(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

Transkrypt

1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 2015/40 EP B1 (13) (51) T3 Int.Cl. A61K 38/09 ( ) A61K 38/24 ( ) A61D 19/02 ( ) A61K 9/00 ( ) A61K 9/08 ( ) A61K 9/10 ( ) (54) Tytuł wynalazku: Sposób synchronizacji owulacji dla zsynchronizowanego rozmnażania bez wykrywania rui (30) Pierwszeństwo: US P (43) Zgłoszenie ogłoszono: w Europejskim Biuletynie Patentowym nr 2006/31 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: Wiadomości Urzędu Patentowego 2016/03 (73) Uprawniony z patentu: Thorn BioScience, LLC, Louisville, US (72) Twórca(y) wynalazku: PL/EP T3 JAMES W. LAUDERDALE, Augusta, US (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Mirosława Ważyńska JWP RZECZNICY PATENTOWI DOROTA RZĄŻEWSKA SP. J. ul. Żelazna 28/30 Sienna Center Warszawa Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).

2 24034/15/ZWA/MW EP Sposób synchronizacji owulacji dla zsynchronizowanego rozmnażania bez wykrywania rui Opis Dziedzina wynalazku [0001] Wynalazek dotyczy reprodukcyjnego zarządzania lochami i loszkami, a zwłaszcza sposobów synchronizacji owulacji u takich świń dla zsynchronizowanego sztucznego rozmnażania zależnego w sposób ograniczony lub niezależnego od wykrywania estrus. Tło wynalazku [0002] Podawanie hormonów dla kontrolowania procesu reprodukcyjnego u zwierząt gospodarskich, takich jak konie, krowy, owce, kozy i świnie, jest dobrze znane w dziedzinie. Jedno z podejść do zarządzania procesami reprodukcyjnymi u ssaków gospodarskich wiąże się z podawaniem gonadotropin bezpośrednio zwierzętom gospodarskim. Gonadotropiny są wytwarzane przez płat przedni przysadki mózgowej i określa się je jako hormon folikulotropowy (FSH) i hormon luteinizujący (LH). Zazwyczaj takie hormony ekstrahuje się ze świńskich przysadek mózgowych i podaje zwierzętom gospodarskim w celu kontrolowania lub stymulowania procesu owulacji. Jedną z formulacji gonadotropiny jest FSH-P wytwarzany przez Schering-Plough Corp. FSH-P ma całkiem wysoką i zmienną zawartość hormonu luteinizującego i choć jest skuteczny w wywoływaniu odpowiedzi owulacyjnej, był mniej niż pożądany pod względem dawania wysokich odsetek zapłodnienia i żywotnych zarodków. Inną formulację, która ma niski i kontrolowany poziom hormonu luteinizującego o wysokiej aktywności stymulowania pęcherzyków, ujawniono w patencie US 4,780,451 B1 Donaldsona. Hormon uwalniający gonadotropinę (GnRH) również można stosować do stymulacji owulacji, jak podano w patencie US 5,180,711 Hodgena. W tym przypadku GnRH podaje się po antagoniście GnRH, co skutecznie usuwa poziomy naturalnej gonadotropiny. GnRH następnie stymuluje uwalnianie endogennego FSH i LH, co prowadzi do rozwoju pęcherzyków i owulacji. Zastosowanie podobnych hormonów do kontrolowania owulacji u bydła opisano w patencie US 5,589,457 Wiltbanka. [0003] Wiele różnych preparatów gonadotropin jest dostępnych w handlu, w tym Fertagyl, Cystorelin, Chorulon, Folltropin-V, Factrel, PG600, Receptal i inne. Ponadto dostępne są również pewne analogi lub agoniści GnRH, takie jak deslorelina i buserelina. Hormony te można podawać różnym gatunkom gospodarczym za pomocą implantu, zastrzyku domięśniowego lub podskórnego lub za pomocą podawania przez błony śluzowe, jak donosowo lub dopochwowo. Gonadotropiny można również podawać z rozczynnikami lub systemami dostarczania, które opóźniają lub kontrolują uwalnianie w czasie, aby dać modele bardziej naturalnego lub nawet wydłużonego uwalniania LH. Patrz patent US 6,051,558 Burnsa, et. al. [0004] Jednym z głównych celów komercyjnej produkcji trzody chlewnej jest maksymalizacja wydajności reprodukcji. Zwiększona wydajność reprodukcji daje

