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg 5340 ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt

71 cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac 5460 tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg 5520 acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg 5580 gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat 5640 ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt 5700 tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 5760 attctgtgga taaccgtatt accgccatgc at 5792 <210> 17 <211> 6777 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 17 tagttattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc 60 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg 120 accatgatta cgccaagcta tttaggtgac actatagaat actcaagcta tgcatcaagc 180 ttggtaccga gctcggatcc actagtaacg gccgccagtg tgctggaatt cgcccttttc 240 tctggagaaa gctgctcccc cagggccatt cccactccca tctacctggc acacgaggtc 300 cagctctttt cctcccaata ccccttccat gtgcctctcc tcagtgcgca gaagtctgtg 360 tatccgggac ttcaaggacc gtgggtgcgc tcaatgtacc agggggctgt gttcctgctc 420 agtaagggag accagctgtc cacccacacc gacggcatct cccatctaca cttcagcccc 480 agcagtgtat tctttggagc ctttgcactg tagattctaa agaaacccaa gaattggatt 540 ccaggcctcc atcctgaccg ttgtttcaag ggtcacatcc ccacagtctc cagccttccc 600 cactaaaata acctggagct ctcacgggag tctgagacac ttcaggggac tacatcttcc 660 ccagggccac tccagatgct caggggacga ctcaagccta cctagaagtt cctgcacaga 720 gcagggtttt tgtgggtcta ggtcggacag agacctggac atgaaggagg gacagacatg 780 ggagaggtgg ctgggaacag gggaaggttg actatttatg gagagaaaag ttaagttatt 840 tatttataga gaatagaaag aggggaaaaa tagaaagccg tcagatgaca actaggtccc 900 agacacaaag gtgtctcacc tcagacagga cccatctaag agagagatgg cgagagaatt 960 agatgtgggt gaccaagggg ttctagaaga aagcacgaag ctctaaaagc cagccactgc 1020 ttggctagac atccacaggg accccctgca ccatctgtga aacccaataa acctcttttc 1080 tctgagattc tgtctgcttg tgtctgtctt gcgttggggg agaaacttcc tggtctcttt 1140 aaggagtgga gcaggggaca gaggcctcag ttggtccatg ggatccgggc agagcaaaga 1200 gacatgagga gcaggcagct cccagagaca tggtggattc acgggagtga ggcagcttaa 1260 ctgccgagag acccaaagga tgagctaggg agatccatcc aagggtggag agagatgagg 1320 gttctgggga gaagtgactc cactggaggg tgggagagtg tttaggagtg ggagggtggg 1380 ggaggggaat ccttggaaga ccggggagtc atacggattg ggagaaatcc tggaagcagg 1440 gctgtgggac ctaaatgtct gagttgatgt accgcagtca agatatggca gaggctccgt 1500 ggaaaactca cttgggagca gggacccaaa gcagcagcct gagctcatga tcagagtgaa 1560 aggagaaggc ttgtgaggtc cgtgaattcc cagggctgag ttcattccct ctggggctgc 1620 cccatactca tcccattacc ccccccacca gccctcccaa agcccatgca cacttcccaa 1680 ctctcaagct gctctgcctt cagccacttc ctccaagaac tcaaacaggg ggctttccct 1740 cctcaatatc atgtctcccc ccttatgcac ccagctttca gaagcacccc cccatgctaa 1800 gttctccccc atggatgtcc catttagaaa tcaaaaggaa atagacacag gcatggtctt 1860 tctacaaaga aacagacaat gattagctct ggaggacaga gaagaaatgg gtttcagttc 1920 tcagggtcct atacaacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacaccct 1980 cctgattggc cccagattgc cacagaatcc tggtggggac gacgggggag agattccttg 2040 atgcctgggt gtccccaact ttccaaaccc tctgcccccg cgatggagaa gaaaccgaga 2100 cagaggtgta gggccactac cgcttcctcc acatgagatc atggttttct ccaccaagga 2160 agttttccga gggttgaatg agagcttttc cccgccctct tccccaaggg ctataaaggc 2220 ggccgtctgc acagccagcc agcagaagct ccctcagcga ggacagcaag ggactagcca 2280 ggagggagaa cagaaactcc agaacatctt ggaaatagct cccagaaaag caagcagcca 2340 accaggcagg ttctgtccct ttcactcact ggcccaaggc gccacatctc cctccagaaa 2400 agacaccatg agcacagaaa gcatgatccg cgacgtggaa ctggcagaag aggcactccc 2460 ccaaaagatg gggggcttcc agaactccag gcggtgccta tgtctcagcc tcttaagggc 2520 gaattctgca gatctcaagc ttcgaattct gcagtcgacg gtaccgcggg cccgggatcc 2580 accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct 2640 ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg 2700 cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt

72 gccctggccc accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc 2820 cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga 2880 gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga 2940 gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa 3000 catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga 3060 caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag 3120 cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct 3180 gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg 3240 cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga 3300 gctgtacaag aagcttagcc atggcttccc gccggcggtg gcggcgcagg atgatggcac 3360 gctgcccatg tcttgtgccc aggagagcgg gatggaccgt caccctgcag cctgtgcttc 3420 tgctaggatc aatgtgtaga tgcgcggccg cgactctaga tcataatcag ccataccaca 3480 tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa cctgaaacat 3540 aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa 3600 agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt 3660 ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta agcgttaata ttttgttaaa 3720 attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa 3780 aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa 3840 caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca 3900 gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg 3960 taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc 4020 ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc 4080 aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca 4140 gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt 4200 ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata 4260 atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta 4320 gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat 4380 tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc 4440 atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta 4500 actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca 4560 gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga 4620 ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga 4680 acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga 4740 ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg 4800 gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaagacga 4860 ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt 4920 tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct 4980 gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct 5040 gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg 5100 agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca 5160 ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg acggcgagga 5220 tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt 5280 ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt 5340 ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct 5400 ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt 5460 cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca 5520 cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg 5580 gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccaccct 5640 agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg cgctatgacg 5700 gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa acgcggggtt 5760 cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg ccaatacgcc 5820 cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc agggctcgca 5880 gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat actttagatt 5940 gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc 6000 atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag 6060 atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa 6120 aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg 6180 aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag

73 ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg 6300 ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga 6360 tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc 6420 ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc 6480 acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga 6540 gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt 6600 cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg 6660 aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac 6720 atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc catgcat 6777 <210> 18 <211> 7616 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 18 tagttattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc 60 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg 120 accatgatta cgccaagcta tttaggtgac actatagaat actcaagcta tgcatcaagc 180 ttggtaccga gctcggatcc actagtaacg gccgccagtg tgctggaatt cgcccttttc 240 tctggagaaa gctgctcccc cagggccatt cccactccca tctacctggc acacgaggtc 300 cagctctttt cctcccaata ccccttccat gtgcctctcc tcagtgcgca gaagtctgtg 360 tatccgggac ttcaaggacc gtgggtgcgc tcaatgtacc agggggctgt gttcctgctc 420 agtaagggag accagctgtc cacccacacc gacggcatct cccatctaca cttcagcccc 480 agcagtgtat tctttggagc ctttgcactg tagattctaa agaaacccaa gaattggatt 540 ccaggcctcc atcctgaccg ttgtttcaag ggtcacatcc ccacagtctc cagccttccc 600 cactaaaata acctggagct ctcacgggag tctgagacac ttcaggggac tacatcttcc 660 ccagggccac tccagatgct caggggacga ctcaagccta cctagaagtt cctgcacaga 720 gcagggtttt tgtgggtcta ggtcggacag agacctggac atgaaggagg gacagacatg 780 ggagaggtgg ctgggaacag gggaaggttg actatttatg gagagaaaag ttaagttatt 840 tatttataga gaatagaaag aggggaaaaa tagaaagccg tcagatgaca actaggtccc 900 agacacaaag gtgtctcacc tcagacagga cccatctaag agagagatgg cgagagaatt 960 agatgtgggt gaccaagggg ttctagaaga aagcacgaag ctctaaaagc cagccactgc 1020 ttggctagac atccacaggg accccctgca ccatctgtga aacccaataa acctcttttc 1080 tctgagattc tgtctgcttg tgtctgtctt gcgttggggg agaaacttcc tggtctcttt 1140 aaggagtgga gcaggggaca gaggcctcag ttggtccatg ggatccgggc agagcaaaga 1200 gacatgagga gcaggcagct cccagagaca tggtggattc acgggagtga ggcagcttaa 1260 ctgccgagag acccaaagga tgagctaggg agatccatcc aagggtggag agagatgagg 1320 gttctgggga gaagtgactc cactggaggg tgggagagtg tttaggagtg ggagggtggg 1380 ggaggggaat ccttggaaga ccggggagtc atacggattg ggagaaatcc tggaagcagg 1440 gctgtgggac ctaaatgtct gagttgatgt accgcagtca agatatggca gaggctccgt 1500 ggaaaactca cttgggagca gggacccaaa gcagcagcct gagctcatga tcagagtgaa 1560 aggagaaggc ttgtgaggtc cgtgaattcc cagggctgag ttcattccct ctggggctgc 1620 cccatactca tcccattacc ccccccacca gccctcccaa agcccatgca cacttcccaa 1680 ctctcaagct gctctgcctt cagccacttc ctccaagaac tcaaacaggg ggctttccct 1740 cctcaatatc atgtctcccc ccttatgcac ccagctttca gaagcacccc cccatgctaa 1800 gttctccccc atggatgtcc catttagaaa tcaaaaggaa atagacacag gcatggtctt 1860 tctacaaaga aacagacaat gattagctct ggaggacaga gaagaaatgg gtttcagttc 1920 tcagggtcct atacaacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacaccct 1980 cctgattggc cccagattgc cacagaatcc tggtggggac gacgggggag agattccttg 2040 atgcctgggt gtccccaact ttccaaaccc tctgcccccg cgatggagaa gaaaccgaga 2100 cagaggtgta gggccactac cgcttcctcc acatgagatc atggttttct ccaccaagga 2160 agttttccga gggttgaatg agagcttttc cccgccctct tccccaaggg ctataaaggc 2220 ggccgtctgc acagccagcc agcagaagct ccctcagcga ggacagcaag ggactagcca 2280 ggagggagaa cagaaactcc agaacatctt ggaaatagct cccagaaaag caagcagcca 2340 accaggcagg ttctgtccct ttcactcact ggcccaaggc gccacatctc cctccagaaa 2400 agacaccatg agcacagaaa gcatgatccg cgacgtggaa ctggcagaag aggcactccc 2460 ccaaaagatg gggggcttcc agaactccag gcggtgccta tgtctcagcc tcttaagggc 2520 gaattctgca gatctcaagc ttcgaattct gcagtcgacg gtaccgcggg cccgggatcc 2580 accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct

74 ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg 2700 cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt 2760 gccctggccc accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc 2820 cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga 2880 gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga 2940 gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa 3000 catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga 3060 caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag 3120 cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct 3180 gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg 3240 cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga 3300 gctgtacaag aagcttagcc atggcttccc gccggcggtg gcggcgcagg atgatggcac 3360 gctgcccatg tcttgtgccc aggagagcgg gatggaccgt caccctgcag cctgtgcttc 3420 tgctaggatc aatgtgtaga tgcgcggccg ccagtgtgct ggaattcggc tgaagggaat 3480 gggtgttcat ccattctcta cccagccccc actctgaccc ctttactctg acccctttat 3540 tgtctactcc tcagagcccc cagtctgtgt ccttctaact tagaaagggg attatggctc 3600 agagtccaac tctgtgctca gagctttcaa caactactca gaaacacaag atgctgggac 3660 agtgacctgg actgtgggcc tctcatgcac caccatcaag gactcaaatg ggctttccga 3720 attcactgga gcctcgaatg tccattcctg agttctgcaa agggagagtg gtcaggttgc 3780 ctctgtctca gaatgaggct ggataagatc tcaggccttc ctaccttcag acctttccag 3840 actcttccct gaggtgcaat gcacagcctt cctcacagag ccagcccccc tctatttata 3900 tttgcactta ttatttatta tttatttatt atttatttat ttgcttatga atgtatttat 3960 ttggaaggcc ggggtgtcct ggaggaccca gtgtgggaag ctgtcttcag acagacatgt 4020 tttctgtgaa aacggagctg agctgtcccc acctggcctc tctaccttgt tgcctcctct 4080 tttgcttatg tttaaaacaa aatatttatc taacccaatt gtcttaataa cgctgatttg 4140 gtgaccaggc tgtcgctaca tcactgaacc tctgctcccc acgggagccg tgactgtaat 4200 tgccctacag tcaattgaga gaaataaaga tcgcttggaa aagaaatgtg atttctgtct 4260 tgggatgaag tctgcatcca tctctttgcg gaggcctaaa gtctctgggt ccagatctca 4320 gtctttatac ccctgggcca ttaagacccc caagaccccc gtggaacaaa aggcagccaa 4380 catccctacc tctcccccgg aaacaggagc ctaaccctaa ttacctttgc cctggggcat 4440 gggaatttcc cactctggga attcttaagc cgaattctgc agatcattct agttgtggtt 4500 tgtccaaact catcaatgta tcttaaggcg taaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa 4560 ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa 4620 atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac 4680 aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag 4740 ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt 4800 aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg 4860 gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca 4920 agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc gccgctacag 4980 ggcgcgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc 5040 taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa 5100 tattgaaaaa ggaagagtcc tgaggcggaa agaaccagct gtggaatgtg tgtcagttag 5160 ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt 5220 agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca 5280 tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa 5340 ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag 5400 aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag 5460 gcctaggctt ttgcaaagat cgatcaagag acaggatgag gatcgtttcg catgattgaa 5520 caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac 5580 tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg 5640 cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact gcaagacgag 5700 gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt 5760 gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg 5820 tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg 5880 catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga 5940 gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag 6000 gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcga gcatgcccga cggcgaggat 6060 ctcgtcgtga cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt

75 tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg 6180 gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt 6240 tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc 6300 ttctgagcgg gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac 6360 gagatttcga ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg 6420 acgccggctg gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccta 6480 gggggaggct aactgaaaca cggaaggaga caataccgga aggaacccgc gctatgacgg 6540 caataaaaag acagaataaa acgcacggtg ttgggtcgtt tgttcataaa cgcggggttc 6600 ggtcccaggg ctggcactct gtcgataccc caccgagacc ccattggggc caatacgccc 6660 gcgtttcttc cttttcccca ccccaccccc caagttcggg tgaaggccca gggctcgcag 6720 ccaacgtcgg ggcggcaggc cctgccatag cctcaggtta ctcatatata ctttagattg 6780 atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa gatccttttt gataatctca 6840 tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga 6900 tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa 6960 aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga 7020 aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt 7080 taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt 7140 taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat 7200 agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct 7260 tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca 7320 cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag 7380 agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc 7440 gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga 7500 aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca 7560 tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg tattaccgcc atgcat 7616 <210> 19 <211> 5076 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 19 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 360 atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca 420 agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt 480 ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg 540 gaggtctata taagcagagc tggtttagtg aaccgtcaga tccgctagcg ctaccggact 600 cagatctcga gctcaagctt cgaattctgc agtcgacggt accgcgggcc cgggatccac 660 cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg 720 tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 780 atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 840 cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 900 accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 960 gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg 1020 gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 1080 tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 1140 agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 1200 tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 1260 ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 1320 atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc 1380 tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggcggtggc ggcgcaggat gatggcacgc 1440 tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca ccctgcagcc tgtgcttctg 1500 ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcc agtgtgatgg atatctgcag aattcggctt 1560 actcgtagta ctgagccacc atgctttaac ttatgaattt ttaatggttt tatttttaat 1620 atttatatat ttataattca taaaataaaa tatttgtata atgtaacaga aatgataact

76 aatgacactt catttgccat aaggtttcta ctgtaagccg aattccagca cactggcggc 1740 cgcgactcta gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa 1800 acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattgtt gttgttaact 1860 tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata 1920 aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttaag 1980 gcgtaaattg taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc 2040 tcatttttta accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc 2100 gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac 2160 tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca 2220 ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg 2280 agcccccgat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag 2340 aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc 2400 accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt caggtggcac ttttcgggga 2460 aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac attcaaatat gtatccgctc 2520 atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag tcctgaggcg 2580 gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag 2640 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc 2700 caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag 2760 tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc 2820 cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc 2880 tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa gatcgatcaa 2940 gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg 3000 gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct 3060 gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac 3120 ctgtccggtg ccctgaatga actgcaagac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg 3180 acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg 3240 ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa 3300 gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca 3360 ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt 3420 gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc 3480 aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc 3540 ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg 3600 ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt 3660 ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag 3720 cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa 3780 tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct 3840 atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg 3900 gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ctagggggag gctaactgaa acacggaagg 3960 agacaatacc ggaaggaacc cgcgctatga cggcaataaa aagacagaat aaaacgcacg 4020 gtgttgggtc gtttgttcat aaacgcgggg ttcggtccca gggctggcac tctgtcgata 4080 ccccaccgag accccattgg ggccaatacg cccgcgtttc ttccttttcc ccaccccacc 4140 ccccaagttc gggtgaaggc ccagggctcg cagccaacgt cggggcggca ggccctgcca 4200 tagcctcagg ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa 4260 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt 4320 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt 4380 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt 4440 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga 4500 taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 4560 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 4620 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg 4680 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga 4740 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca 4800 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa 4860 acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt 4920 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac 4980 ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta tcccctgatt 5040 ctgtggataa ccgtattacc gccatgcatt agttat

77 <210> 20 <211> 4976 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 20 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 360 atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca 420 agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt 480 ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg 540 gaggtctata taagcagagc tggtttagtg aaccgtcaga tccgctagcg ctaccggtcg 600 ccaccatggt gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc 660 tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca 720 cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc 780 ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca 840 tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca 900 tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca 960 ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg 1020 ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga 1080 agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc 1140 tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca 1200 accactacct gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca 1260 tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca 1320 agtccggact cagatctaag ctgaaccctc ctgatgagag tggccccggc tgcatgagct 1380 gcaagtgtgt gctctcctga ggatccagat ctcgagctca agcttcgaat tcggcttact 1440 cgtagtactg agccaccatg ctttaactta tgaattttta atggttttat ttttaatatt 1500 tatatattta taattcataa aataaaatat ttgtataatg taacagaaat gataactaat 1560 gacacttcat ttgccataag gtttctactg taagccgaat tctgcagtcg acggtaccgc 1620 gggcccggga tccaccggat ctagataact gatcataatc agccatacca catttgtaga 1680 ggttttactt gctttaaaaa acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa 1740 tgcaattgtt gttgttaact tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag 1800 catcacaaat ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa 1860 actcatcaat gtatcttaac gcgtaaattg taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt 1920 taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt 1980 ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc 2040 cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg 2100 gcccactacg tgaaccatca ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac 2160 taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg 2220 tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag 2280 cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt 2340 caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac 2400 attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa 2460 aaaggaagag tcctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg 2520 aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc 2580 aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct 2640 caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc 2700 cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga 2760 ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg 2820 cttttgcaaa gatcgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg 2880 gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac 2940 aacagacaat cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg 3000 ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaagac gaggcagcgc 3060 ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg 3120 aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc

78 accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc 3240 ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta 3300 ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg 3360 cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg 3420 tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat 3480 tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc 3540 gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta 3600 tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag 3660 cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt 3720 cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg 3780 ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ctagggggag 3840 gctaactgaa acacggaagg agacaatacc ggaaggaacc cgcgctatga cggcaataaa 3900 aagacagaat aaaacgcacg gtgttgggtc gtttgttcat aaacgcgggg ttcggtccca 3960 gggctggcac tctgtcgata ccccaccgag accccattgg ggccaatacg cccgcgtttc 4020 ttccttttcc ccaccccacc ccccaagttc gggtgaaggc ccagggctcg cagccaacgt 4080 cggggcggca ggccctgcca tagcctcagg ttactcatat atactttaga ttgatttaaa 4140 acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa 4200 aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg 4260 atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc 4320 gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac 4380 tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca 4440 ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt 4500 ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc 4560 ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg 4620 aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc 4680 cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac 4740 gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct 4800 ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc 4860 cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt 4920 tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gccatgcatt agttat 4976 <210> 21 <211> 4780 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 21 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 360 atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca 420 agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt 480 ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg 540 gaggtctata taagcagagc tggtttagtg aaccgtcaga tccgctagcg ctaccggtcg 600 ccaccatggt gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc 660 tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca 720 cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc 780 ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca 840 tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca 900 tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca 960 ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg 1020 ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga 1080 agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc 1140 tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca 1200 accactacct gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca 1260 tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca 1320 agtccggact cagatctaag ctgaaccctc ctgatgagag tggccccggc tgcatgagct

79 gcaagtgtgt gctctcctga ggatccagat ctcgagctca agcttcgaat tcggctttac 1440 tcgtagtact gagccaccat gctttaactt atgaattttt aatggtttta tttttaatat 1500 ttatatattt ataattcata aaataaaata tttgtataat gtaacagaaa tgataactaa 1560 tgacacttca tttgccataa ggtttctact gaagccgaat tctgcagtcg acggtaccgc 1620 gggcccggga tccaccggat ctagataact gatcataatc agccatacca catttgtaga 1680 ggttttactt gctttaagcg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat 1740 cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata 1800 gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt 1860 ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc 1920 atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa 1980 agggagcccc cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg 2040 gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt 2100 aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtcaggtg gcacttttcg 2160 gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc 2220 gctcatgaga caataaccct gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtcctga 2280 ggcggaaaga accagctgtg gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc 2340 ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag 2400 tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc 2460 atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct 2520 ccgccccatg gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctcggcctct 2580 gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg caaagatcga 2640 tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc 2700 tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg 2760 ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac 2820 cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca agacgaggca gcgcggctat cgtggctggc 2880 cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg 2940 gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga 3000 gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg 3060 cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg 3120 tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt 3180 cgccaggctc aaggcgagca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc 3240 ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg 3300 gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga 3360 gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc 3420 gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc 3480 gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc 3540 ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat gatcctccag 3600 cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc caccctaggg ggaggctaac tgaaacacgg 3660 aaggagacaa taccggaagg aacccgcgct atgacggcaa taaaaagaca gaataaaacg 3720 cacggtgttg ggtcgtttgt tcataaacgc ggggttcggt cccagggctg gcactctgtc 3780 gataccccac cgagacccca ttggggccaa tacgcccgcg tttcttcctt ttccccaccc 3840 caccccccaa gttcgggtga aggcccaggg ctcgcagcca acgtcggggc ggcaggccct 3900 gccatagcct caggttactc atatatactt tagattgatt taaaacttca tttttaattt 3960 aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag 4020 ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct 4080 ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt 4140 tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg 4200 cagataccaa atactgtcct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct 4260 gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc 4320 gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg 4380 tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa 4440 ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg 4500 gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg 4560 ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga 4620 tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt 4680 ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct 4740 gattctgtgg ataaccgtat taccgccatg cattagttat

80 <210> 22 <211> 4968 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 22 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gactatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatgcat 360 ggtcgaggtg agccccacgt tctgcttcac tctccccatc tcccccccct ccccaccccc 420 aattttgtat ttatttattt tttaattatt ttgtgcagcg atgggggcgg gggggggggg 480 ggggcgcgcg ccaggcgggg cggggcgggg cgaggggcgg ggcggggcga ggcggagagg 540 tgcggcggca gccaatcaga gcggcgcgct ccgaaagttt ccttttatgg cgaggcggcg 600 gcggcggcgg ccctataaaa agcgaagcgc gcggcgggcg ggagtcgctg cgacgctgcc 660 ttcgccccgt gccccgctcc gccgccgcct cgcgccgccc gccccggctc tgactgaccg 720 cgttactccc acaggtgagc gggcgggacg gcccttctcc ttcgggctgt aattagcgct 780 accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct 840 ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg 900 cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt 960 gccctggccc accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc 1020 cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga 1080 gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga 1140 gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa 1200 catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata tcatggccga 1260 caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag 1320 cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct 1380 gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg 1440 cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga 1500 gctgtacaag tccggactca gatctaagct gaaccctcct gatgagagtg gccccggctg 1560 catgagctgc aagtgtgtgc tctcctgagg atccagatct cgagctcaag cttcgaattc 1620 ggctttactc gtagtactga gccaccatgc tttaacttat gaatttttaa tggttttatt 1680 tttaatattt atatatttat aattcataaa ataaaatatt tgtataatgt aacagaaatg 1740 ataactaatg acacttcatt tgccataagg tttctactga agccgaattc tgcagtcgac 1800 ggtaccgcgg gcccgggatc caccggatct agataactga tcataatcag ccataccaca 1860 tttgtagagg ttttacttgc tttaagcgtt aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt 1920 tgttaaatca gctcattttt taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca 1980 aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag tccactatta 2040 aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta 2100 cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg 2160 aaccctaaag ggagcccccg atttagagct tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga 2220 aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg 2280 ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc 2340 acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat 2400 atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag 2460 agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc 2520 caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt 2580 gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt 2640 cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg 2700 cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct 2760 cggcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca 2820 aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac 2880 gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca 2940 atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt 3000 gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg 3060 tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga 3120 agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct

81 cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg 3240 gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg 3300 gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc 3360 gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat 3420 ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac 3480 tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt 3540 gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct 3600 cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc 3660 tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca 3720 ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga 3780 tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg 3840 aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga 3900 ataaaacgca cggtgttggg tcgtttgttc ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc 3960 actctgtcga taccccaccg agaccccatt ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt 4020 ccccacccca ccccccaagt tcgggtgaag gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg 4080 caggccctgc catagcctca ggttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt 4140 tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt 4200 aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt 4260 gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag 4320 cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca 4380 gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca 4440 agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg 4500 ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg 4560 cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct 4620 acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga 4680 gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc 4740 ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg 4800 agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg 4860 cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt 4920 tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgccatgca ttagttat 4968 <210> 23 <211> 4985 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 23 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 360 atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca 420 agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt 480 ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg 540 gaggtctata taagcagagc tggtttagtg aaccgtcaga tccgctagcg ctaccggact 600 cagatctcga gctcaagctt cgaattctgc agtcgacggt accgcgggcc cgggatccac 660 cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg 720 tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 780 atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 840 cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 900 accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 960 gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg 1020 gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 1080 tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 1140 agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 1200 tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 1260 ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 1320 atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc

82 tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggcggtggc ggcgcaggat gatggcacgc 1440 tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca ccctgcagcc tgtgcttctg 1500 ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcc agtgtgatgg atatctgcag aattcggctt 1560 actcgtagta ctgagccacc atgctttaac ttatgaattt ttaatggttt tatttttaat 1620 atttatatat ttataattca taaaataaaa tatttgtata atgtaacaga aatgataact 1680 aatgacactt catttgccat aaggtttcta ctgtaagccg aattccagca cactggcggc 1740 cgcgactcta gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa 1800 acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcatgcatt ctagttgtgg 1860 tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttaagg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa 1920 aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca 1980 aaatccctta taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga 2040 acaagagtcc actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc 2100 agggcgatgg cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc 2160 gtaaagcact aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc 2220 cggcgaacgt ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg 2280 caagtgtagc ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac 2340 agggcgcgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt 2400 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat 2460 aatattgaaa aaggaagagt cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt 2520 agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa 2580 ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag 2640 catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct 2700 aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc 2760 agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg 2820 aggcctaggc ttttgcaaag atcgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg 2880 aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg 2940 actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg 3000 ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg 3060 aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg 3120 ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc 3180 tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc 3240 tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc 3300 gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc 3360 aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg 3420 atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct 3480 tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt 3540 tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc 3600 tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt 3660 tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc 3720 acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg 3780 ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc 3840 tagggggagg ctaactgaaa cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac 3900 ggcaataaaa agacagaata aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt 3960 tcggtcccag ggctggcact ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc 4020 ccgcgtttct tccttttccc caccccaccc cccaagttcg ggtgaaggcc cagggctcgc 4080 agccaacgtc ggggcggcag gccctgccat agcctcaggt tactcatata tactttagat 4140 tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct 4200 catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa 4260 gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa 4320 aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc 4380 gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta 4440 gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct 4500 gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg 4560 atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag 4620 cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc 4680 cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg 4740 agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt 4800 tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg

83 gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca 4920 catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcatta 4980 gttat 4985 <210> 24 <211> 4229 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 24 agcttggtgt aataaaattt tccaatgtaa actcattttc ccttgccttt cagcaacttt 60 aactctatat atagagagat ctctgccagc attgcattgg actctagagg gcccgggatc 120 caccggtcgc caccatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg gtgcccatcc 180 tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc gagggcgagg 240 gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcccg 300 tgccctggcc caccctcgtg accaccctga cctacggcgt gcagtgcttc agccgctacc 360 ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat gcccgaaggc tacgtccagg 420 agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag gtgaagttcg 480 agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag gaggacggca 540 acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat atcatggccg 600 acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc gaggacggca 660 gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc cccgtgctgc 720 tgcccgacaa ccactacctg agcacccagt ccgccctgag caaagacccc aacgagaagc 780 gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc ggcatggacg 840 agctgtacaa gtaaagcggc cgcgactcta gatcataatc agccatacca catttgtaga 900 ggttttactt gctttaaaaa acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa 960 tgcaattgtt gttgttaact tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag 1020 catcacaaat ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa 1080 actcatcaat gtatcttaag gcgtaaattg taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt 1140 taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt 1200 ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc 1260 cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg 1320 gcccactacg tgaaccatca ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac 1380 taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg 1440 tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag 1500 cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt 1560 caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac 1620 attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa 1680 aaaggaagag tcctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg 1740 aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc 1800 aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct 1860 caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc 1920 cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga 1980 ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg 2040 cttttgcaaa gatcgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg 2100 gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac 2160 aacagacaat cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg 2220 ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaagac gaggcagcgc 2280 ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg 2340 aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc 2400 accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc 2460 ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta 2520 ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg 2580 cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg 2640 tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat 2700 tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc 2760 gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta 2820 tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag 2880 cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt 2940 cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg

84 ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ctagggggag 3060 gctaactgaa acacggaagg agacaatacc ggaaggaacc cgcgctatga cggcaataaa 3120 aagacagaat aaaacgcacg gtgttgggtc gtttgttcat aaacgcgggg ttcggtccca 3180 gggctggcac tctgtcgata ccccaccgag accccattgg ggccaatacg cccgcgtttc 3240 ttccttttcc ccaccccacc ccccaagttc gggtgaaggc ccagggctcg cagccaacgt 3300 cggggcggca ggccctgcca tagcctcagg ttactcatat atactttaga ttgatttaaa 3360 acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa 3420 aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg 3480 atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc 3540 gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac 3600 tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca 3660 ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt 3720 ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc 3780 ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg 3840 aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc 3900 cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac 3960 gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct 4020 ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc 4080 cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt 4140 tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gccatgcatt agttattact 4200 agcgctaccg gactcagatc tcgagctca 4229 <210> 25 <211> 5178 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 25 tagttattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc 60 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg 120 accatgatta cgccaagctt ggtaccgagc tcggatccac tagtaacggc cgccagtgtg 180 ctggaattcg gcttggctcg tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca 240 ggaaacagct atgaccatga ttacgccaag cttgcatgcc tgcaggtcag cttgtgagtc 300 tgagttcaag gatccacacg gtgcaaagag agacccggtc tcctgacctc cacactgatg 360 ctgtagtgca catagataca cacatgctca catgaagtaa tttaaaaaaa atttttttta 420 aatcagccat ttctcaggct tctgtctaag gtaggaaaaa tcttcaacct agcccagaac 480 ctccatatag ctaaagcctc attccatggt cctgcctgcc ccactccatg tcacctctct 540 gtctccaaag accacaaact tgtaagatca gctgggctag gatgcgagaa ggtctgcctc 600 catcatcctt ctatgaggta agaccccaga atcagctttc ccaagatatc agagtttcca 660 aggggccccc atagcaggaa gcagctaggc ccaggtgtgc gcaaggcaga ctttcttgat 720 attactctgt ctttccccag ggcgacacca gcaccctcgg acacctgtga cctctttctt 780 ctctgcagga ggagagccag tggcaaccct acgctgatta gattagtctt aaaggccgtt 840 atgggtgtaa tttcctatgc tgaaactttg tagatttaaa aaaaaaaagg ggggggaggg 900 gtgtttcatt ttccaattgg tctgatttca caggaaaatt tacctgtttc tcttttttct 960 cctggaagag aggtgctgat tggcccagaa taactgacaa tctggtgtaa taaaattttc 1020 caatgtaaac tcattttccc ttggtttcag caactttaac tctatatata gagagatctc 1080 tgccagcatt gcattggact cccgggatcc accggtcgcc accatggtga gcaagggcga 1140 ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca 1200 caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa 1260 gttcatctgc accaccggca agctgcccgt gccctggccc accctcgtga ccaccctgac 1320 ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa 1380 gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa 1440 ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct 1500 gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa catcctgggg cacaagctgg agtacaacta 1560 caacagccac aacgtctata tcatggccga caagcagaag aacggcatca aggtgaactt 1620 caagatccgc cacaacatcg aggacggcag cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa 1680 cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct gcccgacaac cactacctga gcacccagtc 1740 cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac 1800 cgccgccggg atcactctcg gcatggacga gctgtacaag taaagcggcc gcgactctag 1860 atcataatca gccataccac atttgtagag gttttacttg ctttaaaaaa cctcccacac

85 ctccccctga acctgaaaca taaaatgaat gcaattgttg ttgttaactt gtttattgca 1980 gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt 2040 tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttaagg cgtaaattgt 2100 aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa 2160 ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt 2220 gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa 2280 agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag 2340 ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt 2400 tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg 2460 agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc 2520 cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg 2580 aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata 2640 accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt cctgaggcgg aaagaaccag 2700 ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt 2760 atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca 2820 gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta 2880 actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga 2940 ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag 3000 tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaag atcgatcaag agacaggatg 3060 aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt 3120 ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt 3180 gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc 3240 cctgaatgaa ctgcaagacg aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc 3300 ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga 3360 agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat 3420 ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca 3480 agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga 3540 tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc 3600 gagcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat 3660 catggtggaa aatggccgct tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga 3720 ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg 3780 ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt 3840 ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa 3900 gcgacgccca acctgccatc acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg 3960 ggcttcggaa tcgttttccg ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg 4020 ctggagttct tcgcccaccc tagggggagg ctaactgaaa cacggaagga gacaataccg 4080 gaaggaaccc gcgctatgac ggcaataaaa agacagaata aaacgcacgg tgttgggtcg 4140 tttgttcata aacgcggggt tcggtcccag ggctggcact ctgtcgatac cccaccgaga 4200 ccccattggg gccaatacgc ccgcgtttct tccttttccc caccccaccc cccaagttcg 4260 ggtgaaggcc cagggctcgc agccaacgtc ggggcggcag gccctgccat agcctcaggt 4320 tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg 4380 aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga 4440 gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta 4500 atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa 4560 gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact 4620 gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca 4680 tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt 4740 accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg 4800 ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag 4860 cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta 4920 agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat 4980 ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg 5040 tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc 5100 ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac 5160 cgtattaccg ccatgcat 5178 <210> 26 <211> 4352 <212> DNA 85

86 <213> Sztuczne <400> 26 agcttggtgt aataaaattt tccaatgtaa actcattttc ccttgccttt cagcaacttt 60 aactctatat atagagagat ctctgccagc attgcattgg actctagagg gcccgggatc 120 caccggtcgc caccatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg gtgcccatcc 180 tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc gagggcgagg 240 gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcccg 300 tgccctggcc caccctcgtg accaccctga cctacggcgt gcagtgcttc agccgctacc 360 ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat gcccgaaggc tacgtccagg 420 agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag gtgaagttcg 480 agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag gaggacggca 540 acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat atcatggccg 600 acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc gaggacggca 660 gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc cccgtgctgc 720 tgcccgacaa ccactacctg agcacccagt ccgccctgag caaagacccc aacgagaagc 780 gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc ggcatggacg 840 agctgtacaa gaagcttagc catggcttcc cgccggcggt ggcggcgcag gatgatggca 900 cgctgcccat gtcttgtgcc caggagagcg ggatggaccg tcaccctgca gcctgtgctt 960 ctgctaggat caatgtgtag atgcgcggcc gcgactctag atcataatca gccataccac 1020 atttgtagag gttttacttg ctttaaaaaa cctcccacac ctccccctga acctgaaaca 1080 taaaatgaat gcaattgttg ttgttaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata 1140 aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg 1200 tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttaagg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa 1260 aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca 1320 aaatccctta taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga 1380 acaagagtcc actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc 1440 agggcgatgg cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc 1500 gtaaagcact aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc 1560 cggcgaacgt ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg 1620 caagtgtagc ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac 1680 agggcgcgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt 1740 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat 1800 aatattgaaa aaggaagagt cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt 1860 agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa 1920 ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag 1980 catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct 2040 aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc 2100 agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg 2160 aggcctaggc ttttgcaaag atcgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg 2220 aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg 2280 actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg 2340 ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg 2400 aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg 2460 ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc 2520 tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc 2580 tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc 2640 gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc 2700 aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg 2760 atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct 2820 tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt 2880 tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc 2940 tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt 3000 tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc 3060 acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg 3120 ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc 3180 tagggggagg ctaactgaaa cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac 3240 ggcaataaaa agacagaata aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt 3300 tcggtcccag ggctggcact ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc

87 ccgcgtttct tccttttccc caccccaccc cccaagttcg ggtgaaggcc cagggctcgc 3420 agccaacgtc ggggcggcag gccctgccat agcctcaggt tactcatata tactttagat 3480 tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct 3540 catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa 3600 gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa 3660 aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc 3720 gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta 3780 gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct 3840 gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg 3900 atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag 3960 cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc 4020 cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg 4080 agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt 4140 tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg 4200 gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca 4260 catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcatta 4320 gttatcgcta ccggactcag atctcgagct ca 4352 <210> 27 <211> 5307 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 27 agcttggtac cgagctcgga tccactagta acggccgcca gtgtgctgga attcggcttg 60 gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac 120 catgattacg ccaagcttgc atgcctgcag gtcagcttgt gagtctgagt tcaaggatcc 180 acacggtgca aagagagacc cggtctcctg acctccacac tgatgctgta gtgcacatag 240 atacacacat gctcacatga agtaatttaa aaaaaatttt ttttaaatca gccatttctc 300 aggcttctgt ctaaggtagg aaaaatcttc aacctagccc agaacctcca tatagctaaa 360 gcctcattcc atggtcctgc ctgccccact ccatgtcacc tctctgtctc caaagaccac 420 aaacttgtaa gatcagctgg gctaggatgc gagaaggtct gcctccatca tccttctatg 480 aggtaagacc ccagaatcag ctttcccaag atatcagagt ttccaagggg cccccatagc 540 aggaagcagc taggcccagg tgtgcgcaag gcagactttc ttgatattac tctgtctttc 600 cccagggcga caccagcacc ctcggacacc tgtgacctct ttcttctctg caggaggaga 660 gccagtggca accctacgct gattagatta gtcttaaagg ccgttatggg tgtaatttcc 720 tatgctgaaa ctttgtagat ttaaaaaaaa aaaggggggg gaggggtgtt tcattttcca 780 attggtctga tttcacagga aaatttacct gtttctcttt tttctcctgg aagagaggtg 840 ctgattggcc cagaataact gacaatctgg tgtaataaaa ttttccaatg taaactcatt 900 ttcccttggt ttcagcaact ttaactctat atatagagag atctctgcca gcattgcatt 960 ggactcccgg gatccaccgg tcgccaccat ggtgagcaag ggcgaggagc tgttcaccgg 1020 ggtggtgccc atcctggtcg agctggacgg cgacgtaaac ggccacaagt tcagcgtgtc 1080 cggcgagggc gagggcgatg ccacctacgg caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac 1140 cggcaagctg cccgtgccct ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg 1200 cttcagccgc taccccgacc acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga 1260 aggctacgtc caggagcgca ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc 1320 cgaggtgaag ttcgagggcg acaccctggt gaaccgcatc gagctgaagg gcatcgactt 1380 caaggaggac ggcaacatcc tggggcacaa gctggagtac aactacaaca gccacaacgt 1440 ctatatcatg gccgacaagc agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa 1500 catcgaggac ggcagcgtgc agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga 1560 cggccccgtg ctgctgcccg acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc tgagcaaaga 1620 ccccaacgag aagcgcgatc acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac 1680 tctcggcatg gacgagctgt acaagaagct tagccatggc ttcccgccgg cggtggcggc 1740 gcaggatgat ggcacgctgc ccatgtcttg tgcccaggag agcgggatgg accgtcaccc 1800 tgcagcctgt gcttctgcta ggatcaatgt gtagatgcgc ggccgcgact ctagatcata 1860 atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc 1920 ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat 1980 aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg 2040 cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt 2100 taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata

88 ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt 2220 tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg 2280 aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt 2340 ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc 2400 ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg 2460 cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct 2520 taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc 2580 tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg 2640 ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg 2700 aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa 2760 agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc 2820 agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg 2880 cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt 2940 ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga 3000 ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc 3060 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag 3120 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg 3180 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa 3240 tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc 3300 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc 3360 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga 3420 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa 3480 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct 3540 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat 3600 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt 3660 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta 3720 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga 3780 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg 3840 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg 3900 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc 3960 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag 4020 ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga 4080 acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt 4140 cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat 4200 tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa 4260 ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca 4320 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc 4380 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca 4440 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc 4500 tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta 4560 ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt 4620 ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc 4680 gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg 4740 ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg 4800 tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag 4860 ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc 4920 agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat 4980 agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg 5040 gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc 5100 tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt 5160 accgccatgc attagttatt aatgtgagtt agctcactca ttaggcaccc caggctttac 5220 actttatgct tccggctcgt atgttgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag 5280 gaaacagcta tgaccatgat tacgcca 5307 <210> 28 <211> 4566 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 28 88

89 agcttggtgt aataaaattt tccaatgtaa actcattttc ccttgccttt cagcaacttt 60 aactctatat atagagagat ctctgccagc attgcattgg actctagagg gcccgggatc 120 caccggtcgc caccatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg gtgcccatcc 180 tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc gagggcgagg 240 gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcccg 300 tgccctggcc caccctcgtg accaccctga cctacggcgt gcagtgcttc agccgctacc 360 ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat gcccgaaggc tacgtccagg 420 agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag gtgaagttcg 480 agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag gaggacggca 540 acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat atcatggccg 600 acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc gaggacggca 660 gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc cccgtgctgc 720 tgcccgacaa ccactacctg agcacccagt ccgccctgag caaagacccc aacgagaagc 780 gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc ggcatggacg 840 agctgtacaa gaagcttagc catggcttcc cgccggcggt ggcggcgcag gatgatggca 900 cgctgcccat gtcttgtgcc caggagagcg ggatggaccg tcaccctgca gcctgtgctt 960 ctgctaggat caatgtgtag atgcgcggcc gccagtgtga tggatatctg cagaattcgg 1020 cttactcgta gtactgagcc accatgcttt aacttatgaa tttttaatgg ttttattttt 1080 aatatttata tatttataat tcataaaata aaatatttgt ataatgtaac agaaatgata 1140 actaatgaca cttcatttgc cataaggttt ctactgtaag ccgaattcca gcacactggc 1200 ggccgcgact ctagatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa 1260 aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta 1320 acttgtttat tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa 1380 ataaagcatt tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt 1440 aaggcgtaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc 1500 agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag 1560 accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg 1620 gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca 1680 tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa 1740 gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg 1800 aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta 1860 accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg 1920 ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg 1980 ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag 2040 gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc 2100 cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt 2160 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca 2220 tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc 2280 cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg 2340 agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat 2400 caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct 2460 ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc 2520 tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc 2580 gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc 2640 acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg 2700 ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag 2760 aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc 2820 ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt 2880 cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc 2940 gccaggctca aggcgagcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc 3000 tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg 3060 ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag 3120 cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg 3180 cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg 3240 aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct 3300 tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc 3360 gcggggatct catgctggag ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga 3420 aggagacaat accggaagga acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc

90 acggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg 3540 ataccccacc gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc 3600 accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg 3660 ccatagcctc aggttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta 3720 aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 3780 tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt 3840 tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt 3900 gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc 3960 agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg 4020 tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg 4080 ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt 4140 cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac 4200 tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg 4260 acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg 4320 gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat 4380 ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt 4440 tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 4500 attctgtgga taaccgtatt accgccatgc attagttatc gctaccggac tcagatctcg 4560 agctca 4566 <210> 29 <211> 5521 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 29 agcttggtac cgagctcgga tccactagta acggccgcca gtgtgctgga attcggcttg 60 gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac 120 catgattacg ccaagcttgc atgcctgcag gtcagcttgt gagtctgagt tcaaggatcc 180 acacggtgca aagagagacc cggtctcctg acctccacac tgatgctgta gtgcacatag 240 atacacacat gctcacatga agtaatttaa aaaaaatttt ttttaaatca gccatttctc 300 aggcttctgt ctaaggtagg aaaaatcttc aacctagccc agaacctcca tatagctaaa 360 gcctcattcc atggtcctgc ctgccccact ccatgtcacc tctctgtctc caaagaccac 420 aaacttgtaa gatcagctgg gctaggatgc gagaaggtct gcctccatca tccttctatg 480 aggtaagacc ccagaatcag ctttcccaag atatcagagt ttccaagggg cccccatagc 540 aggaagcagc taggcccagg tgtgcgcaag gcagactttc ttgatattac tctgtctttc 600 cccagggcga caccagcacc ctcggacacc tgtgacctct ttcttctctg caggaggaga 660 gccagtggca accctacgct gattagatta gtcttaaagg ccgttatggg tgtaatttcc 720 tatgctgaaa ctttgtagat ttaaaaaaaa aaaggggggg gaggggtgtt tcattttcca 780 attggtctga tttcacagga aaatttacct gtttctcttt tttctcctgg aagagaggtg 840 ctgattggcc cagaataact gacaatctgg tgtaataaaa ttttccaatg taaactcatt 900 ttcccttggt ttcagcaact ttaactctat atatagagag atctctgcca gcattgcatt 960 ggactcccgg gatccaccgg tcgccaccat ggtgagcaag ggcgaggagc tgttcaccgg 1020 ggtggtgccc atcctggtcg agctggacgg cgacgtaaac ggccacaagt tcagcgtgtc 1080 cggcgagggc gagggcgatg ccacctacgg caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac 1140 cggcaagctg cccgtgccct ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg 1200 cttcagccgc taccccgacc acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga 1260 aggctacgtc caggagcgca ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc 1320 cgaggtgaag ttcgagggcg acaccctggt gaaccgcatc gagctgaagg gcatcgactt 1380 caaggaggac ggcaacatcc tggggcacaa gctggagtac aactacaaca gccacaacgt 1440 ctatatcatg gccgacaagc agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa 1500 catcgaggac ggcagcgtgc agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga 1560 cggccccgtg ctgctgcccg acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc tgagcaaaga 1620 ccccaacgag aagcgcgatc acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac 1680 tctcggcatg gacgagctgt acaagaagct tagccatggc ttcccgccgg cggtggcggc 1740 gcaggatgat ggcacgctgc ccatgtcttg tgcccaggag agcgggatgg accgtcaccc 1800 tgcagcctgt gcttctgcta ggatcaatgt gtagatgcgc ggccgccagt gtgatggata 1860 tctgcagaat tcggcttact cgtagtactg agccaccatg ctttaactta tgaattttta 1920 atggttttat ttttaatatt tatatattta taattcataa aataaaatat ttgtataatg 1980 taacagaaat gataactaat gacacttcat ttgccataag gtttctactg taagccgaat

91 tccagcacac tggcggccgc gactctagat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt 2100 tttacttgct ttaaaaaacc tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc 2160 aattgttgtt gttaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat 2220 cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact 2280 catcaatgta tcttaaggcg taaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa 2340 atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata 2400 aatcaaaaga atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac 2460 tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc 2520 cactacgtga accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa 2580 atcggaaccc taaagggagc ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg 2640 cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg 2700 tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag 2760 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt 2820 caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa 2880 ggaagagtcc tgaggcggaa agaaccagct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa 2940 gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac 3000 caggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa 3060 ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag 3120 ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc 3180 cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt 3240 ttgcaaagat cgatcaagag acaggatgag gatcgtttcg catgattgaa caagatggat 3300 tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac tgggcacaac 3360 agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc 3420 tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact gcaagacgag gcagcgcggc 3480 tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag 3540 cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc 3600 ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg 3660 atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc 3720 ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag gggctcgcgc 3780 cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcga gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga 3840 cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca 3900 tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg gctacccgtg 3960 atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg 4020 ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg 4080 gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga 4140 ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg 4200 gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccta gggggaggct 4260 aactgaaaca cggaaggaga caataccgga aggaacccgc gctatgacgg caataaaaag 4320 acagaataaa acgcacggtg ttgggtcgtt tgttcataaa cgcggggttc ggtcccaggg 4380 ctggcactct gtcgataccc caccgagacc ccattggggc caatacgccc gcgtttcttc 4440 cttttcccca ccccaccccc caagttcggg tgaaggccca gggctcgcag ccaacgtcgg 4500 ggcggcaggc cctgccatag cctcaggtta ctcatatata ctttagattg atttaaaact 4560 tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat 4620 cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc 4680 ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct 4740 accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg 4800 cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt taggccacca 4860 cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc 4920 tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga 4980 taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac 5040 gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga 5100 agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag 5160 ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg 5220 acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag 5280 caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc 5340 tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg tattaccgcc atgcattagt tattaatgtg 5400 agttagctca ctcattaggc accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg 5460 tgtggaattg tgagcggata acaatttcac acaggaaaca gctatgacca tgattacgcc

92 a 5521 <210> 30 <211> 4476 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 30 agcttggtgt aataaaattt tccaatgtaa actcattttc ccttgccttt cagcaacttt 60 aactctatat atagagagat ctctgccagc attgcattgg actctagagg gcccgggatc 120 caccggtcgc caccatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg gtgcccatcc 180 tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc gagggcgagg 240 gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcccg 300 tgccctggcc caccctcgtg accaccctga cctacggcgt gcagtgcttc agccgctacc 360 ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat gcccgaaggc tacgtccagg 420 agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag gtgaagttcg 480 agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag gaggacggca 540 acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat atcatggccg 600 acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc gaggacggca 660 gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc cccgtgctgc 720 tgcccgacaa ccactacctg agcacccagt ccgccctgag caaagacccc aacgagaagc 780 gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc ggcatggacg 840 agctgtacaa gtaaagcggc cgcgactcta gatcataatc agccatacca catttgtaga 900 ggttttactt gctttatctg cagaattcgg cttactcgta gtactgagcc accatgcttt 960 aacttatgaa tttttaatgg ttttattttt aatatttata tatttataat tcataaaata 1020 aaatatttgt ataatgtaac agaaatgata actaatgaca cttcatttgc cataaggttt 1080 ctactgtaag ccgaattcca gcacactggc ggccgcgact ctagatcata atcagccata 1140 ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga 1200 aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat aatggttaca 1260 aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt 1320 gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt taatattttg 1380 ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc 1440 ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt 1500 tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc 1560 tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg 1620 tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga 1680 aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg 1740 ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg 1800 ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta 1860 tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt 1920 caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc 1980 agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc 2040 tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc 2100 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc 2160 ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt 2220 atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt 2280 ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg 2340 attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc 2400 tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg 2460 caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcaa 2520 gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc 2580 gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat 2640 ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg 2700 cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc 2760 gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag 2820 catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat gcccgacggc 2880 gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc 2940 cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata 3000 gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc 3060 gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac

93 gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc 3180 catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt 3240 tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc 3300 accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga acccgcgcta 3360 tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg 3420 gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat tggggccaat 3480 acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc 3540 tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca tatatacttt 3600 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata 3660 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag 3720 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa 3780 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt 3840 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc 3900 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa 3960 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa 4020 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc 4080 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa 4140 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa 4200 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg 4260 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc 4320 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg 4380 ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgccatgc 4440 attagttatc gctaccggac tcagatctcg agctca 4476 <210> 31 <211> 6241 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 31 ggcggccgcg aattcactag tgatagattg ctggcttctg tcacctgagt gctgggatta 60 aaggtatgag ttaccacgac cctgctagat ttttttttta agacagattc tcatgattct 120 taaactggcc ttcaagtctc cagcagcaga aggtgacctc gcactcatga tcatcttacc 180 tctgtttcca tctgtatttc atgcctattt taagtcaggg tttttataca agcactctac 240 caaccaagag atgttcctga ctgtcaaaac agagattctt aggtaaacat tcaaatgaat 300 atttgtgtgt gtgtgtgtgt tgtttgtgta taaatcttta tgcttatgta tttgagggaa 360 ataaattgtg tcacagaagc aatgaaacac tttctggttt taaggaaatt agtgggcact 420 gggatggggg tagggggcat gcatagttac ctcgtatatg agactgggga aattgagaac 480 ccatgaagca tagaaacaaa gtgctagccc tgcccagagg ataaagtctg atttgaagct 540 ggaggcttgg gggagaacca aaacagagga tggtttgcat ctgggtcaag ataactgggt 600 accactctga gatgctcaga tgagggaaag ggggcacatg gccaaaggaa ctgcacgaac 660 aagctgcata gcgttgttaa acatctgaca ttgccaaata accatcaagt tttaattgag 720 ccactaggaa tgccgggaag aattctctca actttccatg gagcatttgg ttgagccttt 780 ggctgaagtc cggaagaaaa tgctagtgtt aagctcactg tataaatgtg gaaactgagt 840 cacagatcat aaagatgctg actcaagacc ccgaggctag aatatgaatg gttcaagtct 900 gcacccatag ccactgtgta atgttaatga atacaggaaa ggcagggatg aatacacgtg 960 ggctggcact gaagagcaga gggcctcctg ccccatcctc aaggatcgaa tttcatagat 1020 aggttaccaa agacagagaa ggaaactttt agtgtttgaa cttgatgggg gaaacaattt 1080 tcagttatta atccttattt gggacaagtg tgtgtctagt gctggactag tcattgggat 1140 agccttagcc acatgtgggt atgagagtta gaaacatggc taatcctgaa gtgatttctg 1200 ctgtgtatat aggatagcca ctaggcttta aatatttagt ggcagaggaa ttgaaactct 1260 tattcatcat aaatcttgat acacattgat accttgggtg tgttgagtga aatacaatat 1320 ctaatgaagt attcttgcat ttttactttt atttcatttt gcattttttt cccttttatt 1380 aatggaggaa ctagatgatt ttattttacc tatgtggtct gccttttctt ctttctgggc 1440 acgttgaccc tgagtgattt gtagtaggta ttttactaat cacctccatt gaagggcttc 1500 ctcaccacat tggcttttta accataccct ttccttgctt ttctggtcat ttgcaagaaa 1560 agtttgaaaa ggcttccccc attgcatggt ttgagaagcc caagagtttc ctcatggttt 1620 gagaagccca agagtttcct tttattcagc cgtccccaac cacaaacaaa ggctccctgt 1680 gctgtgctct gtggatgaga aattcacatt acaagggcaa aaagggggag acgtaaaagc 1740 aatttccagc ccccacccca aatggtgtga agtaaaagtg ctttcagaga atcccacaag

94 aatggcacag gtgggcacag cggggctgtc tcatcgtcag agagcccaag gagtcgaaag 1860 gaaactctaa catgccacaa aaccatagct gtaatgcaaa gtaacttagc tccccccacc 1920 tatctgtcac catcttaaaa aaaaaaaaac caaaaaaaaa cttgtgaaaa tacgtaatcc 1980 cgaggagcct tcgatcaggt ataaaactgg aagccagaga ggtgcaggct atagctgcca 2040 tcggctgacc tagagaagaa tcgaattccc gcggccgcca tggcggccgg gagcatgcga 2100 cgtcgggccc gggatccacc ggtcgccacc atggtgagca agggcgagga gctgttcacc 2160 ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg 2220 tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc 2280 accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag 2340 tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc 2400 gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc 2460 gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac 2520 ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac aagctggagt acaactacaa cagccacaac 2580 gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac 2640 aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc agcagaacac ccccatcggc 2700 gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa 2760 gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc 2820 actctcggca tggacgagct gtacaagtaa agcggccgcg actctagatc ataatcagcc 2880 ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc 2940 tgaaacataa aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt 3000 acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta 3060 gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttaaggcgt aaattgtaag cgttaatatt 3120 ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa 3180 atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca 3240 gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc 3300 gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg 3360 aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg 3420 ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg 3480 gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg 3540 ccgctacagg gcgcgtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt 3600 ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg 3660 cttcaataat attgaaaaag gaagagtcct gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt 3720 gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc 3780 atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta 3840 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc 3900 cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta 3960 tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct 4020 tttttggagg cctaggcttt tgcaaagatc gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc 4080 atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga gaggctattc 4140 ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca 4200 gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg 4260 caagacgagg cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg 4320 ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag 4380 gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg 4440 cggcggctgc atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc 4500 atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa 4560 gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgag catgcccgac 4620 ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat 4680 ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac 4740 atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc 4800 ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt 4860 gacgagttct tctgagcggg actctggggt tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc 4920 tgccatcacg agatttcgat tccaccgccg ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg 4980 ttttccggga cgccggctgg atgatcctcc agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg 5040 cccaccctag ggggaggcta actgaaacac ggaaggagac aataccggaa ggaacccgcg 5100 ctatgacggc aataaaaaga cagaataaaa cgcacggtgt tgggtcgttt gttcataaac 5160 gcggggttcg gtcccagggc tggcactctg tcgatacccc accgagaccc cattggggcc 5220 aatacgcccg cgtttcttcc ttttccccac cccacccccc aagttcgggt gaaggcccag

95 ggctcgcagc caacgtcggg gcggcaggcc ctgccatagc ctcaggttac tcatatatac 5340 tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 5400 ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 5460 tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 5520 aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 5580 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 5640 agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 5700 taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 5760 caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 5820 agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag 5880 aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 5940 gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 6000 tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 6060 gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 6120 ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcca 6180 tgcattagtt attactagcg ctaccggact cagatctcga gctcaagctt cgaattctgc 6240 a 6241 <210> 32 <211> 6370 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 32 tcgagctcaa gcttcgaatt ctgcaggcgg ccgcgaattc actagtgata gattgctggc 60 ttctgtcacc tgagtgctgg gattaaaggt atgagttacc acgaccctgc tagatttttt 120 ttttaagaca gattctcatg attcttaaac tggccttcaa gtctccagca gcagaaggtg 180 acctcgcact catgatcatc ttacctctgt ttccatctgt atttcatgcc tattttaagt 240 cagggttttt atacaagcac tctaccaacc aagagatgtt cctgactgtc aaaacagaga 300 ttcttaggta aacattcaaa tgaatatttg tgtgtgtgtg tgtgttgttt gtgtataaat 360 ctttatgctt atgtatttga gggaaataaa ttgtgtcaca gaagcaatga aacactttct 420 ggttttaagg aaattagtgg gcactgggat gggggtaggg ggcatgcata gttacctcgt 480 atatgagact ggggaaattg agaacccatg aagcatagaa acaaagtgct agccctgccc 540 agaggataaa gtctgatttg aagctggagg cttgggggag aaccaaaaca gaggatggtt 600 tgcatctggg tcaagataac tgggtaccac tctgagatgc tcagatgagg gaaagggggc 660 acatggccaa aggaactgca cgaacaagct gcatagcgtt gttaaacatc tgacattgcc 720 aaataaccat caagttttaa ttgagccact aggaatgccg ggaagaattc tctcaacttt 780 ccatggagca tttggttgag cctttggctg aagtccggaa gaaaatgcta gtgttaagct 840 cactgtataa atgtggaaac tgagtcacag atcataaaga tgctgactca agaccccgag 900 gctagaatat gaatggttca agtctgcacc catagccact gtgtaatgtt aatgaataca 960 ggaaaggcag ggatgaatac acgtgggctg gcactgaaga gcagagggcc tcctgcccca 1020 tcctcaagga tcgaatttca tagataggtt accaaagaca gagaaggaaa cttttagtgt 1080 ttgaacttga tgggggaaac aattttcagt tattaatcct tatttgggac aagtgtgtgt 1140 ctagtgctgg actagtcatt gggatagcct tagccacatg tgggtatgag agttagaaac 1200 atggctaatc ctgaagtgat ttctgctgtg tatataggat agccactagg ctttaaatat 1260 ttagtggcag aggaattgaa actcttattc atcataaatc ttgatacaca ttgatacctt 1320 gggtgtgttg agtgaaatac aatatctaat gaagtattct tgcattttta cttttatttc 1380 attttgcatt tttttccctt ttattaatgg aggaactaga tgattttatt ttacctatgt 1440 ggtctgcctt ttcttctttc tgggcacgtt gaccctgagt gatttgtagt aggtatttta 1500 ctaatcacct ccattgaagg gcttcctcac cacattggct ttttaaccat accctttcct 1560 tgcttttctg gtcatttgca agaaaagttt gaaaaggctt cccccattgc atggtttgag 1620 aagcccaaga gtttcctcat ggtttgagaa gcccaagagt ttccttttat tcagccgtcc 1680 ccaaccacaa acaaaggctc cctgtgctgt gctctgtgga tgagaaattc acattacaag 1740 ggcaaaaagg gggagacgta aaagcaattt ccagccccca ccccaaatgg tgtgaagtaa 1800 aagtgctttc agagaatccc acaagaatgg cacaggtggg cacagcgggg ctgtctcatc 1860 gtcagagagc ccaaggagtc gaaaggaaac tctaacatgc cacaaaacca tagctgtaat 1920 gcaaagtaac ttagctcccc ccacctatct gtcaccatct taaaaaaaaa aaaaccaaaa 1980 aaaaacttgt gaaaatacgt aatcccgagg agccttcgat caggtataaa actggaagcc 2040 agagaggtgc aggctatagc tgccatcggc tgacctagag aagaatcgaa ttcccgcggc 2100 cgccatggcg gccgggagca tgcgacgtcg ggcccgggat ccaccggtcg ccaccatggt

96 gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga 2220 cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa 2280 gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt 2340 gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca 2400 cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa 2460 ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa 2520 ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct 2580 ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat 2640 caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca 2700 ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct 2760 gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct 2820 ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agaagcttag 2880 ccatggcttc ccgccggagg tggaggagca ggatgatggc acgctgccca tgtcttgtgc 2940 ccaggagagc gggatggacc gtcaccctgc agcctgtgct tctgctagga tcaatgtgta 3000 gatgcgcggc cgcgactcta gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt 3060 gctttaaaaa acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattgtt 3120 gttgttaact tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat 3180 ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat 3240 gtatcttaag gcgtaaattg taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt taaatttttg 3300 ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa 3360 agaatagacc gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg aacaagagtc cactattaaa 3420 gaacgtggac tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat cagggcgatg gcccactacg 3480 tgaaccatca ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc cgtaaagcac taaatcggaa 3540 ccctaaaggg agcccccgat ttagagcttg acggggaaag ccggcgaacg tggcgagaaa 3600 ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg gcaagtgtag cggtcacgct 3660 gcgcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta cagggcgcgt caggtggcac 3720 ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac attcaaatat 3780 gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag 3840 tcctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca 3900 ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt 3960 ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca 4020 gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc 4080 cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg 4140 gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa 4200 gatcgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc 4260 aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat 4320 cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt 4380 caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaagac gaggcagcgc ggctatcgtg 4440 gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag 4500 ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc 4560 tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc 4620 tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga 4680 agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga 4740 actgttcgcc aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg 4800 cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg 4860 tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc 4920 tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc 4980 cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg 5040 gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc 5100 gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc 5160 ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ctagggggag gctaactgaa 5220 acacggaagg agacaatacc ggaaggaacc cgcgctatga cggcaataaa aagacagaat 5280 aaaacgcacg gtgttgggtc gtttgttcat aaacgcgggg ttcggtccca gggctggcac 5340 tctgtcgata ccccaccgag accccattgg ggccaatacg cccgcgtttc ttccttttcc 5400 ccaccccacc ccccaagttc gggtgaaggc ccagggctcg cagccaacgt cggggcggca 5460 ggccctgcca tagcctcagg ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt 5520 taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa 5580 cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga

97 gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg 5700 gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc 5760 agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag 5820 aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc 5880 agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg 5940 cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac 6000 accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga 6060 aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt 6120 ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag 6180 cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg 6240 gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta 6300 tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gccatgcatt agttattact agcgctaccg 6360 gactcagatc 6370 <210> 33 <211> 6795 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 33 tcgagctcaa gcttcgaatt ctgcaggcgg ccgcgaattc actagtgata gattgctggc 60 ttctgtcacc tgagtgctgg gattaaaggt atgagttacc acgaccctgc tagatttttt 120 ttttaagaca gattctcatg attcttaaac tggccttcaa gtctccagca gcagaaggtg 180 acctcgcact catgatcatc ttacctctgt ttccatctgt atttcatgcc tattttaagt 240 cagggttttt atacaagcac tctaccaacc aagagatgtt cctgactgtc aaaacagaga 300 ttcttaggta aacattcaaa tgaatatttg tgtgtgtgtg tgtgttgttt gtgtataaat 360 ctttatgctt atgtatttga gggaaataaa ttgtgtcaca gaagcaatga aacactttct 420 ggttttaagg aaattagtgg gcactgggat gggggtaggg ggcatgcata gttacctcgt 480 atatgagact ggggaaattg agaacccatg aagcatagaa acaaagtgct agccctgccc 540 agaggataaa gtctgatttg aagctggagg cttgggggag aaccaaaaca gaggatggtt 600 tgcatctggg tcaagataac tgggtaccac tctgagatgc tcagatgagg gaaagggggc 660 acatggccaa aggaactgca cgaacaagct gcatagcgtt gttaaacatc tgacattgcc 720 aaataaccat caagttttaa ttgagccact aggaatgccg ggaagaattc tctcaacttt 780 ccatggagca tttggttgag cctttggctg aagtccggaa gaaaatgcta gtgttaagct 840 cactgtataa atgtggaaac tgagtcacag atcataaaga tgctgactca agaccccgag 900 gctagaatat gaatggttca agtctgcacc catagccact gtgtaatgtt aatgaataca 960 ggaaaggcag ggatgaatac acgtgggctg gcactgaaga gcagagggcc tcctgcccca 1020 tcctcaagga tcgaatttca tagataggtt accaaagaca gagaaggaaa cttttagtgt 1080 ttgaacttga tgggggaaac aattttcagt tattaatcct tatttgggac aagtgtgtgt 1140 ctagtgctgg actagtcatt gggatagcct tagccacatg tgggtatgag agttagaaac 1200 atggctaatc ctgaagtgat ttctgctgtg tatataggat agccactagg ctttaaatat 1260 ttagtggcag aggaattgaa actcttattc atcataaatc ttgatacaca ttgatacctt 1320 gggtgtgttg agtgaaatac aatatctaat gaagtattct tgcattttta cttttatttc 1380 attttgcatt tttttccctt ttattaatgg aggaactaga tgattttatt ttacctatgt 1440 ggtctgcctt ttcttctttc tgggcacgtt gaccctgagt gatttgtagt aggtatttta 1500 ctaatcacct ccattgaagg gcttcctcac cacattggct ttttaaccat accctttcct 1560 tgcttttctg gtcatttgca agaaaagttt gaaaaggctt cccccattgc atggtttgag 1620 aagcccaaga gtttcctcat ggtttgagaa gcccaagagt ttccttttat tcagccgtcc 1680 ccaaccacaa acaaaggctc cctgtgctgt gctctgtgga tgagaaattc acattacaag 1740 ggcaaaaagg gggagacgta aaagcaattt ccagccccca ccccaaatgg tgtgaagtaa 1800 aagtgctttc agagaatccc acaagaatgg cacaggtggg cacagcgggg ctgtctcatc 1860 gtcagagagc ccaaggagtc gaaaggaaac tctaacatgc cacaaaacca tagctgtaat 1920 gcaaagtaac ttagctcccc ccacctatct gtcaccatct taaaaaaaaa aaaaccaaaa 1980 aaaaacttgt gaaaatacgt aatcccgagg agccttcgat caggtataaa actggaagcc 2040 agagaggtgc aggctatagc tgccatcggc tgacctagag aagaatcgaa ttcccgcggc 2100 cgccatggcg gccgggagca tgcgacgtcg ggcccgggat ccaccggtcg ccaccatggt 2160 gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga 2220 cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa 2280 gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt 2340 gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca

98 cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa 2460 ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa 2520 ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct 2580 ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat 2640 caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca 2700 ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct 2760 gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct 2820 ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agaagcttag 2880 ccatggcttc ccgccggagg tggaggagca ggatgatggc acgctgccca tgtcttgtgc 2940 ccaggagagc gggatggacc gtcaccctgc agcctgtgct tctgctagga tcaatgtgta 3000 gatgcgcggc cgcgggaatt cgataaagga gtcgctgctg attcggggtg gggaagagat 3060 tgtcccaata agaataattc tgccagcact atttgaattt ttaaatctaa acctatttat 3120 taatatttaa aactatttat atggagaatc tattttagat gcatcaacca aagaagtatt 3180 tatagtaaca acttatatgt gataagagtg aattcctatt aatatatgtg ttatttataa 3240 tttctgtctc ctcaactatt tctctttgac caattaatta ttctttctga ctaattagcc 3300 aagactgtga ttgcggggtt gtatctgggg gtgggggaca gccaagcggc tgactgaact 3360 cagattgtag cttgtacctt tacttcactg accaataaga aacattcaga gctgcagtga 3420 ccccgggagt gctgctgatg ggaggagatg tctacactcc gggccagcgc tttaacagca 3480 ggccagacag cactcgaatg tgtcaggtag taacaggctg tccctgaaag aaagcagtgt 3540 ctcaagagac ttgacactgg tcttccctat acagctgaaa actgtgacta cacccgaatg 3600 acaaataact cgctcattta tagtttatca ctgtctaatt gcatatgaat aaagtatacc 3660 tttgcaaccc ttaaggcgta aattgtaagc gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat 3720 ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa 3780 tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta 3840 ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca 3900 ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat 3960 cggaacccta aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg 4020 agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc 4080 acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcaggt 4140 ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca 4200 aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg 4260 aagagtcctg aggcggaaag aaccagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt 4320 ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca 4380 ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt 4440 agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt 4500 ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg 4560 cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt 4620 gcaaagatcg atcaagagac aggatgagga tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg 4680 cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag aggctattcg gctatgactg ggcacaacag 4740 acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt 4800 tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg aatgaactgc aagacgaggc agcgcggcta 4860 tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg 4920 ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt 4980 gctcctgccg agaaagtatc catcatggct gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat 5040 ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg 5100 atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca 5160 gccgaactgt tcgccaggct caaggcgagc atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc 5220 catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc 5280 gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat 5340 attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc 5400 gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga 5460 ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt 5520 ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga 5580 tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc ccaccctagg gggaggctaa 5640 ctgaaacacg gaaggagaca ataccggaag gaacccgcgc tatgacggca ataaaaagac 5700 agaataaaac gcacggtgtt gggtcgtttg ttcataaacg cggggttcgg tcccagggct 5760 ggcactctgt cgatacccca ccgagacccc attggggcca atacgcccgc gtttcttcct 5820 tttccccacc ccacccccca agttcgggtg aaggcccagg gctcgcagcc aacgtcgggg

99 cggcaggccc tgccatagcc tcaggttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc 5940 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc 6000 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt 6060 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac 6120 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct 6180 tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact 6240 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg 6300 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata 6360 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga 6420 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag 6480 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg 6540 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac 6600 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca 6660 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg 6720 cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgccat gcattagtta ttactagcgc 6780 taccggactc agatc 6795 <210> 34 <211> 5106 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 34 taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 60 taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 120 ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 180 gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 240 ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 300 ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 360 atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca 420 agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt 480 ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg 540 gaggtctata taagcagagc tggtttagtg aaccgtcaga tccgctagcg ctaccggact 600 cagatctcga gctcaagctt cgaattctgc agtcgacggt accgcgggcc cgggatccac 660 cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg 720 tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 780 atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 840 cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 900 accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 960 gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg 1020 gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 1080 tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 1140 agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 1200 tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 1260 ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 1320 atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc 1380 tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggcggtggc ggcgcaggat gatggcacgc 1440 tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca ccctgcagcc tgtgcttctg 1500 ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcc agtgtgctgg aattcggcgt aagaaaccct 1560 ggaccaccca ccccagcaag gacactgagc aagagaggcc ctatcccaac tcggccccca 1620 acactgagca tctccctcac aatttccatc ccagaccccc ataataacag gaggggccta 1680 gggagccctc cctactctct tgaataccat caataaagtt cgctgcaccc acttaagccg 1740 aattctgcag atatccatca cactggcggc cgcgactcta gatcataatc agccatacca 1800 catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa acctcccaca cctccccctg aacctgaaac 1860 ataaaatgaa tgcaattgtt gttgttaact tgtttattgc agcttataat ggttacaaat 1920 aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg 1980 gtttgtccaa actcatcaat gtatcttaag gcgtaaattg taagcgttaa tattttgtta 2040 aaattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgaaatcggc 2100 aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg 2160 aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat

100 100 cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc 2280 cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat ttagagcttg acggggaaag 2340 ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg 2400 gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta 2460 cagggcgcgt caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt 2520 ttctaaatac attcaaatat gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa 2580 taatattgaa aaaggaagag tcctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt 2640 tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca 2700 attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa 2760 gcatgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc 2820 taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg 2880 cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg 2940 gaggcctagg cttttgcaaa gatcgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt 3000 gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat 3060 gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag 3120 gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaagac 3180 gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac 3240 gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc 3300 ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg 3360 ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag 3420 cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat 3480 caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag 3540 gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc 3600 ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg 3660 ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg 3720 ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag 3780 ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat 3840 cacgagattt cgattccacc gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc 3900 gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc 3960 ctagggggag gctaactgaa acacggaagg agacaatacc ggaaggaacc cgcgctatga 4020 cggcaataaa aagacagaat aaaacgcacg gtgttgggtc gtttgttcat aaacgcgggg 4080 ttcggtccca gggctggcac tctgtcgata ccccaccgag accccattgg ggccaatacg 4140 cccgcgtttc ttccttttcc ccaccccacc ccccaagttc gggtgaaggc ccagggctcg 4200 cagccaacgt cggggcggca ggccctgcca tagcctcagg ttactcatat atactttaga 4260 ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc 4320 tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa 4380 agatcaaagg atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa 4440 aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc 4500 cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt 4560 agttaggcca ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc 4620 tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac 4680 gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca 4740 gcttggagcg aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg 4800 ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag 4860 gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt 4920 ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat 4980 ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc 5040 acatgttctt tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gccatgcatt 5100 agttat 5106 <210> 35 <211> 5006 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 35 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240

101 101 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 300 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 420 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 480 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 540 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta 600 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg 660 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc 720 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg 780 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc 840 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag 900 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag 960 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac 1020 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac 1080 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc 1140 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg 1200 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc 1260 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag 1320 ctgtacaagt ccggactcag atctaagctg aaccctcctg atgagagtgg ccccggctgc 1380 atgagctgca agtgtgtgct ctcctgagga tccagatctc gagctcaagc ttcgaattcg 1440 gcgtaagaaa ccctggacca cccaccccag caaggacact gagcaagaga ggccctatcc 1500 caactcggcc cccaacactg agcatctccc tcacaatttc catcccagac ccccataata 1560 acaggagggg cctagggagc cctccctact ctcttgaata ccatcaataa agttcgctgc 1620 acccacttaa gccgaattct gcagtcgacg gtaccgcggg cccgggatcc accggatcta 1680 gataactgat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaaaaaacc 1740 tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt gttaacttgt 1800 ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag 1860 catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttaacgcg 1920 taaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca 1980 ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag 2040 atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc 2100 aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc 2160 taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc 2220 ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa 2280 gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc 2340 acacccgccg cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag gtggcacttt tcggggaaat 2400 gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg 2460 agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtcc tgaggcggaa 2520 agaaccagct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag 2580 gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag 2640 gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc 2700 cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc 2760 atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat 2820 tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaagat cgatcaagag 2880 acaggatgag gatcgtttcg catgattgaa caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc 2940 gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat 3000 gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg 3060 tccggtgccc tgaatgaact gcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg 3120 ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta 3180 ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta 3240 tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac ctgcccattc 3300 gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc 3360 gatcaggatg atctggacga agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg 3420 ctcaaggcga gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga cccatggcga tgcctgcttg 3480 ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt 3540 gtggcggacc gctatcagga catagcgttg gctacccgtg atattgctga agagcttggc 3600 ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc 3660 atcgccttct atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg gactctgggg ttcgaaatga 3720

102 102 ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga ttccaccgcc gccttctatg 3780 aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg gatgatcctc cagcgcgggg 3840 atctcatgct ggagttcttc gcccacccta gggggaggct aactgaaaca cggaaggaga 3900 caataccgga aggaacccgc gctatgacgg caataaaaag acagaataaa acgcacggtg 3960 ttgggtcgtt tgttcataaa cgcggggttc ggtcccaggg ctggcactct gtcgataccc 4020 caccgagacc ccattggggc caatacgccc gcgtttcttc cttttcccca ccccaccccc 4080 caagttcggg tgaaggccca gggctcgcag ccaacgtcgg ggcggcaggc cctgccatag 4140 cctcaggtta ctcatatata ctttagattg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga 4200 tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt 4260 tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc 4320 tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc 4380 cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac 4440 caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac 4500 cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt 4560 cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct 4620 gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat 4680 acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt 4740 atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg 4800 cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt 4860 gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt 4920 tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg 4980 tggataaccg tattaccgcc atgcat 5006 <210> 36 <211> 4810 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 36 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 300 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 420 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 480 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 540 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta 600 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg 660 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc 720 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg 780 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc 840 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag 900 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag 960 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac 1020 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac 1080 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc 1140 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg 1200 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc 1260 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag 1320 ctgtacaagt ccggactcag atctaagctg aaccctcctg atgagagtgg ccccggctgc 1380 atgagctgca agtgtgtgct ctcctgagga tccagatctc gagctcaagc ttcgaattcg 1440 gcgtaagaaa ccctggacca cccaccccag caaggacact gagcaagaga ggccctatcc 1500 caactcggcc cccaacactg agcatctccc tcacaatttc catcccagac ccccataata 1560 acaggagggg cctagggagc cctccctact ctcttgaata ccatcaataa agttcgctgc 1620 acccacttaa gccgaattct gcagtcgacg gtaccgcggg cccgggatcc accggatcta 1680 gataactgat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaagcgtta 1740 atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg 1800 ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg 1860

103 103 ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa 1920 aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg 1980 ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt 2040 gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg 2100 ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta 2160 atgcgccgct acagggcgcg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta 2220 tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat 2280 aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtcctgaggc ggaaagaacc agctgtggaa 2340 tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag 2400 catgcatctc aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag 2460 aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc 2520 catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt 2580 ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg 2640 aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa agatcgatca agagacagga tgaggatcgt 2700 ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc 2760 tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc 2820 tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg 2880 aactgcaaga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag 2940 ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc gaagtgccgg 3000 ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg 3060 caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac 3120 atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg 3180 acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag gcgagcatgc 3240 ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg 3300 aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc 3360 aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc 3420 gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc 3480 ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc 3540 caacctgcca tcacgagatt tcgattccac cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg 3600 aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt 3660 cttcgcccac cctaggggga ggctaactga aacacggaag gagacaatac cggaaggaac 3720 ccgcgctatg acggcaataa aaagacagaa taaaacgcac ggtgttgggt cgtttgttca 3780 taaacgcggg gttcggtccc agggctggca ctctgtcgat accccaccga gaccccattg 3840 gggccaatac gcccgcgttt cttccttttc cccaccccac cccccaagtt cgggtgaagg 3900 cccagggctc gcagccaacg tcggggcggc aggccctgcc atagcctcag gttactcata 3960 tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct 4020 ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga 4080 ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg 4140 cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc 4200 aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct 4260 agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc 4320 tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt 4380 ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg 4440 cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct 4500 atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag 4560 ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag 4620 tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg 4680 gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg 4740 gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac 4800 cgccatgcat 4810 <210> 37 <211> 5737 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 37 tcgagcagtc aggagagagg gcagtgaggg tccatgctag ctgggtcttg agcctcttct 60 ggggttcagt ctctgatcta cagcagtgtg tccacaccta aaacatcagc tcagagaggc 120 agttgcttct gctgttggaa acggacatcc caaaaaaaaa caaaaaacag aaatcaaaag 180