3 - 2 - producentom znaczące możliwości zmniejszenia kosztów produkcji i zwiększenia opłacalności. Część kosztów produkcji wynika z usilnego opierania się na codziennym wykrywaniu rui u poszczególnych zwierząt (W. L. Flowers and H.-D. Alhusen, (1992) J. Animal Science 70: ), ponieważ loszki i lochy rozmnażają się w spontanicznych cyklach rui. W przybliżeniu połowa pracy w zakładach rozmnażania trzody chlewnej polega na wykrywaniu estrus u rozmnażanych loszek i loch. Loszki lub lochy trzeba sprawdzać co najmniej raz dziennie, aby rozmnażać je w prawidłowym czasie, a jeśli stosowana jest sztuczna inseminacja ("AI"), to aby osiągnąć jak najlepsze wyniki konieczne może być sprawdzanie dwa razy dziennie. Rygorystyczne wykrywanie rui jest konieczne, ponieważ dla dowolnej loszki u której występuje cykl, lub luźnej lochy, nawet takiej o udokumentowanym dobrym wykrywaniu rui trudno przewidzieć dzień rui. [0005] Brüssow et al, Theriogenology, , ujawnia podawanie GnRH lub analogu GnRH jako ostatni etap w wieloetapowym protokole sztucznej inseminacji w ustalonym czasie. Wykorzystuje się sekwencyjne podawanie mieszanek wielu hormonów. GnRH podaje się w kombinacji z altrenogestem lub ecg. [0006] Celem wynalazku jest zapewnienie środków do wywoływania owulacji, które umożliwiają sztuczną inseminację przy braku wykrywania rui. Streszczenie wynalazku [0007] Przykładami wykonania wynalazku są: 1. Zastosowanie kompozycji do synchronizacji owulacji u świni bez wykrywania rui, przy czym kompozycja zawiera hormon wybrany z grupy składającej się z (a) hormonu uwalniającego gonadotropinę (GnRH), (b) hormonu luteinizującego (LH) i (c) ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hcg) lub (d) analogu GnRH, przy czym kompozycja jest stosowana do wywoływania owulacji w określonym czasie po podaniu losze po porodzie po odstawieniu prosiąt i przy czym zastosowaniem jest podawanie jednego hormonu wybranego spośród (a) do (d) bez żadnego innego podawania hormonu i przy czym po podaniu hormonu locha ma być rozmnażana z zastosowaniem jednego etapu sztucznej inseminacji. 2. Zastosowanie z przykładu wykonania 1, przy czym hormonem jest GnRH. 3. Zastosowanie z przykładu wykonania 1, przy czym hormonem jest analog GnRH. 4. Zastosowanie dowolnego z przykładów wykonania od 1 do 3, przy czym hormon jest podawany w polimerowym urządzeniu dostarczającym. 5. Zastosowanie z przykładu wykonania 4, przy czym hormon jest podawany losze 96 godzin po odstawieniu prosiąt.

4 Zastosowanie z przykładu wykonania 4 albo 5, przy czym locha jest rozmnażana około 28 godzin po podaniu hormonu. 7. Zastosowanie dowolnego z przykładów wykonania od 1 do 6, przy czym hormon jest podawany dopochwowo. 8. Zastosowanie dowolnego z przykładów wykonania od 1 do 7, przy czym hormon jest podawany w postaci kompozycji zawierającej materiały tworzące hydrożel. 9. Zastosowanie dowolnego z przykładów wykonania od 1 do 6, przy czym hormon jest podawany w postaci formulacji o przedłużonym uwalnianiu. 10. Zastosowanie dowolnego z przykładów wykonania od 1 do 6, przy czym kompozycja zawiera rozczynnik wybrany z grupy składającej się z octanu izomaślanu sacharozy i kopolimerów blokowych na bazie tlenku etylenu i tlenku propylenu. 11. Zastosowanie z przykładu wykonania 9, przy czym formulacja o przedłużonym uwalnianiu zawiera żywicę jonowymienną. 12. Zastosowanie dowolnego z przykładów wykonania od 1 do 6, przy czym kompozycja zawiera octan izomaślanu sacharozy. 13. Zastosowanie z przykładu wykonania 9, przy czym formulacja o przedłużonym uwalnianiu jest podawana w urządzeniu medycznym typu depo. 14. Zastosowanie dowolnego z przykładów wykonania od 1 do 13, przy czym zastosowanie wspomaga płodność lochy. [0008] Opracowano sposób synchronizacji owulacji u świni w celu zapewnienia wydajnego zarządzania reprodukcyjnego za pomocą zsynchronizowanej sztucznej inseminacji bez wykrywania estrus (rui). Hormon, hormon uwalniający gonadotropinę (GnRH), hormon luteinizujący (LH), hormon folikulotropowy (FSH), ludzka gonadotropina kosmówkowa (hcg), lub lek skojarzony o podobnej aktywności, taki jak PG600, w celu stymulacji owulacji można podawać losze po porodzie w ustalonym czasie po odstawieniu. Po odpowiednim okresie (zgodnym z rasą świni i zapiskami dotyczącymi oproszenia) stosuje się pojedyncze zsynchronizowane rozmnażanie za pomocą AI, aby osiągnąć normalne odsetki ciąż i wielkości miotów niezależnie od wykrywania estrus. [0009] GnRH korzystnie podaje się w postaci 50 mcg desloreliny w nośniku o wydłużonym czasie uwalniania, takim jak rozczynnik SAIB, dostępny od Birmingham Polymers. Inne preparaty GnRH można podawać w zakresie mcg. Takie produkty jak hcg można podawać w dawkach w wielkości nawet 750 IU. Ilości dawki, jakie tu wskazano, dotyczą hormonów w ich "postaci natywnej", a w przypadku analogów GnRH, takich jak deslorelina, wskazuje się je jako ilości równoważne danemu hormonowi w "postaci natywnej". [0010] Przykłady pokazują, że sposób synchronizacji był bardzo skuteczny w porównaniu z kontrolami, które wymagały dużo bardziej pracochłonnych technik rozmnażania. Krótki opis rysunków

5 - 4 - [0011] Figury 1a i 1b są wykresami pokazującymi, że pojedyncze wstrzyknięcie 50 mcg desloreliny w SAIB dało pik LH około dwukrotnie wyższy niż normalna wartość (Figura 1a) w porównaniu z Hansel et al., ((1973) Biology of Reproduction 8, 222) (Figura 1b), który powrócił do poziomu podstawowego w ciągu 18 godzin, co określono za pomocą RIA. Szczegółowy opis wynalazku [0012] Wydajne reprodukcyjne zarządzanie świniami stało się ważnym czynnikiem dla producentów trzody chlewnej, szczególnie ze względu na kontynuowaną integrację pionową przemysłu, gdzie dominującym modelem jest sposób wytwarzania "pełny/pusty". W tym sposobie kolejne grupy świń tworzy się dla oszczędności, kontroli chorób i dawkowania paszy, aby uzyskać grupy świń osiągające w tym samym czasie masę idealną do sprzedaży. Kontrola reprodukcyjna stanowi pierwszy etap sposobu, w którym pomieszczenia porodowe wypełnia się loszkami i/lub lochami, hodowanymi przez krótki czas, zazwyczaj od 5 do 7 dni, do oproszenia. Zapewnia to możliwość odstawienia prosiąt z całego pomieszczenia porodowego tego samego dnia, a to z kolei oznacza, że grupy świń z dowolnej jednostki są w tym samym wieku, mają zbliżony rozmiar i są na zbliżonym etapie rozwoju. W komercyjnym hodowaniu trzody chlewnej pomaga to kontrolować choroby, zmniejsza stres wśród zgromadzonych grup i maksymalizuje wykorzystywanie różnych formulacji paszowych, kiedy świnie zwiększają masę do masy odpowiedniej do sprzedaży. [0013] Znawcy w dziedzinie produkcji trzody chlewnej dobrze wiedzą, że dla maksymalizacji wydajności reprodukcyjnej wykrywanie estrus jest ważnym i podstawowym zadaniem. Estrus jest okresem, kiedy występuje gotowość na przyjęcie knura lub możliwość rozmnażania. Wykrywanie estrus, jak praktykuje się obecnie w gospodarstwach towarowych trzody chlewnej, jest pracochłonnym sposobem wykonywanym codziennie lub dwa razy dziennie. Sposób wiąże się z indywidualnym wystawianiem każdej loszki lub lochy na obecność knura i manualnym uciskaniem grzbietu ("próba dosiadania") każdego zwierzęcia dla określenia, czy wywołany został odruch tolerancji, "ruja stojąca" (Gordon, I., Controlled Reproduction in Pigs, CAB International, 1997). Przeprowadza się to wobec każdego osobnika z puli do rozrodu, o którym nie wiadomo, by ostatnio był rozmnażany i że zakończył się u niego estrus. Sposób kontynuuje się przez okres rujowy i lochę lub loszkę rozmnaża się wiele razy, aż do momentu, kiedy uważa się, że nie przyjmie już samca. [0014] Na początku normalnego estrus (rui) u zwierząt gospodarskich mózg wydziela duże ilości GnRH, co z kolei powoduje uwalnianie hormonu folikulotropowego i hormonu luteinizującego (LH), co w ciągu godzin wywołuje owulację pęcherzyków Graafa. U świń szczytowe poziomy estradiolu występują na kilka dni przed oznakami estrus i pik LH często występuje w czasie, kiedy estrus jest potwierdzony (Niswender et al Endocrinology 37, (1970)). [0015] Czas trwania cyklu rujowego u loch jest stosunkowo stały w ciągu roku i wynosi 21 dni, nie licząc oczywistej sezonowości (Asdell, (1964) Patterns of Mammalian Reproduction, 2nd edn. Cornell University Press, Ithaca, USA, s. 670; Dziuk, (1991) Reproduction in the pig. In: Cupps, P.T. (ed.) Reproduction in Domestic Animals, 4 wyd. Academic Press, New