104 104 ggaaggagaa agtgaaaggg atggaggcag cttgtcccct tccctgtgct tgctgctggt 240 agaaaactca gcctggaact gaccggagca gcagttcttg agtcaattcc attccaactt 300 ctagaagatt cttttcccgt cgaagagtgt caggaggaga ggccagaccc ccttgatcct 360 gatctgccag ccactgcatc agataagacg agataacccc gagttcctgt tctaccagcc 420 ctggtgtggt aaccctctcc aatggggcag gcttggaacc ctgtgccaac gaagatcctc 480 ccccgtactg atgcaggaag gacagcccgg gagtgtaccc tctacatggg tctactttta 540 tttaagcaaa cattccctgg tcaacaggac gtgtagcatt gccccccccc ttgggtcaca 600 cagaaaacag gtaccaggag gacaagtagt tgcttgccca gggtacagaa tgaaaggcaa 660 taggggactc taggcgaatg ttcttcccac ccaaactgag gtagtaggag aagtccctac 720 tgaagggaag gtccagacat aatcaaagga ctaccagaga tctcccaggt atctgtagaa 780 gtactaacat ctccatcctt caacagctac aggttacacg tctccaaggc tgggacattg 840 taaaacaggg ccatggtaag gtctacccga cagcacagag caagcctccc agaagtctga 900 gttccttctc ctaacttctc atgctgggat ctgagcttct tcgtgaaaca cggggcagag 960 gaggcaccag aactctcctc tgaccaactg ccccacagca cacatatcct caaaggatag 1020 tcttgaatac gtgatggaag aattaaagag agtgaggtct gaagaaaatc agccctctcg 1080 gggtttcctt tgggtaactg agtgctaagg tgacttccga gtcagcaaga aatatcggac 1140 gttcaaccca ggttgagtgg aggaaacaat tatttctcaa tcctaatatg ttctggaata 1200 gcccatttat ccacgtcatt atgacctggg agtgcgtgaa tggaatccac agatgagggc 1260 ctctgtacat agaacagctg tctgcctcag gaaatacaac ttttagtatt gagaagctaa 1320 aaagaaaaaa aaattaaaag agaggtagcc catactaaaa atagctgtaa tgcagaagtt 1380 cattccgacc agttctttag cgcttacaat gcaaaaaaaa gggaaaggaa aaaaaaaaag 1440 aaagaaatta aactcaaaaa ttgcatggtt tagaagaggg aggaggagcc tgaataacaa 1500 aaacctttgc caggaaggcc ccactgagcc ttcagtataa aagggggacc aagaacagga 1560 ggtctacatt tagagacttg ctcttgcact accaaagcca caaggcagcc ttgcagaaaa 1620 gagagctcca tcggatccac cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac 1680 cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt 1740 gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac 1800 caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca 1860 gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc 1920 cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg 1980 cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga 2040 cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa 2100 cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca 2160 caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg 2220 cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa 2280 agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat 2340 cactctcggc atggacgagc tgtacaagta aagcggccgc gactctagat cataatcagc 2400 cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaaaaaacc tcccacacct ccccctgaac 2460 ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt gttaacttgt ttattgcagc ttataatggt 2520 tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct 2580 agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttaaggcg taaattgtaa gcgttaatat 2640 tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga 2700 aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga gtgttgttcc 2760 agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac 2820 cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc 2880 gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta gagcttgacg 2940 gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag 3000 ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc 3060 gccgctacag ggcgcgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg 3120 tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat 3180 gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtcc tgaggcggaa agaaccagct gtggaatgtg 3240 tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg 3300 catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt 3360 atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc 3420 ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt 3480 atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc 3540 ttttttggag gcctaggctt ttgcaaagat cgatcaagag acaggatgag gatcgtttcg 3600 catgattgaa caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt 3660

105 105 cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc 3720 agcgcagggg cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact 3780 gcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt 3840 gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca 3900 ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat 3960 gcggcggctg catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg 4020 catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga 4080 agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcga gcatgcccga 4140 cggcgaggat ctcgtcgtga cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa 4200 tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga 4260 catagcgttg gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt 4320 cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct 4380 tgacgagttc ttctgagcgg gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac 4440 ctgccatcac gagatttcga ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc 4500 gttttccggg acgccggctg gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc 4560 gcccacccta gggggaggct aactgaaaca cggaaggaga caataccgga aggaacccgc 4620 gctatgacgg caataaaaag acagaataaa acgcacggtg ttgggtcgtt tgttcataaa 4680 cgcggggttc ggtcccaggg ctggcactct gtcgataccc caccgagacc ccattggggc 4740 caatacgccc gcgtttcttc cttttcccca ccccaccccc caagttcggg tgaaggccca 4800 gggctcgcag ccaacgtcgg ggcggcaggc cctgccatag cctcaggtta ctcatatata 4860 ctttagattg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa gatccttttt 4920 gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc 4980 gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg 5040 caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact 5100 ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg 5160 tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg 5220 ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac 5280 tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca 5340 cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga 5400 gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc 5460 ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct 5520 gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg 5580 agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct 5640 tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg tattaccgcc 5700 atgcattagt tattactagc gctaccggac tcagatc 5737 <210> 38 <211> 5866 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 38 tcgagcagtc aggagagagg gcagtgaggg tccatgctag ctgggtcttg agcctcttct 60 ggggttcagt ctctgatcta cagcagtgtg tccacaccta aaacatcagc tcagagaggc 120 agttgcttct gctgttggaa acggacatcc caaaaaaaaa caaaaaacag aaatcaaaag 180 ggaaggagaa agtgaaaggg atggaggcag cttgtcccct tccctgtgct tgctgctggt 240 agaaaactca gcctggaact gaccggagca gcagttcttg agtcaattcc attccaactt 300 ctagaagatt cttttcccgt cgaagagtgt caggaggaga ggccagaccc ccttgatcct 360 gatctgccag ccactgcatc agataagacg agataacccc gagttcctgt tctaccagcc 420 ctggtgtggt aaccctctcc aatggggcag gcttggaacc ctgtgccaac gaagatcctc 480 ccccgtactg atgcaggaag gacagcccgg gagtgtaccc tctacatggg tctactttta 540 tttaagcaaa cattccctgg tcaacaggac gtgtagcatt gccccccccc ttgggtcaca 600 cagaaaacag gtaccaggag gacaagtagt tgcttgccca gggtacagaa tgaaaggcaa 660 taggggactc taggcgaatg ttcttcccac ccaaactgag gtagtaggag aagtccctac 720 tgaagggaag gtccagacat aatcaaagga ctaccagaga tctcccaggt atctgtagaa 780 gtactaacat ctccatcctt caacagctac aggttacacg tctccaaggc tgggacattg 840 taaaacaggg ccatggtaag gtctacccga cagcacagag caagcctccc agaagtctga 900 gttccttctc ctaacttctc atgctgggat ctgagcttct tcgtgaaaca cggggcagag 960 gaggcaccag aactctcctc tgaccaactg ccccacagca cacatatcct caaaggatag 1020 tcttgaatac gtgatggaag aattaaagag agtgaggtct gaagaaaatc agccctctcg 1080

106 106 gggtttcctt tgggtaactg agtgctaagg tgacttccga gtcagcaaga aatatcggac 1140 gttcaaccca ggttgagtgg aggaaacaat tatttctcaa tcctaatatg ttctggaata 1200 gcccatttat ccacgtcatt atgacctggg agtgcgtgaa tggaatccac agatgagggc 1260 ctctgtacat agaacagctg tctgcctcag gaaatacaac ttttagtatt gagaagctaa 1320 aaagaaaaaa aaattaaaag agaggtagcc catactaaaa atagctgtaa tgcagaagtt 1380 cattccgacc agttctttag cgcttacaat gcaaaaaaaa gggaaaggaa aaaaaaaaag 1440 aaagaaatta aactcaaaaa ttgcatggtt tagaagaggg aggaggagcc tgaataacaa 1500 aaacctttgc caggaaggcc ccactgagcc ttcagtataa aagggggacc aagaacagga 1560 ggtctacatt tagagacttg ctcttgcact accaaagcca caaggcagcc ttgcagaaaa 1620 gagagctcca tcggatccac cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac 1680 cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt 1740 gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac 1800 caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca 1860 gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc 1920 cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg 1980 cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga 2040 cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa 2100 cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca 2160 caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg 2220 cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa 2280 agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat 2340 cactctcggc atggacgagc tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggaggtgga 2400 ggagcaggat gatggcacgc tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca 2460 ccctgcagcc tgtgcttctg ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcg actctagatc 2520 ataatcagcc ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc 2580 cccctgaacc tgaaacataa aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt tattgcagct 2640 tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca 2700 ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttaaggcgt aaattgtaag 2760 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca 2820 ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag 2880 tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg 2940 gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt 3000 tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag 3060 agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc 3120 gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc 3180 gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac 3240 ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc 3300 ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtcct gaggcggaaa gaaccagctg 3360 tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg 3420 caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca 3480 ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact 3540 ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta 3600 atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag 3660 tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaagatc gatcaagaga caggatgagg 3720 atcgtttcgc atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga 3780 gaggctattc ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt 3840 ccggctgtca gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct 3900 gaatgaactg caagacgagg cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg 3960 cgcagctgtg ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt 4020 gccggggcag gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc 4080 tgatgcaatg cggcggctgc atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc 4140 gaaacatcgc atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga 4200 tctggacgaa gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgag 4260 catgcccgac ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat 4320 ggtggaaaat ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg 4380 ctatcaggac atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg gcgaatgggc 4440 tgaccgcttc ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta 4500 tcgccttctt gacgagttct tctgagcggg actctggggt tcgaaatgac cgaccaagcg 4560

107 107 acgcccaacc tgccatcacg agatttcgat tccaccgccg ccttctatga aaggttgggc 4620 ttcggaatcg ttttccggga cgccggctgg atgatcctcc agcgcgggga tctcatgctg 4680 gagttcttcg cccaccctag ggggaggcta actgaaacac ggaaggagac aataccggaa 4740 ggaacccgcg ctatgacggc aataaaaaga cagaataaaa cgcacggtgt tgggtcgttt 4800 gttcataaac gcggggttcg gtcccagggc tggcactctg tcgatacccc accgagaccc 4860 cattggggcc aatacgcccg cgtttcttcc ttttccccac cccacccccc aagttcgggt 4920 gaaggcccag ggctcgcagc caacgtcggg gcggcaggcc ctgccatagc ctcaggttac 4980 tcatatatac tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag 5040 atcctttttg ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg 5100 tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc 5160 tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag 5220 ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc 5280 cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac 5340 ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc 5400 gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt 5460 tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt 5520 gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc 5580 ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt 5640 tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca 5700 ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt 5760 tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt 5820 attaccgcca tgcattagtt attactagcg ctaccggact cagatc 5866 <210> 39 <211> 6223 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 39 tcgagcagtc aggagagagg gcagtgaggg tccatgctag ctgggtcttg agcctcttct 60 ggggttcagt ctctgatcta cagcagtgtg tccacaccta aaacatcagc tcagagaggc 120 agttgcttct gctgttggaa acggacatcc caaaaaaaaa caaaaaacag aaatcaaaag 180 ggaaggagaa agtgaaaggg atggaggcag cttgtcccct tccctgtgct tgctgctggt 240 agaaaactca gcctggaact gaccggagca gcagttcttg agtcaattcc attccaactt 300 ctagaagatt cttttcccgt cgaagagtgt caggaggaga ggccagaccc ccttgatcct 360 gatctgccag ccactgcatc agataagacg agataacccc gagttcctgt tctaccagcc 420 ctggtgtggt aaccctctcc aatggggcag gcttggaacc ctgtgccaac gaagatcctc 480 ccccgtactg atgcaggaag gacagcccgg gagtgtaccc tctacatggg tctactttta 540 tttaagcaaa cattccctgg tcaacaggac gtgtagcatt gccccccccc ttgggtcaca 600 cagaaaacag gtaccaggag gacaagtagt tgcttgccca gggtacagaa tgaaaggcaa 660 taggggactc taggcgaatg ttcttcccac ccaaactgag gtagtaggag aagtccctac 720 tgaagggaag gtccagacat aatcaaagga ctaccagaga tctcccaggt atctgtagaa 780 gtactaacat ctccatcctt caacagctac aggttacacg tctccaaggc tgggacattg 840 taaaacaggg ccatggtaag gtctacccga cagcacagag caagcctccc agaagtctga 900 gttccttctc ctaacttctc atgctgggat ctgagcttct tcgtgaaaca cggggcagag 960 gaggcaccag aactctcctc tgaccaactg ccccacagca cacatatcct caaaggatag 1020 tcttgaatac gtgatggaag aattaaagag agtgaggtct gaagaaaatc agccctctcg 1080 gggtttcctt tgggtaactg agtgctaagg tgacttccga gtcagcaaga aatatcggac 1140 gttcaaccca ggttgagtgg aggaaacaat tatttctcaa tcctaatatg ttctggaata 1200 gcccatttat ccacgtcatt atgacctggg agtgcgtgaa tggaatccac agatgagggc 1260 ctctgtacat agaacagctg tctgcctcag gaaatacaac ttttagtatt gagaagctaa 1320 aaagaaaaaa aaattaaaag agaggtagcc catactaaaa atagctgtaa tgcagaagtt 1380 cattccgacc agttctttag cgcttacaat gcaaaaaaaa gggaaaggaa aaaaaaaaag 1440 aaagaaatta aactcaaaaa ttgcatggtt tagaagaggg aggaggagcc tgaataacaa 1500 aaacctttgc caggaaggcc ccactgagcc ttcagtataa aagggggacc aagaacagga 1560 ggtctacatt tagagacttg ctcttgcact accaaagcca caaggcagcc ttgcagaaaa 1620 gagagctcca tcggatccac cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac 1680 cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt 1740 gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac 1800 caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca 1860