6 - 5 - York, s ), choć późnym latem może występować pewna tendencja do mniejszej konsekwencji (Stork, M.G. (1979) Veterinary Record 104, 49-52; Hurtgen and Leman, (1980) J. Amer. Vet. Med. Ass. 177, ) prawdopodobnie z powodu krótszych dni. Loszki mogą wykazywać tendencję do cyklów krótszych niż u dojrzałych loch (Asdell, (1964) Patterns of Mammalian Reproduction, 2nd edn. Cornell University Press, Ithaca, USA, s. 670). Estrus behawioralny występuje przez okres 2-3 dni, przy czym jego początek poprzedzają szczytowe poziomy estradiolu i zbiega się on ze szczytowymi poziomami LH (Hansel et al., (1973) Biol. Repro. 8, 222), które odpowiadają za dojrzewanie i owulację pęcherzyków (Hunter and Polge, (1966) J. Repro. Fert. 12, ; Hunter (1977) Brit. Vet. J. 133, ). Owulacja zachodzi po około 40 godzinach od rozpoczęcia estrus, jeśli estrus trwa 2 dni, lub po około 75% czasu trwania estrus, jeśli jest on dłuższy niż 2 dni (Gordon, 1997 Controlled Reproduction in Pigs, CAB International, 1997). Wielokrotne owulacje zachodzą przez około 1-6 godzin (Betteridge and Raeside, (1962) Res. Vet. Sci. 3, ; Du Mesnil du Buisson and Signoret, 1970 Du Mesnil du Boisson, F. and Signoret, J.P. (1970) Vet. Rec. 87, ; Soede and Kemp, 1993 Soede, N.M. and Kemp, B. (1993) Theriogenology 39, ). [0016] Podejmowana kontrola hormonalna okresu rujowego i owulacji jest dobrze opisana w literaturze. Opisano kontrole wykorzystujące więcej niż jeden steroid/gonadotropinę/ prostaglandynę lub ich analogi w serii lub kombinacji zastrzyków z różnymi harmonogramami czasowymi zależnie od charakterystyki konkretnej grupy, obejmującej niedojrzałe płciowo lub dojrzałe płciowo loszki, lochy po porodzie, ale przed odstawieniem, w czasie odstawienia lub pod ostawieniu. Wstrzykiwalne i doustne progesteron i progestagen (Ulberg et al (1951) J. Animal Sci. 10, ); Gerrits et al., (1963) J. Animal Sci. 21, ), altrenogest (Martinat-Botte et al., 1985 Martinatt-Botte, F., Bariteau, F., Badouard, B. and Terqui, M. (1985) J. Reprod. Fert. Suppl. 33, ), altrenogest z PMSG i GnRH/hCG (Busch et al., (1992) Monatshefte fur Veteriarmedizin 47, ), prostaglandyny (Jackson and Hutchinson, Veterinary Record ), metalibur, PMSG i hcg (Polge et al., (1968) Veterinary Record 83, ; F. De Rensis et al., (2003) Animal Reproduction Science 76: ) osiągnęły ograniczony sukces (progestagen), zawiodły (prostaglandyny), ich sprzedaż została zakazana (metalibur) lub wymagają codziennego dawkowania doustnego (altrenogest), wielu zastrzyków (estradiol, progesteron) lub kombinacji leków (PMSG, hcg GnRH) połączonej z ciągłym wykrywaniem rui w celu uzyskania znaczącej wydajności rozmnażania. [0017] Znawcy dalej stosują wiele sekwencyjnych interwencji hormonalnych w celu kontrolowania czasu estrus i czasu owulacji u loszek z cyklem rujowym, takich jak sekwencja altrenogestu lub metaliburu w celu zahamowania przysadkowej gonadotropiny, a następnie ecg lub hcg, lub GnRH, a u loch po porodzie - takich jak ecg po odstawieniu, a następnie GnRH lub kombinacja GnRH i hcg, z rozmnażaniem za pomocą zsynchronizowanego AI (Brussow et al, (1996) Theriogenology 46: ). GnRH badano jako "wzmacniacz płodności" u loch poprzez wstrzykiwanie go na 1 dzień lub na 11 do 12 dni po pierwszym kryciu (Peters et al, (2000) Vet. Record 147: ). Jeszcze w 2003 (DeRensis et al, 2003) znawcy kontynuowali badanie PG600 wstrzykiwanego w czasie lub przed odstawieniem jako

7 - 6 - sposób skrócenia okresu między odstawieniem a estrus, ale nie pod kątem zsynchronizowanej owulacji dla zsynchronizowanego rozmnażania. W niedawnych pracach przeglądowych dotyczących hormonalnych sposobów kontrolowania estrus i rozmnażania loszek z cyklem rujowym i loch po porodzie w dalszym ciągu cytowano sposoby przedstawione powyżej (Kirkwood, (1999) Swine Health Prod. 7(1):29-35; Day, et al. Control of reproduction in the female pig. 30th Annual Meeting, American Association of Swine Practitioners, Workshop #6, St. Louis, MO February 27, 1999, s ). W literaturze naukowej od wczesnych lat 60. XX wieku aż do 2003 roku przedstawiano wymagania dla wielokrotnych sekwencyjnych terapii hormonalnych u loszek z cyklem rujowym, lub zastosowanie różnych kombinacji lub pojedyncze zastosowanie gonadotropin do próby kierowania czasu wystąpienia estrus u loch po porodzie. Żaden ze znawców nie doniósł o pojedynczym wstrzyknięciu GnRH po porodzie, a następnie dwóch lub trzech rozmnażaniach dających w wyniku normalną płodność pod nieobecność wykrywania estrus i rozmnażania związanego z wykryciem estrus. [0018] Ostatecznym celem synchronizacji estrus i/lub owulacji, zmniejszenia ostępów od odstawienia do estrus lub zamiast tego rozmnażania loszek jest utrzymywanie pomieszczeń porodowych pełnych i pogrupowanych dla produkcji pełny/pusty. Jednocześnie wszystkie programy zarządzania rozmnażaniem wykorzystują standardowe sposoby wykrywania rui w trakcie okresu wczesnego wykrywania i okresu estrus aż rozmnażanie jest zakończone i loszka lub locha nie przyjmują już samca. [0019] Wiele informacji wskazuje na to, że hormonalna indukcja estrus po odstawieniu za pomocą poszczególnych gonadotropin lub za pomocą leku skojarzonego, takiego jak PG600, jest skuteczna pod względem wywoływania płodnego estrus po odstawieniu (Kirkwood, R.N. (1999) Swine Health Prod. 7(1):29-35; Sechin et al., (1999) Theriogenology 51: ). Jednak F. De Rensis et al. twierdzi, że choć wstrzykiwanie gonadotropin podczas odstawiania wywoła wcześniejszy płodny estrus, przez indukowanie wcześniejszego estrus wydłuża się czas między początkiem estrus a owulacją, co jeszcze bardziej utrudnia przewidzenie owulacji (Knox et al. (2001) J. Animal Sci. 79: ). Co więcej, badanie wykazało, że powodzenie indukowania płodnego estrus jest skorelowane z dniem laktacji, w którym przeprowadzono traktowanie, przy czym największa szansa powodzenia korelowała z traktowaniem w 25. dniu po porodzie (Hodson et al. 1981), co jest niespójne z tymi programami komercyjnymi, w których odstawianie przeprowadza się dni po oproszeniu. We wszystkich przypadkach powodzenie tych doświadczalnych protokołów było związane z wykrywaniem estrus codziennie lub dwa razy dziennie w ciągu okresu, w którym był przyjmowany samiec, i z wielokrotnymi rozmnażaniami. I. Sposoby podawania [0020] Zastosowanie według zastrzeżenia 1 do synchronizacji owulacji u świni bez wykrywania rui obejmuje podawanie świni, zazwyczaj 21 dni po czasie odstawienia, dawki hormonu, takiego jak hormon uwalniający gonadotropinę (GnRH), hormon luteinizujący (LH), ludzka gonadotropina kosmówkowa (hcg) lub ich analogi, lub ich kombinacji w ilości skutecznej do stymulacji owulacji pęcherzyków jajnikowych; i po około jednym dniu rozmnażanie lochy bez wykrywania rui. Rozmnażanie jest sztuczne.