108 108 gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc 1920 cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg 1980 cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga 2040 cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa 2100 cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca 2160 caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg 2220 cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa 2280 agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat 2340 cactctcggc atggacgagc tgtacaagta aagcggccgc gggaattcga tttaaaacac 2400 ctgcagtgtg tattgagtct gctggactcc aggacctaga cagagctctc taaatctgat 2460 ccagggatct tagctaacgg aaacaactcc ttggaaaacc tcgtttgtac ctctctccga 2520 aatatttatt acctctgata cctcagttcc cattctattt attcactgag cttctctgtg 2580 aactatttag aaagaagccc aatattataa ttttacagta tttattattt ttaacctgtg 2640 tttaagctgt ttccattggg gacactttat agtatttaaa gggagattat attatatgat 2700 gggaggggtt cttccttggg aagcaattga agcttctatt ctaaggctgg ccacacttga 2760 gagctgcagg gccctttgct atggtgtcct ttcaattgct ctcatccctg agttcagagc 2820 tcctaagaga gttgtgaaga aactcatggg tcttgggaag agaaaccagg gagatccttt 2880 gatgatcatt cctgcagcag ctcagagggt tcccctactg tcatccccca gccgcttcat 2940 ccctgaaaac tgtggccagt ttgttattta taaccaccta aaattagttc taatagaact 3000 catttttaac tagaagtaat gcaattcctc tgggaatggt gtattgtttg tctgcctttg 3060 tagcagactc taattttgaa taaatggatc ttattcgctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt 3120 taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata 3180 ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt 3240 tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg 3300 aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt 3360 ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc 3420 ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg 3480 cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct 3540 taatgcgccg ctacagggcg cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc 3600 tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg 3660 ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg 3720 aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa 3780 agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc 3840 agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg 3900 cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt 3960 ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga 4020 ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc 4080 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag 4140 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg 4200 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa 4260 tgaactgcaa gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc 4320 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc 4380 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga 4440 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa 4500 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct 4560 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat 4620 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt 4680 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta 4740 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga 4800 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg 4860 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg 4920 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc 4980 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag 5040 ttcttcgccc accctagggg gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga 5100 acccgcgcta tgacggcaat aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt 5160 cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat 5220 tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa 5280 ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca 5340

109 109 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc 5400 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca 5460 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc 5520 tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta 5580 ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt 5640 ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc 5700 gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg 5760 ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg 5820 tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag 5880 ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc 5940 agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat 6000 agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg 6060 gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc 6120 tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt 6180 accgccatgc attagttatt actagcgcta ccggactcag atc 6223 <210> 40 <211> 6352 <212> DNA <213> Sztuczne <400> 40 tcgagcagtc aggagagagg gcagtgaggg tccatgctag ctgggtcttg agcctcttct 60 ggggttcagt ctctgatcta cagcagtgtg tccacaccta aaacatcagc tcagagaggc 120 agttgcttct gctgttggaa acggacatcc caaaaaaaaa caaaaaacag aaatcaaaag 180 ggaaggagaa agtgaaaggg atggaggcag cttgtcccct tccctgtgct tgctgctggt 240 agaaaactca gcctggaact gaccggagca gcagttcttg agtcaattcc attccaactt 300 ctagaagatt cttttcccgt cgaagagtgt caggaggaga ggccagaccc ccttgatcct 360 gatctgccag ccactgcatc agataagacg agataacccc gagttcctgt tctaccagcc 420 ctggtgtggt aaccctctcc aatggggcag gcttggaacc ctgtgccaac gaagatcctc 480 ccccgtactg atgcaggaag gacagcccgg gagtgtaccc tctacatggg tctactttta 540 tttaagcaaa cattccctgg tcaacaggac gtgtagcatt gccccccccc ttgggtcaca 600 cagaaaacag gtaccaggag gacaagtagt tgcttgccca gggtacagaa tgaaaggcaa 660 taggggactc taggcgaatg ttcttcccac ccaaactgag gtagtaggag aagtccctac 720 tgaagggaag gtccagacat aatcaaagga ctaccagaga tctcccaggt atctgtagaa 780 gtactaacat ctccatcctt caacagctac aggttacacg tctccaaggc tgggacattg 840 taaaacaggg ccatggtaag gtctacccga cagcacagag caagcctccc agaagtctga 900 gttccttctc ctaacttctc atgctgggat ctgagcttct tcgtgaaaca cggggcagag 960 gaggcaccag aactctcctc tgaccaactg ccccacagca cacatatcct caaaggatag 1020 tcttgaatac gtgatggaag aattaaagag agtgaggtct gaagaaaatc agccctctcg 1080 gggtttcctt tgggtaactg agtgctaagg tgacttccga gtcagcaaga aatatcggac 1140 gttcaaccca ggttgagtgg aggaaacaat tatttctcaa tcctaatatg ttctggaata 1200 gcccatttat ccacgtcatt atgacctggg agtgcgtgaa tggaatccac agatgagggc 1260 ctctgtacat agaacagctg tctgcctcag gaaatacaac ttttagtatt gagaagctaa 1320 aaagaaaaaa aaattaaaag agaggtagcc catactaaaa atagctgtaa tgcagaagtt 1380 cattccgacc agttctttag cgcttacaat gcaaaaaaaa gggaaaggaa aaaaaaaaag 1440 aaagaaatta aactcaaaaa ttgcatggtt tagaagaggg aggaggagcc tgaataacaa 1500 aaacctttgc caggaaggcc ccactgagcc ttcagtataa aagggggacc aagaacagga 1560 ggtctacatt tagagacttg ctcttgcact accaaagcca caaggcagcc ttgcagaaaa 1620 gagagctcca tcggatccac cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac 1680 cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt 1740 gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac 1800 caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca 1860 gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc 1920 cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg 1980 cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga 2040 cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa 2100 cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca 2160 caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg 2220 cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa 2280

110 110 agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat 2340 cactctcggc atggacgagc tgtacaagaa gcttagccat ggcttcccgc cggaggtgga 2400 ggagcaggat gatggcacgc tgcccatgtc ttgtgcccag gagagcggga tggaccgtca 2460 ccctgcagcc tgtgcttctg ctaggatcaa tgtgtagatg cgcggccgcg ggaattcgat 2520 ttaaaacacc tgcagtgtgt attgagtctg ctggactcca ggacctagac agagctctct 2580 aaatctgatc cagggatctt agctaacgga aacaactcct tggaaaacct cgtttgtacc 2640 tctctccgaa atatttatta cctctgatac ctcagttccc attctattta ttcactgagc 2700 ttctctgtga actatttaga aagaagccca atattataat tttacagtat ttattatttt 2760 taacctgtgt ttaagctgtt tccattgggg acactttata gtatttaaag ggagattata 2820 ttatatgatg ggaggggttc ttccttggga agcaattgaa gcttctattc taaggctggc 2880 cacacttgag agctgcaggg ccctttgcta tggtgtcctt tcaattgctc tcatccctga 2940 gttcagagct cctaagagag ttgtgaagaa actcatgggt cttgggaaga gaaaccaggg 3000 agatcctttg atgatcattc ctgcagcagc tcagagggtt cccctactgt catcccccag 3060 ccgcttcatc cctgaaaact gtggccagtt tgttatttat aaccacctaa aattagttct 3120 aatagaactc atttttaact agaagtaatg caattcctct gggaatggtg tattgtttgt 3180 ctgcctttgt agcagactct aattttgaat aaatggatct tattcgctta aggcgtaaat 3240 tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt 3300 taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga ccgagatagg 3360 gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg actccaacgt 3420 caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc 3480 aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg 3540 atttagagct tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa 3600 aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc 3660 cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg 3720 cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca 3780 ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac 3840 cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga 3900 agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc 3960 ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc 4020 ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc 4080 tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga gctattccag 4140 aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg 4200 atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg 4260 ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc 4320 cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg 4380 tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt 4440 tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg 4500 cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat 4560 catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca 4620 ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca 4680 ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa 4740 ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa 4800 tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc 4860 ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga 4920 atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc 4980 cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga aatgaccgac 5040 caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg 5100 ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg cggggatctc 5160 atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg aggctaactg aaacacggaa ggagacaata 5220 ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg 5280 tcgtttgttc ataaacgcgg ggttcggtcc cagggctggc actctgtcga taccccaccg 5340 agaccccatt ggggccaata cgcccgcgtt tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt 5400 tcgggtgaag gcccagggct cgcagccaac gtcggggcgg caggccctgc catagcctca 5460 ggttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag 5520 gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac 5580 tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc 5640 gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat 5700 caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat 5760

111 111 actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct 5820 acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt 5880 cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg 5940 gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta 6000 cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg 6060 gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg 6120 tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc 6180 tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg 6240 gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat 6300 aaccgtatta ccgccatgca ttagttatta ctagcgctac cggactcaga tc 6352

112 112 Zastrzeżenia patentowe 1. Reporterowa linia komórkowa, znamienna tym, że jest linią komórkową wybraną spośród: linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (C/p1-5 3 TNFαdEGFP/2), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (EL/p1-5 IL2-dEGFP/6), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (EL/p2-5 IL4-dEGFP/2), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (EL/p1-5 IFNγ-dEGFP/3), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (EL/p2-5 IL10-dEGFP/5), linii komórkowej zdeponowanej w ECACC pod numerem dostępu (J/p4-5 IL1 β-degfp/4). 2. Kolekcja linii komórkowych, znamienna tym, że zawiera przynajmniej jedną reporterową linię komórkową określoną w zastrz. 1 oraz przynajmniej jedną linię komórkową, będącą kontrolą pozytywną, wykazującą konstytutywną ekspresję sekwencji genu reporterowego, przy czym sekwencja genu reporterowego jest funkcjonalnie związana z sekwencją regulatorową dającą ekspresję konstytutywną, przy czym korzystnie zawiera przynajmniej jeden spośród następujących elementów: 3 UTR GAPDH, promotor/enhancer CMV, promotor-aktyna lub ich pochodne. 3. Kolekcja linii komórkowych według zastrz. 2, znamienna tym, że linia komórkowa będąca kontrolą pozytywną jest transformowana plazmidem składającym się z sekwencji wybranych spośród następujących: Sekw. Id. Nr: 36 (p1-3 GAPHD/d1EGFP-N1, Sekw. Id. Nr: 37 (p2-3 GAPHD/EGFP-F), Sekw. Id. Nr: 38 (p3-3 GAPDH/EGFP-F), Sekw. Id. Nr: 39 (pca-egfp-f), Sekw. Id. Nr: 40 (pcad1egfp). 4. Kolekcja linii komórkowych według zastrz. 2, znamienna tym, że linia komórkowa będąca kontrolą pozytywną jest linią komórkową zdeponowaną w ECACC pod numerem dostępu (C/pCA- EGFP-F/2) lub linią komórkową zdeponowaną w ECACC pod numerem dostępu No (EL/pCA-dEGFP/9). 5. Sposób otrzymywania charakterystyk testowanych substancji, znamienny tym, że

113 113 a) kontaktuje się testowaną substancję z reporterową linią komórkową określoną w zastrz. 1 lub z przynajmniej jedną linią komórkową określoną w zastrz. 1 lw połączeniu z linią komórkową będącą kontrolą pozytywną określoną w zastrz. od 2 do 4, b) ustala się zmianę poziomu ekspresji genu reporterowego powodowaną przez badaną substancję, c) zmianę poziomu ekspresji ustaloną w (b) uznaje się za charakterystykę immunotoksyczności testowanej substancji. 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że etap (a) i (b) przeprowadzany jest na wszystkich liniach komórkowych określonych w zastrz. 1 i 4, oraz tym że w (b) zmiany poziomu ekspresji genu reporterowego określane są we wszystkich liniach komórkowych, i tym że w (c) otrzymywany jest profil ekspresji charakteryzujący immunotoksyczność substancji, i tym, że profil ten jest porównywany z wynikami otrzymanymi dla znanych substancji immunotoksycznych. 7. Zastosowanie reporterowej linii komórkowej okreśłonej w zastrz. 1 lub kolekcji linii komórkowych określonych w zastrz. od 2 do 4 do badania immunotoksyczności testowanej substancji.

114 114 Rycina 1

115 115 Rycina 2

116 116 Sygnał SV40 polia Sygnał SV40 polia Rycina 3

117 117 Rycina 4

118 118 Rycina 5

119 119 Rycina 6

120 120 Rycina 7

121 121 Rycina 8 Rycina 9

122 122 Rycina 10 Rycina 11

123 123 Rycina 12

124 124 Rycina 13

125 125 Rycina 14

126 126 Rycina 15

127 127 Rycina 16

128 128 Rycina 17

129 129 Rycina 18

130 130 Rycina 19

131 131

132 132

133 133 Rycina 21

134 134 Rycina 22

135 135 Rycina 23

136 136 Rycina 24

137 137 Rycina 25

138 138 Rycina 26 Rycina 27 Rycina 28

139 139 Rycina 29 Rycina 30 Rycina 31

140 140 Rycina 32