8 - 7 - [0021] Świnia jest lochą po porodzie i korzystnie hormon podaje się losze 96 godzin po odstawieniu jej prosiąt. W innym przykładzie wykonania świnia jest lochą po porodzie w pierwszym dniu estrus po odstawieniu; a hormon podaje się i świnię rozmnaża się bez dalszego wykrywania rui. Alternatywnie hormon podaje się przy pierwszych wykrywalnych oznakach estrus. [0022] Lochę korzystnie rozmnaża się około 28 godzin po podaniu hormonu. [0023] Badania wykazały, że zsynchronizowane wstrzyknięcie jednego hormonu, takiego jak deslorelina (analog GnRH), w rozczynniku SAIB i zsynchronizowane rozmnażanie bez wykrywania rui u loch po odstawieniu daje normalną płodność i liczbę prosiąt. Zsynchronizowane wstrzykiwanie i zsynchronizowane rozmnażanie silnie ogranicza wykrywanie rui po wykryciu pierwszej oznaki estrus. Zsynchronizowane wstrzyknięcie jednego hormonu - desloreliny (analogu GnRH) - w rozczynniku SAIB i zsynchronizowane rozmnażanie bez wykrywania rui można również stosować po podaniu prostaglandyny PGF2a u loszek w stanie ciąży urojonej. II. Kompozycje do synchronizacji estrus Hormony [0024] Kompozycja zawiera hormon uwalniający gonadotropinę (GnRH), hormon luteinizujący (LH), ludzką gonadotropinę kosmówkową (hcg) lub analogi GnRH i ich kombinacje w ilości skutecznej do stymulacji owulacji pęcherzyka jajnikowego. Jak pokazano w przykładach, deslorelinę stosowano w dawce 50 mcg w SAIB podawanej podskórnie blisko sromu. Dawki porównywalnych hormonów w ich postaci natywnej lub innych analogów GnRH są zatwierdzone do niektórych zastosowań u zwierząt mięsnych i mlecznych. Z uwzględnieniem wymogów dla zatwierdzenia przez FDA takie dawki mogą być różne, co dla znawców będzie zrozumiałe, ponieważ aktualnie nie ma żadnych zatwierdzonych przez FDA wskazań dla świń. [0025] Termin "postać natywna" oznacza hormon o tej samej sekwencji aminokwasowej i tym samym zakresie aktywności, co ten występujący w naturze. Natywna postać GnRH będzie zatem obejmowała postać hormonu niezależnie od tego, jak została zsyntetyzowana, która jest, jak ta wytworzona przez podwzgórze. GnRH, które są dostępne w handlu pod znakami towarowymi Cystorelin lub Factrel, są syntetycznymi produktami o tych samych sekwencjach aminokwasowych i aktywnościach, jak te naturalnie występujące u zwierząt, a zatem uważa się je za postacie natywne hormonu. Wielkości dawek, które są tu podawane, podano dla analogu GnRH - desloreliny - i należy przeprowadzić odpowiednie dopasowanie dla postaci natywnych, które mają niższą aktywność. Dawka 50 mcg desloreliny jest wielkością dawki dla analogu hormonu GnRH, zatem postać natywną mającą na przykład jedną piątą aktywności należałoby dawkować w wielkości 250 mcg. Rozczynniki [0026] Hormon zawiesza się lub rozpuszcza we wstrzykiwalnym rozczynniku o przedłużonym lub kontrolowanym uwalnianiu. W najkorzystniejszym przykładzie wykonania

9 - 8 - [0027] Można zastosować inne odpowiednie rozczynniki. BASF sprzedaje materiały typu PLURONIC, które są kopolimerami blokowymi na bazie tlenku etylenu i tlenku propylenu. Mogą one działać jako środki przeciwpieniące, środki zwilżające, dyspergatory, zagęstniki i emulgatory. Inne materiały obejmują tworzące hydrożel materiały, takie jak kolagen, kwas hialuronowy, alginian i fibryna. Dostępnych jest również wiele innych materiałów i urządzeń o wydłużonym uwalnianiu, w tym różne medyczne urządzenia typu depo o zbliżonych profilach uwalniania. Inne formulacje o wydłużonym lub przedłużonym uwalnianiu można wykonać z zastosowaniem materiałów, takich jak żywice jonowymienne lub polimerowe urządzenia dostarczające. [0028] Wynalazek będzie lepiej zrozumiały dzięki odniesieniu do poniższych nieograniczających przykładów. Przykład 1: Traktowanie pojedynczą dawką hormonu dawało większe mioty. [0029] Badanie odpowiedzi na dawkę przeprowadzono z zastosowaniem desloreliny w SAIB w modelu wykorzystującym poddaną owariektomii loszkę, której wcześniej podano estrogen (Barb, et al. (1999) Proceed. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 26). Jak pokazano na Figurze 1a, 50 mcg desloreliny w SAIB dało pik LH około dwukrotnie wyższy niż normalna wartość w porównaniu z Figurą 1b z Hansel et al., ((1973) Biology of Reproduction 8, 222), który powrócił do poziomu podstawowego w ciągu 18 godzin, co określono za pomocą RIA. Przykład 2: Porównanie podawania dosromowego z wstrzykiwaniem desloreliny. [0030] Na podstawie tych wyników przeprowadzono badanie wykorzystujące dojrzałe lochy po porodzie, w tym 75 osobników badanych i 75 kontrolnych. Lochy losowo przydzielono w blokach po dwie do kontroli, lub do przyjmowania 50 mcg desloreliny w SAIB w postaci zastrzyków dosromowych w czasie wykrycia estrus w przypadku loch, u których po raz pierwszy wykryto estrus przed południem, i 12 godzin później w przypadku tych, u których estrus wykryto po południu. Traktowane zwierzęta rozmnażano za pomocą AI po wykryciu estrus i ponownie 24 godziny później, jeśli nadal miały estrus. Kontrolom podawano zastrzyk z soli fizjologicznej przy wykryciu pierwszego zachowania związanego z estrus i rozmnażano je zgodnie z normalnymi procedurami obowiązującymi na fermie.

10 - 9 - [0031] Jak przedstawiono w Tabeli 1, nie było znaczących różnic pod względem odsetek ciąż między lochami z grupy Kontrolnej a z grupy Traktowanej, ale liczba żywych prosiąt na miot w grupie traktowanej była o 0,6 większa niż w grupie kontrolnej. Tabela 1: Estrus i odsetek ciąż u loch po traktowaniu desloreliną Sól fizjologiczna (Kontrola) Deslorelina (Traktowane) Długość estrus (godz.) 40,74 (n=73) 40,81 (n=69) Odsetek ciąż 92% (n=75) 91% (n=75) Lochy, którym podawano sól fizjologiczną, rozmnażano przy wykryciu estrus, tak jak lochy na fermie. Lochom, którym podawano deslorelinę, wstrzykiwano dosromowo 1 ml (50 µg octanu desloreiny) przy pierwszym wykryciu estrus i przeprowadzano AI, następnie ponownie przeprowadzano AI, jeśli nadal miały estrus następnego dnia. Liczba żywych prosiąt była o 0,6 większa u loch, którym podawano deslorelinę. w porównaniu z tymi, którym podawano sól fizjologiczną. Przykład 3: Normalne odsetki ciąż uzyskano u loch po traktowaniu hormonalnym. [0032] Około 170 loch po porodzie losowo podzielono na dwie równe grupy złożone ze zwierząt kontrolnych i traktowanych. Po odstawieniu zwierzęta kontrolne monitorowano pod kątem estrus i rozmnażano zgodnie z normalnymi standardowymi procedurami działania dla ferm, na których mieszkały. Lochy traktowane otrzymywały 50 mcg dawkę desloreliny w SAIB 96 godzin po odstawieniu i rozmnażano je za pomocą jednej inseminacji 28+/-2 godziny później niezależnie od wykrywania estrus. Lochy zbadano pod kątem ciąży za pomocą ultradźwięków po 21 dniach i uśmiercono po około 28 dniach od rozmnażania. Usunięto cały przewód rozrodczy i policzono ciałka żółte i zarodki. [0033] Dane w Tabeli 2 pokazują, że normalne odsetki ciąż uzyskano po pojedynczym zsynchronizowanym wstrzyknięciu desloreliny w SAIB w określonym czasie od odstawienia i późniejszej zsynchronizowanej inseminacji przy braku wykrywania estrus (rui). Tabela 2: Odsetki ciąż i liczba zarodków u loch po traktowaniu desloreliną Liczba w grupie Ciężarne lochy Żywe zarodki C.ż. Przeżycie zarodka Odsetek ciąż Kontrolne ,6 20,2 68% 66% Traktowane ,4 20,9 64% 71% Przykład 4: Normalne wielkości miotów i odsetki ciąż uzyskano u loch po traktowaniu hormonalnym. [0034] Lochy po ciąży losowo przydzielono do trzech różnych grup stanowiących Kontrolę, Traktowanie 1 i Traktowanie 2 za wyjątkiem Miejsca 2, które podzielono na dwie grupy -

11 Kontrolę i Traktowanie 2. Kontrolne lochy monitorowano pod kątem estrus po odstawieniu i rozmnażano zgodnie z normalnymi standardowymi procedurami działania dla ferm, na których mieszkały. Lochy z grupy Traktowania 1 były monitorowane pod kątem estrus po odstawieniu i otrzymały 50 mcg dawkę desloreliny rano, gdy miały ruję stojącą, i rozmnażano je za pomocą AI 4 godziny później i ponownie 24+/-2 godziny później. Lochy z grupy Traktowania 2 otrzymywały 50 mcg dawkę desloreliny w SAIB 96 lub 120 godzin po odstawieniu i rozmnażano je za pomocą jednej inseminacji 28+/-2 godziny później niezależnie od wykrywania estrus. [0035] Jak pokazano w Tabeli 3, Tabeli 4 i Tabeli 5, traktowanie desloreliną dało normalne wielkości miotów u loch niezależnie od wykrywania estrus. Tabela 3: Wielkość miotu u loch po traktowaniu desloreliną w Miejscu 1 Liczba w grupie Śr. liczba urodzonych świń ogółem Śr. liczba żywych świń ogółem Kontrolne 38 12,74 11,35 Traktowanie ,10 11,03 Traktowanie ,37 11,24 Tabela 4: Wielkość miotu u loch po traktowaniu desloreliną w Miejscu 2 Liczba w grupie Śr. liczba urodzonych świń ogółem Śr. liczba żywych świń ogółem Kontrolne 68 11,23 10,57 Traktowanie ,21 10,25 Traktowanie ,88 10,02 Tabela 5: Wielkość miotu u loch po traktowaniu desloreliną w Miejscu 3 Liczba w grupie Śr. liczba urodzonych świń ogółem Śr. liczba żywych świń ogółem Kontrolne 58 11,26 10,58 Traktowanie ,09 10,27 [0036] Jak przedstawiono w Tabeli 6, po traktowaniu loch desloreliną uzyskano normalne odsetki ciąż. [0037] Tabela 3, Tabela 4 i Tabela 5 pokazują, że po traktowaniu loch po porodzie pojedynczą dawką desloreliny w SAIB uzyskano normalne wielkości miotów. W Tabeli 3,

12 Tabeli 4 i Tabeli 5 przedstawiono dane uzyskane z trzech różnych miejsc - ferm. Tabela 6 podsumowuje dane z Tabeli 2, Tabeli 3, Tabeli 4 i Tabeli 5 i pokazuje, że po traktowaniu loch desloreliną uzyskano normalne odsetki ciąż. Co znaczące, wyniki te pokazują, że tę samą liczbę świń można uzyskać przy mniejszej ilości pracy. Tabela 6: Odsetek ciąż u loch po traktowaniu desloreliną Liczba w grupie Liczba ciężarnych % ciężarnych Kontrolne ,92% Traktowanie ,80% Mirosława Ważyńska Rzecznik patentowy

13 Zastrzeżenia patentowe 1. Zastosowanie kompozycji do synchronizacji owulacji u świni bez wykrywania rui, przy czym kompozycja zawiera hormon wybrany z grupy składającej się z (a) hormonu uwalniającego gonadotropinę (GnRH), (b) hormonu luteinizującego (LH) i (c) ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hcg) lub (d) analogu GnRH, przy czym kompozycja jest stosowana do wywoływania owulacji w określonym czasie po podaniu losze po porodzie po odstawieniu prosiąt i przy czym zastosowaniem jest podawanie jednego hormonu wybranego spośród (a) do (d) bez żadnego innego podawania hormonu i przy czym po podaniu hormonu locha ma być rozmnażana z zastosowaniem jednego etapu sztucznej inseminacji. 2. Zastosowanie według zastrzeżenia 1, przy czym hormonem jest GnRH. 3. Zastosowanie według zastrzeżenia 1, przy czym hormonem jest analog GnRH. 4. Zastosowanie dowolnego z zastrzeżeń od 1 do 3, przy czym hormon jest podawany w polimerowym urządzeniu dostarczającym. 5. Zastosowanie według zastrzeżenia 4, przy czym hormon jest podawany losze 96 godzin po odstawieniu prosiąt. 6. Zastosowanie według zastrzeżenia 4 albo 5, przy czym locha jest rozmnażana około 28 godzin po podaniu hormonu. 7. Zastosowanie dowolnego z zastrzeżeń od 1 do 6, przy czym hormon jest podawany dopochwowo. 8. Zastosowanie dowolnego z zastrzeżeń od 1 do 7, przy czym hormon jest podawany w postaci kompozycji zawierającej materiały tworzące hydrożel. 9. Zastosowanie dowolnego z zastrzeżeń od 1 do 6, przy czym hormon jest podawany w postaci formulacji o przedłużonym uwalnianiu. 10. Zastosowanie dowolnego z zastrzeżeń od 1 do 6, przy czym kompozycja zawiera rozczynnik wybrany z grupy składającej się z octanu izomaślanu sacharozy i kopolimerów blokowych na bazie tlenku etylenu i tlenku propylenu. 11. Zastosowanie według zastrzeżenia 9, przy czym formulacja o przedłużonym uwalnianiu zawiera żywicę jonowymienną. 12. Zastosowanie dowolnego z zastrzeżeń od 1 do 6, przy czym kompozycja zawiera octan izomaślanu sacharozy. 13. Zastosowanie według zastrzeżenia 9, przy czym formulacja o przedłużonym uwalnianiu jest podawana w urządzeniu medycznym typu depo.

14 Zastosowanie dowolnego z zastrzeżeń od 1 do 13, przy czym zastosowanie wspomaga płodność lochy. Mirosława Ważyńska Rzecznik patentowy

15 - 14 -